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乳酸对粪肠球菌的抑菌作用及作用机制王凤婷;靳盼盼;刘芳;孙芝兰;吴海虹;王道营;许晓曦;徐为民【摘要】目前乳酸常被用来控制食品中腐败菌的生长,但是有关其对食品优势腐败菌抑菌机制方面的研究较少.本试验以一株从肉制品中分离得到的腐败菌粪肠球菌R612-Z1为目标菌株,研究乳酸对其的杀菌效果及作用机制.结果表明,各浓度(0.25%、0.50%、1.00%)的乳酸均有杀菌效果而且作用明显,通过激光共聚焦显微镜及流式细胞仪检测发现,处理后细胞膜通透性增强.扫描电镜及腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)浓度的测定结果说明,胞内物质流出聚集在细胞外侧,胞外ATP浓度和核酸类物质浓度明显上升,膜电势快速升高.因此,乳酸通过破坏粪肠球菌的细胞壁,增加细胞膜通透性,改变细胞内外电势,导致内容物流出,从而达到杀菌效果.%Lactic acid(LA) is widely used to control the growth of contaminating bacteria in food,but there are few reports about the antibacterial mechanism of it. The antimicrobial activity of LA against a dominated spoilage bacterium, Enterococcus faecalis R612-Z1,isolated from water-boiled salted duck was studied. The results showed that all the selected concentrations of LA (0.25%,0.50%, 1.00%) had obvious bactericidal action. The permeability of cell membranes was increased for the bacterial cells treated with 1.00% LA, which was detected using the laser scanning confocal microscope and flow cytometry. The intracellular substances were leaked according to the results of scanning electron micrographs and the detection of extracellular ATP and UV-absorbing materials. The membrane potentials were found to be increased. There-fore,the antibacterial effect of LA on E. faecalis was mainly completed by the massive leakage of intracellular component,which was caused by damaging the cell membrane and membrane potential.【期刊名称】《江苏农业学报》【年(卷),期】2018(034)001【总页数】7页(P200-206)【关键词】粪肠球菌;乳酸;抑菌机理【作者】王凤婷;靳盼盼;刘芳;孙芝兰;吴海虹;王道营;许晓曦;徐为民【作者单位】江苏省农业科学院农产品加工研究所,江苏南京210014;东北农业大学食品学院,黑龙江哈尔滨150030;江苏省农业科学院农产品加工研究所,江苏南京210014;东北农业大学食品学院,黑龙江哈尔滨150030;江苏省农业科学院农产品加工研究所,江苏南京210014;江苏省农业科学院农产品加工研究所,江苏南京210014;江苏省农业科学院农产品加工研究所,江苏南京210014;江苏省农业科学院农产品加工研究所,江苏南京210014;东北农业大学食品学院,黑龙江哈尔滨150030;江苏省农业科学院农产品加工研究所,江苏南京210014【正文语种】中文【中图分类】TS201.3食品的安全、质量及营养价值是人们密切关注的问题[1]。
