第七届云南省教育科研优秀成果评选结果

㊀Ｇｕｉｈａｉａ㊀Ａｕｇ.２０２１ꎬ４１(８):１２１９－１２２５ｈｔｔｐ://ｗｗｗ.ｇｕｉｈａｉａ－ｊｏｕｒｎａｌ.ｃｏｍＤＯＩ:１０.１１９３１/ｇｕｉｈａｉａ.ｇｘｚｗ２０１９１２０２０武丽霞ꎬ韩丽ꎬ赵宜婷ꎬ等.生长素输出载体蛋白ＰＩＮ１在作物根和胚中的亚细胞定位[Ｊ].广西植物ꎬ２０２１ꎬ４１(８):１２１９－１２２５.ＷＵＬＸꎬＨＡＮＬꎬＺＨＡＯＹＴꎬｅｔａｌ.ＳｕｂｃｅｌｌｕｌａｒｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎｏｆａｕｘｉｎｅｆｆｌｕｘｃａｒｒｉｅｒｐｒｏｔｅｉｎＰＩＮ１ｉｎｃｒｏｐｒｏｏｔａｎｄｅｍｂｒｙｏ[Ｊ].Ｇｕｉｈａｉａꎬ２０２１ꎬ４１(８):１２１９－１２２５.生长素输出载体蛋白ＰＩＮ１在作物根和胚中的亚细胞定位武丽霞１ꎬ２ꎬ３ꎬ韩㊀丽１ꎬ２ꎬ３ꎬ赵宜婷１ꎬ２ꎬ３ꎬ周㊀璇１ꎬ２ꎬ３ꎬ杜云龙１ꎬ２ꎬ３∗(１.云南农业大学植物保护学院ꎬ昆明６５０２０１ꎻ２.云南生物资源保护与利用国家重点实验室ꎬ云南农业大学昆明６５０２０１ꎻ３.云南农业大学农业生物多样性与病害控制教育部重点实验室ꎬ昆明６５０２０１)摘㊀要:生长素输出载体在植物发育中起非常重要的作用ꎮ然而ꎬ生长素输出载体蛋白ＰＩＮ１在农作物水稻㊁小麦㊁玉米和大豆的根和胚中的亚细胞定位尚不清楚ꎮ该研究首先分析了ＯｓＰＩＮ１ｂ和它的同源物的氨基酸序列特征ꎬ发现小麦(ＴａＰＩＮ１)㊁玉米(ＺｍＰＩＮ１ｂ)和大豆(ＧｍＰＩＮ１ｂ)中的ＰＩＮ１序列与水稻的ＯｓＰＩＮ１ｂ序列分别具有６１.５％㊁６２.５％㊁６１.９％的相似性ꎮ然后根据水稻 日本晴 ( Ｎｉｐｐｏｎｂａｒｅ )的ＯｓＰＩＮ１ｂ的氨基酸序列ꎬ人工合成ＯｓＰＩＮ１ｂ多肽并注射健康的新西兰白兔获得了抗兔的ＯｓＰＩＮ１ｂ多克隆抗体ꎬ在通过免疫印迹方法检测抗兔的ＯｓＰＩＮ１ｂ多克隆抗体的有效性后ꎬ发现可以利用该抗体有效检测到水稻叶片及根中ＯｓＰＩＮ１ｂ的表达ꎮ为检测ＯｓＰＩＮ１及其同源物在不同作物胚根和胚中子叶细胞的定位ꎬ利用制备的抗兔的ＯｓＰＩＮ１ｂ多克隆抗体并通过免疫组化实验ꎬ发现水稻的ＯｓＰＩＮ１ｂ㊁小麦的ＴａＰＩＮ１和玉米的ＺｍＰＩＮ１ｂ非极性定位在早期的胚根和胚中子叶表皮细胞的细胞质膜上ꎬ大豆中的ＧｍＰＩＮ１ｂ非极性定位在胚根表皮细胞的质膜上ꎬ而在胚的子叶细胞中是胞质定位ꎮ为进一步检测水稻中ＯｓＰＩＮ１ｂ的亚细胞定位ꎬ对水稻根分生区表皮细胞用蛋白质转运抑制剂ＢＦＡ(ＢｒｅｆｅｌｄｉｎＡ)及抗兔的ＯｓＰＩＮ１ｂ多克隆抗体处理后ꎬ进行免疫组化实验ꎬ结果发现水稻中的ＯｓＰＩＮ１ｂ可以通过胞吞转运途径从水稻根表皮细胞膜进入细胞质中ꎮ该研究利用抗兔的ＯｓＰＩＮ１ｂ多克隆抗体有效检测了ＯｓＰＩＮ１ｂ及其同源物在水稻㊁小麦㊁玉米和大豆的胚根表皮细胞及胚中子叶表皮细胞的亚细胞定位ꎬ这将有助于进一步揭示生长素输出载体ＯｓＰＩＮ１ｂ及其同源物通过调控生长素极性运输而参与作物发育的作用机制ꎮ关键词:生长素输出载体ꎬＰＩＮ１ꎬ水稻ꎬ小麦ꎬ玉米ꎬ大豆中图分类号:Ｑ９４３㊀㊀文献标识码:Ａ㊀㊀文章编号:１０００￣３１４２(２０２１)０８￣１２１９￣０７ＳｕｂｃｅｌｌｕｌａｒｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎｏｆａｕｘｉｎｅｆｆｌｕｘｃａｒｒｉｅｒｐｒｏｔｅｉｎＰＩＮ１ｉｎｃｒｏｐｒｏｏｔａｎｄｅｍｂｒｙｏＷＵＬｉｘｉａ１ꎬ２ꎬ３ꎬＨＡＮＬｉ１ꎬ２ꎬ３ꎬＺＨＡＯＹｉｔｉｎｇ１ꎬ２ꎬ３ꎬＺＨＯＵＸｕａｎ１ꎬ２ꎬ３ꎬＤＵＹｕｎｌｏｎｇ１ꎬ２ꎬ３∗收稿日期:２０２０－０２－０５基金项目:国家自然科学基金(３１４６０４５３ꎬ３１６６０５０１ꎬ３１８６００６４)ꎻ云南省教育厅重大科研专项计划(ＺＤ２０１５００５)ꎻ教育部留学回国人员科研启动基金([２０１３]１７９２)ꎻ云南省应用基础研究计划的重点项目(２０１７ＦＡ０１８)[ＳｕｐｐｏｒｔｅｄｂｙｔｈｅＮａｔｉｏｎａｌＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅＦｏｕｎｄａｔｉｏｎｏｆＣｈｉｎａ(３１４６０４５３ꎬ３１６６０５０１ꎬ３１８６００６４)ꎻＭａｊｏｒＳｐｅｃｉａｌＰｒｏｇｒａｍｆｏｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＲｅｓｅａｒｃｈꎬＥｄｕｃａｔｉｏｎＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＹｕｎｎａｎＰｒｏｖｉｎｃｅ(ＺＤ２０１５００５)ꎻＰｒｏｊｅｃｔｏｆＳＲＦｆｏｒＲＯＣＳꎬＳＥＭ([２０１３]１７９２)ꎻＫｅｙＰｒｏｊｅｃｔｏｆＡｐｐｌｉｅｄＢａｓｉｃＲｅｓｅａｒｃｈＰｌａｎｏｆＹｕｎｎａｎＰｒｏｖｉｎｃｅ(２０１７ＦＡ０１８)]ꎮ作者简介:武丽霞(１９９４－)ꎬ硕士研究生ꎬ研究方向为水稻根系发育ꎬ(Ｅ￣ｍａｉｌ)２４１６２０６２４８＠ｑｑ.ｃｏｍꎮ∗通信作者:杜云龙ꎬ博士ꎬ教授ꎬ博士研究生导师ꎬ研究方向为激素与根系发育ꎬ(Ｅ￣ｍａｉｌ)ｙｕｎｌｏｎｇｄｕ＠ａｌｉｙｕｎ.ｃｏｍꎮ(１.ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＰｌａｎｔＰｒｏｔｅｃｔｉｏｎꎬＹｕｎｎａｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬＫｕｎｍｉｎｇ６５０２０１ꎬＣｈｉｎａꎻ２.ＳｔａｔｅＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｆｏｒＣｏｎｓｅｒｖａｔｉｏｎａｎｄＵｔｉｌｉｚａｔｉｏｎｏｆＢｉｏ￣ＲｅｓｏｕｒｃｅｓꎬＹｕｎｎａｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬＫｕｎｍｉｎｇ６５０２０１ꎬＣｈｉｎａꎻ３.ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＡｇｒｏ￣ＢｉｏｄｉｖｅｒｓｉｔｙａｎｄＰｅｓｔＭａｎａｇｅｍｅｎｔｏｆＥｄｕｃａｔｉｏｎＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＣｈｉｎａꎬＹｕｎｎａｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬＫｕｎｍｉｎｇ６５０２０１ꎬＣｈｉｎａ)Ａｂｓｔｒａｃｔ:Ａｕｘｉｎｅｆｆｌｕｘｃａｒｒｉｅｒｐｌａｙｓａｎｅｘｔｒｅｍｅｌｙｉｍｐｏｒｔａｎｔｒｏｌｅｉｎｐｌａｎｔｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ.ＨｏｗｅｖｅｒꎬｔｈｅｓｕｂｃｅｌｌｕｌａｒｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎｏｆａｕｘｉｎｅｆｆｌｕｘｃａｒｒｉｅｒＰＩＮ１ｉｎｔｈｅｒｏｏｔｓａｎｄｅｍｂｒｙｏｓｏｆｃｒｏｐｓｒｉｃｅꎬｗｈｅａｔꎬｍａｉｚｅａｎｄｓｏｙｂｅａｎｒｅｍａｉｎｓｕｎｃｌｅａｒ.ＩｎｔｈｉｓｓｔｕｄｙꎬｔｈｅｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆＯｓＰＩＮ１ｂａｎｄｉｔｓｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓａｍｉｎｏａｃｉｄｓｅｑｕｅｎｃｅｗｅｒｅａｎａｌｙｚｅｄꎬａｎｄｉｔｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅＰＩＮ１ｓｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆｗｈｅａｔ(ＴａＰＩＮ１)ꎬｍａｉｚｅ(ＺｍＰＩＮ１ｂ)ａｎｄｓｏｙｂｅａｎ(ＧｍＰＩＮ１ｂ)ｓｈａｒｅｄ６１.５％ꎬ６２.５％ａｎｄ６１.９％ｓｉｍｉｌａｒｉｔｉｅｓｗｉｔｈｒｉｃｅＯｓＰＩＮ１ｂꎬｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ.ＮｅｘｔꎬａｎａｒｔｉｆｉｃｉａｌＯｓＰＩＮ１ｂｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅｗａｓｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｄｂａｓｅｄｏｎｔｈｅＯｓＰＩＮ１ｂａｍｉｎｏａｃｉｄｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆｒｉｃｅ Ｎｉｐｐｏｎｂａｒｅ ａｎｄｉｎｊｅｃｔｅｄｉｔｉｎｔｏｈｅａｌｔｈｙＮｅｗＺｅａｌａｎｄｗｈｉｔｅｒａｂｂｉｔｓｔｏｏｂｔａｉｎａｎｔｉ￣ｒａｂｂｉｔＯｓＰＩＮ１ｂｐｏｌｙｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙ.ＴｈｅｅｆｆｅｃｔｉｖｅｎｅｓｓｏｆｔｈｅｐｒｅｐａｒｅｄｐｏｌｙｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙａｇａｉｎｓｔＯｓＰＩＮ１ｂｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙｉｍｍｕｎｅｂｌｏｔｍｅｔｈｏｄꎬａｎｄｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＯｓＰＩＮ１ｂｗａｓｆｏｕｎｄｔｏｂｅｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌｙｄｅｔｅｃｔｅｄｉｎｒｉｃｅｌｅａｖｅｓａｎｄｒｏｏｔｓ.ＦｕｒｔｈｅｒｍｏｒｅꎬｔｈｅｓｕｂｃｅｌｌｕｌａｒｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎｏｆＯｓＰＩＮ１ｂａｎｄｉｔｓｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓｉｎｐｒｉｍａｒｙｒｏｏｔｓａｎｄｃｏｔｙｌｅｄｏｎｃｅｌｌｓｏｆｅｍｂｒｙｏｓｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃｒｏｐｓｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｗｉｔｈａｎｔｉ￣ｒａｂｂｉｔＯｓＰＩＮ１ｂｐｏｌｙｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙｂｙｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙａｓｓａｙ.ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｒｉｃｅＯｓＰＩＮ１ｂꎬｗｈｅａｔＴａＰＩＮ１ａｎｄｍａｉｚｅＺｍＰＩＮ１ｂａｐｏｌａｒｌｙｌｏｃａｌｉｚｅｄｏｎｔｈｅｐｌａｓｍａｍｅｍｂｒａｎｅｏｆｅｐｉｄｅｒｍａｌｃｅｌｌｓｏｆｐｒｉｍａｒｙｒｏｏｔｓａｎｄｃｏｔｙｌｅｄｏｎｏｆｅｍｂｒｙｏｉｎｒｉｃｅꎬｗｈｅａｔａｎｄｍａｉｚｅｇｒｏｗｎｉｎｅａｒｌｙｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓｔａｇｅｓꎬａｎｄｓｏｙｂｅａｎＧｍＰＩＮ１ｂａｐｏｌａｒｌｙｌｏｃａｌｉｚｅｄｏｎｔｈｅｐｌａｓｍａｍｅｍｂｒａｎｅｏｆｐｒｉｍａｒｙｒｏｏｔｅｐｉｄｅｒｍａｌｃｅｌｌｓꎬｂｕｔｗａｓｃｙｔｏｓｏｌｉｃｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎｉｎｔｈｅｃｏｔｙｌｅｄｏｎｃｅｌｌｓｏｆｅｍｂｒｙｏ.ＴｏｆｕｒｔｈｅｒｄｅｔｅｃｔｔｈｅｓｕｂｃｅｌｌｕｌａｒｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎｏｆＯｓＰＩＮ１ｂꎬｅｐｉｄｅｒｍａｌｃｅｌｌｓｏｆｒｉｃｅｐｒｉｍａｒｙｒｏｏｔｍｅｒｉｓｔｅｍｒｅｇｉｏｎｗｅｒｅｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈｐｒｏｔｅｉｎｔｒａｎｓｐｏｒｔｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓＢＦＡ(ＢｒｅｆｅｌｄｉｎＡ)ａｎｄａｎｔｉ￣ｒａｂｂｉｔＯｓＰＩＮ１ｂｐｏｌｙｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙａｎｄｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙａｓｓａｙ.ＩｔｓｈｏｗｅｄｔｈａｔＯｓＰＩＮ１ｂｌｏｃａｌｉｚｅｄｏｎｃｙｔｏｐｌａｓｍａｍｅｍｂｒａｎｅｏｆｒｉｃｅｒｏｏｔｅｐｉｄｅｒｍａｌｃｅｌｌｓｃｏｕｌｄｅｎｔｅｒｉｎｔｏｔｈｅｃｙｔｏｐｌａｓｍｖｉａｅｎｄｏｃｙｔｉｃｔｒａｆｆｉｃｋｉｎｇｍａｎｎｅｒ.ＩｎｔｈｉｓｓｔｕｄｙꎬｔｈｅｓｕｂｃｅｌｌｕｌａｒｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎｏｆＯｓＰＩＮ１ｂａｎｄｉｔｓｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓｉｎｔｈｅｅｐｉｄｅｒｍａｌｃｅｌｌｓｏｆｐｒｉｍａｒｙｒｏｏｔｓａｎｄｃｏｔｙｌｅｄｏｎｓｏｆｅｍｂｒｙｏｓｏｆｒｉｃｅꎬｗｈｅａｔꎬｍａｉｚｅａｎｄｓｏｙｂｅａｎｗｅｒｅｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌｙｄｅｔｅｃｔｅｄｗｉｔｈｔｈｅａｎｔｉ￣ｒａｂｂｉｔＯｓＰＩＮ１ｂｐｏｌｙｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙꎬａｎｄｉｔｗｉｌｌｆａｃｉｌｉｔａｔｅｕｓｔｏｒｅｖｅａｌｔｈｅｍｏｌｅｃｕｌａｒｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆａｕｘｉｎｅｆｆｌｕｘｃａｒｒｉｅｒＯｓＰＩＮ１ｂａｎｄｉｔｓｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓｂｙｒｅｇｕｌａｔｉｎｇｐｏｌａｒａｕｘｉｎｔｒａｎｓｐｏｒｔｔｏｉｎｖｏｌｖｅｉｎｃｒｏｐｓｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ.Ｋｅｙｗｏｒｄｓ:ａｕｘｉｎｅｆｆｌｕｘｃａｒｒｉｅｒꎬＰＩＮ１ꎬｒｉｃｅꎬｗｈｅａｔꎬｍａｉｚｅꎬｓｏｙｂｅａｎ㊀㊀生长素输出载体蛋白在调节植物生长素极性运输中起重要作用ꎮ生长素极性运输参与胚胎形态发生(Ｂｌｉｌｏｕｅｔａｌ.ꎬ２００５)和侧生器官的形成(Ｃａｓｉｍｉｒｏｅｔａｌ.ꎬ２００１)ꎮ拟南芥基因组中的ＰＩＮ基因家族编码ＰＩＮ１－８的８种生长素输出载体蛋白(Ｆｒｉｍｌｅｔａｌ.ꎬ２００３ꎻＢｅｎｊａｍｉｎｓ＆Ｓｃｈｅｒｅｓꎬ２００８)ꎮＰＩＮ蛋白可以通过内吞作用转运到细胞质中ꎬ并形成循环小泡返回质膜(Ｇｅｌｄｎｅｒｅｔａｌ.ꎬ２００１)ꎮＡｔｐｉｎ１突变体植株表现出针状花序并且花和维管组织发育表现明显缺陷(Ｇäｌｗｅｉｌｅｒｅｔａｌ.ꎬ１９９８)ꎮＡｔＰＩＮ１的极性定位还影响胚胎的发育(Ｆｒｉｍｌｅｔａｌ.ꎬ２００３)ꎮＡｔＰＩＮ１分布于维管组织(Ｇäｌｗｅｉｌｅｒｅｔａｌ.ꎬ１９９８)㊁木质部薄壁组织(Ｇäｌｗｅｉｌｅｒｅｔａｌ.ꎬ１９９８ꎻＰａｌｍｅ＆Ｇäｌｗｅｉｌｅｒꎬ１９９９)㊁根表皮和皮层细胞(Ｂｌｉｌｏｕｅｔａｌ.ꎬ２００５)㊁分生组织表皮和原基表皮(Ｇｕｅｎｏｔｅｔａｌ.ꎬ２０１２)的细胞质中ꎮ但是ꎬ目前人们对单子叶植物和双子叶植物之间ＰＩＮ１蛋白的亚细胞定位差异仍不清楚ꎮＡｔＰＩＮ１的同源基因可以存在于水稻(Ｘｕｅｔａｌ.ꎬ２００５ꎻＬｉｅｔａｌ.ꎬ２０１９)㊁小麦(Ｓｉｎｇｈｅｔａｌ.ꎬ２０１８)㊁玉米(Ｇａｌｌａｖｏｔｔｉｅｔａｌ.ꎬ２００８)和大豆(Ｗａｎｇｅｔａｌ.ꎬ２０１５)的基因组中ꎮ在水稻的维管组织和根原基中可以检测到ＯｓＰＩＮ１的表达(Ｘｕｅｔａｌ.ꎬ２００５)ꎬＯｓＰＩＮ１以生长素依赖性的方式参与水稻根㊁茎㊁花序和分蘖的发育(Ｘｕｅｔａｌ.ꎬ２００５ꎻＬｉｅｔａｌ.ꎬ２０１９)ꎮＺｍＰＩＮ１ａ主要定位在玉米幼苗的上叶原基(Ｇａｌｌａｖｏｔｔｉｅｔａｌ.ꎬ２００８)㊁根中的中柱鞘细胞和内皮层细胞(Ｃａｒｒａｒｏｅｔａｌ.ꎬ２００６)㊁胚芽鞘(Ｋａｍａｄａｅｔａｌ.ꎬ２０１８)和叶片(Ｍｏｏｎｅｔａｌ.ꎬ２０１３)的表层细胞ꎮ此外ꎬＺｍＰＩＮ１ａ在根冠细胞中显示为胞质定位０２２１广㊀西㊀植㊀物４１卷(Ｆｏｒｅｓｔａｎｅｔａｌ.ꎬ２０１２)ꎬ在花序初生原基细胞中显示为非极性定位(Ｓｋｉｒｐａｎｅｔａｌ.ꎬ２００９)ꎮ但是ꎬ目前尚不清楚ＰＩＮ１在不同作物的根和胚中的亚细胞定位ꎬ包括水稻㊁小麦㊁玉米和大豆ꎮ在这项研究中ꎬ我们基于水稻 日本晴 ( Ｎｉｐｐｏｎｂａｒｅ )的ＯｓＰＩＮ１ｂ氨基酸序列ꎬ制备了抗兔的ＯｓＰＩＮ１ｂ多克隆抗体ꎬ利用该抗体开展的免疫组化实验发现水稻的ＯｓＰＩＮ１ｂ及小麦和玉米中的同源蛋白可以非极性定位在根和胚中子叶表皮细胞的细胞质膜上ꎬ而大豆的ＧｍＰＩＮ１ｂ可以非极性地定位在根中表皮细胞的质膜上ꎬ但是ꎬ在胚的子叶表皮细胞中是细胞质定位ꎮ此外ꎬ水稻根表皮细胞质膜上的ＯｓＰＩＮ１ｂ可以通过内吞运输途径进入到细胞质中ꎮ这些ＰＩＮ１定位结果将有助于我们研究生长素极性运输在水稻㊁小麦㊁玉米和大豆作物发育中的作用ꎮ１㊀材料与方法１.１植物材料植物材料为水稻品种 Ｎｉｐｐｏｎｂａｒｅ 和 丽江新团黑谷 ( ＬＴＨ )(Ｏｒｙｚａｓａｔｉｖａｓｕｂｓｐ.ｊａｐｏｎｉｃａ)㊁小麦(Ｔｒｉｔｉｃｕｍａｅｓｔｉｖｕｍ Ｃｈｕａｎｍａｉ１０７ )㊁玉米(Ｚｅａｍａｙｓ Ｂ７３ )和大豆(Ｇｌｙｃｉｎｅｍａｘ Ｗｉｌｌｉａｍｓ )ꎬ各作物种子置于２８ħ条件下水培萌发ꎬ使用生长了７ｄ的胚根分生区细胞和１ｄ的子叶胚来检测ＯｓＰＩＮ１ｂ及同源物的亚细胞定位ꎮ１.２抗体的制备和检测根据水稻 Ｎｉｐｐｏｎｂａｒｅ 的生长素输出载体ＯｓＰＩＮ１ｂ(Ｏｓ０２ｇ０７４３４００)的氨基酸序列人工合成多肽ＱＳＳＲＮＰＴＰＲＧＳＳＦＮＣꎬ并将其注入新西兰兔体内ꎮ通过ＥＬＩＳＡ方法检测到纯化的抗兔ＯｓＰＩＮ１ｂ多克隆抗体ꎬ其浓度为０.５１ｍｇ ｍＬ￣１(１ʒ２００００)(杭州华安生物技术有限公司)ꎮ１.３免疫杂交和免疫组化检测为检测ＯｓＰＩＮ１ｂ的表达ꎬ提取了水稻叶片和根的总蛋白ꎬ并用一抗[抗兔的ＯｓＰＩＮ１ｂ多克隆抗体(１ʒ２００)]和二抗[山羊抗兔的ＩｇＧ￣ＨＲＰ(１ʒ５０００)]进行了免疫杂交ꎮ为了检测蛋白亚细胞定位ꎬ使用或不使用５０ｍｍｏｌ Ｌ￣１ＢｒｅｆｅｌｄｉｎＡ(ＢＦＡ)(ｍｏｌｅｃｕｌａｒｐｒｏｂｅｓ)对不同农作物的根和胚处理９０ｍｉｎꎬ然后使用改良的免疫组织化学分析方法进行检测(Ｐａｃｉｏｒｅｋｅｔａｌ.ꎬ２００６)ꎮ具体如下:首先ꎬ将样品在２５ħ室温条件下用４％戊二醛溶液固定１ｈꎻ然后ꎬ３７ħ条件下用２％崩溃酶处理１ｈꎻ最后ꎬ用抗兔的ＯｓＰＩＮ１ｂ多克隆抗体(１ʒ２００)和二抗[驴抗兔的ＩｇＧ(Ｈ＋Ｌ)￣Ａｌｅｘａｆｌｕｏｒ４８８抗体(１ʒ５００)](ＪａｃｋｓｏｎＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ)进行免疫组化检测ꎮ使用ＬｅｉｃａＳＰ５激光共聚焦显微镜(ＬｅｉｃａＭｉｃｒｏｓｙｓｔｅｍｓ)观察ＯｓＰＩＮ１ｂ的定位ꎮ１.４生物信息学分析从ＮＣＢＩ(ｈｔｔｐｓ://ｗｗｗ.ｎｃｂｉ.ｎｌｍ.ｎｉｈ.ｇｏｖ/)获得ＯｓＰＩＮ１ｂ及其同源蛋白的氨基酸序列ꎬ通过在线网站(ｈｔｔｐｓ://ｗｗｗ.ｕｎｉｐｒｏｔ.