(教学课件)免疫分析
- 格式：ppt
- 大小：29.62 MB
- 文档页数：41
下载文档原格式
合集下载
免疫学概论第4章抗体PPT课件
免疫学概论第4章抗体ppt 课件
• 抗体的概述 • 抗体的结构 • 抗体的产生与类别 • 抗体的应用 • 总结与展望
01
抗体的概述
抗体的定义
抗体（Antibody）：指B淋巴细胞或记忆B细胞在抗原刺激下，经一系列活化、增殖、 分化后形成的浆细胞分泌出来的一类能与相应抗原特异性结合的免疫球蛋白。
免疫调节
抗体可调节机体免疫应答，用于治疗免疫相关疾病，如风湿性关 节炎、系统性红斑狼疮等。
被动免疫
将含有抗体的免疫血清或免疫球蛋白注入机体，使机体获得特异 性免疫力。
抗体在免疫学研究中的应用
01
02
03
抗原定位
通过抗体标记抗原，研究 抗原在细胞或组织中的定 位和分布。
免疫细胞功能研究
抗体可用来研究免疫细胞 的活化、分化、凋亡等过 程，有下产生的一种蛋白质，具有高度的特异性，能够与相 应的抗原结合，发挥免疫效应。
抗体的类型
IgG
IgM
IgA
IgE
免疫球蛋白G，是血清中含量最 高的抗体类型，也是唯一能够 通过胎盘的抗体类型。它具有 抗菌、抗病毒、抗毒素等作用， 是机体重要的防御机制。
免疫球蛋白M，是初次免疫应 答中最早产生的抗体类型，主 要存在于血液中。它具有抗菌、 抗病毒、抗毒素等作用，但效 价较低。
疾病的抗体药物，提高治疗效果和降低副作用。
03
免疫治疗和免疫调控
抗体在免疫治疗和免疫调控方面具有广阔的应用前景，未来将进一步探
索其在肿瘤、感染性疾病、自身免疫性疾病等领域的应用。
THANKS
感谢观看
合物，进而发挥免疫效应。
激活补体
抗体能够与抗原结合后激活补 体系统，通过补体的级联反应 ，发挥溶解和杀伤作用。
• 抗体的概述 • 抗体的结构 • 抗体的产生与类别 • 抗体的应用 • 总结与展望
01
抗体的概述
抗体的定义
抗体（Antibody）：指B淋巴细胞或记忆B细胞在抗原刺激下，经一系列活化、增殖、 分化后形成的浆细胞分泌出来的一类能与相应抗原特异性结合的免疫球蛋白。
免疫调节
抗体可调节机体免疫应答，用于治疗免疫相关疾病，如风湿性关 节炎、系统性红斑狼疮等。
被动免疫
将含有抗体的免疫血清或免疫球蛋白注入机体，使机体获得特异 性免疫力。
抗体在免疫学研究中的应用
01
02
03
抗原定位
通过抗体标记抗原，研究 抗原在细胞或组织中的定 位和分布。
免疫细胞功能研究
抗体可用来研究免疫细胞 的活化、分化、凋亡等过 程，有下产生的一种蛋白质，具有高度的特异性，能够与相 应的抗原结合，发挥免疫效应。
抗体的类型
IgG
IgM
IgA
IgE
免疫球蛋白G，是血清中含量最 高的抗体类型，也是唯一能够 通过胎盘的抗体类型。它具有 抗菌、抗病毒、抗毒素等作用， 是机体重要的防御机制。
免疫球蛋白M，是初次免疫应 答中最早产生的抗体类型，主 要存在于血液中。它具有抗菌、 抗病毒、抗毒素等作用，但效 价较低。
疾病的抗体药物，提高治疗效果和降低副作用。
03
免疫治疗和免疫调控
抗体在免疫治疗和免疫调控方面具有广阔的应用前景，未来将进一步探
索其在肿瘤、感染性疾病、自身免疫性疾病等领域的应用。
THANKS
感谢观看
合物，进而发挥免疫效应。
激活补体
抗体能够与抗原结合后激活补 体系统，通过补体的级联反应 ，发挥溶解和杀伤作用。
医学免疫学ppt课件
性抗原。
抗体结构特点及功能
抗体结构特点
抗体分子是由两条相同的重链和两条相同的轻链通过链间二硫键连接而成的四肽链 结构。
抗体分子的基本结构可分为可变区和恒定区两部分。
抗体结构特点及功能
01
02
03
结合特异性抗原
抗体分子的可变区具有特 异性，能与相应抗原表位 发生特异性结合。
激活补体
抗体分子与相应抗原结合 后，可激活补体系统，引 起一系列生物学效应。
02
细胞因子的产生与作用
活化的T细胞可分泌多种细胞因子，如干扰素-γ（IFN-γ）、肿瘤坏死
因子（TNF）等，参与免疫应答的调节。
03
细胞毒作用
通过表达FasL等分子，诱导靶细胞凋亡，发挥细胞毒作用。
B细胞介导体液免疫应答
B细胞的活化与增殖
抗原与B细胞受体（BCR）结合，启动B细胞的活化与增殖过程。
抗体的产生与作用
活化的B细胞可分化为浆细胞，分泌特异性抗体，与相应抗原结合 ，发挥中和、调理吞噬等作用。
免疫记忆的形成
部分B细胞可分化为记忆B细胞，长期存活于体内，当再次遇到相 同抗原时，可迅速增殖并分化为浆细胞，产生大量抗体。
适应性免疫应答调节机制
免疫耐受
通过克隆清除、克隆失能 等机制，避免对自身抗原 的免疫应答。
细胞因子与疾病的关系
细胞因子的异常表达与多种疾病的发生和发展密 切相关，如感染性疾病、自身免疫性疾病和肿瘤 等。
补体系统参与固有免疫应答
补体的激活
补体系统可通过经典途径、旁路 途径和MBL途径被激活，产生具
有生物学活性的补体片段。
补体的作用
补体片段具有调理吞噬、溶解细 胞、介导炎症反应和参与组织修 复等作用，是固有免疫应答的重
抗体结构特点及功能
抗体结构特点
抗体分子是由两条相同的重链和两条相同的轻链通过链间二硫键连接而成的四肽链 结构。
抗体分子的基本结构可分为可变区和恒定区两部分。
抗体结构特点及功能
01
02
03
结合特异性抗原
抗体分子的可变区具有特 异性，能与相应抗原表位 发生特异性结合。
