蚁巢伞属真菌甾体类成分含量测定

HPLC测定真菌及其制品中麦角甾醇含量作者：王晓琴黄秀丽陈月景罗旋胡嘉珊翁嘉来源：《农学学报》2021年第04期摘要：本研究旨在找出真菌及其制品的特征指标，用于其质量评价、掺伪鉴别等。

建立了真菌及其制品中麦角甾醇含量测定的高效液相色谱法（HPLC），并利用建立的HPLC法对冬虫夏草、破壁灵芝孢子粉等真菌及其制品以及螺旋藻、大豆油等6种植物油样品进行麦角甾醇含量的测定。

结果显示，麦角甾醇在5～160μg/mL范围内具有较好的线性，线性相关系数大于0.999，检出限为0.1μg/mL，平均回收率为86.32%～105.24%。

螺旋藻以及大豆油等6种植物油中均未检出麦角甾醇，真菌类及其制品中均含有麦角甾醇，麦角甾醇具有专属性。

该方法操作简便、灵敏，且具有较好的重复性和稳定性，可应用于真菌及其制品中麦角甾醇含量的定量分析。

关键词：真菌及其制品；麦角甾醇；专属性，高效液相色谱法（HPLC）中图分类号：S567.3文献标志码：A论文编号：cjas20191000244Determination of Ergosterol in Fungi and Its Products by HPLCWang Xiaoqin， Huang Xiuli， Chen Yuejing， Luo Xuan， Hu Jiashan， Weng Jia（Huizhou Institute for Food and Drug Control， Huizhou 516000， Guangdong， China）Abstract： The aim is to find out the characteristic indexes of fungi and its products for quality evaluation and adulteration identification. The HPLC method was established for determining ergosterol in fungi and its products. With the established HPLC method， the contents of ergosterol were determined in fungi and its products （Cordyceps sinensis and Ganoderma lucidum spores powder）， spirulina and six kinds of plant oil， such as soybean oil. The results showed that therewas a good linearity in the range of 5-160μg/mL of ergosterol， the correlation coefficient was more than 0.999，the detection limit was 0.1μg/mL， and the average recovery was from 86.32% to 105.24%. Ergosterol was not determined in spirulina and six kinds of plant oil （such as soybean oil）， while it was detected in fungi and its products. Ergosterol had specificity in fungi and its products. This study suggests that the method is simple and sensitive， and has good repeatability and stability， thus it can be adopted to quantitatively analyze ergosterol in fungi and its products.Keywords： Fungi and Its Products； Ergostero； Specificity； High Performance Liquid Chromatography （HPLC）0引言目前，真菌在保健方面的作用漸渐被大家所认识，如冬虫夏草、灵芝孢子系列等产品已经广为大家所接受，另外在筛选新药及寻找抗癌药物方面，食药用真菌也已作为重要的研究对象[1-3]。

第四节含量测定 容量法、⽐⾊法、紫外分光光度法、荧光法、⽓相⾊谱法、⾼效液相⾊谱法等，本章重点讨论四氮唑⽐⾊法、异烟肼⽐⾊法、Kober反应⽐⾊法、紫外分光光度法、⾼效液相⾊谱法等。

⼀、四氮唑⽐⾊法 （⼀）四氮唑的种类两种：2，3，5-三苯基氯化四氮唑（缩写为TTC），其还原产物为不溶于考，试⼤收集整理⽔的深红⾊三苯甲簪，λmax在480~490nm，也称红四氮唑（缩写为RT）。

蓝四氮唑（缩写BT），其还原产物为暗蓝⾊的双甲簪，λmax在525nm左右。

TTC和BT的结构式如下： （⼆）反应原理 ⽪质激素C17-α-醇酮基具有还原性，在强碱性溶液中能将四氮唑盐定量地还原为有⾊甲簪。

可能路线为α-醇酮基，失去2个电⼦氧化为20-酮基-21醛基，在碱催化下，分⼦内部重排；有部分形成20-羟基-21-醛基，C20-C21键断裂形成甾基甲酸衍⽣物和甲醛，以前者为主。

四氮唑盐得到2个电⼦，开环形成甲簪显⾊。

（三）测定⽅法 USP（23）采⽤蓝四氮唑；中国药典（1995版）和BP（1993）采⽤红四氮唑。

中国药典收载地醋酸泼尼松龙软膏的含量测定⽅法如下： 1.对照品溶液制备：精密称取醋酸泼尼松龙对照品20mg，置100ml量瓶中，加⽆⽔⼄醇振摇使溶解，并稀释⾄刻度，摇匀，即得。