ｏｒｇ/)分析ＯｓＰＩＮ１ｂ的跨膜结构域ꎬ使用软件ＶｅｃｔｏｒＮＴＩＳｕｉｔｅ６进行氨基酸序列比对ꎬ所有图片均使用Ｐｈｏｔｏｓｈｏｐ软件处理ꎮ２㊀结果与分析２.１不同作物的ＰＩＮ１序列相似性分析为了检测不同作物中生长素输出载体蛋白ＰＩＮ１的亚细胞定位ꎬ首先ꎬ我们对拟南芥(ＡｔＰＩＮ１)㊁水稻(ＯｓＰＩＮ１ｂ)㊁小麦(ＴａＰＩＮ１)㊁玉米(ＺｍＰＩＮ１ｂ)和大豆(ＧｍＰＩＮ１ｂ)中ＰＩＮ１的氨基酸序列进行比对分析(图１)ꎮ结果表明:ＡｔＰＩＮ１㊁ＴａＰＩＮ１㊁ＺｍＰＩＮ１ｂ㊁ＧｍＰＩＮ１ｂ的序列与ＯｓＰＩＮ１ｂ分别具有５８.６％㊁６１.５％㊁６２.５％㊁６１.９％的相似性ꎬ在ＯｓＰＩＮ１ｂ的氨基酸序列中存在１０个跨膜区ꎮ２.２水稻中ＯｓＰＩＮ１ｂ的检测ＰＩＮ１序列在水稻㊁小麦㊁玉米和大豆之间显示出高度相似性(图１)ꎮ我们选择ＯｓＰＩＮ１ｂ中的序列ＱＳＳＲＮＰＴＰＲＧＳＳＦＮＣꎬ通过人工合成多肽免疫兔子制备了抗兔的ＯｓＰＩＮ１ｂ多克隆抗体ꎮ为检测抗兔的ＯｓＰＩＮ１ｂ多克隆抗体的有效性ꎬ我们提取了水稻叶片和根的总蛋白ꎬ并使用抗兔的ＯｓＰＩＮ１ｂ多克隆抗体进行免疫杂交检测ꎮ结果表明ꎬ用ＯｓＰＩＮ１ｂ抗体可以检测到目标蛋白ＯｓＰＩＮ１ｂ(图２)ꎮ２.３ＰＩＮ１在不同农作物中的亚细胞定位通过免疫组织化学分析进一步检测了水稻㊁小麦㊁玉米和大豆根中ＰＩＮ１的亚细胞定位ꎬ发现１２２１８期武丽霞等:生长素输出载体蛋白ＰＩＮ１在作物根和胚中的亚细胞定位水稻ꎬ小麦ꎬ玉米ꎬ大豆和拟南芥之间的ＰＩＮ１氨基酸序列比对ꎬ红框中的氨基酸序列为水稻ＯｓＰＩＮ１ｂ的跨膜结构域ꎮＰＩＮ１ａｍｉｎｏａｃｉｄｓｅｑｕｅｎｃｅｓａｒｅａｌｉｇｎｅｄａｍｏｎｇｒｉｃｅꎬｗｈｅａｔꎬｍａｉｚｅꎬｓｏｙｂｅａｎａｎｄＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓꎬａｎｄｒｅｄｂｏｘｅｓｓｈｏｗｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅｄｏｍａｉｎｓｏｆｒｉｃｅＯｓＰＩＮ１ｂａｍｉｎｏａｃｉｄｓｅｑｕｅｃｅｓ.图１㊀ＰＩＮ１的氨基酸序列比对Ｆｉｇ.１㊀ＰＩＮ１ａｍｉｎｏａｃｉｄｓｅｑｕｅｎｃｅａｌｉｇｎｍｅｎｔＰＩＮ１虽然可定位于根表皮细胞的细胞质膜上ꎬ但没有明显的极性分布(图３:Ａ－Ｄ)ꎮ在检测ＰＩＮ１在胚细胞中的定位时ꎬ发现ＰＩＮ１虽然可分布在水稻(图３:Ｅ)㊁小麦(图３:Ｆ)和玉米(图３:Ｇ)胚中子叶表皮细胞的细胞质膜上ꎬ但没有明显的极性分布ꎮ大豆中的ＧｍＰＩＮ１ｂ非极性分布在根表皮细２２２１广㊀西㊀植㊀物４１卷提取水稻 日本晴 叶片(Ａ)和根(Ｂ)中的总蛋白ꎬ用抗兔的ＯｓＰＩＮ１ｂ多克隆抗体进行免疫杂交ꎮ箭头指示目标蛋白ＯｓＰＩＮ１ｂ的条带ꎮＴｏｔａｌｐｒｏｔｅｉｎｓｏｆｒｉｃｅｌｅａｖｅｓ(Ａ)ａｎｄｒｏｏｔｓ(Ｂ)ｗｅｒｅｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｒｉｃｅ Ｎｉｐｐｏｎｂａｒｅ ａｎｄｂｌｏｔｔｅｄｗｉｔｈａｎｔｉ￣ｒａｂｂｉｔＯｓＰＩＮ１ｂｐｏｌｙｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙ.ＡｒｒｏｗｐｏｉｎｔｓｔｏｔｈｅｔａｒｇｅｔｐｒｏｔｅｉｎＯｓＰＩＮ１ｂ.图２㊀蛋白免疫杂交检测水稻叶片和根中的ＯｓＰＩＮ１ｂＦｉｇ.２㊀ＤｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＯｓＰＩＮ１ｂｉｎｒｉｃｅｌｅａｖｅｓａｎｄｒｏｏｔｓｂｙｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｍｅｔｈｏｄ胞的细胞质膜上ꎬ而在胚的子叶表皮细胞中则分布于细胞质中(图３:Ｈ)ꎮ２.４水稻中ＯｓＰＩＮ１ｂ的胞吞检测由于ＯｓＰＩＮ１ｂ蛋白定位于细胞质膜上(图３:ＡꎬＥ)ꎬ因此ꎬ我们进一步检测了ＯｓＰＩＮ１ｂ是否可以通过胞吞的方式从细胞质膜转运入细胞质ꎮ用蛋白转运抑制剂ＢＦＡ处理水稻 Ｎｉｐｐｏｎｂａｒｅ 和 ＬＴＨ 的根尖ꎬ用抗兔的ＯｓＰＩＮ１ｂ多克隆抗体开展免疫组织化学实验ꎬ结果发现在细胞质中可以检测到ＯｓＰＩＮ１ｂ蛋白的聚集(图４)ꎮ这表明ＯｓＰＩＮ１ｂ可以通过胞吞途径从细胞质膜转移到细胞质中ꎮ３㊀讨论与结论生长素输出载体蛋白ＰＩＮ家族在植物发育中起着至关重要的作用ꎮ在这项研究中ꎬ我们利用抗兔的ＯｓＰＩＮ１ｂ多克隆抗体有效检测了水稻㊁小麦㊁玉米和大豆的胚根分生区表皮细胞及胚中子叶表皮细胞的ＯｓＰＩＮ１及其同源物的亚细胞定位ꎬ结果发现ＯｓＰＩＮ１ｂ及其同源物分布在水稻㊁小麦㊁玉米和大豆的根和胚中子叶表皮细胞的细胞质膜及细胞质中ꎮ不同作物中的相同细胞定位表明ＰＩＮ１在不同植物发育中ꎬ其调节生长素分布功能是保守的ꎮ此外ꎬ我们也注意到与拟南芥ＡｔＰＩＮ１的极性定位相比(Ｆｒｉｍｌｅｔａｌ.ꎬ２００３)ꎬ在不同农作物的根表皮细胞中ꎬＯｓＰＩＮ１及其同源物的定位是非极性的ꎮＯｓＰＩＮ１ｂ的氨基酸序列与ＡｔＰＩＮ１具有５８.６％的相似性ꎬ因此ꎬ不同作物和拟南芥ＡｔＰＩＮ１蛋白的亚细胞定位模式存在的差异可能与不同植物中ＰＩＮ１蛋白结构差异有关ꎮ玉米中的ＺｍＰＩＮ１ａ在不同玉米组织中的定位存在极性定位(Ｃａｒｒａｒｏｅｔａｌ.ꎬ２００６ꎻＧａｌｌａｖｏｔｔｉｅｔａｌ.ꎬ２００８ꎻＭｏｏｎｅｔａｌ.ꎬ２０１３ꎻＫａｍａｄａｅｔａｌ.ꎬ２０１８)㊁非极性定位(Ｓｋｉｒｐａｎｅｔａｌ.ꎬ２００９)和胞质定位(Ｆｏｒｅｓｔａｎｅｔａｌ.ꎬ２０１２)ꎬ一些研究也发现ＡｔＰＩＮ１的极性分布与胚发育中的生长素动态相关(Ｆｒｉｍｌｅｔａｌ.ꎬ２００３)ꎮ在本研究中ꎬ用于ＯｓＰＩＮ１ｂ及其同源物细胞定位观察的胚根及子叶胚都处于植物发育的早期阶段ꎬ这表明不同作物中ＰＩＮ１的定位还与作物组织发育阶段有关ꎮ此外ꎬ利用抗兔的ＯｓＰＩＮ１ｂ多克隆抗体可以检测到ＯｓＰＩＮ１ｂ蛋白ꎮ进一步分析结果发现ＯｓＰＩＮ１ｂ与ＯｓＰＩＮ１ａ氨基酸序列相似性为６２.４％ꎬＯｓＰＩＮ１ａ㊁ＯｓＰＩＮ１ｂ蛋白分子量分别为６４.７㊁５９.３ｋＤꎬ且ＯｓＰＩＮ１ａ氨基酸序列中含有用于制备抗兔的ＯｓＰＩＮ１ｂ多克隆抗体的序列ＱＳＳＲＮＰＴＰＲＧＳＳＦＮＣꎮ因此ꎬ不能完全排除所检测到的蛋白条带中含有ＯｓＰＩＮ１ａꎬ而这也可能部分解释了我们在根表皮细胞中所观察到的ＯｓＰＩＮ１ｂ及其同源物的非极性定位ꎮＰＩＮ蛋白由于胞吞作用而产生的细胞定位的改变可影响生长素的极性运输ꎬ从而进一步调控器官形成(Ｋｌｅｉｎｅ￣Ｖｅｈｎｅｔａｌ.ꎬ２００８)ꎮ本研究结果发现ＯｓＰＩＮ１ｂ可以通过胞吞途径进入到细胞质中ꎮ这显示由于细胞的胞吞作用ꎬＯｓＰＩＮ１ｂ及其同源物的细胞质膜及细胞质定位可能会发生变化ꎬ并参与调控植物内生长素的分布ꎮＰＩＮ蛋白的细胞定位可受到其他物质如水杨酸的调控(Ｄｕｅｔａｌ.ꎬ２０１３)ꎮ但是ꎬ我们观察到ＯｓＰＩＮ１ｂ的定位可由自身胞吞作用而改变ꎬ因此ꎬ不同作物中ＰＩＮ１蛋３２２１８期武丽霞等:生长素输出载体蛋白ＰＩＮ１在作物根和胚中的亚细胞定位水稻 日本晴 (ＡꎬＥ)ꎬ小麦(ＢꎬＦ)ꎬ玉米(ＣꎬＧ)和大豆(ＤꎬＨ)的根(Ａ－Ｄ)和胚(Ｅ－Ｈ)用抗兔的ＯｓＰＩＮ１ｂ多克隆抗体开展免疫组化实验ꎮ标尺＝１０μｍꎮＲｏｏｔｓ(Ａ－Ｄ)ａｎｄｅｍｂｒｙｏｓ(Ｅ－Ｈ)ｏｆｒｉｃｅ Ｎｉｐｐｏｎｂａｒｅ (ＡꎬＥ)ꎬｗｈｅａｔ(ＢꎬＦ)ꎬｍａｉｚｅ(ＣꎬＧ)ａｎｄｓｏｙｂｅａｎ(ＤꎬＨ)ｗｅｒｅｄｅｖｅｌｏｐｅｄｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙａｓｓａｙｗｉｔｈａｎｔｉ￣ｒａｂｂｉｔＯｓＰＩＮ１ｂｐｏｌｙｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙ.Ｂａｒｓ＝１０μｍ.图３㊀ＰＩＮ１在根和胚的子叶表皮细胞中的亚细胞定位Ｆｉｇ.３㊀ＳｕｂｃｅｌｌｕｌａｒｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎｏｆＰＩＮ１ｉｎｒｏｏｔａｎｄｅｍｂｒｙｏｅｐｉｄｅｒｍａｌｃｅｌｌｓ用２５μｍｏｌ Ｌ￣１ＢＦＡ处理水稻品种 丽江新团黑谷 (Ａ)和 日本晴 (Ｂ)的根尖９０ｍｉｎꎬ然后用抗兔的ＯｓＰＩＮ１ｂ多克隆抗体通过免疫组化检测ＯｓＰＩＮ１ｂ的胞吞ꎮ箭头指示根表皮细胞胞质中ＯｓＰＩＮ１ｂ蛋白聚集体ꎮ标尺＝１０μｍꎮＲｏｏｔｓｏｆｒｉｃｅｌｉｎｅｓ ＬＴＨ (Ａ)ａｎｄ Ｎｉｐｐｏｎｂａｒｅ (Ｂ)ｗｅｒｅｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈ２５μｍｏｌ Ｌ￣１ＢＦＡｆｏｒ９０ｍｉｎꎬａｎｄｂｌｏｔｔｅｄｗｉｔｈａｎｔｉ￣ｒａｂｂｉｔＯｓＰＩＮ１ｂｐｏｌｙｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙｂｙｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙａｓｓａｙ.ＡｒｒｏｗｐｏｉｎｔｓｔｏｔｈｅＯｓＰＩＮ１ｂｉｎｔｅｒｎａｌｉｚａｔｉｏｎｉｎｃｙｔｏｐｌａｓｍａｏｆｒｏｏｔｅｐｉｄｅｒｍａｌｃｅｌｌｓ.Ｂａｒｓ＝１０μｍ.图４㊀水稻根表皮细胞中ＯｓＰＩＮ１ｂ的胞吞检测Ｆｉｇ.４㊀ＥｎｄｏｃｙｔｏｓｉｓｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＯｓＰＩＮ１ｂｉｎｔｈｅｃｙｔｏｐｌａｓｍａｏｆｒｉｃｅｒｏｏｔｅｐｉｄｅｒｍａｌｃｅｌｌｓ４２２１广㊀西㊀植㊀物４１卷白的亚细胞定位是一个动态的过程ꎮ不同作物中ＯｓＰＩＮ１ｂ及其同源物可非极性定位于细胞质膜及细胞质中ꎬ这是一个动态的分布过程ꎬ并与植物所处的发育阶段密切相关ꎮＯｓＰＩＮ１ｂ及其同源物的亚细胞定位将有助于揭示生长素输出载体通过影响生长素极性分布而参与调控农作物中根和胚发育的分子机制ꎮ登录号㊀文章中相关蛋白在ＮＣＢＩ数据库中的登录号分别为ＡｔＰＩＮ１(ＮＰ＿１７７５００.１)㊁ＯｓＰＩＮ１ｂ(ＸＰ＿０１５６１６０１４.１)㊁ＴａＰＩＮ１(ＡＡＳ１９８５８.１)㊁ＺｍＰＩＮ１ｂ(ＡＢＨ０９２４３.１)㊁ＧｍＰＩＮ１ｂ(ＮＰ＿００１２３７５４６.２)ꎮ参考文献:ＢＥＮＪＡＭＩＮＳＲꎬＳＣＨＥＲＥＳＢꎬ２００８.Ａｕｘｉｎ:ｔｈｅｌｏｏｐｉｎｇｓｔａｒｉｎｐｌａｎｔｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ[Ｊ].ＡｎｎＲｅｖＰｌａｎｔＢｉｏｌꎬ５９(１):４４３－４６５.ＢＬＩＬＯＵＩꎬＸＵＪꎬＷＩＬＤＷＡＴＥＲＭꎬｅｔａｌ.ꎬ２００５.ＴｈｅＰＩＮａｕｘｉｎｅｆｆｌｕｘｆａｃｉｌｉｔａｔｏｒｎｅｔｗｏｒｋｃｏｎｔｒｏｌｓｇｒｏｗｔｈａｎｄｐａｔｔｅｒｎｉｎｇｉｎＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓｒｏｏｔｓ[Ｊ].Ｎａｔｕｒｅꎬ４３３(７０２１):３９－４４.ＣＡＲＲＡＲＯＮꎬＦＯＲＥＳＴＡＮＣꎬＣＡＮＯＶＡＳꎬｅｔａｌ.ꎬ２００６.ＺｍＰＩＮ１ａａｎｄＺｍＰＩＮ１ｂｅｎｃｏｄｅｔｗｏｎｏｖｅｌｐｕｔａｔｉｖｅｃａｎｄｉｄａｔｅｓｆｏｒｐｏｌａｒａｕｘｉｎｔｒａｎｓｐｏｒｔａｎｄｐｌａｎｔａｒｃｈｉｔｅｃｔｕｒｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｍａｉｚｅ[Ｊ].ＰｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌꎬ１４２(１):２５４－２６４.ＣＡＳＩＭＩＲＯＩꎬＭＡＲＣＨＡＮＴＡꎬＢＨＡＬＥＲＡＯＲＰꎬｅｔａｌ.ꎬ２００１.ＡｕｘｉｎｔｒａｎｓｐｏｒｔｐｒｏｍｏｔｅｓＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓｌａｔｅｒａｌｒｏｏｔｉｎｉｔｉａｔｉｏｎ[Ｊ].ＴｈｅＰｌａｎｔＣｅｌｌꎬ１３(４):８４３－８５２.ＤＵＹＬꎬＴＥＪＯＳＲꎬＢＥＣＫＭꎬｅｔａｌ.ꎬ２０１３.Ｓａｌｉｃｙｌｉｃａｃｉｄｉｎｔｅｒｆｅｒｅｓｗｉｔｈｃｌａｔｈｒｉｎ￣ｍｅｄｉａｔｅｄｅｎｄｏｃｙｔｉｃｐｒｏｔｅｉｎｔｒａｆｆｉｃｋｉｎｇ[Ｊ].ＰＮＡＳꎬ１１０(１９):７９４６－７９５１.ＦＯＲＥＳＴＡＮＣꎬＦＡＲＩＮＡＴＩＳꎬＶＡＲＯＴＴＯＳꎬ２０１２.ＴｈｅｍａｉｚｅＰＩＮｇｅｎｅｆａｍｉｌｙｏｆａｕｘｉｎｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒｓ[Ｊ].ＦｒｏｎｔＰｌａｎｔＳｃｉꎬ３(１６):１６.ＦＲＩＭＬＪꎬＶＩＥＴＥＮＡꎬＳＡＵＥＲＭꎬｅｔａｌ.ꎬ２００３.Ｅｆｆｌｕｘ￣ｄｅｐｅｎｄｅｎｔａｕｘｉｎｇｒａｄｉｅｎｔｓｅｓｔａｂｌｉｓｈｔｈｅａｐｉｃａｌ￣ｂａｓａｌａｘｉｓｏｆＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ[Ｊ].Ｎａｔｕｒｅ(Ｌｏｎｄｏｎ)ꎬ４２６(６９６３):１４７－１５３.ＧＡＬＬＡＶＯＴＴＩＡꎬＹＡＮＧＹꎬＳＣＨＭＩＤＴＲＪꎬｅｔａｌ.ꎬ２００８.Ｔｈｅｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｂｅｔｗｅｅｎａｕｘｉｎｔｒａｎｓｐｏｒｔａｎｄｍａｉｚｅｂｒａｎｃｈｉｎｇ[Ｊ].ＰｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌꎬ１４７(４):１９１３－１９２３.ＧÄＬＷＥＩＬＥＲＬꎬＧＵＡＮＣꎬＭＵＬＬＥＲＡꎬｅｔａｌ.ꎬ１９９８.ＲｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｐｏｌａｒａｕｘｉｎｔｒａｎｓｐｏｒｔｂｙＡｔＰＩＮ１ｉｎＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓｖａｓｃｕｌａｒｔｉｓｓｕｅ[Ｊ].Ｓｃｉｅｎｃｅꎬ２８２(５３９７):２２２６－２２３０.ＧＥＬＤＮＥＲＮꎬＦＲＩＭＬＪꎬＳＴＩＥＲＨＯＦＹＤꎬｅｔａｌ.ꎬ２００１.ＡｕｘｉｎｔｒａｎｓｐｏｒｔｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓｂｌｏｃｋＰＩＮ１ｃｙｃｌｉｎｇａｎｄｖｅｓｉｃｌｅｔｒａｆｆｉｃｋｉｎｇ[Ｊ].Ｎａｔｕｒｅꎬ４１３(６８５４):４２５－４２８.ＧＵＥＮＯＴＢꎬＢＡＹＥＲＥꎬＫＩＥＲＺＫＯＷＳＫＩＤꎬｅｔａｌ.ꎬ２０１２.ＰＩＮ１￣ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｌｅａｆｉｎｉｔｉａｔｉｏｎｉｎＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ[Ｊ].ＰｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌꎬ１５９(４):１５０１－１５１０.ＫＡＭＡＤＡＭꎬＭＩＹＡＭＯＴＯＫꎬＯＫＡＭꎬｅｔａｌ.ꎬ２０１８.ＰｒｏｃｅｄｕｒｅｓｆｏｒｃｈｅｍｉｃａｌｆｉｘａｔｉｏｎｉｎｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌａｎａｌｙｓｅｓｏｆＰＩＮｐｒｏｔｅｉｎｓｒｅｇｕｌａｔｉｎｇｐｏｌａｒａｕｘｉｎｔｒａｎｓｐｏｒｔ:ｒｅｌｅｖａｎｃｅｔｏｓｐａｃｅｆｌｉｇｈｔｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ[Ｊ].ＬｉｆｅＳｃｉＳｐａｃｅＲｅｓ(Ａｍｓｔ)ꎬ１８:４２－５１.ＫＬＥＩＮＥ￣ＶＥＨＮＪꎬＤＨＯＮＵＫＳＨＥＰꎬＳＡＵＥＲＭꎬｅｔａｌ.ꎬ２００８.ＡＲＦＧＥＦ￣ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｔｒａｎｓｃｙｔｏｓｉｓａｎｄｐｏｌａｒｄｅｌｉｖｅｒｙｏｆＰＩＮａｕｘｉｎｃａｒｒｉｅｒｓｉｎＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ[Ｊ].ＣｕｒｒＢｉｏｌꎬ１８(７):５２６－５３１.ＬＩＹꎬＺＨＵＪＳꎬＷＵＬＬꎬｅｔａｌ.ꎬ２０１９.ＦｕｎｃｔｉｏｎａｌｄｉｖｅｒｇｅｎｃｅｏｆＰＩＮ１ｐａｒａｌｏｇｏｕｓｇｅｎｅｓｉｎｒｉｃｅ[Ｊ].ＰｌａｎｔＣｅｌｌＰｈｙｓｉｏｌꎬ６０(１２):２７２０－２７３２.ＭＯＯＮＪꎬＣＡＮＤＥＬＡＨꎬＨＡＫＥＳꎬ２０１３.Ｔｈｅｌｉｇｕｌｅｌｅｓｓｎａｒｒｏｗｍｕｔａｔｉｏｎａｆｆｅｃｔｓｐｒｏｘｉｍａｌ￣ｄｉｓｔａｌｓｉｇｎａｌｉｎｇａｎｄｌｅａｆｇｒｏｗｔｈ[Ｊ].Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔꎬ１４０(２):４０５－４１２.ＰＡＣＩＯＲＥＫＴꎬＳＡＵＥＲＭꎬＢＡＬＬＡＪꎬｅｔａｌ.ꎬ２００６.Ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｃｈｅｍｉｃａｌｔｅｃｈｎｉｑｕｅｆｏｒｐｒｏｔｅｉｎｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎｉｎｓｅｃｔｉｏｎｓｏｆｐｌａｎｔｔｉｓｓｕｅｓ[Ｊ].ＮａｔｕｒｅＰｒｏｔｏｃｏｌｓꎬ１(１):１０４－１０７.ＰＡＬＭＥＫꎬＧÄＬＷＥＩＬＥＲＬꎬ１９９９.ＰＩＮ￣ｐｏｉｎｔｉｎｇｔｈｅｍｏｌｅｃｕｌａｒｂａｓｉｓｏｆａｕｘｉｎｔｒａｎｓｐｏｒｔ[Ｊ].ＣｕｒｒＯｐｉｎＰｌａｎｔＢｉｏｌꎬ２(５):３７５－３８１.ＳＫＩＲＰＡＮＡꎬＣＵＬＬＥＲＡＨꎬＧＡＬＬＡＶＯＴＴＩＡꎬｅｔａｌ.ꎬ２００９.ＢＡＲＲＥＮＩＮＦＬＯＲＥＳＣＥＮＣＥ２ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｗｉｔｈＺｍＰＩＮ１ａｓｕｇｇｅｓｔｓａｒｏｌｅｉｎａｕｘｉｎｔｒａｎｓｐｏｒｔｄｕｒｉｎｇｍａｉｚｅｉｎｆｌｏｒｅｓｃｅｎｃｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ[Ｊ].ＰｌａｎｔＣｅｌｌＰｈｙｓｉｏｌꎬ５０(３):６５２－６５７.ＳＩＮＧＨＫꎬＳＩＮＧＨＪꎬＪＩＮＤＡＬＳꎬｅｔａｌ.ꎬ２０１８.ＳｔｒｕｃｔｕｒａｌａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｅｖｏｌｕｔｉｏｎｏｆａｎａｕｘｉｎｅｆｆｌｕｘｃａｒｒｉｅｒＰＩＮ１ａｎｄｉｔｓｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｉｎｃｏｍｍｏｎｗｈｅａｔ[Ｊ].ＦｕｎｃｔＩｎｔｅｇｒＧｅｎｏｍｉｃꎬ１９(１):２９－４１.ＷＡＮＧＹＱꎬＣＨＡＩＣＬꎬＶＡＬＬＩＹＯＤＡＮＢꎬｅｔａｌ.ꎬ２０１５.Ｇｅｎｏｍｅ￣ｗｉｄｅａｎａｌｙｓｉｓａｎｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐｒｏｆｉｌｉｎｇｏｆｔｈｅＰＩＮａｕｘｉｎｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒｇｅｎｅｆａｍｉｌｙｉｎｓｏｙｂｅａｎ(Ｇｌｙｃｉｎｅｍａｘ) [Ｊ].ＢＭＣＧｅｎｏｍｉｃｓꎬ１６(１):９５１－９６３.ＸＵＭꎬＺＨＵＬꎬＳＨＯＵＨＸꎬｅｔａｌ.ꎬ２００５.ＡＰＩＮ１ｆａｍｉｌｙｇｅｎｅꎬＯｓＰＩＮ１ꎬｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎａｕｘｉｎ￣ｄｅｐｅｎｄｅｎｔａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓｒｏｏｔｅｍｅｒｇｅｎｃｅａｎｄｔｉｌｌｅｒｉｎｇｉｎｒｉｃｅ[Ｊ].ＰｌａｎｔＣｅｌｌＰｈｙｓｉｏｌꎬ４６(１０):１６７４－１６８１.(责任编辑㊀周翠鸣)５２２１８期武丽霞等:生长素输出载体蛋白ＰＩＮ１在作物根和胚中的亚细胞定位。