激活补体
抗体分子与相应抗原结合 后，可激活补体系统，引 起一系列生物学效应。
02
细胞因子的产生与作用
活化的T细胞可分泌多种细胞因子，如干扰素-γ（IFN-γ）、肿瘤坏死
因子（TNF）等，参与免疫应答的调节。
03
细胞毒作用
通过表达FasL等分子，诱导靶细胞凋亡，发挥细胞毒作用。
B细胞介导体液免疫应答
B细胞的活化与增殖
抗原与B细胞受体（BCR）结合，启动B细胞的活化与增殖过程。
抗体的产生与作用
活化的B细胞可分化为浆细胞，分泌特异性抗体，与相应抗原结合 ，发挥中和、调理吞噬等作用。
免疫记忆的形成
部分B细胞可分化为记忆B细胞，长期存活于体内，当再次遇到相 同抗原时，可迅速增殖并分化为浆细胞，产生大量抗体。
适应性免疫应答调节机制
免疫耐受
通过克隆清除、克隆失能 等机制，避免对自身抗原 的免疫应答。
细胞因子与疾病的关系
细胞因子的异常表达与多种疾病的发生和发展密 切相关，如感染性疾病、自身免疫性疾病和肿瘤 等。
补体系统参与固有免疫应答
补体的激活
补体系统可通过经典途径、旁路 途径和MBL途径被激活，产生具
有生物学活性的补体片段。
补体的作用
补体片段具有调理吞噬、溶解细 胞、介导炎症反应和参与组织修 复等作用，是固有免疫应答的重
人教版生物八年级下册 第二节免疫与计划免疫 课件(共141张PPT)
是因为体内存留有:
A.抗原
B.吞噬细胞
C.抗体
D.溶菌酶
10、人体对麻疹病毒可产生终身免 疫，这主要是因为： A、皮肤的免疫具有免疫监视的功能 B、人体的免疫具有保持自我稳定的 功能 C、人体的免疫具有免疫监视的功能 D、淋巴细胞有免疫记忆功能
11、下列有关抗原的叙述错误的是: A、抗原可以是某种大分子异物 B、抗原只能被B淋巴细胞识别 C、抗原可以是某种病原体 D、抗原是可以引起机体产生抗体 的物质
情形二:抗体 附在病原体上
情形三:病原体 被溶解及杀死
抗体
抗原 情形四:抗体附在病原体表面，使 病原体更易被吞噬细胞吞噬 上述四种情形皆为体液免疫的情形.
P78:有的抗原被清除后,相应的抗
体仍存留在人体内.当同样的抗原
再次侵入人体时,就会被体内存留
的抗体按同样的方式加以清除.
9、得过麻疹的人以后不再得麻疹，
1.我们身体的“天然屏障”是指： A.眼睛 B.鼻子 C.皮肤 D.脾脏
(2)黏膜的两大防护功能: P77图VIII-5 A:黏膜上的纤毛具有清扫异物(包 括病菌)的作用.
B:各种黏膜的分泌物(如乳酸、脂 肪酸、胃酸和酶等)还有杀菌作用.
气管壁粘膜上的纤毛
纤毛的摆动，可以清除异物和病菌
呼吸系统的粘膜层
3、有的病人因肾脏功能衰竭而急 需肾移植时，必须找一个与之“匹 配”的肾脏，这又是为什么？ 4.在生活中，为什么有的人虽然接 触到病菌、病毒却不会患病？ 为 什么患过麻疹的人就不患麻疹了？
人生活的自然环境中，有许多病 原体，这些病原体一旦侵入人体， 就又可能引起疾病，损害人的健 康。人之所以能在有许多病原体 存在的环境中健康生活，是因为 人体具有保卫自身的三道防线.
免疫分析中的干扰与消除ppt课件
内容概要 1.概述
2.主要内容
3.结语
1.溶血等常见内源性干扰 2.类风湿因子 3.补体 4.异嗜性抗体 5.HAMA 6.自身抗体 7.结合蛋白 8.其他干扰因素
编辑版ppt
1
概述 • 基础、前沿的话题 • 普遍、常见的现象 • 复杂、多样的本质 • 深刻、直接的影响 • 长远、艰巨的任务
编辑版ppt
• 鸟蛋白（beckman）
编辑版ppt
13
异嗜性抗体（Heterophilic antibodies，HA） • HA是存在于人类血清中，由已知或未知的抗原物质刺激人体产
生的，与啮齿类动物（如鼠等）Ig（s）结合的一类抗体。
• 通常是由于直接接触动物，污染的食品，接种动物血清或疫苗 而产生。
• 可分为天然抗体和自身免疫抗体，亲和力低，结合力弱，具有 广泛的特异性，普遍存在于人体中，多为IgG 。
编辑版ppt
7
异嗜性抗体产生的途径
• 类风湿性关节炎 • 流行性感冒 • 过敏 • 输血 • 自身免疫疾病 • 免疫抑制药物 • 心肌病变 • 注射疫苗
• 动物接触（饲养宠物） • 特定食物（奶酪） • 动物辅助治疗（胸腺细
胞，胚胎细胞，羊细胞）
• 血液透析 • 母婴传递 • 肠胃炎（E.coli）
• 抗同种型，抗独特型，抗抗独特型
编辑版ppt
16
HAMA干扰机制
编辑版ppt
17
HAMA干扰机制
Байду номын сангаас
编辑版ppt
18
HAMA的鉴别
• 稀释样本测定的值不成比例 • 用参考试剂盒测定进行对比 • 其他试剂盒验证 • 加入清洁抗体进行对比 • HAMA测定试剂盒（6 HAMA试剂盒）
2.主要内容
3.结语
1.溶血等常见内源性干扰 2.类风湿因子 3.补体 4.异嗜性抗体 5.HAMA 6.自身抗体 7.结合蛋白 8.其他干扰因素
编辑版ppt
1
概述 • 基础、前沿的话题 • 普遍、常见的现象 • 复杂、多样的本质 • 深刻、直接的影响 • 长远、艰巨的任务
编辑版ppt
• 鸟蛋白（beckman）
编辑版ppt
13
异嗜性抗体（Heterophilic antibodies，HA） • HA是存在于人类血清中，由已知或未知的抗原物质刺激人体产
生的，与啮齿类动物（如鼠等）Ig（s）结合的一类抗体。
