乙醇酸氧化酶

2、细胞信号转导：是指细胞通过胞膜或胞内受体感受信息分子的刺激，经细胞内信号转导系统转换，从而影响细胞生物学功能的过程 。

3、代谢源（metabolic source ）: 是指能够制造并输出同化物的组织、器官或部位。

如绿色植物的功能叶，种子萌发期间的胚乳或子叶，春季萌发时二年生或多年生植物的块根、块茎、种子等。

4、代谢库：接纳消耗或贮藏有机物质的组织或部位。

又称代谢池 。

5、光合性能：是指植物光合系统的生产性能或生产能力。

光合生产性能与作物产量的关系是：光合产量的多少取决于光合面积、光合性能与光合时间三项因素。

农作物经济产量与光合作用的关系可用下式表示： 经济产量=[(光合面积 X 光合能力 X 光合时间）— 消耗] X 经济系数6、光合速率（photosynthetic rate ）：是指单位时间、单位叶面积吸收CO2的量或放出O2的量。

常用单位12--••h m mol μ，12--••s m mol μ 7、光和生产率（photosynthetic produce rate ）：又称净同化率（NAR ）,是指植物在较长时间（一昼夜或一周）内，单位叶面积产生的干物质质量。

常用单位12--••d m g8、氧化磷酸化：生物化学过程，是物质在体内氧化时释放的能量供给ADP 与无机磷合成ATP 的偶联反应。

主要在线粒体中进行。

9、质子泵：能逆浓度梯度转运氢离子通过膜的膜整合糖蛋白。

质子泵的驱动依赖于ATP 水解释放的能量，质子泵在泵出氢离子时造成膜两侧的pH 梯度和电位梯度。

10、水分临界期：作物对水分最敏感时期，即水分过多或缺乏对产量影响最大的时期 。

11、呼吸跃变（climacteric ）：当果实成熟到一定时期，其呼吸速率突然增高，最后又突然下降的现象。

12、种子活力：即种子的健壮度，是种子发芽和出苗率、幼苗生长的潜势、植株抗逆能力和生产潜力的总和，是种子品质的重要指标。

13、种子生活力（viability ）：是指种子的发芽潜在能力和种胚所具有的生命力，通常是指一批种子中具有生命力（即活的）种子数占种子总数的百分率。

乙醇氧化酶乙醇氧化酶 1别名：乙醇氧化酶/Alcohol Oxidase酶（德语：Enzym，源于希腊语：ενζυμον，“在酵里面”；又称酵素），指具有生物催化功能的高分子物质。

在酶的催化反应体系中，反应物分子被称为底物，底物通过酶的催化转化为另一种分子。

几乎所有的细胞活动进程都需要酶的参与，以提高效率。

与其他非生物催化剂相似，酶透过降低化学反应的活化能（用Ea或ΔG表示）来加快反应速率，大多数的酶可以将其催化的反应之速率提高上百万倍；事实上，酶是提供另一条活化能需求较低的途径，使更多反应粒子能拥有不少于活化能的动能，从而加快反应速率。

酶作为催化剂，本身在反应过程中不被消耗，也不影响反应的化学平衡。

酶有正催化作用，也有负催化作用，不只是加快反应速率，也有减低反应速率。

与其他非生物催化剂不同的是，酶具有高度的专一性，只催化特定的反应或产生特定的构型。

虽然酶大多是蛋白质，但少数具有生物催化功能的分子并非为蛋白质，有一些被称为核酶的RNA分子和一些DNA分子同样具有催化功能。

此外，通过人工合成所谓人工酶也具有与酶类似的催化活性。

有人认为酶应定义为具有催化功能的生物大分子。

酶的催化活性可以受其他分子影响：抑制剂是可以降低酶活性的分子；激活剂则是可以增加酶活性的分子。

有许多药物就是酶的抑制剂。

酶的活性还可以被温度、化学环境（如pH 值）、底物浓度以及电磁波（如微波）等许多因素所影响。

人体和哺乳动物体内含有5000种酶。

它们或是溶解于细胞质中，或是与各种膜结构结合在一起，或是位于细胞内其他结构的特定位置上(是细胞的一种产物），只有在被需要时才被激活，这些酶统称胞内酶；另外，还有一些在细胞内合成后再分泌至细胞外的酶──胞外酶。

酶催化化学反应的能力叫酶活力（或称酶活性）。

酶活力可受多种因素的调节控制，从而使生物体能适应外界条件的变化，维持生命活动。

没有酶的参与，新陈代谢几乎不能完成，生命活动就根本无法维持。

乙醇氧化酶 1上海安研生物公司备有上万种产品！所有生化试剂产品都具有类似以下产品价格优势，质量保证!欢迎新老客户垂询！1. 一抗及标记一抗抗体2.二抗及标记二抗抗体3.蛋白及抗原4.人Elisa试剂盒5.小鼠Elisa试剂盒6.大鼠Elisa试剂盒7.豚鼠Elisa试剂盒8.猪Elisa试剂盒9.鸡Elisa试剂盒10.各种动物Elisa试剂盒 11.植物Elisa试剂盒12.微生物Elisa试剂盒13.分离试剂 14.酶与辅酶 15.蛋白质16.抗生素 17.放免试剂盒18.各种动物细胞株、细胞系..... 等等公司产品经无数次市场验证，若出现质量问题可无条件换货或退货。

3本实验部分工作在中国科学院上海植物生理研究所植物分子遣传国家重点实验室中完成,并得到该实验室研究课题(104KF -9202)、国家自然科学基金和华南师范大学校内项目基金的资助。

　收稿日期:1995-09-15水稻乙醇酸氧化酶的纯化和特性分析徐　杰华南师范大学生物技术研究所　广州　510631摘要　从水稻绿叶中分离纯化得到一种单亚基的乙醇酸氧化酶,其全酶分子量(M r )约为260kD ,电泳特性表明该酶的p I <8.3.我们用改进的8%PA GE ,结合Western blot ,测定水稻绿叶中还存在一种p I >8.3的全酶M r >669kD 的乙醇酸氧氧化酶。