2.供试品溶液的制备：精密称取本品4g（约相当于醋酸泼尼松龙20mg），置烧杯中，加⽆⽔⼄醇约30ml，置⽔浴上加热，充分搅拌，使醋酸泼尼松龙溶解，在置冰浴中放冷后，滤过，滤液滤⼊100ml量瓶中，同法提取3次，滤液并⼊量瓶中，加⽆⽔⼄醇稀释⾄刻度，摇匀，即得。

3.测定法：精密量取对照品溶液及供试品溶液各1ml，分别置⼲燥具塞试管中，各精密加⽆⽔⼄醇9ml与氯化三苯四氮唑试液2ml，摇匀，再精密加氢氧化四甲基铵试液1ml，摇匀，在25℃暗处放置40~45min，照分光光度法，在485nm的波长处分别测定吸收度，计算，即得。

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910935958.2(22)申请日 2019.09.29(71)申请人 遵义市林业科学研究所地址 563000 贵州省遵义市汇川区遵义市开发区洗马路阿家寺巷41号(72)发明人 易筑刚　蔡静云　(74)专利代理机构 贵阳睿腾知识产权代理有限公司 52114代理人 周黎亚(51)Int.Cl.G01N 5/04(2006.01)C12N 1/14(2006.01)C12R 1/685(2006.01)C12R 1/645(2006.01)C12R 1/885(2006.01)(54)发明名称一种真菌菌丝生物量的测定方法(57)摘要本发明属菌丝生物量测定方法技术领域，特别涉及一种真菌菌丝生物量的测定方法，包括如下步骤：(1)载玻片处理：将基础溶液浸湿的介质纸片贴于马铃薯基质片上，然后贴于圆形载玻片上，置于培养皿内，并向培养皿内加注基础溶液至淹没介质纸片，盖上盖子，高压灭菌；(2)接种元处理：将接种元经高压灭菌，冷却至室温，后用真菌纯培养液浸湿；(3)接种、培养；(4)检测：培养数日，用镊子将附有菌丝的介质纸片与马铃薯基质片分离，然后脱水干燥、称重；本发明的菌丝生物量测定方法具有操作简便、测定精确、成本低、计算方式简单、可重复性强、测定范围广、结果偏差小的特点。

权利要求书1页 说明书7页 附图1页CN 110618056 A 2019.12.27C N 110618056A1.一种真菌菌丝生物量的测定方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)载玻片处理：将基础溶液浸湿的介质纸片贴于马铃薯基质片上，然后共同再贴放于圆形载玻片上使得介质纸片朝上，再将圆形载玻片倾斜20-25°固定于支架上，然后放置于培养皿内，并向培养皿内加注基础溶液至淹没介质纸片0.3-0.7cm，盖上盖子，高压灭菌28-35min；(2)接种元处理：将接种元经高压灭菌28-35min，于无菌条件下冷却至室温，然后将接种元用真菌纯培养液浸湿；(3)接种、培养：用接种针挑取接种元接种于介质纸片上，盖上盖子，于恒温恒湿环境下静置培养；(4)检测：培养数日，用镊子将附有菌丝的介质纸片与马铃薯基质片分离，然后将附有菌丝的介质纸片脱水干燥、称重，除去介质纸片重量即得菌丝生物量。

蚂蚁化学成分的实验研究美国、德国对蚁科的多种蚂蚁进行大量分析研究，证明蚂蚁含有特殊的醛类化合物。

如柠檬醛（C10H16O），也称草体蚁醛，这与人们早已知道的蚁醛（HCHO）（又称甲醛）是不同的。

从阿根廷蚁分析出胸蚁醛（C10H14O）、虹蚁醛（C10H16O）；从小黄蚁属类蚂蚁分析出香茅萜、柠檬萜等；还有高能的含磷化合物三磷酸腺苷（ATP），多种酶和辅酶。

