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筛选核酸适配体的技术嘿，朋友们！今天咱就来聊聊筛选核酸适配体的技术。
这玩意儿可神奇啦，就像是在一个巨大的宝库中寻找那颗最闪亮的宝石。
你想想看，核酸适配体就像是一把专门为目标分子打造的钥匙，而且是超级精准的那种。
要找到这把钥匙可不容易，得有一套厉害的办法。
首先呢，有一种方法叫指数富集的配体系统进化技术，这名字听起来是不是很高大上？其实简单来说，就是让核酸分子们在那里竞争，看谁能和目标分子结合得最好。
就好像一场激烈的比赛，只有最强的才能胜出。
这过程可不简单，得经过一轮又一轮的筛选和进化，才能得到那最优秀的核酸适配体。
还有一种方法呢，是利用噬菌体展示技术。
这就好比是把核酸适配体放在一个大舞台上展示，让目标分子来挑选自己喜欢的。
那些被选中的核酸适配体就有机会留下来，继续发光发热。
筛选核酸适配体的过程就像是一场冒险，充满了未知和挑战。
有时候你可能觉得已经找到了那把钥匙，但再仔细一看，哎呀，好像还差那么一点点。
但别灰心呀，继续努力，说不定下一次就成功了呢！你说这技术是不是很神奇？它能在那么多的核酸分子中找到最合适的那一个，就像大海捞针一样，但又比那更难。
不过咱科学家们可不怕，他们有着无穷的智慧和耐心，一点一点地攻克难关。
你知道吗，这核酸适配体的用途可广泛了。
它可以用来检测疾病，就像一个小侦探，能快速准确地发现问题。
还可以用来治疗疾病呢，把那些坏家伙都给抓住。
咱想想看，如果没有这些先进的技术，那很多疾病的诊断和治疗该有多困难呀！所以说呀，筛选核酸适配体的技术真的是太重要了。
咱再回到这个技术本身，它就像是一个魔法盒子，打开之后里面充满了惊喜和可能。
每一次的实验，每一次的尝试，都有可能带来新的发现。
这就是科学的魅力呀，永远充满了未知和挑战，永远让人充满期待。
所以呀，朋友们，让我们一起为这些伟大的科学家们点赞，感谢他们为我们带来这么好的技术。
也让我们一起期待未来，看看这筛选核酸适配体的技术还能给我们带来哪些惊喜！这不就是科学的魅力所在吗？让我们一起拥抱它吧！。
核酸适配体体外筛选技术导则核酸适配体体外筛选技术导则一、导言核酸适配体体外筛选技术是一种用于筛选与特定目标分子相互作用的核酸分子的方法。
本导则旨在为研究人员提供关于核酸适配体体外筛选技术的指导，以确保实验操作的严谨性、科学性和安全性。
为了保证实验结果的可靠性和可重复性，使用者应严格按照下述导则进行操作。
二、实验室要求1. 实验室环境应符合生物安全标准，并保持清洁、整洁。
2. 实验室必须设有相应的安全设施，包括但不限于洗眼器、紧急淋浴和灭火设备等。
3. 实验室应制定并实施核酸废物的处理方案，避免对环境和人员的污染。
三、实验操作1. 实验前应认真阅读相关文献，了解适配体库的构建方法和筛选技术的原理。
2. 在操作过程中，应严格遵守实验操作规范，避免交叉污染。
3. 使用者应按照实验方案准备所需试剂和仪器，并确保其质量和纯度符合要求。
4. 在实验过程中，应随时记录实验条件、操作步骤和结果等重要信息，以备后续分析和验证。
5. 实验完成后，应及时清理实验台面和实验器材，避免污染和交叉感染。
四、结果分析与验证1. 实验结果应经过多次独立重复实验以验证其可靠性和可重复性。
2. 实验结果应与既有的相关数据进行比较和分析，并进行统计学处理和验证。
3. 可使用合适的实验方法（如荧光检测、凝胶电泳等）对筛选结果进行验证，以确保结果的准确性和可信度。
五、数据和结果报告1. 实验数据应以明确、准确的形式记录并保存，包括但不限于实验条件、实验操作、分析结果和报告等。
2. 实验结果的报告应详细描述实验所采用的方法、分析过程和结果，并进行充分讨论和解释。
3. 在发表科研论文或申请专利时，应按照相关规定对参考文献进行引用，并注明实验方法的来源和适用范围。
六、安全注意事项1. 在实验操作中应遵守实验安全操作规程，佩戴个人防护用具，如实验手套、口罩和实验服等。
2. 避免将实验物品和试剂接触到皮肤和眼睛，如不慎接触应及时用清水冲洗，并寻求医疗救助。
适配体的筛选技术——SELEX[摘要] 适配体泛指具有抗体功能的单股寡核苷酸（RNA或DNA），其可形成的特殊的立体结构如以辨识特定的蛋白质。
在一定环境下, 单链DNA 或RNA能与某些物质形成多种热力学稳定的三维空间结构而成为各种功能分子。
