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（三）接种 1、接种室消毒
污染的主要来源是空气中的细菌和孢子，接种室消毒是至关 重要的。用70％的酒精喷雾使空气消毒， 70％的酒精擦拭工 作台并用紫外线照射20分钟
2、无菌操作要求
所有的接种操作要在酒精灯火焰旁完成。 每次使用器械后，都需要用火焰灼烧灭菌。 接种后立即盖好瓶盖。
3、材料的切取和接种
（三）是否进行了统计、对照与记录
做好统计和对照，填好结果记录表，从第一步开始做好实 验记录。可以分组配制不同培养基，如诱导愈伤组织直接分化 丛芽的培养基，做不同培养基配方的实验比较。
（四）生根苗的移栽是否合格
关键是既要充分清洗根系表面的培养基，又不能伤及根系。 一般先使用无土栽培的办法，培养基要提前消毒。苗壮后再移 植到土壤。可通过统计成活率来衡量移栽水平。
三、结果分析与评价
（一）对接种操作中污染情况的分析
一般情况下，细菌污染可能是由接种人员造成的，如未戴 口罩，接种时说话，或手及器械消毒不严等。
（二）是否完成了对植物组织的脱分化和再分化
观察实验结果，看是否培养出愈伤组织，记录愈伤组织的 出现时间。统计更换培养基后愈伤组织进一步分化成根和芽的 比例和时间。
思考：同专题2中微生物培养基的配方相
比，MS培养基的配方有哪些明显的不同？
微无生机物物培养基以有机营养有为主机。物植物组
织培养MS培养基则以无机营养为主。
牛肉膏蛋白胨培养基
在MS培养基MS配培养制基好之后，常常需要加入植物激素
3、植物激素的影响
①常用的植物激素：生长素、细胞分裂素和赤霉素
生长素类：2（，I4AA－）二、氯萘苯乙氧酸乙（酸N（AA2），、4－吲D哚）丁、酸吲（哚I乙BA酸） 细胞分裂素类：激 （动6素－（BAK）T）、、玉6米－素苄（基Z嘌T）呤 赤霉素类： 赤霉酸（GA3）

专题2 微生物的培养与应用
课题1 微生物的实验室培养
1
（一）培养基
1、定义：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制 出供其生长繁殖的营养基质。 2、培养基成分:碳源、氮源、水和无机盐等4类 ★另外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质,以及 氧气、二氧化碳、渗透压等的要求。如:培养乳酸菌时需 添加维生素、霉菌PH调成酸性、细菌PH调成中性或微碱 性、厌氧微生物提供无菌条件。 ★ 4类成分齐全的培养基叫基本培养基，例如牛肉膏蛋白 胨培养基
根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指
示剂或化学药品配制而成，用以鉴别不同种类的
微生物。
3
液体培养基：
表面生长
均匀混浊生长
沉淀生长
4
固体培养基：菌落
单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖 时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定 形态结构的子细胞群体，叫做菌落。
菌落特征是鉴定菌种的重要依据。
5
于计算平均值，因为它不接近真实值，应重新实验
并注意：将菌液摇匀后再接种 P22
35
㈤.微生物的培养与观察
培养不同微生物往往需要不同培养温度。 细菌：30～37℃培养1～2d 放线菌：25～28℃培养5～7d 霉菌：25～28℃的温度下培养3～4d。
在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。 选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止 因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。
半固体培养基：
无动力
有动力(弥散)
(是否运动) 6
选择培养基:从微生物群中选择具有特定表型的细胞. 使之进行繁殖所用的培养基,称为选择培养基.
加入青霉素的培养基: 分离酵母菌、霉菌等真菌
加入高浓度食盐的培养基: 分离金黄色葡萄球菌