• 通常是由于直接接触动物，污染的食品，接种动物血清或疫苗 而产生。
• 可分为天然抗体和自身免疫抗体，亲和力低，结合力弱，具有 广泛的特异性，普遍存在于人体中，多为IgG 。
编辑版ppt
7
异嗜性抗体产生的途径
• 类风湿性关节炎 • 流行性感冒 • 过敏 • 输血 • 自身免疫疾病 • 免疫抑制药物 • 心肌病变 • 注射疫苗
• 动物接触（饲养宠物） • 特定食物（奶酪） • 动物辅助治疗（胸腺细
胞，胚胎细胞，羊细胞）
• 血液透析 • 母婴传递 • 肠胃炎（E.coli）
• 抗同种型，抗独特型，抗抗独特型
编辑版ppt
16
HAMA干扰机制
编辑版ppt
17
HAMA干扰机制
Байду номын сангаас
编辑版ppt
18
HAMA的鉴别
• 稀释样本测定的值不成比例 • 用参考试剂盒测定进行对比 • 其他试剂盒验证 • 加入清洁抗体进行对比 • HAMA测定试剂盒（6 HAMA试剂盒）
临床免疫学检验课件第11章固相膜免疫分析技术ppt
收峰波长增长， A680/A519比值增大。 肉眼观察胶体金颜色或测定其吸收峰波长的变化粗
略预估胶体金直径大小
为了规范事业单位聘用关系，建立和 完善适 应社会 主义市 场经济 体制的 事业单 位工作 人员聘 用制度 ，保障 用人单 位和职 工的合 法权益
不同直径金颗粒的呈色性和光吸收性
胶体金颗粒 （nm）
?斑点金免疫渗滤试验(dot immunogold
filtration assay, DIGFA) ?斑点金免疫层析试验（dot immunogold
胶体金免 疫技术
chromatography assay, DICA)
?斑点酶免疫吸附试验(dot enzyme linked immunospot assay
（2）保存 ： ? 洁净的玻璃容器；室温避光无灰尘环境中保 存3个月，4℃保存半年 ? 避免冻存：导致胶体金聚集。 ? 20天内标记：胶体金的不稳定性
为了规范事业单位聘用关系，建立和 完善适 应社会 主义市 场经济 体制的 事业单 位工作 人员聘 用制度 ，保障 用人单 位和职 工的合 法权益
（三）免疫金的制备(P53)
,Dot-ELISA)
?免疫印迹法(immunoblotting test, IBT)
为了规范事业单位聘用关系，建立和 完善适 应社会 主义市 场经济 体制的 事业单 位工作 人员聘 用制度 ，保障 用人单 位和职 工的合 法权益
第一节 胶体金免疫技术
colloidal gold immunoassay 1.原理：
胶体金特性 ? 胶体特性 ? 呈色性和光吸收性 ? 稳定性 ? 聚沉现象
为了规范事业单位聘用关系，建立和 完善适 应社会 主义市 场经济 体制的 事业单 位工作 人员聘 用制度 ，保障 用人单 位和职 工的合 法权益
略预估胶体金直径大小
为了规范事业单位聘用关系，建立和 完善适 应社会 主义市 场经济 体制的 事业单 位工作 人员聘 用制度 ，保障 用人单 位和职 工的合 法权益
不同直径金颗粒的呈色性和光吸收性
胶体金颗粒 （nm）
?斑点金免疫渗滤试验(dot immunogold
filtration assay, DIGFA) ?斑点金免疫层析试验（dot immunogold
胶体金免 疫技术
chromatography assay, DICA)
?斑点酶免疫吸附试验(dot enzyme linked immunospot assay
（2）保存 ： ? 洁净的玻璃容器；室温避光无灰尘环境中保 存3个月，4℃保存半年 ? 避免冻存：导致胶体金聚集。 ? 20天内标记：胶体金的不稳定性
为了规范事业单位聘用关系，建立和 完善适 应社会 主义市 场经济 体制的 事业单 位工作 人员聘 用制度 ，保障 用人单 位和职 工的合 法权益
（三）免疫金的制备(P53)
,Dot-ELISA)
?免疫印迹法(immunoblotting test, IBT)
为了规范事业单位聘用关系，建立和 完善适 应社会 主义市 场经济 体制的 事业单 位工作 人员聘 用制度 ，保障 用人单 位和职 工的合 法权益
第一节 胶体金免疫技术
colloidal gold immunoassay 1.原理：
胶体金特性 ? 胶体特性 ? 呈色性和光吸收性 ? 稳定性 ? 聚沉现象
为了规范事业单位聘用关系，建立和 完善适 应社会 主义市 场经济 体制的 事业单 位工作 人员聘 用制度 ，保障 用人单 位和职 工的合 法权益
抗原抗体反应与非标记免疫分析精品PPT课件
一、直接凝集
20
玻片法
直接凝 集反应
试管法
1:2稀释待测血清 1:4
常用于菌种鉴定或ABO 血型鉴定
常用于检测抗体的滴 度或效价，见于临床 诊断伤寒或副伤寒所 用的肥达氏反应和诊 断布氏菌病所用的瑞 特试验。
1:8
1:16
21
二、间接凝集反应
将可溶性Ag/Ab先吸附在某些颗粒载体上，形成 致敏颗粒，然后再与相应Ab/Ag进行反应产生凝集， 叫间接凝集反应。
3. 适宜的抗原抗体浓度和比例（定比性） 决定抗原抗体结合后能否出现肉眼可见的反 应；
4. 抗原抗体反应的2个阶段性 第1阶段是抗原抗体特异性结合，可在数秒钟 至几分钟内完成； 第2阶段是小的抗原抗体复合物靠正负电荷吸 引形成较大复合物，所需时间从数分钟至数 日不等。
10
11
