课题1 菊花的组织培养
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菊花的组织培养
2、在整个操作过程中，是如何来实现无菌环境的？
实验操作
制备MS固 体培养基
（哪 6步？） 各浓缩多少倍？用量较小的有机物呢？）
素？）
1、配制各种母液（大量元素、微量元素 2、配制培养基（菊花组培是否添加植物激 3、灭菌（哪种灭菌方法？） 外植体消毒 接种
流水冲洗—无菌纸吸干—70%酒精—无 菌水冲洗—无菌纸吸干—0.1%氯化汞培 —无菌水冲洗至少三次之上 注意接种时的各种无菌操作。 直接移栽到土壤中吗？ （流水是为消毒吗？能消毒的是什么？ 将菊花茎段插入培养基时特别应注意什么？ 无菌水冲洗是为了干啥？） 最好在哪儿培养？温度？光照？定期消毒？
2、植物组织培养的原理是什么？
A
。
概念：细胞的全能性指具有某种生物全部遗传信
息的任何一个已经分化的细胞都是有发育成完整 生物个体的潜能。
一、基础知识
(一)植物组织培养的过程 1、观察下图，写出植物组织培养的过程 2、图中标出愈伤组织，脱分化、再分化 3、这种生殖方式属于 无性 生殖
脱 分 化
再 分 化
基本过程:
离体的植物器官、组织 或细胞(外植体） 脱分化（又叫去分化） 愈伤组织 再分化 根或芽等器官 植物体
影响因素： 材料性质、营养物质、 调节物质、环境条件
练习
1.植物组织培养过程中的脱分化是指（ c） A.植物体的分生组织通过细胞分裂产生新细胞 B.未成熟的种子经过处理培育出幼苗的过程 C.植物的器官、组织或细胞，通过离体培养产生 愈伤组织的过程 D.取植物的枝芽培育成一株新植物的过程 2.下列关于愈伤组织的说法中不正确的是（B ） A.愈伤组织的细胞能够进行细胞分裂 B.用叶培养形成的愈伤组织细胞能够进行光合作用 C.培养愈伤组织的培养基中应含有有机养料 D.人们可以从愈伤组织中提取所需物质
课题1菊花的组织培养
2009年上学期
C、结果分析与评价 1、对接种操作中污染情况的分析
接种3～4 d后，在接种操作中被杂菌污染的 培养物会表现出被污染的现象。适时统计污 染率，分析接种操作是否符合无菌要求。
正常苗
污染苗
2、是否完成了对植物组织的脱分化和再分化
观察实验结果，看看是否培养出了愈伤组织， 记录多长时间长出愈伤组织。统计更换培养 基后愈伤组织进一步分化成根和芽的比例和 时间。
3、灭菌 分装好的培养基连同其他器械一起进行高 压蒸汽灭菌 （二）外植体消毒
1、选材：菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝 2、消毒
①流水冲洗 菊花茎段用流水冲洗后可加少许洗衣粉， 用软刷轻轻刷洗，刷洗后在流水下冲洗 20min左右。
② 酒精处理 用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入 体积分数为70％的酒精中摇动2－3次，持续 6－7s，立即将外植体取出，在无菌水中清 洗。 ③消毒液处理
（六）栽培 幼苗移栽后，每天观察并记录幼苗的生长情 况，适时浇水、施肥，直至开花。
操作的？ ①培养基的灭菌 （高压蒸汽灭菌） ②外植体的消毒 （酒精、氯化汞） ③接种的无菌操作 （酒精、酒精灯——灼烧） ④无菌箱中的培养； ⑤移栽到消过毒的环境中生 存一段时间。
思 考 在整个过程中，是如何来实现无菌
思 考 （P33）
你能说出各种营养物质的作用吗？同专题2 中微生物培养基的配方相比，MS培养基的配 方有哪些明显的不同？
微量元素和大量元素提供植物细胞生活所必 需的无机盐；蔗糖提供碳源，同时能够维持 细胞的渗透压；甘氨酸、维生素等物质主要 是为了满足离体植物细胞在正常代谢途径受 到一定影响后所产生的特殊营养需求。
同一植物材料的年龄、保存时间的长短 会影响实验结果
菊花的组织 培养一般选 择：未开花 植株的茎上 部新萌生的 侧枝。
高中生物专题三课题1菊花的组织培养课件新人教版选修
组织培养的应用领域
• 农业：用于大规模繁殖优良植株。 • 医学：用于生产药用植物和药物的提取物。 • 研究：用于研究植物生长和发育的分子机制。
菊花的组织培养步骤
1. 材料准备：收集健康的菊花植株和实验所需的器具。 2. 杀菌消毒：对器具和培养基进行消毒处理。 3. 培养基的制备：制作适合菊花生长的培养基。 4. 组织的提取：从菊花中提取所需的组织。 5. 培养条件控制：控制温度、湿度和光照等条件，促进组织生长。
菊花的组织培养研究案例
菊花花蕊的组织培养实验
通过离体培养菊花的花蕊细胞， 研究花蕊的发育和花色形成的分 子机制。
菊花叶片的组织培养实验
利用组织培养技术来研究菊花叶 片生长的调控机制，以及养分吸 收和光合作用。
菊花茎段的组织培养实验
将菊花的茎段进行离体培养，研 究茎的分化和再生能力，以及植 物生长激素的作用。
高中生物专题Байду номын сангаас课题1菊花的 组织培养课件新人教版选修
什么是组织培养
组织培养是一种通过离体培养组织细胞，以促进细胞生长和发育的技术。
组织培养的原理
1 无菌条件
通过在无菌环境下进行培 养，防止外来微生物的污 染。
2 培养基
使用富含营养物质的培养 基来提供组织细胞所需的 生长因子和养分。
3 激素控制
添加适当浓度的激素来调 节组织的生长和分化。
专题3.1 菊花的组织培养
课题1 菊花的组织培养★课题目标1、熟悉植物组织培养的基本过程2、理解细胞分化的概念及离体植物细胞的脱分化和再分化3、通过联系农业生产实际，培养学生活学活用，理论联系实际的能力★课题重点植物组织培养过程中使用的无菌技术★课题难点植物组织培养过程中使用的无菌技术★教学方法启发式教学★教学工具多媒体课件★教学过程（一）引入新课上节课我们探讨学习了如何从土壤中分离出尿素分解菌和纤维素分解微生物及其计数方法。
这节课我们来学习研究植物的组织培养技术。
（二）进行新课1．基础知识知识回顾：联系“植物细胞工程”，回答下列问题：1．1具有某种生物全套遗传信息的任何一个活细胞，都具有发育成完整个体的能力，即每个生物细胞都具有全能性。
但在生物体的生长发育过程中并不表现出来，这是因为在特定的时间和空间条件下，通过基因的选择性表达，构成不同组织和器官。
1．2植物组织培养技术的应用有：实现优良品种的快速繁殖；培育脱毒作物；制作人工种子；培育作物新品种以及细胞产物的工厂化生产等。
