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LPS诱导下THP-1细胞基因表达内参基因的筛选

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作者简介 ： 刘明刚 ， 男， 现 为 山西 医科 大 学 硕 士 研 究 生 （ 邮编 ： ０ ３ ０ ０ ０ １ ） ； 朱
王磊． 星形 胶质 细胞在 神经 系统疾 病 中的作用 ［ Ｊ ］ ． 生 物 技 术 通
报， ２ Ｏ １ ｏ （ ６ ） ： ３ ３ —３ ６ ．
Ｖｅ ｓ ｓ ａ ｌ Ｍ ， Ｄｕ ｇ ａ ｎ ｉ ＣＢ， Ｓｏ ｌ ｏ ｍｏ ｎ ＤＡ， ｅ ｔ ａ ｇ ． Ｍｉ ｇ ｈ ｔ ａ ｓ ｔ ｒ ｏ ｃ ｙ ｔ ｅ ｓ ｐ ｌ ａ ｙ ａ
Ｃａ ｒ ｄ ｉ ｏ ｖ ａ ｓ ｃ Ｐｓ ｙ ｃ ｈ ｉ ａ ｔ ｒ ｙ Ｎｅ ｕ ｒ ｏ ｌ ， ２ ０ １ １， ２ Ｏ １ １： ４ ６ １ ２ ６３ ．
ｆ ｏ ｒ ｔ ｈ ｅ ｐ ｒ ｅ ｖ ｅ ｎ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｅ ｐ ｉ ｌ ｅ ｐ ｓ ｙ ［ Ｊ ］ ． Ｅ ｐ ｉ ｌ ｅ ｐ ｓ ｙ Ｒｅ ｓ ， ２ ０ ０ ９ ， ８ ５ （ ２ —３ ） ：
ａ ｃ ｔ ｉ ｖ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｆ ｏ ｌ ｌ ｏ ｗ ｉ ｎ ｇ ｐ ｉ ｌ ｏ ｃ ａ ｒ ｐ ｉ ｎ ｅ —ｉ ｎ ｄ ｕ ｃ ｅ ｄ ｓ ｅ ｉ ｚ ｕ ｒ ｅ ｓ ｉ ｎ ｒ ａ ｔ ｓ ［ Ｊ ］ ． Ｅ ｐ ｉ
ｌ ｅ ｐ ｓ ｉ ａ， ２ ０ ０ ８， ４ ９ （ Ｓ ｕｐ ｐ ｌ ２ ）： ３ ３—４ １ ．
权、 孙美珍 ， 工 作 于 山西 医科 大 学 第 一 临 床 医 学 院 ； 孙洋、 李伟 ， 为 山西 医
科大学硕士研究生。 （ 收稿 日期 ： ２ Ｏ ｌ ３—０ ６ —０ １ ） （ 本 文 编辑 郭 怀 印 ）
ｒ ｏ ｌ ｅ ｉ ｎ ｍａ ｉ ｎ ｔ ａ ｉ ｎ ｉ ｎ ｇ ｔ ｈ ｅ ｓ ｅ ｉ ｚ ｕ ｒ ｅ— ｐ ｒ ｏ ｎ ｅ ｓ ｔ ａ ｔ ｅ ？ＥБайду номын сангаас Ｊ ］ ． Ｂ ｒ ａ ｉ ｎ Ｒｅ ｓ ，
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ｈ ａ ｂｉ ｌ ， １ ９ ９ ７， ７ ８ （ ８ ）： ８ ３ ５—８ ４ ０ ．
口 口 中西 医结口 合心脑血管病 杂志 ２ ０ １ ３年 １ Ｏ 月第 ｌ １ 卷第 １ Ｏ期
叩
Ｆｒ ｉ ｅ ｄ ｍａ ｎ Ａ ，Ｋａ ｕ ｆ ｅ ｒ Ｄ ，Ｈｅ ｉ ｎ ｅ ｍａ ｎ ｎ Ｕ．Ｂｌ ｏ ｏ ｄ— ｂ ｒ ａ ｉ ｎ ｂ ａ ｒ ｒ ｉ ｅ ｒ ｂ ｒ ｅ ａ ｋ ｄ ｏ ｗｎ — ｉ ｎ ｄ ｕ ｃ ｉ ｎ ｇ ａ ｓ ｔ ｒ ｏ ｃ ｙ ｔ ｉ ｃ ｔ ｒ ａ ｎ ｓ ｆ ｏ ｒ ｍａ ｔ ｉ ｏ ｎ：Ｎｏ ｖ ｅ ｌ ｔ ａ ｒ ｇ ｅ ｔ ｓ
