采用超高效液相色谱串联质谱法检测饲料中3种磺胺类药物

分析测试经验介绍 (104 ~ 109)超高效液相色谱-串联质谱法同时检测地龙药材中4种黄曲霉毒素含量及阳性结果确证郭　晶1，张　进1，李文君1，李正刚2（1. 通化市食品药品检验所，吉林 通化　134000；2. 四平市食品药品检验所，吉林 四平　136000）摘要：建立超高效液相色谱-串联质谱法同时测定地龙药材中黄曲霉毒素B 1、B 2、G 1、G 2的含量，并对阳性结果进行确证. 样品经70%甲醇提取、免疫亲和柱净化、超高效液相色谱柱分离、三重四极杆质谱检测，并采用离子峰度比进行阳性结果确证. 结果表明，4种黄曲霉毒素的线性关系良好（r >0.999 5），回收率在91.2%~95.6%范围内.黄曲霉毒素B 1、B 2、G 1、G 2的检出限分别为0.10、0.038、0.11、0.038 µg/kg. 方法专属性好，灵敏度高，准确性好，可以进行最终阳性检出的判定. 15批地龙药材中6批黄曲霉毒素确证阳性检出, 证明地龙药材较易被黄曲霉毒素污染.关键词：地龙；超高效液相色谱-串联质谱；黄曲霉毒素；阳性结果确证中图分类号：O657. 63 文献标志码：B 文章编号：1006-3757（2024）02-0104-06DOI ：10.16495/j.1006-3757.2024.02.005Simultaneous Determination of Four Aflatoxins in Pheretima by Ultra Performance Liquid Chromatography Tandem Mass Spectrometry andConfirmation of Positive ResultsGUO Jing 1， ZHANG Jin 1， LI Wenjun 1， LI Zhenggang2（1. Tonghua Institute for Food and Drug Control , Tonghua 134000, Jilin China ；2. Siping Institute for Food andDrug Control , Siping 136000, Jilin China ）Abstract ：A method for simultaneous determination of aflatoxins B 1, B 2, G 1, and G 2 in pheretima was been established by ultra performance liquid chromatography tandem mass spectrometry (UPLC-MS/MS), and the positive results was confirmed. The samples were extracted by 70% methanol, purified by a immunoaffinity columns, separated by UPLC-MS/MS, detected by triple quadrupole mass spectrometry, and confirmed by ion peak ratio. The results showed that the linear relationship of the four aflatoxins were good (r >0.999 5), and the recoveries ranged from 91.2% to 95.6%. The limits of detection for aflatoxin B 1, B 2, G 1, and G 2 were 0.10, 0.038, 0.11, 0.038 µg/kg, respectively. The method has a good specificity, high sensitivity, good accuracy, and can be used to determine the final positive detection. Aflatoxin were positively detected in 6 out of 15 batches of pheretima , which proved that the Pheretima were more susceptible to contamination by aflatoxins.Key words ：Pheretima ；UPLC-MS/MS ；aflatoxin ；confirmation of positive results收稿日期：2024−01−10；　修订日期：2024−03−05.基金项目：吉林省中药材标准及中药饮片炮制规范（项目编号：JLPZGF-2020-052）作者简介：郭晶（1979−），女，副主任药师，研究方向为药品质量标准通信作者：李正刚（1982−），男，硕士，医药工程师，研究方向为中药质量标准，E-mail ：*****************.