年云南省高等教育教学成果奖评审结果————————————————————————————————作者：————————————————————————————————日期：22005年云南省高等教育教学成果奖评审结果推荐国家级一等奖序号项目名称成果完成单位获奖人（集体主要成员）1 新世纪公共事业管理人才培养模式研究与实践云南大学崔运武、高力、张健东、候江红、方盛举2 材料工程专业学生能力培养的研究与实践昆明理工大学史庆南、刘荣佩、周融、张代明推荐国家级二等奖3 “3+1”教学模式的实践与完善——东南亚泰、缅、越、老语言文化人才培养模式云南民族大学陆生、吕士清、王何忠、杨丽周、杨光远4 省级重点建设专业林学专业建设与示范西南林大学胥辉、李根前、石卓功、周蛟、徐正会5 云南大学“数理基地”建设云南大学田兴时、徐贵桐、陈永康、杨富春、张力6 实践第一探索创新——植物生物学实验教学改革与实践云南大学王若南、曹玉7 边疆多民族地区高校普通话课程“层级分类教学模式”改革的探索云南师范大学罗明东、崔梅、颜晓云、单春樱、李迈8 以“质量点”管理为核心的高等教育课程教学质量监控体系建设的研究与实践云南中医学院李庆生、郭兆刚、贾勇、熊磊、杨健武9 “信号与系统”教学建设、改革与实践云南大学、云南民族大学梁虹、陈跃斌、杨鉴、高飞、梁洁10 冶金工程重点学科新世纪系列教材建设（教材）昆明理工大学彭金辉、陈雯、魏永昶、马克毅、朱祖泽11 云南民族美术资源在教学、创作中的应用与实践云南艺术学院武俊、陇艺梅、汤海涛、李靖寰12 云南农业大学教学质量监控与评价体系的构建与实践云南农业大学吴伯志、洪树琼、徐昆龙、雷兴刚、郑永春13 省级重点建设专业“数学与应用数学”专业建设的探究与实践云南师范大学郭震、董义琳、马煜、王涛、代龙14 高等农业院校创业型人才培养模式的研究与实践云南农业大学戴志明、郭华春、段纲、赵燕妮、刘鸿高15 云南大学函授、夜大学教学监控、评估的实践完善及规范云南大学李炎、王娅、刘俊玮、王敏、杜超16 《地理学基础》：地理科学类学术著作性教材（教材）云南师范大学潘玉君17 大基础平台下的柔性多模块教学改革昆明理工大学迟毅林、董为民、刘泓滨、廖丕博、罗德扬18 云南大学创办文科试验班的探索与实践云南大学殷永林19 云南师范大学本科人才培养模式改革的研究与实践云南师范大学曾华、罗明东、郑勤红、邹敏、陈瑶20 市场营销学课程立体化教学包云南财贸学院吴健安、王旭、朱立、聂元昆21 生态学教学理论探索与实践——21世纪大学生态教学内容优化及课程体系建设云南大学段昌群、江望高、常学秀、杨雪清、王焕校省级一等奖序号项目名称成果完成单位获奖人（集体主要成员）1 新世纪公共事业管理人才培养模式研究与实践云南大学崔运武、高力、张健东、候江红、方盛举2 材料工程专业学生能力培养的研究与实践昆明理工大学史庆南、刘荣佩、周融、张代明3 “3+1”教学模式的实践与完善——东南亚泰、缅、越、老语言文化人才培养模式云南民族大学陆生、吕士清、王何忠、杨丽周、杨光远4 省级重点建设专业林学专业建设与示范西南林大学胥辉、李根前、石卓功、周蛟、徐正会5 云南大学“数理基地”建设云南大学田兴时、徐贵桐、陈永康、杨富春、张力6 实践第一探索创新——植物生物学实验教学改革与实践云南大学王若南、曹玉47 边疆多民族地区高校普通话课程“层级分类教学模式”改革的探索云南师范大学罗明东、崔梅、颜晓云、单春樱、李迈8 以“质量点”管理为核心的高等教育课程教学质量监控体系建设的研究与实践云南中医学院李庆生、郭兆刚、贾勇、熊磊、杨健武9 “信号与系统”教学建设、改革与实践云南大学、云南民族大学梁虹、陈跃斌、杨鉴、高飞、梁洁10 冶金工程重点学科新世纪系列教材建设（教材）昆明理工大学彭金辉、陈雯、魏永昶、马克毅、朱祖泽11 云南民族美术资源在教学、创作中的应用与实践云南艺术学院武俊、陇艺梅、汤海涛、李靖寰12 云南农业大学教学质量监控与评价体系的构建与实践云南农业大学吴伯志、洪树琼、徐昆龙、雷兴刚、郑永春13 省级重点建设专业“数学与应用数学”专业建设的探究与实践云南师范大学郭震、董义琳、马煜、王涛、代龙14 高等农业院校创业型人才培养模式的研究与实践云南农业大学戴志明、郭华春、段纲、赵燕妮、刘鸿高15 云南大学函授、夜大学教学监控、评估的实践完善及规范云南大学李炎、王娅、刘俊玮、王敏、杜超16 《地理学基础》：地理科学类学术著作性教材（教材）云南师范大学潘玉君17 大基础平台下的柔性多模块教学改革昆明理工大学迟毅林、董为民、刘泓滨、廖丕博、罗德扬18 云南大学创办文科试验班的探索与实践云南大学殷永林19 云南师范大学本科人才培养模式改革的研究与实践云南师范大学曾华、罗明东、郑勤红、邹敏、陈瑶20 市场营销学课程立体化教学包云南财贸学院吴健安、王旭、朱立、聂元昆21 生态学教学理论探索与实践——21世纪大学生态教学内容优化及课程体系建设云南大学段昌群、江望高、常学秀、杨雪清、王焕校22 地方高师汉语言文学专业师范生“教师能力”培养工程的构建及实施玉溪师范学院任宏志、张苹、车柏青、周志远523 文学概论教材建设与教学创新（教材）曲靖师范学院张永刚24 国外汉语人才联合培养模式探索云南师范大学骆小所、吴应辉、于燕京、袁焱、魏红25 《污染生态学》教材云南大学王焕校、常学秀、段昌群26 博士学位论文隐名评审制度和论文评价指标体系的建立及应用实践昆明理工大学高绿绮、王华、林峰27 云南省高校计算机基础教育的改革与实践昆明理工大学、云南省教育厅张洪明、张国华、叶绿、杨毅、楼静28 金工实习课程建设及改革（教材等）昆明理工大学陈君若、魏镜弢、葛夏文、马俊武、向启宾29 本科毕业设计（论文）工作改革与实践昆明理工大学张英杰、徐天茂、刘荣佩、黄前光、周梅村30 本科计算机教学改革与发展昆明理工大学楼静、王建华、张启富、张明坤、秦卫平省级二等奖31 艺术设计专业人才培养模式改革与实践云南大学和家胜、杨中碧、郑滋、农伟、杨晓翔32 “叙述学”研究生课程建设云南大学谭君强33 推行学分制绩点，关注学生学习质量——云南大学资环学院学分制绩点试点改革云南大学郭陵之、谢应齐、卜玉康、刘英34 数学建模与数学实验课程建设云南大学胡光华、赵晓华、谭建国、陆正福、杨富春35 有时代特色的“化学专业英语”课程建设云南大学赵逸云、方瑞斌、邓世昆、古昆、邹永明36 “中国文化史”课程教学内容和方法的改进云南大学杨兆荣37 转变观念创新方法——提高学生英语综合能力的探索与实践云南大学段竹英38 校企合作增强办学实力提高人才培养质量的探索昆明理工大学、中国水电十四局、束洪春、王海军、李琴书、李跃平、王建春6云南省水利水电勘测设计研究院39 使用英文物理教材进行双语多媒体课堂教学的改革试点昆明理工大学王安安、伏云昌、陈劲波、吴光敏、樊则宾40 院级教学质量监控体系的构建与实践昆明理工大学孙俊、程赫明、黄跃波、陈庆华、刘铮41 工程力学中电测实验教学环节的改革与实践昆明理工大学罗成玲、王时越、文宏光、迟珊、潘琪42 创新素质教育与创造实践昆明理工大学官德娟、朱昆莉、吴海涛、那裕康、段正华43 “向知识要金牌”：走学校体育教育与竞技体育协调发展之路云南师范大学赵玲玲、熊小铭、刘坚、金黄斌、杨秀芝44 教育学重点专业建设的研究与实践云南师范大学傅淳、罗黎辉、李天凤、张锋、罗明东45 云南师大学生学术科技活动的探索与实践云南师范大学周本贞、欧阳俊虎、杨映霞、姜扬、熊永翔46 物理学专业教学改革与建设的探索云南师范大学张雄、马力、侯德东、解福瑶、刘艳春47 英语专业选修课建设云南师范大学刘守兰、张克勤、杨端和、谢明、刘汉玉48 云南农业大学教学督导工作的实践与创新云南农业大学陈海如、洪树琼、张世光、杨裕后、李晓英49 精心组织“形势与政策”课，积极推进思想政治理论课教学改革云南农业大学刘光维、王飞、李树坚、杨云、杨玲50 厅校合作构建创新型水利人才培养模式的研究与实践云南农业大学文俊、杨荣新、龚爱民、李靖、王春彦51 创新型高职人才培养模式的探索与实践云南农业大学雷兴刚、吕才有、洪树琼、陆自强、代卫东52 基于数据库的多媒体课件开发平台的研究及应用云南农业大学杨林楠、鲁绍坤、吴文斗、张超、张丽莲53 高等院校体育俱乐部教学管理实施研究西南林学院韦群杰、索建强、李任波、郭银华、李光莲54 成人高等教育学分制教学管理体系的研究西南林学院张玉光、周远、赵丽芳、邓成琼、张武仙55 树木学教育教学建设与研究西南林学院邓莉兰、樊国盛、徐声远、区智、孙永科56 化学实验课程体系教学改革研究与实践西南林学院陈玉惠、付惠、刘祥义、王文久、刘建祥、7任梅蓉57 运用现代教育技术的实践与成果西南林学院徐声远、罗大叶、赵同林、孙永科、鲁宁58 医科大学生思想文化素质教育理论与实践昆明医学院王灿平、张瑞宏、熊万兴、张毅萍、陈桂勤59 病理学多媒体课件的设计制作及其应用昆明医学院章宗籍、阮永华、郭萍、华海容、邹英鹰60 加强基地建设，规范实践教学管理，强化学生临床能力培养昆明医学院杨凌、崔进、陈有华、李保刚、周萍61 积累和创新，突破教学难点——“牙体比较解剖法”在牙体解剖生理教学中的运用昆明医学院杨春、沈丽宁、李松、罗应伟、解危62 强化素质教育，创建“以问题为中心，教与学互动”的局部解剖学教学新模式昆明医学院孙俊、王金德、陈绍春、邹智荣、李兴国63 外科总论及手术学实验教学改革成果昆明医学院陈有华、李保刚、尹继波、张家骅、李俊64 《正常人体解剖学》多媒体课件开发及应用云南中医学院杨恩彬、和凤军、宋波、武煜明、唐柱生65 中医方剂学教学参考书《中医方剂精要及趣味记忆》云南中医学院秦竹、胥筱云、李铭66 《少数民族传统体育文化论纲》多媒体教学课件的开发与应用云南民族大学赵静冬、李波、赖云华67 《富有特色的少数民族预科教学模式的构建与实践》云南民族大学吴云虹、李春波68 化学网络教学模式的研究与实践云南民族大学王红斌、杨敏、戴云、董学畅、陈琳69 《天然有机化学》课程体系建设与实践云南民族大学戴云、陈海云、杨海英、任红雷、曾茗70 中小学艺术教育与音乐舞蹈复合型艺术师资培养模式研究与实践云南艺术学院朱红、于景春、徐梅、李伟平、农布七林71 《音乐美学》课程建设云南艺术学院申波872 以学生为本的学分制教学改革研究与实践云南财贸学院姚大金、王力宾、王荣党、杜涛73 健康教育整合于体育的教学研究与实践云南财贸学院张河川、郭思智、张凯、和平英、董一凡74 《会计报表审计案例》（辅助教材）云南财贸学院朱锦余、杨静、曾纯、古淑萍、陈红75 云南地理课程改革与教材建设玉溪师范学院王声跃、张文、高昆谊、陈红、陈黎阳76 中小学骨干教师培养与培训模式探究楚雄师范学院姜子华、李全华、周林宗、李克英、庄兆盛77 《数学建模》教学建设与大学生数学应用能力的培养楚雄师范学院山玉林、梁林、刘鹏、胡钊、何建锋78 大学英语水平测试研究与实践楚雄师范学院顾菊华、李桃梅、唐春华、袁秀萍、李绍芳79 四年制护理学本科教育人才培养模式改革的研究与实践大理学院钱金栿、汤珺、廖剑英、李合、栾玉泉80 问题定向教学法在内科实践课的应用研究大理学院尹雪艳、郭艳、李凤贤、何敏华、李永萍81 临床综合技能培训的研究与实践大理学院罗志勇、尹雪艳、李梅、李海燕、周玲82 中国古代史书体裁研究（教材）红河学院白云83 “毕业设计（论文）的发展性评价体系”研究与实践红河学院张培、晏青青、李俊生、丁颢、肖天庆84 工科类高职高专文化素质教育的研究与实践昆明冶金高等专科学校夏昌祥、杨卫华、代祖良、杨丽敏、陈鑫85 测量工程重点专业建设昆明冶金高等专科学校赵文亮、叶加冕、徐宇飞、王育军、张东明86 《单片机原理及应用》课程建设昆明冶金高等专科学校佟云峰、杨卫华、龙志文、李志平、张帆87 师专人才培养模式改革中强化教师专业化教育的探索昆明冶金高等专科学校封海清、潘京京、吴跃辉、包兴88 工厂电器与供电（教材）昆明冶金高等专科学校胡光甲89 高等职业教育旅游专业“现场模拟导游”课程建设与教学改革丽江教育学院何守伦、王荣红、朱桂香、和克纯、段平华90 高新技术解读（教材）云南广播电视大学李昭明、罗骥、周晓俊9。