荧光共振能量转移(FRET)影像系统Olympus（北京）销售服务有限公司上海分公司PDF created with pdfFactory Pro trial version 荧光共振能量转移(FRET)影像系统一、研究目的随着生命科学研究的不断深入, 光学显微镜使我们理解了细胞结构和有关功能。
但是分子 生物学研究已经显示了分子事件，例如信号传导和基因翻译，需要蛋白质的装配成特殊的大 分子复合体等。
对各种生命现象发生的机制,特别是对细胞内蛋白质间相互作用的研究变得尤 为重要。
传统的生物物理或生物化学方法例如亲和色谱法或免疫沉淀反应法和近来的酵母双杂 交、磷酸化抗体、免疫荧光、放射性标记等方法等，都需要破碎细胞或对细胞造成损伤，无 法做到在活细胞生理条件下实时地对细胞内蛋白质-蛋白质间相互作用进行动态研究。
而基于强度的影像技术FRET方法，使得研究活细胞内的这些相互作用变得容易了，荧光 共振能量转移( FRET)是用于对生物大分子之间相互作用定性、定量检测的一种有效方法。
根 据所基于的荧光显微镜配置不同而有不同的应用侧重，可在多细胞，单细胞，细胞膜，细胞 器等不同层次对生物大分子间的相互作用距离，动力学特性等进行研究。
二、FRET的原理和实现方法FRET的原理和发生的基本条件：1. 2. 3. 4. 发色团之间的距离在10A到100A 。
供体D的荧光光谱和受体A的吸收光谱足够多的重叠。
供体D的量子产率和受体A的吸收系数足够大。
D和A的跃迁偶极矩有最佳的相对取向，或者两者之一有一定的快速旋转的自由度。
FRET的实现方法：1) 稳态方法（基于供体、受体的三通道计算校准） 供体荧光的减弱－主要的方法 受体荧光的增强 激发光谱和吸收光谱的比较 2) 3) 光漂白方法 （Pb-FRET） 时间分辨方法（TR-FRET） 供体荧光的衰减 受体荧光的增长PDF created with pdfFactory Pro trial version FRET 特点：1) 动态实验，采集速度快 / 高速Shutter、高速CCD 2) 3) 4) 维持活细胞活性－CO2培养箱、恒温培养箱、恒温板 尽量减少光毒性，减少光照时间 保证长时间观察奥林巴斯 FRET 系统组成：1、显微镜 2、光源、高速荧光激发光切换控制和电动光闸 3、电动 XY 载物台 4、环境控制 5、高灵敏度冷 CCD 6、多种部件同时工作的控制软件 7、图像分屏器——DualView三、Olympus FRET系统详细技术参数一）显微镜：Optics 光学性能Ø 光学系统（Optical System）: 奥林巴斯 2005 年最新推出的 UIS2 无限 远光学系统（UIS2 Infinity optical system） （UIS2 光学系统具有的高光 透过率和全光谱范围的色差校正，及高信噪比的特点，非常适合荧光 方面的研究，可以说是目前最先进的光学系统之一） 光路设计: V型光路把反射时的光线损失减少到最小程度，保证最大光 通过量System Flexibility系统适应性Ø Ø Ø 光口: 双层多光口设计（奥林巴斯首创）保证了输入/输出灵活性，提 供 6 条射入/射出光路，最多可同时接 4 路采集原像的图像获取系统。
武汉大学化学与分子科学学院大型仪器平台收费细则（2017-04）1、x射线粉末衍射仪（1） Bruker D8 Advance粉末衍射仪细则院内校内校外说明1 普通快扫（<20min）40元/样60元/样80元/样普通快扫时间超过20分钟，每超出20分钟按多扫一个样品计费，不足20分钟按20分钟计。
2 小角扫描（SAXS）60元/样80元/样100元/样3 长时间扫描100元/小时150元/小时200元/小时（2） Rigaku MiniFlex600粉末衍射仪细则院内校内校外说明1 普通快扫（<5min）40元/样60元/样80元/样普通快扫时间超过5分钟，每超出5分钟按多扫一个样品计费，不足5分钟按5分钟计。
2 长时间扫描150元/小时200元/小时250元/小时（3） RigakuSmartLab 9kW多功能粉末衍射仪细则院内校内校外说明1 普通快扫（<10min）60元/样80元/样100元/样普通快扫时间超过10分钟，每超出10分钟按多扫一个样品计费，不足10分钟按10分钟计。
