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北虫草液体发酵培养基优化研究

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表 #" 以菌丝体干重为指标的正交试验结果及分析
试验号 * " 2 5 $ . 3 4 :* :" :2 ; 7 * * * " " " 2 2 2 2# +$5* .# .2.$ $# 2$4+# 2.53 8 * " 2 * " 2 * " 2 2# *$"" .# *."" $# 52.+ +# 2255 9 * " 2 " 2 * 2 * " .# .$-" 5# +$"2 5# +244 +# "4+4 空白列 * " 2 2 * " " 2 * ! +# "435 +# 5"4+# 2.$+ +# 53-+ +# 3**. +# 4$5" +# 2+$+# -.4+ +# 543. " +# 2*-+# 24$. +# 2"$. +# 5*.+# .-*+ +# 45+5 +# 2*3" +# 4"3+# 5-55 菌丝体干重 （ &） # +# "32+ +# 25"$ +# 2+.5 +# 524" +# 3"*2 +# 445+ +# 2+.+ *# +-2. +# $.-5 平均 +# "4.5 +# 2-42 +# 22"2 +# 5553 +# 3+5. +# 4."4 +# 2+43 +# 4.+ 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 吴达满： 瓜蒌高效栽培技术初探
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! ""# $%& ’ ()" ， 硼砂的施用对提高瓜蒌产量、 品质具有重要作用， 必须引起高度重视。瓜蒌开花结果后要进行整 枝， 把不会开花结果的长枝劈掉， 以减少养分消耗， 提高坐果率。 冬季管理： 对瓜蒌地块进行清理， 瓜蒌采收结束后， 瓜藤慢慢枯死， 在离地面*+ ,) 处剪去枯死瓜藤， 并用 -.# "/ 铜大师 *+++ 倍液喷施剪口， 然后待藤枯死后清除瓜蒌和落叶， 集中烧毁。同时要把病株的块根挖掉并在其 穴内撒施石灰杀菌， 然后把挖出有病的块根带走， 远离瓜蒌地， 集中销毁。通过以上措施可以清洁环境， 降低越冬 病虫害基数， 减轻来年病虫害发生， 达到事半功倍的效果。另外， 瓜蒌的基部在 +0 以下的低温会被冻烂。必须在 瓜蒌基部覆土 （"$%& ’ 堆） 或盖稻草、 地膜等保温。最后， 在瓜蒌基部周围处细心深挖不要伤了块根， 其它地方深挖 把土打碎晾晒， 使土壤疏松， 同时进行清沟排水， 以便来年促进瓜蒌早发根、 早生长发育、 早开花结果。 "# .1 病虫害防治1 病害防治： 根线虫病： 实行轮作， 选用健康无病的块根， 冬天深翻土地， 晒土壤， 杀灭病源， 用 $+/ 克线颗粒剂 *$+%& ’ ()" 拌入少量干砂撒于畦面， 翻入土中； 炭疽病： 发病温度 "+ ! 2+0 ， 湿度越大越容易发病， 蔓枯病： 防止把瓜蒌藤伤了， 用 3$/ 百菌清 -++ 倍液或 $+/ 多菌灵 用世高 "+++ 倍液或炭疽福美 -++ 倍液防治； *+++ 倍液防治。 成虫防治方法是在 虫害防治： 黄守瓜： 幼虫为害根， 成虫危害叶， 幼虫用 $+/ 辛硫磷乳油 $++ 倍液速效药防治， 清晨进行人工捕捉， 用 4+/ 敌百虫 *+++ 倍液毒杀或用 -+/ 敌敌畏乳油 *+++ 倍液防治； 瓜实蝇： 双翅目， 一年可以 发生 $ 代， 应清洁环境， 用 -+/ 敌敌畏乳油 *+++ 倍液防治； 瓜绢螟： 俗称 “蒲虎” ， 朝阳的地块发生较严重， 以幼虫危 害叶， 甚至吃光全部叶片， 用 $+/ 美除乳油 *+++ 倍液防治或 "$/ 功夫水乳剂 *+++ 倍液防治； 蚜虫： 用 5+/ 乐果 *+++ 倍液防治； 透翅蛾： 用药与黄守瓜防治方法相同。 "# 31 采收与处理1 一般 4 ! *+ 月份， 瓜蒌果皮由青绿变淡黄色即可分批采收。采收的瓜蒌宜存放 " ! 26， 然后剖 瓜去皮取子， 装入编织袋， 摩擦去果囊， 并用清水清净， 晒干即可。 !" 