[思考]“闻着臭，吃着香” ， 请解释其原因？
细菌进行发酵产生具有有浓烈臭味道的气体 （NH3，H2S）。 毛霉分泌的蛋白酶 将豆腐所含有的蛋白质水解为 多肽和各种氨基酸，脂肪酶可以将脂肪分解成甘 油和脂肪酸。 酵母菌进行酒精发酵产生酒精，酒 精、脂肪酸生成具有芳香气的酯。
结果分析与评价 1．纵观腐乳的整个制作过程，哪些因素会影响腐乳 的风味和质量? (1)豆腐的品质：目前市场上的豆腐有两种，一种是由 石膏形成的，另一类是由卤水形成的。后者含水量相 对较低，比较适宜用于制作腐乳。 (2)菌种的选择和用量：菌种是发酵的关键，如有杂菌 污染则直接影响产品的色、香、味。 (3)温度和湿度：影响菌丝的生长和代谢。 (4)发酵时间：发酵时间影响反应程度。 (5)调味品的种类和用量。
加盐 腌制
加卤汤 装瓶
密封 腌制
注意：温 度控制15 －18℃； 豆腐的水 分控制在 70％左右
瓶口的盐 厚一点可 以抑制微 生物生长 避免豆腐
腐败
加12％左右 的酒以抑制 微生物的生 长使腐乳有 香味
封瓶时瓶 口通过酒 精灯火焰 防止瓶口
污染
在整个的操作过程中，可以抑制杂菌的污染的操 作是： ①长毛时的温度 ②加盐腌制 ③卤汤中的酒精、香辛料 ④对用具的消毒灭菌 ⑤密封
霉的生长 时改变口感和风味
控制毛霉的生长
果酒
微生物
酵母菌
分类 代谢类型 反应原理 反应温度 检测方法
真菌
异养兼 性厌氧
酵母菌的 无氧呼吸 产生酒精
18~25 ℃
重铬酸钾与 其反应呈灰 绿色
果醋
醋酸菌
细菌
异养需氧 醋酸菌的 有氧呼吸 产生醋酸
30~35℃
品尝、 pH试纸 检测

下降 (硝酸盐还原菌受抑制， 部分亚硝酸盐被分解) 下降至相对稳定 (硝酸盐还原菌被完全抑 制)
提醒： (1)亚硝酸盐与人体健康的关系 ①膳食中绝大部分亚硝酸盐在人体内以“过客”的形式随尿排出，但当摄
入总量较多时，可引起中毒或死亡。 ②亚硝酸盐在一定条件下可转化为致癌、致畸和致突变的物质——亚硝胺。 (2)乳酸菌、乳酸、亚硝酸盐的数量随时间变化的曲线如下乳酸菌、乳酸、
六、泡菜的制作
七、泡菜腌制过程中，乳酸菌、乳酸和亚硝 酸盐的变化
发酵 时期
发酵 初期
发酵 中期
发酵 后期
乳酸菌
少 (有O2，乳酸菌活动受抑 制)
最多 (乳酸抑制其它菌活动)
减少 (乳酸继续积累，pH继续 下降，抑制其活动)
乳酸
少
积累、 增多、 pH下降 继续增多， pH继续下降
亚硝酸盐
增加 (硝酸盐还原菌的作用)
具体操作步骤： (1)泡菜的腌制过程
2006年11月1日上午，课外小组同学选取1.2.3号三只容积相同的泡菜坛，用清 水洗净，用开水消毒，然后在1.2.3号坛中分别加入洗净并用开水焯过的白萝卜和 洋白菜各1kg，再倒入倒满煮沸过的10%的NaCl溶液，用水封坛，置于温度为 18—20°C的同一环境中，封坛前进行第一次测定以作对照。后来每隔三天测定 一次，直到泡菜腌熟能够食用为止（此周期为15天）——定期取样。
表2：未加热和加热情况下亚硝酸盐含量的对比（mg/kg）
实验结果分析和讨论：
三只泡菜坛中的亚硝酸盐含量变化的绝对数量虽然不同，但整体的变化趋势却 基本相同。
在腌制后的第四天，三只泡菜坛中亚硝酸盐的含量都达到最高峰（1.2.3号坛中 的亚硝酸盐分别达到0.6mg/kg、0.2mg/kg、0.8mg/kg），也就是说，在腌制后的前 5天内，泡菜中的亚硝酸盐含量就可以达到最高峰。