在大多数情况下, 溶液中的单链DNA 或RNA 的空间构象是不确定的, 当有目标分子存在时, 在合适的环境下寡聚单链会发生适应性折叠, 形成发夹( hairpin) 、假结( pseudokno t ) 、凸环( bulg e) 、G-四分体( G-quar tet ) 等特殊结构, 通过氢键、疏水堆积作用、范德华力等与目标分子紧密结合。
这种结合不需要依靠通常的核糖磷酸骨架的亲和力, 而且靶物质既可以是蛋白质, 也可以是多肽及小分子物质。
这种寡核苷酸片段被称为适配体。
适配体的产生是借由一种指数富集配体的系统进化技术( systematic evolution of ligands by exponential enrichment, SELEX)。
SELEX是20世纪90年代发展起来的一项组合化学技术。
利用该技术可以从随机单链核酸序列库中筛选到特异性与靶物质高度亲和的核酸配体( ap tamer) , 其解离常数可以与单克隆抗体媲美。
经过十几年的发展, SELEX技术已经成为一种重要的研究手段和工具,被广泛应用到分子生物学、基因组学、临床医学等众多研究领域, 并且衍生出了混合靶SELEX、体内SELEX、基因组SELEX等各种子技术。
随着基因组学和蛋白质组学的深入开展, SELEX技术会有更广泛的应用前景。
[关键词]适配体；指数富集配体的系统进化; 配体;Aptamer screening technology - SELEX[Abstract] Aptamers function refers to a single-stranded antibody oligonucleotides (RNA or DNA), which can form three-dimensional structures such as special to identify specific proteins. In certain circumstances, asingle-stranded DNA or RNA can form a variety of substances with certain thermodynamically stable three-dimensional structure for a variety of functional molecules. In most cases, the solution of the single-stranded DNA or RNA conformational is uncertain, when the presence of target molecules in a suitable environment occurs adaptive single-stranded oligo folded forms a hairpin (hairpin) , fake knot (pseudokno t), convex ring (bulg e), G-tetrad (G-quar tet) and other special structure, through hydrogen bonding, hydrophobic stacking interactions, van der Waals and other closely integrated with the target molecule. This combination does not need to rely on the usual affinity ribose phosphate backbone and the target substance may be a protein, polypeptide can also be small molecules. This oligonucleotide is called aptamers. Aptamer is produced by means of ligands by exponential enrichment caused by a phylogenetic techniques (systematic evolution of ligands by exponential enrichment, SELEX). SELEX was in the 1990s developed a combinatorial