国家统计局关于第七届全国统计科研优秀成果奖评选
结果的通报
文章属性
•【制定机关】国家统计局
•【公布日期】2004.08.13
•【文号】国统字[2004]84号
•【施行日期】2004.08.13
•【效力等级】部门规范性文件
•【时效性】现行有效
•【主题分类】科技奖励
正文
国家统计局关于第七届全国统计科研优秀成果奖评选结果的
通报
（国统字[2004]84号）
各省、自治区、直辖市统计局，新疆生产建设兵团统计局：
经第七届全国统计科研优秀成果奖评审委员会终审，并公示通过，本届成果奖共评选出获奖课题论文类成果95项，其中，一等奖6项，二等奖35项，三等奖54项。

获奖专著5部，其中，一等奖1部，二等奖4部。

获奖信息技术应用类项目22项，其中，软件类成果一等奖空缺，二等奖7项，三等奖9项；论文类成果一等奖空缺，二等奖3项，三等奖3项。

获奖优秀博士论文类11篇，其中，一等奖2篇，二等奖9篇。

现将获奖名单予以通报。

国家统计局办公室
二○○四年八月十三日第七届全国统计科研优秀成果奖获奖名单。

云南省教育科学研究课题管理办法(修订)云南省教育科学研究课题管理办法（修订）第一章总则第一条为认真落实科教兴滇战略，进一步促进云南省教育科研工作发展，扩大研究范围，提高研究水平，充分发挥教育科研在云南省教育改革和发展中的先导性、前瞻性作用，进一步改进和完善管理，特制定本办法。

第二条本办法适用于云南省教育科学规划领导小组（以下简称“省领导小组”）批准立项课题的管理。

第三条教育科学研究课题，必须坚持以马克思列宁主义、毛泽东思想、邓小平理论、“三个代表”的重要思想和科学发展观为指导，为教育改革与发展服务、为教育决策服务、为繁荣教育科学服务，百花齐放、百家争鸣、学术自由，以云南省教育改革和发展中遇到的重大理论和实践问题为研究重点，不断提高教育科研成果的理论学术水平和实践应用价值。

第四条云南省教育科学研究课题面向全省，公平竞争，择优立项，保证重点。

第五条云南省教育科学研究课题由省领导小组及云南省教育科学规划领导小组办公室（以下简称“省规划办”）按照目标管理与过程管理相结合，重点管理与一般管理相结合，集中管理与分级管理相结合的原则进行管理。

第二章组织及职责第六条在省领导小组及其办公室的领导协调下，建立课题评审专家库和学术委员会。

专家库成员由各州、市教育科学规划领导小组及其办公室（以下简称“州、市领导小组”和“州、市规划办”）和各高等学校推荐产生，学术委员会从专家库中遴选产生。

学术委员会主要职责是：评审教育科学研究领域内的各类课题；评审优秀研究成果；协助检查、指导和参与全省教育科学重大、重点课题的研究工作；参与对教育科研课题结题验收鉴定活动；提供相关课题研究的建议和意见等。

由省领导小组及其办公室组织的教育科研评审活动原则上应由专家库成员为主组成。

学术委员会和专家库成员实行动态更替更新制度。

第七条省规划办是省领导小组的日常办事机构。

各州、市领导小组及办公室，各高等学校科研处在业务上接受省领导小组及省规划办的指导。

云南省教化科学“十二五”规划2024年度课题指南目录2024年度云南省教化科学规划课题申报说明 (1)一、重点招标课题 (3)二、其他课题 (3)（一）教化理论和教化史探讨 (3)（二）教化发展战略探讨 (4)（三）教化经济与管理探讨 (4)（四）基础教化探讨 (5)（五）高等教化探讨 (7)（六）职业技术教化探讨 (7)（七）德育探讨 (8)（八）教化心理探讨 (9)（九）体育卫生艺术教化探讨 (9)（十）教化技术与传播探讨 (10)（十一）接着教化与终身教化探讨 (10)（十二）民族教化探讨 (11)（十三）国际与比较教化探讨 (11)2024年度云南省教化科学规划课题申报说明一、申报2024年度云南省教化科学规划课题的指导思想是：高举中国特色社会主义宏大旗帜，以邓小平理论和“三个代表”重要思想为指导，深化实行科学发展观，实行国家和我省教化规划纲要，围绕云南省教化改革和发展的总体目标和发展任务，回应云南省教化改革和发展中的热点、难点问题，重视义务教化均衡发展和教化公允，关注教化体制和机制建设，注意教化改革和创新，突出教化对外开放和国际化，强调理论探讨和实践探讨，体现教化科学探讨的前瞻性，着力推出具有理论劝服力和实践操作性的教化科学探讨成果。

二、2024年度云南省教化科学规划设置重点招标课题、重点课题、一般课题、青年基金课题四类。

三、云南省教化科学规划课题申报者，须具有中级（或相当于中级）及以上专业技术职务；青年基金课题申报者（包括课题组成员）年龄不得超过39周岁（1973年6月30日后诞生），不具备中级以上（含中级）专业技术职务的，须由两名具有副高级专业技术职务的同行专家举荐。

