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第四章 单克隆抗体与基因工程抗体的制备
第一节 杂交瘤技术的基本原理
第二节 单克隆抗体的制备
第三节 基因工程抗体制备
第四节 单克隆抗体的应用
将单个B细胞分离出来加以增殖形成一个克隆群落，该B细胞克隆产生出针对单一表位、结构相同、功能均一的抗体，称为单克隆抗体。
第一节 杂交瘤技术的基本原理
杂交瘤技术的原理是使免疫的小鼠脾细胞与具有体外长期繁殖能力的小鼠骨髓瘤细胞融为一体，成为杂交瘤细胞，最终获得既能产生所需单克隆抗体，又能长期繁殖的杂交瘤细胞系。
将这种杂交瘤细胞扩大培养，接种于小鼠腹腔，在小鼠腹腔积液中即可得到高效价的单克隆抗体。
一、杂交瘤技术
包括两种亲本细胞的选择与制备，细胞融合，杂交瘤细胞的筛选与克隆化。
（一）小鼠骨髓瘤细胞
细胞株稳定，易于传代培养。
细胞株自身不会产生免疫球蛋白或细胞因子。
该细胞是次黄嘌呤磷酸核酸核糖转化酶（HGPRT）的缺陷株。
（二）免疫脾细胞
免疫用抗原尽量提高其纯度和活性，免疫途径多用腹腔内或皮内多点注射法。
如为珍贵微量抗原，可用脾脏内直接注射法进行免疫。
（三）细胞融合
PEG（聚乙二醇）可能导致细胞膜上脂类物质的物理结构重排，使细胞膜容易打开而有助于细胞融合。
（四）杂交瘤细胞的选择性培养
HAT培养液，是在基础细胞培养液内添加次黄嘌呤、甲氨蝶呤和胸腺嘧啶核苷。
1.脾细胞（指B细胞） 在一般培养基中不能生长繁殖。
2.骨髓瘤细胞
因缺乏HGPRT而合成DNA，骨髓瘤细胞在HAT培养基中不能增殖而死亡。
3.杂交瘤细胞
由骨髓瘤细胞和脾细胞融合形成的杂交瘤细胞。
由于与脾细胞融合，可获得其HGPRT，可以合成DNA。因此，杂交瘤细胞在选择性培养得以生存而被筛选出来。
二、阳性杂交瘤细胞的克隆化培养
单个细胞培养又称克隆化。
细胞克隆化有以下几种方法：
临床医学检验技师初级（师）临床免疫学及检验（单克隆抗体与基因工程抗体制备技术）-试卷1
(总分：60.00，做题时间：90分钟)
一、 A1型题(总题数：17，分数：34.00)
1.下列关于杂交瘤细胞特点的错误描述是
（分数：2.00）
A.具备了双亲细胞的特点
B.分泌人源性单克隆抗体 √
C.分泌鼠源性单克隆抗体
D.体外繁殖快速
E.能分泌抗体
解析：解析：杂交瘤细胞是两个不同特性的细胞融合成一个异型核细胞，这两种细胞分别是小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞，分泌鼠源性单克隆抗体。
2.杂交瘤技术中最常用的骨髓瘤细胞株是
（分数：2.00）
A.NS-1和SP2／0细胞株 √
B.NS-2株
C.SP5株
D.HPG-2
E.HAILA
解析：解析：杂交瘤技术中最常用的骨髓瘤细胞株是NS一1和SP2／0细胞株。
3.HAT培养基中三种关键成分为
（分数：2.00）
A.次黄嘌岭、氨基蝶呤、胸腺嘧啶核苷 √
B.黄嘌呤、氨基蝶呤、胸腺嘧啶核苷
C.氨基嘌岭、氨基蝶呤、胸腺嘧啶核苷
D.腺嘌呤、氨基蝶呤、胸腺嘧啶核苷
E.鸟嘌呤、氨基蝶呤、胸腺嘧啶核苷
解析：解析：HAT系次黄嘌呤(hypoxantin)、氨基蝶呤 (aminopterin)和胸腺嘧啶脱氧核苷(thymidin)三种物质各英文首字之缀列，HAT培养基也就是指含有这三种物质的细胞培养基。
4.阳性杂交瘤细胞的克隆化培养方法不包括
（分数：2.00）
A.有限稀释法
B.无限稀释法 √
C.显微操作法
D.荧光激活细胞分选仪
E.软琼脂平板法
解析：解析：阳性杂交瘤细胞的克隆化(单个细胞培养)方法包括有限稀释法、显微操作法、荧光激活细胞分选仪、软琼脂平板法。
5.实验室最常用的阳性杂交瘤细胞的克隆化方法是
（分数：2.00）
A.无限稀释法
B.有限稀释法 √
C.荧光激活细胞分选仪