第 30 卷第 2 期分析测试技术与仪器Volume 30 Number 22024年3月ANALYSIS AND TESTING TECHNOLOGY AND INSTRUMENTS Mar. 2024黄曲霉毒素（aflatoxins, AF）是一种毒性极强的剧毒物质，被各个国家的癌症研究机构列为Ⅰ类致癌物. 黄曲霉毒素主要是由黄曲霉、寄生曲霉产生的次生代谢产物，是一组化学结构类似的化合物[1-2]，主要包括AFB1、AFB2、AFG1、AFG2，多存在于土壤、动植物、各种坚果中[3]，在湿热环境下出现黄曲霉毒素污染的概率最高. 黄曲霉毒素的危害性在于对人及动物肝脏组织的慢性毒性作用，长期积累可导致肝癌甚至死亡[4-5]. 各国药典均对黄曲霉毒素在中药材或中草药中的限量作了规定，如《欧洲药典》规定AFB1、AFB2、AFG1、AFG2总量在中草药中的限量不得高于4 µg/kg，《美国药典》规定AFB1、AFB2、AFG1、AFG2总量在中草药中的限量不得高于20µg/kg，《中华人民共和国药典》规定其总量在中药材中的限量不得高于10 µg/kg[6].地龙药材标准收载在《中华人民共和国药典》2020版一部[7]. 采收时需要及时剖开腹部，除去内脏和泥沙. 由于地龙生长在土壤环境中，故其被AF污染的风险较大. 目前AF测定的方法主要有液相色谱-柱后碘衍生化法或光化学衍生化法-荧光检测器以及酶联免疫法，但以上方法均存在假阳性的误判可能性，当超出标准限值时均需要采用质谱检测器进行阳性确证[8]. 本研究采用超高效液相色谱-串联质谱法（UPLC-MS/MS）同时测定不同产地多批次地龙药材中AFB1、AFB2、AFG1、AFG2的含量，并对阳性结果进行确证，从而准确的判定检出情况，为地龙药材中AF污染情况提供参考.1　试验部分1.1　仪器和试剂BT125D型电子天平（北京赛多利斯仪器天平有限公司），TDL-5-A型离心机（上海安亭科学仪器厂），AB SCIEX QTRAP® 5500型超高效液相色谱-三重四极杆质谱（美国AB SCIEX公司）. 超高压液相色谱柱（岛津科技有限公司），免疫亲和柱（青岛普瑞邦生物工程有限公司，规格：3 mL，批号：2J1J24-4）.AF混合对照品溶液：AFB1、AFB2、AFG1、AFG2标示质量浓度分别为1.04、0.38、1.08、0.38µg/mL，批号：610001-202006，来源于中国食品药品检定研究院. 氯化钠和醋酸铵（国药集团化学试剂有限公司，分析纯），甲醇和乙腈（Flsher Scientific，色谱纯），纯化水为自制.本次收集到不同产地和批次的地龙药材共15批，基本信息如表1所列.表 1 地龙药材样品基本信息Table 1　Basic informations of Pheretima samples药材编号样品名称产地DL1广地龙海南文昌DL2广地龙广东肇庆DL3广地龙广东韶关DL4广地龙广东韶关DL5广地龙广西玉林DL6广地龙广西北海DL7沪地龙湖北襄阳DL8沪地龙河南濮阳DL9沪地龙河南安阳DL10沪地龙浙江嘉兴DL11沪地龙河南焦作DL12沪地龙浙江金华DL13沪地龙江西赣州DL14沪地龙江西九江DL15沪地龙江西宜春1.2　仪器工作条件1.2.1　色谱条件色谱柱：Shim-pack XR-ODS，3.0 mm×75 mm （1.8 µm）；以10 mmol/L醋酸铵溶液为流动相A，甲醇为流动相B；柱温：25 ℃；流速：0.3 mL/min. 按表2中的程序进行梯度洗脱.表 2 梯度洗脱程序Table 2　Gradient elution procedure时间/min流动相A/%流动相B/%0~4.565~1535~854.5~615~085~1006~6.50~65100~356.5~1065351.2.2　质谱条件离子源：电喷雾离子源（ESI源）；监测模式：正离子扫描下的多反应监测模式（MRM）；喷雾压强：0.21 MPa；干燥气流速：8 L/min；干燥气温度：550 ℃；毛细管电压：5 500 V；三重四极杆离子对及相关电压参数设定如表3所列.第 2 期郭晶，等：超高效液相色谱-串联质谱法同时检测地龙药材中4种黄曲霉毒素含量及阳性结果确证1051.3　标准曲线绘制分别精密量取AF混合对照品溶液100、50、25µL于10 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得标准曲线溶液1、2、3. 分别精密量取1 mL标准曲线溶液2、0.1 mL标准曲线溶液1于10 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得标准曲线溶液4、5. 精密量取1 mL标准曲线溶液4于10 mL 容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得标准曲线溶液6.1.4　供试品溶液制备取供试品粉末约15 g（过四号筛网），精密称定，置于均质瓶中，加入氯化钠3 g、70%甲醇溶液75 mL，12 000 r/min高速搅拌2 min，4 500 r/min离心5 min，取上清液15.0 mL，置于50 mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，4 500 r/min离心10 min，取续滤液20.0 mL. 