高效液相色谱法测定阿德福韦的含量

第40卷第5期肇庆学院学报Vol.40,No.52019年9月JOURNALOFZHAOQINGUNIVERSITYSep.2019

高效液相色谱法测定阿德福韦的含量

黄励坚

（广东肇庆星湖生物科技股份有限公司，广东肇庆526040）

摘要：为建立阿德福韦含量的高效液相色谱测量方法，采用C18柱（4.6mm×250mm，5µm）色谱柱，流动相为乙腈，流速为1mL·min-1，检测波长为230nm，柱温为25℃，进样量为20μL进行实验测定.结果表明：阿德福韦含量在20～400μg·ml-1范围内，线性关系良好（r=1.000，n=6），加样回收率为100.08%，RSD=0.89%（n=9）.该方法可靠、简便、准确，适用于阿德福韦含量测定与质量控制.关键词：阿德福韦；高效液相色谱；含量中图分类号：R917文献标志码：A文章编号：1009-8445（2019）05-0031-04

收稿日期：2019-05-16作者简介：黄励坚（1968-），男，广东广州人，广东肇庆星湖生物科技股份有限公司，工程师

.阿德福韦酯是一种新型治疗乙肝药物，被人体吸收后能迅速水解为阿德福韦，因此该药起到抗病毒作

用的是阿德福韦，其学名为9-[2-(膦酰甲氧基)乙基]腺嘌呤;9-[2-(磷酸甲氧基)乙基]腺嘌呤.研究拟建立一种

专属性强、灵敏度高、操作简单的阿德福韦含量测定方法，为阿德福韦人体代谢动力学研究提供支持.

1仪器与试剂

1.1仪器

1100高效液相色谱分析仪(安捷伦）；色谱柱：ZorbaxSB-Aq；PHS-3CpH计（雷磁）；十万分之一分析天

平（梅特勒-托利多XSE）；KQ3200型超声波清洗器(昆山超声仪器厂有限公司).

1.2药品与试剂

阿德福韦对照品（中国食品药品检定研究院，批号101359-201501,含量100%）；乙腈，色谱纯；氢氧化钠，

分析纯；磷酸，分析纯；磷酸二氢铵，分析纯；去离子水.

2方法与结果

2.1液相色谱条件

色谱柱：ZorbaxSB-Aq(填料粒径5µm，规格4.6mm×250mm).

流动相.溶液A：置1.15g磷酸二氢铵（NH4H2PO4）于1000mL去离子水中，混合均匀，用10%磷酸溶液调

pH值至3.50±0.05，混合均匀，经0.45µm尼龙膜过滤并脱气；溶液B：HPLC级乙腈.按照表1程序洗脱.

柱温：30℃；流速1ml·min-1；进样量10μl;检测波长260nm.肇庆学院学报第40卷

表1梯度洗脱程序

时间/min03152022242425303536384350溶液A/%10010085857575756555557585100100溶液B/%001515252525354545251500

2.2溶液配制

标准品储备液（1000μg·ml-1）：精密称量25mg阿德福韦标准品到25ml容量瓶中，加0.1mol·L-1氢氧

化钠1.0ml，加5ml去离子水，超声至完全溶解，用去离子水稀释至刻度，混匀.

标准品对照溶液（100μg·ml-1）：移液管移取10.0ml标准品储备液到100ml容量瓶中，用去离子水稀释

至刻度，混匀.

样品供试液（100μg·ml-1）：精密称量25mg阿德福韦供试品到25ml容量瓶中，加0.1mol·L-1氢氧化钠

1.0ml，加5ml去离子水，超声至完全溶解，用去离子水稀释至刻度，混匀；移液管移取10.0ml到100ml容量

瓶中，用去离子水稀释至刻度，混匀.

用去离子水做为空白样品溶液.