等价带
12
酸碱度 pH值6-8
当pH值接近等电点时，抗原抗体多带正负电 荷相等，由于自身吸引而出现凝集，导致非 特异性反应。
14
常用免疫分析技术概述
抗原抗体反应
凝集反应
沉淀反应
蛋白芯片 技术
直接凝集 间接凝集
免疫比浊 单向免疫扩散
双向免疫扩散
免疫电泳
免疫标记
荧光 酶 同位素 化学发光 胶体金 免疫印迹
15
7
8
第一节 抗原抗体反应原理※※
(二)抗原抗体反应的特点 1. 高度特异性 特异性越强，亲和力也越高； 2. 表面化学基团之间的可逆结合
不如共价键稳定，易受温度、酸碱度和离子强度的影 响而解离，解离后抗原抗体仍具有原有特性；
Ab+Ag
Ab:Ag
9
(二(二)抗)抗原原抗抗体体反反应应的的特特点点
20
玻片法
直接凝 集反应
试管法
1:2稀释待测血清 1:4
常用于菌种鉴定或ABO 血型鉴定
常用于检测抗体的滴 度或效价，见于临床 诊断伤寒或副伤寒所 用的肥达氏反应和诊 断布氏菌病所用的瑞 特试验。
1:8
1:16
21
二、间接凝集反应
将可溶性Ag/Ab先吸附在某些颗粒载体上，形成 致敏颗粒，然后再与相应Ab/Ag进行反应产生凝集， 叫间接凝集反应。
3. 适宜的抗原抗体浓度和比例（定比性） 决定抗原抗体结合后能否出现肉眼可见的反 应；
4. 抗原抗体反应的2个阶段性 第1阶段是抗原抗体特异性结合，可在数秒钟 至几分钟内完成； 第2阶段是小的抗原抗体复合物靠正负电荷吸 引形成较大复合物，所需时间从数分钟至数 日不等。
10
11
等价带
12
酸碱度 pH值6-8
当pH值接近等电点时，抗原抗体多带正负电 荷相等，由于自身吸引而出现凝集，导致非 特异性反应。
14
常用免疫分析技术概述
抗原抗体反应
凝集反应
沉淀反应
蛋白芯片 技术
直接凝集 间接凝集
免疫比浊 单向免疫扩散
双向免疫扩散
免疫电泳
免疫标记
荧光 酶 同位素 化学发光 胶体金 免疫印迹
15
7
8
第一节 抗原抗体反应原理※※
(二)抗原抗体反应的特点 1. 高度特异性 特异性越强，亲和力也越高； 2. 表面化学基团之间的可逆结合
不如共价键稳定，易受温度、酸碱度和离子强度的影 响而解离，解离后抗原抗体仍具有原有特性；
Ab+Ag
Ab:Ag
9
(二(二)抗)抗原原抗抗体体反反应应的的特特点点
放射免疫分析-PPT课件
16
B/F
0 [Ag0]
标准曲线
17
根据加样顺序与温育次数的不同，放 射免疫分析可分为如下三种。 平衡法：将非标记抗原、抗体、标记抗原 依次加入反应管，混匀后一次性温育至反 应达到动态平衡，再加分离剂使B与F分离。
18
顺序加样法：先将非标记抗原与抗体在反 应管内作第一次温育，待反应达到动态平 衡后，加入标记抗原，作第二次温育，然 后分离B与F。
25
第4代(1981-1995)：早在l975年，Milstein和Kshler 将绵羊红细胞注射给小鼠，将获得的小鼠脾细胞 与骨髓瘤细胞融合，得到了杂交细胞，经培养、 分离、成株等系列步骤后，首次制备出小鼠抗绵 羊红细胞的单克隆抗体(mAb)。这一重大研究成 果为RIA及其他免疫分析技术提供了新型特异性 抗体。进入20世纪80年代，mAb制备技术的完善 和许多固相载体材料的研制成功，将试管固相、 塑料球等包被mAb制成固相抗体，传统IRMA技术 的灵敏度、特异性和检测量程度提高到了一个新 水平。
4
R.S. Yalow
S.A. Berson
5
由于胰岛素抗体的浓度太低，用以往 的免疫学技术不能测定，因此Berson 和Yalow等人采用放射性标记法测定浓 度极低的抗原-抗体复合物。电泳结果 表明在接受胰岛素治疗的病人的血浆 中，胰岛素与一种球蛋白结合，证明 胰岛素抗体确实存在。
6
值得一提的是，在20世纪50年代中期， 免疫学家还不能接受“胰岛素抗体”这 一概念。Berson和Yalow等人的论文被 《Science》退稿，刚开始投《Journal of Clinical Investigation》(JCI)也是退稿， 后来向JCI的编辑作出妥协，从标题中 删去“胰岛素抗体”字样，论文才得以 在JCI上发表。
B/F
0 [Ag0]
标准曲线
17
根据加样顺序与温育次数的不同，放 射免疫分析可分为如下三种。 平衡法：将非标记抗原、抗体、标记抗原 依次加入反应管，混匀后一次性温育至反 应达到动态平衡，再加分离剂使B与F分离。
18
顺序加样法：先将非标记抗原与抗体在反 应管内作第一次温育，待反应达到动态平 衡后，加入标记抗原，作第二次温育，然 后分离B与F。
25
第4代(1981-1995)：早在l975年，Milstein和Kshler 将绵羊红细胞注射给小鼠，将获得的小鼠脾细胞 与骨髓瘤细胞融合，得到了杂交细胞，经培养、 分离、成株等系列步骤后，首次制备出小鼠抗绵 羊红细胞的单克隆抗体(mAb)。这一重大研究成 果为RIA及其他免疫分析技术提供了新型特异性 抗体。进入20世纪80年代，mAb制备技术的完善 和许多固相载体材料的研制成功，将试管固相、 塑料球等包被mAb制成固相抗体，传统IRMA技术 的灵敏度、特异性和检测量程度提高到了一个新 水平。
4
R.S. Yalow
S.A. Berson
5
由于胰岛素抗体的浓度太低，用以往 的免疫学技术不能测定，因此Berson 和Yalow等人采用放射性标记法测定浓 度极低的抗原-抗体复合物。电泳结果 表明在接受胰岛素治疗的病人的血浆 中，胰岛素与一种球蛋白结合，证明 胰岛素抗体确实存在。
