RGD-TRAIL抗肿瘤作用的细胞筛选研究

２ 实 验 孔 板 加 样 设 计
胰 岛素 （ Ｂ Ｉ ， 上海 浩哗 公 司 ） ； Ｔ Ｒ Ｙ Ｐ Ｓ Ｉ Ｎ ０ ． ２ ５ ％ Ｅ Ｄ Ｔ Ａ
（ Ｇ ｉ ｂ ｃ ｏ 公司） ； Ｐ Ｂ Ｓ ， ｐ Ｈ ７ ． ２ （ Ｇ ｉ ｂ ｃ ｏ 公司） 。
Ｒ Ｇ Ｄ — Ｔ Ｒ Ａ Ｉ Ｌ （ 常州千红生化制药股份有 限公司 ） 。
Ｃｈ ｉ ｎ ｅ ｓ ｅ Ｊ ｏ ｕ ｒ ｎ ａ Ｉ ｏ ｆ Ｎｅ ｗ Ｄｒ ｕ ｇ ｓ ２ ０１ ５ ， ２ ４（ ９ ）
一
类 生 物新 药 ， 即 靶 向抗 肿瘤 药 物 Ｒ Ｇ Ｄ — Ｔ Ｒ Ａ Ｉ Ｌ ，
将Ｒ Ｇ Ｄ肽 同 Ｔ Ｒ Ａ Ｉ Ｌ融 合 构 建 而 成 ， 它不 仅 保 留了
Ｔ Ｒ Ａ Ｉ Ｌ的诱导 肿瘤 细胞 凋 亡 的 功能 ， 而 且 提 高 了药
物 对肿瘤 的靶 向性 ， 赋予 其更 高 的抗 肿 瘤活性 。 由于 Ｔ Ｒ Ａ Ｉ Ｌ应 用 于 临 床 治 疗 肿 瘤 还 存 在 一 些 问题 ， 且 并非 所有 肿瘤 细 胞都 对 Ｔ药
料
Ｅ ｎ Ｖ ｉ ｓ ｉ ｏ ｎ ２ １ ０ ４型多标 记微孔板检 测仪 （ Ｅ ｎ ｖ ｉ ｓ ｉ ｏ ｎ
２ １ ０ ４ Ｍｕ ｌ ｔ ｉ ｌ ａ ｂ ｅ ｌ Ｒ ｅ ａ ｄ ｅ ｒ ， 美 国 Ｐ ｅ ｒ ｋ ｉ ｎ Ｅ ｌ ｍ ｅ ｒ公 司 ） ；
Ｓ Ａ Ｎ Ｙ Ｏ二 氧化碳培养箱 （ 日本三 洋 公 司 ） ； Ｘ Ｄ Ｓ一 １ Ｂ
ｄ ５ ： 药 物处 理 ７ ２ ｈ后 ， 每 孔加 入 ５ ０ Ｌ （ １ ／ ２培
ｍ ｇ ・ ｍＬ 储 存 液 。再 用培养 基制 备 ３ ． １ ６ Ｘ系列 稀释
的 ５倍供试 品 Ｒ Ｇ Ｄ — Ｔ Ｒ Ａ Ｉ Ｌ溶液 。最 后 ， 每 株 细胞每
孔分 别 加 ２ ０ Ｌ相 应 的 供试 品 Ｒ Ｇ Ｄ ． Ｔ Ｒ Ａ Ｉ Ｌ ５倍 溶
液， 每个药 物浓 度各 ３个复孑 Ｌ 。
Ｘ Ｒ细胞 计数 仪进 行 活 细胞 计 数 。用 培养 基 将 细 胞
悬 液调 整 到适 当的浓 度 。每孔加 ８ ０ Ｌ细胞 悬 液于
９ ６孔 细 胞 培 养 板 ， 最终 细胞 浓度 为 每孔 ３ ０ ０ ０～
５ ０ ０ ０细 胞 。细胞 置 于 ３ ７℃ ， ５ ％ Ｃ Ｏ 和 ９ ５ ％ 湿 度 的培 养箱 培养 ２ ４ ｈ 。
细胞水 平 的药物筛 选 能够直 接观察 被 筛选药 物对 生 命 功 能 的影 响 ， 更 能全 面反 映其 生理 活性特 征 ， 适 应
现代 药物筛 选 的需要 。
因此 ， 本研究选择 ３ ０株人 肿瘤细胞 系开展 Ｒ Ｇ Ｄ －
