Gateway技术5
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Gateway克隆技术,简单易操作在过去数十年,用限制性内切酶产生黏性末端,在DNA连接酶的作用下,连接两个甚至更多片段的克隆方法,是载体构建的经典方案。
但是现如今我们再提到克隆的时候,远远不再只有传统的限制酶克隆一种选择。
其中Gateway克隆技术作为一种可以快速、高效将DNA 序列转移到载体上的克隆方法已经流行开来。
不要觉得Gateway克隆技术高深莫测,其实了解一下你就能懂。
Gateway克隆方法是λ噬菌体感染细菌时发生的整合和切割重组反应的体外形式。
在体内,噬菌体(attP)和细菌(attB)的附着位点发生重组反应,噬菌体整合到细菌基因组中,两侧为两个新的重组位点(attL-left-和attR-right-)。
在某些条件下,attL和attR位点可以重组,导致噬菌体从细菌染色体上切除并重新生成attP和attB位点。
即Gateway技术依赖于下面描述的两个反应:BP反应和LR反应,通过BP反应获得入门克隆(有时候我们也说中间克隆),再通过LR反应将目的DNA以正确的方向连接到各种目的载体上,形成不同的表达载体。
GeneCopoeia的EZShuttle™重组克隆体系应用E.coli 和λ噬菌体特异位点的重组酶促体系使DNA片段在载体间相互转换,其原理与Gateway 克隆技术相同。
BP反应-构建入门载体:通过PCR将attB位点添加到目的DAN序列两侧,形成attB-PCR产物。
用attB-PCR产物或者含attB位点的供体质粒和含attP位点的质粒发生重组生成入门克隆。
EZRecombinase BP混合物,货号:RCBM-1002-020LR反应-构建表达载体:制作表达载体时,选择适合的目标载体非常重要。
这种选择取决于许多因素,如宿主类型,所需的表达水平和实验目的。
选定的attR表达载体与attL-入门载体重组以产生表达载体。
EZRecombinase LR混合液,货号:RCBM-1001-020。
第一章概述1-17 收发两端之间的传输距离为1000km,信号在媒体上的传播速率为2×108m/s。
试计算以下两种情况的发送时延和传播时延:(1)数据长度为107bit,数据发送速率为100kb/s。
(2)数据长度为103bit,数据发送速率为1Gb/s。
从上面的计算中可以得到什么样的结论?解:(1)发送时延:ts=107/105=100s传播时延tp=106/(2×108)=0.005s(2)发送时延ts =103/109=1µs传播时延:tp=106/(2×108)=0.005s结论:若数据长度大而发送速率低,则在总的时延中,发送时延往往大于传播时延。
但若数据长度短而发送速率高,则传播时延就可能是总时延中的主要成分。
1-19 长度为100字节的应用层数据交给传输层传送,需加上20字节的TCP首部。
再交给网络层传送,需加上20字节的IP首部。
最后交给数据链路层的以太网传送,加上首部和尾部工18字节。
试求数据的传输效率。
数据的传输效率是指发送的应用层数据除以所发送的总数据(即应用数据加上各种首部和尾部的额外开销)。
若应用层数据长度为1000字节,数据的传输效率是多少?解:(1)100/(100+20+20+18)=63.3%(2)1000/(1000+20+20+18)=94.5%第二章物理层2-05 物理层的接口有哪几个方面的特性?个包含些什么内容?答:(1)机械特性明接口所用的接线器的形状和尺寸、引线数目和排列、固定和锁定装置等等(2)电气特性指明在接口电缆的各条线上出现的电压的范围。
(3)功能特性指明某条线上出现的某一电平的电压表示何意。
(4)规程特性说明对于不同功能的各种可能事件的出现顺序。
2-16 共有4个站进行码分多址通信。
4个站的码片序列为A:(-1-1-1+1+1-1+1+1)B:(-1-1+1-1+1+1+1-1)C:(-1+1-1+1+1+1-1-1)D:(-1+1-1-1-1-1+1-1)现收到这样的码片序列S:(-1+1-3+1-1-3+1+1)。
路由选择信息协议百科名片路由信息协议(RIP)是一种在网关与主机之间交换路由选择信息的标准。
RIP 是一种内部网关协议。
在国家性网络中如当前的因特网,拥有很多用于整个网络的路由选择协议。
作为形成网络的每一个自治系统,都有属于自己的路由选择技术,不同的AS 系统,路由选择技术也不同。