经济效益分析 瓜蒌高效栽培技术经过几年来的生产实践不断得到完善， 经济效益也显著提高。如左溪村胡恒良农户 "++* ! "++$ 年种植瓜蒌的种子产量分别为 .++# + 、 *2*"# $ 、 ""$+# + 、 "53$# + 和 "*3$# +%& ’ ()" ， 其纯收入分别为 .*$+ 、 "42"$ 、 $ 45++ 、 *+.$++ 和43"3$ 元 ’ ()" 。 再如： 枕头村陈孔盛农户"++2 ! "++$ 年种植瓜蒌的种子产量分别为... # 3 、 *"++# +、 *...# 3%& ’ ()" ， 纯收入分别为 *2*.$# $ 、 2*+-2# + 、 54522# 2 元 ’ ()" 。以上结果表明， 种植瓜蒌一般以 " ! $ 年 的产量最高、 效益最好。 左溪镇的生产实践证明， 推广瓜蒌高效栽培技术具有良好的经济效益、 生态效益和社会效益。"++$ 年全镇推 被列为县级扶持补助项目。"++. 年， 全镇推广面积进一步扩大， 农民也因熟练掌 广瓜蒌高效栽培技术 "++ 多 ()" ， 握此项技术而尝到甜头， 瓜蒌高效栽培技术推广也将成为农业增效、 农民增收的途径之一而前景广阔。
’ %: ": 8! 正交试验! 为了确定最优碳源、 氮源和无机盐的浓度， 设计了 I（ 正交试验， 配成 9 种培养基， 在 "8#BI 9 ) ）
三角瓶中装入培养液 8#BI， 每种设 ) 个重复， 按 8; 接种， "8@ 、 %8#/ A B05 摇床培养， 第 8C 测定菌丝体干重。
"! 结果与分析
图 $" 不同氮源对北虫草液体发酵菌丝体产量的影响" " " " 图 %" 无机盐对北虫草液体发酵菌丝体产量的影响
!! &" 正交试验结果 以蔗糖 （ .） 、 蛋白胨 （ /） 和 ’(# )*（ 为 $ 个因素， 各个因素均设 $ 个浓度水平， 分别为 ." ： "0 ， .# ： #0 ， .$ ： % &） 1! "0 ， /# ： "0 ， /$ ： 1! 20 ； &" ： 1! "0 ， &# ： 1! 120 ， &$ ： 10 ， 按表 " 设计正交试验， 结果列于表 " 。 $0 ； /" ： 表 " 极差分析结果表明： 碳源浓度对菌丝体产量的影响最大， 其次是氮源， 无机盐的影响最小。同时可以得出 最佳培养基的组合为 .# /# &" ， 即蔗糖 #0 、 蛋白胨 "0 、 ’(# )*% 1! "10 。
3 % 期3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 尹萍等： 北虫草液体发酵培养基优化研究
"1$
!! !" 碳源对菌丝体产量的影响 按 "! #! # 进行实验， 测得菌丝体干重如图 # ， 由图 # 可知， 北虫草对普通的碳源都能加以利用， 较好的碳源是可 溶性淀粉、 蔗糖和甘露醇， 考虑到淀粉发酵的粘度较大， 甘露醇作发酵原料价格较高， 确定蔗糖为最佳碳源。
图 #" 北虫草液体发酵曲线" " " " " " " " 图 !" 碳源对北虫草液体发酵的影响
!! $" 氮源对菌丝体产量的影响 按 "! #! $ 进行实验， 测得菌丝体干重如图 $ ， 由图 $ 可以看出， 北虫草发酵较好的氮源是蛋白胨、 酵母粉和黄豆 粉。考虑到培养基原料成本和来源， 蛋白胨是最佳选择。 !! %" 无机盐对菌丝体产量的影响 无机盐对菌丝体产量的影响结果见图 % ， 由图 % 可见， 与 &’ 相比， 添加 ’(# )*% 和 +,-*% 对北虫草的生长有 明显的促进作用， 其中又以 ’(# )*% 的影响最为明显， 因此可考虑通过进一步的正交试验来确定其用量。
摘! 要： 对北虫草菌的液体发酵培养基进行了优化研究， 结果表明， 以蔗糖 "; 、 蛋白胨 %; 、 <=" >?’ #: %#; 为 主的发酵培养基， 在 "8@ 、 转速 %8#/ A B05、 接种量 8; 的条件下， 摇床振荡培养 ’C， 菌丝体产量较高。 关键词：北虫草； 液体发酵； 培养基； 优化 中图分类号： D9) 7 ))8! 文献标识码： *! 文章编号： %##% 7 &8&% （"##$ ） #’ 7 #%#" 7 #" 冬虫夏草系冬虫夏草菌 !"#$%&’() )*+’+)*) （ E3/F323G）H-++: 寄生在鳞翅目蝙蝠蛾科昆虫 虫草蝙蝠蛾 ,’(*-./)

