骨髓CD34+干细胞种植人工血管应用于血管置换后内皮化和通畅率的研究

利用干细胞和基因技术的组织工程血管研究的开题报告标题：利用干细胞和基因技术的组织工程血管研究背景：心血管疾病是目前全球最具挑战性的公共卫生问题之一。

心脏支架和移植血管等目前的血管替代物具有某些缺陷，如血管狭窄和血栓形成等，因此需要寻找更好的血管技术。

干细胞和基因技术的兴起为组织工程血管的研究提供了新思路。

干细胞可以分化为内皮细胞和平滑肌细胞，而基因技术则可以调控这些分化过程，从而实现组织工程血管的构建。

目的：本研究旨在探索利用干细胞和基因技术构建组织工程血管的可行性和有效性。

方法：首先，采用体外细胞培养技术培养干细胞，并对其进行分化和扩增。

然后，利用基因工程技术，调控干细胞的分化过程，促进其向内皮细胞和平滑肌细胞的分化方向转化。

接下来，将分化后的细胞运用到生物材料上，构建组织工程血管。

最后，采用体内（小鼠实验）和体外（细胞培养实验）方式，研究组织工程血管构建的效果，并进行相关实验验证。

预期结果：该研究预计可以成功通过组织工程血管构建的方式获得新型的血管替代物。

同时，在小鼠实验和细胞培养实验过程中，可以观察到构建出的组织工程血管在内皮细胞和平滑肌细胞方面的分化效果、生物材料与细胞相结合的效果及其在体内的应用效果。

这项研究的意义在于为治疗心脏病等心血管疾病提供新思路，为组织工程领域的发展带来新的进展。

结论：本研究通过采用干细胞和基因技术结合的方式，成功构建了新型的组织工程血管，并通过小鼠实验和细胞培养实验验证了其可行性和有效性。

该研究为治疗心血管疾病提供了新的思路，为组织工程领域的发展带来新的进展。

体外诱导骨髓CD34+细胞生成血管内皮细胞的方法李清刚;张育;王质刚;徐秀红;张玉海;李哲先【期刊名称】《临床和实验医学杂志》【年(卷),期】2002(001)003【摘要】目的体外分离狗骨髓CD34+细胞,建立诱导分化血管内皮细胞的方法,并进行生物学鉴定.方法利用免疫磁珠法分离狗骨髓CD34+细胞,在体外经血管内皮细胞生长因子(VEGF)、内皮细胞生长因子(EGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)诱导后,观察细胞生长状况,以光镜、电镜进行形态学鉴定,应用免疫组化方法检测冯维靳布兰德因子(Von Willebrandfactor,vWF)表达.结果光镜下细胞单层融合生长,呈铺路石样形态,单个核位于中央,细胞群体倍增时间为35 h.电镜下可见到Weibel-Palade小体,在细胞胞浆vWF染色阳性.结论采用免疫磁珠法可从骨髓获得高纯度的CD34+细胞,在体外诱导分化成血管内皮细胞.【总页数】3页(P172-174)【作者】李清刚;张育;王质刚;徐秀红;张玉海;李哲先【作者单位】首都医科大学附属北京友谊医院肾内科,100050;首都医科大学附属北京友谊医院肾内科,100050;首都医科大学附属北京友谊医院肾内科,100050;首都医科大学附属北京友谊医院泌尿外科,100050;首都医科大学附属北京友谊医院泌尿外科,100050;首都医科大学附属北京友谊医院泌尿外科,100050【正文语种】中文【中图分类】Q813.1+1【相关文献】1.脐带血CD34+细胞体外诱导成为血管内皮细胞的观察 [J], 汪健;翟志敏;孙自敏;刘会兰;王保龙2.体内外诱导CD34+细胞生成血管内皮细胞的方法及其组织工程学运用 [J], 谭强;沙慧芳;江晓丰;史振余;顾伟勇;周允中3.体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞向血管内皮细胞的分化 [J], 贾立山;周云;张亚;张建;张婷;严向明4.血管内皮细胞生长因子联合碱性成纤维细胞生长因子体外诱导人骨髓间充质干细胞分化为血管内皮样细胞 [J], 刘德伍;李晓亮;张志安5.兔骨髓间充质干细胞体外诱导血管内皮细胞 [J], 常青;程燕;高静媛;梁芳倩;于晓龙因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

不同时间移植人脐血CD34＋细胞可影响心肌梗死大鼠心功能及血管内皮细胞生长因子的分泌邢云利;刘军华;李敏;王翠英【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2012(016)023【摘要】背景：干细胞移植可以改善心脏功能,改善预后.目的：观察不同时间经静脉移植人脐血CD34＋细胞对心肌梗死大鼠心功能及细胞因子分泌的影响.方法：结扎冠状动脉左前降支制备Wistar大鼠心肌梗死模型,于梗死后1,5,10,30 d经尾静脉注入0.5 mL人脐血CD34＋细胞（实验组）或磷酸盐缓冲溶液（对照组）.结果与结论：与对照组相比,梗死后5,10 d实验组大鼠左室射血分数明显升高（P 〈 0.05）,左室收缩末内径明显减小（P 〈 0.05）,左室后壁增厚率更高（P〈 0.05）,毛细血管密度明显增加（P 〈 0.05）,且以梗死后10 d移植大鼠心功能改善效果最明显（P 〈 0.05）.梗死后10 d实验组心肌局部血管内皮细胞生长因子最高（P 〈 0.05）.说明大鼠心肌梗死后5,10 d经静脉移植脐血CD34＋细胞可明显改善心功能,梗死后10 d移植血管内皮细胞生长因子分泌更多,血管生成更多,对心功能的改善更明显;同时说明脐血单个核细胞移植可能是通过增加血管内皮细胞生长因子分泌,提高毛细血管密度来改善心功能的.【总页数】6页(P4267-4272)【作者】邢云利;刘军华;李敏;王翠英【作者单位】【正文语种】中文【中图分类】R394.2【相关文献】1.不同时间经静脉移植人脐血单个核细胞对心肌梗死大鼠心功能及结构重构的影响[J], 邢云利;沈潞华;赵林;王雷;李敏;王翠瑛2.不同时期移植人脐血CD34+细胞对大鼠脊髓损伤修复的对比研究 [J], 唐亮;冯世庆;高瑞霄3.不同时间移植人脐血CD34+细胞可影响心肌梗死大鼠心功能及血管内皮细胞生长因子的分泌 [J], 邢云利;刘军华;李敏;王翠英4.人脐血CD34+细胞移植对局灶性脑缺血大鼠神经功能恢复的影响 [J], 刘海英;李建峰;李洪均;张庆俊;韩忠朝5.人脐血单个核细胞移植对急性心肌梗死大鼠心功能及左室重构的影响 [J], 王小庆;胡承恒;伍贵富;杨燕华;何小洪;杜志民;刘东红因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