通过免疫亲合柱，流速3 mL/min，用20 mL水洗脱，洗脱液弃去，使空气进入免疫亲合柱，将水挤出，再用适量甲醇洗脱，收集洗脱液，置于2 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.22 µm）滤过，取续滤液，即得.2　结果与讨论2.1　免疫亲和柱技术和质谱测定法的优势免疫亲和柱技术是利用抗原、抗体之间高度特异性结合对目标物进行净化富集的一种实验技术，预置在柱体内的特异性抗体选择性结合样本中的待测物，杂质不被结合流出柱外，柱上结合的目标物再被洗脱液洗脱，从而实现目标物的高效净化和浓缩[9].质谱法是使待测化合物产生气态离子，再按质荷比（m/z）将离子分离、检测的分析方法，检测限可达10−15~10−12 mol数量级. 相比较液相色谱法，测试样品需要的量较少，其检测灵敏度也大幅度提高，且其较好的专属性可以作为液相色谱检出情况的进一步确证，大大降低误判阳性检出的情况[10-13]. 2.2　线性范围和检出限分别精密吸取1.3项下系列混合对照品溶液5µL，注入液相色谱仪，测定峰面积，以进样质量浓度（ng/mL）为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线.结果如表4所列，4种黄曲霉毒素的线性关系良好（r>0.999 5）.取不含AF的样品15 g，加入0.15 mL标准曲线溶液1，余下操作同1.4项下供试品溶液制备，1.2项下仪器工作条件测定，以信噪比（S/N）为3作为4种黄曲霉毒素的检出限（limit of detection，LOD），结果如表4所列，AFB1、AFB2、AFG1、AFG2的LOD分别为0.10、0.038、0.11、0.038 µg/kg，表明方法灵敏度较高.表 4 回归方程、线性范围和检出限Table 4　Regression equations, linear ranges and limits of detection组分名称回归方程r线性范围/（ng/mL）LOD/（µg/kg）S/N AFB1y=33 600x –1 3600.999 90.104～10.4000.10 4.5AFB2y=30 900x – 4 8800.999 80.038～3.8000.038 3.1AFG1y=26 150x – 6 3400.999 80.108～10.8000.11 4.2AFG2y=21 200x + 2 9200.999 80.038～3.8000.038 3.32.3　精密度考察取5 µL 1.3项下标准曲线溶液1，在1.2项下仪器条件及测定方法下分别连续进样6次，测定各组分的色谱峰面积. 测试结果：AFB1、AFB2、AFG1、表 3 质谱条件Table 3　Conditions of mass spectrometer序号组分名称母离子/（m/z）子离子/（m/z）碎裂电压/V碰撞能量/eV1AFB1313.1285.1*16034241.0207512AFB2315.1287.1*18937259.1200393AFG1329.1243.1*16338311.1180314AFG2331.1313.1*18535245.118842注：*定量离子对106分析测试技术与仪器第 30 卷AFG2色谱峰面积相对标准偏差（RSD)分别为1.3%、2.2%、1.8%和2.2%，表明仪器的精密度良好.2.4　稳定性试验取1.3项下标准曲线溶液1，分别于0、4、８、16、18、24 h 按1.2项下仪器条件进样5 µL，记录所测各组分峰面积. 测试结果：AFB1、AFB2、AFG1、AFG2色谱峰面积RSD分别为2.6%、2.2%、2.5%和2.3%，结果表明在24 h内测定结果稳定.2.5　重复性和回收率试验由于15批次地龙药材中仅部分检出AFB1、AFB2，故在加标回收试验中进行方法的重复性考察.称取不含AF的地龙药材（编号：DL1）粉末约15 g，各6份，分别精密加入AF混合对照品溶液75 µL，其余操作同2.1.2项下供试品溶液制备，按2.2项下条件分别测定各组分的色谱峰面积，结果如表5所列. 由表5可见，AFB1、AFB2、AFG1、AFG2的平均回收率分别为95.6%、93.4%、93.2%、91.2%，加标测定值的RSD分别为1.9%、2.0%、1.7%和2.6%，表明该方法的回收率满足要求，方法的重复性良好.2.6　样品测定取15批次地龙药材，按照1.4项下方法制备供试品溶液，1.2项下仪器条件进行测定，结果如表6所列，结果表明在6批地龙样品中检测出AFB1和AFB2，质谱总离子流图如图1所示.