恩诺沙星 金鳟和哲罗鲑鱼

司力娜，陈琛，李绍戊，等．恩诺沙星在金鳟和哲罗鲑鱼体内的药代动力学比较［J ］．江苏农业科学，2011，39（6）：390－392．恩诺沙星在金鳟和哲罗鲑鱼体内的药代动力学比较司力娜1，2，陈琛1，2，李绍戊2，卢彤岩2，尹海富1（1．东北农业大学动物科学技术学院，黑龙江哈尔滨150030；2．中国水产科学研究院黑龙江水产研究所，黑龙江哈尔滨150070）摘要：采用高效液相色谱法，研究以15．0mg /kg 剂量肌肉注射给药途径下，恩诺沙星在金鳟和哲罗鲑鱼体内的药代动力学。

取给药后不同时间的血浆、肝脏、肾脏，测定其中的恩诺沙星浓度，用3P97软件进行数据处理和分析。

结果表明：2种鱼肌肉注射恩诺沙星后，血浆、肝脏和肾脏中药物浓度－时间关系均符合一级吸收的二室开放动力学模型；金鳟体内的药物吸收量较小，吸收分布速率和消除均较快，而哲罗鲑鱼体内的药物吸收量较大，吸收分布速率和消除均慢。

恩诺沙星在金鳟体内的主要动力学参数如下：分布半衰期（T 1/2α）分别为0．4107、1．6781、4．3385h ，消除半衰期（T 1/2β）分别为43．6742、47．3875、33．6594h ，药－时曲线下面积（AUC ）分别为126．3705、7．5405、247．6855μg /（g ·h ）［或μg /（mL ·h ）］；恩诺沙星在哲罗鲑鱼体内的主要动力学参数如下：T 1/2α分别为1．5453、3．5387、5．7619h ，T 1/2β分别为78．6968、39．6266、41．3326h ；AUC 分别为191．5507、60．1040、233．9931μg /（g ·h ）［或μg /（mL ·h ）］。

关键词：恩诺沙星；金鳟；哲罗鲑鱼；药代动力学中图分类号：S948文献标志码：A 文章编号：1002－1302（2011）06－0390－03收稿日期：2010－12－24基金项目：农业公益性行业专项（编号：200803013）；中央级公益性科研院所基本科研业务费专项（编号：201003）；黑龙江水产研究所基本科研业务项目（编号：2007HSYZX －YZ －10）。

作者简介：司力娜（1985—），女，河北石家庄人，硕士研究生，从事鱼类病害研究。

E －mail ：si_lina@126．com 。

通信作者：尹海富，副教授，主要从事动物营养与饲料研究。

E －mail ：haifuyin@163．com 。

金鳟（Bidyanus bidyanus ）又名甘脂鱼、黑珍珠石斑。

该鱼适应性强，耐寒耐热性及抗病力也较一般养殖鱼类强。

其肉味鲜美，营养丰富，无肌间刺，具有很高的食用价值和观赏价值。

哲罗鲑鱼（Hucho taimen ）生长速度较快，并以相等的速度发展，属于大型经济鱼类，肉味鲜美、细嫩，为富有营养的鱼类，也是高寒地区的特产，在产区内为珍贵的食品。

恩诺沙星（enrofloxacin ，EFL ）又名乙基环丙沙星、恩氟沙星，为第3代喹诺酮类药物，对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌都有抑菌和杀菌作用，抗菌力强，体内分布广，抑菌和杀菌作用迅速、彻底，属广谱抗菌药物，我国将其大量应用于畜牧业及水产养殖业生产中，被誉为防治畜禽疾病的新武器［1］。

但在使用过程中，由于缺乏相应的理论指导，忽略养殖环境恶化和药物滥用问题，使其毒副作用逐渐显现，加上人们对食品安全意识的不断加强，其药物及代谢产物环丙沙星（ciprofloxacin ，CIP ）残留问题已引起了国内外的普遍重视。

目前国内外已报道了恩诺沙星在欧洲鳗鲡（Anguilla anguilla ）、眼斑拟石首鱼（Scjaenops ocellatus ）、中华绒螯蟹（Eriocheir sinensis ）、中国对虾（Penaeus chinensis ）、大菱鲆（Scophthalmus maximus ）等体内的药代动力学及残留情况［2－6］。