目录路由信息协议(RIP)光栅图像处理器RNA 免疫共沉淀展开编辑本段路由信息协议(RIP)简介(RIP/RIP2/RIPng:Routing Information Protocol)作为一种内部网关协议或IGP(内部网关协议),路由选择协议应用于AS 系统。
连接AS 系统有专门的协议,其中最早的这样的协议是“EGP”(外部网关协议),目前仍然应用于因特网,这样的协议通常被视为内部AS 路由选择协议。
RIP 主要设计来利用同类技术与大小适度的网络一起工作。
因此通过速度变化不大的接线连接,RIP 比较适用于简单的校园网和区域网,但并不适用于复杂网络的情况。
RIP 2 由RIP 而来,属于RIP 协议的补充协议,主要用于扩大RIP 2 信息装载的有用信息的数量,同时增加其安全性能。
RIP 2 是一种基于UDP 的协议。
在RIP2 下,每台主机通过路由选择进程发送和接受来自UDP 端口520的数据包。
RIP的特点(1)仅和相邻的路由器交换信息。
如果两个路由器之间的通信不经过另外一个路由器,那么这两个路由器是相邻的。
RIP协议规定,不相邻的路由器之间不交换信息。
(2)路由器交换的信息是当前本路由器所知道的全部信息。
即自己的路由表。
(3)按固定时间交换路由信息,如,每隔30秒,然后路由器根据收到的路由信息更新路由表。
适用RIP 和RIP 2 主要适用于IPv4 网络,而RIPng 主要适用于IPv6 网络。
本文主要阐述RIP 及RIP 2。
RIPng:路由选择信息协议下一代(应用于IPv6)(RIPng:RIP for IPv6)RIPng与RIP 1和RIP 2 两个版本不兼容。
文中如未特别指出,PCR程序均为:95℃预变性5',95℃变性30",60℃退火30", 72℃延伸1'30" (短片段30"), 30个循环后延伸10min。
1%琼脂糖凝胶电泳检测PCR 产物。
1.1.1载体构建及鉴定1.PCR产物的纯化参见安比奥生物科技公司的Puprep PCR Purification Kit 说明书。
2. 载体构建(Gateway技术)pDONR201是一种attP供体载体,用于BP反应构建入门载体,包含抗kan和抗cm筛选标记,并且含有ccdB基因,ccdB基因编码干扰大肠杆菌DNA促旋酶的一种蛋白,从而抑制标准大肠杆菌宿主的生长。
当目的载体和入门克隆发生重组时,ccdB基因被目的基因取代。
携带有ccdB基因的未反应载体或保留有ccdB基因副产品的细胞将不会生长。
GatewayN-GFP一种attR目的载体通过LR反应构建目的基因的表达载体(图3.3),含有35S组成型强启动子、抗氨苄青霉素基因和抗除草剂筛选标记基因Bar,还含有绿色荧光蛋白报告基因GFP。
表达载体Gatewaypleela(图2.2)含有35S组成型强启动子、抗氨苄青霉素基因和抗除草剂筛选标记基因Bar,通过LR反应构建目的基因的表达载体。
图2.2 pDONR201的结构BP反应体系(att B x att P → att L x att R )att B-PCR产物40-100 fmol,25-50ngpDONR™75ng5x BP Clonase™- buffer 1 μlTE Buffer (pH 8.0) or H2O to 4.5μlBP Clonase™0 .5μlTotal 5μl反应体系放于25°C下温育2h。
反应后,加2 μl 2 μg/μl的Proteinase K在37°C下处理10 min,再将BP产物(入门载体)加2μl转入大肠杆菌DH5α,在含kan的LB 板上筛选,克隆并保存入门载体。
gateway 转发feign 原理一、什么是网关和feign1. 网关(Gateway)网关是指在微服务架构中,提供对外访问和请求转发的入口节点。
它可以负责请求路由、负载均衡、请求过滤等功能,是微服务架构中不可或缺的重要组件。
2. FeignFeign是一个声明式的Web服务客户端,它使得编写Web服务客户端变得更加简单。
只需定义一个接口并为它添加注解,Feign会根据这些注解自动生成实现类。
二、gateway 转发 feign 的作用在微服务架构中,通常会将业务拆分为多个独立的服务。
这种拆分带来了很多优势,如独立部署、独立扩展、独立开发等。
但是也带来了一个问题,就是服务间的调用变得复杂。
需要解决服务间调用的问题,主要包括请求路由、负载均衡和服务熔断等。
gateway 能够作为一个统一的入口来处理所有的请求,并将请求按照路由规则转发到相应的服务上。
而 feign 则可以作为一个轻量级的HTTP客户端来访问其他的微服务。
所以,gateway 转发 feign 的作用就是将所有的请求通过 gateway 进行统一的路由转发,并使用 feign 来访问相应的服务。