申请人必需从事实际探讨工作并能够担当和负责组织课题的实施；课题的参与者或举荐人必需征得本人同意并签字确认，否则视为违规申报。

四、每位课题负责人限报一项课题，且不能以课题组成员身份参与其他课题的申报。

课题组成员不能同时参与三个以上（含三个）课题的申报。

江苏农业学报(ＪｉａｎｇｓｕＪ.ｏｆＡｇｒ.Ｓｃｉ.)ꎬ２０２４ꎬ４０(２):２３３￣２４２ｈｔｔｐ://ｊｓｎｙｘｂ.ｊａａｓ.ａｃ.ｃｎ吴雅杰ꎬ樊炳君ꎬ朱国兴ꎬ等.特基拉芽孢杆菌ＫＣ１２１拮抗玉米镰刀菌的防病促生作用[Ｊ].江苏农业学报ꎬ２０２４ꎬ４０(２):２３３￣２４２.ｄｏｉ:１０.３９６９/ｊ.ｉｓｓｎ.１０００￣４４４０.２０２４.０２.００５特基拉芽孢杆菌ＫＣ１２１拮抗玉米镰刀菌的防病促生作用吴雅杰１ꎬ㊀樊炳君２ꎬ㊀朱国兴１ꎬ㊀焦㊀钰１ꎬ㊀张兴丽１ꎬ㊀王瑞雪１ꎬ㊀周㊀萍１ꎬ㊀曹艳茹１(１.昆明学院农学与生命科学学院ꎬ云南昆明６５０２１４ꎻ２.云南丽江市植保植检站ꎬ云南丽江６７４１９９)收稿日期:２０２３￣０１￣１２基金项目:国家自然科学基金项目(３１６６０００２)ꎻ云南省地方本科高校(部分)基础研究联合专项(２０１８ＦＨ００１￣００３)ꎻ省部共建云南生物资源保护与利用国家重点实验室开放课题(２０１９ＫＦ００５)ꎻ云南省 万人计划 青年拔尖人才资助项目(ＹＮＷＲ￣ＱＮＢＪ￣２０１８￣０１１)ꎻ云南省教育厅科学研究基金项目(２０２１Ｙ７３３㊁２０２２Ｙ７１５)作者简介:吴雅杰(１９９８－)ꎬ女ꎬ河北石家庄人ꎬ硕士研究生ꎬ主要从事农业微生物研究ꎮ(Ｅ￣ｍａｉｌ)１１４３１０６２６２＠ｑｑ.ｃｏｍ通讯作者:曹艳茹ꎬ(Ｅ￣ｍａｉｌ)ｙａｎｒｕｃａｏ３＠ａｌｉｙｕｎ.ｃｏｍ㊀㊀摘要:㊀为初步探究１株分离自兰坪铅锌尾矿的特基拉芽孢杆菌ＫＣ１２１的防病促生效果及作用机理ꎬ将其无菌滤液涂布平板与病原菌共培养以及与发酵滤液病原菌孢子共孵育来测定菌株ＫＣ１２１对病原菌菌丝生长㊁产孢数量及孢子萌发的影响ꎻ以发酵液浸种试验来测定菌株ＫＣ１２１对玉米种子萌发的影响ꎻ最后利用盆栽灌根的方法研究菌株ＫＣ１２１对玉米镰刀菌根腐病的防治效果及对玉米幼苗的促生作用并探究其机理ꎮ结果表明ꎬ特基拉芽孢杆菌ＫＣ１２１无菌滤液可使镰刀菌菌丝发生皱缩和凹陷ꎬ同时抑制了镰刀菌孢子的产生和萌发ꎻ浸种试验结果表明ꎬ稀释１ˑ１０３倍的菌株ＫＣ１２１发酵液可以促进玉米种子萌发时主根增长６１％ꎬ芽长增加１６２％ꎻ在盆栽试验中ꎬ菌株ＫＣ１２１发酵液原液对腐皮镰刀菌(Ｆｕｓａｒｉｕｍｓｏｌａｎｉ)和拟枝孢镰刀菌(Ｆｕｓａｒｉｕｍｓｐｏｒｏｔｒｉｃｈｉｏｉｄｅｓ)引起的玉米根腐病的防治效果分别为６６ ６７％和７６ ００％ꎬ且分别使玉米植株地上部分干质量和鲜质量提高了１３０％和９０％ꎮ促生机理探究发现特基拉芽孢杆菌ＫＣ１２１通过产淀粉酶ꎬ并产生６ １９ｎｇ/ｍｌ的吲哚乙酸(ＩＡＡ)和提高玉米幼苗的总叶绿素含量来促进玉米幼苗生长ꎮ研究结果显示特基拉芽孢杆菌ＫＣ１２１对防治玉米镰刀菌病害及促进玉米生长具有应用潜力ꎮ关键词:㊀特基拉芽孢杆菌ꎻ镰刀菌ꎻ抑菌机理ꎻ促生机理中图分类号:㊀Ｓ４３５.１３１㊀㊀㊀文献标识码:㊀Ａ㊀㊀㊀文章编号:㊀１０００￣４４４０(２０２４)０２￣０２３３￣１０ＤｉｓｅａｓｅｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎａｇａｉｎｓｔｃｏｒｎＦｕｓａｒｉｕｍａｎｄｇｒｏｗｔｈｐｒｏｍｏｔｉｏｎｏｆＢａｃｉｌ￣ｌｕｓｔｅｑｕｉｌｅｎｓｉｓＫＣ１２１ＷＵＹａ￣ｊｉｅ１ꎬ㊀ＦＡＮＢｉｎｇ￣ｊｕｎ２ꎬ㊀ＺＨＵＧｕｏ￣ｘｉｎｇ１ꎬ㊀ＪＩＡＯＹｕ１ꎬ㊀ＺＨＡＮＧＸｉｎｇ￣ｌｉ１ꎬ㊀ＷＡＮＧＲｕｉ￣ｘｕｅ１ꎬ㊀ＺＨＯＵＰｉｎｇ１ꎬ㊀ＣＡＯＹａｎ￣ｒｕ１(１.ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅａｎｄＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓꎬＫｕｎｍｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬＫｕｎｍｉｎｇ６５０２１４ꎬＣｈｉｎａꎻ２.ＬｉｊｉａｎｇＰｌａｎｔＰｒｏｔｅｃｔｉｏｎＳｔａｔｉｏｎꎬＬｉｊｉａｎｇ６７４１９９ꎬＣｈｉｎａ)㊀㊀Ａｂｓｔｒａｃｔ:㊀ＴｈｅＢａｃｉｌｌｕｓｔｅｑｕｉｌｅｎｓｉｓＫＣ１２１ｗｈｉｃｈｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｔｈｅｌｅａｄ￣ｚｉｎｃｔａｉｌｉｎｇｓｏｆＬａｎｐｉｎｇꎬｓｈｏｗｅｄｓｔｒｏｎｇｉｎｈｉ￣ｂｉｔｉｏｎａｃｔｉｖｉｔｙａｇａｉｎｓｔＦｕｓａｒｉｕｍｓｐｐ.Ｉｎｔｈｉｓａｒｔｉｃｌｅꎬｉｔｓｆｕｎｇａｌｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎａｃｔｉｖｉｔｙꎬｐｌａｎｔｇｒｏｗｔｈｐｒｏｍｏｔｉｏｎｅｆｆｅｃｔꎬａｎｄｔｈｅｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇｍｅｃｈａｎｉｓｍｗｅｒｅｓｔｕｄｉｅｄ.ＴｈｅｓｔｅｒｉｌｅｆｉｌｔｒａｔｅｏｆＫＣ１２１ｗａｓｕｓｅｄｔｏｃｏ￣ｃｕｌｔｕｒｅｗｉｔｈｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｆｕｎｇｉａｎｄｃｏ￣ｉｎｃｕｂａｔｉｏｎｗｉｔｈｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｆｕｎｇａｌｓｐｏｒｅｓｔｏｄｅｔｅｒｍｉｎｅｉｔｓｅｆｆｅｃｔｓｏｎｈｙｐｈａｌｇｒｏｗｔｈꎬｃｏｎｉｄｉａｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎａｎｄｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ.Ｔｈｅｍａｉｚｅｓｅｅｄｓｗｅｒｅｓｏａｋｅｄｗｉｔｈｆｅｒｍｅｎｔａ￣ｔｉｏｎｂｒｏｔｈｔｏｄｅｔｅｒｍｉｎｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｓｔｒａｉｎＫＣ１２１ｏｎｍａｉｚｅｓｅｅｄｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ.Ｆｉｎａｌｌｙꎬｔｈｅｂｉｏ￣ｃｏｎｔｒｏｌｅｆｆｅｃｔｏｆｓｔｒａｉｎＫＣ１２１ａｇａｉｎｓｔＦｕｓａｒｉｕｍａｎｄｔｈｅｐｌａｎｔ￣ｇｒｏｗｔｈｐｒｏ￣ｍｏｔｉｏｎｅｆｆｅｃｔｏｎｍａｉｚｅｓｅｅｄｌｉｎｇｓｗｅｒｅｓｔｕｄｉｅｄｂｙｐｏｔｅｘｐｅｒ￣ｉｍｅｎｔ.Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔａｆｔｅｒｃｏ￣ｃｕｌｔｕｒｅｗｉｔｈＫＣ１２１ꎬｔｈｅｈｙｐｈａｅｏｆＦｕｓａｒｉｕｍｗｅｒｅｗｒｉｎｋｌｅｄａｎｄｓｕｎｋｅｎꎬａｎｄｃｏｎｉｄｉａｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎａｎｄｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｗｅｒｅａｌｓｏｉｎｈｉｂｉ￣３３２ｔｅｄ.ＴｈｅｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｂｒｏｔｈｏｆｓｔｒａｉｎＫＣ１２１ｃｏｕｌｄｐｒｏｍｏｔｅｔｈｅｇｒｏｗｔｈｏｆｔａｐｒｏｏｔｂｙ６１％ａｎｄｂｕｄｇｒｏｗｔｈｂｙ１６２％ｄｕｒｉｎｇｍａｉｚｅｓｅｅｄｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ.ＩｎｔｈｅｐｏｔｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔꎬｔｈｅｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｅｆｆｅｃｔｓｏｆＫＣ１２１ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｂｒｏｔｈｏｎｒｏｏｔｒｏｔｃａｕｓｅｄｂｙＦｕ￣ｓａｒｉｕｍｓｏｌａｎｉａｎｄＦｕｓａｒｉｕｍｓｐｏｒｏｔｒｉｃｈｉｏｉｄｅｓｗｅｒｅ６６.６７％ａｎｄ７６.００％ꎬｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙꎬａｎｄｔｈｅｄｒｙａｎｄｆｒｅｓｈｗｅｉｇｈｔｏｆｍａｉｚｅｗｅｒｅｉｎｃｒｅａｓｅｄｂｙ１３０％ａｎｄ９０％ꎬｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ.ＴｈｅＫＣ１２１ｓｔｒａｉｎｐｒｏｍｏｔｅｄｔｈｅｇｒｏｗｔｈｏｆｍａｉｚｅｓｅｅｄｌｉｎｇｓｂｙｐｒｏｄｕｃｉｎｇａｍｙｌａｓｅꎬｐｒｏｄｕｃｉｎｇ６ １９ｎｇ/ｍｌｉｎｄｏｌｅａｃｅｔｉｃａｃｉｄ(ＩＡＡ)ａｎｄｉｎｃｒｅａｓｉｎｇｔｈｅｔｏｔａｌｃｈｌｏｒｏｐｈｙｌｌｃｏｎｔｅｎｔ.ＴｈｅＢ.ｔｅｑｕｉｌｅｎｓｉｓＫＣ１２１ｓｈｏｗｅｄｉｍｐｏｒｔａｎｔｐｏｔｅｎｔｉａｌｉｎｃｏｎｔｒｏｌｌｉｎｇｔｈｅＦｕｓａｒｉｕｍｄｉｓｅａｓｅｏｆｍａｉｚｅａｎｄｐｒｏｍｏｔｉｎｇｍａｉｚｅｇｒｏｗｔｈ.Ｋｅｙｗｏｒｄｓ:㊀ＢａｃｉｌｌｕｓｔｅｑｕｉｌｅｎｓｉｓꎻＦｕｓａｒｉｕｍꎻａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌｍｅｃｈａｎｉｓｍꎻｐｒｏｍｏｔｉｎｇｇｒｏｗｔｈｍｅｃｈａｎｉｓｍ㊀㊀镰刀菌(Ｆｕｓａｒｉｕｍ)隶属丛梗孢目瘤痤孢科镰刀菌属ꎬ是一类世界性分布的真菌ꎬ它可以造成粮食作物㊁经济作物及药用植物等多达数百种植物的根腐病㊁茎腐病㊁花腐病和穗腐病等病害ꎮ镰刀菌还会通过孢子对作物进行二次侵染ꎬ带来持续的农业危害ꎬ是生产上最难防治的病原菌之一ꎮ镰刀菌的种类繁多ꎬ由其导致的作物减产造成了农业生产的巨大经济损失ꎮ研究结果表明ꎬ禾谷镰刀菌㊁腐皮镰刀菌㊁拟枝孢镰刀菌及尖孢镰刀菌是造成玉米根腐病的主要致病菌[１￣３]ꎬ是玉米生产的重要隐患ꎮ由镰刀菌引起的玉米病害极大地影响了玉米的产量和品质ꎮ目前ꎬ对于镰刀菌引起的病害多采用化学药剂进行防治ꎬ造成了严重的农残超标和环境污染问题ꎬ同时对人畜健康存在潜在威胁ꎮ因此ꎬ迫切需要研究安全有效的生物防治措施来攻克镰刀菌病害ꎮ生物防治具有农药残留少㊁环保㊁具有靶向性㊁可以改善土壤微生态等优点[４]ꎬ是近年来农业病害防治研究的重点方向ꎮ目前应用于植物镰刀菌生物防治的微生物主要有木霉菌㊁非致病性尖孢镰刀菌㊁丛枝菌根真菌㊁芽孢杆菌㊁假单胞菌等ꎮ其中ꎬ芽孢杆菌属菌株(Ｂａｃｉｌｌｕｓ)是一类分布于自然环境以及动物肠道等处的能产生芽孢的革兰氏阳性菌ꎬ由于其能产生酶及多种广谱杀菌活性物质而成为研究热点[５]ꎮ张艳茹等[６]㊁曹荣耀等[７]研究发现贝莱斯芽孢杆菌对尖孢镰刀菌及禾谷镰刀菌具有抑制作用ꎻ毛咪等[８]研究发现解淀粉芽孢杆菌对茄病镰刀菌具有良好的拮抗作用ꎻ常淑娴等[９]㊁吉亚泰[１０]研究发现地衣芽孢杆菌㊁皮奥显亚类芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌对尖孢镰刀菌具有较强的拮抗作用ꎮ可见ꎬ芽孢杆菌在由镰刀菌引起的植物病害的生物防治研究领域具有较大的应用潜力ꎮ除了抑制病原菌之外ꎬ芽孢杆菌还能促进作物生长ꎬ如王华笑[１１]研究发现解淀粉芽孢杆菌可以抑制尖孢镰刀菌ꎬ同时有解淀粉㊁溶解磷㊁产吲哚乙酸(ＩＡＡ)的能力ꎬ可以促进盐碱胁迫下的玉米生长ꎮ李安等[１２]研究发现枯草芽孢杆菌不但能增强玉米的抗旱性ꎬ还能有效促进玉米的萌发及萌发期幼苗的生长ꎮ目前尚无特基拉芽孢杆菌防治玉米根腐病的报道ꎬ本实验室前期从兰坪铅锌尾矿极端环境中分离筛选出１株能同时抑制腐皮镰刀菌(Ｆ.ｓｏｌａｎｉ)㊁禾谷镰刀菌(Ｆ.ｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍ)㊁尖孢镰刀菌(Ｆ.ｏｘｙｓｐｏ￣ｒｕｍ)和拟枝孢镰刀菌(Ｆ.ｓｐｏｒｏｔｒｉｃｈｉｏｉｄｅｓ)４种镰刀病原菌的菌株ＫＣ１２１并鉴定其为特基拉芽孢杆菌(Ｂａｃｉｌｌｕｓｔｅｑｕｉｌｅｎｓｉｓ)[１３]ꎮ在测定该菌株对镰刀菌病害防治效果的同时ꎬ发现其还可以促进玉米幼苗生长ꎮ本研究将进一步测定特基拉芽孢杆菌对４种玉米镰刀根腐病原菌的抑制及对玉米种子萌发和幼苗的促生作用ꎬ并探究其防病促生机理ꎬ从而为镰刀菌的生物防治研究提供理论依据和菌种资源ꎮ１㊀材料与方法１.１㊀材料和试剂本研究采用无包衣的玉米种子作为镰刀菌防效测定及促幼苗生长等试验的供试材料ꎮ本研究中用到的镰刀病原菌菌株有:腐皮镰刀菌(Ｆ.ｓｏｌａｎｉꎬＢ６)㊁禾谷镰刀菌(Ｆ.ｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍꎬＢ７)㊁尖孢镰刀菌(Ｆ.ｏｘｙｓｐｏｒｕｍꎬＢ８)和拟枝孢镰刀菌(Ｆ.ｓｐｏｒｏｔｒｉｃｈｉｏｉｄｅｓꎬＢ９)ꎮ特基拉芽孢杆菌ＫＣ１２１为本课题组前期分离筛选所得[１３]ꎮ以上菌株均在２８ħ条件下培养ꎮ特基拉芽孢杆菌ＫＣ１２１采用改良ＩＳＰ２(ＩＳＰＭｅｄｉｕｍ２ꎬ国际链霉菌培养基２号)培养[１４]ꎮ４种镰刀病原菌采用马铃薯葡萄糖琼脂培养基(ＰＤＡ)培养[１５]ꎮ蒙金娜无机磷培养基用于测定ＫＣ１２１菌株解磷能力[１６]ꎮ钾长石培养基用于测定ＫＣ１２１菌株解钾能力[１７]ꎮＡｓｈｂｙ无氮培养基用于测定ＫＣ１２１菌株固氮能力[１８]ꎮ淀粉水解琼脂培养基用于测定ＫＣ１２１菌株水解淀粉能力[１９]ꎮ４３２江苏农业学报㊀２０２４年第４０卷第２期１.２㊀特基拉芽孢杆菌ＫＣ１２１的抑菌作用实验室前期研究发现特基拉芽孢杆菌ＫＣ１２１对腐皮镰刀菌(Ｆ.ｓｏｌａｎｉ)㊁禾谷镰刀菌(Ｆ.ｇｒａｍｉｎｅａ￣ｒｕｍ)㊁尖孢镰刀菌(Ｆ.ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ)和拟枝孢镰刀菌(Ｆ.ｓｐｏｒｏｔｒｉｃｈｉｏｉｄｅｓ)４种镰刀病原菌的抑菌率分别为７６ ９１％㊁６５ ３１％㊁４７ ８８％㊁８２ ６６％(图１)ꎮ本研究对特基拉芽孢杆菌的抑菌机理进行了初步探究ꎮＡ:腐皮镰刀菌ꎻＢ:禾谷镰刀菌ꎻＣ:尖孢镰刀菌ꎻＤ:拟枝孢镰刀菌ꎻ图中ꎬ左边为对照(ＣＫ)ꎻ右边为ＫＣ１２１发酵滤液处理ꎮ图１㊀特基拉芽孢杆菌ＫＣ１２１对４种病原菌的抑制效果Ｆｉｇ.１㊀ＩｎｈｉｂｉｔｏｒｙｅｆｆｅｃｔｏｆＢａｃｉｌｌｕｓｔｅｑｕｉｌｅｎｓｉｓＫＣ１２１ｏｎｆｏｕｒｐａｔｈｏｇｅｎｓ１.２.１㊀特基拉芽孢杆菌ＫＣ１２１对４种病原菌菌丝及孢子生长形态影响的电镜观察㊀菌株活化:从特基拉芽孢杆菌ＫＣ１２１保藏试管中挑取菌体转接于ＩＳＰ２平板上ꎬ进行活化培养ꎮ同时ꎬ从病原菌保藏试管中挑取菌丝接种于ＰＤＡ平板上ꎬ置于２８ħ恒温培养箱中培养１~３ｄꎮ发酵液制备:挑取特基拉芽孢杆菌ＫＣ１２１的单菌落接种至ＩＳＰ２液体培养基中ꎬ置于２００ｒ/ｍｉｎ㊁２８ħ的摇床培养３ｄꎬ制得发酵液ꎮ发酵液离心后用０ ２２μｍ的细菌过滤器过滤ꎬ再用无菌水分别制成稀释１ˑ１０１倍㊁１ˑ１０２倍的发酵滤液稀释液ꎮ对病原菌菌丝及孢子生长的影响:分别取２００μｌ不同含量的发酵滤液涂布于ＰＤＡ平板上ꎬ待培养基表面的液体吸收后将直径为８ｍｍ的病原菌菌块接种于平板上[２０]ꎬ在２８ħ恒温箱培养７ｄꎬ以空白培养基涂板培养为对照ꎮ待病原菌长好后ꎬ从菌落边缘切矩形小块放在样品台上ꎬ将样品台放入提前准备好的液氮雪泥中ꎬ－８０ħ升华１０ｍｉｎ后喷金镀膜２次(每次１ｍｉｎ)ꎬ进行形态观察ꎮ１.２.２㊀特基拉芽孢杆菌ＫＣ１２１发酵滤液对病原菌孢子萌发影响的显微镜观察㊀病原菌孢子悬浮液制备:用无菌水洗脱产孢病原菌菌丝上的孢子ꎬ将孢子悬浮液用无菌水稀释制得１ｍｌ１０４个的病原菌孢子悬浮液ꎮ对病原菌孢子萌发影响的测定:采用凹玻片法[２１]测定不同稀释倍数的发酵滤液(制备方法同１.２.１)对病原菌孢子萌发的影响ꎮ在凹玻片中央滴加２０μｌ发酵滤液和２０μｌ孢子悬浮液ꎬ混合均匀ꎬ置于铺有湿润滤纸的培养皿中ꎬ在２８ħ的条件下培养ꎬ每２ｈ镜检１次ꎬ观察并记录萌发情况ꎬ直至对照组的萌发率达９０％时停止观察ꎮ１.３㊀特基拉芽孢杆菌ＫＣ１２１的防病效果测定试验在大棚内进行ꎬ玉米种子在穴盘中育苗后ꎬ将长势一致的玉米幼苗移栽至装有混合土壤(腐殖土ʒ红土＝１ʒ１)的盆中ꎮ试验设置３个处理ꎬ每个处理３０株ꎬ处理情况如下:处理一:将玉米幼苗移栽到正常土壤中ꎻ处理二:将玉米幼苗移栽到拌有病原菌的土壤中ꎬ随后灌入２００ｍｌ的特基拉芽孢杆菌ＫＣ１２１发酵液(菌体含量为４.９７ˑ１０６ＣＦＵ/ｍｌ)ꎬ每７ｄ浇灌１次ꎻ处理三:将玉米幼苗移栽到拌有病原菌的土壤中ꎬ随后灌入２００ｍｌ的空白培养基ꎬ每７ｄ浇灌１次ꎮ５３２吴雅杰等:特基拉芽孢杆菌ＫＣ１２１拮抗玉米镰刀菌的防病促生作用自移栽之日起每７ｄ观察玉米幼苗的生长及发病情况并记录ꎬ共观察２１ｄꎮ根据记录结果ꎬ按照刘治刚[２２]和樊炳君[２３]的分级标准进行病情指数和防治效果的测定ꎮ１.４㊀特基拉芽孢杆菌ＫＣ１２１对玉米促生效果的测定１.４.１㊀特基拉芽孢杆菌ＫＣ１２１发酵液促玉米种子萌发试验㊀按照１.２.１的方法制备发酵液原液ꎬ并用无菌水分别制成稀释１ˑ１０１倍㊁１ˑ１０２倍㊁１ˑ１０３倍㊁１ˑ１０４倍㊁１ˑ１０５倍㊁１ˑ１０６倍的发酵液稀释液ꎬ分别吸取１０ｍｌ上述稀释液加入铺有滤纸的培养皿中ꎮ挑选清水浸泡了２４ｈ的饱满玉米种子ꎬ置于培养皿中ꎬ每皿１０粒ꎬ浸湿滤纸ꎬ以空白培养基(ＣＫ)为对照ꎮ将处理好的种子放置在光照培养箱(温度２８ħꎬ湿度７０％)中培养ꎬ每天补充２ｍｌ发酵滤液稀释液(共培养５ｄ)ꎬ每天进行观察ꎬ记录主根长和芽长ꎮ１.４.２㊀特基拉芽孢杆菌ＫＣ１２１发酵液促玉米植株生长试验㊀将种子放入清水中浸泡２４ｈ后取出ꎬ挑选饱满的玉米种子置于铺有湿润滤纸的培养皿中催芽ꎮ待８０％的种子萌发后挑选长势一致的种子播种于穴盘中ꎮ每穴播入１粒种子ꎬ待株高为１０ｃｍ左右时ꎬ将其移栽至花盆中继续种植ꎬ每周每盆加入２００ｍｌ的发酵液原液灌根ꎬ每４ｄ进行观察并记录株高和茎粗ꎮ栽种２４ｄ后将植株拔出ꎬ用清水洗掉根部附着的土壤ꎬ放在通风处自然晾干表面水分后分别进行地上部分和地下部分鲜质量的称量ꎻ随后将植株放入烘箱６５ħ恒温烘干后称量干质量ꎮ１.５㊀特基拉芽孢杆菌ＫＣ１２１的促生机制初探从固氮㊁溶磷㊁溶钾㊁产吲哚乙酸以及对玉米幼苗叶绿素含量的影响等方面探究特基拉芽孢杆菌ＫＣ１２１促生作用的机理ꎮ根据黄涛[２４]的方法对特基拉芽孢杆菌ＫＣ１２１促生功能进行测定:利用Ａｓｈｂｙ无氮培养基测定菌株固氮能力ꎬ菌株在平板上能正常生长即具有固氮能力ꎻ利用蒙金娜无机磷培养基测定菌株溶磷能力ꎬ菌落周围产生透明圈即说明菌株具有溶无机磷能力ꎻ利用钾长石培养基测定菌株溶钾能力ꎬ菌落周围产生透明圈即说明菌株具有溶钾能力ꎮ使用ＩＡＡ试剂盒测定特基拉芽孢杆菌ＫＣ１２１发酵液中ＩＡＡ的含量[２５]ꎻ利用淀粉水解琼脂培养基测定特基拉芽孢杆菌ＫＣ１２１水解淀粉的能力[２３]ꎻ采用李合生[２６]的方法测定玉米幼苗的叶绿素含量ꎮ２㊀结果与分析２.１㊀特基拉芽孢杆菌ＫＣ１２１的抑菌作用２.１.１㊀特基拉芽孢杆菌ＫＣ１２１对病原菌菌丝及分生孢子形态影响的电镜观察㊀由于未经稀释的发酵液即原液对病原菌的抑制效果最好ꎬ因此选用该含量平板上的菌丝观察特基拉芽孢杆菌ＫＣ１２１对４种病原菌形态的影响ꎮ通过扫描电镜观察发现ꎬ未经处理的４种病原菌菌丝表面光滑ꎬ呈现正常的管状结构ꎬ长且直ꎬ并均匀地从顶端延伸生长ꎮ经过菌株ＫＣ１２１发酵液处理的４种病原菌菌丝相比对照有较大变化ꎬ菌丝粗细不一ꎬ表面均出现皱缩和凹陷ꎮ其中ꎬＢ６㊁Ｂ７和Ｂ８病原菌在经过发酵液处理后菌丝发生明显黏连现象ꎬＢ６和Ｂ９的菌丝体弯折明显且易断裂ꎬＢ７和Ｂ８的菌丝体则出现了一定程度的皱缩和凹陷(图２)ꎮ以上结果表明菌株ＫＣ１２１发酵液可以通过使４种镰刀病原菌菌丝发生不同程度的皱缩㊁凹陷和弯折而抑制其菌丝的生长ꎮ㊀㊀通过光学显微镜初步观察(图３)可以看出ꎬ与对照相比ꎬＢ６病原菌处理组的分生孢子数量减少ꎬ分生孢子形态变小且细长ꎮＢ７病原菌处理组及对照均未发现分生孢子ꎬ经处理的Ｂ７病原菌ꎬ菌丝分隔减少ꎮＢ８病原菌处理组的分生孢子数量也明显减少ꎬ视野中仅有极少的分生孢子分布ꎬ且分生孢子形态变得小且细长ꎮＢ９病原菌处理组的分生孢子数量同对照相比减少ꎬ而分生孢子形态无明显变化ꎮ该结果表明特基拉芽孢杆菌ＫＣ１２１发酵液可以通过减少病原菌分生孢子的数量来抑制腐皮镰刀菌㊁尖孢镰刀菌和拟枝孢镰刀菌的生长ꎬ通过减少菌丝分隔来抑制禾谷镰刀菌的生长ꎮ２.