有关恩诺沙星在金鳟和哲罗鲑鱼体内药代动力学及残留消除规律的研究尚未见报道。

本试验主要研究了肌肉注射给药情况下，恩诺沙星在金鳟和哲罗鲑鱼体内的吸收、分布、消除等药代动力学参数，以期为恩诺沙星安全地应用于冷水性鱼类养殖提供科学依据。

1材料与方法1．1试验动物金鳟、哲罗鲑鱼均购自黑龙江省渤海冷水性鱼类试验站，金鳟体重（100ʃ10）g ，哲罗鲑鱼体重（150ʃ10）g 。

试验前将金鳟和哲罗鲑鱼在水族箱（0．5m ˑ0．5m ˑ0．9m ）中暂养1周，投喂不含任何药物的全价饲料。

选择健康个体进行试验，试验前24h 停止饲喂，试验期间不投喂饲料。

1．2药品和试剂恩诺沙星标准品（含量99．5%，批号为H0080807），由中国兽医药品监察所提供；恩诺沙星原粉（含量98%，批号为20080716），购自河南汇杰科创动物药业有限公司；乙腈和正己烷为色谱纯试剂，其他试剂和药品均为分析纯。

1．3仪器高效液相色谱仪（美国安捷伦公司Agilent1100）；荧光检测器；电子分析天平（Model No．SI －234，Denver Instrument Germany ）；快速混匀器（Model No．SI －T256，Scientific Indus-tries Inc．U．S．A．）；高速分散匀质机（上海华岩仪器设备有限公司）；旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；循环水真空泵（上海亚荣生化仪器厂）等。

1．4色谱条件色谱柱为ODS －3柱（4．6mm ˑ250mm ）；流动相为乙腈与磷酸三乙胺混合液（体积比12ʒ88）；提取液为乙腈与50%盐酸混合液（体积比为50ʒ1）；激发波长为280nm ，发射波长为450nm ；流速为1．0mL /min ；柱温为40ħ；进样量为20μL 。

1．5给药方式及样品采集肌肉注射恩诺沙星15mg /kg ，于给药后0．15、0．25、0．5、0．75、1、1．5、2、4、6、8、12、24、48、72h 分别采集金鳟和哲罗鲑鱼的血液、肝脏、肾脏，每个时间点采样5尾。

用注射器—093—江苏农业科学2011年第39卷第6期（0．5%肝素钠润洗）自尾部采集血液并于4500r/min离心10min，分离血浆。

所有血浆、肝脏、肾脏样品于－20ħ保存，进行药物浓度分析。

1．6样品的处理1．6．1血浆样品的处理量取0．3mL血浆于50mL离心管中，加入10mL提取液和0．5g无水硫酸钠，快速混匀2min，4000r/min离心10min；上清液转移至旋转蒸发瓶中，45ħ水浴真空蒸发至干；固体残渣用2mL流动相充分溶解，再加入2mL正己烷，快速混匀2min，然后转移溶液至5mL离心管中，10000r/min离心5min；抽取下层液相经0．45μm微孔滤器过滤至进样瓶中，滤液进行HPLC测定。

1．6．2肝脏和肾脏样品的处理称取0．5g肝脏或0．15g肾脏于50mL离心管中，加入10mL提取液和0．5g无水硫酸钠，用分散匀质机匀浆，4000r/min离心10min；后续步骤同“1．6．1”。

1．7标准工作曲线的制备用流动相将恩诺沙星配制成系列浓度（0．01、0．02、0．05、0．10、0．20μg/mL）的标准液，过0．45μm微孔滤器于进样瓶中，进行HPLC测定。

滤液每个浓度进样4次，测定峰面积，以峰面积为纵坐标，恩诺沙星浓度为横坐标绘出标准曲线，并求出回归方程及相关系数。

配制一系列标准混合溶液，在上述色谱条件下检测药物含量，作出标准曲线。

1．8回收率的测定用流动相将恩诺沙星配制成系列浓度（0．05、0．10、1．00、2．00μg/mL）的标准液，每个浓度分别加入到0．3mL血浆、0．5g肝脏、0．15g肾脏中。

按照“1．6”中的方法处理后进行HPLC测定，每个药物浓度做5个重复，计算恩诺沙星的相对回收率：相对回收率=（实测药物浓度/实际药物浓度）ˑ100%。

1．9数据处理药物浓度－时间数据用3P97药代动力学软件处理，由程序自动拟合最佳模型。

2结果与分析2．1线性范围恩诺沙星的标准曲线回归方程为y=1280．2x－0．0335（y为药物浓度，x为平均峰面积），决定系数r2=0．9999，在0．01 0．2μg/mL范围内线性关系良好。

