人脂肪细胞总RNA抽提方法

总RNA的提取（Trizol法提取）在收集到生物材料之后，最好能即刻进行RNA制备工作。

若需暂时储存，则应以液氮将生物材料急速冷冻后，储存于-80℃冷冻柜。

在制备RNA时，将储存于冷冻柜的材料取出，立即以加入液氮研磨的方式打破细胞，不可以先行解冻，以避免RNase的作用。

1.提取组织RNA时，每50～100mg组织用1ml Trizol试剂对组织进行裂解；提取细胞RNA时，先离心沉淀细胞，每5-10 ╳106个细胞加1ml Trizol后，反复用枪吹打或剧烈振荡以裂解细胞；2.将上述组织或细胞的Trizol裂解液转入EP管中,在室温15~30C下放置5分钟；3.在上述EP管中，按照每1ml TRIZOL加0.2ml氯仿的量加入氯仿，盖上EP管盖子，在手中用力震荡15秒，在室温下（15℃～30℃）放置2～3分钟后，12000g（2℃～8℃）离心15分钟；4.取上层水相置于新EP管中,按照每1ml TRIZOL加0.5ml异丙醇的量加入异丙醇，在室温下（15℃～30℃）放置10分钟,12000g（2℃～8℃）离心10分钟；5.弃上清，按照每1ml TRIZOL加1ml 75%乙醇进行洗涤，涡旋混合，7500g（2℃～8℃）离心5分钟，弃上清；6.让沉淀的RNA在室温下自然干燥；7.用Rnase-free water 溶解RNA沉淀。

PCR实验室常用DNA聚合酶有三种：TaKaRa Taq TM，TaKaRa E X Taq TM和Pyrobest TM DNA Polymerase。

TaKaRa Taq TM是一般的DNA聚合酶，保真性较差，但价钱便宜，一般用于基因表达的检测等。

TaKaRa E X Taq TM是具有Proof reading 活性的耐热性DNA聚合酶，具有一定的保真性，而且其扩增得到的PCR产物3’端附有一个“A”碱基，如果希望直接将产物克隆到T-vector可以用此酶。

Pyrobest TM DNA Polymerase也是具有Proof reading活性的耐热性DNA聚合酶，其特点是保真性极高，扩增得到的PCR产物为平滑末端。

提取总rna的方法
总RNA是指从细胞或组织中提取出的含有所有类型RNA的混合物。

总RNA的提取是RNA研究的重要步骤之一，可以用于分析基因表达、RNA修饰、RNA结构等。

以下是一种常用的总RNA提取方法：材料与试剂：
- 细胞或组织样本
- TRIzol试剂（Invitrogen）
- 氯仿
- 异丙醇
- 离心管
- 离心机
- 热板
步骤：
1. 将细胞或组织样本加入到离心管中，用PBS或生理盐水洗涤
一遍。

2. 加入TRIzol试剂，按照试剂和样本的比例加入。

比例一般为1mL TRIzol/1g细胞或组织。

3. 用均质器将样本均质，使细胞或组织完全破碎，并使其与TRIzol完全混合。

4. 加入氯仿，并彻底混合，使其与TRIzol完全分离。

5. 离心管离心15分钟（4℃，12000rpm），使混合液分为两层，上层为清亮的上清液，下层为混浊的有机相。

6. 将上清液转移至新的离心管中，加入相同体积的异丙醇，混匀。

7. 离心管离心10分钟（4℃，12000rpm），使RNA沉淀在管底。

8. 倒掉上清液，用75%乙醇洗涤RNA沉淀，离心管离心5分钟（4℃，7500rpm）。

9. 将乙醇洗涤RNA沉淀挥干，加入适量的RNase-free水溶解即可。

注意事项：
1. TRIzol是一种强还原剂，需避免与其他化学物质接触。

2. RNA样本处理过程中需注意RNase污染的防止，使用
RNase-free试剂和器材。

3. RNA的保存需避免RNase污染和长时间保存，最好在-80℃低温下保存。

一、实验准备1、实验器具与材料：（1）移液枪：1ml、200ul、10ul（2）吸头：1ml、200ul、20ul（3）吸头台：放置1ml吸头的一个，放置200ul和20ul的吸头一个（4）EP管1.5ml、100ul（5）玻璃研磨器（6）容量瓶：1000ml（7）盐水瓶：100ml（8）15ml塑料管一个（配75%乙醇用）2、实验器具的处理与准备（1）塑料制品：（包括吸头、EP管等）将塑料制品逐个浸泡于1‰DEPC水中（必要时小枪头需要用吸管打入DEPC水）37℃过夜，然后送至高压3次，后在80℃烘烤箱中烘干（或置于37℃中8小时左右烘干），试验前将枪头放入吸头台。