表 6 样品测定结果Table 6　Determination results of samples/(µg/kg)样品编号AFB1质量分数AFB2质量分数AFG1质量分数AFG2质量分数总质量分数DL1/////DL2/////DL3/////DL4 6.80.53//7.33 DL5/////DL6/////DL77.80.35//8.15 DL8 6.50.31// 6.81 DL9 4.30.24// 4.54 DL10/////DL11/////DL12/////DL13 3.10.43// 3.53 DL14 2.50.31// 2.81 DL15/////注：“/”：未检出2.7　阳性结果确证中药组成成分相较于西药组成成分复杂多样，三重四极杆质谱是以母离子及子离子组成的离子对进行检测，由于样品基质成分的复杂性，单个离子对出现干扰的情况在试验过程中偶有发生. 然而一个化合物在质谱检测器的离子源中被固定碰撞电压击碎产生的多个碎片离子之间具有相对固定的比例，故采用离子对峰面积的比值进行比较更具有专属性，UPLC-MS/MS法通常采用离子峰度比对结果进一步确证阳性检出，即：如果样品检出色谱峰的保留时间与对照品一致，并且在扣除背景后的表 5 方法的重复性和回收率试验结果Table 5　Experimental results of repeatability andrecovery of method添加质量分数加入质量/ng实测质量/ng回收率/%平均回收率/%RSD/%AFB1 (5 µg/kg)78.0074.2195.1495.6 1.9 78.0073.1193.7378.0075.5396.8378.0076.5298.1078.0072.9993.5878.0075.2396.45AFB2 (2 µg/kg)28.5026.1291.6593.4 2.0 28.5025.2390.7728.5026.7893.9628.5027.0194.7728.5027.3295.8628.5026.5593.16AFG1 (5 µg/kg)81.0077.4495.6093.2 1.7 81.0075.2692.9181.0075.3693.0481.0074.8292.3781.0076.3594.2681.0073.7891.09AFG2 (2 µg/kg)28.5025.1591.0591.2 2.6 28.5026.2292.0028.5025.4789.3728.5025.1188.1128.5027.0194.7728.5026.2892.21第 2 期郭晶，等：超高效液相色谱-串联质谱法同时检测地龙药材中4种黄曲霉毒素含量及阳性结果确证107质谱图中，所选择的监测离子对均出现，而且所选择的监测离子对峰面积比与对照品的监测离子对峰面积比一致，则可判定样品中存在该真菌毒素.经计算本试验检出的6批阳性样品的离子峰度比AFB 1分别为75.3%、75.2%、75.1%、75.3%、75.2%、75.1%，相对平均偏差均小于0.2%. AFB 2分别为85.0%、85.1%、85.1%、85.2%、85.3%、85.0%，相对平均偏差均小于0.2%. 均在允许偏差±20%内，确证样品阳性检出.3　结论由多批次样品检验情况可以初步得出，地龙药材中黄曲霉毒素的污染主要为黄曲霉毒素B 1和B 2.地龙药材在产地初加工过程中需去除泥沙，而泥沙为黄曲霉毒素污染的重要来源，如果泥沙去除不净、保存不当、遇湿热环境，则黄曲霉毒素含量容易超标[14-17]. 因此地龙药材的黄曲霉毒素监测检验非常必要[18-21]. 试验结果表明，UPLC-MS/MS 法操作简便、专属性好、灵敏度高、重复性好，能够对地龙药材的阳性结果作出准确判定，故将在中药材的黄曲霉毒素污染检测中发挥重要作用.参考文献：刘丽娜, 李海亮, 李耀磊, 等. 中药真菌毒素质量控制概况、限量标准制定及有关问题的思考[J ]. 中草药，2023，54（19）：6197-6207. [LIU Lina, LI Hailiang, LI Yaolei, et al. Overview on quality control of mycotox-ins in traditional Chinese medicine, limit requirements and discussion on related issues [J ]. Chinese Tradition-al and Herbal Drugs ，2023，54 （19）：6197-6207.]［ 1 ］沈立, 汤燕, 陈铁柱, 等. 固相萃取液质联用测定川产道地药材黄精、麦冬中10种真菌毒素[J ]. 药物分析杂志，2023，43（8）：1369-1380. [SHEN Li, TANG［ 2 ］Yan, CHEN Tiezhu, et al. Determination of 10 my-cotoxins in Polygonati Rhizoma and Ophiopogonis Radix as a genuine regional drug of Sichuan by solid-phase extraction coupled with LC-MS/MS [J ]. 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液相色谱串联质谱法检测鸡蛋中磺胺类药物作者：伦丽丽来源：《食品安全导刊》2019年第07期磺胺类药物（SAs）是指具有对氨基苯磺酰胺结构的一类化学药物的总称，被广泛用于畜禽生产中以防治细菌感染。