CD34-造血干细胞的研究进展
姜晓华;李忠轶
【期刊名称】《现代医药卫生》
【年(卷),期】2004(020)004
【摘要】随着研究的深入 ,人们发现了多种骨髓,外周血或脐带血等的 CD34-的细胞群都有造血干细胞的特点,认识到 CD34-造血干细胞的存在 ,并且开始研究这类细胞生物学特性以及可能的临床和研究的治疗价值.
【总页数】2页(P248-249)
【作者】姜晓华;李忠轶
【作者单位】涪陵中心医院,重庆,涪陵,408000;涪陵中心医院,重庆,涪陵,408000【正文语种】中文
【中图分类】R446
【相关文献】
1.CD34-造血干细胞研究进展 [J], 王冬梅;裴雪涛
2.异基因造血干细胞移植后T细胞免疫重建与临床预后相关性研究进展 [J], 李娅;黄晓兵
3.骨髓造血干细胞移植后肾损伤研究进展 [J], 吕佳璇
4.脐血联合单倍型造血干细胞共移植治疗恶性血液病的研究进展 [J], 赵鸣悦
5.造血干细胞移植治疗恶性血液病的研究进展/造血干细胞移植治疗急性髓细胞白血病 [J], 赵春亭
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(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201810759461.5(22)申请日 2018.07.11(71)申请人 深圳华云生物技术有限公司地址 518000 广东省深圳市龙岗区坂田街道发达路云里智能园6栋2楼202(72)发明人 刘韬　李柱　周美龄　刘兵　(74)专利代理机构 深圳中一联合知识产权代理有限公司 44414代理人 张全文(51)Int.Cl.C12N 5/0789(2010.01)(54)发明名称一种CD34+造血干细胞的培养方法(57)摘要本发明提供了一种CD34+造血干细胞的培养方法，包括以下步骤：配置CD34+造血干细胞完全培养基，所述CD34+造血干细胞完全培养基包括细胞因子和化学分子，其中，所述细胞因子包括SCF、Flt -3L、TPO、IL -6、LDL，所述化学分子包括SR1和UM171；提供脐带血，从所述脐带血分离PBMC；采用所述CD34+造血干细胞完全培养基重悬所述PBMC，摇床培养；培养期间，每天添加新鲜的所述CD34+造血干细胞完全培养基，培养9-12天。

权利要求书2页 说明书6页 附图8页CN 110713979 A 2020.01.21C N 110713979A1.一种CD34+造血干细胞的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：配置CD34+造血干细胞完全培养基，所述CD34+造血干细胞完全培养基包括细胞因子和化学分子，其中，所述细胞因子包括SCF、Flt-3L、TPO、IL-6、LDL，所述化学分子包括SR1和UM171；提供脐带血，从所述脐带血分离PBMC；采用所述CD34+造血干细胞完全培养基重悬所述PBMC，摇床培养；培养期间，每天添加新鲜的所述CD34+造血干细胞完全培养基，培养9-12天。

2.如权利要求1所述的造血干细胞的培养方法，其特征在于，所述CD34+造血干细胞完全培养基中，各细胞因子和化学分子的终浓度为：SCF 50-500ng/ml，Flt-3L 50-500ng/ml，TPO 30-300ng/ml，IL-6 30-300ng/ml，LDL 5-50ug/ml，SR1 200-2000nM，UM171 20-200nM。