（2）玻璃制品：（主要是玻璃研磨器）先泡酸过夜，冲洗干净后，在1‰DEPC水中泡8小时左右，37℃烘干，用蒙锡纸包裹送至干烤3次。

（3）金属制品：（镊子等）先洗干净，再送干烤3次。

（不需要泡DEPC水）3、试剂配制和准备：（1）DEPC水：泡实验器具的DEPC水的配制：1000ml双蒸水中加1mlDEPC，放在1000ml 容量瓶中静置4小时后备用。

配75%乙醇的DEPC水的配制：100ml盐水瓶内装40ml双蒸水，加40ulDEPC，37℃过夜，送至高压。

（2）75%乙醇（要在抽提时现配）：用无水乙醇和DEPC水配制（DEPC水：无水乙醇=1：3），然后放于-20℃备用。

（3）异丙醇：放入棕色瓶（4）氯仿：放入棕色瓶（5）Trizol：100ml/瓶存放于4℃图：TRIzol抽提总RNA步骤二、抽提时注意事项全程佩戴一次性手套和口罩，手套要勤换，避免戴上的一次性的手套接触可疑污染物。

三、抽提步骤1、匀浆化作用取约100mg鼠脑组织放于玻璃研磨器内，先加0.2ml的Trizol溶液，研磨组织后，倒入1.5mlEP 管中，再在研磨器内加入0.8ml的Trizol溶液洗，后全部再倒入EP管中。

颠倒混匀10下，室温静置5分钟。

2、分离阶段每1mlTrizol中加0。

脂肪组织rna trizol提取引言RNA提取是分子生物学研究中的一项重要步骤，它能够帮助我们了解基因表达和调控机制。

Trizol是一种常用的RNA提取试剂，其原理是利用酚和异硫氰酸盐钠（GuSCN）溶解细胞膜并使RNA稳定，随后使用异丙醇沉淀纯化RNA。

本文将详细介绍脂肪组织中RNA的Trizol提取方法。

材料与试剂1. Trizol试剂2. 75% 热力学乙醇3. RNase-free水4. 去离子水5. 1.5 mL离心管6. 冷藏离心机7. 离心管架8. 离心管转子9. 无菌取样器10. 显微镜片11. 显微镜12. 1 mL和200 μL的RNase-free离心管13. PCR仪步骤1. 将脂肪组织样本放入1.5 mL离心管中，加入1 mL Trizol试剂。