三、果酒、果醋制作的基本过程
1.对发酵瓶、纱布、榨汁器等用具进行清洗并消毒。 2.取葡萄500g，去除腐烂的叶子,用清水冲洗葡萄1－2次除去污物
（注意冲洗次数不宜太多）,去除枝梗.
3.榨汁后装入发酵瓶（要留出大约 1/3的空间） 。
4.将发酵瓶置于适宜的温度（18－25℃）下酒精发酵。 【简易装置12h天排气一次（拧松瓶盖）】 5.10天后，取样检验。 6.加入醋酸菌或醋曲，然后移至30－35℃条件下发酵，适 时充气（氧气或者无菌空气）。
讨论：果醋的作用
果醋中含有20多种氨基酸和16种有机酸，不 仅对8种有害微生物如葡萄菌、伤寒菌、赤痢 菌、霉菌等有明显抑制杀灭作用，还可降低 胆固醇、促进消化、降低血脂和血压、软化 血管、提高肝脏的解毒和新陈代谢等。
1.适量食醋对消化不良和缺乏胃酸的老年人能生 津开胃，加强消化系统的功能。 2.适量食醋能抑制老年人肠道内肠毒素对人体的 影响。
课题2 果醋的制作
教学目标
1.说明果醋制作的原理。 2.设计制作果醋的装置。 3.完成果醋的制作。
♪课题重点：说明果醋的制作原理，设计制作装置，制 作出果醋。 ♪课题难点：制作过程中发酵条件的控制。
一、果醋的制作原理 1、小醋组讨酸论菌，（思原考核下细列菌问题）：二分裂增殖
21、、醋果酸醋菌的最适制生作长利温用度的30菌－3种5℃是、？PH属:于偏酸原核5还.4～6.3 、 醋是酸真菌核是生好物氧细？菌如，何只繁有殖当的氧气？充足时才能进行旺盛的生理活动。
方程式为: C2H5OH+O2
酶
CH3COOH+H2O
（2）分析此发酵装置不足之处 易被杂菌污染
思考：结合果酒、果醋的制作 原理，你认为应该如何使用这 个发酵装置？

2、无菌操作要求
操作要在酒精灯火焰旁完成，每次使用器械后，都需 要用火焰灼烧灭菌，接种后立即盖好瓶盖。
3、材料的切取和接种
将消过毒的菊花茎段在无菌培养皿中切成 0.5～1cm的小段，用镊子夹取菊花茎段接种。
4、接种注意事项
①每接种一块外植体前，镊子需放入体积分数为70 ％的酒精溶液中消毒一次，然后在酒精灯火焰上烧 一遍，冷却后再接种
材料的种类、年龄及保存时间长短
2、营养---MS培养基
无 （1）大量元素: N、P、S、K、Ca、Mg 机 盐 （2）微量元素:Fe、Mn、Zn、Cu、B、Mo、I、Co
有机物 甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖 植物激素 生长素、细胞分裂素、赤霉素等
思考与讨论：你能说出各种营养物质的作用吗？ 同专题2中微生物培养基的配方相比，MS培养基 的配方有哪些明显的不同？
2.答：外植体的生理状态是成功进行组织培养 的重要条件之一。生长旺盛的嫩枝生理状况 好，容易诱导脱分化和再分化。
基本原理: 细胞的全能性
菊 基本过程: 脱分化 愈伤组织 再分化
花
的 影响因素： 材料性质、营养物质、
组
调节物质、环境条件
织 操作流程： 配制MS固体培 外植体的消毒
培
养基
养
栽培 移栽 培养 接种
例：下列有关植物组织培养过程中，MS培养基 的描述错误的是（ D ） A.Ｎ、Ｐ主要影响蛋白质、核酸的合成 B.蔗糖既是碳源也能提供能量，同时还能调节 渗透压 C.甘氨酸是蛋白质的组成成分，也是有机氮源 D.大量元素中没有C、H、O是因为不需要
3、植物激素的影响 学生活动：阅读教材，归纳填空 1.常用植物激素：生长素、细胞分裂素和 赤霉素 。 2.生长素、细胞分裂素是

专题3 植物的组织培养技术 课题1 菊花的组织培养
1958年， 美国 科学家斯图尔德将胡 萝卜韧皮部的一些细 胞进行培养，由于细 胞分化而最终发育成 完整的新植株。
一、植物组织培养的基本过程 植物组织培养的过程
细胞分化
概念：在植物个体发育的过程中，细胞在形态、结 构、生理功能上发生稳定性差异的过程叫做细胞分化。
四、 结果分析与评价
请分析图中培养容器 内愈伤组织只分化出根， 难以形成试管苗的原因。
再分化阶段，生长素用量大于细胞分裂素用量，利 于根的分化，抑制芽的形成。
五、 课题延伸
一般来说，容易进行无性繁殖的植物，也 容易进行组织培养。
KH2PO4 MgSO4•
N、P、K1、70mg 7HC2Oa、Mg、370Smg
CaCl2
440mg
FeSO4• 7H2O
27.8mg
微量元 Na2EDTA
素：Fe、 MnSO4• 4H2O
Mn、B、 Zn、I
ZnSO4•
4H2O
H3BO3
37.3mg 22.3 8.6mg 6.2mg
KI
0.83mg
每一个活细胞中都包含本物种的全部遗传信息。
思考2：在生物体内，细胞能否表现出全能性？为什么？
不能。在生物体内，基因选择性表达。
思考3：植物细胞在什么情况下才能表现出全能性？
首先要离体
菊花的组织培养视频1
二、影响植物组织培养的因素
成分
含量
NH4NO3
1650mg
MS培养 基成分 及含量
KNO3
大量元素1：900mg
二、影响植物组织培养的因素 1、相对特殊的营养、激素、环境
矿质营养（大量元素、微量元素） 有机营养（甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖）