chemistry techniques. This technology can be single-stranded nucleic acid sequence from a random library was screened with the target substance to a specific high affinity nucleic acid ligands (ap tamer), dissociation constant of the monoclonal antibody can be comparable. After ten years of development, SELEX technology has become an important research tool, and tools are widely applied to molecular biology, genomics, clinical research and many other fields, and derived from a mixed target SELEX, in vivo SELEX, genome SELEX various sub-technologies. Withgenomics and proteomics in depth, SELEX technology has wider applications. [key words]Aptamer,SELEX,ligand20世纪90年代初, 美国科罗拉多大学(University of Col2 orado)的Tuerk 和Gold 将翻译T4 DNA 聚合酶( gp43 ) 的mRNA 中一含有8个碱基的环状结构进行序列随机化(该区域为茎环结构, 含18 个碱基, 其中环的部分有8 个碱基,gp43本身可以结合该区域并对自身合成进行调节) , 得到一个含65 536种序列的核酸库, 经过几轮筛选从中得到了两种与gp43紧密结合的核酸配体: 一种为已知的野生型, 另一种变体与野生型相差4个碱基, 两者的解离常数接近(野生型Kd = 5 ×10 - 9 mol/L, 变异性Kd = 3. 2 ×10 - 7 mol/L ) 。
核酸适配体序列
核酸适配体是一种用于连接不同核酸分子（如DNA或RNA）的分子工具。
它由两个互补的序列组成，通常称为前适配体和后适配体。
核酸适配体可以通过杂交与目标核酸序列进行特异性配对，用于引导DNA或RNA的连接、扩增、修饰等各种实验操作。
核酸适配体的实际使用中，其序列会根据具体实验设计和目标的不同而有所变化。
这些序列是由研究人员根据实验需求进行设计和合成的。
适配体的长度通常在10至30个碱基对之间，以便在杂交与目标核酸序列时能够提供稳定的配对。
核酸适配体的序列可以根据实验需求和目标设计，例如，在PCR实验中，核酸适配体的序列必须与待扩增的目标DNA序列的两端互补，以便引导扩增反应的进行。
在连接DNA 分子时，核酸适配体序列的设计必须与待连接的两个DNA分子的序列匹配。
值得注意的是，核酸适配体序列的选择要遵循一定的设计准则，以确保其信号特异性和稳定性。
例如，避免适配体内部的重复序列、避免适配体之间的互补序列或重叠等。
总结起来，核酸适配体的序列是由实验设计者根据具体实验需求进行设计和合成的。
在不同的实验中，核酸适配体的序列会有所变化，以便适应不同的应用场景，例如PCR扩增、DNA连接等。
根据实验需求，科研人员可以设计和合成适合的核酸适配体序列，以实现特定的实验操作和目标。
核酸适配体在分子医学中的应用一、简介核酸适配体是一类能与特定的目标分子结合的寡核苷酸或寡肽序列。
它们通过与目标分子结合，进行特异性识别和调控，成为分子医学研究和应用的重要工具。
本文将介绍核酸适配体的概念、结构和制备方法，并重点探讨它们在分子医学领域的应用。
二、核酸适配体的结构与制备2.1核酸适配体的结构核酸适配体由寡核苷酸组成，可以是DN A、R NA或D NA-R NA杂交分子。
核酸适配体的结构通常由两个重要部分组成：结构域和配体域。
结构域为核酸适配体提供稳定的空间构象，而配体域则与目标分子特异性结合。
2.2核酸适配体的制备方法核酸适配体的制备方法主要包括体外筛选和化学修饰两种。
体外筛选通过筛选大规模的核酸库，选取具有特异性结合能力的核酸适配体，常用的筛选方法包括S ELE X法和RN A适配体筛选法。