2. 使用无菌取样器彻底混合样本和试剂，确保完全溶解组织。

3. 将混合物在室温下静置5分钟，使RNA充分稳定。

4. 加入200 μL氯仿，并充分混合离心管，使混合物乳化。

5. 将离心管置于冰上，静置15分钟，使RNA与DNA和蛋白质分离。

6. 以12000×g的速度离心15分钟，将混合物分为两个相分离的层，上层为无色上清液，其中含有RNA。

7. 使用无菌取样器小心地将上清液转移到新的离心管中。

8. 加入1 mL 75% 热力学乙醇，轻轻倒置离心管混合。

9. 将离心管置于冰上静置10分钟，使RNA沉淀。

10. 以12000×g的速度离心10分钟，使RNA沉淀于离心管底部。

11. 弃去上清液，加入 1 mL 75% 乙醇洗涤RNA沉淀，轻轻倒置离心管混合。

12. 以7500×g的速度离心5分钟，去除乙醇。

13. 使用10 mL去离子水重悬RNA沉淀。

14. 将离心管放入PCR仪中，在60°C下孵育10分钟，使RNA充分溶解。

15. 可以使用紫外可见光或显微镜检测RNA溶液的质量和浓度。

讨论本文介绍了使用Trizol方法提取脂肪组织中的RNA的步骤和原理。

提取rna步骤随着分子生物学技术的发展，现在已经可以对RNA有更加深入的研究，RNA的提取和纯化技术也越来越成熟。

RNA提取非常重要，因为它是研究细胞和生物过程的基础，特别是在基因表达调控、疾病治疗、药物研发等领域方面。

现在，让我们来了解一下RNA的提取步骤。

1. 样品收集和处理在提取RNA之前，首先要准备好样品。

我们需要收集到含有RNA的样品，比如细胞、组织或者血液等，这些样品应该是新鲜的，并且需要以无菌的方式采集和处理。

采集完样品后，我们应该尽快处理它们以防止RNA的降解。

如果需要存储样品，我们应该通过冷冻或化学处理的方式来保护它们。

2. 细胞和组织破碎提取RNA的首要步骤是将细胞和组织破碎，让RNA能够被释放和提取。

有几种方法可以用来破碎细胞和组织，其中最常用的是机械法和化学法。

机械法包括高压灭菌、超声波破碎、玻璃珠磨碎等，而化学法则是使用化学试剂（如三氯乙酸、硫酸、氯仿等）来破坏细胞和组织的膜。

3. 提取RNA在破碎后，我们需要使用RNA提取试剂盒等工具来提取RNA。

这些试剂盒通常包括裂解缓冲液、酚/氯仿/异戊醇（PCI）和异丙醇等成分。

提取RNA的基本过程如下：（1）将样品加入到裂解缓冲液中，并进行混合（2）将PCI加入到样品中（3）离心样品，将上清液转移至新的离心管中（4）加入异丙醇，混合并离心（5）将上清液转移到另一个离心管中，加入等体积的异丙醇（6）离心并将上清液转移到另一个离心管中。

重复此步骤，直到纯化出RNA。

4. 检测RNA浓度和质量获取RNA后，我们需要检测其浓度和质量以确认其可用性。

这可以通过比色计或荧光分光光度计进行，以确保RNA的纯度和质量。

一旦RNA被成功提取和纯化，我们需要将其存储在恰当的条件下，以便之后的实验和分析。

RNA应该在-80摄氏度条件下冷冻，并在使用前恢复至室温。

综上所述，RNA的提取过程是一个重要的步骤，需要严格遵守标准化的操作程序，才能得到高质量的RNA。

总rna的提取方法
总RNA（total RNA）是指从细胞或组织中提取出来的包含所有类型的RNA的混合物。

下面是一种常见的总RNA提取方法：
1. 细胞/组织样品准备：收集足够数量的细胞或组织样品，并将其保存在适当的缓冲液中（如RIPA缓冲液）。

2. 细胞破碎：将细胞样品经过离心等步骤，去除缓冲液，然后加入细胞破裂缓冲液（常见的破裂缓冲液成分包括TRIzol、RLT缓冲液等），使用搅拌器或超声波进行细胞破碎。

3. RNA提取：加入氯仿或类似的有机物，进行混匀，离心，使得混合液分为上清液（含有DNA和RNA）和有机相（含有脂质和蛋白质）。

4. 上清液沉淀：将上清液转移至新的管中，加入同等体积的异丙醇，轻轻混匀，离心15分钟以使RNA沉淀。

5. RNA洗涤：轻轻倒掉上清液，用70%乙醇洗涤RNA沉淀，再次离心。

6. RNA溶解：将RNA沉淀干燥，加入适当的RNase-free水溶解RNA。

7. RNA质量检测：使用比色法或荧光法测定RNA浓度和纯度（如比例计算
A260/A280）。

这些步骤是总RNA提取的一般流程，具体的操作步骤可能会因实验目的、样品类型和提取试剂盒等因素而有所不同。

同时，为了确保RNA的完整性和减少污染，实验操作中还应遵循严格的无RNase和无DNA污染的条件。

不同组织总rna提取
总RNA是一种包含所有转录本的RNA样品，对于许多生物学研究非常重要。

不同组织中的总RNA提取方法可能略有不同，以下是一些常见的总RNA提取方法：
1. 经典酚/氯仿法：该方法适用于多种组织，包括动物和植物组织。

它利用酚和氯仿的不同溶解度将RNA从DNA和蛋白质中提取出来。

它需要耗时且冗长的样品制备步骤，但可以获得高质量的RNA。

2. Trizol法：该方法是一种常用的RNA提取方法，适用于多种组织和细胞类型。

它使用一种酚-胍-氯仿混合物将RNA从细胞和组织中提取出来。

这种方法比经典酚/氯仿法更快，也可以获得高质量的RNA。

3. 氯化锂法：该方法适用于小型样品和细胞类型，例如酵母细胞。

它使用氯化锂和酒精的不同溶解度来提取RNA。

这种方法需要较短的制备时间，但可能会影响RNA的质量。

4. 柱式RNA提取法：该方法使用酚/氯仿或Trizol提取RNA，
并通过硅胶柱纯化步骤来去除杂质。

这种方法可以获得高质量的RNA，并且适用于各种组织类型。

总之，不同组织中的总RNA提取方法略有不同，但通常都可以使用上述方法之一。

选择合适的方法取决于实验的具体需求和样品类型。

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RNA提取实验操作步骤、注意事项及问题指南RNA提取是一项重要的实验技术，也是分子生物学和基因表达研究的前提之一。