关键词　乙醇酸氧化酶;分子量;水稻中图分类号　Q946.5 乙醇酸氧化酶(EC1.1.3.15简称GO )是光呼吸的关键酶,抑制其活性可显著提高C 3植物的光合效率[1,2],故研究重要的C 3经济作物如水稻的GO 具有重要意义,本文首次报导水稻乙醇酸氧化酶的纯化和分子量等特性。

1　材料与方法(1)3种水稻样品(水稻绿叶,黄化苗以及黄化苗经底物乙醇酸诱导)的获得水稻(Oryza sativa )种子经萌发后,部分在25℃下,经人工气候室培养20d ,获得其绿叶;部分在相同条件下遮光培养20d ,获得黄化苗;该黄化苗的一部分用于真空渗入底物乙醇酸,方法按徐杰等[3]。

(2)水稻绿叶中GO 的提纯和活性测定按徐杰和李明启[4]。

(3)蛋白质含量测定按Bradford [5]。

(4)提纯后GO 的全酶M r 和亚基组成的测定4%～20%PA GE 和SDS -PA GE 按张龙翔等[6],电泳缓冲液的p H =8.3,均采用垂直板电泳槽,其中4%～20%PA GE 的电泳是从负极到正极进行,故只能测定p I <8.3的蛋白。

5种标准蛋白为Pharmacia 产品(5)水稻中高p I (>8.3)的GO 的全酶M r 的测定由于经典的PA GE 只能测定p I <8.3的蛋白M r ,而我们已证实在同一菠菜中存在3种不同p I 的GO ,即p I >8.3,p I ≈8.3和p I <8.3[7],它们的稳定性相差很大,用普通的纯化方法难于得到菠菜中p I >8.3的GO [4],我们用其中的一种SDS -PA GE 为单带,p I <8.3的GO 为抗原制备了其抗体[3],在此基础上,我们用改进的PA GE ,结合Western blot ,测定高p I (>8.3)的GO 的全酶M r 。

高等植物呼吸代谢的特点，一是复杂性，呼吸作用的整个过程是一系列复杂的酶促反应；二是物质代谢和能量代谢的中心，它的中间产物又是合成多种重要有机物的原料，起到物质代谢的枢纽作用；三是呼吸代谢的多样性，表现在呼吸途径的多样性。

如植物呼吸代谢并不只有一种途径，不同的植物、同一植物的不同器官或组织在不同的生育时期、不同环境条件下，呼吸底物的氧化降解可以走不同的途径。

此外，表现在电子传递系统的多样性和末端氧化酶的多样性。

1糖酵解在无氧条件下酶将葡萄糖降解成丙酮酸，并释放能量的过程，称为糖酵解（glycolysis）。

为纪念在研究糖酵解途径方面有突出贡献的三位德国生物化学家Embden,Meyerhof和Parnas,又把糖酵解途径称为Embden-Meyerhof-Parnas途径（EMPPathway）。

糖酵解普遍存在于动物、植物、微生物的所有细胞中，是在细胞质中进行的。

虽然糖酵解的部分反应可以在质体或叶绿体中进行，但不能完成全过程。

糖酵解过程中糖分子的氧化分解是没有氧分子的参与下进行的，其氧化作用所需的的氧是来自水分子和被氧化的糖分子，故又称为分子内氧化。

以葡萄糖为例，糖酵解的反应式如下：C6H12O6+2NAD++2ADP+2Pi→2C3H4O3+2NADH+2H++2ATP+2H2O糖酵解具有多种功能。

（1）糖酵解的一些中间产物（如甘油醛-3-磷酸等）是合成其他有机物质的重要原料，其终产物丙酮酸在生化上十分活跃，可通过各种代谢途径，产生不同物质。

（2）糖酵解中生成的A TP和NADH，可使生物体获得生命活动所需要的部分能量和还原力。

（3）糖酵解普遍存在生物体中，是有氧呼吸和无氧呼吸经历的共同途径。

（4）糖酵解有三个不可逆反应,但其它反应均是可逆的,它为糖异生作用提供基本途径。

糖酵解的调控。

糖酵解过程中有3个不可逆反应,分别由已糖激酶,磷酸果糖激酶,丙酮酸激酶所催化.磷酸果糖激酶(PFK):ADP和AMP为它的别构激活剂,ATP为抑制剂。

乙醇酸氧化酶（glycollicoxidase,GO）试剂盒说明书乙醇酸氧化酶（glycollic oxidase, GO）试剂盒说明书微量法100T/96S注意：正式测定之前选择23个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：乙醇酸氧化酶（EC1.1.3.1）是植物光呼吸代谢中的关键酶，也是光下合成草酸的关键酶，它催化乙醇酸氧化生成乙醛酸，对研究光呼吸代谢过程及其调控具有重要意义。

测定原理：乙醇酸氧化酶催化乙醇酸氧化生成乙醛酸，乙醛酸和盐酸苯肼反应生成乙醛酸苯腙，在324nm有特征吸收峰。

自备实验用品及仪器：天平、低温离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板（UV板）。

试剂组成和配制：提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存。

试剂一：液体15mL×1瓶，4℃保存。

试剂二：粉剂×1瓶，4℃避光保存，临用前加5mL双蒸水溶解；用不完的试剂分装后20℃保存，禁止反复冻融。

试剂三：液体2mL×1支，4℃保存。

酶液提取：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。

12000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

测定操作表：测定管样本（μL）10试剂一（μL）130试剂二（μL）40试剂三（μL）20充分混匀，立即于微量石英比色皿/96孔板中测定324nm处10s和190s吸光值A1和A2，△A=A2 A1酶活性计算公式：a．用微量石英比色皿测定的计算公式如下1．按照蛋白浓度计算酶活性定义：每毫克蛋白每分钟氧化1nmol乙醇酸所需的酶量为一个酶活力单位。

GO活性（nmol/min /mg prot）= ×V反总÷（V样×Cpr）÷T= 392×△A÷Cpr2．按照样本质量计算酶活性定义：每克组织每分钟氧化1 nmol乙醇酸所需的酶量为一个酶活力单位。