２ ０ ０ ５． １ ０ ４ ４（ ２） １ ９ Ｏ一 １ ９ ６ ．
Ｌ Ｐ Ｓ诱 导 下 ＴＨＰ一１细 胞基 因表 达 内参 基 因的 筛 选
梁 俊红 ， 曹 锡悔 ， 万东 方 ， 张
关键 词 ： 实时定量 Ｐ Ｃ Ｒ； 内参 基 因 ； 脂 多糖 ； 人 单核 白血 病 细 胞
中图分 类号 ： Ｒ ５ ４ １ ． ４ Ｒ ２ ５ ６ ． ２ 文献 标识 码 ： Ａ ｄ ｏ ｉ ： ｌ Ｏ ． ３ ９ ６ ９ ／ ｊ ． ｉ ｓ ｓ ｒ Ｌ １ ６ ７ ２ —１ ３ ４ ９ ． ２ ０ １ ３ ． １ ０ ． ０ ４ ８ 文章编号 ： １ ６ ７ ２ —１ ３ ４ ９ （ ２ ０ １ ３ ） １ ０ —１ ２ ４ ７ — ０ ３
１ ４２— １ ４ ９ ．
ｒ ２ ２ ］ Ｈａ ｌ ｔ ｉ ｎ ｅ ｒ ＡＭ， Ｔｅ ｍｋ ｉ ｎ ＮＲ ， Ｄｉ ｋ ｍｅ ｎ Ｓ Ｓ． Ｒｉ ｓ ｋ ｏ ｆ ｓ ｅ ｉ ｚ ｕ ｒ ｅ ｒ ｅ ｃ ｕ ｒ ｒ ｅ ｎ ｃ ｅ
Ｓｈ ａ ｐ ｉ ｒ ｏ ＬＡ ， Ｗ ａ ｎ ｇ Ｌ， Ｒｉ ｂａ ｋ ＣＥ．Ｒａ ｐ ｉ ｄ ａ ｓ ｔ ｒ ｏ ｃ ｙ ｔ ｅ ａ ｎ ｄ ｍｉ ｃ ｒ ｏ ｇ ｌ ｉ ａ ｌ
ｒ ２ １ ］ Ｆｒ ｉ ｅ ｄｍａ ｎ ＡＲ， Ｃａ ｃ ｈ ｅ ａ ｕ ｘ ＬＰ， ｌ ｖ ｅ ｎｓ Ｓ， ｅ ｔ ａ ．Ｅｌ ｕ ｃ ｉ ｄ ａ ｔ ｉ ｎ ｇ ｔ ｈ ｅ ｅ ｏ ｍ—
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潮， 郭 大玮
动 脉 粥样 硬 化 （ ａ ｔ ｈ ｅ ｒ ｏ ｓ ｃ ｌ ｅ ｒ ｏ ｓ ｉ ｓ ， Ａ Ｓ ） 是 心 脑 血 管 疾 病 的 主要
病理基础 ， 引 起 ＡＳ的病 因 很 复 杂 。巨 噬 细 胞 在 其 发 生 、 发 展 过 程 中有重要作用Ｅ ｘ ］ 。抑 制 巨 噬 细 胞 的炎 症 反 应 有 可 能 成 为 预 防和治 疗 Ａ Ｓ的一 个重 要 的方 向。 已知人 单 核 白血 病 （ Ｔ ＨＰ一１ ） 细 胞 具 有单 核 细 胞 和 巨 噬 细 胞 的 功 能 和 生 理 学 特 性 ， 被 广 泛 用 于
科学院典型培养物保藏委 员会 细胞库 （ ＴＣ Ｈｕ一５ ７ ） ， 用含 １ Ｏ
Ｆ Ｂ Ｓ （ Ｇ ｉ ｂ ｃ ｏ １ ０ ０ ９ ９—１ ４ ｌ ， 购 自北 京 茂 建 ） 的Ｒ Ｐ ＭＩ 一１ ６ ４ ０ （ Ｈｙ — ｃ ｌ ｏ ｎ ｅ ， Ｓ Ｈ３ ０ ８ ０ ９ ． ０ １ Ｂ ） 培养基 ， ３ ７℃ ，５ Ｃ Ｏ２ 的 细 胞 培 养 箱 培 养 。 稳定 培 养 传 ２代 ～ ３代 后 给 予 Ｉ ｉ ｐ ｏ ｐ ｏ Ｉ ｙ ｓ ａ ｃ ｃ ｈ ａ ｒ ｉ ｄ ｅ （ Ｌ Ｐ Ｓ ，