化学修饰则通过改变核酸适配体的碱基序列或化学结构，增强其结合能力和稳定性。
三、核酸适配体的应用3.1肿瘤治疗核酸适配体在肿瘤治疗中发挥着重要的作用。
通过特异性结合肿瘤细胞表面的抗原，核酸适配体可用于靶向传递药物、放射性同位素或光敏物质，实现肿瘤的精确治疗。
此外，核酸适配体还可作为肿瘤标志物的检测工具，帮助早期诊断和预后评估。
3.2感染性疾病检测核酸适配体在感染性疾病的早期检测中具有巨大潜力。
通过与致病微生物或其产物特异性结合，核酸适配体可用于快速、敏感地检测病原体的存在和数量。
这种检测方法对于迅速控制和防止疫情的扩散具有重要意义。
3.3基因治疗核酸适配体在基因治疗中也有广泛的应用。
通过与目标基因或其调控序列结合，核酸适配体可以调控基因的表达，实现基因治疗的精准性和有效性。
此外，核酸适配体还可用于基因编辑和基因传递载体的构建，为基因研究和治疗提供强大的工具。
四、总结核酸适配体作为一类具有特异性结合和调控能力的分子工具，在分子医学中的应用前景广阔。
通过结合不同的配体域，核酸适配体可以用于肿瘤治疗、感染性疾病检测和基因治疗等领域。
![一种特异性结合CD3的核酸适配体及其筛选方法和应用[发明专利]](https://img.taocdn.com/s1/m/48d0db5f1fb91a37f111f18583d049649b660e97.png)
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201610110684.X(22)申请日 2016.02.29(71)申请人 广西医科大学地址 530021 广西壮族自治区南宁市双拥路22号(72)发明人 卢小玲 赵永祥 (74)专利代理机构 深圳市顺天达专利商标代理有限公司 44217代理人 郭伟刚 周娇娇(51)Int.Cl.C12N 15/115(2010.01)C12N 15/11(2006.01)G01N 33/53(2006.01)A61K 31/711(2006.01)A61P 35/00(2006.01)C12N 15/10(2006.01)C12Q 1/68(2006.01)(54)发明名称一种特异性结合CD3的核酸适配体及其筛选方法和应用(57)摘要本发明公开了一种特异性结合CD3的核酸适配体及其筛选方法和应用。
本发明所提供的核酸适配体，为如下(a )或(b)：(a )序列表中序列1所示的单链DNA片段；(b)将序列表中序列1经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加后所得序列所示的单链DNA片段，且与(a)中所述单链DNA片段具有相同功能。
以本发明所提供的核酸适配体与CD3分子结合为基础，可以进一步用于靶向T细胞的药物设计、制备药物或其他制品；该核酸适配体序列可作为靶向T细胞的分子探针。
本发明为T细胞活化及肿瘤靶向诊断与治疗提供新思路与新工具，具有重要的临床价值。
权利要求书2页 说明书12页 附图2页CN 107129988 A 2017.09.05C N 107129988A1.一种特异性结合CD3的核酸适配体，其特征在于，为如下(a)或(b)：(a)序列表中序列1所示的单链DNA片段；(b)将序列表中序列1经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加后所得序列所示的单链DNA片段，且与(a)中所述单链DNA片段具有相同功能。
专利名称：核酸适配体的制造方法专利类型：发明专利
发明人：平尾一郎,平尾路子,横山茂之申请号：CN201280039329.8
申请日：20120808
公开号：CN103732748A
公开日：
20140416
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明的目的在于提供一种有效且简便地制造与靶物质的特异性及结合性高的核酸适配体、特别是DNA适配体的方法。
所述核酸适配体的制造方法包含以下工序：复合体形成工序，将单链核酸文库和靶物质在溶液中混合，形成单链核酸和靶物质的复合体；固定化工序，将前工序之后的溶液和固相载体混合，经由吸附于靶物质和/或固相载体的连接体（結合子）将复合体固定化于固相载体；回收工序，将固定化于固相载体的复合体从溶液中回收；扩增工序，回收复合体中的单链核酸后，利用核酸扩增法使其扩增；及单链核酸制备工序，将扩增工序中得到的双链核酸单链化后，形成分子内立体结构。