活动1：阅读“植物组织培养的基本过程”，讨论并完成以下问题：1．3细胞分化：个体发育中细胞在形态、结构和生理功能上出现稳定性差异的过程。
〖思考1〗细胞分化是一种持久性的变化，它有什么生理意义？使多细胞生物体中细胞结构和功能趋向专门化，有利于提高各种生理功能的效率。
1．4愈伤组织是通过细胞分裂形成的，其细胞排列疏松而无规则，高度液泡化呈无定形状态的薄壁细胞。
〖思考2〗填表比较根尖分生组织和愈伤组织的异同：1．5植物组织培养的过程可简单表示为：活动2：阅读“影响植物组织培养的条件”，讨论并完成以下问题：1．6材料：植物的种类、材料的年龄和保存时间的长短等都会影响实验结果。
菊花组织培养一般选择未开化植物的茎上部新萌生的侧枝作材料。
〖思考3〗一般来说，容易进行无性繁殖的植物容易进行组织培养。
〖思考4〗选取生长旺盛嫩枝进行组培的原因是嫩枝生理状态好，容易诱导脱分化和再分化。
课题1 菊花的组织培养chen
2、愈伤组织的继代培养 继代培养所用的培养基与培养愈伤组织的相同， 在严格的无菌条件下，将愈伤组织连同原来的外 植体一起移到新培养基上。愈伤组织的继代培养 一代为20d。如果延长时间，培养基中营养物质 减少，外植体会分泌有毒物质，造成自身中毒。 如果愈伤组织长到直径为1－1.5cm时，就可以 进行试管苗培养，否则还需进行第二代继代培养 在愈伤组织继代培养期间，将恒温箱的门打开， 让愈伤组织见光，愈伤组织见光后颜色可以转为 绿色
不同植物的组织培养难度不同
同一种植物的不同组织培养难度不同
菊花的组织培养：一般选择未开花植株的 茎上部新萌生的侧枝
（2）MS固体培养基成分及比例
MS 培基相比， MS培养基的配方有哪些明显的不同？
（2）、培养基的配制(MS培养基)
大量元素：N、P、K、Ca、Mg、S
4、突变育种 采用组织培养可以直接诱变和 筛选出具抗病、抗盐、高赖氨酸、高蛋白 等优良性状的品种。 5、基因工程 基因工程主要研究DNA的转导， 而基因转导后必须通过组织培养途径才能 实现植株再生。 6、生物制品 有些极其昂贵的生物制品，如 抗癌首选药物--紫杉醇等，可通过组织培养 方式生产。
总结植物组织培养过程:
MS培养基以无机营养为主、蔗糖为碳源、常加激素。
（3）植物激素的影响 ①常用的植物激素：生长素、细胞分裂素和 赤霉素 生长素类： 2，4－二氯苯氧乙酸（2，4－D）、 吲哚乙酸（IAA）、萘乙酸（NAA）、 吲哚丁酸（IBA）
细胞分裂素类： 激动素（KT）、6－苄基嘌呤 （ 6－BA）、玉米素（ZT） 赤霉素类： 赤霉酸（GA3）
土豆发芽
落地生根
1958，美国 斯图尔德
课题1 菊花的组织培养
植物组织培养的基本过程
人教版 高中生物 选修一 专题三 课题1 菊花的组织培养
【情景创设】科学研究表明，当植物细胞脱离了原来所在植物体的器官或组织而处于离体状态时，在一定的营养物质、激素和其他外界条件的作用下，就可能表现出全能性，发育成完整的植株。
科学家用植物组织培养的方法，已经把许多种植物的离体的组织或细胞，培养成了完整的植物体。
通过这项技术，可以实现优良花卉和蔬菜品种的快速繁殖、珍稀濒危物种的拯救等，而这项技术从设想到成熟，却经历了半个世纪，在本课题中，我们将通过菊花组织培养的实验来初步学习这一技术。
【问题设计】1、什么是植物细胞的全能性？植物细胞是否在任何条件下都可以体现出全能性？如若不是，那么植物细胞要体现全能性需满足什么条件？2、简述植物组织培养的基本过程并阐释脱分化和再分化两个过程。
3、分析影响植物组织培养的因素有哪些及菊花组织培养过程中对各因素的处理。
4、介绍MS 培养基的组成及制备过程，回答P33旁栏思考。
5、阐述利用MS 培养基进行菊花组织培养的实验操作流程，回答P35旁栏思考。
6、完成P36练习1、2。
【达标检测】（必做）1. 下列有关植物组织培养的叙述，正确的是（ ）A ．愈伤组织是一团有特定结构和功能的薄壁细胞B ．用于组织培养的培养基中无需加入有机物C ．生长素用量与细胞分裂素用量的比值高时，有利于芽的分化D ．植物耐盐突变体可通过添加适量NaCl 的培养基培养筛选而获得2. 下列关于植物组织培养的叙述，错误的是（ ）A ．外植体可以来自于植物的任何细胞B ．培养应在无菌条件下进行C ．以花粉作为外植体可得到单倍体植株【使用时间】 第 4 周 第 1 课时 【编辑】李玲珍 【审核】刘萍萍【主题】 专题三 课题1 菊花的组织培养 2012.03.02D．不同阶段的培养基中细胞分裂素和生长素的比例不同3.下列关于植物组织培养的叙述中，错误的是（）A．培养基中添加蔗糖的目的是提供营养和调节渗透压B．培养基中的生长素和细胞分裂素影响愈伤组织的生长和分化C．离体器官或组织的细胞都必须通过脱分化才能形成愈伤组织D．同一株绿色开花植物不同部分的细胞经培养获得的愈伤组织基因相同(选做)草莓生产上传统的繁殖方式易将所感染的病毒传播给后代，导致产量降低、品质变差。
课题菊花的组织培养
外植体为体细 胞，染色体数 无需加倍。
再分化成丛芽， 取材为花药，培养的
诱导出根，然
为单倍体幼苗，植株 弱小，高度不育，必
后进行移栽。 须用秋水仙素处理，
使染色体数目加倍，
恢复正常植株的染色 体数，而且为纯种。
a
16
• . 现有甲、乙两个烟草品种（2N=48），其基因型分别为aaBB和 Aabb，这两对基因位于非同源染色体上，且在光照强度大于 800勒克斯时，都不能生长，这是由于它们中的一对隐性纯合基 因（aa或bb）作用的结果。
a
7
• 3．基因型为AaBb的水稻（24条染色体）的花药通过无菌操作， 接入试管后，在一定条件下培养形成试管苗。
• （1）愈伤组织是花粉细胞不断分裂后形成的不规则的细胞团，
愈伤组织形成中，必须从培养基中获得
和小分子有机
物等营养物质。
• （两2种）激要素促。进花粉细胞分裂生长，培养基中应有
和
• （3）愈伤组织分化是指愈伤组织形成芽和根，再由芽发育成叶 和茎。这一过程必须给予光照，其原因是 ①
愈 再分化 根 伤
组
织
芽
植 物 体
a
3
3.植物组织培养条件
• 离体状态
• 含有全部营养成分的培养基(包括 植物激素)
• 一定的温度、空气、无菌环境、适 合的PH、适时光照等
不同的植物组织,培养的难易程度差别很大.