RNA提取的操作步骤、注意事项和可能出现的问题是影响实验结果的关键因素。

本文将介绍RNA提取实验的操作步骤、注意事项和问题指南，以便帮助读者更好地完成RNA提取实验。

RNA提取实验操作步骤1. 样本的准备在实验开始前，需要准备好样本。

样本可以是组织、细胞、菌落等，在RNA提取中通常使用 TRIzol 或 RNeasy 等试剂进行样品裂解和提取。

样本的数量和来源需要根据实验的需要来决定。

2. 细胞裂解样品准备好之后，需要进行细胞裂解，使细胞内部的 RNA 释放出来。

裂解的方法可以是机械裂解、化学裂解或声波裂解等。

3. RNA 的提取和纯化经过细胞裂解后，需要使用 RNA 提取试剂对 RNA 进行提取和纯化。

经过提取和纯化后，可以通过检测 A260/A280 值的比例来确定 RNA 的纯度和浓度。

4. 聚合酶链式反应（PCR）检测经过 RNA 的提取和纯化之后，需要进行 PCR 检测，确定 RNA 是否已经被成功提取和纯化。

PCR 检测需要使用适当的引物和探针，并遵守相应的反应条件和分析方法。

RNA提取实验注意事项1. 样品选择选择合适的样品，保证样品的活性和稳定性。

不同类型的样品需要使用不同的RNA 提取试剂，因此需要选择适当的试剂和方法。

2. 操作规范在 RNA 提取过程中，需要保持操作规范，如穿戴实验手套和实验衣服等，避免 RNA 受到污染。

在实验过程中要注意操作细节，如注射器和离心管应保证干净和无漏，对样品的取用和储存要进行标记和记录。

3. RNA 的质量控制在 RNA 提取的过程中，需要进行质量控制，如测定 RNA 的纯度和浓度等。

在进行下一步操作之前，必须检查 RNA 的质量和质量指标，如 A260/A280 值的比例要在 1.8 ~ 2.0 之间， RNA 的完整性要保证。

采用TRIZOL抽提RNA的操作程序1．收集细胞：5-10×106 /1ml Trizol2．裂解细胞：加入1ml Trizol，用替补头吹打均匀，室温下静置5min（目的：使核蛋白复合体完全溶解）。

3．加入200ul 异丙醇，与细胞裂解液混合均匀。

1）弃去培养瓶中的培基，用1×PBS（pH7.4）洗涤细胞两次。

加入适量Trizol（1×106个细胞/ml），用移液管反复吹打至透明无颗粒，冰上裂解5min；2）每1ml Trizol加0.2ml氯仿，振荡器剧烈混匀15秒，室温放置10分钟；3）4℃、12000rpm离心15分钟；4）将水样层转移到一干净的试管中，每1ml Trizol加0.5 ml异丙醇，混匀、室温下放置10分钟；5）4℃、12000rpm离心10分钟；6）去上清，DEPC水配制的75%的乙醇洗涤RNA沉淀一次，空气干燥，DEPC水溶解。

取1μl样品用紫外分光光度计测定RNA的浓度和纯度，同时点2μl样品电泳鉴定RNA的质量，其余-70℃冰箱保存备用4．2.TRIZOL试剂说明:1.抽提总RNA，通常抽提得到的RNA可以避免DNA和蛋白质的污染，但对于PCR而言，如果引物设计在同一个外显子内，仍建议将样本用DNase处理，通常得到的RNAA260/A280比值≥1.8，电泳跑胶时包括28S、18S、5S三条区带，分离的同时还可以保持RNA的完整。

2.用途：TRIZOL抽提得到的RNA可以用于PCR、Northen blot analysis、dot blothybridization、molecular cloning、in vitro translation、RNase protection assay、poly (A)+ selection。