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北虫草液体发酵培养基的筛选

北虫草液体发酵培养基的筛选

辽 宁农 业 科 学
２ ０ １ ３ （ ６ ） ： ６ １～ ６ ２
Ｌ ｉ ａ ｏ ｎｉ ｎｇ Ａｇ ｒ ｉ ｃ ｕ ｌ ｔ ｕ ｒ ａ ｌ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎｃ ｅ ｓ
文章编号 ： １ ０ ０ ２—１ ７ ２ ８（ ２ ０ １ ３） ０ ６—０ ０ ６ １一Ｏ ２
北 虫 草 液 体 发 酵 培 养 基 的筛 选
（ ４ ）红 糖 ２ ０ ｇ ， 马铃薯 ２ ０ ０ ｇ ， 蛋 白胨 ３ ｇ ， Ｋ Ｈ２ Ｐ Ｏ ４ ２ ｇ ， Ｍｇ Ｓ Ｏ ４・ ７ Ｈ ２ ０ １ ｇ ， 维 生素 Ｂ ｌ １ ０ ｍ ｇ ，
水 １ ０ ０ ０ ｍｌ 。
重等 指标 。 菌球 大小 ： 随机 取培 养基 中菌球 ３ ０～５ ０个 置 于 培养皿 中紧密排 成一 排 ， 测 量 总直径 ， 求 出菌 球
养 基进 行筛 选 ， 通过 试 验 来 确 定 北 虫 草 的最 佳 液
体 培养 基配 方 ， 为 北 虫 草 的液 体 发 酵 工业 化 生 产 提 供参 考 。
（ ９ ）蔗糖 ２ ０ ｇ ， 玉米粉 ２ ０ ｇ ， 黄豆粉 １ ０ ｇ ， 酵 母粉 ２ ｇ ， Ｋ Ｈ ２ Ｐ Ｏ ０ ． ５ ｇ ， Ｃ ａ Ｃ Ｏ ３ １ ｇ ， 水 １ ０ ０ ０ ｍｌ 。
量 在不 断增 大 ， 野生 北 虫 草 已经 远 远不 能 满 足 市
（ ７ ）葡 萄糖 １ ０ ｇ ， 玉米粉 ２ ０ ｇ ， 麦麸 ５ ０ ｇ ， 水 １ ０ ０ ０ ｍ ｌ （ 将麦 麸 、 玉米粉 ｔ 昆合 ， 加水 ， 煮沸 ２ ０ ｍｉ ｎ
后， 过 滤取 汁 ， 再 加入 葡萄糖 ） 。 （ ８ ）葡 萄 糖 ３ ０ ｇ ， 黄豆粉 ３ ０ ｇ ， 蛋 白胨 ２ ｇ ， Ｋ Ｈ２ Ｐ Ｏ ４ ０ ． ５ ｇ ， Ｍｇ Ｓ Ｏ ４・ ７ Ｈ２ ０ ０ ． ５ ｇ ， 维生素 Ｂ １
北虫草液体菌种制作方法