菊花的组培,一般选择未开花植株的茎上部新萌
生的侧枝.
a
4
4.实验操作(视频)
• （一）制备MS固体培养基 • （二）外植体消毒 • （三）接种 • （四）培养 • （五）移栽 • （六）栽培
胚状体 愈伤组织
分化 丛芽 再分化
菊花组织培养
课题1 菊花的组织培养一、教材分析：植物组织培养技术应用广泛。
利用植物的一块组织，甚至一个细胞，就能培育出完整的植株，靠的就是植物的组织培养技术。
运用这种技术，可以实现优良品种的快速繁殖，培养出大量不含病毒的幼苗，保持遗传性状的一致性，实现花卉的连续生产，缩短育种周期等。
这项技术从设想到成熟，经历了半个世纪。
植物组织培养的这项挑战性工作不仅使我们学到新的技术，还会带来丰富的经验，宝贵的启迪。
本专题主要从基础知识入手，进行实验操作及结果分析与评价。
其操作流程包括：配制母液、培养基配制与灭菌、外植体选择和消毒、接种、形成愈伤组织、诱导丛芽和生根、组培苗移栽等几个环节对学生进行教学。
二、学情分析：本专题在必修的有关知识的基础上，在教师的引导下学生自己进行实验设计，并引导学生尝试植物的组织培养，使学生初步掌握植物组织培养的技术。
三、与高考衔接组织培养是学习话要培养的基础，单倍体育种是高考热点，应着重掌握。
四、教学目标：1.、知识与技能1）、熟悉植物组织培养的基本过程。
2)、理解细胞分化的概念及离体植物细胞的脱分化和再分化。
3)、通过联系农业生产实际，培养学生活学活用，理论联系实际的能力。
2、过程与方法归纳MS培养基的配制方法，并设计表格比较微生物培养基与MS培养基的配方的异同。
3、情感、态度与价值观1）通过阅读植物组织培养技术的发展史，课下查阅植物组织培养技术在生产实践中应用的资料。
2）关注学生科学态度的教育，拓展学生视野，感受科学技术在生产实践中的重要价值。
五、课题重点：植物组织培养过程中使用的无菌技术。
六、课题难点：植物组织培养过程中使用的无菌技术。
七、教学方法：观察法、比较法、阅读法，讨论法、分析法、引导法、讲授法等相结合。
八、教学准备：多媒体课件、直观的图片、实验资料等。
九、课时安排2课时（第一课时新课讲解，第二课时习题讲解。
）十、教学过程十一、板书设计课题1 菊花的组织培养组织培养原理：（已分化细胞、全能性、完整植株）基础知识影响因素：菊花组织培养（营养、环境条件、激素）实验操作：制备培养基→外植体消毒→接种→培养→移栽→栽培（无菌下）十二、教学反思：。
最新课题1菊花的组织培养
在生物体内的各种细胞在特定的条件下，通过基因的 选择性表达已构成不同的组织和器官。
细胞全能性的实现需要条件：离体、营养、植物激素、 无菌条件、适宜的PH、温度、光照等。
一、 基础知识
1、植物组织培养的基本过程
（1）细胞分化
概念：
在植物个体发育的过程 中，细胞在形态、结构、生 理功能上发生稳定性差异的 过程叫做细胞分化。
思考：植物的导管细胞、人的成熟红细胞有全能 性吗、为什么？ 4.细胞的全能性高低相同吗？
5.以下举例哪些全能性已表达？为什么？
A、玉米种子长成植株；B、癌细胞体外繁 殖数代；C、病毒增殖数代； D、细菌分裂N次； E、DNA扩增1000次； F、棉花叶肉细胞培养成抗虫棉植株
6.生物个体内的各种细胞并没有表达全能性，为什么？ 细胞的全能性怎样才能实现？
不利分化 细胞既分裂也分化
分化频率高
当生长素和细胞分裂素同时使用时，两者用量的 比例影响植物细胞的发育方向。
生长素 > 细胞分裂素： 有利于根的分化
生长素
< 细胞分裂素：
有利于芽的分化，抑制 根的形成
生长素 ＝ 细胞分裂素： 促进愈伤组织形成
无菌环境
在培养的整个过程中，都需要是一个无菌环境原因：
课题1菊花的组织培养
马铃薯块茎发芽生根
这些现象引起了科学家的兴趣， 促使他们去思考、解释。
植物组织培养
植物组织培养是二十
组世织纪培发展养起是来指的在新人技 工术培，养近三基十上年，来离由体于 培组组究迅织养织的速、植培深，养入发细物基，表胞的础发的和器理展文原官论极献生、研为浩 质如体烟，海，并几使乎其以生植长物、 增为殖研、究对分象化的以各及个再分 生支组植学织株科培都养的。在技广术泛。进行
细胞全能性的实现需要条件：离体、营养、植物激素、 无菌条件、适宜的PH、温度、光照等。
一、 基础知识
1、植物组织培养的基本过程
（1）细胞分化
概念：
在植物个体发育的过程 中，细胞在形态、结构、生 理功能上发生稳定性差异的 过程叫做细胞分化。
思考：植物的导管细胞、人的成熟红细胞有全能 性吗、为什么？ 4.细胞的全能性高低相同吗？
5.以下举例哪些全能性已表达？为什么？
A、玉米种子长成植株；B、癌细胞体外繁 殖数代；C、病毒增殖数代； D、细菌分裂N次； E、DNA扩增1000次； F、棉花叶肉细胞培养成抗虫棉植株
6.生物个体内的各种细胞并没有表达全能性，为什么？ 细胞的全能性怎样才能实现？
不利分化 细胞既分裂也分化
分化频率高
当生长素和细胞分裂素同时使用时，两者用量的 比例影响植物细胞的发育方向。
生长素 > 细胞分裂素： 有利于根的分化
生长素
< 细胞分裂素：
有利于芽的分化，抑制 根的形成
生长素 ＝ 细胞分裂素： 促进愈伤组织形成
无菌环境
在培养的整个过程中，都需要是一个无菌环境原因：
课题1菊花的组织培养
马铃薯块茎发芽生根
这些现象引起了科学家的兴趣， 促使他们去思考、解释。
植物组织培养
植物组织培养是二十
组世织纪培发展养起是来指的在新人技 工术培，养近三基十上年，来离由体于 培组组究迅织养织的速、植培深，养入发细物基，表胞的础发的和器理展文原官论极献生、研为浩 质如体烟，海，并几使乎其以生植长物、 增为殖研、究对分象化的以各及个再分 生支组植学织株科培都养的。在技广术泛。进行