3.在抽提过程中应该注意RNase的污染。

TRIZOL本身可以避免RNase的污染，但下游步骤应该注意使用RNase-free的耗材和试剂。

RNA抽提指南(TRIZOL法)RNA抽提指南(TRIZOL法)注意事项：* 全程佩戴一次性手套。

皮肤经常带有细菌和霉菌，可能污染RNA的抽提并成为RNA酶的来源。

培养良好的微生物实验操作习惯预防微生物污染。

* 使用灭菌的，一次性的塑料器皿和自动吸管抽提RNA，避免使用公共仪器所导致的RNA酶交叉污染。

例如，使用RNA探针的实验室可能用RNA酶A 或T1来降低滤纸上的背景，因而某些非一次性的物品（如自动吸管）可能富含RNA酶。

* 在TRIZOL 中，RNA 是隔离在RNA 酶污染之外的。

而对样品的后续操作会要求用无RNA 酶的非一次性的玻璃器皿或塑料器皿。

玻璃器皿可以在150°C 的烘箱中烘烤4 小时。

塑料器皿可以在0.5 M NaOH 中浸泡10 分钟，用水彻底漂洗干净后高压灭菌备用。

抽提步骤：1．匀浆化作用通过离心来沉淀细胞后，弃上清，用移液管加TRIZOL试剂反复吹打来裂解细胞至均一通亮的液态后，将匀浆样品在15—30°C 条件下孵育5 分钟以使核蛋白体完全分解。