１.２㊀特基拉芽孢杆菌ＫＣ１２１对病原菌分生孢子萌发的显微镜观察㊀由于多次培养均未找到禾谷镰刀菌的分生孢子ꎬ因此本试验仅研究了特基拉芽孢杆菌ＫＣ１２１发酵液对其他３种病原菌分生孢子萌发的影响(表１)ꎮ对于腐皮镰刀菌(Ｆ.ｓｏｌａｎｉ)来说ꎬ当培养至４ｈ时ꎬ对照的分生孢子萌发率为５９ ３７％ꎬ发酵液原液处理过的分生孢子萌发率仅为２２ １６％ꎬ稀释１ˑ１０１倍的发酵滤液处理的分生孢子萌发率为３８ ４４％ꎬ稀释１ˑ１０２倍的发酵滤液处理的分生孢子萌发率与对照无明显差异ꎻ当培养至６ｈ时ꎬ对照的分生孢子萌发率为８７ ０６％ꎬ发酵液原液处理过的分生孢子６３２江苏农业学报㊀２０２４年第４０卷第２期萌发率仅为２７ ４９％ꎬ而稀释１ˑ１０１倍和稀释１ˑ１０２倍的发酵滤液处理的分生孢子萌发率则较高(表１)ꎮ以上结果表明随着发酵液含量的降低ꎬ对分生孢子萌发的抑制能力也降低ꎮＢ６:腐皮镰刀菌ꎻＢ７:禾谷镰刀菌ꎻＢ８:尖孢镰刀菌ꎻＢ９:拟枝孢镰刀菌ꎮＡ:对照(ＣＫ)ꎻＢ:ＫＣ１２１发酵液处理组ꎮ图２㊀ＫＣ１２１发酵液对４种病原菌菌丝生长的影响Ｆｉｇ.２㊀ＥｆｆｅｃｔｓｏｆＫＣ１２１ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｂｒｏｔｈｏｎｍｙｃｅｌｉａｇｒｏｗｔｈｏｆｆｏｕｒｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｆｕｎｇｉＢ６:腐皮镰刀菌ꎻＢ７:禾谷镰刀菌ꎻＢ８:尖孢镰刀菌ꎻＢ９:拟枝孢镰刀菌ꎮＡ:对照组(ＣＫ)ꎻＢ:ＫＣ１２１发酵液处理组ꎮ图３㊀ＫＣ１２１发酵液对病原菌孢子生长的影响Ｆｉｇ.３㊀ＥｆｆｅｃｔｓｏｆＫＣ１２１ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｂｒｏｔｈｏｎｓｐｏｒｅｇｒｏｗｔｈｏｆｐａｔｈｏｇｅｎｓ㊀㊀对分生孢子萌发的显微观察发现ꎬ２ｈ时对照的部分分生孢子已开始萌发ꎬ而处理组的分生孢子在４ｈ时才开始萌发ꎮ随着培养时间的延长ꎬ对照组的分生孢子不断萌发并发育成正常菌丝ꎻ发酵液原液和稀释１ˑ１０１倍的发酵滤液处理的分生孢子则未能正常萌发ꎬ二者在分生孢子萌发芽管的不同位置发生膨大ꎬ进而减缓甚至阻止了菌丝的形成ꎬ该现象在培养８ｈ时稀释１ˑ１０１倍的发酵滤液处理组中表现得最为明显(图４)ꎮ稀释１ˑ１０２倍的发酵滤液对分生孢子萌发的影响不明显ꎮ㊀㊀对于尖孢镰刀菌(Ｆ.ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ)来说ꎬ培养６~８ｈ时对照的分生孢子萌发率为５５.６５％~９０ ５４％ꎬ而发酵液原液极大地降低了分生孢子萌发率(表１)ꎬ发酵滤液稀释液对分生孢子萌发的抑制作用则显著减弱ꎮ通过显微镜观察到培养８ｈ时发酵液原液处理的尖孢镰刀菌仅有少数开始萌发且产生的芽管发生膨大ꎮ７３２吴雅杰等:特基拉芽孢杆菌ＫＣ１２１拮抗玉米镰刀菌的防病促生作用Ａ:对照(ＣＫ)ꎻＢ:特基拉芽孢杆菌ＫＣ１２１发酵滤液处理组ꎮ图４㊀孵育８ｈ时稀释１ˑ１０１倍的ＫＣ１２１发酵滤液对腐皮镰刀菌孢子萌发的影响Ｆｉｇ.４㊀Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆ１０￣ｆｏｌｄｄｉｌｕｔｅｄＫＣ１２１ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｆｉｌｔｒａｔｅｏｎｃｏｎｉｄｉａｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆＦｕｓａｒｉｕｍｓｏｌａｎｉａｆｔｅｒ８ｈｉｎｃｕｂａ￣ｔｉｏｎ㊀㊀对于拟枝孢镰刀菌(Ｆ.ｓｐｏｒｏｔｒｉｃｈｉｏｉｄｅｓ)而言ꎬ在培养２ｈ到８ｈ的时间段内ꎬ发酵液原液始终对分生孢子萌发有较强的抑制作用(表１)ꎬ少数萌发的分生孢子芽管较短且出现不同程度的膨大ꎮ发酵滤液稀释液对分生孢子萌发的抑制作用明显降低ꎮ综上所述ꎬ特基拉芽孢杆菌ＫＣ１２１发酵液原液会使萌发分生孢子的芽管延伸受阻ꎬ使芽管发生膨大ꎬ进而抑制菌丝的正常形成ꎮ由表１可以看出ꎬ处理时间高于２ｈ时ꎬ菌株ＫＣ１２１发酵液原液对腐皮镰刀菌㊁尖孢镰刀菌㊁拟枝孢镰刀菌分生孢子萌发的抑制效果最好ꎮ表１㊀发酵滤液对病原菌孢子萌发的影响Ｔａｂｌｅ１㊀Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｆｉｌｔｒａｔｅｏｎｃｏｎｉｄｉａｌｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｆｕｎｇｉ菌株处理时间(ｈ)分生孢子萌发率(％)对照发酵液原液稀释１ˑ１０１倍的发酵滤液稀释１ˑ１０２倍的发酵滤液腐皮镰刀菌２１.９３ʃ０.９７ａ２.５７ʃ０.５２ａ２.２６ʃ０.５９ａ２.００ʃ１.０８ａ４５９.３７ʃ４.６８ａ２２.１６ʃ７.０１ｃ３８.４４ʃ３.６２ｂ５６.５４ʃ８.４２ａ６８７.０６ʃ４.９２ａ２７.４９ʃ１.６６ｃ６６.２５ʃ１.９８ｂ８４.６２ʃ２.４９ａ８９０.６８ʃ２.９３ａ７６.５３ʃ４.８１ａ８５.８３ʃ５.９２ａ８４.９５ʃ６.１８ａ尖孢镰刀菌２４.７６ʃ２.４６ａ１.８６ʃ１.１３ｂ１.３３ʃ０.５８ｂ２.９０ʃ１.９７ａｂ４６.０２ʃ２.４８ｃ１.９７ʃ１.００ｃ１４.７６ʃ４.２０ｂ４４.６７ʃ２.０７ａ６５５.６５ʃ１１.２１ａ４.１９ʃ１.７５ｃ３０.６３ʃ７.９５ｂ６５.７７ʃ１４.３３ａ８９０.５４ʃ６.７３ａｂ９.４５ʃ３.８４ｃ８２.９６ʃ１.８６ｂ９４.５８ʃ１.９４ａ拟枝孢镰刀菌２１３.０８ʃ０.８３ａ０.５８ʃ０.３４ｄ２.６０ʃ０.６１ｃ４.６２ʃ１.５７ｂ４７０.０７ʃ７.４４ａ２.０８ʃ１.２０ｄ１６.６９ʃ２.５９ｃ４９.９５ʃ３.５０ｂ６９０.７２ʃ３.７９ａ２.９８ʃ２.０２ｂ６８.９３ʃ２２.９７ａ８９.８５ʃ５.９６ａ８９４.８０ʃ２.３７ａ２９.８３ʃ６.１７ｂ８４.４４ʃ８.９７ａ９５.０７ʃ１.９８ａ同一种病原菌同一行数据后不同字母表示差异显著(Ｐ<０.０５)ꎮ２.２㊀特基拉芽孢杆菌ＫＣ１２１的防病效果盆栽试验结果(表２)表明ꎬ菌株ＫＣ１２１发酵液原液灌根处理对由腐皮镰刀菌(Ｆ.ｓｏｌａｎｉ)和拟枝孢镰刀菌(Ｆ.ｓｐｏｒｏｔｒｉｃｈｉｏｉｄｅｓ)引起的玉米根腐病的防治效果分别为６６ ６７％和７６ ００％ꎬ对由尖孢镰刀菌(Ｆ.ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ)和禾谷镰刀菌(Ｆ.ｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍ)引起的玉米根腐病在盆栽试验中的防治效果仅有３ ４３％和４ ６４％ꎮ以上结果表明ꎬ特基拉芽孢杆菌ＫＣ１２１对由腐皮镰刀菌(Ｆ.ｓｏｌａｎｉ)和拟枝孢镰刀菌(Ｆ.ｓｐｏｒｏｔｒｉｃｈｉｏｉｄｅｓ)引起的玉米根腐病有较好的防治效果ꎬ而对尖孢镰刀菌和禾谷镰刀菌引起的根腐病防治效果较差ꎮ２.３㊀特基拉芽孢杆菌ＫＣ１２１对玉米的促生效果２.３.１㊀ＫＣ１２１发酵液促玉米种子萌发的作用㊀利表２㊀盆栽试验防治效果Ｔａｂｌｅ２㊀Ｃｏｎｔｒｏｌｅｆｆｅｃｔｏｆｐｏｔｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ处理病情指数防治效果(％)Ｂ６＋１２１１６.６７ʃ２８.８７ｂ６６.６７ʃ５７.７４ａｂＢ６ＣＫ５０.００ʃ５０.００ａ－Ｂ７＋１２１６９.００ʃ５０.００ａ４.６４ʃ３.４７ｃＢ７ＣＫ７２.２０ʃ１９.２３ａ－Ｂ８＋１２１７５.００ʃ２５.００ａ３.４３ʃ２.３９ｃＢ８ＣＫ７７.６７ʃ４.６２ａ－Ｂ９＋１２１１６.６７ʃ２８.８７ｂ７６.００ʃ４１.５７ａＢ９ＣＫ６９.３３ʃ１７.２１ａ－Ｂ６＋１２１表示ＫＣ１２１发酵液原液灌根防治由腐皮镰刀菌引起的玉米根腐病ꎻＢ６ＣＫ表示腐皮镰刀菌引起的玉米根腐病ꎻＢ７＋１２１表示ＫＣ１２１发酵液原液灌根防治由禾谷镰刀菌引起的玉米根腐病ꎻＢ７ＣＫ表示禾谷镰刀菌引起的玉米根腐病ꎻＢ８＋１２１表示ＫＣ１２１发酵液原液灌根防治由尖孢镰刀菌引起的玉米根腐病ꎻＢ８ＣＫ表示尖孢镰刀菌引起的玉米根腐病ꎻＢ９＋１２１表示ＫＣ１２１发酵液原液灌根防治由拟枝孢镰刀菌引起的玉米根腐病ꎻＢ９ＣＫ表示拟枝孢镰刀菌引起的玉米根腐病ꎮ同一列数据后不同字母表示差异显著(Ｐ<０.０５)ꎮ８３２江苏农业学报㊀２０２４年第４０卷第２期用发酵液处理玉米种子ꎬ自第２ｄ起ꎬ稀释１ˑ１０２倍~１ˑ１０６倍的发酵滤液处理组的主根长和芽长就始终优于对照(图５)ꎮ当培养至５ｄ时ꎬ稀释１ˑ１０３倍的发酵滤液处理组的促生效果最好ꎬ其主根长已达１０ ４６ｃｍ(图５Ａ)ꎬ较对照提高了６１％ꎻ芽长达７ ２４ｃｍꎬ较对照提高了１６２％(图５Ｂ)ꎮ因此ꎬ发酵滤液稀释１ˑ１０３倍是促进种子根和芽生长的最佳处理(图６)ꎮＡ:主根长ꎻＢ:芽长ꎮ图５㊀ＫＣ１２１发酵液对玉米种子萌发时的促生作用Ｆｉｇ.５㊀ＧｒｏｗｔｈｐｒｏｍｏｔｉｎｇｅｆｆｅｃｔｏｆＫＣ１２１ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｂｒｏｔｈｏｎｍａｉｚｅｓｅｅｄｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎＡ:对照(ＣＫ)ꎻＢ:ＫＣ１２１发酵滤液稀释１ˑ１０３倍处理组ꎮ图６㊀ＫＣ１２１发酵液对玉米种子萌发５ｄ时根长及芽长的促生作用Ｆｉｇ.６㊀Ｇｒｏｗｔｈ￣ｐｒｏｍｏｔｉｎｇｅｆｆｅｃｔｏｆＫＣ１２１ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｂｒｏｔｈｏｎｒｏｏｔｌｅｎｇｔｈａｎｄｓｈｏｏｔｌｅｎｇｔｈｏｆｍａｉｚｅｓｅｅｄｓａｔ５ｄａｆｔｅｒｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ２.３.２㊀ＫＣ１２１发酵液原液促玉米植株生长的作用㊀培养２４ｄ时ꎬ发酵液原液对玉米幼苗的促生作用最为明显(图７)ꎮ培养８ｄ和１６ｄ时ＫＣ１２１发酵液原液处理的株高与对照有显著差异ꎬ在第１６ｄ时株高较对照提高了０ ３８倍(图８Ａ)ꎬ但对茎粗影响不大(图８Ｂ)ꎮ种植２４ｄ后进行干质量和鲜质量测量ꎬ经过特基拉芽孢杆菌ＫＣ１２１发酵液原液灌根的玉米植株地上部分鲜质量为５ ７ｇꎬ较对照提高了９０％ꎬ而干质量则较对照提高了１３０％ꎻＫＣ１２１对地下部分干质量和鲜质量的影响不大ꎮ２.４㊀特基拉芽孢杆菌ＫＣ１２１的促生功能测定前面的研究结果显示ꎬ特基拉芽孢杆菌ＫＣ１２１可以促进玉米种子萌发时的芽长和根长ꎬ同时也可以促进玉米幼苗生长时的地上部分干质量和鲜质量ꎬ但其机理尚不明确ꎮ因此ꎬ本研究初步探究了其促生机理ꎮ２.４.１㊀菌株解磷、钾及固氮功能㊀通过对特基拉芽孢杆菌ＫＣ１２１固氮㊁溶磷㊁溶钾能力的测定发现ꎬ该菌株在蒙金娜无机磷培养基平板及钾长石培养基平板上均无透明圈的产生ꎬ且在Ａｓｈｂｙ无氮培养基平板上不能生长ꎮ因此ꎬ该菌株不具有固氮㊁溶磷㊁溶钾的功能ꎮ２.４.２㊀分泌ＩＡＡ能力㊀经检测ꎬ特基拉芽孢杆菌ＫＣ１２１具有产ＩＡＡ的能力且质量浓度达６ １９ｎｇ/ｍｌꎮ２.４.３㊀特基拉芽孢杆菌ＫＣ１２１水解淀粉能力㊀淀粉水解试验结果表明ꎬ加碘液后在淀粉水解琼脂培养基上的菌落周围出现了透明圈ꎬ表明该菌株可分泌淀粉酶ꎬ具有较强的水解淀粉能力ꎮ９３２吴雅杰等:特基拉芽孢杆菌ＫＣ１２１拮抗玉米镰刀菌的防病促生作用Ａ:对照(ＣＫ)ꎻＢ:ＫＣ１２１发酵液原液处理组ꎮ图７㊀ＫＣ１２１发酵液原液对玉米幼苗２４ｄ时的促生效果Ｆｉｇ.７㊀Ｇｒｏｗｔｈ￣ｐｒｏｍｏｔｉｎｇｅｆｆｅｃｔｏｆＫＣ１２１ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｂｒｏｔｈｏｎｍａｉｚｅｓｅｅｄｌｉｎｇｓａｔ２４ｄａｙｓＡ:株高ꎻＢ:茎粗ꎻ∗表示处理组之间差异显著(Ｐ<０ ０５)ꎮ图８㊀ＫＣ１２１发酵液原液对玉米幼苗株高和茎粗的促生效果Ｆｉｇ.８㊀Ｇｒｏｗｔｈ￣ｐｒｏｍｏｔｉｎｇｅｆｆｅｃｔｏｆＫＣ１２１ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｂｒｏｔｈｏｎｐｌａｎｔｈｅｉｇｈｔａｎｄｓｔｅｍｄｉａｍｅｔｅｒｏｆｍａｉｚｅｓｅｅｄｌｉｎｇｓ２.４.４㊀玉米幼苗叶绿素含量㊀经特基拉芽孢杆菌ＫＣ１２１稀释１ˑ１０３倍的发酵滤液处理后玉米幼苗中叶绿素ａ含量㊁叶绿素ｂ含量及叶绿素ａ＋ｂ含量较对照均明显增加ꎮ其中ꎬ稀释１ˑ１０３倍的发酵滤液处理组叶绿素ａ含量为２ ４１ｍｇ/Ｌꎬ较对照(０ ８７ｍｇ/Ｌ)增加了１１７ ０１％ꎬ叶绿素ｂ的含量为１ ０８ｍｇ/Ｌꎬ较对照(０ ７２ｍｇ/Ｌ)则增加了５０ ００％ꎬ总叶绿素含量为３ ４９ｍｇ/Ｌꎬ较对照(１ ５９ｍｇ/Ｌ)增加了１１９ ５０％ꎮ３㊀讨论与结论本研究探究了特基拉芽孢杆菌ＫＣ１２１的防病促生作用及其机理ꎮ防病试验结果表明ꎬ菌株ＫＣ１２１发酵液灌根能减轻由腐皮镰刀菌和拟枝孢镰刀菌引起的玉米根腐病ꎬ这为玉米镰刀根腐病的生物防治提供了微生物资源ꎮ促生试验结果表明适宜含量的菌株ＫＣ１２１发酵液对玉米种子萌发及幼苗生长均具有促进作用ꎬ可用于促进玉米生长菌剂的开发ꎮ对特基拉芽孢杆菌ＫＣ１２１的防病促生机理的探究ꎬ为后期开发防治玉米镰刀根腐病及促生菌剂的研究提供了参考ꎮ特基拉芽孢杆菌(Ｂ.ｔｅｑｕｉｌｅｎｓｉｓ)是在２００６年由Ｇａｔｓｏｎ等[２７]从墨西哥一座墓穴中首次分离得到的菌株ꎮ随后ꎬ研究人员陆续报道了该菌株的抑菌活性ꎬ如从健康水稻植株中分离出来的特基拉芽孢杆菌对多种植物病原真菌和卵菌具有抑制作用[２８]ꎬ从土样中分离出来的特基拉芽孢杆菌对立枯丝核菌具有拮抗作用[２９]等ꎮ目前有关特基拉芽孢杆菌生物防治作用的研究主要集中于防治马铃薯黑痣病㊁西瓜枯萎病㊁枸杞根腐病等[２９￣３１]ꎬ对特基拉芽孢杆菌防治玉米镰刀根腐病的报道较少ꎮ本研究利用盆栽试验进一步探究了菌株ＫＣ１２１对４种玉米镰刀菌病害的防治效果ꎮ盆栽试验结果表明ꎬ菌株ＫＣ１２１发酵液灌根能减轻由腐皮镰刀菌和拟枝孢镰刀菌引起的玉米根腐病ꎬ防治效果分别达６６ ６７％和７６ ００％ꎻ但对禾谷镰刀菌及尖孢镰刀菌的盆栽防治效果只有４ ６４％和３ ４３％ꎬ因此特基拉芽孢杆菌ＫＣ１２１仅适合防治由腐皮镰刀菌和拟枝孢镰刀菌０４２江苏农业学报㊀２０２４年第４０卷第２期引起的玉米根腐病ꎮ一些研究结果表明ꎬ特基拉芽孢杆菌可以使尖孢镰刀菌的菌丝体发生皱缩㊁弯折[３２]ꎮ本研究通过对特基拉芽孢杆菌ＫＣ１２１抑菌机理的初探发现ꎬ菌株ＫＣ１２１发酵液可以使４种病原菌菌丝皱缩和凹陷ꎬ使腐皮镰刀菌㊁尖孢镰刀菌以及禾谷镰刀菌菌丝体发生黏连ꎬ通过使腐皮镰刀菌和拟枝孢镰刀菌的菌丝体弯折明显且易断裂等方式来抑制菌丝体的生长ꎮ孢子是真菌的主要繁殖器官ꎮ本研究发现特基拉芽孢杆菌ＫＣ１２１发酵液可以降低腐皮镰刀菌㊁尖孢镰刀菌和拟枝孢镰刀菌的产孢量ꎬ还能使病原菌孢子萌发的芽管变得膨大ꎬ以此来延缓或抑制病原菌孢子的萌发ꎮ特基拉芽孢杆菌ＫＣ１２１可以通过降低镰刀菌的产孢量及延缓或抑制孢子萌发来抑制镰刀菌病害的传播ꎮ综上ꎬ特基拉芽孢杆菌ＫＣ１２１通过干扰㊁抑制菌丝生长ꎬ降低病原菌产孢量㊁抑制孢子萌发等方式来实现对病原菌的防治作用ꎮ在进行特基拉芽孢杆菌ＫＣ１２１对玉米根腐病防病效果试验的过程中发现该菌株对玉米生长具有促进作用ꎬ因此对该菌株的促生效果和促生机制进行了初步探究ꎮ结果显示ꎬ稀释１ˑ１０３倍的发酵滤液浸种５ｄ可以使玉米种子萌发时的主根长和芽长增加ꎬ发酵液原液灌根２４ｄ使幼苗地上部分的干㊁鲜质量增加ꎮ已有研究结果表明ꎬ从特基拉芽孢杆菌中提取出的生物表面活性剂(ＢｉｏｓｕｒｆａｃｔａｎｔｓꎬＢＳ)能够促进玉米种子萌发及幼苗生长[３３]ꎬ而本研究中特基拉芽孢杆菌的发酵液原液即可促进玉米种子萌发及幼苗成长ꎬ不仅使得操作更加简便ꎬ还降低了生产成本ꎮ在玉米种子萌发的过程中ꎬ胚乳中的淀粉被水解后为种子的萌发提供营养和能量ꎮ本研究对菌株ＫＣ１２１促生机制的探究发现ꎬ该菌株具有较强的水解淀粉的能力ꎬ可加快玉米种子萌发的能量供应ꎬ从而促进种子萌发ꎮ菌株ＫＣ１２１还能通过产生６ １９ｎｇ/ｍｌ的ＩＡＡ以及增加玉米幼苗的叶绿素含量来促进玉米幼苗地上部分的生长ꎮ生防菌能够防治植物病害的原因一方面是生防菌对病原菌具有抑菌活性ꎬ另一方面能通过固氮㊁溶磷ꎬ产生生长素等方式促进植物健康生长从而提高植物的抗逆性[３４￣４０]ꎮ本研究对特基拉芽孢杆菌ＫＣ１２１防治玉米镰刀根腐菌以及促进玉米生长的机理探究结果表明ꎬ该菌株一方面产生了抑制玉米镰刀根腐病的活性物质ꎬ同时又通过产淀粉酶㊁产ＩＡＡ以及提高幼苗叶绿素含量的方式促进玉米健康生长和抗病性的产生ꎮ本研究结果为镰刀菌引起的植物真菌病害的生物防治以及生物防治菌剂的开发提供了参考ꎮ然而ꎬ我们对于抑制镰刀菌的活性物质尚不清楚ꎬ今后仍需进一步加强对特基拉芽孢杆菌ＫＣ１２１抑菌活性物质的详细研究ꎬ以助力防治镰刀菌病害生防菌剂的研发ꎮ参考文献:[１]㊀李㊀军ꎬ赵雪峰ꎬ邓如正.玉米苗期根腐病的发生与防治[Ｊ].农业开发与装备ꎬ２０１４(７):１２３.[２]㊀马桂珍ꎬ暴增海ꎬ杨文兰ꎬ等.玉米苗期根腐病的病原学研究[Ｊ].河北农业技术师范学院学报ꎬ１９９５(４):７￣１１. [３]㊀贾㊀娇ꎬ张㊀伟ꎬ孟玲敏ꎬ等.吉林省玉米根腐镰孢菌种类鉴定和防治药剂筛选[Ｊ].玉米科学ꎬ２０１９ꎬ２７(５):１７６￣１８０. [４]㊀梁积平.试论生物防治在蔬菜病虫害防治上的应用[Ｊ].农家参谋ꎬ２０２１(７):５３￣５４.[５]㊀施祖国.植物镰刀菌枯萎病防治的研究进展[Ｊ].现代农业科技ꎬ２０１６(２０):１０２￣１０３.[６]㊀张艳茹ꎬ郎剑锋ꎬ郭富超ꎬ等.禾谷镰刀菌拮抗放线菌２１￣３的筛选及鉴定[Ｊ].河南科技学院学报(自然科学版)ꎬ２０２２ꎬ５０(１):１６￣２１.[７]㊀曹荣耀ꎬ谢岩黎ꎬ刘㊀晨ꎬ等.贝莱斯芽孢杆菌降解脱氧雪腐镰刀菌烯醇及抑制禾谷镰刀菌的研究[Ｊ].河南工业大学学报(自然科学版)ꎬ２０２２ꎬ４３(３):７４￣８０ꎬ８８.[８]㊀毛㊀咪ꎬ吕长平ꎬ帅佳琪ꎬ等.牡丹根腐病拮抗菌ＭＲＸ２￣１的鉴定及发酵条件优化[Ｊ].山西农业大学学报(自然科学版)ꎬ２０２２ꎬ４２(４):２８￣３６.[９]㊀常淑娴ꎬ马㊀琴ꎬ曲文文ꎬ等.芝麻枯萎病拮抗菌的分离㊁鉴定及防效研究[Ｊ].河南农业科学ꎬ２０２２ꎬ５１(８):８４￣９１. [１０]吉亚泰.枯草芽孢杆菌Ｎ￣１８防治番茄颈腐根腐病作用机理初步解析[Ｄ].泰安:山东农业大学ꎬ２０２２.[１１]王华笑.解淀粉芽孢杆菌ＹＭ６对盐胁迫下玉米促生作用及机理研究[Ｄ].银川:北方民族大学ꎬ２０２０.[１２]李㊀安ꎬ舒健虹ꎬ刘晓霞ꎬ等.干旱胁迫下枯草芽孢杆菌对玉米种子抗旱性及生理指标的影响[Ｊ].作物杂志ꎬ２０２１(６):２１７￣２２３.[１３]樊炳君ꎬ姚㊀丽ꎬ段㊀娇ꎬ等.镰刀菌根腐病拮抗菌的筛选及鉴定[Ｊ].江苏农业科学ꎬ２０２１ꎬ４９(２０):１３２￣１３７.[１４]何江波ꎬ石洋铢ꎬ康大伟ꎬ等.白云鄂博稀土矿来源放线菌Ａｃｔｉ￣ｎｏｒｅｃｔｉｓｐｏｒａｍｅｔａｌｌｉ的次生代谢产物研究[Ｊ].云南大学学报(自然科学版)ꎬ２０２２ꎬ４４(３):６０６￣６１１.[１５]黄秀梨.微生物学实验指导[Ｍ].北京:高等教育出版社ꎬ１９９９.[１６]ＰＩＫＯＶＳＫＡＹＡＲ.Ｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎｏｆｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓｉｎｓｏｉｌｉｎｃｏｎｎｅｃｔｉｏｎｗｉｔｈｖｉｔａｌａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｓｏｍｅｍｉｃｒｏｂｉａｌｓｐｅｃｉｅｓ[Ｊ].Ｍｉｋｒｏｂｉｏｌｏｇｉｙａꎬ１９４８ꎬ１７:３６２￣３７０.[１７]杜连祥ꎬ路福平.微生物学实验技术[Ｍ].北京:中国轻工业出１４２吴雅杰等:特基拉芽孢杆菌ＫＣ１２１拮抗玉米镰刀菌的防病促生作用。

