90猪口蹄疫病毒非结构蛋白抗体酶联免疫吸附试剂诊断试剂盒

口蹄疫O型抗体检测试剂盒（酶联免疫法）使用说明书【产品名称】通用名：口蹄疫O型抗体检测试剂盒（酶联免疫法）英文名：Test Kit for Antibodies to Foot and Mouth Disease Virus Asia O（ELISA）【包装规格】96T×1/盒、96T×2/盒、96T×5/盒【预期用途】口蹄疫是由口蹄疫病毒（Foot and Mouth Disease Virus，FMDV）引起的偶蹄动物的一种急性、热性、高度接触性传染病，其特征为口腔黏膜、蹄部、乳房皮肤发生水泡和烂斑。

本试剂用于检测牛、羊、猪血清中口蹄疫O型抗体，可用于口蹄疫O型疫苗免疫效果评价。

【原理】本试剂盒由预包被口蹄疫O型抗体的酶标板、抗体工作液、抗原液、酶标记物及其他配套试剂组成，应用阻断酶联免疫法（ELISA）原理检测牛、羊、猪血清样本中口蹄疫O型抗体。

实验时将稀释的样本与抗原液同时加入酶标板中孵育，样本中的抗体与酶标板上的抗体竞争抗原，阻断抗原与板的结合；经洗涤后，再加抗体工作液孵育；经洗涤后加入酶标记物孵育；再经洗涤除去未结合的酶标记物，在孔中加底物液，与酶标结合物反应形成蓝色产物，显色深浅与样品中的特异性抗体含量成负相关；加入终止液终止反应后，产物变为黄色；用酶标仪在450nm波长测定各反应孔中的吸光值，即可知样品是否含有口蹄疫O型抗体。

【试剂盒组成】【储存及有效期】2～8℃保存，有效期12个月。

包被板开封后请于2～8℃避光保存，避免受潮。

使用期限为2个月。

【适用仪器】含450nm、630nm波长的酶标仪，37℃恒温设备，可调微量移液器。

【样品准备】1.取动物全血按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血、无污染。

样品1周内可于2～8℃保存，长期需置-20℃保存。

2.用工作洗涤液将待检牛、羊血清先按32倍稀释（如5μl 血清加入155μl 工作洗涤液中，混匀），待检猪血清按16倍稀释（如5μl 血清加入75μl 洗涤液中，混匀），阴、阳性对照不用稀释。

口蹄疫监测诊断作业指导书一、口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体检测酶联免疫吸附试验1. 适用范围用于检测猪、牛、羊血清中的口蹄疫病毒VPI 结构蛋白抗体，与猪、牛、羊口蹄疫病毒非结构蛋白抗体酶联免疫吸附试验诊断试剂盒联合使用，可区分口蹄疫病毒感染动物及疫苗免疫动物。

检测猪血清应用猪口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体酶联免疫吸附试验诊断试剂盒；检测牛、羊血清应用牛、羊口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体酶联免疫吸附试验诊断试剂盒。

2. 检测试剂口蹄疫病毒VP1 抗原包被板、样品稀释液、酶结合物、阴性对照、VP1阳性对照、酶结合物稀释液、TMB底物A液、TMB底物B液、终止液（I.OMHZSQ）、浓缩洗涤液、稀释板、一次性封板膜、微孔定位标签。