6
值得一提的是，在20世纪50年代中期， 免疫学家还不能接受“胰岛素抗体”这 一概念。Berson和Yalow等人的论文被 《Science》退稿，刚开始投《Journal of Clinical Investigation》(JCI)也是退稿， 后来向JCI的编辑作出妥协，从标题中 删去“胰岛素抗体”字样，论文才得以 在JCI上发表。
第六章-免疫比浊分析PPT课件
BNⅡ、BN100特种蛋白分析分析系统
（二）ARRAY分析系统 1.测定原理 本系统属于速率散射比浊分析法，在抗体过量的 前提下，光束通过抗原抗体复合物时所产生的散 射光速率变化大小与抗原浓度成正比。
速率的峰值通过电脑处理系统转换成待测抗 原的浓度。
2.仪器基本组成
ARRAY系统由分析仪、电脑处理系统、打印 机构成，其主要构成部分为分析仪，由加液 系统、散射测浊仪、40孔样本转盘、20孔试 剂转盘、软盘驱动器等组成。
•41
• 4.单向琼脂扩散法可用于
• A.抗体定性 B.抗体定量
• C.抗原定性 D.抗原定量
• 5.双向琼脂扩散试验，两种受检抗原的性质完全 相同时，沉淀线出现
• A.二条直线相交叉 C.二条弧线部分融合
B.二条弧线完全融合 D.二条直线不连接
• 6.火箭免疫电泳达到终点时应
• A.火箭峰呈云雾状 B.火箭峰呈圆形
抗原抗体复合物形成时间与速率的关系
累计时间 复合物产 产生速率 生总量
5
8
—
10
13
5
15
25
12
20
60
35
25
150
90
30
230
80
35
300
70
40
360
60
45
415
55
50
450
45
55
480
30
60
500
20
•18
当抗体的浓度固定于一定范围时，复合物 形成的速率峰值的高低与抗原的含量成正比， 随着时间的延长，免疫复合物的量逐渐增多， 抗原抗体结合速度的峰值在一定的时间出现。 通过微机处理即可得到待测蛋白成份的含量。
免疫学应用-PPT课件精选全文
将PHA注射于受试者前臂屈侧皮内， 6-12小时后局部出现红斑硬结，24-48 小时达高峰，即为阳性反应，常用于检 测细胞免疫水平。
祝愿 同学 们前 程似 锦！
免疫标记技术：——免疫荧光技术
免疫荧光直接法
免疫荧光间接法
免疫标记技术：——免疫酶技术
1、包被抗体 洗
1、包被抗原 洗
2、加抗原 洗
2、加抗体 洗
3、加酶标抗体 洗
3、加酶标抗球 蛋白
洗
4、加底物显色 ELISA双抗体夹心法
4、加底物显色 ELISA间接法
免疫标记技术：—放射免疫测定法（RIA）
细胞免疫检测——T细胞亚群测定
用间接荧光法 检测CD4和CD8 T细胞
CD4/CD8正常 比值为1.7-2.0左 右。
细胞免疫检测——淋巴细胞转化试验
---细胞介导的细胞毒试验
B细胞的检测
B细胞数量的检测 (1)膜表面免疫球蛋白(SmIg)的检测：SmIg是 B细胞特有的表面标志，因此是鉴定B细胞的可 靠指标。用抗SmIg抗体，借助直接免疫荧光法 或免疫组织化学法进行检测。
(2)间接免疫荧光法：应用针对B细胞表面抗 原(CDl9、CD20、CD21、CD22等)的特异性 单克隆抗体，以间接免疫荧光法对B细胞进 行鉴定和计数。
B细胞功能测定
B细胞增生试验 原理与T细胞增生试验相同； 但刺激物主要为美洲商陆(PWM)、富
含SPA的金葡菌、细菌脂多糖等。
体内免疫学检测
放射免疫测定法（RIA）是将放射性核 素分析的灵敏性和抗原抗体反应的特异性结 合的测定技术。具有灵敏、精确、特异性高、 易规范化及自动化等优点的一种先进的免疫 标记技术。
免疫标记技术：—金免疫技术（金标法）
祝愿 同学 们前 程似 锦！
免疫标记技术：——免疫荧光技术
免疫荧光直接法
免疫荧光间接法
免疫标记技术：——免疫酶技术
1、包被抗体 洗
1、包被抗原 洗
2、加抗原 洗
2、加抗体 洗
3、加酶标抗体 洗
3、加酶标抗球 蛋白
洗
4、加底物显色 ELISA双抗体夹心法
4、加底物显色 ELISA间接法
免疫标记技术：—放射免疫测定法（RIA）
细胞免疫检测——T细胞亚群测定
用间接荧光法 检测CD4和CD8 T细胞
CD4/CD8正常 比值为1.7-2.0左 右。
细胞免疫检测——淋巴细胞转化试验
---细胞介导的细胞毒试验
B细胞的检测
B细胞数量的检测 (1)膜表面免疫球蛋白(SmIg)的检测：SmIg是 B细胞特有的表面标志，因此是鉴定B细胞的可 靠指标。用抗SmIg抗体，借助直接免疫荧光法 或免疫组织化学法进行检测。
(2)间接免疫荧光法：应用针对B细胞表面抗 原(CDl9、CD20、CD21、CD22等)的特异性 单克隆抗体，以间接免疫荧光法对B细胞进 行鉴定和计数。
B细胞功能测定
B细胞增生试验 原理与T细胞增生试验相同； 但刺激物主要为美洲商陆(PWM)、富
含SPA的金葡菌、细菌脂多糖等。
体内免疫学检测
放射免疫测定法（RIA）是将放射性核 素分析的灵敏性和抗原抗体反应的特异性结 合的测定技术。具有灵敏、精确、特异性高、 易规范化及自动化等优点的一种先进的免疫 标记技术。
免疫标记技术：—金免疫技术（金标法）
荧光偏振免疫分析ppt课件
荧光偏振免疫分析的优点
1.均相系统,不需要洗涤操作,可大大减少试剂的用量。