本方法的最低检测限为0．005μg/mL，能较好地满足金鳟和哲罗鲑鱼中恩诺沙星残留检测的要求。

2．2相对回收率的测定结果由表1可知，恩诺沙星在4个浓度下平均相对回收率在81．23% 96．67%之间，表明此样品处理方法重现性较好，可满足本试验的要求。

2．3恩诺沙星在金鳟和哲罗鲑鱼组织中的分布以15mg/kg剂量对金鳟和哲罗鲑鱼肌肉注射恩诺沙星后，各个组织中的药物浓度随时间变化分布的情况见图1、图2。

由图1可以看出，恩诺沙星在金鳟的血浆和器官中的分布较广泛，药物浓度变化趋势基本一致，但在相同时间点，肾脏中的浓度显著高于血浆和肝脏中，恩诺沙星在肝脏中的浓度最低。

实测样品中，药物浓度均在给药后迅速上升，血浆、肝表1恩诺沙星在金鳟和哲罗鲑鱼中的相对回收率药物添加浓度（μg/mL）金鳟中回收率（%）血浆肝脏肾脏哲罗鲑鱼中回收率（%）血浆肝脏肾脏0．0582．1285．2186．1486．1894．3292．370．1086．0583．4591．3484．3687．1696．461．0089．1294．3283．0287．3788．7281．232．0091．0596．6787．5689．6485．2584．28脏、肾脏均在1h后达到最大药物浓度。

由图2可以看出，恩诺沙星在哲罗鲑鱼体内的分布情况。

药物浓度在肾脏中最高，实测样品中，药物浓度均在给药后迅速上升。

在血浆、肝脏、肾脏中药物浓度分别在1．5、1．0、0．75h达峰值，在0．15 8h间肝脏的药物浓度明显高于血浆，但在12 72h间血浆的药物浓度下降缓慢，明显地高于肝脏的药物浓度。

2．4恩诺沙星在金鳟和哲罗鲑鱼中的药代动力学参数应用3P97软件对所测得的药物水平－时间关系进行一室、二室和三室模型的数据拟合，结果（表2）表明，金鳟和哲罗鲑鱼以肌肉注射给药后，恩诺沙星在血浆、肝脏和肾脏中的代谢过程用一级吸收二室模型来描述较为合适。

由表2可知，恩诺沙星在金鳟血浆、肝脏、肾脏中的分布半衰期（T1/2α）分别为0．4107、1．6781、4．3385h，在哲罗鲑鱼血浆、肝脏、肾脏中的分布半衰期（T1/2α）分别为1．5453、3．5387、5．7619 h，说明肌肉注射给药后，哲罗鲑鱼的吸收分布比较快，而金鳟的吸收分布比较慢。

从消除半衰期（T1/2β）来比较，结果显示哲罗鲑鱼体内的药物消除速度较金鳟慢。

同样，哲罗鲑鱼的达峰浓度（C max）明显高于金鳟。

3讨论本研究结果表明，恩诺沙星在金鳟和哲罗鲑鱼体内药物浓度－时间数据经3P97药代动力学软件处理后，均可较好地用开放性二室模型拟合，这与恩诺沙星在大西洋鲑（Salmo salar）［7］和罗氏沼虾［8］中的房室模型类似，与日本囊对虾［9］—193—司力娜等：恩诺沙星在金鳟和哲罗鲑鱼体内的药代动力学比较表2金鳟和哲罗鲑鱼肌肉注射恩诺沙星后的药代动力学参数名称器官A（μg/mL或μg/g）α（h－1）B（μg/mL或μg/g）β（h－1）K a（h－1）T1/2α（h）T1/2β（h）AUC［μg/（mL·h）或μg/（g·h）］CL［L/（kg·h）］T peak（h）C max（μg/mL或μg/g）金鳟血浆6．16651．68781．99560．01602．69770．410743．6742126．37050．11870．72502．6322肝脏0．19380．42310．10530．01502．38031．678147．38757．54051．98931．10000．2048肾脏5．94460．15974．40680．02102．94284．338533．6594247．68550．06061．21508．9039哲罗鲑鱼血浆8．20950．44851．61540．00900．96781．545378．6968191．55070．07831．81503．5306肝脏6．81490．19590．49370．01802．50803．538739．626660．10400．24961．13505．5163肾脏10．16000．12032．57830．01703．02775．761941．3326233．99310．06411．175010．9856注：A为分布相的零时截距；α为一级分布速率常数；B为消除相的零时截距；β为一级消除速率常数；K a为药物吸收速率常数；T1/2α为分布半衰期；T1/2β为消除半衰期；AUC为药时曲线下面积；CL为清除率；T peak为达峰时间；C max为峰浓度。