3. 检测步骤3.1使用前将试剂盒恢复到室温，避免阳光直射或放置在30C 以上的环境中。

3.2取出试剂盒中的样品稀释液。

A1、B1 两孔作为阴性对照，CI 、D1 两孔作为阳性对照孔，其余孔作检测孔，每孔一个样品。

3.3在稀释板的各孔中加200样品稀释液。

在相应各孔中分别加入10 此对照血清或被检血清样品。

用加样器重复吹吸数次。

稀释每个样品时必须使用不同的吸头。

3.4取出抗原包被板。

3.5分别从稀释板上取稀释后的对照血清和被检血清各100 此，加至抗原包被板的相应孔中，加益或封膜后，置37 士2C下孵育60 士5 分钟。

3.6洗涤工作液配制：按需要量，用去产离子水或双蒸水将洗涤液作25 倍稀释。

3.7用洗涤工作液洗涤抗原包被板，每孔300 吨，洗涤6 次，拍干。

3.8酶结合物工作液配制：用酶结合物稀释液将酶结合物作100 倍稀释，现配现用。

3.9每孔加入100此酶结合物工作液，加盖或封膜后，置37 士2C 下孵育30± 2 分钟。

3.10 重复3.7。

3.1仃MB底物工作液配制：将TMB底物B液和TMB底物A液等量混合，现配现用。

3.12每孔加入100此底物工作液，加盖或封膜后，置37 士2C下孵育15士1 分钟。

不同试剂盒检测猪口蹄疫O型合成肽疫苗免疫抗体的对比试验廖美娜;袁敏【摘要】使用口蹄疫O型正向间接血凝抗体试剂盒(IHA)和2个厂家生产的猪口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体酶联免疫吸附试验诊断试剂盒(VP1-ELISA)分别检测接种猪口蹄疫O型合成肽疫苗免疫后不同时间的抗体合格率,以探讨3种抗体检测试剂盒的相关性.结果显示,IHA试剂盒与两种VP1-ELISA的符合率较差,分别为11.7％、12.5％,IHA试剂盒不能用于检测合成肽疫苗免疫抗体;VP1-ELISA试剂盒可以科学评价合成肽疫苗免疫抗体,两种VP1-ELISA试剂盒的平均符合率为93.6％,但是VP1-ELISA (UBI)试剂盒的稳定性高于VP1-ELISA(Z)试剂盒.【期刊名称】《广东畜牧兽医科技》【年(卷),期】2016(041)001【总页数】4页(P24-26,29)【关键词】猪口蹄疫;O型抗体;试剂盒;对比【作者】廖美娜;袁敏【作者单位】河源市龙川县动物卫生监督所赤光分所,广东河源517349;河源市龙川县畜牧兽医渔业局,广东河源517300【正文语种】中文【中图分类】S851.3口蹄疫（Foot-an-mouth isease，FM）是一种急性、热性、高度接触性传染病[1]，严重危害我国畜牧业的发展[2-3]。

目前，我国对口蹄疫实行预防为主、扑杀为辅的防控政策，对口蹄疫实行强制免疫。

免疫抗体检测是科学评价免疫质量的有效手段，也是制定免疫程序的可靠依据。

在实际工作中，因受到检测方法、检测试剂的不同而导致检测结果常有差异。

近几年，猪口蹄疫O型合成肽疫苗作为一种新型疫苗在市场上得到广泛的应用[4]。

为了选择科学评估此种疫苗免疫质量的检测方法，本试验通过使用猪口蹄疫O型合成肽疫苗免疫猪群后，采集不同时间的血清，分别使用正向间接血凝试验试剂盒（IHA）和2个厂家生产的猪口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体酶联免疫吸附试验诊断试剂盒（VP1-ELISA），进行了猪口蹄疫O型抗体检测的对比试验。

不同品牌 ELISA试剂盒对口蹄疫抗体检测的试验摘要：用不同品牌的口蹄疫O型ELISA试剂盒,对免疫口蹄疫疫苗后的猪群进行口蹄疫抗体检测，发现检测结果阳性率各不相同。

结果表明不同品牌试剂盒因制备方法、包被抗原不同对猪群的抗体检测结果不同，所以，建议在实践中用口蹄疫ELISA试剂盒检测抗体效价应根据情况有选择使用。

关键词：试剂盒；抗体效价检测；阳性率；有选择使用；口蹄疫(Foot-and-Mouth Disease，FMD)是由口蹄疫病毒（Foot-and-mouth disease virus）引起的偶蹄动物烈性传染病，是世界卫生组织（OIE）规定必报的烈性传染病，我国将其排在一类传染病之首。

口蹄疫病毒共有七个血清型，分别为O、A、C、Asia1、SAT1、SAT2、SAT3型。

每个血清型又有许多不同的亚型，各血清型之间没有交叉保护，同一血清型的各亚型之间仅有部分交叉保护，这使得对口蹄疫的防控更加困难。

目前我国主要流行O型和A型口蹄疫。

目前，我国防控口蹄疫主要采取疫苗免疫与扑杀相结合的综合防治措施，对所有易感动物猪、牛、羊进行口蹄疫灭活疫苗免疫接种。

但是在给动物注射疫苗后能否预防口蹄疫的发生一直的广大养殖户迫切需要知道的问题。

所以免疫后的效果评价就显得特别重要。

目前主要有以下几种检测方法：1.免疫动物攻毒实验；这一方法是判断疫苗免疫效果的金标准，但因需要在生物安全三级实验室内进行，一般养殖企业和研究单位都没法实施。

2.免疫动物血清中和实验；这一方法相对准确些，但同样也受一定条件限制，一般的研究检测单位也不完全具备检测条件。

3.免疫动物血清ELISA抗体检测；这一方法的准确性比前两种方法相对较差，但也是一般检测单位都容易实施的检测方法，因此也被广泛用于疫苗免疫效果的评价。

但由于这一方法的存在的一定的缺陷，评价结果也一直存在争议。

本文所研究的就是使用第三种方法对疫苗免疫效果进行检测，根据检测结果进一步分析这一方法的准确性，对使用单位给予一些指导建议。

口蹄疫病毒 RT-PCR检测试剂盒使用说明书用途口蹄疫病毒( FMDV)反转录聚合酶链反应( RT-PCR)，用于检测疑似感染动物的水疱皮或水疱液中所有血清型的 FMDV，适用于 FMDV的检测、诊断和流行病学调查。