2.检测速度很快,且易于自动化,适于快速的筛选检测。
3.荧光标记抗原的均一性好,性质稳定,可长期保存,方法的重现性好。
4.FP值是一个比值,与其他荧光检测技术相比,不易受溶液颜色和仪器灵 敏度变化的影响，实验结果稳定,可靠性高。
荧光偏振免疫分析的缺点
1. FPIA比ELISA方法的灵敏度低。一般来说FPIA的检测限为 0.1-10ng/mL-1左右。
2.FPIA易受样本基质(如与基质蛋白的非特异性结合),背景荧光 和光散射的影响。
3.FPIA的检测信号的背景较高,检测范围(窗口)较窄,信噪比 (S/N)较低。
4. FPIA对荧光标记物的纯度要求较高,需耍较复杂的纯化步骤。
认识到了贫困户贫困的根Байду номын сангаас原因，才 能开始 对症下 药，然 后药到 病除。 近年来 国家对 扶贫工 作高度 重视， 已经展 开了“精 准扶贫 ”项目
组蛋白对DNA荧光偏振度影响
2.荧光偏振度测量:
用MOS-450/CD测量,其是一个标准的荧光偏振度测量模式;
在测量荧光偏振度时, 偏振光弹性调制器自动设置在半波长模 式, 这样激发光在水平分量和垂直分量之间以100 kHz 的频率转换;
认识到了贫困户贫困的根本原因，才 能开始 对症下 药，然 后药到 病除。 近年来 国家对 扶贫工 作高度 重视， 已经展 开了“精 准扶贫 ”项目
组蛋白对DNA荧光偏振度影响
4. 对图表的解释:
在溶液中单独存在时, DNA分子随机卷曲且有弹性此构型对应着 一定的偏振度值.在我们的实验条件下, DNA 分子的荧光偏振 度在0.11左右;
认识到了贫困户贫困的根本原因，才 能开始 对症下 药，然 后药到 病除。 近年来 国家对 扶贫工 作高度 重视， 已经展 开了“精 准扶贫 ”项目
1.均相系统,不需要洗涤操作,可大大减少试剂的用量。
2.检测速度很快,且易于自动化,适于快速的筛选检测。
3.荧光标记抗原的均一性好,性质稳定,可长期保存,方法的重现性好。
4.FP值是一个比值,与其他荧光检测技术相比,不易受溶液颜色和仪器灵 敏度变化的影响，实验结果稳定,可靠性高。
荧光偏振免疫分析的缺点
1. FPIA比ELISA方法的灵敏度低。一般来说FPIA的检测限为 0.1-10ng/mL-1左右。
2.FPIA易受样本基质(如与基质蛋白的非特异性结合),背景荧光 和光散射的影响。
3.FPIA的检测信号的背景较高,检测范围(窗口)较窄,信噪比 (S/N)较低。
4. FPIA对荧光标记物的纯度要求较高,需耍较复杂的纯化步骤。
认识到了贫困户贫困的根Байду номын сангаас原因，才 能开始 对症下 药，然 后药到 病除。 近年来 国家对 扶贫工 作高度 重视， 已经展 开了“精 准扶贫 ”项目
组蛋白对DNA荧光偏振度影响
2.荧光偏振度测量:
用MOS-450/CD测量,其是一个标准的荧光偏振度测量模式;
在测量荧光偏振度时, 偏振光弹性调制器自动设置在半波长模 式, 这样激发光在水平分量和垂直分量之间以100 kHz 的频率转换;
认识到了贫困户贫困的根本原因，才 能开始 对症下 药，然 后药到 病除。 近年来 国家对 扶贫工 作高度 重视， 已经展 开了“精 准扶贫 ”项目
组蛋白对DNA荧光偏振度影响
4. 对图表的解释:
在溶液中单独存在时, DNA分子随机卷曲且有弹性此构型对应着 一定的偏振度值.在我们的实验条件下, DNA 分子的荧光偏振 度在0.11左右;
认识到了贫困户贫困的根本原因，才 能开始 对症下 药，然 后药到 病除。 近年来 国家对 扶贫工 作高度 重视， 已经展 开了“精 准扶贫 ”项目
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
1990年德国推出的全自动管式ELISA分析系统和配 套试剂
用链霉亲和素包被的聚苯乙烯管、生物素结合的抗 原或抗体，辣根过氧化物酶标记的抗体和显色底物 ABTS
测定中标准曲线可使用2星期，每次测定只需一点 定标
测定的精密度CV在3%左右
5、微粒固相酶免疫测定仪
美国生产自动酶免疫分析仪应用聚苯乙烯微粒（颗 粒直径0.47μm）作为固相，特异抗体或抗原包被在 微粒上。
1、微孔板固相酶免疫测定仪器
有单通道和多通道两种类型 工作原理与主要结构和光电比色计相同 不同之处在于：
比色液的容器是塑料微孔板 以垂直光束通过待测液 通常使用光密度OD来表示吸光度
2、半自动微孔板式ELISA分析仪
在酶标仪的基础上再配置:
加液器 温育器 洗板机 测读仪
测定中需由手工将微孔板移至下一步骤的仪器中进行。
特异抗体或抗原包被的磁微粒（颗粒直径1μm）
FITC结合的特异抗体或抗原
碱性磷酸酶标记的特异抗体或抗原
什么样的反应
底物酚肽（phenolphthalein）磷酸酯
反应结束后将试管架放在磁铁板上，磁微粒被磁铁 吸引至管底，完成固相与液相的分离。酶作用后反 应液呈粉红色。
磁颗粒ELISA是将两株单抗分别标记酶和异硫氰 酸荧光素(FITC)，另将一抗FITC抗体经化学反应 与磁颗粒偶联，制成可磁化固相通用分离剂。测 定时将样品和两种标记单抗加至试管中温育，然 后加入可磁化抗FITC颗粒分离剂，生成夹心免疫 复合物，洗涤，加酶底物显色。
标记抗体 （二抗）
待测抗 体
间接法原理
包被体
包被抗 原
标记抗原