ＣＲＴＥＲＰｒｏｇｒｅｓｓｉｎｔｈｅｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｉｚａｔｉｏｎｏｆｖａｓｃｕｌａｒｐｒｏｓｔｈｅｓｅｓＡｂｓｔｒａｃｔＯＢＪＥＣＴＩＶＥ：Ｔｏｓｕｍｍａｒｉｚｅｔｈｅｃｕｒｒｅｎｔｐｒｏｇｒｅｓｓｉｎｔｈｅｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｉｚａｔｉｏｎｏｆｖａｓｃｕｌａｒｐｒｏｓｔｈｅｓｅｓ，ａｎｄｔｈｅａｄｖａｎｔａｇｅｓａｎｄｄｉｓａｄｖａｎｔａｇｅｓｏｆｖａｒｉｏｕｓｋｉｎｄｓｏｆｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｉｚａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｓ，ｓｏａｓｔｏｌｏｏｋａｈｅａｄｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｄｉｒｅｃｔｉｏｎｏｆｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｉｚａｔｉｏｎｏｆｖａｓｃｕｌａｒｐｒｏｓｔｈｅｓｅｓｉｎｆｕｔｕｒｅ．ＤＡＴＡＳＯＵＲＣＥＳ：Ａｃｏｍｐｕｔｅｒ－ｂａｓｅｄｏｎｌｉｎｅｓｅａｒｃｈｏｆＰｕｂＭｅｄｄａｔａｂａｓｅｗａｓｕｎｄｅｒｔａｋｅｎｔｏｉｄｅｎｔｉｆｙａｒｔｉｃｌｅｓａｂｏｕｔｔｈｅｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｉｚａｔｉｏｎｏｆｖａｓｃｕｌａｒｐｒｏｓｔｈｅｓｅｓｐｕｂｌｉｓｈｅｄｉｎＥｎｇｌｉｓｈｆｒｏｍＪａｎｕａｒｙ１９９５ｔｏＪｕｌｙ２００６ｗｉｔｈｔｈｅｋｅｙｗｏｒｄｓｏｆ＂Ｖａｓｃｕｌａｒｐｒｏｓｔｈｅｓｅｓ，Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓ，Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｉｚａｔｉｏｎ＂．Ｍｅａｎｗｈｉｌｅ，ｔｈｅｒｅｌｅｖａｎｔＣｈｉｎｅｓｅａｒｔｉｃｌｅｓｗｅｒｅｓｅａｒｃｈｅｄｆｒｏｍｔｈｅｄａｔａｂａｓｅｏｆＣｈｉｎｅｓｅＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃａｎｄＴｅｃｈｎｉｃａｌＰｅｒｉｏｄｉｃａｌｓ（ＶｉｐＩｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ）ｐｕｂｌｉｓｈｅｄｂｅｔｗｅｅｎＪａｎｕａｒｙ１９９５ａｎｄＪｕｌｙ２００６ｗｉｔｈｔｈｅｓａｍｅｋｅｙｗｏｒｄｓｉｎＣｈｉｎｅｓｅ．ＳＴＵＤＹＳＥＬＥＣＴＩＯＮ：Ｔｈｅｄａｔａｗｅｒｅｓｅｌｅｃｔｅｄｆｉｒｓｔｌｙ，ａｎｄｔｈｅｑｕｏｔａｔｉｏｎｓｏｆｅａｃｈａｒｔｉｃｌｅｗｅｒｅｌｏｏｋｅｄｏｖｅｒ．Ｉｎｃｌｕｓｉｖｅｃｒｉｔｅｒｉａ：Ａｒｔｉｃｌｅｓｒｅｌａｔｅｄｔｏｔｈｅｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓｏｒｔｈｅｐｒｏｇｒｅｓｓｉｎｒｅｓｅａｒｃｈｏｆｔｈｅｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｉｚａｔｉｏｎｏｆｖａｓｃｕｌａｒｐｒｏｓｔｈｅｓｅｓ．Ｅｘｃｌｕｓｉｖｅｃｒｉｔｅｒｉａ：ＲｅｐｅｔｉｔｉｖｅｒｅｓｅａｒｃｈｏｒＭｅｔａａｎａｌｙｓｉｓａｒｔｉｃｌｅｓ．ＤＡＴＡＥＸＴＲＡＣＴＩＯＮ：Ｔｏｔａｌｌｙ２７７ａｒｔｉｃｌｅｓｗｅｒｅｃｏｌｌｅｃｔｅｄｉｎｃｌｕｄｉｎｇ２４７ｆｏｒｅｉｇｎｌｉｔｅｒａｔｕｒｅｓａｎｄ３０Ｃｈｉｎｅｓｅｏｎｅｓ，ｏｆｗｈｉｃｈ３４ｗｅｒｅｉｎａｃｃｏｒｄａｎｃｅｗｉｔｈｔｈｅｉｎｃｌｕｓｉｖｅｃｒｉｔｅｒｉａ．２４３ｏｌｄｃｏｎｔｅｎｔｏｒｒｅｐｅｔｉｔｉｖｅｒｅｓｅａｒｃｈｅｓｗｅｒｅｅｘｃｌｕｄｅｄ．Ｏｆｔｈｅ３４ａｒｔｉｃｌｅｓ，ｔｈｅｒｅｗｅｒｅ４ａｒｔｉｃｌｅｓｏｎｔｈｅｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓ，ａｎｄ３０ａｂｏｕｔｔｈｅｐｒｏｇｒｅｓｓｏｆｔｈｅｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｉｚａｔｉｏｎｏｆｖａｓｃｕｌａｒｐｒｏｓｔｈｅｓｅｓ．ＤＡＴＡＳＹＮＴＨＥＳＩＳ：Ｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓｃｏｕｌｄｎｏｔｏｎｌｙｓｅｒｖｅａｓｔｈｅｂａｒｒｉｅｒｓｔｒｕｃｔｕｒｅｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｖａｓｃｕｌａｒｗａｌｌａｎｄｂｌｏｏｄ，ｂｕｔａｌｓｏｐｒｅｖｅｎｔｔｈｅｔｈｒｏｍｂｏｇｅｎｅｓｉｓｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌｙ，ｋｅｅｐｔｈｅｂａｌａｎｃｅｂｅｔｗｅｅｎｖａｓｏｃｏｎｓｔｒｉｃｔｉｏｎａｎｄｖａｓｏｄｉｌａｔａｔｉｏｎ，ａｎｄｂｌｏｏｄｃｌｏｔｔｉｎｇａｎｄａｎｔｉｃｏａｇｕｌａｔｅｄｂｌｏｏｄ．Ｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓｃｏｕｌｄｆｏｒｍａｓｙｓｔｅｍｏｆａｎｔｉｃｏａｇｕｌａｔｅｄａｎｄａｎｔｉｔｈｒｏｍｂｏｇｅｎｅｓｉｓｏｎｔｈｅｓｕｒｆａｃｅｏｆｌｕｍｅｎ，ｔｏｋｅｅｐｔｈｅｎｏｒｍａｌｂｌｏｏｄｆｌｏｗａｎｄｌｏｎｇ－ｔｅｒｍｐａｔｅｎｃｙｏｆｖａｓｃｕｌａｒｖｅｓｓｅｌ．Ｔｈｅｌｏｎｇ－ｔｅｒｍｐａｔｅｎｃｙｒａｔｅａｆｔｅｒｖａｓｃｕｌａｒｐｒｏｓｔｈｅｓｅｓｉｎｃｌｉｎｉｃｗａｓｌｏｗ，ｅｓｐｅｃｉａｌｌｙｉｎｍｉｄｄｌｅａｎｄｓｍａｌｌｃａｌｉｂｅｒａｒｔｅｒｙａｎｄｖｅｉｎｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．Ｍａｎｙｄｏｍｅｓｔｉｃａｎｄｆｏｒｅｉｇｎｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓｈａｖｅｂｅｅｎｃｏｎｆｉｒｍｅｄｔｈａｔｔｈｅｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｉｚａｔｉｏｎｏｆｖａｓｃｕｌａｒｐｒｏｓｔｈｅｓｅｓｃｏｕｌｄｒｅｄｕｃｅｔｈｅｔｈｒｏｍｂｏｇｅｎｅｓｉｓａｎｄｉｎｈｉｂｉｔｔｈｅｉｎｔｉｍａｌｈｙｐｅｒｐｌａｓｉａｔｏｉｍｐｒｏｖｅｔｈｅｌｏｎｇ－ｔｅｒｍｐａｔｅｎｃｙｒａｔｅｏｆｖａｓｃｕｌａｒｐｒｏｓｔｈｅｓｅｓ．Ａｔｐｒｅｓｅｎｔ，ｔｈｅｍｅｔｈｏｄｓｏｆｔｈｅｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｉｚａｔｉｏｎｏｆｖａｓｃｕｌａｒｐｒｏｓｔｈｅｓｅｓｗｅｒｅｖａｒｉｅｄｉｎｃｌｕｄｉｎｇｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｉｚａｔｉｏｎ，ａｕｔｏａｌｌｅｒｇｉｃｖｅｉｎｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓｓｉｎｇｌｅ－ｓｔａｇｅｓｅｅｄｉｎｇ，ｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｈｉｇｈ－ｄｅｎｓｉｔｙｓｅｅｄｉｎｇ，ｉｎｖｉｔｒｏｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓｔｗｏ－ｓｔａｇｅｓｅｅｄｉｎｇａｎｄｓｏｏｎ．Ｅｖｅｒｙｍｅｔｈｏｄｈａｓｔｈｅａｄｖａｎｔａｇｅｓａｎｄｄｉｓａｄｖａｎｔａｇｅｓ．ＣＯＮＣＬＵＳＩＯＮ：Ｔｈｏｕｇｈｔｈｅｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｉｚａｔｉｏｎｏｆｖａｓｃｕｌａｒｐｒｏｓｔｈｅｓｅｓｃｏｕｌｄｉｍｐｒｏｖｅｔｈｅｌｏｎｇ－ｔｅｒｍｐａｔｅｎｃｙｒａｔｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ，ｔｈｅｃｕｒｒｅｎｔｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｉｚｅｄｍｅｔｈｏｄｓｈａｖｅｓｏｍｅｄｉｓａｄｖａｎｔａｇｅｓ．Ｗｉｔｈｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｍｏｌｅｃｕｌａｒｂｉｏｌｏｇｙａｎｄｇｅｎｅｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ｔｈｅｏｕｔｌｏｏｋｏｆｔｈｅｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｉｚａｔｉｏｎｏｆｖａｓｃｕｌａｒｐｒｏｓｔｈｅｓｅｓｃｏｕｌｄｂｅｗｉｄｅｉｎｆｕｔｕｒｅ．ＨｕＢ，ＨｅＹＺ．Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｎｔｈｅｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｉｚａｔｉｏｎｏｆｖａｓｃｕｌａｒｐｒｏｓｔｈｅｓｅｓ．ＺｈｏｎｇｇｕｏＺｕｚｈｉＧｏｎｇｃｈｅｎｇＹａｎｊｉｕｙｕＬｉｎｃｈｕａｎｇＫａｎｇｆｕ２００７；１１（１０）：１９２３－１９２６（Ｃｈｉｎａ）［ｗｗｗ．ｚｇｌｃｋｆ．ｃｏｍ／ｚｇｌｃｋｆ／ｅｊｏｕｒｎａｌ／ｕｐｆｉｌｅｓ／０７－１０／１０ｋ－１９２３（ｐｓ）．ｐｄｆ］摘要目的：总结目前人工血管内皮化的研究进展及各种内皮化方法的优缺点，展望未来人工血管内皮化的发展方向。