三、gateway 转发 feign 的原理1. gateway 路由转发原理gateway 的路由转发功能是通过配置路由规则来完成的。
在 gateway 的配置中,可以指定路由规则的匹配路径、目标服务、负载均衡策略等信息。
当有请求进来时,gateway 会根据路由规则进行匹配,找到匹配的路由信息。
然后将请求通过网关转发到目标服务。
在转发过程中,可以进行请求的过滤、修改、重试等操作。
2. feign 的调用原理Feign的调用原理是通过动态代理的方式实现的。
当定义一个Feign的客户端接口时,Feign会根据接口的注解生成一个代理对象。
对该代理对象的方法调用会被转发到一个实际的HTTP客户端上。
在 feign 的调用过程中,可以通过 feign 的注解来指定请求的URL、请求方法、请求参数等信息。
SpringCloudGateway拦截器遇到的小坑汇总Spring Cloud Gateway是一个基于Spring Framework 5,Spring Boot 2和Project Reactor构建的API网关。
它可以实现请求路由、限流、熔断等功能,是构建微服务架构的重要组件之一、在使用Spring Cloud Gateway进行开发时,可能会遇到一些坑,下面将列举一些方便开发者了解和解决。
1.配置顺序问题在使用Spring Cloud Gateway配置路由时,需要注意配置顺序的问题。
如果两个路由规则的匹配条件相似,而且顺序错乱,可能会导致路由规则无法正确匹配。
因此,需要将具体的路由规则放在前面,而将通用的路由规则放在后面,以免匹配错误。
2.路由配置端口问题3.添加全局过滤器在使用Spring Cloud Gateway进行开发时,可以通过添加全局过滤器来实现一些通用的功能。
例如,可以添加一个全局日志过滤器来记录请求日志。
可以通过实现GatewayFilterFactory接口来创建自定义的全局过滤器。
4.转发请求头问题在进行请求转发时,如果需要将原始请求的一些请求头传递到目标URL,可以通过添加以下配置来实现:spring.cloud.gateway.forward-headers-strategy=native5.缓存问题当使用Gateway进行请求转发时,如果目标URL的响应结果有缓存,需要注意在缓存配置中添加适当的Cache-Control或ETag响应头,避免返回缓存结果。
6.限流问题在进行请求限流时,可以使用Spring Cloud Gateway的限流过滤器来实现。
可以通过添加以下配置来启用限流:spring.cloud.gateway.filter.headers.enabled=truespring.cloud.gateway.filter.headers.header-name=x-countspring.cloud.gateway.filter.headers.quota=107.自定义路由规则问题如果希望使用复杂的逻辑来配置路由规则,可以使用自定义的Predicate实现来实现。
gateway 对get请求参数特殊字符处理当涉及到网关(Gateway)对GET请求参数中特殊字符的处理时,通常需要考虑到几个方面:1. URL编码:在HTTP协议中,特殊字符(如空格、&、%、<>等)需要进行URL编码。
网关需要正确地解码这些参数,以避免解析错误或安全漏洞。
2. 参数传递方式:GET请求的参数通常附加在URL的末尾,以“?”或“&”分隔。
网关需要能够正确解析这些参数,并将其传递给后端服务。
3. 防止跨站脚本攻击(XSS):当用户输入包含特殊字符的参数时,如果不进行适当的过滤和转义,可能会引起XSS攻击。
网关需要对这些参数进行适当的过滤和转义,以防止潜在的安全风险。
4. 字符集和编码:确保网关能够正确处理不同字符集和编码的请求参数。
这包括对国际化和多语言字符的支持。
为了确保网关正确处理GET请求参数中的特殊字符,可以考虑以下几点:1. 使用现有的安全框架或库:许多现代编程语言和框架提供了用于处理HTTP请求和参数的安全库。
这些库通常具有内置的URL解码、过滤和转义功能,可以简化特殊字符的处理。
2. 实施输入验证和过滤:对用户输入的参数进行验证和过滤是一种常见的安全实践。
验证可以确保输入符合预期的格式和要求,而过滤可以防止潜在的安全漏洞。
3. 使用内容安全策略(CSP):CSP是一种安全机制,通过限制浏览器加载的内容来减少跨站脚本攻击(XSS)的风险。
通过设置适当的CSP头,可以限制哪些内容被允许加载和执行。
4. 更新和维护:随着新的安全漏洞和攻击的出现,网关的处理机制可能需要不断更新和维护。