乙醇氧化酶形貌概述及解释说明1. 引言1.1 概述本文将介绍乙醇氧化酶形貌的相关内容。

乙醇氧化酶是一种重要的生物催化剂，具有广泛的应用领域，如酒精代谢、乙醇燃料电池等。

了解乙醇氧化酶的形貌对于深入理解其催化机制以及优化其性能具有重要意义。

1.2 文章结构本文分为五个部分进行讨论。

引言部分即当前所处的章节，主要介绍文章的背景和目标。

接下来，正文部分将详细介绍乙醇氧化酶形貌的特点、结构和功能。

在第三章节中，我们将探讨乙醇氧化酶与其他相关蛋白质或配体之间的相互作用。

第四章节将涉及最新的研究进展和应用前景。

最后，在结论部分对本文进行总结并提出未来可能的研究方向。

1.3 目的本文旨在全面了解乙醇氧化过程中，乙醇氧化酶形貌对反应活性和选择性产生影响的原因。

通过对乙醇氧化酶的形貌特征进行解析，我们可以更好地理解其在生物催化过程中的作用机制，为进一步优化乙醇氧化酶的性能和开发相关领域的应用提供理论依据。

以上是“1. 引言”部分的内容，请按照你的需求进一步修改或补充。

如果有其他问题，请随时告诉我。

2. 正文乙醇氧化酶（Alcohol oxidase，简称AOX）是一种重要的酶类分子，在不同的生物体中具有广泛的分布。

其功能主要是催化乙醇的氧化反应，将乙醇转化为相应的酮或醛。

本节将对乙醇氧化酶的形貌进行概述，并对其结构与功能进行解释说明。

2.1 乙醇氧化酶的形貌概述乙醇氧化酶通常由多个亚基组成，这些亚基间通过非共价键相互连接形成复合物。

根据研究，不同来源的乙醇氧化酶在形貌上存在一定差异。

以甲基铜霉菌为例，其乙醇氧化酶主要由两个亚基A和B组成。

其中，亚基A含有FAD辅因子并催化电子传递反应，而亚基B则是催化剂中心，促使底物与FAD之间发生直接氧化反应。

此外，在其他生物体内也存在着该类似分子机制和构造特点的乙醇氧化酶。

尽管其具体形貌可能有所差异，但整体结构和功能均具备乙醇氧化酶的基本特征。

2.2 乙醇氧化酶的结构与功能解释说明乙醇氧化酶的结构决定了其催化反应的机制和底物选择性。

各种植物代谢途径介绍高等植物呼吸代谢的特点，一是复杂性，呼吸作用的整个过程是一系列复杂的酶促反应；二是物质代谢和能量代谢的中心，它的中间产物又是合成多种重要有机物的原料，起到物质代谢的枢纽作用；三是呼吸代谢的多样性，表现在呼吸途径的多样性。

如植物呼吸代谢并不只有一种途径，不同的植物、同一植物的不同器官或组织在不同的生育时期、不同环境条件下，呼吸底物的氧化降解可以走不同的途径。

此外，表现在电子传递系统的多样性和末端氧化酶的多样性。

1糖酵解在无氧条件下酶将葡萄糖降解成丙酮酸，并释放能量的过程，称为糖酵解（glycolysis）。

为纪念在研究糖酵解途径方面有突出贡献的三位德国生物化学家Embden,Meyerhof和Parnas,又把糖酵解途径称为Embden-Meyerhof-Parnas途径（EMPPathway）。