课题1菊花的组织培养
PPT文档演模板
课题1菊花的组织培养
•在整个操作过程中，是如何来实现无菌环境的？
•1、培养基的灭菌（高压蒸汽灭菌）
•2、外植体的消毒（酒精、氯化汞）
•3、接种的无菌操作（酒精、酒精灯——灼烧）
•4、无菌箱中的培养；
•5、移栽到消过毒的环境中生存一段时间
•35页旁栏思考：
•至少做一组以上的重复。对照实验用一个不
激素？）
•制备MS固
•3、灭•外菌植（体哪种消灭菌方法？）• 接
体培养基
毒
种
•流水冲洗—无菌纸吸干—70%酒精—
无菌水冲洗—无菌纸吸干—0.1%氯•化 培 养 •••最注将•直好菊意接汞 •无在（花接移菌—哪流茎种栽无水儿水段时到菌冲培是插的土水洗养为入各壤冲是？消培种中洗为温毒养无吗至了度吗•基菌培栽？少干？？时操三啥光能特作次？照消别。之）？毒应上定的注期是意消什什• 毒么么移？？？ 栽
接种的空白培养基与接种的培养基一同培养，
用以说明培养基制作合格，没有被杂菌污染。
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课题1菊花的组织培养
•四、课外延伸
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课题1菊花的组织培养
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•人工种子
课题1菊花的组织培养
课题延伸（略）
练习
1.答：植物组织培养所利用的植物材料体积小、 抗性差，对培养条件的要求较高。用于植物 组织培养的培养基同样适合于某些微生物的 生长，如一些细菌、真菌等的生长。而培养 物一旦受到微生物的污染，就会导致实验前 功尽弃，因此要进行严格的无菌操作。
•继代培养所用的培养基与培养愈伤组织的相同， 在严格的无菌条件下，将愈伤组织连同原来的外 植体一起移到新培养基上。愈伤组织的继代培养 一代为20d。如果延长时间，培养基中营养物质 减少，外植体会分泌有毒物质，造成自身中毒。 如果愈伤组织长到直径为1－1.5cm时，就可以进 行试管苗培养.
课题1菊花的组织培养
课题1菊花的组织培养专题3植物的组织培养技术利⽤植物的⼀块组织，甚⾄⼀个细胞，就能培养出完整的植株，靠的就是植物组织培养技术。
运⽤这种技术，可以实现优良品种的快速繁殖，保持遗传性状的⼀致；可以培育出⼤量不含病毒的幼苗，提⾼作物的产量；可以实现花卉的连续⽣产，不受开花季节的限制……然⽽这⼀技术从设想到成熟，却经历了半个世纪。
这项富有挑战性的⼯作，不仅会使你学到新的技术，还会带给你丰富的体验，宝贵的启迪。
课题1 菊花的组织培养课题背景科学研究表明，当植物细胞脱离了原来所在植物体的器官或组织⽽处于离体状态时，在⼀定的营养物质、激素和其他外界条件的作⽤下，就可能表现出全能性，发育成完整的植株。
科学家⽤植物组织培养的⽅法，已经把许多种植物的离体的组织或细胞，培养成了完整的植物体。
在本课题中，我们将通过菊花组织培养的实验来学习这⼀技术。
基础知识（⼀）植物组织培养的基本过程在植物的个体发育过程中，细胞在形态、结构和⽣理功能上都会出现稳定性的差异，形成这些差异的过程叫做细胞分化。
已经分化了的细胞在结构和功能上都⽐较专⼀，要在离体条件下发育成完整的植株，并不容易。
离体的植物组织或细胞，在培养了⼀段时间以后，会通过细胞分裂，形成愈伤组织（图3-1）。
愈伤组织的细胞排列疏松⽽⽆规则，是⼀种⾼度液泡化的呈⽆定形状态的薄壁细胞。
由⾼度分化的植物组织或细胞产⽣愈伤组织的过程，称为植物细胞的脱分化，或者叫做去分化。
脱分化产⽣的愈伤组织继续进⾏培养，⼜可以重新分化成根或芽等器官，这个过程叫做再分化。
再分化形成的试管苗，移栽到地⾥，可以发育成完整的植物体。
图3-1简要地归纳了植物组织培养的过程。
在这个过程中，往往需要使⽤植物激素，⼈为地控制细胞的脱分化与再分化。
（⼆）影响植物组织培养的因素不同的植物组织，培养的难易程度差别很⼤。
例如，烟草和胡萝⼘的组织培养较为容易，⽽枸杞愈伤组织的芽诱导就⽐较难。
因此，植物材料的选择直接关系到实验的成败。
3.1 菊花的组织培养
，
。
高度液泡化的呈无定形状态的薄壁细胞
完整 植物体
(二)影响植物组织培养的因素
1.内因：外植体的生理状态。不同的植物组织、同种植物 材料的年龄、保存时间长短、部位等都会影响实验结果。 2.外因： (1)营养成分：常用的一种培养基—— MS培养基 矿质元素：大量元素和微量元素 有机物：维生素、甘氨酸、烟酸、肌醇、蔗糖、琼脂； (2)植物激素：启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键 性激素——细胞分裂素和生长素 ，两者的 浓度 、 使用的 先后顺序 及 用量的比例 都会影响实验结果。 (3)其他因素：pH、温度、光照等条件。
外植体的选择 影响植物组织 营养成分：大量元素、微量元素、有机物 培养的因素： 植物激素 温度、pH、光照等 实验操作： 制备MS培养基 外植体消毒
接种
培养
移栽
栽培
P36 1.在植物组织培养的过程中，为什么要进行一系列 的消毒、灭菌，并且要求无菌操作？ 植物组织培养所利用的植物材料体积小、抗性差，对 培养条件的要求较高。用于植物组织培养的培养基同样适 合于某些微生物的生长，如一些细菌、真菌等的生长。而 培养物一旦受到微生物的污染，就会导致实验前功尽弃，