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THP-1和单核细胞诱导分化

THP-1和单核细胞诱导分化

THP-1和单核细胞诱导分化方法1.THP-1细胞的诱导分化（1）THP-1用185ng/ml佛波酯（PMA，用DMSO溶解）作用 6小时，诱导细胞分化为巨噬细胞（M0）。

（2）在PMA继续存在的情况下，通过分别：•与IFN-γ(20 ng/ml)和LPS(100 ng/ml)孵育48小时以上，使其向M1表型极化。

•与 IL-4(20 ng/ml)和IL-13(20 ng/ml)孵育48小时以上，使其向M2表型极化。

（3）极化完成后，细胞用不含刺激物和PMA的无血清RPMI1640重悬，可保持72小时。

2. 人单核细胞来源的巨噬细胞(MDM)的诱导分化（1）采血后，首先用 Ficoll密度梯度离心法分离PBMC（400g，25min），然后再用 Percoll （400g，15min）分离PBMC，最后将单核细胞以5×10E5/ml的浓度接种在含有 10%胎牛血清、100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素的RPMI1640培养基中，同时加入 20 nM的CSF-1。

（2）单个核细胞在37°C、5%CO2条件下培养7d，每3d更换一次培养液，获得MDM。

（3）MDM得到之后，去除培养基后：•若与新鲜的、无血清的RPMI1640继续培养，则维持M0状态。

•若与LPS(1μg/ml)和IFN-γ(10 ng/ml)孵育48小时，则向M1表型极化。

•若与IL-4(20 ng/ml)和IL-13(5 ng/ml)孵育48小时，则向M2表型极化。

（3）极化完成后，细胞用不含刺激物和PMA的无血清RPMI1640重悬，可保持72小时。

参考文献：Tedesco S, et al. (2018) Convenience versus Biological Significance: ArePMA-Differentiated THP-1 Cells a Reliable Substitute for Blood-Derived Macrophages When Studying in Vitro Polarization?. Front. Pharmacol. 9:71. doi: 10.3389/fphar.2018.00071。

牛分枝杆菌感染巨噬细胞（THP-1）全基因表达谱变化的研究

牛分枝杆菌感染巨噬细胞（THP-1）全基因表达谱变化的研究

牛分枝杆菌感染巨噬细胞（THP-1）全基因表达谱变化的研究高峰;李卫民;李传友;刘毅;孙照刚;张建源;姜平;范伟兴【期刊名称】《结核病与胸部肿瘤》【年(卷),期】2009(000)001【摘要】目的分析可用于牛结核病免疫学诊断的后选靶标，同时初步探讨由牛分枝杆菌（Mycobacterium bovis）引起人结核病的免疫学发病机制。

方法牛分枝杆菌（AF2212／97）和结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis（H37Rv））感染人的模式巨噬细胞（THP-1），采用含有22000个基因全长的基因芯片分析感染72个小时后的THP-1细胞全基因组在转录水平的表达谱变化。

在确定所分析的芯片的特异性和稳定性均达到要求的基础上，通过GO显著性统计分析，研究表达变化的基因所对应蛋白的分子功能、生物过程以及细胞组分;进一步采用Pathway显著性统计分析，研究表达差异蛋白之间的相互作用。

结果感染H37Rv后的THP-1细胞，存在290个差异基因表达，其中170个上调表达，120个下调表达，与以往的结果类似。

牛分枝杆菌感染的THP-1细胞中有1899（8．6％）个基因差异表达，其中1075个基因被上调表达（56．6％），其它43．4％被下调。

1899个基因中1674个在GenBank有记录，263个是新基因，基质金属蛋白酶12（H200000442）被上调达60．4921倍;下调幅度最大的蛋白丝氨酸／半胱氨酸抑制酶（H200006177）被下调6．29倍。