tumstatin基因修饰的CD34+造血干细胞生成抗血管生成活性的血小板李娟;罗以勤;丁邦胜;贺学姣;周明;赵亮;姚丽娟【期刊名称】《安徽医科大学学报》【年(卷),期】2014(000)005【摘要】目的以慢病毒为基因载体,将tumstatin cDNA导入CD34+造血干细胞,在体外诱导生成tumstatin基因修饰的巨核细胞( MKs)和血小板,检测产生的血小板对血管内皮细胞管状结构形成的作用。

方法构建 pLVX-tumstatin-mCMV-ZsGreen重组载体后转染293T细胞进行病毒包装。

用密度梯度离心法结合免疫磁珠分离法富集脐血中CD34+造血干细胞。

用慢病毒感染CD34+造血干细胞,在细胞因子组合培养液中诱导MKs生成,流式细胞仪和形态学检测MKs的生成及产血小板情况。

应用RT-PCR法和Western blot法检测tumstatin基因的表达,通过人脐静脉血管内皮细胞管状结构形成抑制试验研究血小板内容物生物学活性。

结果选择最佳感染复数(MOI)30：1感染干细胞时效率最高；流式细胞术检测结果显示,细胞在诱导过程中,转染组与未转染组细胞都有MKs与血小板的生成,且生长速度和分化趋势基本相同。

在转染的MKs基因组里,RT-PCR法检测到738 bp tumstatin基因片段。

Western blot法检测到tumstatin在转基因细胞来源的血小板中稳定表达,血小板可明显抑制人脐静脉内皮细胞管状结构形成。

结论基因修饰的CD34+造血干细胞在体外成功诱导分化为MKs和血小板并表达tum-statin 蛋白,且这种血小板在体外显著抑制人脐静脉血管内皮细胞的管状结构形成。

%Objective CD34 + hematopoietic stem cells transfected with recombinant lentivirus vector carrying tum-statin cDNA were in vitroinduced to produce megakaryocytes ( MKs) and platelets. The inhibitory effect of the platelets on the growth of capillary tube structures of HUVEC were detected. Methods Constructed pLVX-tumsta-tin-mCMV-ZsGreen recombinant vector was transfected into 293T cells for virus packaging. Cord blood CD34 +hematopoietic stem cells enriched by immunomagnetic separation were transfected with recombinant lentivirus and induced to produce megakaryocytes in the culture medium combinations of cytokines. Flow cytometry and morpho-logical observation were used to detect the generation of megakaryocytes and platelets. RT-PCR and Western blot a-nalysis were applied to examine the expression of tumstatin. Capillary tube structures assay of HUVEC was used to evaluate the inhibitory effect of the platelets in vitro. Results CD34 + hematopoietic stem cells transfected with re-combinant lentivirus at the best multiplicity of infection ( MOI ) being 30 : 1 , ZsGreen positive rate of which was highest. The transfected and untransfected cells generated megakaryocyte and platelets, the growth rate and differ-entiation trend of which were substantially identical by flow cytometry analysis. RT-PCR detected a 738 bp tumsta-tin cDNA in transfected MKs. Western blot confirmed the expression of tumstatin protein in gene-modified megakaryocyte and platelets. Tumstatin gene-modified platelets inhibited the capillary tube structures of HUVEC. Conclusion Gene-modified CD34 + hematopoietic stem cells not only successfully differentiate into megakaryocyte and platelets but also express tumstatin protein, and this transgenic platelets significantly inhibit the capillary tube structures of HUVEC in vitro.【总页数】6页(P576-581)【作者】李娟;罗以勤;丁邦胜;贺学姣;周明;赵亮;姚丽娟【作者单位】安徽医科大学附属省立医院检验科，合肥230001;安徽医科大学附属省立医院检验科，合肥230001;安徽医科大学附属省立医院检验科，合肥230001;安徽医科大学附属省立医院检验科，合肥230001;安徽医科大学附属省立医院输血科，合肥230001;安徽医科大学附属省立医院检验科，合肥230001;安徽医科大学附属省立医院检验科，合肥230001【正文语种】中文【中图分类】R349.63;R331.2【相关文献】1.Tumstatin活性片段-T7肽抑制血管生成的实验研究 [J], 王付海;徐宗珍;李涛;刘锋;修鹏;李杰2.血小板反应素1抗血管生成活性片段(TSP-1-2)的纯化与活性初步检测 [J], 刘顺湖;王晓强3.赤(鱼工)软骨血管生成抑制因子的纯化及抗血管生成活性验证 [J], 罗红宇;余新威;钱晓4.造血干细胞移植治疗重型再生障碍性贫血:血小板生成素促血小板植入的有效性和安全性 [J], 郭智; 任骅; 吉勇; 陈丽萍; 陈丽娜; 刘玄勇; 郑珊珊; 刘晓东; 陈惠仁5.造血干细胞移植治疗重型再生障碍性贫血:血小板生成素促血小板植入的有效性和安全性 [J], 郭智; 任骅; 吉勇; 陈丽萍; 陈丽娜; 刘玄勇; 郑珊珊; 刘晓东; 陈惠仁因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

cd34造血干细胞标准
CD34是指CD34阳性细胞，一般大于5×10^6/kg才可以采集干细胞。

CD34+细胞是与造血干/祖细胞密切相关的阶段特异性抗原，是造血干/祖细胞分离纯化的标志，主要存在于幼稚的造血干细胞、部分骨髓基质细胞，以及少量的血管内皮细胞表面。

CD34+细胞群中，含有可以长期重建髓系和淋巴系的造血干细胞，以及大量造血祖细胞，已经是公认且理想的造血干细胞/祖细胞移植物，而且近年来更多的临床实践表明，CD34+细胞输注的剂量，与植入率、血象回升时间，甚至与GVHD（移植物抗宿主病）发生率和恶性病复发率密切相关。

以上内容仅供参考，建议在医生的指导下进行采集。

犬骨髓CD34+细胞种植人工血管置换后短期内皮化的实验研究(一)作者：于振海张曙光李光新王坤阮长乐【摘要】目的：探讨骨髓CD34+细胞种植于常用膨体聚四氟乙烯（expandedpolyterafluoroethylene，ePTFE）人工血管和涤纶人工血管后二者的内皮化程度。