（每5—10×106的动物细胞，植物或酵母菌细胞或每1×107 细菌加1ml的TRIZOL。

在加入TRIZOL前应避免洗涤细胞因为那样会增加mRNA降解的可能性。

）2．分离阶段每1 mlTRIZOL 加0.2 ml 氯仿。

盖紧样品管盖，用手用力摇晃试管15 秒并将其在30°C 下孵育2—3 分钟。

在2—8°C 下以不超过12,000×g 的离心力高速冷冻离心15 分钟。

离心后混合物分成三层：下层红色的苯酚-氯仿层，中间层，上层无色的水样层。

RNA 无一例外地存在于水样层当中。

水样层的容量大约为所加TRIZOL 容量的60%3．RNA的沉淀将水样层转移到一干净的试管中，通过将水样层和异丙醇混合来沉淀RNA。

最初均化时的每1 m lTRIZOL 对应0.5 ml 异丙醇。

总rna提取方法嘿，朋友们！今天咱就来讲讲总 RNA 提取方法。

这可是个相当重要的事儿呢！想象一下，RNA 就像是细胞里的小信使，传递着各种重要的信息。

要把这些小信使完好地提取出来，可不容易呢！首先呢，你得准备好各种材料和试剂。

就好像做饭一样，得有锅碗瓢盆和食材呀！不同的样本可能需要不同的处理方式哦。

然后就是关键步骤啦！一般常用的方法有酚氯仿提取法。

这就好比是一场精细的捕捞行动，要把 RNA 从细胞的海洋里准确地捞出来。

在这个过程中，每一步都得小心翼翼，稍有差错可能就前功尽弃啦。

还有啊，提取过程中要注意环境的清洁。

这就跟我们要住在干净整洁的家里一样，要是到处脏兮兮的，那可不行！不能有其他杂质来干扰我们提取 RNA 呀。

另外呢，操作手法也很重要。

得轻拿轻放，不能太粗鲁啦。

就像对待宝贝一样对待样本，这样才能得到高质量的 RNA 呢。

提取完 RNA 后，还得检测一下质量。

这就好比是给 RNA 做个体检，看看它是不是健康的。

如果质量不好，那可就麻烦咯。

哎呀，说起来简单，做起来可难啦！这就像是走钢丝，得保持平衡，不能有一点闪失。

但只要你认真细心，按照步骤一步一步来，肯定能成功提取出总 RNA 的。

朋友们，别害怕困难呀！想想看，当你成功提取出RNA 的那一刻，那种成就感，简直无与伦比！就好像你攻克了一座很难爬的山峰一样。

所以呀，大胆去尝试吧！去探索总 RNA 提取的奥秘，让我们在科学的海洋里畅游。

相信自己，一定能行！这可不是开玩笑的哦，只要你有决心，有耐心，就没有办不成的事儿！加油吧！。

提取总rna的方法
1.收集细胞样品，并立即加入1 mL TRIzol试剂。

2. 彻底混合，使样品完全与TRIzol试剂混合。

3. 放置室温5分钟。

4. 加入200 μL氯仿，轻轻摇晃管子混合。

5. 放置室温10分钟。

6. 离心12,000 rpm，4℃，15分钟。

7. 将上清液转移到新的1.5 mL离心管中，加入等体积的异丙醇混合，轻轻摇晃混合。

8. 放置室温10分钟。

9. 离心12,000 rpm，4℃，10分钟。

10. 倒掉上清液，用70%乙醇洗涤沉淀。

11. 离心12,000 rpm，4℃，5分钟。

12. 倒掉上清液，用RNase-free水洗涤沉淀。

13. 用RNase-free水重悬RNA沉淀。

14. 加入DNase I酶，按照酶的说明书处理。

15. 用琼脂糖凝胶电泳检测RNA的完整性和纯度。

总RNA的提取过程需要注意以下几点：
1. 保持细胞样品在冰冻状态，防止RNA分解。

2. TRIzol试剂和氯仿的使用要充分混合，不要过度混合，以免影响RNA的提取。

3. 在加入异丙醇之前，要等待氯仿和试剂分离，以确保上清液
中的RNA含量最大化。

4. 洗涤RNA沉淀时，要用70%乙醇，以去除残留的盐和试剂。

5. 洗涤沉淀时要避免使用强酸、强碱或含有RNA酶的溶液，这些溶液会影响RNA的纯度和完整性。

总的来说，总RNA的提取方法比较简单，但在操作过程中需要注意细节，以确保提取的RNA质量和完整性。

总RNA提取操作步骤2.1 实验原理Trizol是一种新型的总RNA即用型制备试剂，适用于从各种组织或细胞中快速分离总RNA。

Trizol试剂是由苯酚和异硫氰酸胍配制而成的单相的快速抽提总RNA的试剂，在匀浆和裂解过程中，能在破碎细胞、降解细胞其它成分的同时保持RNA的完整性。

在氯仿抽提、离心分离后，RNA处于水相中，将水相转管后用异丙醇沉淀RNA。

Trizol 的主要成分是酚，主要作用是裂解细胞，使细胞中的蛋白、核酸物质解聚得到释放。

但酚虽可有效的变性蛋白质，却不能完全抑制RNA酶活性，因此Trizol中还加入了8-羟基喹啉、异硫氰酸胍、β-巯基乙醇等来抑制内源和外源RNase。

0.1%的8-羟基喹啉与氯仿联合使用可增强对RNase的抑制；异硫氰酸胍属于解偶剂，是一类强力的蛋白质变性剂，可溶解蛋白质，并使蛋白质二级结构消失，细胞结构降解，核蛋白迅速与核酸分离。

β-巯基乙醇主要破坏RNase蛋白质中的二硫键。

2.2 应用范围人、动物、植物和细菌、血液总RNA提取都适用，也可以抽提microRNA等小RNA。

提取的总RNA没有DNA和蛋白质污染，可用于Northern blot、RT-PCR、Dot blot、分离mRNA、RNase保护分析、体外翻译、cDNA克隆、基因表达芯片分析、高通量测序等。

2.3 实验设备天平，漩涡振荡器，低温高速离心机，各种规格移液器，高压灭菌锅，匀浆器，研钵，微量分光光度计等。

2.4 试剂及耗材耗材：各种规格枪头，去酶离心管等。

试剂：TRIzol，氯仿，异丙醇，无水乙醇，0.05～0.1％DEPC－H2O。

2.5 操作步骤2.5.1 组织抽提1）组织取材后用灭菌的锡箔纸包好保存于液氮。

实验时，在液氮中将组织研磨成粉末，趁液氮未挥发将粉末转移到EP管，室温5000rpm离心去上清。

每50-100mg组织，加入1ml Trizol。

2）若是新鲜标本经匀浆后转移离心管，加入1ml Trizol。

将150~200 mg白色脂肪组织（棕色脂肪100mg左右）块直接放入研钵中，加入少
量液氮，迅速研磨，如此进行三次
研成粉末后，加入1mL以上Trizol在继续研磨，待Trizol溶解后
吸出到1.5mlEP管中，涡旋振荡，静置裂解5-10min
充分混匀后于4℃，10000×g 离心10min，弃上层富含脂类的液体
取下层液体于4℃，10000×g 离心10min，弃上层含脂类的液体
吸取下层液体，按每ml Trizol加入200ul氯仿,待其充分混合后，室温静置5min后，于4℃，12000×g 离心15 min。