蚂蚁的螫刺腺含有蚁酸、生物碱、组织胺、正葵醇、正十一烷醇、正十二烷醇。

医学家的动物试验证明，一只蚂蚁的螫刺腺注入大白鼠，效果相当于6个单位效价的促肾上腺皮质激素（ACTH）。

10年前一度认为蚂蚁的主要药效健身成分是蚂蚁的白色血液棗草体蚁醛，通过近年的深入研究发现，蚂蚁的药效与健身成分是多种生物活性物质综合作用，而不是单一成分的作用。

澳大利亚麦克利大学的贝蒂教授经过多种研究后宣称，蚂蚁之所以很少染病，是因为蚂蚁所分秘的蜡状物质中含有的抗菌素可以有效地控制蚁群中的传染病之故。

在她进行的最新试验研究还证实，上述抗菌素也有助于人体抵抗多种致病微生物，在对付真菌感染和金黄色葡萄球菌方面的作用特别明显。

贝蒂教授正与一家英国制药公司合作，把她的研究成果转化为“蚂蚁抗菌素”的新药，以造福人类。

蚂蚁体内的氨基酸有氨基（-NH4）和羧基（-COOH）的有机化合物，是组成蛋白质的基本单位。

据广西中医学院和吉林农业大学的分析，蚂蚁体内所含氨基酸中，有苏氨酸、苯丙氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、色氨酸等8种是人体所必需的。

人体必需的微量元素目前已知的有14种，即硒（Se）、锌（Zn）、锰（Mn）、铁（Fe）、钴（Co）、铜（Cu）、碘（I）、钼（Mo）、铬（Cr）、镍（Ni）、锡（Sn）、硅（Si）、氟（F）、钒（V）。