糖酵解普遍存在于动物、植物、微生物的所有细胞中，是在细胞质中进行的。

虽然糖酵解的部分反应可以在质体或叶绿体中进行，但不能完成全过程。

糖酵解过程中糖分子的氧化分解是没有氧分子的参与下进行的，其氧化作用所需的的氧是来自水分子和被氧化的糖分子，故又称为分子内氧化。

以葡萄糖为例，糖酵解的反应式如下：C6H12O6+2NA D++2ADP+2Pi→2C3H4O3+2NADH+2H++2 A TP+2H2O糖酵解具有多种功能。

（1）糖酵解的一些中间产物（如甘油醛-3-磷酸等）是合成其他有机物质的重要原料，其终产物丙酮酸在生化上十分活跃，可通过各种代谢途径，产生不同物质。

（2）糖酵解中生成的A TP和NADH，可使生物体获得生命活动所需要的部分能量和还原力。

（3）糖酵解普遍存在生物体中，是有氧呼吸和无氧呼吸经历的共同途径。

（4）糖酵解有三个不可逆反应,但其它反应均是可逆的,它为糖异生作用提供基本途径。

糖酵解的调控。

糖酵解过程中有3个不可逆反应,分别由已糖激酶,磷酸果糖激酶,丙酮酸激酶所催化.磷酸果糖激酶(PFK):ADP和AMP为它的别构激活剂,A TP为抑制剂。

收稿日期:2001-10-26基金项目:国家自然科学基金项目(39800009);广东省自然科学基金项目(970308)作者简介:徐杰(1964-),男,广东梅县人,华南师范大学研究员,博士.文章编号:1000-5463(2002)03-0106-06乙醇酸氧化酶研究进展徐 杰(华南师范大学生命科学学院,广东广州510631)摘要:概述乙醇酸氧化酶研究存在的问题和进展.指出乙醇酸氧化酶被认为只含单种亚基,但该观点难于解释不同植物乙醇酸氧化酶为何等电点(pI )相差较大.首次介绍乙醇酸氧化酶是一种至少有GO (pI 7.4)、GO !(pI 9.4)和GO ∀(pI 8.3)的同工酶,以及GO 只含单种亚基,GO !和GO ∀则可能含两种亚基的新观点.关键词:乙醇酸氧化酶;同工酶;研究进展中图分类号:Q946 5 文献标识码:ASTUDIES ON PROPERTIES A ND ADVA NC ES OF GLYCOLATE OXIDASEXU Jie(College of Li fe Sciences,South China Normal Univers ity,Guangz hou 510631,China)Abstract:Advances and problems in research on glycolate oxidase were discussed.Glycolate oxidase was c onsidered as a homogeneous enzyme consisted of one kind of subnuit and FMN be fore,but this vie w can not explain why many glycolate oxidases with different isoelectric point coexisted in different plants.A ne w theory was put forwards that glycolate oxidase was a isozyme including GO (pI 7.4),GO !(pI 9.4),and GO ∀(pI 8.3),where GO consisted of FMN and one kind of subunit,whereas GO !and GO ∀consisted of FMN and two kinds of subunit.Key words:glyc olate oxidase;isozyme;research advances乙醇酸氧化酶(EC 1.1.3.15GO)是植物光呼吸途径的关键酶.从理论上讲,降低光呼吸能提高植物特别是C 3植物如水稻的净光合速率.人们由此提出了通过抑制GO 活性以提高水稻产量的设想[1,2].在目前中国乃至世界人口不断增加和可耕种土地日益减少的情况下,对GO 的研究具有重要的理论意义和实际应用价值[3].光呼吸的发现可追溯到1920年Warburg 报告氧对小球藻光合作用的抑制[4].但提出和确定完整的光呼吸途径则是在上世纪60-70年代[2,4].在光呼吸途径被提出后的几十年间,人们围绕如何抑制GO 活性进行了大量的研究[4,5].在GO 研究早期,许多人致力于寻找GO 的活性抑制剂,并将之喷洒在植物叶面上,想2002年8月 Aug.2002 华南师范大学学报(自然科学版)JOURNAL OF SOUTH CHINA NORMAL UNIVERSITY (NATURAL SCIENCE EDITION) 2002年第3期 No.3,2002籍此提高植物的产量[6].如早期人们发现亚硫酸钠可提高植物的产量,Zelitch认为亚硫酸钠进入植物后和醛反应生成 -羟基磺酸,和GO的底物乙醇酸( -羟基乙酸)竞争从而抑制光呼吸[7].但后来亚硫酸钠被证实只是提高光合作用而不是抑制光呼吸[8].进一步研究表明,尽管人们已发现各种各样在体外能抑制GO活性的试剂,但所有这些试剂均不能真正有效抑制植物体内光呼吸GO的活性[5,8].人们对GO的酶学性质进行了大量的研究.前人已从多种高等植物和藻类中获得SDS-P AGE呈单带的GO[9-20],并据此认为GO是一个只含单种亚基和FMN的寡聚酶,不同植物的GO的亚基数和全酶分子量(M r)相差很大:如豌豆GO的M r为88kD和48kD[10];菠菜为270kD、140kD和70kD[9,15];黄瓜为700kD和180kD[12];浮萍GO的M r为250kD和500kD[20];南瓜为280-320kD[14];藻(S.paci f icun)为230kD[17];藻(M.viride)为150kD[19];C3、C4和C3-C4植物均为96kD[18];小麦、大麦、菠菜、烟草等C3植物为160-180 kD,玉米和甘蔗等C4植物为290-310kD[21].据此有人推测GO可能存在不同的聚合态[12,14,21].前人认为GO是一双功能酶,能同时催化乙醇酸和乙醛酸的氧化[22,23].用X-射线衍射法对GO的三级空间结构进行了测定,认为GO酶亚基呈8股 / 捅型结构[15,24-26].前人用化学试剂对GO的氨基酸进行修饰,表明赖氨酸、精氨酸、酪氨酸、组氨酸残基是GO活性中心的必需基团[27-31].最近人们对GO的分子生物学特性也进行了研究.已将菠菜、兵豆、南瓜等的GO的cDNA进行克隆和测序,推导出GO的氨基酸序列[32-36].证实GO基因表达受照光和底物的诱导[37].尽管目前人们在蛋白和基因水平对GO进行了大量的研究,但GO酶学特性还有许多疑点:前人认为GO只含单种亚基[9-20],GO可能是存在不同的聚合态从而导致植物的GO的亚基数和全酶分子量相差很大[5,9-20].但该观点难于解释不同植物GO为何等电点(pI)相差较大:如黄瓜GO约为8 4[12];豌豆是大于9 6[10];藻(S.paci f icun)为9 6[17];藻(M.viride)为7 6[19];小麦约为7 7[21];大麦约为7 1[38];浮萍GO的pI>9[20].菜心则有7 0、8 5、以及大于8 8等共5种不同pI的GO活性组分[39].在非变性凝胶电泳(native-PAGE)中不同的电泳行为、以及在DEAE-Cellulose柱层析中不同的洗脱特性等也表明GO电荷不均一:如南瓜纯化GO在pH8 9的native-PAGE中不会泳动,在pH4 5的则能向负极泳动并呈一条带,表明其pI 8 9[14];部分纯化的菠菜、豌豆和烟草等植物的GO在pH8 3的native-PAGE中呈两条活性带,一条泳动距离极小,另一条可泳动至正极(pI<8 3),两者对FMN的依赖性有明显的差别[40].和豌豆GO pI>9 6明显不同[10].用同一pH8 3洗脱液,报告GO活性在DE AE-Cellu lose柱层析的第一个蛋白峰[10]或第二个蛋白峰[28].GO氨基酸组成也有相互矛盾的报告:从菠菜和兵豆中克隆了GO cDNA,编码的氨基酸中富含碱性氨基酸,解释了GO具高pI[32-36].但也有报告菜心纯化GO的酸性氨基酸反而比碱性氨基酸要多[28].有人甚至还观察到菠菜GO 出现pI下降的现象:有报告高活性的菠菜GO在pH8 3的native-PAGE中是向负极泳动(pI> 8 3),该GO可衍生出向正极泳动(pI<8 3)的低活性的GO钝化蛋白.由于pI的改变,暗示GO 钝化蛋白可能是个矫作物,GO呈多个pI可能和纯化中产生的矫作物有关.但作者对GO的pI 下降并不十分肯定,只把该现象写在脚注里而不是正文中[10].另外,目前对GO是否能同时催化乙醇酸和乙醛酸的氧化也有争议,早期Richardson和Tolbert,以及Tolbert和Burris均认为GO是双功能酶[21,22].