原理利用离心柱内硅基质膜提取 RNA，在反转录酶的作用下，以 RNA为模板，以引物为起点合成与 RNA模板互补的 cDNA链。

在 TaqDNA聚合酶的作用下，经高温变性、低温退火、中温延伸的循环，使特异 DNA片段的拷贝数放大一倍。

经过 35次循环，最终使扩增 DNA 片段放大了数百万倍。

将扩增 DNA片段进行电泳，经染色后，在紫外灯照射下，肉眼可见到 DNA片段的扩增带。

试剂1．试剂盒组成2．试剂盒保存期：6个月。

Store:4℃需要自备的器材1．仪器：分析天平、离心机、 PCR扩增仪、电泳仪、电泳槽、紫外凝胶成像仪(或紫外分析仪)、微波炉、组织研磨器、-20℃冰箱、可调移液器(2µL、20µL、200 µL、1000 µL)。

2．耗材：眼科剪、眼科镊、称量纸、 20mL一次性注射器、生理盐水、琼脂糖、 500mL量筒、500 mL锥形瓶、经焦碳酸二乙酯( DEPC)水处理的灭菌 1.5mL离心管和吸头( 10 µL、200µL、1000 µL)、灭菌双蒸水。

使用注意事项1．所有接触病料的物品均应合理处理，以免污染实验室。

2．PCR整个试验分配液区、模模板提取区扩增区电泳区。

严禁器材和试剂倒流。

1所有试剂应在规定的温度储存， -20℃保存的各试剂使用前应放于室温完全融化，使用后立即放回 -20℃。

2染色液低毒，应于室温条件避光保存，操作时应戴上手套。

3注意防止试剂盒组分受污染。

使用前将红盖管8000 rpm离心15 s，使液体全部沉于管底，放于冰盒中，吸取液体时移液器吸头尽量在液体表面层吸取。

1不要使用超过有效期限的试剂，试剂盒之间的成分不要混用。

口蹄疫病毒非结构蛋白（NSP）抗体检测试验一、介绍：口蹄疫（FMD）是由口蹄疫病毒（FMDV）引起的急性、热性高度接触性传染病，主要侵害偶蹄兽，一旦发病，将会引起严重的经济损失。

口蹄疫病毒属于微核糖核酸病毒科口蹄疫病毒属，目前已知共有7种血清型，即O型、A型、C型、SAT1、SAT2、SAT3和亚洲1型。

口蹄疫病毒（FMDV）非结构蛋白（NSP）特异性抗体的存在，通常用来证明宿主体内口蹄疫病毒已经感染或正在感染，非结构蛋白与结构蛋白不一样，没有血清型区分。

国际兽医局（OIE）规定的非结构蛋白血清学检测方法为EITB和ELISA。

韩国金诺VDPro FMDV 非结构蛋白（NSP）抗体检测试剂盒，是用阻断ELISA，重组FMDV NSP蛋白包被，过氧化物酶标记的单克隆抗体，来检测血清中非结构蛋白抗体是否存在。

适用对象包括猪、牛、山羊以及绵羊等。

二、试剂盒组成：三、注意事项：1、使用之前请仔细阅读操作说明；2、试剂盒储存条件：2-8℃；四、实验前准备：1、洗液10倍稀释：如20ml洗液，加入180ml去离子水混匀，备用。

2、TMB底物：使用前恢复到室温，因为低温可能导致不显色。

五、操作步骤：1、使用前将试剂盒所有组件恢复到室温（25±3℃），取出抗原包被板；2、标记好样品、阳性对照和阴性对照（对照各做两孔），每孔加入样品稀释液80μl，然后加入样品血清、阳性对照、阴性对照各20μl后进行震荡混匀；3、室温孵育60分钟；4、洗板：每孔加入洗涤液300μl，洗涤3次，最后在吸水纸上拍干；5、每孔加入100μl酶标抗体，室温孵育60分钟；6、重复步骤4，洗涤3次；7、每孔加入TMB底物反应液100μl，室温暗处放置15分钟。