2 小角扫描（SAXS）120元/样150元/样180元/样3 长时间扫描150元/小时200元/小时250元/小时注意：1、以上如采用毛细管等特殊装置进行测试，则样品制备时间算在测试时间内，且毛细管等耗材费用另计。
2、XRD自主操作培训费用1000元/人次（校外人员不能自主操作）。
2、x射线单晶衍射仪细则院内校内校外1 扫单胞50元/样100元/样200元/样2 晶体结构数据采集（整套数据8h以内）400元/样600元/样800元/样3 晶体结构数据采集（整套数据超过8h）每小时加收100元/样每小时加收150元/样每小时加收200元/样4 2D衍射(4h以内)400元600元800元5 低温液氮费30元/小时30元/小时60元/小时注意：1、以上如采用毛细管等特殊装置进行测试，则样品制备时间算在测试时间内，且毛细管等耗材费用另计。
蔡司LSM900共聚焦显微镜的成
像原理
蔡司LSM900共聚焦显微镜的成像原理
共聚焦显微镜是指利用共聚焦显微成像技术（Confocal microscopy）作为技术基础，应用光学手段进行成像的一种光学显微镜。
共聚焦显微成像技术是一种利用逐点照明和空间针孔调制来去除样品非焦点平面的散射光的光学成像手段，相比于传统成像方法可以提高光学分辨率和视觉对比度。
共聚焦显微镜是一种利用逐点照明和空间针孔调至来去除样品非焦点平面的散射光成像技术的显微镜，是拥有高对比度和高分辨率的专业级显微镜。
常用语细胞及生物荧光样品观察分析；绿荧光蛋白分析；荧光复位杂交分析；光切片扫描以及
3D图像处理等应用中。
蔡司LSM900共聚焦显微镜的成像原理主要用于生物领域，共聚焦成像也被称为细胞CT。
能够获得焦平面细胞内一个层面的细胞图像，因无其它层面信号的干扰，能获得非常清晰的细胞图像。
共聚焦成像经过多年发张，如超分辨技术具有多种一样的实现方式相同，有多种方式能够实现共聚焦，不同的成像方式之间特点互补。
共焦成像是利用激光点扫描共焦成像的原理，即通过单个激光点激发样品中的荧光获得荧光信号，通过针孔屏蔽非焦平面信息，从而获得单片细胞图像。
在转盘可以聚焦的成像原理上，激光或普通激发光通过转盘变成多个激发点，转盘的旋转使激发光扫描整个样品，得到的荧光通过转盘的针孔去除非焦点细胞图像。
更多信息请咨询北京瑞科钟毅科技相关人员。
激光共聚焦（LSCM）检测一、实验技术简介激光扫描共聚焦显微镜是采用激光作为光源，在传统光学显微镜基础上采用共轭聚焦原理和装置，并利用计算机对所观察的对象进行数字图象处理的一套观察、分析和输出系统。
主要系统包括激光光源、自动显微镜、扫描模块（包括共聚焦光路通道和针孔、扫描镜、检测器）、数字信号处理器、计算机以及图象输出设备（显示器、彩色打印机）等。
通过激光扫描共聚焦显微镜，可以对观察样品进行断层扫描和成像。
因此，可以无损伤的观察和分析细胞的三维空间结构。
同时，通过激光扫描共聚焦显微镜也是活细胞的动态观察、多重免疫荧光标记和离子荧光标记观察的有力工具。
二、主要技术指标1、共聚焦扫描系统（1）独立双向扫描镜。
可以在正置显微镜和倒置显微镜之间迅速互换。
仪器永久不用校正；可调的计算机控制单共焦针孔、孔径20～600μm（2）光谱扫描区400～850nm（3）单线扫描频率≥2000线/秒（4）图扫描率≥3幅/秒512×512pixels；≥20幅/秒512×32pixels（5）扫描分辨率4096*4096扫描放大1～32X；多方位序列扫描方式；任意形状区域扫描-范围：≥22mm。
（6）光谱斜陡率≤1％（7）透射光检测器用于微分干涉相衬法检验（8）低噪音冷却型光电倍增管（PNT）控测器12bi2、激光装置：具有多通道AOTF（四通道，八谱线），连接四种不同波长的可见光激光可以自动选择激光谱线和功率，具等待功能。
光纤耦合连接低能量激光。
目前使用五激光，八谱线。
Ar激光发生器（458nm/5mw，476nm/5mw，488nm/20mw，514nm/20mw）-蓝；He/Ne激光发生器（543nm/1.2mw）-绿；He/Ne激光发生器（633nm/10mw，594nm/2mv）-红，紫外激光发生器（405nm/25mv）3、显微镜：DMIRE2倒置电动荧光显微镜，拥有10x，20x，40x干镜以及63x，100x油镜。