近期Havir在GO纯化过程中,不断测定酶液催化乙醇酸和乙醛酸的氧化的活化能,并计算其比值,发现不同纯化程度的酶液有不107同的比值,据此推测催化乙醇酸和乙醛酸的氧化可能是由不同的酶来完成,即乙醇酸氧化酶只催化乙醇酸的氧化,而乙醛酸的氧化是由独立的乙醛酸氧化酶来催化[41].我们从菠菜和菜心中纯化得到经SDS-PAGE后为一条带的GO,用氧电极法证实其能同时催化乙醇酸和乙醛酸的氧化,首次明确证实GO是双功能酶[42,43].王炜军也报告菜心GO是双功能酶[44].最近我们首次报告,菠菜、水稻和菜心植物中至少含有不同pI的GO 、GO!和GO∀3个同工酶;它们应有不同的分子结构但互相之间有免疫同源性;3者在GO活性、稳定性、M r、pI 等均存在较大的差异[16,45-48].进一步研究表明:菠菜GO 只含酸性亚基,而GO!和GO∀同时含酸性亚基和67kD碱性亚基,但两者的酸性亚基/碱性亚基的比例不同.GO!和GO∀两种亚基的结合可能较松散,两种亚基可解离并导致其pI和活性的改变:当部分碱性亚基从GO !离解出来后,GO!就变为GO∀矫作物;当所有碱性亚基从GO∀离解出来后,GO∀就变为GO 矫作物.水稻3个GO同工酶者虽并存在植物体内,但在不同生理条件下3者的相对含量可能是不同的;GO!的相对含量会随水稻黄化苗转绿过程而增加,表明两种亚基在体内可发生聚合现象(表1)[49-51].因此,GO同工酶酸性亚基/碱性亚基的比例可能是多样的,且比例可能是会变化的.GO 、GO!和GO∀只是其中相对较稳定的状态.从而导致前人报告的GO 有电荷不均一现象[9-20].表1 菠菜中乙醇酸氧化酶同工酶的分子特性GO GO!GO∀pI7.49.48.3SDS-PAGE/kD40#240#2,67#240#267#2稳定性较好很差差活性低(1.6U)高(33.3U)中等(14U)以上实验结果对研究GO的调节特性具有重要的指导意义.前人一方面把所有具不同pI 和M r的不同的GO同工酶均称为GO;另一方面只认为SDS-PAGE为单带的GO 才是纯的GO.前者混淆不同的GO同工酶,从而造成所报告GO的pI和M r的不一致;而后者则限制了人们对除GO 之外的其它GO同工酶的深入研究,因为他们会把除GO 之外的其它GO同工酶视为含杂蛋白的GO .因此前人只会先获得GO ,再研究其的调节特性,结果表明进展甚少[3].即目前有关GO的三维空间结构、未发现GO的调节特性和GO活性中心的氨基酸等的报道,均只针对GO 而言,而研究GO∀和GO!的分子结构与功能、它们和GO 的相互关系、新发现的碱性亚基的性质等,可能会为发现GO同工酶的调节特性,并最终人为控制光呼吸以提高植物产量提供新的理论依据.国外学者也观察到GO和一个70kD蛋白关系密切:有人以豌豆衰老叶片粗蛋白为材料分析GO的降解特性,用只含一种43kD亚基的GO(就是GO )抗体为一抗作SDS-PAGE蛋白印迹,有70kD、43kD和40kD等3条蛋白带[52].40kD应是43kD的降解产物.因为有人报告藻(S.paci f icun)中的GO的49kD亚基会产生31kD的降解产物,49kD亚基的抗体可以和31kD降解产物发生免疫反应[17];菠菜GO 40kD酸性亚基会产生38kD的降解产物,40kD酸性亚基的抗体也可以和38kD降解产物发生免疫反应[50,51].但豌豆GO的43kD亚基抗体能和70#2kD蛋白带发生免疫反应则难于解释,除非108GO的43kD亚基和70#2kD蛋白带有某种关系[52].有人用HSP70(热激蛋白70,SDS-PAGE 为70kD)抗体可间接把GO免疫沉淀下来,表明GO和HSP70结合紧密,据此认为HSP70可能是GO的伴侣蛋白[53].GO同工酶67kD碱性亚基和以上HSP70,以及能和豌豆GO抗体发生免疫反应的70#2kD蛋白带相比,大小很接近,3者是否为同一蛋白有待研究.参考文献:[1] Zelitch I.Plant productivity and con trol of p hotorespiration pathways of carbon fi xation in green plant[J].Science,1975,188(4188):625-635.[2] Zelitch I.Increased rate of net photosyhthetic carbon dioxide up take caused by the inhibition of glycolate oxidase[J].Plant Physiol,1966,41:1623-1631.[3] 徐 杰.乙醇酸氧化酶分子结构的研究和存在的问题[J].华南师范大学学报(自然科学版),1995(4):109-112.[4] 余叔文,汤章城.植物生理与分子生物学[M].北京:科学出版社,1999,248-261.[5] 李明启.植物中的乙醇酸氧化酶.植物生理学通讯[J],1988,24(6):67-71.[6] Servai ts J C,Ogren W J.Chemical inhibition of the glycolate pathway in soybean leaf cells[J].Plant Physiol,1977,60:461-466.[7] Zelitch I.Alpha-Hydroxysulfonates as inhibitors of the enzymatic oxidation of glycolic and lactic acids[J].J BiolChem,1957,224:251-260.[8] 沈允钢,施教耐,许大全.动态光合作用[M].北京:科学出版社,1998,46-47.[9] Frigerio N A,Harbury H A.Purification and some properties of crystalline glycollic acid oxidase of spinach[J].J Biol Chem,1958,231:135-157.[10] Kerr M W,Groves D.Purification and p roperties of glycolate oxidase from Pisum sativum leaves[J].Phytochem,1975,14:359-362.[11] Schwam H,Michelson S,Randall W C,et al.Purification and characterization of human liver glycolate ox idase,molecular weight,subunit,and kinetic properties[J].Bi ochem,1979,18:2828-2833.[12] Behrends W,Raush U,Loffler H G,et al.Purification of glycollate oxidase from greening cucumber cotyledons[J].Plan ta,1982,156:566-571.[13] Pandey O P,San wal G G.Purification and properties of glycolate oxidase from N opalea de j ecta,a CAM plant[J].Biochem,1982,9:80-87.[14] Nishimura M,Akhmedov Y D,Strzalka K,et al.Purificati on and characterization of glycolate oxidase from pumpkincotyledons[J].Arch Biochem Biophys,1983,222:397-402.[15] Lindq vist Y,Branden C I.Structure of glycolate oxidase from spinach[J].Pro Natl Acad Sci USA,1985,82:6855-6859.[16] 徐 杰,李明启.乙醇酸氧化酶纯化方法的改进[J].植物生理学通讯,1996,32(4):280-282.[17] Iwamoto K,Suzuki K,Ikawa T.Purification and characterization of glycolate ox idase from the brown alga spatoglossum acificum(phaeophyta)[J].J phycol,1996,32(5):790-798.[18] Devi T M,Rajagopalan A V,Raghavendra A S.Pur i fication and properties of glycolate ox idase from plants with different photosyn thetic pathways:Distinctness of C4enzyme from that of a C3species and C3-C4intermediate[J].Photosynthesis Research,1996,47:231-238.