申请人：塔古西库斯生物株式会社
地址：日本神奈川县
国籍：JP
代理机构：北京安信方达知识产权代理有限公司
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适配体筛选材料新方法以适配体筛选材料新方法为标题，本文将介绍一种新的适配体筛选材料的方法。
这种方法可以提高筛选效率，减少材料浪费，并且可以应用于多种不同的适配体筛选领域。
我们需要了解适配体筛选材料的背景和重要性。
适配体是指具有特定结构和功能的分子，可以与特定的目标分子相互作用。
适配体筛选材料是一种利用适配体与目标分子之间的相互作用来筛选出具有特定功能的材料的方法。
适配体筛选材料在药物研发、催化剂设计、纳米材料制备等领域具有重要的应用价值。
传统的适配体筛选材料方法主要依赖实验室合成大量的材料，并通过试错的方法来筛选出具有特定功能的材料。
这种方法存在耗时、耗能、耗材的问题，并且筛选效率很低。
因此，研究人员一直在寻找一种更高效、更准确的适配体筛选材料方法。
近年来，随着计算机技术的发展和材料模拟方法的成熟，基于计算模拟的适配体筛选材料方法逐渐受到关注。
这种方法通过建立适配体与目标分子之间的相互作用模型，并利用计算机模拟方法来预测适配体与目标分子之间的相互作用能力。
然后，根据预测结果，选择具有潜在适配能力的材料进行实验验证。
与传统方法相比，基于计算模拟的适配体筛选材料方法具有以下优点：该方法可以节省大量的实验材料和实验时间。
通过计算机模拟，可以预测出具有潜在适配能力的材料，减少了实验室合成材料的数量和时间成本。
该方法可以提高筛选效率和准确性。
通过计算模拟，可以预测适配体与目标分子之间的相互作用能力，从而筛选出具有特定功能的材料。
这种预测结果可以指导实验设计，提高筛选效率和准确性。
基于计算模拟的适配体筛选材料方法还具有灵活性和可重复性。
通过调整计算模拟的参数和方法，可以适应不同的适配体筛选需求。
而且，该方法可以重复使用，可以在不同的适配体筛选项目中应用。
总结起来，基于计算模拟的适配体筛选材料方法是一种高效、准确、灵活和可重复的筛选方法。
该方法的应用可以提高适配体筛选材料的效率，减少材料浪费，并且可以应用于多种不同的适配体筛选领域。
本技术公开了一种黏附素适配体及筛选该黏附素适配体的方法，本技术以幽门螺杆菌基因组DNA为模板，扩增得到其黏附素基因，将得到的基因与表达载体连接获得筛选靶标，再将筛选靶标与随机单链ssDNA文库孵育，SELEX筛选，PCR扩增文库，然后经多轮筛选得到黏附素核酸适配体。
本技术还公开了该黏附素适配体在制备幽门螺杆菌的检测试剂盒以及制备幽门螺杆菌免疫药物中的应用。
本技术的黏附素核酸适配体具有较高的亲和力与特异性，分子量小、渗透性强，相对现有技术能够更直观的反应机体感染Hp的状况。
技术要求1.一种黏附素核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体的核苷酸序列含有SEQ IDNO.1所示的核苷酸序列；或含有以下任意一种核苷酸序列：与SEQ ID NO.1限定的核苷酸序列同源性在60％以上、与SEQ ID NO.1限定的核苷酸序列进行杂交的序列、SEQ ID NO.1限定的核苷酸序列转录的RNA序列。
2.根据权利要求1所述的黏附素核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体的核苷酸序列被甲基化、巯基化、磷酸化、氨基化或同位素化。
3.根据权利要求1或2所述的黏附素核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体的核苷酸序列上连接有荧光物质、治疗性物质、放射性物质、生物素、地高辛、纳米发光材料或酶标记。
4.一种权利要求1所述的核酸适配体的的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)以幽门螺杆菌基因组DNA为模板，PCR扩增得到幽门螺杆菌黏附素(Hpa A)基因；(2)将得到的基因与表达载体Pet28a质粒经酶切后连接，连接产物转入大肠杆菌E.coli BL21菌株并诱导表达，裂解细菌，纯化，获得的重组粘附素Hpa A即为筛选靶标；(3)将步骤(2)得到的黏附素Hpa A与ssDNA文库进行孵育，收集与筛选靶标结合的ssDNA；(4)将得到的ssDNA进行PCR扩增，得到dsDNA；(5)得到的dsDNA与pUC19质粒经酶切后连接，并转入大肠杆菌E.coli DH5α菌株；(6)选取阳性克隆测序，并验证阳性克隆扩增得到的ssDNA与Hpa A的结合力，得到核酸适配体。