在养殖密度较大的家禽行业中，使用磺胺类药物防治细菌感染的做法尤为普遍，因此禽蛋中存在着磺胺类药物残留的风险。

目前，我国相关的动物源性食品中磺胺类药物的检测方法已有相关标准，但对鸡蛋中仪器检测的报道文献较少。

本文建立了鸡蛋中16种磺胺类药物的超高效液相色谱串联质谱检测方法，其灵敏度高、稳定性好，能够满足对鸡蛋中磺胺类药物残留的检测要求。

1 实验部分1.1 试剂与耗材磺胺乙酰、磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺二恶唑、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺甲恶唑、磺胺吡啶、磺胺地索辛、磺胺甲氧哒嗪、磺胺二甲基异噁唑、苯甲酰磺胺、磺胺喹恶啉、磺胺邻苯甲氧嘧啶，德国DR.E公司。

乙腈、甲醇、甲酸等，均为色谱纯（国药）。

将标准品用甲醇配制成单标母液，并配制10μg/mL混合储备液于-20℃保存，使用时现配为系列标准工作液。

鸡蛋购于超市，经液质分析确认均为阴性样本。

1.2 仪器设备ACQUITYTM型超高效液相色谱仪、Waters Xevo TQS四极杆质谱仪（配电喷雾离子源）、ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱（2.1mm×100mm，1.7μm），美国Waters公司；离心机；纯水仪；氮吹仪。

1.3 试验1.3.1 前处理方法优化本实验比较了乙腈、1%甲酸乙腈作为提取溶剂，对事先添加25μg/kg混标溶液的空白鸡蛋样本进行提取，并进行提取溶剂优化试验；比较了涡旋振荡提取、涡旋振荡+超声配合提取，对事先添加25μg/kg混标溶液的空白鸡蛋样本进行萃取，同时进行提取方法优化试验；比较了10g无水硫酸钠加入与否对结果的影响；最终确定最优的前处理条件。

1.3.2 优化后的前处理方法称取样品2g，加入混合内标工作液100ng、无水硫酸钠10g、12mL1%甲酸乙腈，涡旋振荡2min，超声提取10min；7000rpm离心5min，取上清，60℃水浴氮吹至干。

QuEchERS-超高效液相色谱-串联质谱法测定饲料中甲磺草胺范艳; 程媛媛; 韩超; 王莉; 王菲迪; 吴声敢【期刊名称】《《浙江农业科学》》【年(卷),期】2019(060)011【总页数】3页(P2106-2108)【关键词】饲料; 超高效液相色谱-串联质谱; 甲磺草胺; 平均回收率【作者】范艳; 程媛媛; 韩超; 王莉; 王菲迪; 吴声敢【作者单位】浙江省植物有害生物防控重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地农业农村部农药残留检测重点实验室浙江省农业科学院农产品质量标准研究所浙江杭州 310021【正文语种】中文【中图分类】S481+.8甲磺草胺(Sulfentrazone)，又名甲基磺酰甲胺，是一种三唑啉酮类除草剂，原卟啉原氧化酶抑制剂。