云南省教育厅科学研究项目立项合同3篇篇1甲方：云南省教育厅（以下简称“甲方”）乙方：（以下简称为“乙方”）鉴于：1. 甲方为推动本省高等教育科研工作的发展，鼓励和支持高校教师及科研人员开展高水平科学研究，决定设立科学研究项目，并进行立项资助；2. 乙方为具有独立法人资格的高等院校或研究机构，拥有从事相关领域科学研究的能力和条件；3. 经过项目申报、专家评审等程序，甲方决定对乙方提出的项目进行立项资助。

甲乙双方经友好协商，就科学研究项目的立项资助事宜达成如下协议：第一条项目基本信息1. 项目名称：2. 项目负责人：3. 项目起止时间：自年月日至年月日。

4. 项目预算总额：人民币（大写）元整（￥）。

5. 项目资助金额：人民币（大写）元整（￥），由甲方提供。

6. 项目研究内容与预期成果：（具体描述项目的研究方向、主要研究内容、拟解决的关键问题及预期研究成果等内容）。

第二条项目实施1. 乙方应严格按照项目计划书的要求开展研究工作，确保项目按期完成。

2. 乙方须定期向甲方提交项目进展报告，并接受甲方组织的中期检查和结题验收。

3. 在项目执行过程中如需调整研究计划或预算，须事先书面报甲方批准后方可实施。

4. 乙方应保证项目经费专款专用，不得挪作他用。

第三条知识产权1. 项目实施过程中产生的所有知识产权归乙方所有。

2. 乙方应积极申请专利、发表论文等方式保护和利用研究成果。

3. 若项目成果涉及保密事项，乙方需按照国家相关规定采取相应保密措施。

4. 对于甲方资助形成的知识产权，乙方在使用时需注明“本成果得到云南省教育厅科学研究项目资助”。

第四条违约责任1. 如乙方未按期完成项目或未达到预期目标，甲方有权要求乙方退还全部或部分资助资金。

2. 如乙方违反本合同约定，甲方有权终止合同并追究乙方违约责任。

3. 因不可抗力导致无法履行合同义务的，双方应及时通知对方，并在不可抗力消除后继续履行合同。

第五条争议解决1. 双方因本合同发生争议时，应首先通过友好协商解决。

名师风甭【人物简介】苏云涛，云南省下关第一中学初中部美术高级教师，大理大学硕士研究生指导教师，云南省基础教育教学科研专家，云南省苏云涛民间美术特色工作室主持人，云南省初中美术苏云涛名师工作坊坊主，云南省优课名师，大理州首批“苍洱霞光”教学名师，大理州美术骨干教师培训主讲教师。

星光不问赶路人时光不负有心人一一记云南省初中美术苏云涛名师工作坊坊主苏云涛熊志坚“躺着看画站着教画坐着写画四季陪画共度，闲而思 梦忙而追梦睡而做梦三生与梦同行。

”这个痴画者、追梦 人正是云南省初中美术苏云涛名师工作坊坊主、云南省 下关第一中学初中部美术高级教师苏云涛。

多年来，他孜 孜不倦，笔耕不辍，始终坚守励志育人的初心，无怨无悔 地追逐着自己的教育梦想。

美术教坛耕耘者，春风化兩硕果累累与很多教师不同的是，苏云涛并非一开始就投身教 育事业。

2005年9月，已经在大啤集团工会工作了 10余 年的他，毅然走进下关一中初中部的大门，成为一名美术 教师。

他深知业精于勤，于是坚持“望尽天涯路”的追求，也知晓教育是苦差,故抱定“衣带渐宽终不悔”的决心，更 悟透“众里寻他千百度”的艰辛，故上下而求索。

风雨十数 载，他乐此不疲，潜心问道。

苏云涛是一个热爱生活、热爱事业、热爱美的凡人，唯愿在平凡的教育岗位上，扮演一个普通角色，于平凡中绽放精彩，演绎美丽。

曾经，他花了一个周末的时间，徒步 苍山林间溪畔,只为寻找溪流的神韵。

他想告诉孩子们清 流绿草需要我们去呵护，他坚信教师职业的真实回报来自 工作本身，来自心血的积淀,来自那种“朝闻道，夕死可矣”的满足与体验。

同事闲聊，有人感慨“压力山大”，回报微 薄，他都付之一笑。

多年来，因为兢棘业业工作、端端正正 做人，他收获满满，先后受到各级表彰奖励74次,发表论 文及创作学校宣传文稿（图>200余篇(幅）。

2010-2019连 续丨0年，苏云涛被学校评为“优秀共产党员”;2015、2017 年两次被评为“大理州教育工委优秀党员”;2020年云南 省关心下一代工作委员会授予他“青少年教育培养突出贡 献奖”。