[19] Iwamoto K,Ikawa T.A novel glycolate ox idase req uiring flavin mononucletide as the cofactor in the prasinophyceanalga mesostigma viride[J].Plant cell physiol,2000,41(8):988-991.109[20] E mes M J,Erismann K H.Purification and properties of glycolate oxidase from Lemna minor L[J].Int J Biochem,1984,16:1373-1378.[21] Hall N P,Reggiani R,Lea P J.Molecular weigh t of glycolate oxidase from C3and C4plants determined during early stage purification[J].Phytochemistery,1985,24(8):1645-1648.[22] Richardson K E,Tolbert N E.Oxidation of glycoxylic acid to oxalic acid by glycolic acid oxidase[J].J Biol Chem,1961,236:1280-1283.[23] Tolbert N E,Burris R H.Light activation of plant enzymes which oxidizes glycolic acid[J].J Biol Chem,1950,186:791-804.[24] Lindqvist Y,Branden C I.Preliminary crys tsllographic data for glycolate oxidase from spinach[J].J Biol Chem,1979,154:7403-7404.[25] Lindqvist Y,Branden C I.Structure of glycolate oxidase frim spinach at a Resolu tion of5.5A[J].J Mol Biol,1980,143:201-211.[26] Lindq vist Y.Refined structure of glycolate oxidase at2A Resolution[J].J Mol Biol,1989,209:151-166.[27] Lindq vist Y,Branden C I.The active site of spinach glycolate ox idase[J].J Biol Chem,1989,264:3624-3628.[28] 彭新湘,李明启.乙醇酸氧化酶的纯化结晶和酪氨酸残基修饰对酶活性的影响[J].植物生理学报,1989,15(3):257-262.[29] 彭新湘,李明启.组氨酸残基在乙醇酸氧化酶催化活性中的作用[J].植物生理学报,1990,16(2):167-172.[30] 彭新湘,李明启.赖氨酸残基在乙醇酸氧化酶催化活性中的作用[J].生物化学与生物物理学报,1990,22(4):391-395.[31] 彭新湘,李明启.乙醇酸氧化酶必需精酸残基的化学修饰[J].植物生理学报,1991,17(3):321-326.[32] Gerdes H H,Kindel H.Partial purification and characterization of mRNA encoding glycolate oxidase and catalase[J].Planta,1986,167:166-174.[33] Gerdes H H,Kindel H.Gene expressi on upon illumination in forming mRNA encoding perox i somal glycolate oxidase[J].Biochi m Biophys A cta,1988,949:195-205.[34] Ludt C,Kindel H.Characterization of a cDNA encodi ng Lens culinaris glycolate oxidase and developmental exp ressi on of glycolate oxidase mRNA in cotyledons and leaves[J].Plan t Physiol,1990,94:1193-1198.[35] Park Y S,Chai J D,Cho N J.Expression of glycolate oxidase gene in spinach[J].Korean Biochem,1992,25:219-232.[36] Tsugeki R,Hara-Nishi mura I,Mori H.Cloning and sequencing of cDNA for glycolate oxidase from pumpkincotyledons and Northern blot analysis[J].Plane Cell Physiol,1993,34:51-55.[37] 徐 杰,李明启,施教耐.光和底物对乙醇酸氧化酶基因表达的诱导[J].植物生理学报,1996,22(3):315-319.[38] Roth-Bejerano N,Lips S H.Binding of glycolate oxidase to peroxisomal membranes as effected by light[J].Photochem Photobiol,1978,27:171-175.[39] 王炜军,李明启.菜心叶片中乙醇酸氧化酶的多种组分[J].植物生理学报,1998,24(4):413-416.[40] Grodzinski B,Colman.Disc electrophoresis of glycolate oxidizing enzymes[J].Phytochemistry,11:1281-1285.[41] Havir E A.Evidence for presence in tobacco leaves of multiple enzymes for the oxidation of glycolate and glycoxylate[J].Plant Physiol,1983,71:874-878.[42] 徐 杰.菜心乙醇酸氧化酶的纯化和催化特性分析[J].植物学通报,1998,15(4):75-77.[43] 徐 杰,吴燕燕.菠菜乙醇酸氧化酶同工酶GO 的纯化和特性[J].热带亚热带植物学报,2001,9(1):14-18.110[44] 王炜军,李明启.菜心乙醇酸氧化酶二种催化功能的初步研究[J].热带亚热带植物学报,1999,7(2):177-180.[45] 徐 杰.水稻乙醇酸氧化酶的纯化和特性分析[J].华南师范大学学报(自然科学版),1997(1):50.[46] 徐 杰.乙醇酸氧化酶底物诱导实验[J].华南师范大学学报(自然科学版),1996(1):61-63.[47] 徐 杰.菠菜中的乙醇酸氧化酶是一个同工酶[J].中国生物化学与分子生物学报,1998,14(6):800.[48] 徐 杰,吴燕燕.菠菜中不同等电点的乙醇酸氧化酶全酶分子量的测定[J].植物生理学通讯,1998,34(1):49-51.[49] 徐 杰,吴燕燕.菜心和水稻绿叶中不同等电点的乙醇酸氧化酶[J].中国生物化学与分子生物学报,2001,17(2):266-270.[50] 徐 杰,吴燕燕.菠菜叶片中乙醇酸氧化酶3种同工酶的生化特性[J].中国生物化学与分子生物学报,2001,17(4):537-540.[51] 徐 杰,吴燕燕.菠菜乙醇酸氧化酶同工酶的亚基组成[J].中国生物化学与分子生物学报,2001,17(5):245-247.[52] Stefania Distefano,Jose M Palma,Iva M cCarthy,et al.Proteolytic cleavage of plant proteins by peroxisomal endoproteases from senescent pea leaves[J].Plan ta,1999,209:308-313.[53] Wendy J,Laura J.The role of heat shocck protein70(hsp70)in higher plant:peroxisome biogensis[C/OL].h ttp:///mwaspp/1996-meeting/crookes.html.∃责任编辑 黄玉萍%111。

