YABBY和YABBY2基因表达及功能分析实验计划
一、实验材料的准备
1、模式植物的种植及管理（拟南芥番茄）
拟南芥种植：选取Arabidopsis thaliana L. ecotype Col-0，在22℃恒温光照培养箱中培养，16小时光照/8小时黑暗。
番茄种植：选取番茄为一栽培品种（文献表明，野生型番茄的YABBY基因为负调控基因，使番茄果实变小）25℃、16h光照/8h 黑暗交替，取萌发后6d 的幼苗，以备转化。
2、葡萄植株生长管理
3、其他实验材料准备（试剂、药品等）
二、基因全长克隆及序列功能分析
在获得YABBY和YABBY2后，利用相应的计算机软件及数据库对这两个基因的理化性质，结构与功能进行预测，同时考虑构建其同源基因的系统进化树。
理化性质预测：ProtParam （http：//www.expasy.ch/tools/protparam.htmL）结构与功能预测：Swiss model workspace（http://swissmodel.expasy. org/workspace/）
核定位信号预测：PSORT WWW Service（http://psort.ims.u-tokyo.ac.jp/）
进化树构建CLUSTALW2 program （/Tools/clustalw2/ index.html）
三、GFP亚细胞定位
启动子采用CaMV 35S，将含有35S::YABBY–GFP、35S::YABBY2–GFP及35S:: GFP序列的质粒用基因枪击入洋葱表皮细胞，并最终用Zeiss confocal microscope进行拍照观察。
四、转基因（过量表达）
构建好植物过量表达载体后，采用农杆菌转化法将目的基因转入拟南芥和番茄中，拟南芥采用花絮侵染法，番茄采用叶盘转化法，并且细心管理。
五、RNA原位杂交
在葡萄开花前、中、晚期进行花蕾RNA原位杂交，以此检测所研究基因在花的发育过程中表达变化情况。
六、半定量RT-RCR
分别检测葡萄植株和番茄（转基因和未转基因）上不同器官，不同时期YABBY 和YABBY2基因的表达情况。
器官：茎、叶、花、果；
时期：开花前期、开花中期、开花晚期、坐果期、果实膨大期、果实成熟期七、转基因植物的性状分析。
比较转基因番茄与对照组之间的差别，主要是性状比较，比如植株生长势、果实大小、直径、重量、形状等，并可做定量比较。另外，可将番茄解剖，观察组织有何变化，比如番茄心室数目，因为野生番茄中的YABBY基因为调节小数目心室的基因，从而生长出偏小的番茄果实，由此预测野生型葡萄的YABBY基因可能也具有此功能。
收集转基因拟南芥T0种子，播种得到T1代，观察记录生长过程中与对照组的差别，从而得到YABBY和YABBY2基因在拟南芥中的过量表达结果。