北虫草液体菌种制作方法

北虫草液体菌种制作方法北虫草的菌种怎样制作培育？北虫草是一种富含虫草素、氧基酸等营养物质的虫、菌结合的食用菌类，因为营养物质种类多、含量高，是人们生活中的上等滋补佳品，在市场上销售情况一直较佳，人工种植前景看好。

而今天给大家介绍一下关于北虫草液体菌种制作方法，如下：一、培养基配方配方：玉米粉1%、葡萄糖2%、蛋白胨1%、酵母粉0.5%、磷酸二氢钾0.1%、水95.35%、硫酸镁0.05%、维生素B110mg、PH值调至6.5左右。

二、制作培养方法1.制作一级摇瓶种：将这些原料溶于水后装在500毫升三角瓶中，每个三角瓶装量200毫升，放入玻璃珠3粒左右，塞紧棉塞，然后用4层纱布罩住棉塞、瓶口扎紧，放在高压灭菌锅内进行消毒，待压力表上升至0.5kg/cm2压力时，即放净冷气待指针降至0后，再关掉放气阀门，待温度表指针逐渐上升至1.1kg/cm2后就开始保温30分钟后，慢慢下降指针至0，然后开盖冷却至常温，再移入接种箱或超净工作台等待接种。

2.接种方法：先把灭菌后的北虫草液体菌种培养基移放在超净工作台上，并把北虫草母种和接种勾、酒精灯、酒精棉球等接种物品也放在超净工作台上，工作服挂在接种室消毒。

然后在接种室点燃烟雾剂（用臭氧消毒器更好），立即关闭所有门窗密闭消毒同时打开紫外线灯。

待40min后，将烟雾放净，关闭紫外线灯，接种人员就可进行接种。

接种的方法是穿好工作服，打开超净工作台风机，点燃酒精灯，左手拿着母种试管对准火焰口，右手拿着铁勾在酒精灯火焰消毒3-5秒种后立即伸进母种试管内把菌种分成5-7段，再用左手迅速将纱布瓶盖打开，右手立即把一段菌块勾入瓶内（每瓶接入5-6片0.5平方厘米大小菌种）速将瓶盖按原样盖紧。

当北虫草菌种接好后，移入22-24℃恒温培养室，摇床震荡发菌培养。

摇床转速140r/min，经过4-6天的发菌培养，经检查北虫草菌液的颜色开始清亮、菌球密集，瓶口闻有很浓的北虫草气味，可判断为菌种优良。

北冬虫夏草的研究发展现状

北冬虫夏草的研究发展现状

研制成药品 吉林东北虎药业有限公司已将北冬虫夏草作 为主要成分向国家卫生部申报了一类新药并获得 批准，商品名为欣科奇胶囊，作用为补肾益肺、抗
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辽宁农业科学
年
衰老、调节睡眠等。这样，就为北冬虫夏草替代冬 虫夏草作为医药原料奠定了基础，而且，笔者认为 这方面也将是北冬虫夏草今后开发应用的一个主 要方向。
珍国医国药， ，（ ）： " ［ ］ 汤晓云 蛹草的研究进展［ ］基层中药杂志，， （ ）：
" ［ ］ 赵余庆，于明，陈立君，等 冬虫夏草属真菌化学研究概况
［ ］中草药 ，（ ）： ［ ］ 刘民培 人工蛹虫草子实体对荷瘤小鼠免疫功能的影响
［ ］中国医药学报， ，（ ）： " ［ ］ 张传开，袁盛榕 冬虫夏草和中国拟青霉对细胞免疫功能
加工成保健品 据了解，目前已上市的北冬虫夏草保健品有， 虫草口服液、虫草补肾酒［ ］、虫草健康啤酒以及 沈阳农业大学研制的虫草胶囊等。另外，值得一 提的是，近几年，随着对北冬虫夏草的功效研究和 宣传不断深入，国外厂商也对其产生了浓厚的兴 趣，出口量不断增加。而且日本和韩国等国家近 年来都在加强对虫草功能食品的研究和开发［ ］。
作为食品直接食用 北冬虫夏草作为新型绿色保健食品，可炒菜、 炖鸡、炖鸭、煲汤、烫火锅、沏茶等，尤其是用虫草 煲汤在广东、香港和台湾等地区很受欢迎。目前， 广东省农业科学院蚕业与昆虫研究所已研制出虫 草系列汤包，另外，成都金草公司将北冬虫夏草加 工成虫草雪莲、虫草芦荟和虫草竹荪汤等适合大 众消费的滋补菜系。
讨论
虽然北冬虫夏草的人工培养在我国已获得 成功并进入产业化阶段，但产业化生产中仍存在 着一定的难题，突出的一点就是北冬虫夏草菌种 的退化问题，因为北冬虫夏草对生长基质及生态 环境与一般食用菌不同，而且长期采用无性繁殖 及多次转管的北冬虫夏草菌种，其母种基因容易 变异，表现为出草畸形甚至不出草，产量和质量都 不稳定，生物转化率较低，所以，必须研究和摸索 出一种有效地防止虫草菌种退化的方法，从而确 保北冬虫夏草产业化生产顺利进行。
发酵培养基优化策略