2.3方法学考察

专属性考察:取2.2项下对照品溶液适量，按拟订色谱条件进样对照品溶液、供试品溶液及空白样品(离

子水)溶液进行分析，色谱图见图1～图3.在该条件下，样品分离良好.

图1空白溶液高效液相色谱图32第5期黄励坚：高效液相色谱法测定阿德福韦的含量

图2对照品溶液高效液相色谱图

图3供试品溶液高效液相色谱图线性关系考察：用不同体积移液管精密量取2.2项下标准品储备液至不同体积容量瓶中，用去离子水稀

释至刻度，制成系列质量浓度溶液（20.0、50.0、100.0、200.0、250.0、400.0μg·ml-1）.按拟订色谱条件进样分

析，记录色谱图.以药物浓度对峰面积做线性回归，得回归方程为：Y=30.739X-14.777,R=1,结果显示阿德

福韦在20.0～400.0μg·ml-1范围内，线性关系良好.

精密度试验：取2.2项下对照品溶液适量，加去离子水分别稀释制成低、中、高质量浓度(20.0、50.0、

100.0μg·mL)的对照品溶液，各分别重复进样6次，记录峰面积.结果RSD分别为0.56%、0.68%、0.89%

(n=6),表明仪器精密度良好.

重复性试验：取2.2项下对照品溶液适量，加去离子水分别稀释制成供试液（100μg·ml-1）6份，依次测

量，记录图谱，外标法计算含量，按照含量计算RSD=0.27%(n=6),表明实验重复性良好.

中间精密度试验：取2.2项下对照品溶液适量，加去离子水分别稀释制成供试液（100μg·ml-1）6份，由

第二人在另一台仪器上测量，记录图谱，外标法计算含量，加上重复性实验的6个共12个含量值，计算得到

RSD=0.20%(n=12),表明实验精密度良好.

稳定性试验：配置供试液（100μg·ml-1），分别于0、2、4、6、8h进样，记录图谱，以峰面积计算RSD=

0.31%(n=5),表明室温下供试品溶液在8h内稳定.

回收率试验：分别精密称量20、25、30mg阿德福韦到25ml容量瓶中，加0.1mol·L-1氢氧化钠1.0ml，加

5ml去离子水，超声至完全溶解，用去离子水稀释至刻度，混匀.移液管移取10.0ml到100ml容量瓶中，用去

离子水稀释至刻度，混匀，形成相当于供试液浓度80%、100%、120%的样品，每个浓度配3份，进行液相测33肇庆学院学报第40卷

量，记录图谱，外标法计算每个浓度的回收率、平均回收率、RSD，以及9个样品回收率RSD，结果见表2：

表2阿德福韦回收率实验结果

浓度/%

80

100

120回收率/%99.3199.94100.9299.0099.02100.90100.6199.70101.34平均回收率/%

100.06

99.64

100.55RSD

0.81

1.09

0.82总RSD

0.89

3结论

建立了HPLC测量阿德福韦含量的方法，考察了方法的线性、精密度、回收率.结果表明阿德福韦含量在

20～400μg·ml-1范围内，线性关系良好(r=1.000,n=6),平均回收率为100.08%，RSD=0.89(n=9).该方法专

属性强，灵敏度高，适用于阿德福韦的含量测定与质量控制.

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HUANGLijian

(XinghuBiotechnologyCo.Ltd.,Zhaoqing,Guangdong526040,China)Abstract:Toestablishamethodforthedeterminationofadefouvircontent,AC18(4.6mm×250mm,5µm)

columnwasusedtodetecttheadefouvirsample,tostudythelinearity,precisionandrecoveryofthemethod.The

calibrationcurvewaslinearintherangeof20~400ug·ml-1(r=1.000,n=6).Therecoverywas100.08%,and

RSD=0.89(n=9).Themethodisspecificandsensitiveanditcanbeusedforthedeterminationofadefovircon-

tent.

Keywords:adefovir;HPLC;content

（责任编辑：张宝杰

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