保持对相关技术和最佳实践的了解,并及时应用安全补丁和更新是非常重要的。
总之,正确处理GET请求参数中的特殊字符对于确保网关的安全性和可靠性非常重要。
通过采用适当的技术和实践,可以有效地防止潜在的安全风险并保护用户数据的安全性。
gateway的discovery用法介绍在计算机网络中,网关(gateway)是连接两个或多个网络的节点。
它可以连接一个局域网(LAN)和互联网,也可以连接不同的局域网。
网关的一个重要功能是转发数据包,使得不同网络之间可以进行通信。
在网络架构中,网关起到了桥梁的作用,路由所有的数据流过它,进行数据的控制和转发。
在当今互联网时代,服务的快速发展和规模的不断扩大,给网关的管理和控制带来了一定的挑战。
为了使网关可以自动发现并管理所有的设备和服务,提供可靠的路由选择和负载均衡的功能,网关的discovery机制变得至关重要。
网关的discovery用法是指通过一种自动化的方式,让网关能够发现网络中的各种设备和服务,并对其进行管理和监控。
在本文中,我们将详细介绍gateway的discovery用法,包括其原理、常用的discovery协议和工具,以及如何在实际应用中使用。
原理网关的discovery机制的原理主要包括以下几个方面: 1. 局域网广播:局域网广播是一种向局域网中的所有设备发送广播消息的机制。
通过发送广播消息,网关可以获取到局域网中的所有设备的IP地址和MAC地址等信息。
2. 多播组:多播组是一种允许多个设备共享同一个多播地址的机制。
网关可以通过加入同一个多播组,获取到多播组中的其他设备的信息。
3. 超时机制:为了保证网关能够在合理的时间内发现网络中的设备和服务,一般会设置一个超时机制。
当网关发出发现消息后,如果一定时间内没有收到响应消息,就会认为该设备或服务不可用。
常用的discovery协议在网关的discovery过程中,常用的discovery协议有如下几种:1. Simple Service Discovery Protocol (SSDP)SSDP是一种基于HTTP的协议,主要用于设备的发现和服务的注册。
通过使用SSDP 协议,网关可以发现局域网中的所有支持SSDP协议的设备,并获取到其提供的服务和功能。
gateway predicates转发规则【实用版】目录1.概览2.gateway predicates 的定义与作用3.gateway predicates 的转发规则4.示例与实践5.总结正文1.概览在计算机网络中,gateway predicates 是一种重要的技术手段,用于实现网络数据包的高效转发。
gateway predicates 可以理解为网关预测,即在数据包到达网关时,网关根据一定的规则对数据包进行预测,从而实现快速转发。
2.gateway predicates 的定义与作用gateway predicates 是一种逻辑表达式,通常用于描述数据包的转发条件。
通过组合不同的逻辑运算符(如与、或、非等),可以构建出复杂的逻辑表达式。
当数据包满足这些条件时,网关会根据逻辑表达式的结果,对数据包进行相应的处理,例如转发、丢弃等。
gateway predicates 的作用主要体现在以下两个方面:(1)提高数据包转发速度:通过预先设定的逻辑表达式,网关可以在接收到数据包后迅速判断其转发条件,从而实现快速转发。
(2)灵活控制流量:gateway predicates 可以根据实际需求设定不同的转发规则,从而实现对网络流量的灵活控制。
3.gateway predicates 的转发规则gateway predicates 的转发规则主要基于逻辑表达式的真假值。
以下是一些常见的逻辑表达式及转发规则:(1)逻辑与(AND):当逻辑表达式的所有条件都满足时,结果为真,数据包会被转发;否则,结果为假,数据包不会被转发。
(2)逻辑或(OR):当逻辑表达式的任意一个条件满足时,结果为真,数据包会被转发;只有当所有条件都不满足时,结果才为假,数据包不会被转发。
(3)逻辑非(NOT):当逻辑表达式的结果为真时,执行非操作后的结果为假,数据包不会被转发;当逻辑表达式的结果为假时,执行非操作后的结果为真,数据包会被转发。
way后缀的单词5个
gateway n.门口,入口;关口;
halfway adv. 半途;不彻底地;
hallway n. 走廊;
hatchway n. 舱口,地板,天花板之出入口;
headway n. 前进,航行速度,进展
扩展资料
A good education is the gateway to success.