以锰、硒、铁、碘、铜、锌较为重要，而这些微量元素在蚂蚁体内都有丰富含量，尤以锌的含量最为丰富，每千克蚂蚁含锌高达120~198毫克。

白蚁巢胶囊的成分白蚁巢胶囊是一种由白蚁制作的物质，其成分非常独特，因此受到了科学家们的广泛关注。

本文将对白蚁巢胶囊的成分进行详细介绍，以期让读者更加了解这一神奇物质。

一、胶囊的主要成分白蚁巢胶囊的主要成分是木质素和纤维素。

这两种物质都是由植物细胞壁中的纤维素和木质素组成的。

在白蚁巢胶囊中，这两种物质的比例大约为1:1，因此可以说它们是胶囊的主要成分。

木质素是一种由苯环和甲基苯环组成的复杂有机化合物。

它们是植物细胞壁中的一部分，起到支撑和保护细胞的作用。

在白蚁巢胶囊中，木质素的含量非常高，可以达到50%以上。

纤维素是由多个葡萄糖分子组成的多糖，是植物细胞壁中的主要成分。

在白蚁巢胶囊中，纤维素的含量也非常高，可以达到50%以上。

二、其他成分除了木质素和纤维素外，白蚁巢胶囊中还含有其他一些成分，如蛋白质、糖类、脂肪酸等。

这些成分的含量较低，但它们对胶囊的性质和功能也有一定的影响。

蛋白质是由氨基酸组成的大分子有机化合物，是白蚁巢胶囊中的重要成分之一。

它们可以增强胶囊的韧性和强度，使其更加耐用。

糖类是一种简单的碳水化合物，也是白蚁巢胶囊中的成分之一。

它们可以增加胶囊的黏合性和粘度，使其更加牢固。

脂肪酸是一种有机化合物，是白蚁巢胶囊中的重要成分之一。

它们可以增加胶囊的韧性和强度，同时还可以增加胶囊的耐水性和耐候性。

三、成分的作用白蚁巢胶囊的成分对其性质和功能都有一定的影响。

下面是一些典型的例子：1、木质素和纤维素是白蚁巢胶囊的主要成分，它们可以增加胶囊的韧性和强度，同时还可以增加胶囊的耐水性和耐候性。

这些特性使得白蚁巢胶囊可以在恶劣的环境下存活，并且可以承受大量的压力和振动。

2、蛋白质可以增强胶囊的韧性和强度，使其更加耐用。

这些特性使得白蚁巢胶囊可以在长时间的使用和磨损下保持其完整性和功能性。

3、糖类可以增加胶囊的黏合性和粘度，使其更加牢固。

这些特性使得白蚁巢胶囊可以在多种不同的表面上黏附，并且可以承受大量的拉力和剪力。

真菌残体碳计算方法真菌残体碳计算简介真菌残体碳计算是一种用于计算真菌残体中所含碳含量的方法。

真菌残体是指真菌生命周期结束后剩余的物质，包括菌丝、子实体和孢子等。

计算真菌残体碳含量可以帮助我们了解真菌在碳循环中的作用，并对土壤碳储存和气候变化等方面的研究具有重要意义。

方法以下列出了几种常用的真菌残体碳计算方法：1.直接测定法：–将真菌残体样品送至实验室进行干燥和研磨处理。

–使用测定仪器，例如元素分析仪，测定样品中的碳含量。

–通过计算样品的质量和碳含量的比例，得出真菌残体的碳含量。

2.筛选法：–将真菌残体样品经过筛网筛分，去除较大的杂质。

–将筛分后的真菌残体样品进行干燥处理。

–使用测定仪器，例如元素分析仪，测定样品中的碳含量。

–通过计算筛分后样品的质量和碳含量的比例，得出真菌残体的碳含量。

3.化学分析法：–将真菌残体样品进行化学分解，使其中的碳转化为易测的形式，例如二氧化碳。

–使用化学分析方法，例如碳含量测定试剂，测定样品中的碳含量。

–通过计算样品的质量和测得的碳含量，得出真菌残体的碳含量。

注意事项在进行真菌残体碳计算时，需要注意以下几点：•真菌残体样品的采集应严格控制，避免杂质污染。

•不同的真菌残体计算方法可能存在差异，选择适合研究目的的方法进行。

•研究中需要进行多次重复实验，以提高数据的可靠性。

•结果的解释需要结合具体研究背景和目的，不能孤立地看待碳含量数据。

结论真菌残体碳计算是一项重要的研究工作，可以帮助我们深入了解真菌的生态角色和碳循环过程。

通过选择合适的计算方法，并结合其他环境要素的考虑，可以更准确地评估真菌在生态系统中的碳贡献。

进一步的研究工作可以扩展到不同环境条件下真菌残体碳含量的变化规律，以及真菌与其他生物之间碳交换的机制等方面，为环境保护和气候变化的应对提供科学依据。

真菌残体碳计算方法(一)真菌残体碳计算概述真菌残体碳计算是一种评估真菌生物量和碳循环的重要方法。

通过测定真菌的生物量和含碳量，可以估算真菌残体对碳循环的贡献。

本文将介绍几种常用的真菌残体碳计算方法。

方法一：重量法通过在野外采集真菌残体样本，并将其送至实验室称重，可以获得真菌残体的总重量。

然后，将重量与真菌残体平均碳含量进行相乘，即可获得真菌残体的碳含量。

方法二：光密度法光密度法是一种非破坏性的真菌残体碳计算方法。

首先，将真菌残体样本放入测量仪器中，测量其在特定波长下的光密度。

然后，使用事先建立的光密度-碳含量模型，将测得的光密度转换为真菌残体的碳含量。

方法三：生化指标法生化指标法是一种通过测量真菌残体中特定生化指标的含量来计算其碳含量的方法。

常用的生化指标包括蛋白质含量、脂肪含量和纤维素含量等。

通过对真菌残体进行样品制备和测量分析，可以计算出其碳含量。

方法四：DNA测序法DNA测序法是一种利用真菌残体中的DNA序列信息来推测其生物量和碳含量的方法。

通过提取真菌残体中的DNA，并使用高通量测序技术进行测序，可以获得真菌残体的DNA序列。

然后，利用基于DNA序列的生物量和碳含量预测模型，可以估算出真菌残体的生物量和碳含量。

结论真菌残体碳计算是一项有益于了解真菌生物量和碳循环贡献的方法。

不同的计算方法适用于不同的研究目的和条件。

重量法是一种简单直接的方法，适用于大量真菌残体样本的计算；光密度法和生化指标法是一种非破坏性的方法，适用于小样本量的计算；DNA测序法则是一种基于DNA信息推测的方法，适用于对真菌群落进行整体评估。

研究者可以根据实际需求选择合适的真菌残体碳计算方法。

方法五：同位素示踪法同位素示踪法是一种利用同位素标记的方法来测定真菌残体碳含量的方法。

研究者可以使用特定的同位素标记物将碳引入真菌残体中，然后通过测定真菌残体内同位素标记的比例来计算其碳含量。

这种方法能够提供高精度和高灵敏度的真菌残体碳计算结果。