方法：选杂种犬8条，依支架覆膜不同分为ePTFE组和涤纶组，每组实验犬2条，对照犬2条。

实验犬采自体骨髓，提取CD34+细胞种植覆膜支架，对照犬采用单纯自体血预凝覆膜支架。

将人工血管植入犬的下腔静脉和腹主动脉。

在术后第10、30天观察植入的人工血管通畅情况，采用免疫组织化学方法鉴定内膜细胞来源，在光镜和电镜下观察人工血管新生内膜表面内皮化情况。

结果：术后第10天实验组与对照组差异无统计学意义；术后第30天腔面新生内膜内皮细胞自人工血管吻合口向中间逐渐减少（P0.05）；而对照组内膜表面第10、30天均无内皮细胞覆盖。

结论：经纯化的CD34+细胞种植于ePTFE和涤纶人工血管,均获得理想的内皮化。

【关键词】人工血管·CD34·血管内膜【ABSTRACT】Objective:ToinvestigatetheendothelializationofartificialbloodvesselseededbyCD34+stemcells.Met hods:Eightcrossbreddogswererandomizedintotwogroups.ArtificialbloodvesselcoveredwithePTFEo rDacronwereimplantedintotheabdominalaortaartery（AAA）andinferiorvenacava （IVC）.Ineachgroup,twodogswereimplantedbyprosthesesseededbyCD34+stemcells,twodogswer eimplantedbyautogenousbloodonlyascontrol.Theprostheseswereexplantedattenorthirtydays.Ligh tandelectronmicroscopywereapplyedtoexamineendothelializationofprostheses.CD34factorstainw ereusedtoidentifyendothelialcells.Result:Confluentendothelialcellsappearedontheneointimaofse ededprostheses.Therewerenoendothelialcellsintheno-implatedprostheses.Conclusion:Rapidendot helializationcanbeachievedintheprosthesescoveredwithePTFEorDacronwhichareimplantedbyCD3 4+stemcells.TheeffectofDacron’sendodermisimplantedbyCD34+stemcellsisbetterthanePTFE’s.【KEYWORDS】Bloodvesselprosthesis·CD34·Tunicaintima人工血管作为一种非生物材料，其近远期通畅率是血管外科医师最关心的问题。

骨髓基质细胞对人造血CD_34^+细胞体外扩增及基因转导的
作用
吴瑞琼;杨治华;石远凯;董志伟
【期刊名称】《中国输血杂志》
【年(卷),期】1999(12)2
【摘要】目的：探讨造血基质细胞对人外周血干细胞体外培养扩增及基因转导的促进作用。

方法：应用基质细胞支持培养扩增体系进行人造血干细胞体外培养扩增及基因转导。

结果：骨髓基质细胞和造血生长因子共同支持组的造血ＣＤ＋３４细胞在体外培养３周后，其造血祖克隆形成能力较单纯造血生长因子支持组高３０．７％（Ｐ＜０．０５）。

在有基质细胞支持时，逆转录病毒载体上清转导人造血ＣＤ＋３４细胞后，其造血细胞克隆中Ｎｅｏ基因阳性克隆是无基质支持对照组的２倍。

结论：基质细胞的支持有维持造血干细胞原始造血活性及促进基因转导的双重好处。

【总页数】3页(P73-75)
【关键词】人造血干细胞;体外扩增;基质细胞;基因转导
【作者】吴瑞琼;杨治华;石远凯;董志伟
【作者单位】中国医学科学院中国协和医科大学肿瘤研究所
【正文语种】中文
【中图分类】R457
【相关文献】
1.转FL、GM-CSF基因的人骨髓基质细胞促进脐血CD34+细胞体外扩增 [J], 李杰;李薇;侯燕;马俐君
2.基质细胞支持的体外扩增造血细胞对致死剂量照射小鼠造血恢复的促进作用 [J], 孔佩艳;罗成基;郭朝华;周燕虹;施炎;邹仲敏
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骨髓间充质干细胞向内皮细胞的分化和临床应用
骨髓间充质干细胞(MSCs)具有广泛的应用前景，包括归纳性疾病。

特别是它们在血管内皮细胞(ECs)中的分化能力，可能会为血管内皮损伤和功能障碍提供修复策略。

最近，有研究表明MSCs的向EC的分化促进了血管再生，提高了内皮修复，改善了血管增厚和瘢痕形成。

实验室和临床研究表明，MSC特别适合用于血管修复的临床应用研究。

例如，外周血MSC 可以用于血管再生和口服给予细胞因子治疗，以改善周围血管循环系统，甚至某些心血管疾病。

此外，一系列临床试验表明，人口腔间充质干细胞(hBMSCs)可以分泌一系列抗衰老因子，在确定的时间内，可以促进血管再生和功能恢复，有利于修复和加强患者的血管功能，从而有效改善患者的血液循环状况。

骨髓CD34^+细胞移植促进梗死心肌血管形成的实验研究高文根;张仁福;王辉山;汪曾炜;马东初;朱洪玉【期刊名称】《中国临床康复》【年(卷),期】2004(8)15【摘要】目的:研究骨髓CD34+细胞移植对梗死心肌血管再生的作用。

方法:用免疫磁珠法从犬肋骨骨髓分离CD34+细胞并注射到CO2冷冻建立的慢性心肌梗死模型区,2,4,8周后取标本,应用免疫组化方法检测血管第八因子的表达,计数血管密度,分别于建立模型前、后4周和干细胞移植后8周应用99TCm-甲氧基异丁基异腈(99TCm-MIBI)单光子计算机断层扫描对心肌血流灌注进行评价,计算放射性分布缺损计数(F值)。

结果:骨髓CD34+细胞移植2,4,8周后梗死区血管密度(200倍视野下数)分别为(3.2±1.2),(8.2±0.8),(12.7±2.2)条/视野,明显高于对照组(t=5.09,14.07,8.67,P均<0.05)。