良好的教育是通往成功之路。
The narrow gateway left me little margin for error as I reversed the car.
门口狭窄,弄得我倒车时几乎不能出任何差错。
He walked across the park and through a gateway.
他穿过公园,走过一道大门。
The prestigious title offered a gateway to success in the highly competitive world of modelling.
在竞争异常激烈的模特界,这一享有盛誉的`头衔打开了通往成功的大门。
Lyons is the gateway to the Alps for motorists driving out from Britain.
里昂是从英国驱车前往阿尔卑斯山的门户。
“GateWay之断言Predicate”知识点评估题
学习知识点后请完成以下练习题
1)下列哪些属于常用的Route Predicate( )。
(多选)
A.Path Route Predicate
B.After Route Predicate
C.Between Route Predicate
D.Host Route Predicate
2)Spring Cloud Gateway包括许多内置的Route Predicate工厂。
所有这些Predicate 都与HTTP请求的不同属性匹配。
多个RoutePredicate工厂可以进行组合( )。
(判断)
A.正确
B.错误
3)Gateway包含许多内置的Route Predicate Factories所有这些谓词都匹配HTTP请求的同一属性。
多种谓词工厂可以组合,并通过逻辑or( )。
(判断)
A.正确
B.错误
4)Spring Cloud Gateway创建Route对象时,使用RoutePredicateFactory 创建Predicate对象,Predicate对象可以赋值给Route( )。
(判断)
A.正确
B.错误
5)Predicate(断言)参考的是java8的java.util.function.Predicate开发人员可以匹配HTTP请求中的所有内容(例如请求头或请求参数),如果请求与断言相匹配则进行路由( )。
(判断)
A.正确
B.错误
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A:BP反应连接
1. 在1.5 μl的微型离心管中进行
attB-PCR production 2.5 μl
DONOR vector 0.5 μl
TE (pH=8) 1 μl
2取BP酶Mix在冰上解冻2分钟,涡旋混匀两次,每次2 s
3加入1μl BP酶Mix,短暂涡旋两次,离心混匀
4BP酶Mix立即保存在-20℃
5BP反应体系25℃孵育一小时
6加0.5μl蛋白酶终止酶促反应,涡旋,37℃孵育10 min
B:转化
1. BP反应中0.5 μl反应液加入到装有25μl感受态cell中,离心管冰浴30分钟
2. 42℃热激30 s,加250 μlLB培养基(pDONR.221只具有kana+基因),150 rpm,37℃孵育一小时。
3取100 μl的转化液涂布于具有kana+的LB培养基上,过夜培养
C:M13验证(共载体具有这个序列),不详细,用taq酶做PCR
D:Entry Clone质粒提取,用于LR反应。
LR反应
A连接
B转化
A:LR反应,连接过程
1.在1.5 ml的微型离心机中室温混合
BP提取质粒 2.5 μl
pSGate0.5 μl
TE buffer (pH=8)1μl 2取LR酶Mix在冰上解冻2 min,涡旋混匀两次,每次2 s
3加入1μl LR酶Mix,短暂涡旋两次,离心混匀
4LR酶Mix立即保存在-20℃
5LR反应体系25℃孵育一小时
6加0.5μl蛋白酶终止酶促反应,涡旋,37摄氏度37℃孵育10 min
B:转化
1.LR反应中0.5 μl反应液加入到装有25μl感受态cell中,离心管冰浴30 min
2. 42℃热激30 s,加250 μ l具有LB培养基,150 rpm,37℃孵育一小时。
3取100 μl的转化液涂布于具有Amp(100 μg/ml)的LB培养基上,过夜培养
C酶切验证:
1 单酶单DNA样品消化
X μl质粒DNA
2 μl10酶切buffer
18-x 无菌水
2加入限制性内切酶1-5U(根据质粒DNA计算,xbaI找到了,xhoI没找到)。
室温温育1h
3加入5μl电泳加样缓冲液,终止酶反应,电泳。