并分别加入2.0mL对氨基苯磺酸溶液，混匀，静置3～ 5分钟后；
再分别加入1.0mL N-1－萘基乙二胺盐酸盐溶液，加 蒸馏水至50mL，混匀；
观察亚硝酸钠溶液颜色的梯度变化（玫瑰红色逐渐加 深）。
制备样品
增加亚硝酸盐的 溶解度
样品处理液的制备 吸附杂质，脱色， 净化作用
中和乳酸
比色
样品即滤液加入比色管
抽空给自己放个假吧，或许是短暂的穿梭回到童年，仅仅是度一个24h的假期，放肆快乐的开怀大笑一天；或者是选择一家安静美好的民宿，望着月亮发发呆；更或者是集结三五好友，在星空灯火的陪伴下喝点啤酒，聊点理想，都行。 想必，这也算是给即将结束的2019年，画上一个完美的句号了罢。
0今天这个题目的灵感，来自于刘润老师公众号里的文章《假如再选一次，我会选A》。文章中刘润老师给了两个选项： A、：你可以慢慢变成一个强者。 B、：你可以一瞬间以弱变强。
在远古的狩猎时代，人们过着食不果腹，衣不裹体的生活，每一天都在为食物发愁，及时猎取食物就显得尤为重要。因为工具简易，加之那时人的大脑普遍不怎么发达，要捕获一些猎物非常不容易。
并且人多肉少，你不及时吃掉食物，别人就会掠夺那些食物。即使能捕获一些大型猎物，也因为不能很好的储存，食物常常会腐败变质。所以及时获取、即使享受，在几万年的演化中，逐渐成为人们一种本领，深深嵌入人们的意识。
测定亚硝酸盐含量
成品泡菜
蔬菜处理
将鲜菜修整、洗涤、阳光下晾晒，到菜表皮 萎焉时收下，切分成条状或片状。
配制盐水
• 清水与盐按4:1的比例配制好后煮沸冷却。
盐的作用：调味，抑制微生物生长，所以盐含量 过低会造成细菌污染。 煮沸的目的：杀菌 冷却是为了不影响乳酸菌的生命活动。
装坛发酵

走近生物技术
最新人教版高二生物选修1Leabharlann 生物技 术实践电子课本课件【全册】
专题1 传统发酵技术的应用
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目录
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走近生物技术 课题1 果酒和果醋的制作 课题3 制作泡菜并检测亚硝酸盐含量 课题1 微生物的实验室培养 课题3 分解纤维素的微生物的分离 课题1 菊花的组织培养 专题4 酶的研究与应用 课题2 探讨加酶洗衣粉的洗涤效果 专题5 DNA和蛋白质技术 课题2 多聚酶链式反应扩增DNA片段 专题6 植物有效成分的提取 课题2 胡萝卜素的提取 附录2 生物学实验室中常用的国际单位 附录4 常用的消毒灭菌操作方法

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MS固体培养基成分及比例
同微生物培养基相比，MS培养基的配方有哪些明显的不同？
阅读课文，思考以下问题
1. 同微生物培养基相比，MS培养基的配方有哪些明显的不同？
微生物培养基以有机营养为主。与微生物的培养不同， MS培养基则需提供大量无机营养，无机盐混合物包括植 物生长必须的大量元素和微量元素两大类。
培养植物的器官、组织、细胞，并 使其生长、增殖、分化以及再生长 成植株的技术。
细胞分化
个体发育中细胞在形态、结构和生理功能 上出现稳定性差异的过程
思考： 1、细胞分化的原因是什么？
在特定的时间和空间条件下，基因 的选择性表达。
植物组织培养过程示意图
2、上面的示意图中还有什么地方不够完善的？ 没有进行灭菌处理，试管也没有做密封等。
2、你认为组织培养过程中，成功的关键有哪些？这些步骤的 适宜条件是什么？
组织的脱分化及愈伤组织的再分化。 植物组织培养过程中，影响植物细胞脱分化、再分 化的最重要因素是植物激素。
激素配比对组织培养的影响
在培养基中需要添加生长素和细胞分裂素等植物激素，其浓度、 使用的先后顺序、用量的比例等都影响结果。