活，等幼苗长壮后再移栽到土壤中。
(六）栽培
三、结果分析与评价
1.外植体被污染的原因： (1)材料的选取应加以选择，老的材料比幼嫩的材料
带菌多，田间比温室生长的材料带菌多。
(2)消毒材料不彻底，植物组织只能进行表面灭菌，
对材料内部所带的细菌、霉菌等杂菌往往难以对 付，可在培养基中添加抗生素解决。
(3)人为污染，如使用未消毒工具或呼吸排出细菌； 手接触材料或器皿边缘，使用过的工作器具未消 毒而再继续使用，造成交叉污染；接种室空气污 染等。
3-1 菊花的组织培养
总结植物组织培养过程:
离 体 组 织 或 细 胞
脱分化 细胞分 裂素≈ 生长素
愈 再分化 伤 组 织
细胞分裂 素>生长素
芽
根 细胞分裂 素<生长素
植 物 体
植物组织培养过程示意图
上面的示意图中还有什么地方不够完善的？
没有进行灭菌处理，试管也没有做密封等。
植物组织培养的污染
①细菌污染：菌斑呈粘液状，界限比较明显， 一般接种后1－2天即能发现。主要是大肠杆 菌和链球菌。
讨论：你能说出各种营养物质的作用吗？同专题2中微 生物培养基的配方相比，MS培养基的配方有哪些明显 的不同？ 微量元素和大量元素提供植物细胞生活所必需的无机盐； 蔗糖提供碳源，同时能够维持细胞的渗透压；
甘氨酸、维生素等物质主要是为了满足离体植物细胞对 特殊营养的需求。
微生物培养基以有机营养为主。与微生物的培养不同， MS培养基则需提供大量无机营养。
菊花： pH=5.8、温度控制在18—22℃、每日 光照12h
1、组织培养 是指在人工培养基上，离体培养植物的器官、 组织、细胞，并使其生长、增殖、分化以及再生 植株的技术。
2、植物组织培养的原理 植物细胞具有全能性。（即生物体的细胞， 具有使后代细胞形成完整个体的能力）
一、基础知识 (一)植物的组织培养的基本过程
3、细胞分化 个体发育中，细胞在形态、结构和生理功能上 出现稳定性差异的过程。
(一)植物的组织培养的基本过程
离体组 织或细 胞 愈 脱分化 再分化 伤 组 营养物质、 织 营养物质、 芽 根 植 物 体
激素、pH、 温度
激素、pH、 温度、光照
（二）影响植物组织培养的因素
1、外植体的选取 2、培养基的配制(MS培养基)
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植物细胞培养 离 体 组 织 或 细 胞 细胞分裂 素>生长素
脱分化 细胞分 裂素≈ 生长素
愈 伤 再分化 组 织
芽
根 细胞分裂 素<生长素 需要光
植 物 体
不需要光
课题延伸 1、一般来说，容易进行无性繁殖的植物，也 容易进行组织培养
2、实例：芦荟、豆瓣绿、秋海棠、月季
美国科学家将分离得到的成熟胡萝卜根的 韧皮部细胞进行培养，由单个细胞发育成完整的新 植株，如图所示，①开花的胡萝卜，②胡萝卜根的 切片，③从根的切片分离的细胞，④由单个细胞分 裂后形成的细胞团，⑤胚状体，⑥试管植物。 请分析： (1)分离出来的胡萝卜根细胞成为细胞团是通过 有丝 分裂方式来完成的。 __________
课题1 菊花的组织培养
植物组织培养的基本过程
离体器官、 组织或细胞
脱分化
愈伤组织
再分化
根、芽
植物体
离体条件下利用人工培养条件在无菌情况下 培养、生长、发育再生出完整植株的过程。
植物组织培养的理论基础：
细胞全能性：具有某种生物全套遗传信息的 任何一个活细胞，都具有发育成完整个体的 能力，即每个生物细胞都具有全能性。
植物组织培养，作为种苗的主要生产方式之一， 具有明显的优点：(1)繁殖速度快，尤其适宜于 新、优、特品种推广的需要；(2)不受季节限制， 可全年生产；(3)植物性状一致，生长势旺，尤 其是作为盆栽植物，丛生性强，丰满度高，具 有更强的观赏性；(4)可防止种质退化，是去除 病毒病害的一种有效手段；(5)作为品种改良的 一个重要手段；(6)可极大地方便种苗出口。基 于上述优势，植物组织种苗培养的产业化，日 益成为许多园艺企业热衷投资的方向之一。
4.愈伤组织
愈伤组织是外植体通过 细胞分裂形成的，其细胞 排列疏松而无规则，高度 液泡化呈无定形状态的薄 壁细胞。
5.再分化：
脱分化产生的愈伤组织继续进行培养，又可 以重新分化成根或芽等器官。
影响植物组织培养的因素：
（1）、外植体的选取
不同植物的组织培养难度不同
同一种植物的不同组织培养难度不同
菊花的组织培养：一般选择未开花植株的 茎上部新萌生的侧枝
（3）植物激素的影响 ①常用的植物激素：生长素、细胞分裂素和 赤霉素 生长素类： 2，4－二氯苯氧乙酸（2，4－D）、 吲哚乙酸（IAA）、萘乙酸（NAA）、 吲哚丁酸（IBA）
细胞分裂素类： 激动素（KT）、6－苄基嘌呤 （ 6－BA）、玉米素（ZT） 赤霉素类： 赤霉酸（GA3）
②生长素和细胞分裂素作用 植物中生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、 脱分化和再分化的关键性激素。在生长素存在 的情况下，细胞分裂素的作用呈现加强的趋势 使用顺序 先使用生长素，后使用 细胞分裂素 先使用细胞分裂素后使 用生长素 同时使用 实验结果 有利于细胞分裂，但不 利分化 细胞既分裂也分化 分化频率高
3、试管苗的培养 当愈伤组织长到一定大小 后，可以更换培养基，进 行试管苗的见光培养 （五）移栽
1、打开封口膜
移栽生根的菊花试管苗之前，应先打开培养 瓶的封口膜，让试管苗在培养间生长几日 2、清洗转移 用流水清洗根部的培养基，将幼苗移植到消过 毒的蛭石或珍珠岩等环境下生活一段时间