通过抑制叶绿素生物合成过程中原卟啉原氧化酶而破坏细胞膜，使叶片迅速干枯、死亡。

适用于大豆、玉米、花生、向日葵等作物田内一年生阔叶杂草、禾本科杂草和莎草，如牵牛、反枝苋、铁苋菜、曼陀罗、狗尾草、苍耳、牛筋草、香附子等。

甲磺草胺是一种使用范围较广，低毒且难降解的除草剂，对目前较难除的牵牛花、香附子、苍耳有较好的效果[1-2]，是玉米、大豆和花生等作物的新型高效低毒播后苗前除草剂。

这也使得甲磺草胺在农作物中有一定量的农药残留。

饲料是用于农业或牧业饲养的动物食物，包括大豆、豆粕、玉米、鱼粉、氨基酸、杂粕、乳清粉、油脂、肉骨粉、谷物、饲料添加剂等十余个品种的饲料原料，对饲料中甲磺草胺残留量的研究至关重要。

美国和日本已经制定了甲磺草胺在部分商品(包括水果、蔬菜、饲料等)中的残留限量(0.05～1.5 mg·kg-1不等)[3]，我国目前还没有对甲磺草胺做限量规定，也没有相关的检测标准。

目前，对甲磺草胺的检测方法包括气质联用[4-6]，液相色谱法[7-10]和液质联用[11]。

甲磺草胺的不合理使用，不仅会对动物产生影响，还会对人体健康产生重大威胁。

因此，有必要建立一种简便、快速的方法检测饲料中的残留。

高效液相色谱—串联质谱法测定牛肉中的十种磺胺类药物残留倪永付;王勇;朱莉萍;闫秋成【摘要】The residues of ten sulphonamides in beef were determined by high - performance liquid chro- matography - tandem mass spectrometry. The result showed that the correlation coefficients of linear cali- bration curves r =0.9955 - 0.9997 within the sulphonamides concentration rangeof 10- 200ug/L;the detection limit of this method was 10p, g/kg and the recovery rates were 70% -95% .%用高效液相色谱—串联质谱法（LC/MS/MS）测定牛肉中残留的十种磺胺类药物。

结果表明：十种磺胺在浓度10～200μg/L范围内线性关系良好,相关系数r=0.9955～0.9997,回收率为70%～95%,定量限为10μg/kg。

【期刊名称】《粮油食品科技》【年(卷),期】2011(019)006【总页数】3页(P37-39)【关键词】磺胺类药物;残留;液相色谱—串联质谱;牛肉【作者】倪永付;王勇;朱莉萍;闫秋成【作者单位】济宁出入境检验检疫局技术中心,山东济宁272000;济宁出入境检验检疫局技术中心,山东济宁272000;济宁出入境检验检疫局技术中心,山东济宁272000;济宁出入境检验检疫局技术中心,山东济宁272000【正文语种】中文【中图分类】R115;O657.63磺胺类药物(sulfonamides，SAS)是一类含有对氨基苯磺酰胺结构药物的总称［1］，具有抗菌、抗虫功效，是兽医中防治疾病的常用药物，通常是混在饲料中或动物直接口服，主要用于预防和治疗细菌感染性疾病［2－4］，因具有抗菌谱广、价格低、化学性质稳定、使用方便等优点而被广泛应用［5］。

工作研究畜牧业环境 2021.0432摘　要：高效液相色谱-串联质谱法是检测领域中一种非常重要的检测方法，本文针对水产品中的磺胺类药物残留建立了相关的LC-MS法，旨在帮助实验室提高检测效率和检测质量。