发酵培养基优化策略

2011年6月第25卷第2期总84期北京联合大学学报（自然科学版）Journal of Beijing Union University （Natural Sciences ）Jun．2011Vol．25No．2Sum No．84［收稿日期］2011－03－03［作者简介］李勇昊（1986—），男，黑龙江哈尔滨人，吉林大学生物与农业工程学院硕士研究生，研究方向为发酵工程。

［通讯作者］杨建明（1978—），男，安徽无为人，中国科学院青岛生物能源与过程研究所，助理研究员，研究方向为生物催化。

发酵培养基优化策略李勇昊1，周长海1，丁雷3，孙元章2，杨建明2（1.吉林大学生物与农业工程学院，长春130022；2.中国科学院青岛生物能源与过程研究所，青岛266071；3.东北林业大学生命科学学院，哈尔滨150040）［摘要］在发酵过程中，经常需要通过试验来寻找研究对象的变化规律，这些对象包括培养基的设计、工艺参数等；而这些变化规律的寻找就要通过科学的试验设计与数据分析来实现。

通过对规律的研究达到各种实用的目的，比如提高产量、降低消耗、提高产品质量等，特别对于新菌种、新产品的试验。

本文对发酵培养基优化的基本方向进行了综述，并比较了常用的试验设计与数据分析方法。

［关键词］培养基优化；试验设计；数据分析［中图分类号］TQ 920.6［文献标志码］A［文章编号］1005-0310（2011）02-0053-07Strategies for Optimization of Fermentation MediumComposition PerformanceLI Yong-hao 1，ZHOU Chang-hai 1，DING Lei 3，SUN Yuan-zhang 2，YANG Jian-ming 2（1.Bioengineering and Agricultural engineering College ，JiLin University ，Changchun130022，China ；2.Qingdao Institute of Bioprocess Technology ，CAS ，Qingdao 266071，China ；3.College of Life Science ，Northeast Forestry University ，Haerbin150040，China ）Abstract ：In the process of fermentation ，it is often necessary to find the change rules of the study objects through experiments．These objects include medium design ，technological parameter ，etc ；and the observation of the change laws is achieved through a suitable strategy to arrange scientific experiment design and optimization tech-niques．Various practical purposes can be reached by studying the laws including increasing production ，reducing consumption ，improving the quality of products and so on ，especially for new bacteria and new product．This re-view summarizes the basic trends of optimizing fermentation medium ，and compares with some general experimen-tal designs and methods of data analysis．Key words ：medium optimization ；experimental design ；optimization techniques1发酵培养基的初期选择策略1.1发酵的准备发酵的第一步往往是选择合适的培养基，然而不能光靠试验来获取数据，那么选择初始培养基的最简单途径就是查阅文献，通过以往发表的相关文献，尤其是自己研究领域的相关文献，会节省大量的时间，并且行之有效。