（再抽提一次）
离心后可见明显分层，吸取上层清澈液体；加入等体积（按每ml Trizol加0.5ml）异丙醇轻轻混匀，室温静置10min后，于4℃，12000×g 离心10min
弃上清，加入75％乙醇（经DEPC 处理，无RNA酶）1mL，振荡混匀，4℃，7500×g
离心5min
弃上清，滤纸吸干残余液体，晾7min左右；加入50ul DEPC处理水溶解，（若不
溶，再50度10min助溶）。

RNA的提取方法RNA提取是生物学中一项非常重要的实验技术，它可以用于研究RNA在生物体内的表达以及功能调控。

RNA提取的方法有多种，下面将介绍一些常用的RNA提取方法。

1.总RNA提取：总RNA提取是最常用的RNA提取方法之一，它可以提取细胞或组织中的所有RNA种类，包括mRNA、rRNA和tRNA等。

总RNA提取的步骤包括细胞或组织的裂解、蛋白酶处理、RNA溶液的提取和纯化等。

提取时可以使用商业化的总RNA提取试剂盒，也可以自制试剂进行提取。

2.mRNA提取：mRNA是总RNA中占比相对较小的一部分，它包含了大部分的转录信息。

mRNA的提取主要是通过使用寡聚dT寡核苷酸的亲和浸润材料，富集含有poly(A)尾的RNA分子。

提取步骤包括细胞裂解、磁珠富集和纯化等。

3. miRNA提取：miRNA是一类长度较短的非编码RNA，具有多种生物学功能。

miRNA的提取相对较为复杂，步骤包括细胞裂解、蛋白酶处理、有机溶剂萃取、硅胶膜纯化和乙酸乙酯沉淀等。

商业化的miRNA提取试剂盒则简化了这一过程。

4.胚胎RNA提取：胚胎RNA提取主要适用于研究早期胚胎发育过程中的基因表达变化。

提取步骤包括选择合适的胚胎发育阶段、胚胎裂解、RNA的提取和纯化等。

在这个过程中，需要注意减少RNA的降解，因为胚胎RNA含有RNA酶。

5.组织RNA提取：组织RNA提取是为了研究不同组织中特定基因的表达差异。

提取组织RNA的步骤包括组织的裂解、蛋白酶处理、RNA的提取和纯化等。

组织RNA的含量通常较少，需要采取额外的措施来提高RNA的得率。

6.体液RNA提取：体液RNA的提取用于研究循环系统或分泌系统中的RNA信息。

体液RNA的提取步骤包括样本的离心、细胞裂解、RNA的提取和纯化等。

一般情况下，体液RNA的浓度较低，因此需要使用高敏感的RNA提取方法。

总的来说，RNA提取是RNA研究的基础，根据不同的研究目的和样本类型选择合适的RNA提取方法非常重要。

提取rna的步骤及原理RNA提取是分子生物学实验中的一项重要步骤，它是从生物样本中分离出RNA分子的过程。

RNA提取的原理是利用化学方法破坏细胞膜和核膜，使得细胞内的RNA分子释放出来，并且通过特定的提取试剂将RNA分子纯化出来。

下面将介绍RNA提取的步骤及原理。

首先，准备样本。

样本可以是细胞、组织或者血液等生物材料，需要将样本收集到离心管中，并且在样本收集后尽快进行RNA提取，以保证RNA的完整性和稳定性。

其次，细胞破裂。

细胞破裂是RNA提取的关键步骤之一，可以通过机械破碎或者化学方法来实现。

机械破碎是利用高速离心或者超声波等物理手段破坏细胞膜和核膜，释放细胞内的RNA分子。

化学方法则是利用洗涤缓冲液或者酶来破坏细胞膜和核膜，使得RNA分子得以释放。

接下来，RNA纯化。

RNA纯化是为了去除样本中的DNA、蛋白质和其他杂质，使得提取得到的RNA分子纯度较高。

RNA纯化的方法有很多种，常用的方法包括酚氯仿法、硅胶柱法和磁珠法等。

其中，酚氯仿法是通过酚和氯仿的密度差异来分离RNA和其他杂质，硅胶柱法则是利用硅胶柱的亲和性吸附RNA分子，而磁珠法则是利用磁珠表面修饰的特定配体与RNA分子结合，然后通过磁场分离RNA。