采用GO分析发现，这些基因对应的多为炎症因子蛋白、凋亡蛋白、细胞外基质蛋白、T细胞受体信号通路相关蛋白等。

其中与炎症相关的的蛋白有47个，如TNF、IL8、CXCL3、CCL8、CCL7、IFNK、IL-26、CCL28等。

随后的Pathway分析差异表达基因对应的2014个蛋白，展示了一系列引起结核病发病的重要信号传导通路。

结论基因表达谱研究可为牛结核病发病机制及其诊断研究提供大量有益的生物学信息。

thp-1诱导实验原理

thp-1诱导实验原理

thp-1诱导实验原理
THP-1细胞诱导实验原理如下：
THP-1细胞是单核细胞系，通常用于模拟研究人体单核细胞/巨噬细胞的生物学特性和功能。

这些细胞可以被诱导分化为不同类型的巨噬细胞，如M1型和M2型巨噬细胞。

在具体的诱导分化实验中，THP-1细胞首先被佛波酯（PMA）诱导分化为巨噬细胞。

这个过程中，细胞会发生形态变化和生长方式的改变，由悬浮式生长变成贴壁生长，由圆形变成不规则形态，体积进一步增大，细胞浆疏松，细胞核增大明显，可见大量明显细胞器，胞膜周围可见少量突起。

分化后的巨噬细胞可以被进一步诱导分化为M1型或M2型巨噬细胞。

M1型巨噬细胞主要通过脂多糖（LPS）和IFN-γ诱导，进一步发生M1型极化，释放出TNF-α、IL-6等细胞因子，这是经典的炎症模型。

而M2型巨噬细胞则通过IL-4、IL-13和巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）诱导，进一步发生M2型极化，分泌TGF-β、IL-10等抑制性细胞因子，模拟炎症后期的组织修复和重建的过程。

以上就是THP-1细胞诱导实验的基本原理，希望对您有所帮助。

EGb761LPS诱导THP-1细胞释放HMGB1蛋白表达的调节

EGb761LPS诱导THP-1细胞释放HMGB1蛋白表达的调节


（１）炎性因子检测组：Ｔ唧－１＋ＥＧｂ７６１（５０９９／ｍＩ）＋ＬＰＳ（１９９／ｍ１）
（２）ＮＦ—ｒｄ３的活化检测组；ＴＨＰ－１＋ＥＧｂ７６１（５０９９／ｍ１）＋ＬＰＳ（１９９／ｍ１） （３）不同时间点ＨＭＧＢｌ蛋白检测组：ＴＨＰ一１＋ＬＰＳ（１斗ｇ／ｍ１） （４）不同浓度ＥＧｂ７６１对ＨＭＧＢｌ影响检测组：ＴＨＰ．１＋ＥＧｂ７６１（５０９９／ｍｌ、１００
学者却发现ＨＭＧＢｌ蛋白是脓毒症的晚期介质，其中在大部分脓毒症患者中会 升高。ＨＭＧＢｌ由激活的免疫细胞合成，可与ＴＬＲ．２、ＴＬＲ．４发生关联，从而启 动与ＬＰＳ类似的炎症反应。ＨＭＧＢｌ还会引起凝血因子和中性粒细胞的聚集， 与促炎细胞因子ＩＬ．１等相比，ＬＰＳ刺激ＨＭＧＢｌ的释放发生于相对较晚的阶段。 尽管ＨＭＧＢｌ在严重脓毒症患者中升高，但是其对脓毒症的预后并没有预测意 义。向实验小鼠注射ＨＭＧＢｌ是致命的，而用ＨＭＧＢｌ抗体对内毒素和盲肠结 扎穿孔小鼠具有一定治疗作用，因此推断ＨＭＢＧｌ可能是脓毒症治疗的新靶点。 中药银杏叶提取物（ｅｘｔｒａｃｔ ｏｆＧｉｎｋｇｏｂｉｌｏｂａ，ＥＧｂ７６１）是从银杏叶中提取的天 然活性物质，其中主要有效成分为黄酮糖苷类（２４％）和菇烯内醋类（６％），ＥＧｂ７６１ 也是一类纯天然抗氧化剂，调节多种抗氧化酶活性，具有抗炎、抗癌、抗衰老、抑 制血小板聚集等多种药理活性。也有研究表明ＥＧｂ７６１对早期炎症因子ＩＬ．１１３、
２．３
Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ检测不同时间点ＨＭＧＢｌ蛋白的表达 将稀释均匀的ＴＨＰ．１细胞培养于２４孔板中每孔加入细胞悬浮液ｌｍｌ及
浓度为１９９／ｍｌ ＬＰＳ诱导（均设３个重复孔）６ｈ、１２ｈ、１８ｈ后，收集细胞上清液裂 解离心提取蛋白，在４℃一抗孵育过夜，辣根过氧化物酶标记的山羊抗鼠 ＩｇＧ（１：５０００稀释）孵育，采用化学发光显色法，以目的条带和１３－ａｃｔｉｎ条带积分 光密度值的比值（ＩＯＤ值）定为目的蛋白的相对表达量。