珍珠岩：固体基质型，含水量高、蓄水性强、 透性好，适合栽培 3、移栽 幼苗长壮后，移栽到土壤中
实验操作
制备MS固体 培养基 外植体消毒
接种
冲洗—酒精—无菌水冲洗—氯化汞—无菌 水冲洗至少三次之上
培
养
栽
培
移ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
栽
实验操作
（一）制备MS固体培养基
1、配置各种母液
2、配置培养基 ①定容 ② 调PH ③培养基的分装 3、灭菌
分装好的培养基连同其他器械一起进行 高压蒸汽灭菌
（二）外植体消毒 1、选材：菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝 2、消毒： 流水冲洗—酒精—无菌水冲洗—氯化汞— 无菌水冲洗至少三次之上
例1
(2)细胞团中相同的细胞在发育成胚状体 和植株的过程中，形态结构和生理功能 逐渐向不同的方向发生了变化，这种现 分化 象叫做细胞的__________ 。
全能性 (3)本实验说明了植物细胞具有________________ 。 (4)图示培育新的胡萝卜植株的技术在生物学上属 无性生殖 于何种生殖方式_____________________________ 。
细胞全能性表达条件： 离体、一定的营养物质、激素和其他 外界条件
基础知识----相关概念
1.外植体：P34 2.细胞分化：P32 概念： 在个体发育中，相同细胞的后代在形态、 结 构、生理功能上发生稳定性差异的过程
原因： 基因在特定的时间和空间条件下的选择性表 达的结果 结果： 形成各种组织器官 3.脱分化： 由高度分化的植物组织或细胞产生愈伤组织的过程， 又叫去分化。
思考：你打算做几组重复？打算设置对照实验 吗？ 答：每种材料或配方至少要做一组以上的重复。 设置对照实验可以取用一个经过灭菌的装有培养 基的锥形瓶，与接种操作后的锥形瓶一同培养， 用以说明培养基制作合格，没有被杂菌污染。
（四）培养 1、愈伤组织的培养
从接种外植体到出现愈伤组织需经过2周 时间。2周之内可以看到外植体上逐渐长 出乳白色或黄白色的瘤状愈伤组织。首次 培养愈伤组织时，恒温箱的门应该关闭不 必见光，因为在无光条件下愈伤组织长的 更快。2周后，培养基成分接近耗尽，必 须更换培养基，进行继代培养
例2
①当植物激素X与植物激素Y的浓度比等于1时， 未分化细胞群经分裂形成愈伤组织 ______________________________________ ； 当植物激素 X与植物激素 Y的浓度比大于 ②___________________________________ 。 1时， 未分化细胞群分化形成芽 当植物激素X与植物激素Y的浓度比小于1时， ③__________________________________________ 未分化细胞群分化形成根 。 ____________________________ (4)若植物激素Y是生长素，在植物组织培养中其主 (伸长)、分裂和分化 要作用是促进细胞的生长 ______________________ ； 则植物激素 细胞分裂素 X的名称是________ 。 (5)生产上用试管苗保留植物的优良性状，其原因 组织培养形成试管苗的过程属于无性 。 是________________________________
①培养条件可以人为控制 ②生长周期短，繁殖率高 ③管理方便，利于工厂化生产和自动化控制
植物组织培养的应用：
1、快速繁殖 运用组织培养的途径，一个单 株一年可以繁殖几万到几百万个植株。例 如一株兰花一年繁殖到400万株。 2、种苗脱毒 针对病毒对农作物造成的严重 危害，通过组织培养可以有效地培育出大 量的无病毒种苗。 3、远缘杂交 利用组织培养可以使难度很大 的远缘杂交取得成功，从而育成一些罕见 的新物种
（六）栽培
幼苗移栽后，每天观察并记录幼苗的生长情 况，适时浇水、施肥，直至开花
思考
在整个操作过程中，是如何来实现无菌环境的？ 1、培养基的灭菌（高压蒸汽灭菌） 2、外植体的消毒（酒精、氯化汞）
3、接种的无菌操作（酒精、酒精灯——灼烧）
4、无菌箱中的培养；
5、移栽到消过毒的环境中生存一段时间。
植物组织培养特点：
目前全世界许多国家都拥有离体快繁的专业 公司，如荷兰，既是一个花卉生产出口的大 国，同时也是植物组培苗的生产王国，其每 年出口花卉种苗达5000万株以上。我国也不 乏组培苗生产的专业公司，目前年生产总量 约2亿株，其中近一半用于出口。从花卉种苗 的生产情况来看，全世界将近80％的种苗均 来源于组织培养。
跟踪训练 下图为植物组织培养过程的简单示意图。 下列 叙述正确的是( A ) ①― ― →②― ― →③― →④ A．植物组织培养所依据的生物学原理为细胞的全能性 B．③→④过程指植物的生殖生长阶段 C．将①经脱分化培养成的②包裹上人工种皮即可获得人 工种子 D．②→③的再分化过程中，诱导②生根的激素为细胞分 裂素
植物组织培养技术发展史 1902年，德国植物学家哈伯兰特预言：植物体 的任何一个细胞都有长成完整个体的潜在能力， 这种潜在能力就叫植物细胞的全能性。为证实 这个预言，他选植物叶片细胞进行实验培养， 但没有获得成功。1937年，美国科学家怀特 （此外还有法国科学家高斯雷特和诺贝库尔特） 改进了培养基，结果培养的细胞开始分裂，堆 积成一团菜花状瘤状物，即愈伤组织，但不能 继续分化为根、茎、叶等器官。后来研究发现， 只有在培养基中加入适当比例的细胞分裂素和 植物生长素，愈伤组织才能分化出芽和根。