骨髓CD34+细胞移植前、后8周的心肌灌注显像F值分别为5.44±0.70,1.50±0.55,细胞移植后梗死区心肌血流灌注得到明显改善(t=10.84,P均<0.05)。

结论:骨髓CD34+细胞梗死心肌移植可明显促进梗死区血管形成,提高梗死区心肌的血流灌注。

【总页数】4页(P2839-2841)【关键词】骨髓CD34^+细胞移植;心肌梗死;血管形成;实验;血管再生【作者】高文根;张仁福;王辉山;汪曾炜;马东初;朱洪玉【作者单位】解放军第四军医大学西京医院心血管外科;解放军沈阳军区总医院心血管外科;解放军沈阳军区总医院医学实验科【正文语种】中文【中图分类】R542.22;R457.7【相关文献】1.靶向微泡造影剂促进兔心肌梗死骨髓干细胞移植后血管新生及心肌力学改变 [J], 曾倩倩;曹桂秋;穆玉明;唐琪;王春梅2.血管内皮生长因子基因修饰骨髓间充质干细胞移植心肌梗死大鼠：高压氧干预促进治疗性血管生成 [J], 高峰;张近宝;周凯;欧阳辉;唐柯;邬晓臣;何春阳;刘维永3.血管内皮生长因子基因修饰骨髓间充质干细胞移植心肌梗死大鼠:高压氧干预促进治疗性血管生成 [J], 高峰;张近宝;周凯;欧阳辉;唐柯;邬晓臣;何春阳;刘维永4.骨髓CD34+细胞移植促进梗死心肌血管形成的实验研究 [J], 高文根;张仁福;王辉山;汪曾炜;马东初;朱洪玉5.腺病毒介导人受体活性修饰蛋白-1修饰骨髓间充质干细胞移植对兔心肌梗死后心肌新生血管形成的影响 [J], 龙仙萍;赵然尊;石蓓;许官学;喻田因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

骨髓间充质干细胞作血管组织工程种子细胞的研究进展
刘丹丹;李玉林
【期刊名称】《国际生物医学工程杂志》
【年(卷),期】2005(028)003
【摘要】骨髓间充质干细胞易于分离培养,增殖能力强,体外培养多次传代后仍保持多向分化潜能其以自身多方面的特点已成为血管组织工程又一种可选择的种子细胞,对临床应用具有重要价值,但其进一步体外成血管的条件尚需深入研究.综述人骨髓间充质干细胞hMSCs体外培养、定向分化为内皮细胞的条件及相关研究进展.【总页数】4页(P154-157)
【作者】刘丹丹;李玉林
【作者单位】130021,长春,吉林大学白求恩医学院基础病理教研室;130021,长春,吉林大学白求恩医学院基础病理教研室
【正文语种】中文
【中图分类】Q813
【相关文献】
1.血管组织工程种子细胞研究现状 [J], 刘生和;范存义;曾炳芳
2.血管组织工程中内皮种子细胞的干细胞来源研究进展 [J], 兰志勇;熊猛
3.血管组织工程种子细胞的建立及意义 [J], 傅博;黄大伟;孙雪峰;谢院生;蔡广研;马强;陈香美
4.血管组织工程种子细胞在再生医学中的应用 [J], 李春民;汪忠镐
5.血管组织工程种子细胞原代培养技术的改良 [J], 唐新华;黄玲;夏宁;彭兆意;熊吉信
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人骨髓间充质干细胞体外向血管内皮细胞诱导分化的研究
的开题报告
一、选题背景及意义
干细胞具有自我复制和分化为多种细胞类型的潜能，因此被视为治疗各种疾病的潜在来源。

而骨髓中的间充质干细胞（MSCs）被认为是一种主要来源，因为它们相对易获取并且具有丰富的来源。

将MSCs向特定细胞类型分化的方法越来越被研究，其
中向内皮细胞的分化方法是一种有潜力的方法，因为内皮细胞在许多疾病（如心血管
疾病和炎症性疾病）的治疗中具有重要作用。

因此，这项研究的目的是研究MSCs向
内皮细胞的诱导分化方法，以拓宽治疗疾病的途径。

二、研究问题
本研究旨在回答以下问题：
1.间充质干细胞可否被诱导分化为内皮细胞?
2.在诱导过程中是否存在特定的生物因素或细胞因素对内皮细胞分化的促进作用?
3.经过诱导分化后，MSCs分化到内皮细胞的程度如何评估?
三、研究方法
本研究将使用骨髓MSCs和血管内皮细胞来进行体外实验。