云南省第六届高等教育教学成果获奖项目名单省级特等奖（3项）1.民族政治学学科与人才培养体系的创建及实践云南大学周平方盛举赵春盛王燕飞2.创建及规范再生资源科学与技术专业的探索与实践昆明理工大学宁乎郝吉明瞿广飞陈建中唐晓龙3.农业生物多样性创新人才培养基地建设与实践云南农业大学朱有勇胡先奇王云月何霞红陈斌省级一等奖（30项）1.以全球医学基本要求（gmer）为标准，创建口腔医学临床实践教学模式昆明医学院丁仲鹃奚春睿雷雅燕朱红董宝财2.软件类专业实践教学体系的构建与实施云南大学王世普梁宇姚绍文李彤柳青3.围绕统计学省级重点专业建设，探讨统计人才培养新模式云南财经大学石磊王力宾李兴绪费宇雷健敏4.旅游管理学科与人才培养体系的创建及实践云南大学田卫民杜靖川吕宛青杨桂华李洁5.以培养医学生的创新能力为目标，构建具有基础医学特色的实验教学体系昆明医学院孙俊李树清李明郭泽云王文林6.边疆民族地区高校体教结合培养高水平竞技体育人才的改革、创新与实践云南师范大学刘坚陈志青金黄斌赵玲玲何光煜7.面向东南亚国际化人才培养的体系创新与实践云南师范大学伊继东武友德吴雁江魏红明庆忠8.西南林学院创新型人才培养模式的研究与实践西南林学院刘惠民姚孟春赵龙庆赵乐静廖春华9.培养云南省“云药”产业需要的中药类系列人才专业链建设的研究与实践云南中医学院李庆生贾勇钱子刚郭兆刚杨国祥10.提升内涵突出特色增强教学实力一化学实验教学改革与课程建设的探索与实践云南大学李霁良曹秋娥丁中涛赵逸云杨靖华11.构建地方院校创新人才培养的工程实践平台昆明理工大学陈君若王春荣李白良刘美红王胜民12.建设特色鲜明的生物学本科实践教学平台，改革实践教学云南大学肖蘅叶辉王跃华王若南程立忠13.复合型音乐人才培养模式的改革与实践云南艺术学院陈劲松朱发刚刘晓耕叶明菊杨波14.面向工程校企结合三方互动的电力本科人才培养改革与实践昆明理工大学束洪春纳学梅陆建生丁炜寇伟15.创新教学管理突出理工特色强化质量工程全面提升人才培养质量昆明理工大学纳海莺陆建生陈扬建邹永松黄丽16.云南特色民间工艺在《旅游商品设计》课程中的应用云南艺术学院陈劲松张勇彭瑶李海华何璞17.结合云南生物资源产业优势建设特色专业的研究与实践云南农业大学吴伯志邵宛芳李文祥杨焕文李佛琳18.边疆少数民族地区物理实验教学改革与实践云南师范大学张雄侯德东杨卫平刘应开杨卫国19.基于“禁毒防艾”的《大学生性健康》课程构建与实施效果评价云南财经大学张河川郭思智和平英欧阳慧蓉张金甫20.中国少数民族语言文学专业人才培养模式改革的探索与实践云南民族大学和少英刘劲荣陈斌罗海麟熊光红21.云南现代远程开放教育教学模式创建与应用云南广播电视大学罗骥李渝周晓俊郑新兴田云鹏22.信息管理与信息系统专业人才培养模式改革与实践昆明理工大学段万春介俊董毅明陈渝秦开大23.医学生临床实践能力培养体系的建设与实践昆明医学院姜润生李松杨玉萍于建云杨凌24.高职高专教育“双定生”人才培养模式的探索与实践昆明冶金高等专科学校夏昌祥杨丽敏代祖良谭红翔25.道路桥梁工程技术专业人才培养模式研究与实践云南交通职业技术学院晏杉杨金华刘创明周荣英秦溱26.招生一培养一就业一体化实现人才培养和社会需求的有效对接云南农业大学唐滢晏丕振洪树琼刘鸿高段青松27.高职数控技术专业人才培养规格和课程体系改革、建设的研究与实践云南机电职业技术学院黄晓明王石健虎智猛王磊刘永刚28.基于地域特色的土建专业群建设研究与实践昆明理工大学程赫明李莉萍费维水孙俊屈本宁29.就业导向下的少数民族应用性人才培养模式研究与实践云南民族大学普林林甄朝党董兴马永涛冉德君30.搞好东南亚语种群特色专业建设，服务国家和云南发展战略云南民族大学甄朝党杨光远陆生刀承华周德才省级二等奖（69项）1.少数民族传统体育文化传承与高校体育教学改革研究一以民族健身操推广教学为例云南民族大学寸亚玲方桢赵静冬黄光伟金旭东2.加强马克思主义民族观、宗教观教育为边疆稳定、社会和谐发展培养优秀人才云南民族大学马丽娟张桥贵李若青赵学先何叔涛3.禁毒学（教材）云南警官学院于燕京张义荣莫关耀骆寒青王建伟4.透视辩论一大学生智辩入门指导（教材）楚雄师范学院王锡林5.写作教学改革方案及其实施成果昆明学院尹相如王昆建吴跃辉石静6.“三位一体、定点互动”教育实习模式的构建与实践保山师范高等专科学校邓忠汉尹康平徐东李忻琪李德光7.以专业建设促进应用化学人才培养模式的探索与实践云南民族大学王红斌杨敏戴云高云涛叶艳青8.教学科研相结合促进经济学课程教学改革与学生创新精神的培养曲靖师范学院巴春生荀关玉朱谷生高文进杨筠9.直面云南水利特色强化立体实训培养边疆水利应用人才云南农业大学文俊龚爱民林志样王春彦王龙10.高校多元化网络教学环境构建及应用云南大学邓世昆董立昆李红灵张月芬卫纯11.“金属矿开采技术”重点专业建设昆明冶金高等专科学校叶加冕王育军况世华翁春林段永祥12.《中医基础理论》课程辅助教学系统的开发与应用云南中医学院吕峰王志红李永强何丹张潍纤13.综合实用型小学教师培养模式探索与实践昆明学院李晋德李宗梅王昆建齐逾杨平14.高职高专院校思想政治理论课教学及管理模式探索临沧师范高等专科学校李红梅那金华付金峰明月15.联合办学培养一专多能实战型法医学人才昆明医学院刘清李利华瞿勇强韩晓华李建京16.云南广播电视大学远程开放教育管理模式创建与实践云南广播电视大学李昭明张卫平火寿平杨立峰王一帆17.云南财经大学“读写议”教学模式改革与实践云南财经大学李国疆旷锦云石福荣林云胡琦18.“aai”教学法在思想政治理论课中的探索和应用一以《当代世界经济与政治》教学为例云南大学任新民陈国新李维吕刘亚建鄢显俊19.医学生课外素质教育创新模式的探索与实践昆明医学院李燕张爱云李瑞民张毅萍邵维庆20.以教学研究推动公共体育课教学改革，促进学生体质增强云南大学李国忠杨霞杨雪芹牟少华秦庆峰21.学分制综合教学管理系统的创新与实践云南农业大学李树坚陆自强饶志坚张海涛袁永华22.中外合作国际化人才创新培养模式云南财经大学刘尔思张洪烈潘雪冬钟伟杨淑香23.数据库系列教材建设（教材）云南大学刘惟一周永恒王丽珍岳昆梁洁24.化学本科专业全程实践教学改革的构建与实践红河学院刘卫易中周闵勇张举成严和平25.校企合作高层次物流管理人才培养基地建设云南财经大学李严锋周少方郭思智王力宾冉文学26.云南民族民间舞在舞蹈教学中的应用与实践云南艺术学院朱红徐梅曾金华袁蓉殷宏光27.农科专业基础实验教学平台的构建与实践云南农业大学李正跃雷兴刚陈建斌李树坚刘勇28.独立学院应用型人才培养模式改革探索云南师范大学商学院张云钢王雪莲韩越赵宗泽许玲29.科研支撑林科大学生实践能力培养的研究与实践西南林学院陈宝昆王昌命杨斌黄晓园戴志荣30.西部地方院校大学英语模块教学研究与实践昆明理工大学杨世强王荣媛郝兴跃李玉琼刘艳31.提高临床医学教学水平的探索与实践昆明医学院陈明清韦嘉倪锐志赵卫何黎32.机电设备维修与管理专业理实一体化和工学结合教学研究昆明工业职业技术学院张钢王红伟彭戎曹宇雷必钢33.完善基础医学实验教学体系探索学生能力培养新途径大理学院吴建新白丽田昆仑郭宪国申元英34.创立民族民间文化传习馆构建能力本位本土化课程玉溪师范学院张汉东孙燕程斌陈江晓孙丹婷35.热带园艺应用型人才培养模式的创新与实践思茅师范高等专科学校杜巍李宏伟毕廷菊章靖陶川36.汽车运用技术专业“岗位导向校企联合培养”人才培养模式探索与实践云南交通职业技术学院杨宏进宋麓明邢忠义张发龙张嘉智37.有机化学课程建设与应用研究曲靖师范学院汪帆杨思娅杨芬刘品华38.建设开放性实验室，促进创新型人才培养云南大学杨军宗容施继红裴以建蒋慕蓉39.地方综合性艺术院校教学质量保障体系的建设与实践云南艺术学院陈勇郭浩丁煜伦付梅段晋昆40.小学教师专业化培养模式及其实践教学的改革与创新楚雄师范学院陈兰香赵天培陶汝林吴永社段连鑫41.医学临床教学基地内部质量保障体系建设昆明医学院杨达宽夏晓玲何勤敖丽娟唐新明42.创新型人才培养的实验教学改革与实践昆明理工大学宋智夏锋唐荣刘桂芳熊志坚43.云南省高职院校人才培养工作评估研究与实践云南省高等教育评估中心张国华董云川刘康宁44.旅游专业人才培养规格与模式、课程与实验室建设探索与实践昆明学院张明清窦志萍岳怀仁郝旭霞黄继元45.通用网络教学平台开发与应用云南农业大学杨毅雷兴刚饶志坚洪树琼曹志勇46.“形势与政策”课教育教学改革云南师范大学周本贞陈路李申文罗文邬农47.提高化工类大学生工程能力的创新实践教学研究与实践昆明理工大学周梅村余旭亚杨庆云宋鹏云顾丽莉48.西部地区教育硕士培养模式的构建与实践云南师范大学郑勤红罗致含罗利佳何斌张绍宗49.测绘工程技术专业递进、组合式教学模式改革实施方案云南国土资源职业学院苟伟黄涛殷英董云50.西部地方高师院校数学与应用数学专业人才培养模式改革的探索与实践云南师范大学郭震王涛朱维宗化存才黄永明51.构建教学平台促进团队发展探索与实践西南林学院胥辉王昌命李永和费建国郭盘江52.三年制煤矿机械专业整体教学改革方案研究云南能源职业技术学院赵瑞安邓开陆季春张书征庄严53.以素质教育为核心构建“模块化”大学语文教学新体系云南农业大学洪树琼李伟黎文李荣兴董华54.工商管理专业本科“全过程、链锁式”实践教学模式的创建与应用云南大学姚建文张建民王克岭张霓陶小龙55.《民族传统体育》精品课程建设的探索与实践云南师范大学饶远陈敏陈斌左力熊亚兵56.英力克：创建英语语言环境的可持续性发展模式丽江师范高等专科学校段平华沈紫拉杨丽萍王晓芸杨润生57.马克思主义哲学原理教学改革与思想政治教育专业学生核心素质的培养大理学院赵金元施福昆李鸿昌鲍宏光58.新型中医临床人才实践技能培养模式改革与探索云南中医学院秦国政张宏叶建州苗晓玲李世辉59.以专业基本技能为核心的学生能力培养研究与实践大理学院钱金袱段利华林椿榕李鸿昌李彬60.玉溪师范学院应用型人才培养教学体系的探索与实践玉溪师范学院高卫国高洪谢永安莫晓辉陶琳61.中医方剂学多维立体化综合教学模式的构建与实践云南中医学院秦竹熊洪艳张胜李铭马凤丽62.《中国古代文学》课程人文教育资源综合开发与利用曲靖师范学院高小和蔡燕臧国书郭兴良朱堂锦63.信息类本科专业实践、创新能力培养模式探索与研究昆明理工大学黄青松万舟张长胜龙华杨立功64.师范院校生物科学综合性、设计性实验教学改革的研究与实践云南师范大学龚明林卫东李忠光范丽仙许波65.西部农科高校学位与研究生教育发展的探索与实践云南农业大学萧风回高洪文斌余佳祥周玲66.临床医学肿瘤专业教学模式的构建与实践昆明医学院隋军黄云超王绍尧刘志敏蒋永新67.开发云南民族传统体育资源构建大学体育课程体系玉溪师范学院程斌聂锐新赵兴武刘林陈琍琍68.边疆农科高素质应用型人才培养的研究与实践云南农业大学雷兴刚戴志明郭华春段纲赵燕妮69.科研教学结合，建设一流的道路交通虚拟现实教学演示与探索实验室昆明理工大学熊坚万华森秦雅琴郭凤香贾现广。

第七届云南省教育教学成果奖（高等教育）申报依托学科优势构建冶金与材料专业人才多元化培养体系的探索与实践成果总结成果完成人：彭金辉、干勇、华一新、赵昆渝、易健宏完成单位：昆明理工大学；钢铁研究总院二○一二年十月十日一、项目研究背景随着经济社会和科学技术的发展，社会对工程技术人才的需求日趋多元化，工程教育不仅需要培养厚基础、宽口径、重实践、强能力的“应用型”人才，还需要培养一批基础扎实、素质全面、创新能力强、个性突出、视野宽广的“研究型”人才。

因此，以个性化教育为导向，培养“应用型”和“研究型”工程技术人才是高等工程教育服务于创新型国家建设的迫切需要。

冶金与材料学科是昆明理工大学58年办学积淀形成的特色优势学科，具有“有色金属冶金”国家级重点学科，“冶金工程”和“材料科学与工程”一级学科博士授权点，“真空冶金”国家工程实验室，“微波能工程应用及装备技术”国家地方联合工程实验室，“复杂有色金属资源清洁利用”国家重点实验室(培育基地)，省部级重点实验室和工程研究中心16个；近年来获国家级科技奖励3项，省部级科技奖励56项，国家发明专利306项;已培养本科毕业生20540余人、硕士3120余人、博士230余人，已培养的毕业生中涌现出徐祖耀、殷之文、张国成、戴永年4位院士，3位省部级领导，32位地厅级领导、100余位大型国有企业领导以及一大批行业领军人物。

本成果立足学科群体优势，结合学科发展和专业布局特色，与钢铁研究总院合作，建立学科与专业互促机制，按照“宽口径、厚基础、强能力、重个性、广视野、求创新”的人才培养标准，构建了冶金与材料专业人才“多模式培养—多学科交叉—多方位协同—国际化合作”的多元化培养体系，以满足创新型国家建设对多元化高素质人才的重大需求。

二、成果主要内容及创新点2.1成果主要内容（1）多模式培养，适应社会对人才日益多元化的需求以“应用型”和“研究型”多元化人才培养为目标，以社会和冶金材料行业的人才需求为背景，以学生为本，坚持“通识教育、按类教学、倡导探索”的教育理念，实施因材施教、分流培养，坚持工程教育四年不断线，构建了“校企联合、校际交流、国际合作”的多元化培养模式，促进学生“知识、能力、素质”协调发展。

云南省教育科学研究优秀成果奖励办法（）第一条云南省教育科学研究优秀成果评奖工作每两年进行一次，本办法所称省教育科学研究优秀成果奖励，是指给予在教育科学研究方面取得优秀成果的集体和个人的奖励，为本省教育科学研究领域的最高奖励。

第二条评奖范围（一）凡列入全国或全省教育科学规划的各级各类立项课题均可参评，具体的年限要求以当年发布的通知要求为准。

（二）凡未列入全省教育科学规划而公开发表和出版的教育科研成果，或不宜公开发表和出版但被决策、管理部门采用的教育科研成果，经州（市）级教育行政部门或高等院校推荐，也可参加评奖。

（三）凡已获国家或省级优秀成果奖的成果不能重复评奖。

凡在往届国家、省级或州（市）级优秀成果评奖中未获奖的成果不再参加评奖。

第三条参评成果（一）已公开出版和发表的成果，包括著作、论文、校本课程资源等（不包括工具书、论文集、教材、音像制品、计算机软件）。

（二）课题结题后的结题报告、研究报告（以结题证书和结题证明材料为准）。

（三）不宜公开出版和发表，但已被决策、管理部门采用的咨询报告（需提供采纳单位证明）。

第四条评选标准评价和推荐入选课题要注重原创性，注意实际价值，要认真贯彻政治标准与学术标准相统一和保证质量、宁缺毋滥的原则。

依据这一要求，各等级奖项的基本评审标准为：（一）选题有重大意义，学风端正，观点鲜明，资料翔实，数据准确，论据充分，逻辑严密，方法科学，具有创新性和前沿性，符合学术道德和学术规范要求。

在学科发展或某一领域的研究方面有较大突破或填补空白，提出了十分重要的新观点、新结论，居本学科研究领域的前沿领先地位，对解决教育改革和发展中的重大理论问题和实际问题有突破性贡献，对提高我省的教育教学质量有重大作用，得到学术界和社会高度评价的成果，可推荐入选一等奖。

（二）选题有重要意义，研究难度较大，研究方法有较大创新，在学科发展或某一领域的研究方面有突破，提出了新观点、新结论，居本学科研究领域的先进地位，对解决教育改革和发展中的重大理论问题和实际问题有较大贡献，对提高我省的教育教学质量有较重要的作用，得到学术界和社会较高评价的成果，可推荐入选二等奖。

学校教育教学科研成果奖励评定细则1.获奖内容指论文、教案、教育教学设计、课件、案例、评优课等。

2.获奖范围指教育有关部门和教育学会组织的教科研评比活动，凡民间团体组织的评比活动均不予以奖励。

3.成果由多人合作完成的，只对第一作者进行奖励。

课题获奖，奖给课题组。

4.同一教科研成果在不同级别获奖，按最高级别奖励一次。

5.教师获得成果的时间必须在本校工作时间内。

论文发表期刊日期或证书发放日期为准。

6.指导学生获奖或者在学生刊物上发表论文均不属于本方案的奖励范围。

7.凡在刊物以专辑形式发表的论文则降一级奖励。

8.同一成果已获得学校其他部门奖励的不再予以奖励。

学校教育教学科研成果奖励评定细则（二）第一章总则第一条为了激励教师们在教育教学科研方面的创新与努力，提高学校的教学质量和科研水平，特制定本细则。

第二条学校教育教学科研成果奖励是对在教育教学科研方面作出突出贡献的教师进行表彰和奖励的一项制度。

第三条学校教育教学科研成果奖励评定的原则是公正、公平、有效。

第四条学校教育教学科研成果奖励分为个人奖和团队奖两类。

第五条学校教育教学科研成果奖励评定由学校教务处牵头，充分发挥教师工作部门和学科负责人的作用，形成集体评审的结果。

第六条学校教育教学科研成果奖励评定工作应当遵循科学、公正、客观、公开的原则进行。

第七条学校教育教学科研成果奖励的资金来自学校教育经费，按照一定比例分配。

第二章个人奖的评定第八条个人奖是对个人在教育教学科研方面有突出贡献的教师进行表彰和奖励的一项制度。

第九条个人奖评审的原则是公正、公平、有效。

第十条个人奖的评定指标主要包括以下几个方面：（一）教学成果：主要评价教师在教学活动中所取得的优异成果，包括教学质量、学生评价、教学方法创新、获奖情况等。

（二）教育科研成果：主要评价教师在教育科研活动中所取得的突出成就，包括论文发表、科研项目、教材编写、课程研究等。

（三）教育改革创新：主要评价教师在教育改革创新方面所做出的贡献和成果。

中文系教师获院系（含）以上奖励一览表姓名奖项发奖单位时间曹晓宏云南省高等学校教学、科研带头人云南省教育厅2008年 4月《文化自信的启蒙意义与和谐社会的文化依托---- 从楚雄彝州地域曹晓宏文化源流及其属性说起》一文获“建设和谐校园文化与社会主义核心中共云南省委教育厅云南省教育厅2007 年 10 月价值体系”论文评选二等奖曹晓宏楚雄州优秀社会科学工作者中共楚雄州委楚雄州人民政府2007 年 12 月曹晓宏优秀共产党员中共云南省委高等院校工作委员会2006年 6月曹晓宏云南省第十次哲学社会科学优秀成果评奖一等奖云南省人民政府2005 年 10 月曹晓宏精神文明建设工作突出贡献奖中共楚雄师范学院委员会楚雄师范学院2006年 4月曹晓宏《楹联三题》获“姚安征文”一等奖姚安县委宣传部姚安县文联2007年 9月曹晓宏2004 年度云南省教育科研课题成果评奖二等奖云南省教育科学规划领导小组办公室2004 年 12 月曹晓宏首届师德表率中共楚雄师范学院委员会2004年 4月曹晓宏云南省政府特殊津贴云南省政府2000年 4月曹晓宏云南省高校省级教学名师云南省教育厅2008年 7月曹晓宏全国教育系统劳动模范全国模范教师中华人民共和国教育部中华人民共和国人事部1998年 9月曹晓宏楚雄师范学院科研工作先进个人楚雄师范学院2009年 6月马粼2007 年度校园安全稳定工作先进个人学院安全稳定工作小组2008年 2月马粼2005 年度就业工作先进个人楚雄师范学院招生就业工作领导小组2005 年 12 月马粼2006 年度就业工作先进个人楚雄师范学院招生就业工作领导小组2007年 1月马粼《高校二级工会如何发挥职能作用》一文获云南省教卫科工会20072007 年 12 月云南省教育卫生科研工会刘晓燕年度优秀调研报告和论文评选活动三等奖马粼与刘晓燕合作《高校二级工会如何发挥职能作用》荣获楚雄州教育工会2008年 1月一等奖马粼“云岭先锋”党务工作者中共楚雄师范学院委员会2008年 6月马粼《高校二级工会在构建和谐社会中如何发挥作用》荣获一等奖楚雄州教育工会2009年 1月姜明2001 年度优秀科研成果三等奖楚雄师范学院2003年 1月姜明2004 年度校园安全稳定工作先进个人楚雄师范学院2005年 2月姜明2003— 2004 学年“云岭先锋”党务工作者中共楚雄师范学院委员会2004年 6月姜明2006 年校园安全稳定工作中，工作突出被评为先进个人楚雄师范学院2007年 1月姜明2008 年毕业生就业工作中，荣获先进个人一等奖楚雄师范学院2009年 3月尹艳燕第二届师德标兵楚雄师范学院2008年 6月杨涛“创先争优”活动中被评为“云岭先锋”共产党员中共楚雄师范学院委员会2008年 6月杨涛云南省优秀共青团干部共青团云南省委2007年 5月姚霁珊论文《渗透在蒲松龄狐鬼世界中的文人心态》获楚雄州第五届社会科中共楚雄州委楚雄州人民政府2007 年 12 月学优秀成果奖三等奖杨涛青年教师课堂教学比赛二等奖楚雄师范学院2005年 6月钱万民青年教师课堂教学比赛二等奖楚雄师范学院2002 年 12 月胡文群毕业论文优秀指导教师楚雄师范学院2008年 7月胡文群精神文明建设工作先进个人中共楚雄师范学院委员会楚雄师范学院2006年 4月胡文群优秀指导教师楚雄师范学院精神文明建设委员会2006年 3月胡文群优秀社员九三学社楚雄支社2005年 1月胡文群优秀测试工作者云南省语言文字工作委员会云南省教育厅2005年 4月樊英论文《反思与重建——论新课程对教师的角色定位》获楚雄州第五届中共楚雄州委楚雄州人民政府2007 年 12 月社会科学优秀成果奖一等奖洪丽霁云南省优秀毕业生云南省教育厅2007年 6月洪丽霁创新奖学金获得者云南大学人文学院中文系2006 年 11 月洪丽霁优秀学生一等奖学金云南大学2005 年 12 月洪丽霁教职工首届卡拉 ok 大赛三等奖楚雄师范学院工会委员会2003 年 11 月马红惠第五届青年教师课堂教学比赛三等奖楚雄师范学院2007年 5月刘晓燕“工会工作先进个人”楚雄师范学院2009年 3月刘晓燕《高校二级工会在构建和谐社会中如何发挥作用》荣获一等奖楚雄州教育工会2009年 1月李德梅《溪峡谷的萝卜》荣获楚雄州第二届“马樱花文艺创作奖”文学类三中共楚雄州委楚雄州人民政府2007 年 12 月等奖陈永香2007、 2008 两届毕业论文优秀指导教师楚雄师范学院2008年 7月陈永香2005— 2006 学年“云岭先锋”共产党员中共楚雄师范学院委员会2006年 6月陈永香《梅葛与马游彝族民俗》获“姚安征文“二等奖姚安县委宣传部姚安县文联2007年 9月陈永香《对民俗学与相关学科关系的再认识》获科研成果三等奖楚雄师范学院2002 年 10 月陈永香2003 年度工会活动积极分子楚雄师范学院工会2004年 3月陈永香《彝族史诗《梅葛》现状的调查与研究》获楚雄州第五届社会科学三中共楚雄州委楚雄州人民政府2007 年 12 月等奖陈永香楚雄师范学院科研工作先进个人楚雄师范学院2009年 6月陈永香《楚雄彝族民俗大观》获第二届“马缨花文艺创作奖”一等奖中共楚雄州委楚雄州人民政府2007 年 12 月陈永香《《梅葛》的文化学解读》（撰写两章六万多字）获中国民间文艺山中国文联、云南省人民政府政府2009 年 12 月花奖，云南省社会科学三等奖。