2、愈伤组织的继代培养 继代培养所用的培养基与培养愈伤组织的相同， 在严格的无菌条件下，将愈伤组织连同原来的外 植体一起移到新培养基上。愈伤组织的继代培养 一代为20d。如果延长时间，培养基中营养物质 减少，外植体会分泌有毒物质，造成自身中毒。 如果愈伤组织长到直径为1－1.5cm时，就可以 进行试管苗培养，否则还需进行第二代继代培养 在愈伤组织继代培养期间，将恒温箱的门打开， 让愈伤组织见光，愈伤组织见光后颜色可以转为 绿色
（三）接种 1、接种室消毒
用70％的酒精喷雾使空气消 毒，酒精或新洁尔灭搽洗工 作台并用紫外线照射20分钟
2、无菌操作要求
操作要在酒精灯火焰旁完成， 每次使用器械后，都需要用 火焰灼烧灭菌，接种后立即 盖好瓶盖。
3、材料的切取和接种
4、接种注意事项 ①每接种一块外植体前，镊子需放入体积分 数为75％的酒精溶液中消毒一次，然后在酒 精灯火焰上烧一遍，冷却后再接种 ②外植体在培养基中要分布均匀，放置外植体 数量根据锥形瓶的大小确定，一般胡萝卜3－ 4块，菊的茎或叶6－8块，也不要太少，以充 分利用培养基中的营养成分和光照条件 ③插入时应注意方向，不要倒插。茎段、茎尖 基部插入培养基利于吸收水分和养分
脱分化 细胞分 裂素≈ 生长素
愈 伤 再分化 组 织
芽
根 细胞分裂 素<生长素 需要光
植 物 体
不需要光
课题延伸 1、一般来说，容易进行无性繁殖的植物，也 容易进行组织培养
2、实例：芦荟、豆瓣绿、秋海棠、月季
美国科学家将分离得到的成熟胡萝卜根的 韧皮部细胞进行培养，由单个细胞发育成完整的新 植株，如图所示，①开花的胡萝卜，②胡萝卜根的 切片，③从根的切片分离的细胞，④由单个细胞分 裂后形成的细胞团，⑤胚状体，⑥试管植物。 请分析： (1)分离出来的胡萝卜根细胞成为细胞团是通过 有丝 分裂方式来完成的。 __________
课题1 菊花的组织培养
植物组织培养的基本过程
离体器官、 组织或细胞
脱分化
愈伤组织
再分化
根、芽
植物体
离体条件下利用人工培养条件在无菌情况下 培养、生长、发育再生出完整植株的过程。
植物组织培养的理论基础：
细胞全能性：具有某种生物全套遗传信息的 任何一个活细胞，都具有发育成完整个体的 能力，即每个生物细胞都具有全能性。
植物组织培养，作为种苗的主要生产方式之一， 具有明显的优点：(1)繁殖速度快，尤其适宜于 新、优、特品种推广的需要；(2)不受季节限制， 可全年生产；(3)植物性状一致，生长势旺，尤 其是作为盆栽植物，丛生性强，丰满度高，具 有更强的观赏性；(4)可防止种质退化，是去除 病毒病害的一种有效手段；(5)作为品种改良的 一个重要手段；(6)可极大地方便种苗出口。基 于上述优势，植物组织种苗培养的产业化，日 益成为许多园艺企业热衷投资的方向之一。
4.愈伤组织
愈伤组织是外植体通过 细胞分裂形成的，其细胞 排列疏松而无规则，高度 液泡化呈无定形状态的薄 壁细胞。
5.再分化：
脱分化产生的愈伤组织继续进行培养，又可 以重新分化成根或芽等器官。
影响植物组织培养的因素：
（1）、外植体的选取
不同植物的组织培养难度不同
同一种植物的不同组织培养难度不同
菊花的组织培养：一般选择未开花植株的 茎上部新萌生的侧枝
（3）植物激素的影响 ①常用的植物激素：生长素、细胞分裂素和 赤霉素 生长素类： 2，4－二氯苯氧乙酸（2，4－D）、 吲哚乙酸（IAA）、萘乙酸（NAA）、 吲哚丁酸（IBA）
细胞分裂素类： 激动素（KT）、6－苄基嘌呤 （ 6－BA）、玉米素（ZT） 赤霉素类： 赤霉酸（GA3）
②生长素和细胞分裂素作用 植物中生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、 脱分化和再分化的关键性激素。在生长素存在 的情况下，细胞分裂素的作用呈现加强的趋势 使用顺序 先使用生长素，后使用 细胞分裂素 先使用细胞分裂素后使 用生长素 同时使用 实验结果 有利于细胞分裂，但不 利分化 细胞既分裂也分化 分化频率高
3、试管苗的培养 当愈伤组织长到一定大小 后，可以更换培养基，进 行试管苗的见光培养 （五）移栽
1、打开封口膜
移栽生根的菊花试管苗之前，应先打开培养 瓶的封口膜，让试管苗在培养间生长几日 2、清洗转移 用流水清洗根部的培养基，将幼苗移植到消过 毒的蛭石或珍珠岩等环境下生活一段时间
珍珠岩：固体基质型，含水量高、蓄水性强、 透性好，适合栽培 3、移栽 幼苗长壮后，移栽到土壤中
实验操作
制备MS固体 培养基 外植体消毒
接种
冲洗—酒精—无菌水冲洗—氯化汞—无菌 水冲洗至少三次之上
培
养
栽
培
移ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
栽
实验操作
（一）制备MS固体培养基
1、配置各种母液
2、配置培养基 ①定容 ② 调PH ③培养基的分装 3、灭菌
分装好的培养基连同其他器械一起进行 高压蒸汽灭菌
（二）外植体消毒 1、选材：菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝 2、消毒： 流水冲洗—酒精—无菌水冲洗—氯化汞— 无菌水冲洗至少三次之上
例1
(2)细胞团中相同的细胞在发育成胚状体 和植株的过程中，形态结构和生理功能 逐渐向不同的方向发生了变化，这种现 分化 象叫做细胞的__________ 。
全能性 (3)本实验说明了植物细胞具有________________ 。 (4)图示培育新的胡萝卜植株的技术在生物学上属 无性生殖 于何种生殖方式_____________________________ 。
