【儿科PPT课件】流式细胞术在微小残留(MRD)检测中的应用

儿童急性淋巴细胞白血病微小残留病的流式细胞术检测分析目的探讨流式细胞术检测微小残留病（MRD）在儿童急性淋巴细胞白血病（ALL）治疗中的临床价值。

方法用多种四色荧光抗体组合检测50例正常儿童骨髓，据此建立双参数点图分析模型，500例ALL初发患儿行流式细胞分析，选出异于正常骨髓细胞免疫表型组合来检测MRD，根据确定好的免疫表型组合对105例患儿诱导治疗结束及后续治疗中的骨髓标本行MRD监测，同步行细胞形态学检测和PCR检测。

结果流式细胞术检出462例有效MRD免疫表型组合，PCR检出142例判断MRD的融合基因或IgH/T淋巴细胞受体基因重排；细胞形态学对诱导治疗后的患儿的MRD阳性检出率为66.67%，流式细胞术的MRD阳性检出率为91.43%。

结论流式细胞术能对ALL患儿治疗期间的MRD 作出准确评估，具有较好的覆盖面和敏感性，值得临床应用。

标签：急性淋巴细胞白血病；微小残留病；流式细胞术急性淋巴细胞白血病（acute lymphoblastic leuke- mia，ALL）严重影响患儿健康发育，3～4岁是其高发年龄，发热、贫血、肝脾肿大等是其早期症状。

临床报道指出个体化治疗对ALL患者尤为重要[1]，治疗强度应当同其复发风险相适应。

微小残留病（minimal residual disease，MRD）是经过诱导化疗或骨髓移植治疗后体内仍残留的白血病细胞形态，它是诱发白血病复发的根源，逐渐被纳入指导个体化治疗的关键性指标[2]。

目前聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）和流式细胞术是MRD两种检查方法，本研究探讨分析流式细胞术检测MRD在儿童ALL治疗中的临床价值，现报道如下。

1 资料与方法1.1 一般资料随机选取2009年1月～2012年12月于本院接受诱导缓解治疗的500例ALL 患儿，男性296例，女性204例，年龄1～8岁，平均（4.2±1.2）岁，上述病例经细胞形态学、免疫学、遗传学和分子生物学等方法确诊，B淋巴细胞白血病465例，T淋巴细胞白血病35例。

MRD检测方法1. 简介MRD（Minimal Residual Disease，最小残余疾病）是指在治疗过程中仍存在的极低水平的癌细胞或其他病理细胞。

MRD检测是一种用于评估治疗效果和预测复发风险的重要方法。

本文将介绍常见的MRD检测方法及其原理、优缺点以及应用领域。

2. 流式细胞术（Flow Cytometry）原理流式细胞术是一种通过对单个细胞进行标记并通过流式细胞仪进行分析的方法。

在MRD检测中，可以使用免疫荧光染色技术标记特定的抗原，然后通过流式细胞仪对标记的细胞进行计数和分析。

优点•可以实现高通量分析，快速获得结果。

•可以同时检测多个抗原。

•可以精确计算MRD水平。

缺点•对样本质量要求高，需要高质量的单个细胞悬液。

•对操作人员技术要求高，需要专业培训和经验。

•需要昂贵的设备和试剂。

应用领域•白血病等血液系统肿瘤的MRD监测。

•免疫治疗后的效果评估。

3. 定量PCR（Quantitative Polymerase Chain Reaction）原理定量PCR是一种通过扩增目标DNA序列并使用荧光探针实时监测扩增过程的方法。

在MRD检测中，可以设计特异性引物和探针来扩增和检测与肿瘤相关的基因或染色体异常。

优点•可以实现高灵敏度的定量分析。

•可以在不同样本之间进行比较。

•技术成熟，广泛应用。

•需要设计特异性引物和探针，对操作人员技术要求较高。

•对样本质量要求高，需要高质量的DNA。

应用领域•白血病、淋巴瘤等血液系统肿瘤的MRD监测。

•固体肿瘤中某些特定基因突变的监测。

4. 高通量测序（Next-generation Sequencing）原理高通量测序是一种通过对DNA或RNA进行大规模并行测序的方法。

在MRD检测中，可以使用特定的引物扩增目标基因区域，然后通过高通量测序仪进行测序，最后通过比对和分析数据来计算MRD水平。

优点•可以同时检测多个基因或区域。

•可以发现新的基因突变或异常。

•可以提供更全面的信息。