5.如权利要求4所述的筛选方法，其特征在于，步骤(1)中Hpa A引物序列为：F:5’-CGGATCCTGCAGCCCGCATATTATTG-3’；R:5’-CAAGCTTTCGGTTTCTTTTGCCTTTT-3’。
6.如权利要求4所述的筛选方法，其特征在于，步骤(3)中，ssDNA文库包括序列：5’-CGGATCCATCCAGAGTGACGCAGCA-N45-TGGACACGGTGGCTTAGT-3’；引物P1：5’-CGGATCCATCCAGAGTGACGCAGCA-3’；引物P2：5’-GAAGCTTACTAAGCCACCGTGTCCA-3’。
7.如权利要求4所述的筛选方法，其特征在于，步骤(3)中，将纯化的粘附素Hpa A包被于聚苯乙烯微孔中，然后将合成的ssDNA文库溶于筛选缓冲液投入其中，洗下结合的ssDNA作为下一轮的模板；第五轮后以空白孔为负向筛选介质。
8.权利要求1-3任意一项所述的黏附素核酸适配体或其衍生物在制备检测幽门螺杆菌的试剂盒、分子探针或靶向介质中的应用。
9.一种幽门螺杆菌检测试剂，其特征在于，含有权利要求1-3任意一项所述的黏附素核酸适配体。
10.权利要求1-3任意一项所述的黏附素核酸适配体或其衍生物在制备抗幽门螺杆菌疫苗中的用途。
技术说明书粘附素核酸适配体及其筛选方法和应用技术领域本技术涉及核酸适配体及其筛选和应用，尤其涉及一种可用于检测幽门螺杆菌的核酸适配体及其筛选方法和应用。
背景技术核酸适配体是采用指数富集的配基系统进化技术(Systematic Evolution ofLigands by Exponential Enrichment，SELEX)从随机单链寡核苷酸库中筛选出的能与靶物酸适配体具有亲和力高、性能稳定、分子量低、免疫原性低、易于修饰改造且无毒副作用等优点。
幽门螺杆菌(Helicobacter pylori，H.pylori，Hp)感染与胃癌的高发密切相关，全球Hp感染率约为50％，亚洲地区感染率高达70％，我国的平均感染率约为59％黏膜上皮细胞结合定植于胃黏膜层。
黏附过程中Hp能够激活胃黏膜上皮细胞内多种信号通路并分泌多种致病相关因子，继而引发细胞增生、凋亡、过度炎症此可见，Hp与胃粘膜上皮细胞的黏附是其侵袭机体致病过程的关键环节。
Hp进行黏附的物质基础为黏附素，黏附素的种类较多且在黏附过程中占主导地位。
目前发现有多种Hp黏附素蛋白(如Hpa A、Bab A、Sab A、Alp A/B、Oip A 其定植作用。
其中Hpa A在Hp在定植、致病各阶段中均发挥及其重要的作用，且有望成为幽门螺杆菌检测、预防的靶标。
因而筛选黏附素相应的配基，通过因此，利用SELEX的特性针对Hpa A筛选出相应的配基对胃黏膜内Hp诊疗有非常重要的意义。
目前临床针对Hp的感染的检测主要以C14呼气试验和快速尿酶试验为主要手段，其原理主要基于Hp尿素酶催化尿素分解。
但是C14呼气试验因为有一定的放射近期内服用过抗生素及空腹程度也会对呼气试验结果的判读造成影响。
而快速脲酶实验往往会因为取材中Hp数量的关系以及近期服用抗生素造成一定程度的检测更为广泛，但是其对患者病程的判断仍然存在不足。
而且目前培养技术仍未能标准化、商品化，亟待一种能够对以上方法进行补充的检测手段。
技术内容针对现有技术中的缺陷，本技术提供一种特异性靶向粘附素Hpa A的适配体，还提供了上述黏附素适配体的筛选方法，其基于SELEX技术，针对黏附素Hpa A 探索该方法进行胃黏膜内Hp诊疗的可行性奠定了基础。
为了实现上述目的，本技术采用了下述技术方案：一种黏附素核酸适配体，所述核酸适配体的核苷酸序列含有SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列；或含有以下任意一种核苷酸序列：与SEQ ID NO.1限定的核苷酸序列进行杂交的序列、SEQ ID NO.1限定的核苷酸序列转录的RNA序列。
进一步地，所述核酸适配体的核苷酸序列被甲基化、巯基化、磷酸化、氨基化或同位素化。
进一步地，所述核酸适配体的核苷酸序列上连接有荧光物质、治疗性物质、放射性物质、生物素、地高辛、纳米发光材料或酶标记。