俘获法原理
包被体
待测抗体
俘获抗体 （二抗）
标记抗原 待测抗体
双抗原夹心法原理
包被体
包被抗原
我们把采用酶标的方法测定物质含量的设备称为 酶标仪。
一般简单的酶标仪只有读数、数据处理的功能， 还需要配置孵育箱，洗板机，人工操作步骤繁琐 。
三、酶免疫分析仪的性能评价和维护保养
（一）评价指标和方法
1．滤光片波长精度检查及其峰值测定 2．灵敏度和准确度 3．通道差与孔间差检测 4．零点飘移 5．精密度评价 6．线性测定 7．双波长评价
重点是光学部分 1．滤光片波长精度检查 2．通道差与孔间差检测
四、酶免疫分析仪的临床应用
１．病原体及其抗体的检测 2．各种免疫球蛋白和细胞因子、补体等 3．肿瘤标志物 4．多种激素 5．药物和毒品
ELISA）
需要了解的基本概念
▪ 酶免疫测定（Enzyme Immunoassay, EIA)
✓ 均相酶免测定 对象为小分子抗原或半抗原，主要用于药物 测定
✓ 异相酶免测定 需经过结合的标记物和游离的标记物的分离 才能测定. 分离的方法主要通过固相载体，故此法称为固相 酶免疫测定ELISA 。
▪ ELISA的测定模式 :
第十一章 免疫分析技术和相关仪器
第一节 酶免疫分析仪
一、酶免疫分析技术的分类：
酶免疫分析(enzyme immunoassay，EIA)
根据是否需要分离结合与游离的酶标记物，可分为: 酶扩大免疫测定
均相酶免疫测定
非均相酶免疫测定
克隆酶供体免疫测定 液相酶免疫法
固相酶免疫法
(酶联免疫吸附测定 enzyme linked immunosorbent assay，
✓ 双抗体夹心法 ✓ 间接法 ✓ 竞争法
双抗体夹心法（三明治法）原理
待测物
标记抗体
固相支持物表面
包被抗体
夹心法的剂量--反应关系曲线
信号强度（Y）
Hook效应
线性范围
待测物浓度（X）
竞争法的原理
待测物 标记抗原
固相支持物表面
包被抗体
竞争法的剂量--反应关系曲线
信号强度（ Y ）
线性范围
待测物浓度（ X ）
第一次抗原抗体反应后，将反应液通过特制的玻璃 纤维膜，聚苯乙烯微粒吸附在玻璃纤维膜上，液体 则通过膜滤出。
以后的反应在膜上进行，标记酶为ALP，底物为4甲基伞酮磷酸酶，反应后进行荧光测定。
6、磁微粒固相酶免疫测定仪
瑞士出品的分析系统由分光光度测读仪、磁铁板和 试剂组成：
试剂包括：
抗异硫氰酸荧光素（FITC）抗体
辣根过氧化物酶的色原底物
HRP最常用的色原底物有:
邻苯二胺(OPD)、2，2’-吖嗪-(3-乙酰苯基噻唑磺酸6)[ABTS](杂环吖嗪)
四甲基联苯胺(TMB) 4-氨基安替比林：苯酚耦联底物对
OPD被认为是HRP最为敏感的色原底物之一，其在HRP的 作用下，由过氧化氢(H202) 氧化而聚合成2，2’-二氨基偶 氮苯(DAB)。在pH5.0左右时，DAB在波长450nm处有广范 围的最大吸收，当pH值降为1.0时，最大吸收波长移动至 492nm，同时摩尔消光系数变大，显色加深。因而常用强 酸如硫酸或盐酸终止反应。OPD的缺点是其对机体具有致 突变作用。
稳 定：
只要避免人为操作错误， 可连续数年良好工作。
准 确：
不存在交叉感染。反应振荡， 确保检测 准确。
高 速：
加注、读板速度快
扩 展 性：
软件可升级，样本量增加，可联机使用
用户做主更多：
开放式试剂 WINDOW操作系统 中/英/日自选操作界面 自定义编程 自动/自定义时间表 无限存档
4、管式固相酶免疫测定仪
检测时间:以乙肝两对半（立可读）为例
仪器操作各单元如下（满板）
加样品时间：6-7分钟；9-10分钟（使用液面传感器） 加酶时间： 4分46秒(洗5遍，不浸泡) 加两种显色剂A、B共： 5分30秒 加终止液： 2分42秒 读板时间： 2分58秒
优势
自动化程度高：
前后处理一体化设计，减少人与样品的 接触机会，降低感染。各种自动安全检 测能。
3、全自动微孔板式ELISA分析仪
自动化酶免疫分析系统由:
加样系统 温育系统 洗板系统 判读系统 机械臂系统 液路动力系统 软件控制系统等组成
温育箱 反应板 迭式存储器
X-Y头架
样品架
50根 装
50×3
4根独立 上下吸 移管
检 测 光 纤
反应板
反应板 夹具
清 洗 装 置
供水箱 废水箱
全自动酶联免疫系统集加样品、加试剂、孵育 、震荡、洗板、读数、数据处理7大功能于一体。
二、酶免疫分析仪的类型、工作原理及 基本结构
微孔板固相酶免疫测定仪器(酶标仪) 半自动微孔板ELISA分析仪 全自动微孔板ELISA分析仪 管式固相酶免疫测定仪器 小珠固相酶免疫测定仪器 磁微粒固相酶免疫测定仪器等
用链霉亲和素包被的聚苯乙烯管、生物素结合的抗 原或抗体，辣根过氧化物酶标记的抗体和显色底物 ABTS
测定中标准曲线可使用2星期，每次测定只需一点 定标
测定的精密度CV在3%左右
5、微粒固相酶免疫测定仪
美国生产自动酶免疫分析仪应用聚苯乙烯微粒（颗 粒直径0.47μm）作为固相，特异抗体或抗原包被在 微粒上。
1、微孔板固相酶免疫测定仪器
有单通道和多通道两种类型 工作原理与主要结构和光电比色计相同 不同之处在于：
比色液的容器是塑料微孔板 以垂直光束通过待测液 通常使用光密度OD来表示吸光度
2、半自动微孔板式ELISA分析仪
在酶标仪的基础上再配置:
加液器 温育器 洗板机 测读仪
测定中需由手工将微孔板移至下一步骤的仪器中进行。