Ｔ Ｒ Ａ Ｉ Ｌ的敏感 肿 瘤 细胞 筛 选 ， 采用 Ｃ Ｔ Ｇ方 法 测 定药 物在各 个 肿 瘤 细 胞 系 中的 细 胞 增 殖 ５ ０ ％ 抑 制 浓 度 （ Ｉ Ｃ 如 ） ， 来确定 对 Ｒ Ｇ Ｄ — Ｔ Ｒ Ａ Ｉ Ｌ的敏感 肿 瘤细胞 株 ， 为 Ｒ Ｇ Ｄ ． Ｔ Ｒ Ａ Ｉ Ｌ确定临床适应症 提供理论依据 。
型显微镜 （ 重庆光 电集 团） ； Ｂ Ｃ Ｄ一２ １ ５ Ｄ Ｋ型冰箱 （ 海
尔集 团 ） ； Ａ Ｌ ２ ０ ４型 电子 天 平 （ 梅特勒多利多公司） ； Ｖ ｉ — Ｃ ｅ ｌ ｌ Ｘ Ｒ型活细胞计数仪 （ 贝克曼公 司） 。
Ｃ ｅ ｌ ｌ Ｔ ｉ ｔ ｅ ｒ — Ｇ ｌ ｏ （ Ｃ Ｔ Ｇ， Ｐ ｒ ｏ ｍ ｅ ｇ ａ公 司 ） ； Ｒ Ｐ Ｍ Ｉ Ｉ ６ ４ ０培 养基 （ 改 良型 ， Ｔ ｈ ｅ ｒ ｍｏ ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｔ ｉ ｉ ｆ ｃ 公司） ； Ｄ ＭＥ Ｍ 培养 基 （ Ｇ ｉ ｂ ｃ ｏ公 司 ） ； Ｍｃ Ｃ ｏ ｙ ’ Ｓ ５ ａ培 养 基 （ Ｇ ｉ ｂ ｃ ｏ公 司 ） ； Ｈ ａ ｍ ’ Ｓ Ｆ １ ２ Ｋ培养基 （ Ｇ ｉ ｂ ｃ ｏ 公司） ； Ｌ 一 １ ５培 养基 （ Ｔ ｈ ｅ ｒ ． ｍ ｏ ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｔ ｉ ｉ ｆ ｃ 公 司） ； Ｆ Ｂ Ｓ （ 胎牛血清 ， Ｇ ｉ ｂ ｃ ｏ公 司 ） ； 牛
１ ０ ６ ６
中 国 新 药杂 志 ２ ０ １ ５年 第 ２ ４卷第 ９期
Ｃ ｈ ｉ ｎ ｅ ｓ ｅ Ｊ ｏ ｕ ｒ ｎ ａ ｌ ｏ ｆ Ｎ ｅ ｗ Ｄ ｒ ｕ ｇ ｓ ２ ０ １ ５ ， ２ ４（ ９）
ｄ ２ ：用 ｄ ｄ Ｈ， ０溶 解供 试 品 Ｒ Ｇ Ｄ － Ｔ Ｒ Ａ Ｉ Ｌ为 １ ． ２
我 们选 取 １ ９种肿瘤 的常见 细胞株 进行 了实 验 ，
来 源 和培养基 情 况见表 １ 。
品， 每个 细胞 株重 复 ３次 。 以等 体 积 培养 基 作 为 空
表 ｌ 实 验用 细胞 系 的来 源 和培养 基情 况
白对照 。
３ Ｃ Ｔ Ｇ 方 法测定 药物 细胞 增殖 Ｉ Ｃ 。 ｄ １ ：收 集 处 于 指 数 生 长期 的细 胞 并 用 Ｖ ｉ — Ｃ ｅ ｌ ｌ
２ 细 胞 系
细胞 接 种浓度 控 制 在 每 孔 ３ ０ ０ ０— ５ ０ ０ ０细胞 ， １ ～ ９孔分别 加 入 ２ Ｏ Ｌ ｃ １～Ｃ ９系列 稀 释浓 度 的供 试品Ｒ Ｇ Ｄ－ Ｔ Ｒ Ａ Ｉ Ｌ（ ４ ０ Ｉ ｘ ｇ ・ ｍＬ ～～ ４ ｎ ｇ ・ ｍＬ ）的样
方
法
１ 药 物配 制方法 和加 样设 计 用 １ ｍＬ ｄ ｄ Ｈ ， Ｏ溶解 １ ． ２ ｍｇ 供试 品 Ｒ Ｇ Ｄ — Ｔ Ｒ Ａ Ｉ Ｌ 为 １ ． ２ ｍｇ ・ ｍ Ｌ 储存 液， 用储 存 液 和 培养 基 配 制 ５ 倍 供试 品 系列 稀释 浓度 。