最后，RNA溶解。

提取得到的RNA通常以水溶液的形式保存，因此需要将RNA溶解在适当的缓冲液中，以便后续的RNA定量和实验操作。

总的来说，RNA提取的步骤包括样本准备、细胞破裂、RNA纯化和RNA溶解。

通过这些步骤，我们可以从生物样本中高效、纯度较高地提取出RNA分子，为后续的RNA分析实验提供可靠的样本基础。

在实际操作中，需要根据样本的特性和实验的要求选择合适的RNA提取试剂盒，并严格按照试剂盒说明书中的操作步骤进行实验。

此外，为了保证提取得到的RNA质量和数量，需要注意实验中的细节操作，如样本保存、试剂配置、离心参数等，以确保实验的准确性和可重复性。

总之，RNA提取是分子生物学实验中的重要步骤，掌握好RNA提取的原理和操作技巧对于后续的实验结果具有重要的影响。

RNA抽提步骤DAY one：1、提前一天灭好工具：置180度过夜，根据材料的多少准备工具。

研磨棒、研钵、小勺子，必要时一把小镊子，用锡箔纸包住置180度烘箱中。

2、可以取材料于-70度液氮中冻着。

取时就浸在液氮中（也可以当天取材料当天抽RNA）。

DAY two:1、擦拭超净台，放上各量程的枪；关闭玻璃门，打开紫外灯，照射20分钟；关上紫外灯，打开玻璃门释放里面的臭氧；30分钟后开始做。

2、预冷研钵、研磨棒，倒入材料开始研磨（材料一直在液氮中，注意戴手套口罩）。

3、等液氮即将挥发完时，快速用力研磨。

研磨必须充分，然后装在预冷的1.5mldorf管中。

4、加入tri-zol提取液1ml(先500ul再500ul也可以)，震荡混匀。

5、静置5分钟，加200ul三氯仿手摇晃15秒，室温下静置2-3分钟。

6、2-8°12000rpm离心15分钟，RNA处于上层约为60%（450ul）。

7、吸上清450ul到另一drof管中，加500ul异丙醇，室温下放10分钟。

8、2-8°12000rpm离心10分钟，弃上清后加1ml 75%乙醇，涡旋，2-8°7500rpm 5分钟。

9、室温干燥RNA 5-10分钟，将RNA溶于20-40ul DEPC水中，-70°保存。

DAY three:抽的RNA反转录：RT-PCR步骤一、总RNA提取1.取200mg组织，放到1.5ml EP管中，加入1ml Trizol剪碎。

2.震荡30s。

3.加0.2ml氯仿，剧烈摇动30s，室温3min。

4.12000×g，4℃离心，15min。

5.吸上层无色水相，移入另一EP管中（约0.5ml）。

6.加等体积异丙醇，-20℃，30min。

7.12000×g，4℃离心，10min。

在管底部可见微量RNA沉淀8.弃上清，加75％乙醇1ml，振荡。

9.7500×g，4℃离心，10min。

细胞总RNA的提取
1. 六孔板每孔细胞中加入1ml Trizol，冰上放置5min，枪头吹打。

2. 将各孔裂解液吸到1.5 ml EP管中，加入氯仿0.2ml/管，用力振摇15s。

15－30℃下孵育2-3min，离心（4℃，12,000g，15min）。

3. 离心后液体分为三层（上层－无色水样层为RNA，中层白色为DNA和底层红色为蛋白质），小心吸取上层无色液体移入一新的EP 管中。

4. 加入等体积异丙醇，0.4－0.5ml，混匀，15-30℃下孵育10－30min，离心（4℃，12，000g，10min）。

其中如果加入等体积异丙醇后，置于试管架上用PE手套密封后，放于4℃冰箱中，沉淀30min效果更好。

5. 去上清，沉淀加入75％乙醇1ml，漩涡振荡30s，离心（4℃，7,500g，5min）。

6. 小心去上清，管内沉淀在超净台中鼓风静置干燥3-5min。

最好是用枪头吸取上清，尽量除去。

7. 加入20ul DEPC水溶解，分装5ul/管，-70℃冰箱保存。

8. 细胞总RNA的鉴定：0.9-1.2％琼脂糖电泳鉴定细胞总RNA，观察出现条带及各条带亮度。

紫外分光光度计测定：分别测定细胞总RNA在260nm和280nm处的光密度值(OD)，并计算RNA的含量和纯度。