特异抗体或抗原包被的磁微粒（颗粒直径1μm）
FITC结合的特异抗体或抗原
碱性磷酸酶标记的特异抗体或抗原
什么样的反应
底物酚肽（phenolphthalein）磷酸酯
反应结束后将试管架放在磁铁板上，磁微粒被磁铁 吸引至管底，完成固相与液相的分离。酶作用后反 应液呈粉红色。
磁颗粒ELISA是将两株单抗分别标记酶和异硫氰 酸荧光素(FITC)，另将一抗FITC抗体经化学反应 与磁颗粒偶联，制成可磁化固相通用分离剂。测 定时将样品和两种标记单抗加至试管中温育，然 后加入可磁化抗FITC颗粒分离剂，生成夹心免疫 复合物，洗涤，加酶底物显色。
标记抗体 （二抗）
待测抗 体
间接法原理
包被体
包被抗 原
标记抗原
俘获法原理
包被体
待测抗体
俘获抗体 （二抗）
标记抗原 待测抗体
双抗原夹心法原理
包被体
包被抗原
我们把采用酶标的方法测定物质含量的设备称为 酶标仪。
一般简单的酶标仪只有读数、数据处理的功能， 还需要配置孵育箱，洗板机，人工操作步骤繁琐 。
三、酶免疫分析仪的性能评价和维护保养
（一）评价指标和方法
1．滤光片波长精度检查及其峰值测定 2．灵敏度和准确度 3．通道差与孔间差检测 4．零点飘移 5．精密度评价 6．线性测定 7．双波长评价
重点是光学部分 1．滤光片波长精度检查 2．通道差与孔间差检测
四、酶免疫分析仪的临床应用
１．病原体及其抗体的检测 2．各种免疫球蛋白和细胞因子、补体等 3．肿瘤标志物 4．多种激素 5．药物和毒品
ELISA）
需要了解的基本概念
▪ 酶免疫测定（Enzyme Immunoassay, EIA)
✓ 均相酶免测定 对象为小分子抗原或半抗原，主要用于药物 测定
✓ 异相酶免测定 需经过结合的标记物和游离的标记物的分离 才能测定. 分离的方法主要通过固相载体，故此法称为固相 酶免疫测定ELISA 。
▪ ELISA的测定模式 :
第十一章 免疫分析技术和相关仪器
第一节 酶免疫分析仪
一、酶免疫分析技术的分类：
酶免疫分析(enzyme immunoassay，EIA)
根据是否需要分离结合与游离的酶标记物，可分为: 酶扩大免疫测定
均相酶免疫测定
非均相酶免疫测定
克隆酶供体免疫测定 液相酶免疫法
固相酶免疫法
(酶联免疫吸附测定 enzyme linked immunosorbent assay，
✓ 双抗体夹心法 ✓ 间接法 ✓ 竞争法
双抗体夹心法（三明治法）原理
待测物
标记抗体
固相支持物表面
包被抗体
夹心法的剂量--反应关系曲线
信号强度（Y）
Hook效应
线性范围
待测物浓度（X）
竞争法的原理
待测物 标记抗原
固相支持物表面
包被抗体
竞争法的剂量--反应关系曲线
信号强度（ Y ）
线性范围
待测物浓度（ X ）
第一次抗原抗体反应后，将反应液通过特制的玻璃 纤维膜，聚苯乙烯微粒吸附在玻璃纤维膜上，液体 则通过膜滤出。
以后的反应在膜上进行，标记酶为ALP，底物为4甲基伞酮磷酸酶，反应后进行荧光测定。
6、磁微粒固相酶免疫测定仪
瑞士出品的分析系统由分光光度测读仪、磁铁板和 试剂组成：
试剂包括：
抗异硫氰酸荧光素（FITC）抗体
辣根过氧化物酶的色原底物
HRP最常用的色原底物有:
邻苯二胺(OPD)、2，2’-吖嗪-(3-乙酰苯基噻唑磺酸6)[ABTS](杂环吖嗪)
四甲基联苯胺(TMB) 4-氨基安替比林：苯酚耦联底物对
OPD被认为是HRP最为敏感的色原底物之一，其在HRP的 作用下，由过氧化氢(H202) 氧化而聚合成2，2’-二氨基偶 氮苯(DAB)。在pH5.0左右时，DAB在波长450nm处有广范 围的最大吸收，当pH值降为1.0时，最大吸收波长移动至 492nm，同时摩尔消光系数变大，显色加深。因而常用强 酸如硫酸或盐酸终止反应。OPD的缺点是其对机体具有致 突变作用。
稳 定：
只要避免人为操作错误， 可连续数年良好工作。
准 确：
不存在交叉感染。反应振荡， 确保检测 准确。
高 速：
加注、读板速度快
扩 展 性：
软件可升级，样本量增加，可联机使用
用户做主更多：
开放式试剂 WINDOW操作系统 中/英/日自选操作界面 自定义编程 自动/自定义时间表 无限存档
4、管式固相酶免疫测定仪
检测时间:以乙肝两对半（立可读）为例
仪器操作各单元如下（满板）
加样品时间：6-7分钟；9-10分钟（使用液面传感器） 加酶时间： 4分46秒(洗5遍，不浸泡) 加两种显色剂A、B共： 5分30秒 加终止液： 2分42秒 读板时间： 2分58秒
优势
自动化程度高：
前后处理一体化设计，减少人与样品的 接触机会，降低感染。各种自动安全检 测能。
3、全自动微孔板式ELISA分析仪
自动化酶免疫分析系统由:
加样系统 温育系统 洗板系统 判读系统 机械臂系统 液路动力系统 软件控制系统等组成
温育箱 反应板 迭式存储器
X-Y头架
样品架
50根 装
50×3
4根独立 上下吸 移管
检 测 光 纤
反应板
反应板 夹具
清 洗 装 置
供水箱 废水箱
全自动酶联免疫系统集加样品、加试剂、孵育 、震荡、洗板、读数、数据处理7大功能于一体。
二、酶免疫分析仪的类型、工作原理及 基本结构
微孔板固相酶免疫测定仪器(酶标仪) 半自动微孔板ELISA分析仪 全自动微孔板ELISA分析仪 管式固相酶免疫测定仪器 小珠固相酶免疫测定仪器 磁微粒固相酶免疫测定仪器等