一种上述的核酸适配体的的筛选方法，包括以下步骤：(1)以幽门螺杆菌基因组DNA为模板，PCR扩增得到幽门螺杆菌黏附素(Hpa A)基因；(2)将得到的基因与表达载体Pet28a质粒经酶切后连接，连接产物转入大肠杆菌E.coli BL21菌株并诱导表达，裂解细菌，纯化，获得的重组粘附素Hpa A即为筛(3)将步骤(2)得到的黏附素Hpa A与ssDNA文库进行孵育，收集与筛选靶标结合的ssDNA；(4)将得到的ssDNA进行PCR扩增，得到dsDNA；(5)得到的dsDNA与pUC19质粒经酶切后连接，并转入大肠杆菌E.coli DH5α菌株；(6)选取阳性克隆测序，并验证阳性克隆扩增得到的ssDNA与Hpa A的结合力，得到核酸适配体。
进一步地，步骤(1)中Hpa A引物序列为：F:5’-CGGATCCTGCAGCCCGCATATTATTG-3’；R:5’-CAAGCTTTCGGTTTCTTTTGCCTTTT-3’。
进一步地，步骤(3)中，ssDNA文库包括序列：5’-CGGATCCATCCAGAGTGACGCAGCA-N45-TGGACACGGTGGCTTAGT-3’；引物P1：5’-CGGATCCATCCAGAGTGACGCAGCA-3’；引物P2：5’-GAAGCTTACTAAGCCACCGTGTCCA-3’。
进一步地，步骤(3)中，将纯化的粘附素Hpa A包被于聚苯乙烯微孔中，然后将合成的ssDNA文库溶于筛选缓冲液投入其中，洗下结合的ssDNA作为下一轮的本技术还提供了上述的黏附素核酸适配体或其衍生物在制备检测幽门螺杆菌的试剂盒、分子探针或靶向介质中的应用。
一种幽门螺杆菌检测试剂，含有权利要求上述的黏附素核酸适配体。
本技术还提供了上述的黏附素核酸适配体或其衍生物在制备抗幽门螺杆菌疫苗中的用途。
所述黏附素适配体的衍生物可以是上述的和配体的核苷酸序列的骨与现有技术相比，本技术的有益效果体现在：本技术得到的具有较高亲和力的核酸适配体具有较强的区分Hp的能力；在胃黏膜冰冻切片中验证其与Hp的结合时，结合荧光标记，能够更灵敏的检测出菌体观的反应机体感染Hp的状况，特异性结合Hp菌体表面的Hpa A适配体的筛选能够应用于胃粘膜组织Hp感染的检测。
附图说明为了更清楚地说明本技术具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
在所有附图中图中，各元件或部分并不一定按照实际的比例绘制。
图1为PCR扩增Hpa A基因琼脂糖凝胶电泳图；图2为重组pET28a/Hpa A质粒酶切后琼脂糖凝胶电泳图；图3为重组pET28a/Hpa A质粒测序结果的比对图；图4为Hpa A蛋白在大肠杆菌DE3中的诱导表达的SDS-PAGE凝胶电泳图；图5为重组Hpa A蛋白的纯化后的SDS-PAGE凝胶电泳图；图6为纯化的重组蛋白Hpa A的HPLC图；图7为不同轮数文库的相对结合力的比较结果图；图8为限制性内切酶酶切鉴定分析适配体单克隆图；图9为不同单克隆适配体对5种菌株检测性能的比较结果图；图10为适配体HA6全长序列及核心序列结合力的检测结果图；图11为激光共聚焦验证适配体与H.pylori的结合结果图；图12为流式细胞检测适配体HA6阻断Hp与GES-1的结合结果图。
具体实施方式下面将结合附图对本技术技术方案的实施例进行详细的描述。
以下实施例仅用于更加清楚地说明本技术的技术方案，因此只作为示例，而不能以此来限制本需要注意的是，除非另有说明，本申请使用的技术术语或者科学术语应当为本技术所属领域技术人员所理解的通常意义。
以下实施例中的实验方法如无特殊说明，均为常规生化试剂商店购买得到。
实施例1、适配体的筛选1、实验材料菌株来源：Hp ATCC26695菌株来自江苏大学。
ssDNA文库：5’-CGGATCCATCCAGAGTGACGCAGCA-N45-TGGACACGGTGGCTTAGT-3’和引物P1：5’-CGGATCCATCCAGAGTGACGCAGCA-3’引物P2：5’-GAAGCTTACTAAGCCACCGTGTCCA-3’；均由上海生物工程公司提供。
哥伦比亚培养基购自青岛海博生物技术公司。
胎牛血清购自Gibco公司。
限制性内切酶BamH I、Hind III及T4连接酶购自Fermentas公司。
DNA marker、蛋白marker购自北京兰博利德生物公司。