MSCs将通过培养和
特定的生物因子和细胞因子处理来诱导分化为内皮细胞。

分化程度将通过多种实验方
法进行评估，比如免疫荧光染色和电镜检测。

通过比较不同处理组的结果，我们将确
定最佳的诱导方法。

四、预期结果
我们预计最终能够成功将MSCs分化为内皮细胞，并探索出特定的生物因素和细胞因素对内皮细胞分化的促进作用。

以及在MSCs分化到内皮细胞的程度方面找到量
化方法，并为进一步治疗疾病提供基础研究。

骨髓干细胞移植治疗下肢深静脉血栓的实验研究的开题报告一、研究背景和意义下肢深静脉血栓是常见的一种血管疾病，严重者可能危及生命。

尽管当前的治疗手段包括抗凝治疗、机械性栓塞除栓等方法，但其治疗效果仍不尽如人意，并且存在一些不利因素，如出血风险性增加，复发率高等问题。

近年来，骨髓干细胞移植（BMT）在治疗心血管疾病方面逐渐得到关注和应用。

因此，本研究旨在探究BMT治疗下肢深静脉血栓的疗效和安全性。

二、研究内容和方法本研究将采用动物模型，建立下肢深静脉血栓模型，将实验动物随机分为观察组和对照组，每组10只。

观察组将接受BMT治疗，对照组将接受传统治疗，包括抗凝剂和机械性栓塞除栓等方法。

治疗10周后评估两组的治疗效果，并对实验动物进行安全性评估。

治疗结束后，对实验动物进行如下检测：临床表现、肝肾功能、心肺功能、骨髓穿刺等，还将进行组织学、免疫学和分子生物学检测，以评估治疗的疗效和安全性。

三、预期研究结果通过本研究，预计可以证实BMT治疗下肢深静脉血栓的疗效和安全性，探寻其作用机制，为临床治疗提供新思路和方法。

同时，也将为骨髓干细胞在心血管疾病治疗中的应用开辟新的方向。

四、研究进度安排本研究的进度安排如下：2021年6月-7月：建立下肢深静脉血栓模型2021年8月-10月：实验动物随机分组，开始治疗2021年11月-2022年1月：治疗结束后进行评估2022年2月-3月：数据分析和结果总结五、参考文献1. Zhu, T., et al. (2019). Bone marrow stem cells contribute to ectopic adipocyte deposition in type 2 diabetes. Adipocyte 8(1), 14-23.2. Ding, Y. H., et al. (2015). Bone marrow mesenchymal stem cells regain functional integrity, but have altered cytokine expression profiles, after a 3-day suspension culture. Tissue Eng Part C Methods 21(6), 593-9.3. Ji, J., et al. (2014). Mesenchymal stem cells: sources, potency and isolation methods. Biomed Mater Eng 24(1 Suppl), 59-64.。

人工血管作为许多严重狭窄或闭塞性血管的替代品，在临床上有着重要的应用价值。

随着生物工程学和生物材料学的迅猛发展，目前，在外科手术中，人工血管主要用于暂时性或永久性的取代患者缺损的动脉或静脉，或作为动脉阻塞时的分流通道，以及肾病患者进行血液透析时所需的动静脉移植替代管。

用人工合成血管作为替代品，特别是大口径人工血管在组织修复、血管重建手术中已经得到了广泛的应用。

但内径<6mm的人工血管替代人体小动脉或静脉一直未获得满意的效果(血管口径<6mm。

6个月后通常率< 40%)。

其主要原因是由于血栓形成以及新生内膜增厚、血流阻力较大使人工血管阻塞。

因此，人工血管植入后防止其管径狭窄、小口径人工血管内皮化的研究已经成为人工血管研究的热点和难点。

1 小口径人工血管的材料选择1．1 ePTFE(expanded po1ytetraf1uorethy1ene)化学名称是聚四氟乙烯，是一种化学稳定性极佳的新型高分子材料，聚四氟乙烯人工血管由2层材料组成：内层材料呈纵向性，外层材料呈横向性，从而结合成为一种纵向、横向都具有极度牢固的血管壁结构。

其壁具有无数可控制的微孔结构，ePTFE的多微孔结构可以提高材料的顺应性。

植入后，人体组织可迅速贴敷到血管外壁上，成纤维细胞和结缔组织在管壁微孔中广泛长人，毛细血管在孔隙结构中存在，内壁形成完整而较薄的新内膜。

ePTFE具有较高的负电性，不易发生腔内凝血，且孔径较小，术前不需进行预凝。

与人体组织相容性好，膜薄，光滑，柔顺性强，易缝合，对人体无任何不良反应，可作为体内保持持久强度的血管代用品。

但是，ePTFE植覆内皮细胞有困难。

同时，有机溶剂(酒精、脂肪溶液、组织液等)可增加移植物的多孔性和过滤性，应避免与之接触，避免形成移植物周围血清肿。

1．2 聚氨酯(polyurethane，PU)聚氨酯是一种具有良好的理化性能、血液相容性和生物相容性的医用高分子材料。

PU具有良好的顺应性，韧性和弹性，耐磨、耐腐蚀，易加工，能采用通常的方法灭菌。

骨髓间充质干细胞诱导分化为血管内皮样细胞的实验研究
的开题报告
一、研究背景
随着生物技术的不断发展，骨髓间充质干细胞 (MSCs) 作为一种多功能的细胞，因其自我更新、迅速增殖、分化成多种细胞类型和缺乏免疫原性等特点，在组织工程、再生医学和临床治疗等领域受到了广泛的关注。

近年来，大量的研究显示，骨髓间充
质干细胞具有诱导分化成血管内皮样细胞 (ECs) 的潜力，可以用于血管再生和血管疾
病的治疗。

二、研究目的
本文旨在通过体外实验，验证骨髓间充质干细胞是否能够诱导分化成血管内皮样细胞，并探讨这些细胞在治疗血管疾病中的应用前景。

三、研究方法
1. 骨髓间充质干细胞的提取和培养：将来自小鼠骨髓的MSCs 提取出来，培养至四代后进行实验。

2. 血管内皮样细胞诱导分化：通过添加不同的生长因子和培养基，逐步将骨髓间充质干细胞转化为血管内皮样细胞，并进行相关的形态学和生物学检测。

3. 细胞培养条件的优化：根据实验结果，进一步优化培养条件以提高细胞的分化效率和稳定性。

4. 细胞生物学性质的研究：通过各种技术手段，如细胞增殖实验、核糖体RNA
分析、细胞免疫荧光染色等，研究血管内皮样细胞的生物学性质，如分化程度、生长
特性和分子表达等。

四、研究意义与预期结果
本文将为骨髓间充质干细胞诱导分化成血管内皮样细胞的应用前景提供新的研究思路和实验验证。

预计实验结果将通过形态学和生物学的方式揭示细胞分化的过程和
机制，提高细胞分化的效率和稳定性，并为治疗血管疾病提供新的治疗手段。