六、读数：每孔加入50μl终止液，在酶标仪450nm波长处读数。

七、结果判定：1、实验有效性判定阴性对照OD值≥0.6阳性对照OD值≤0.32、计算方法3、判定标准SN值＞0.60 判为阴性；SN值≤0.60 判为阳性。

猪瘟ELISA抗体检测试剂盒猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒使用说明书【简介】试剂盒由抗原包被的微孔板，酶标羊抗猪IgG及其它试剂制成，应用间接ELISA原理检测猪血清中抗猪瘟病毒抗体。

【用途】猪瘟ELISA诊断试剂盒用于检测猪血清中猪瘟病毒抗体。

评估猪场猪瘟疫苗免疫状况，感染猪的血清学诊断。

【原理】本试剂盒是采用猪瘟抗原包被微孔板，在试验中，加入稀释的对照血清和待检血清，经温育后，若样品中含有抗猪瘟病毒的特异性抗体，则将与检测板上抗原结合，经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后；再加入酶标二抗，与检测板上抗原抗体复合物发生特异性结合；再经洗涤除去未结合的酶结合物，在孔中加TM B底物液，与酶反应形成蓝色产物，加入HF溶液终止反应后，用酶标仪630nm波长测定各反应孔中的OD 值。

【试剂盒主要成分】1 包被抗原的微孔板 2块（96孔/块）2 阴、阳性对照血清各1管（0.5ml/管）3 羊抗猪酶标二抗 1瓶（20ml/瓶）4 20倍浓缩洗涤液 1瓶（30ml/瓶）5 底物A液、B液各1瓶（10ml/瓶）6 终止液 1瓶（10ml/瓶）7 样品稀释液 1瓶（50ml/瓶）8 血清稀释板 2块（96孔/块）9 说明书 1张【样品制备】取动物全血，按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血。

【洗涤液配制】使用前，浓缩的洗涤液应恢复至室温（25℃左右），并摇动使沉淀的盐溶解（最好在37℃水中加热5-10m in），然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释（例如：每板用20 ml浓缩液加上380ml水），稀释好的洗涤液在4℃可以存放7天。

【样品稀释】在血清稀释板中按1：40的体积稀释待检血清（195μl样品稀释液中加5μl待检血清）。

注意：阳性对照和阴性对照1：40稀释，（234μl样品稀释液中加6μl对照血清）。

【注意事项】1 试剂盒使用前各试剂应平衡至室温，使用后放回2-8℃。

2 不同批号试剂盒的试剂组分不得混用，使用试剂时应防止试剂污染。

猪口蹄疫病毒O型抗体检测试剂盒（酶联免疫法）使用说明书【产品名称】通用名：猪口蹄疫病毒O型抗体检测试剂盒（酶联免疫法）英文名：Diagnostic Kit for Antibodies to Porcine foot and mouth disease virus (ELISA) 【预期用途】本品采用酶联免疫间接法检测猪血清或血浆中的猪口蹄疫病毒（O型）抗体，适用于评估猪场猪口蹄疫疫苗免疫状况，可用于动物疫病的调查。

【检验方法】1. 配洗液：将50ml洗液（20×）加纯化水稀释至1000ml，充分摇匀后备用。

2. 编号：每次试验应在包被板上设空白对照孔1孔，阴性对照孔2孔，阳性对照孔2孔，其余为待检样品孔。

3. 加样品稀释液：用加样器在包被板的待检样品孔中加入样品稀释液，每孔100μl；空白对照孔、阴性对照孔及阳性对照孔不加样品稀释液。

4. 加样：分别于各待检样品孔加入待检样品10μl，阴性对照孔加入阴性对照血清100μl，阳性对照孔加入阳性对照血清100μl；空白对照孔不加样。

5. 温育（一）：充分混匀，贴上封板膜，37±2℃温育30分钟。

6. 洗板（一）：洗板机洗或手洗，方法如下：①手洗：倾去内容物，用洗液注满反应孔，静置15秒至30秒后吸去或弃去，在毛巾或吸水纸上拍干。

如此洗板重复5次。

②洗板机洗：洗板次数为5次，每次洗液在孔中滞留时间为15-30秒，洗液应注满反应孔，确保每次吸净无残留，全部洗完后在毛巾或吸水纸上拍干。

7. 加酶标结合物：除空白对照孔以外，各孔中加入酶标结合物100μl。

8. 温育（二）：贴上封板膜，37±2℃温育30分钟。

9. 洗板（二）：方法同洗板（一）。

10. 加显色剂：每孔加入显色剂A 50μl，全部加完后再在每孔中加入显色剂B 50μl，混匀。

11. 温育（三）：37±2℃显色10分钟。

12. 终止：显色完毕后立即于每孔加50μl终止液，混匀。