乙醇酸氧化酶（GO）检测试剂盒（乙醇酸比色法）乙醇酸氧化酶(GO)检测试剂盒(乙醇酸比色法)简介：乙醇酸氧化酶(Glycolate oxidase，GO)是乙醇酸循环的一种酶，在乙醇酸代谢循环中乙醇酸通过乙醇酸氧化酶的作用而变成乙醛酸。

光合作用与呼吸作用是植物代谢的两大核心内容，前者是物质合成与能量储存过程，属于同化作用，为包括人来在内的几乎所有生物的生存提供物质来源和能量来源；后者是物质分解与能量释放过程，属于异化作用，为生命提供能量。

通过测定样品中乙醇酸氧化酶活性，了解植物的光合和呼吸代谢的基本方法。

Leagene乙醇酸氧化酶(GO)检测试剂盒(乙醇酸比色法)检测原理是在弱碱条件下，在乙醇酸氧化酶作用下，乙醇酸氧化生成乙醛酸和过氧化氢，以半胱氨酸为氢受体，接受乙醇酸氧化时脱下的氢离子有最大吸收，通过分光光度比色法(分光光度计)测定处吸光度的变化，计算出乙醇脱氢酶活性水平。

该试剂盒主要用于检测植物样本中乙醇脱氢酶活性，进而了解植物的光合和呼吸代谢情况。

该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

组成：自备材料：1、研钵或匀浆器2、纱布或滤纸3、离心管或试管4、离心机5、pH计6、氮气(备选)7、水浴锅8、比色杯编号名称TE053350TStorage试剂(A):GO Lysis buffer2×500ml4℃避光试剂(B):蛋白沉淀剂100g RT避光试剂(C):GO悬浮液100ml RT试剂(D):GO Assay buffer100ml4℃避光使用说明书1份9、分光光度计操作步骤(仅供参考)：1、准备样品：取新鲜植物叶片，清洗干净，吸水纸吸干，称取，加入预冷的GO Lysis buffer，冰浴情况下充分匀浆或研磨，经纱布或滤纸过滤，将滤液置于离心管或试管中离心，取上清液置于新的离心管或试管，调节pH值，离心，取上清液。