本实验建立的方法在1～20ng/mL范围内具有良好线性关系，且7种磺胺药物的相关系数均大于0.998；同时该方法检出限较低，为1ug/kg。

另外测定了5ug/kg添加水平时的回收率，结果显示各类药物的回收率在83%～95%之间。

可见该方法高效准确，可以满足实验需求。

关键词：高效液相色谱-串联质谱法；水产品；磺胺类药物；检测方法1　前言磺胺类药物自发现至今，已有80余年历史。

由于其具有广谱抗菌性、性质稳定、吸收快、使用方便等诸多优点，使其在医疗卫生、食品生产、动物养殖等领域应用广泛。

但在使用过程中也存在着一些缺陷，例如抑菌效果弱、易产生耐药性、用量大、疗程长和发生不良反应等，这些缺陷的存在会造成磺胺类药物的过量使用，由此导致水产、畜禽肉等农产品中药物残留超标，对人体健康产生威胁。

随着检验检测技术的发展，关于磺胺类药物的检测方法已从最初的一种变为现在的多种，主要包括LC-MS（高效液相-串联质谱法）、LC（高效液相色谱法）、快速检测法（ELISA酶联免疫吸附法）、安培检测法等。

其中LC-MS和LC最为常用，在定性定量方面占有很大优势。

本研究以水产品为检测对象，经过一系列条件的优化，建立了关于磺胺类药物的高效液相-串联质谱法的检测方法。

2　材料与方法2.1　实验材料与仪器甲酸（色谱纯，赛默飞世尔），甲醇、乙腈（色谱纯，默克），Captive EMR柱（5982-1003，安捷伦），7种磺胺类药物的混合标准品（100μg/ml，Dr.Ehrenstorfer GmbH）。

0.1%甲酸-水溶液：甲酸：水=1：1000。

超高效液相色谱（1290）-串联四极杆质谱联用仪（6495）（美国，安捷伦）；CF16RN高速冷冻离心机（日本，日立）；涡旋混合器（德国，IKA）；MS2204TS电子天平（瑞士，梅特勒）。

磺胺类药物（sulfonamides ，SAs ）是指具有对氨基苯磺酰胺结构的一类药物的总称，是一类用于预防和治疗细菌感染性疾病的抗生素[1]。

1935年磺胺类药正式应用于临床。

具有抗菌谱广、性质稳定、体内分布广等优点。

磺胺类药物在畜牧业，被广泛用于治疗食源性动物疾病，同时可以添加到饲料中作为预防和促生长使用[2-4]。

磺胺增效剂(sulfonamide potentiators,SAP)是指含有5-取代苄基-2，4-二氨基嘧啶的一类化合物，包括三甲氧苄氨嘧啶、二甲氧苄胺嘧啶和二甲氧甲基苄胺嘧啶等，多与磺胺合用使细菌的叶酸代谢受到双重阻断，可以增加磺胺抗菌作用。

磺胺增效剂与磺胺联合使用于畜禽养殖业中治疗大肠杆菌引起的败血症、鸡白痢及球虫病等[4-6]。

但是近年研究表明,该类药物存在较为严重的副作用,过量使用会导致其在动物源性食品中残留，会致使其在人体中蓄积，导致人类对许多细菌产生抗药性，从而对人类的身体健康造成很大的危害[7~9]。

因此，很多国家对磺胺种类的使用和用量有严格的规定。

我国农业农村部规定动物源性食品中的SAs 总量及磺胺二甲基嘧啶等单个SAs 的含量不得超过0.1mg/kg ，磺胺增效剂限量不得超过0.05mg/kg [10]。

由于抗生素潜在的威胁，液相色谱-串联质谱同步检测饲料中26种磺胺和3种磺胺增效剂■宋占腾肖志明王石樊霞索德成*(中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所，北京100081)作者简介：宋占腾，硕士，研究方向为农产品质量与安全。

通讯作者：索德成，副研究员，硕士生导师。

收稿日期：2021-01-15基金项目：国家自然科学基金项目[31572443]；农业行业标准制定和修订（农产品质量安全）项目[2017-215]摘要：通过对提取、净化等前处理条件及LC-MS/MS 分析条件的优化，建立了多重机制杂质吸附结合液相色谱-串联质谱同步检测饲料中26种磺胺及3种常用磺胺增效剂的方法。