D.软琼脂平板法 E.显微操作法
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· 第四章 单克隆抗体与基因工程抗体的制备
第一节 杂交瘤技术的基本原理
第二节 单克隆抗体的制备
第三节 基因工程抗体制备
第四节 单克隆抗体的应用
将单个B细胞分离出来加以增殖形成一个克隆群落，该B细胞克隆产生出针对单一表位、结构相同、功能均一的抗体，称为单克隆抗体
第一节 杂交瘤技术的基本原理
杂交瘤技术的原理是使免疫的小鼠脾细胞与具有体外长期繁殖能力的小鼠骨髓瘤细胞融为一体，成为杂交瘤细胞，最终获得既能产生所需单克隆抗体，又能长期繁殖的杂交瘤细胞系。
将这种杂交瘤细胞扩大培养,接种于小鼠腹腔,在小鼠腹腔积液中即可得到高效价的单克隆抗体。
一、杂交瘤技术
包括两种亲本细胞的选择与制备，细胞融合，杂交瘤细胞的筛选与克隆化
（一）小鼠骨髓瘤细胞
细胞株稳定，易于传代培养
细胞株自身不会产生免疫球蛋白或细胞因子
该细胞是次黄嘌呤磷酸核酸核糖转化酶（HGPRT）的缺陷株
（二）免疫脾细胞
免疫用抗原尽量提高其纯度和活性，免疫途径多用腹腔内或皮内多点注射法
如为珍贵微量抗原，可用脾脏内直接注射法进行免疫
（三）细胞融合
PEG（聚乙二醇）可能导致细胞膜上脂类物质的物理结构重排，使细胞膜容易打开而有助于细胞融合。
（四）杂交瘤细胞的选择性培养
HAT培养液，是在基础细胞培养液内添加次黄嘌呤、甲氨蝶呤和胸腺嘧啶核苷
1.脾细胞（指B细胞）在一般培养基中不能生长繁殖
2.骨髓瘤细胞
因缺乏HGPRT而合成DNA，骨髓瘤细胞在HAT培养基中不能增殖而死亡
3.杂交瘤细胞
由骨髓瘤细胞和脾细胞融合形成的杂交瘤细胞
由于与脾细胞融合，可获得其HGPRT，可以合成DNA。因此，杂交瘤细胞在选择性培养得以生存而被筛选出来
二、阳性杂交瘤细胞的克隆化培养
单个细胞培养又称克隆化
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临床免疫学和免疫检验
第1页 第四章 单克隆抗体与基因工程抗体的制备
将单个B细胞分离出来加以增殖形成一个克隆群落，该B细胞克隆产生出针对单一表位、结构相同、功能均一的抗体，称为单克隆抗体。
第一节 杂交瘤技术的基本原理
杂交瘤技术的原理是利用聚乙二醇（PEG）为细胞融合剂，使免疫的小鼠脾细胞与具有体外长期繁殖能力的小鼠骨髓瘤细胞融为一体，在HAT选择性培养基的作用下，只让融合成功的杂交瘤细胞生长，经过反复的免疫学检测、筛选和单个细胞培养（克隆化），最终获得既能产生所需单克隆抗体，又能长期繁殖的杂交瘤细胞系。将这种杂交瘤细胞扩大培养，接种于小鼠腹腔，在小鼠腹腔积液中即可得到高效价的单克隆抗体。
杂交瘤技术是一项周期长和高度连续性的实验技术，涉及大量的细胞培养、免疫化学等方法。具体包括两种亲本细胞的选择与制备，细胞融合，杂交瘤细胞的筛选与克隆化等。
一、杂交瘤技术
（一）小鼠骨髓瘤细胞
1.细胞株稳定，易于传代培养。
2.细胞株自身不会产生免疫球蛋白或细胞因子。
3.该细胞是次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转化酶（HGPRT）或胸腺嘧啶激酶（TK）的缺陷株。
4.目前最常用的骨髓瘤细胞是NS-1和SP2/O细胞株。
（二）免疫脾细胞
免疫时选用与骨髓瘤细胞同源的BALB/c小鼠，鼠龄8～12周，体重约20g，雌雄均可，但必须分笼。免疫用抗原尽量提高其纯度和活性，免疫途径多用腹腔内或皮内多点注射法。如为珍贵微量抗原，可用脾脏内直接注射法进行免疫。
（三）细胞融合
细胞融合是产生杂交瘤细胞的中心环节。PEG（聚乙二醇）有助于细胞融合。
（四）杂交瘤细胞的选择性培养
将经过融合的细胞置于含有次黄嘌呤、甲氨蝶呤和胸腺嘧啶核苷的HAT培养基中。
1.脾细胞：在一般培养基中不能生长繁殖。