按上清液：蛋白沉淀剂一定的比例加入蛋白沉淀剂，不断混匀，离心，取上清液。

乙醇酸氧化酶提取乙醇酸氧化酶是一种酶类蛋白质，具有催化乙醇酸氧化的作用。

乙醇酸氧化酶在生物体内广泛存在，可以参与多种代谢途径，发挥重要的生理功能。

本文将介绍乙醇酸氧化酶的提取方法及其应用。

乙醇酸氧化酶的提取方法有多种，常用的方法包括超声波法、冷冻法、酶解法等。

其中，超声波法是一种快速高效的提取方法。

将待提取样品与适量的缓冲液混合后，通过超声波的作用，使细胞破裂释放出乙醇酸氧化酶。

冷冻法则是通过在低温条件下将样品冷冻，然后迅速解冻以破坏细胞结构，释放出乙醇酸氧化酶。

酶解法则是利用酶解剂将细胞壁溶解，释放出乙醇酸氧化酶。

乙醇酸氧化酶的提取过程中，需要注意的是提取条件的选择。

不同的提取方法适用于不同的样品类型，提取条件的选择应根据样品的特性来确定。

此外，在提取过程中还应注意避免酶的失活，可以通过控制提取时间、温度和pH值等来保证酶的活性。

乙醇酸氧化酶在生物体内具有多种重要的生理功能。

首先，乙醇酸氧化酶参与乙醛酸代谢途径，将乙醛酸氧化为乙酸，从而产生能量和氧化还原电位。

乙醛酸是一种中间代谢产物，其积累会导致细胞功能受损。

乙醇酸氧化酶的存在可以有效地将乙醛酸转化为乙酸，维持细胞内代谢平衡。

乙醇酸氧化酶还参与酒精代谢途径。

乙醇酸是酒精代谢的重要中间产物，其积累会导致酒精中毒。

乙醇酸氧化酶可以催化乙醇酸的氧化反应，将其转化为乙酸，并释放出二氧化碳。

这一过程在人体内起到重要的解毒作用，有助于降低酒精中毒的风险。

乙醇酸氧化酶还参与某些疾病的发生和发展。

乙醇酸氧化酶的活性与某些疾病的发生有关，如糖尿病、肝炎等。

因此，研究乙醇酸氧化酶的提取和活性调控对于相关疾病的治疗和预防具有重要意义。

乙醇酸氧化酶是一种重要的酶类蛋白质，具有催化乙醇酸氧化的作用。

乙醇酸氧化酶的提取方法有多种，其中超声波法、冷冻法和酶解法是常用的提取方法。

乙醇酸氧化酶在生物体内参与多种代谢途径，发挥重要的生理功能，如乙醛酸代谢、酒精代谢等。

此外，乙醇酸氧化酶还与某些疾病的发生和发展相关。

微粒体乙醇氧化酶系1. 什么是微粒体乙醇氧化酶系？微粒体乙醇氧化酶系是一种位于微粒体中的酶系，主要参与乙醇的代谢和氧化过程。

酒精（乙醇）的代谢是人体生物化学过程中的重要环节，而微粒体乙醇氧化酶系在其中起到了关键的作用。

乙醇是一种普遍存在于酒精饮料中的化合物，人们经常通过饮酒摄入乙醇。

乙醇在体内代谢为乙醛，再被进一步氧化为乙酸，最终转化为能量和二氧化碳。

2. 微粒体乙醇氧化酶系的成员微粒体乙醇氧化酶系由多个酶组成，其中最重要的酶是乙醇脱氢酶（ADH）和乙醛脱氢酶（ALDH）。

ADH主要负责将乙醇氧化为乙醛，而ALDH则进一步将乙醛氧化为乙酸。

此外，还有一些辅助酶（例如维生素B1和B6）对微粒体乙醇氧化酶系的功能发挥起到重要的辅助作用。

3. 微粒体乙醇氧化酶系的代谢途径微粒体乙醇氧化酶系的代谢途径经过以下几个步骤：步骤1：乙醇转化为乙醛在乙醇被摄入体内后，乙醇首先进入细胞内的微粒体。

在微粒体中，乙醇脱氢酶（ADH）将乙醇氧化为乙醛。

该过程中产生的还原型辅酶NADH可以在后续的代谢过程中参与能量的产生。

步骤2：乙醛转化为乙酸乙醛会进一步被乙醛脱氢酶（ALDH）氧化，生成乙酸。

这一步骤同样会释放出能量，并产生丙酮作为中间产物。

步骤3：乙酸转化为能量和二氧化碳乙酸会进一步被细胞质中的线粒体内的乙酸脱氢酶（ACDH）氧化，最终被转化为能量和二氧化碳。

这些能量会参与细胞的各种生物学过程。

4. 微粒体乙醇氧化酶系的重要性微粒体乙醇氧化酶系在酒精的代谢过程中起到了至关重要的作用。

乙醇是一种有毒物质，如果不能被有效地代谢和排出体外，会对人体健康产生负面影响。

微粒体乙醇氧化酶系不仅参与乙醇的代谢，还参与一些其他的代谢过程。

例如，它也被认为是维生素A代谢的关键参与者之一。

此外，微粒体乙醇氧化酶系统的异常功能与许多疾病有关。

一些研究发现，微粒体乙醇氧化酶系统的功能失调可能与肝脏疾病、酒精中毒以及一些遗传性疾病相关。

5. 总结微粒体乙醇氧化酶系是人体内一个重要的酶系统，参与乙醇的代谢和氧化过程。

1.2 茶树代谢及品质相关酶1.2.1 碳代谢相关酶1.2.1.1 乙醇酸氧化酶（GO）乙醇酸氧化酶位于细胞过氧化物酶体中，是参与光呼吸代谢的关键酶之一[14]，能够催化乙醇酸氧化生成乙醛酸，进一步催化乙醛酸氧化生成草酸。

光呼吸是光照下绿色植物细胞吸收氧气与放出二氧化碳的过程，植物的光合作用和光呼吸是伴随发生的。

在早期GO催化功能的研究中，Richardson和Tolbert[15]发现甜菜等一些植物的GO能氧化乙醇酸生成乙醛酸、氧化乙醛酸生成草酸，并且两步反应催化活性的比值在酶的纯化及纯化酶的保存过程中保持不变。

由此，他们认为两步反应的氧化活性均由GO来催化，GO之所以能够氧化乙醛酸，是由于乙醛酸的水合物与乙醇酸结构相似。

然而，Havir[16]研究表明，在烟草叶片GO 的纯化过程中，GO氧化乙醇酸、乙醛酸活性的比值随着酶的不断纯化而下降；同时还发现，抑制剂2-羟基丁炔酸和氧浓度对两步反应氧化活性的影响不同。

因此，Havir 推测催化乙醇酸氧化和乙醛酸氧化可能是由不同的酶来完成的。

早期的研究认为草酸是植物的一种代谢终产物，没有任何生理意义。

但是现在越来越多的研究表明草酸不仅具有一定的生理功能，而且在植物适应生物和非生物的胁迫中具有重要的作用[17]。

而GO可能影响植物光呼吸强弱及草酸的合成，通过其两个催化活性完全有可能控制代谢物质的分配，所以研究GO的催化功能有十分重要的意义[18]。

1.2.1.2 转化酶（INV）转化酶又称蔗糖酶，与植物的碳代谢密切相关，可以催化蔗糖水解为葡萄糖和果糖，经糖酵解进入三羧酸循环，为植物生命活动提供充足的能量[19]。

转化酶可分为细胞壁转化酶、液泡转化酶和细胞质转化酶。

一般在植物的分生组织和快速生长的幼嫩的组织和器官中，细胞壁转化酶和液泡转化酶的活性较高。

转化酶的活性能够影响植物的产量和品质，同时其活性也受很多因素影响。

林晓影等[20]研究结果表明，适宜浓度的硫酸锰能有效地提高叶片转化酶活性和可溶性糖含量，促进马铃薯幼苗株高、茎粗、单株叶面积的形成及干物质积累，有利于马铃薯幼苗建成。

乙醇酸氧化酶底物诱导实验
徐杰
【期刊名称】《华南师范大学学报：自然科学版》
【年(卷),期】1996(000)001
【摘要】乙醇酸氧化酶底物诱导实验徐杰（华南师范大学生物技术研究所广州５１０６３１）关键词乙醇酸氧化酶；底物诱导；６６ｋｕ蛋白中图分类号Ｑ９４６．５我们用改进后的方法，即粗蛋白在柱层析前加人适量的ＦＭＮ，硫酸铰质量分数分布范围改为１５％一２５％，其余按［１１纯...
【总页数】4页(P60-63)
【作者】徐杰
【作者单位】无
【正文语种】中文
【中图分类】Q946.54
【相关文献】
1.乙醇酸氧化酶基因诱导反义表达载体的构建与水稻的遗传转化 [J], 胥华伟;侯典云;施江;史国安
2.化学所发展底物诱导组装大环超分子催化新策略 [J],
3.光对黄化小麦幼苗硝酸还原酶和乙醇酸氧化酶诱导的影响 [J], 余让才;范燕萍;李明启
4.光和底物对乙醇酸氧化酶的基因表达的诱导 [J], 徐杰;施教耐
5.双底物诱导脂肪酶构象的固定及对底物的吸附特性 [J], 宋锡瑾;厉瑾;王杰;徐佳音
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