食品与药品Food and Drug2021年第23卷第1期17加速溶剂萃取-超高效液相色谱-串联质谱法测定大枣中3种五环三祜酸张萍，何婷，王颖，胡克特，顾丁，陈荣祥**(遵义医科大学基础医学院，贵州遵义563000)摘要：目的建立加速溶剂萃取-超高效液相色谱-串联质谱法(ASE-UPLC-MS/MS)同时测定大枣中桦木酸、齐墩果酸和熊果酸的方法。

方法样品釆用ASE提取，优化提取条件，并与超声辅助提取法进行比较。

优化 后的提取条件为：以80%甲醇为提取溶剂，提取温度100-C,静态萃取时间15min,萃取1次。

提取液釆用Waters ACQUITY BEH C18色谱柱分离，以乙ffi-15mmol/L乙酸钱(pH9.3)为流动相，梯度洗脱，经UPLC-MSZMS仪，釆用电喷雾电离源，负离子模式下多反应监测模式检测。

结果桦木酸、齐墩果酸、熊果酸在0.5~10 mg/L范围内，浓度与峰面积线性关系良好，相关系数大于0.9900。

不同浓度3种化合物的加标回收率93.6%〜101.7%,相对标准偏差在1.18%~6.83%之间。

结论此法简单快速、准确稳定、重复性好，可用于大枣中桦木酸、齐墩果酸、熊果酸的含量测定。

关键词：加速溶剂萃取；超高效液相色谱；串联质谱法；大枣中图分类号：R284.1文献标识码：A文章编号：1672-979X(2021)01-0017-06DOI：10.3969/j.issn.l672-979X.2021.01.004Simultaneous Determination of Three Pentacyclic Triterpenic Acids in Jujubae Fructus byAccelerated Solvent Extraction-UPLC-MS/MSZHANG Ping,HE Ting,WANG Ying,HU Ke-te,GU Ding,CHEN Rong-xiang(School of B asic Medical Sciences,Zunyi Medical University,Zu^yi563000,China)Abstract:Objective To establish a method for the simultaneous determination of betulinic acid,oleanolic acid and ursolic acid in Jujubae fructus by ultra-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry(UPLC-MS/MS)with accelerated solvent extraction(ASE).Methods The extract parameters of A SE were optimized and the efficiency was compared with the ultrasound-assisted extraction method.The optimum extraction conditions were as follows:80%methanol was selected as extraction solvent,oven temperature was100°C,the static extraction time was 15min and one extraction cycle was adopted.A waters ACQUITY BEH C18(2.1mmx]00mn,1.7“m)column was used as the stationary phase,acetonitrile and ammonium acetate solution(15mmol/L,pH9.3)was used as the mobile phase.Mass detection was conducted by electrospray ionization in negative ion multiple reaction monitoring mode. Results The calibration curves were linear over a concentration range of0.5-10mg/L for betulinic acid,oleanolic acid and ursolic acid.The correlation coefficients were greater than0.9900.The recoveries of different spiked levels were between93.6%and101.7%,with RSDs between1.18%and6.83%.Conclusion The method is simple,rapid,收稿日期：2020-09-04基金项目：国家自然科学基金(31660131,81760652)；贵州省联合基金(黔科合J字LKZ[2013]17号)；遵义医学院博士启动基金(F-568)作者简介：张萍，硕士研究生，研究方向：药用植物开发与利用E-mail:******************通讯作者：陈荣祥，教授，博士，研究方向：药用植物开发与利用E-mail:*************************18食品与药品Food and Drug2021年第23卷第1期accurate,stable and reproducible.It can be used for the determination of betulinic acid,oleanolic acid and ursolic acid in Jujubae f ructus.Key Words:accelerated solvent extraction;ultra-high performance liquid chromatography;tandem mass spectrometry; Jujubae f ructus.大枣为鼠李科植物枣树（Ziziphus jujuba Mill.）的干燥成熟果实，不仅作为食物，还是传统中医药中的常用药材。