细胞全能性表达条件： 离体、一定的营养物质、激素和其他 外界条件
基础知识----相关概念
1.外植体：P34 2.细胞分化：P32 概念： 在个体发育中，相同细胞的后代在形态、 结 构、生理功能上发生稳定性差异的过程
原因： 基因在特定的时间和空间条件下的选择性表 达的结果 结果： 形成各种组织器官 3.脱分化： 由高度分化的植物组织或细胞产生愈伤组织的过程， 又叫去分化。
思考：你打算做几组重复？打算设置对照实验 吗？ 答：每种材料或配方至少要做一组以上的重复。 设置对照实验可以取用一个经过灭菌的装有培养 基的锥形瓶，与接种操作后的锥形瓶一同培养， 用以说明培养基制作合格，没有被杂菌污染。
（四）培养 1、愈伤组织的培养
从接种外植体到出现愈伤组织需经过2周 时间。2周之内可以看到外植体上逐渐长 出乳白色或黄白色的瘤状愈伤组织。首次 培养愈伤组织时，恒温箱的门应该关闭不 必见光，因为在无光条件下愈伤组织长的 更快。2周后，培养基成分接近耗尽，必 须更换培养基，进行继代培养
例2
①当植物激素X与植物激素Y的浓度比等于1时， 未分化细胞群经分裂形成愈伤组织 ______________________________________ ； 当植物激素 X与植物激素 Y的浓度比大于 ②___________________________________ 。 1时， 未分化细胞群分化形成芽 当植物激素X与植物激素Y的浓度比小于1时， ③__________________________________________ 未分化细胞群分化形成根 。 ____________________________ (4)若植物激素Y是生长素，在植物组织培养中其主 (伸长)、分裂和分化 要作用是促进细胞的生长 ______________________ ； 则植物激素 细胞分裂素 X的名称是________ 。 (5)生产上用试管苗保留植物的优良性状，其原因 组织培养形成试管苗的过程属于无性 。 是________________________________
①培养条件可以人为控制 ②生长周期短，繁殖率高 ③管理方便，利于工厂化生产和自动化控制
植物组织培养的应用：
1、快速繁殖 运用组织培养的途径，一个单 株一年可以繁殖几万到几百万个植株。例 如一株兰花一年繁殖到400万株。 2、种苗脱毒 针对病毒对农作物造成的严重 危害，通过组织培养可以有效地培育出大 量的无病毒种苗。 3、远缘杂交 利用组织培养可以使难度很大 的远缘杂交取得成功，从而育成一些罕见 的新物种
（六）栽培
幼苗移栽后，每天观察并记录幼苗的生长情 况，适时浇水、施肥，直至开花
思考
在整个操作过程中，是如何来实现无菌环境的？ 1、培养基的灭菌（高压蒸汽灭菌） 2、外植体的消毒（酒精、氯化汞）
3、接种的无菌操作（酒精、酒精灯——灼烧）
4、无菌箱中的培养；
5、移栽到消过毒的环境中生存一段时间。
植物组织培养特点：
目前全世界许多国家都拥有离体快繁的专业 公司，如荷兰，既是一个花卉生产出口的大 国，同时也是植物组培苗的生产王国，其每 年出口花卉种苗达5000万株以上。我国也不 乏组培苗生产的专业公司，目前年生产总量 约2亿株，其中近一半用于出口。从花卉种苗 的生产情况来看，全世界将近80％的种苗均 来源于组织培养。
跟踪训练 下图为植物组织培养过程的简单示意图。 下列 叙述正确的是( A ) ①― ― →②― ― →③― →④ A．植物组织培养所依据的生物学原理为细胞的全能性 B．③→④过程指植物的生殖生长阶段 C．将①经脱分化培养成的②包裹上人工种皮即可获得人 工种子 D．②→③的再分化过程中，诱导②生根的激素为细胞分 裂素
植物组织培养技术发展史 1902年，德国植物学家哈伯兰特预言：植物体 的任何一个细胞都有长成完整个体的潜在能力， 这种潜在能力就叫植物细胞的全能性。为证实 这个预言，他选植物叶片细胞进行实验培养， 但没有获得成功。1937年，美国科学家怀特 （此外还有法国科学家高斯雷特和诺贝库尔特） 改进了培养基，结果培养的细胞开始分裂，堆 积成一团菜花状瘤状物，即愈伤组织，但不能 继续分化为根、茎、叶等器官。后来研究发现， 只有在培养基中加入适当比例的细胞分裂素和 植物生长素，愈伤组织才能分化出芽和根。
2、愈伤组织的继代培养 继代培养所用的培养基与培养愈伤组织的相同， 在严格的无菌条件下，将愈伤组织连同原来的外 植体一起移到新培养基上。愈伤组织的继代培养 一代为20d。如果延长时间，培养基中营养物质 减少，外植体会分泌有毒物质，造成自身中毒。 如果愈伤组织长到直径为1－1.5cm时，就可以 进行试管苗培养，否则还需进行第二代继代培养 在愈伤组织继代培养期间，将恒温箱的门打开， 让愈伤组织见光，愈伤组织见光后颜色可以转为 绿色
（三）接种 1、接种室消毒
用70％的酒精喷雾使空气消 毒，酒精或新洁尔灭搽洗工 作台并用紫外线照射20分钟
2、无菌操作要求
操作要在酒精灯火焰旁完成， 每次使用器械后，都需要用 火焰灼烧灭菌，接种后立即 盖好瓶盖。
3、材料的切取和接种
4、接种注意事项 ①每接种一块外植体前，镊子需放入体积分 数为75％的酒精溶液中消毒一次，然后在酒 精灯火焰上烧一遍，冷却后再接种 ②外植体在培养基中要分布均匀，放置外植体 数量根据锥形瓶的大小确定，一般胡萝卜3－ 4块，菊的茎或叶6－8块，也不要太少，以充 分利用培养基中的营养成分和光照条件 ③插入时应注意方向，不要倒插。茎段、茎尖 基部插入培养基利于吸收水分和养分