萎缩性胃炎与非萎缩性胃炎胃黏膜基因表达谱的对照研究
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慢性萎缩性胃炎的胃镜下表现与病理诊断对照分析卢蕊摘要:目的:探究慢性萎缩性胃炎在胃镜下的表现,及其病理的诊断结果。
方法:从2016年1月——2016年12月在我院接受检查的慢性萎缩性胃炎患者中抽取60例患者作为研究对象,对其展开回顾性分析,对病变处进行活检病理检查,将其内镜下的表现进行分析对比,对检查结果进行比较,明确慢性萎缩性胃炎在内镜下的表现,将其与比病理检查之间存在的相关性进行分析。
结果:对慢性萎缩性胃炎胃镜下的表现及病理结果进行比较研究后,胃镜下出现粘膜皱襞变平或是消失,其粘膜表现为红白相间,主要以白为主,并且其血管透见的有11例患者,而胃镜下表现为粘膜颗粒状或是结节状的患者共有20例,胃镜下两种表现情况兼具的患者共有29人,其中,在胃镜表现和病理结果进行比较时,均显示P<0.05,差异具有统计学意义。
结论:在对慢性萎缩性胃炎的内径诊断和病理结果进行分析后,可以发现,两者的符合率存在一定的差异性,还需要将慢性萎缩性胃炎的诊断和内径诊断结果、病理诊断相结合,为医生的诊断奠定辅助基础,从而将慢性萎缩性胃炎的确诊率提高。
关键词:慢性萎缩性胃炎;胃镜;表现;病理诊断结果;对照分析在针对慢性萎缩性胃炎进行检查的过程中,其镜下表现形式是诊断病情的重要依据,但是其种类不同在胃镜下的表现形式也不尽相同[1]。
本研究将以我院接收的慢性萎缩性胃炎患者为例,对其胃镜下的表现情况进行分析,并将其病理作为参考,探究其病情特点,从而能够为临床诊断做出依据,促进诊断准确率的提高,具体报道内容如下。
1一般资料和方法1.1一般资料从2016年1月——2016年12月在我院接受检查的慢性萎缩性胃炎患者中抽取60例患者作为研究对象。
其中,共有男性患者34人,女性患者26人,患者年龄在26岁-66岁,平均年龄为(45.34±4.64)岁。
所有患者均自愿参与调查研究,调查过程中意识清醒。
同时排除患者具有精神病史和消化道肿瘤、消化性溃疡或是其他上消化道疾病的可能性,排除患者具有严重心脑血管疾病的可能性。
慢性萎缩性胃炎不同证型\Hp与黏膜中SS相关性研究【摘要】目的探讨cag不同证型与黏膜中ss及hp的相关性。
方法选取符合标准患者60例,脾胃虚弱证者30例,脾胃湿热证者30例,正常对照者30例,应用ria法测定胃黏膜中ss含量,并进行ss水平比较。
结果 cag患者胃黏膜中ss水平在2证型均明显低于正常对照(均p0.05),在hp感染阳性者明显低于正常者、阴性者 (均p<0.05)结论 cag患者胃黏膜中ss水平变化可以部分反映脾胃虚弱证、湿热证的本质, ss的严重减少可能与hp感染相关。
【关键词】慢性萎缩性胃炎;中医证型;生长抑素;幽门螺杆菌慢性萎缩性胃炎(cag)为胃癌前状态,“未病先防,已病防变”,中医药已凸显优势,但中医证候标准化还有待进一步研究。
本课题将西医诊病与中医辨证相结合,通过黏膜中ss水平测定,探讨cag 中医证型与hp及胃肠激素的相关性,以期为辨证论治cag提供客观化诊断指标。
1 材料与方法1.1诊断标准采用2003年中华消化内镜学会制定的cag胃镜联合病理组织学诊断标准及《中药新药临床研究指导原则》cag脾胃虚弱证、脾胃湿热证诊断标准[1]。
排除合并消化性溃疡、胃息肉、胃黏膜有中重度异型增生或病理诊断疑有恶变者;合并心、脑、肝、肾和造血系统等严重原发性疾病、精神病患者;妊娠或哺乳期妇女。
1.2一般资料符合上述标准我院就诊cag患者60例,脾胃虚弱证者30例,男15例,女15例,年龄25~63岁,病程0.5~6年;脾胃湿热证者男16例,女14例,年龄27~65岁,病程0.5~5年。
正常对照者30例均来自我院胃镜普查所筛选无疾病无症状健康人群,男17例,女13例,年龄26~60岁。
三组在性别、年龄、病程等方面相比差异无统计学意义(均 p>0.05)。
1.3标本采集及制备入选病例,空腹行胃镜检查取胃黏膜组织,其中3块送病理检查,1块用快速尿素酶试验检测是否有hp感染,2块用滤纸吸干组织表面,置万分之一天平称重;称重后置于含有0.5ml hci(0.1mmol)溶液的试管中,水浴(95℃)10分钟,立即匀浆;匀浆后加入0.1mmol的naoh0.5ml中和,以3000r/min,离心15分钟,吸取上清液置于密封冻存管中,-70℃保存备用。
不同形态萎缩性胃炎伴肠上皮化生胃黏膜中Ki67和RegIV的表达情况背景及目的胃癌是消化道肿瘤之一,临床发病率高,且早期症状及胃镜下形态均不典型,早期胃癌常易被漏诊,确诊胃癌时大多数患者的病情已进入中晚期,难以取得满意的五年存活率,患者预后差。
如果能做到早期预防,并且定期对高危人群进行胃镜筛查,就可减少胃癌发病率或提高胃癌检出率。
本文将胃黏膜形态学、病理学及分子生物学等信息综合考虑,检测胃窦处不同形态的萎缩性胃炎伴肠上皮化生黏膜中Ki67和再生基因IV(regenerating gene Ⅳ, Reg IV)的表达情况,推测在高危人群中哪种胃窦黏膜形态发生异型增生或癌变的可能性大,以提高胃镜靶向活检的准确率。
对象和方法胃镜下活检取得不同病变、不同形态的胃窦黏膜标本共314例,分为五组,分别为:非萎缩性胃炎组60例、萎缩性胃炎组61例、萎缩性胃炎伴肠化呈浅表凹陷黏膜组(简称肠化凹陷灶)64例、萎缩性胃炎伴肠化呈浅表隆起黏膜组(简称肠化隆起灶)64例和胃癌组65例。
所有患者均未接受质子泵抑制剂及胃黏膜保护剂等药物治疗。
分别使用免疫组织化学染色法和半定量反转录聚合酶链反应(reverse transcriptase-PCR,RT-PCR)法对胃镜下所取标本组织进行Ki67和RegIV因子的蛋白质和mRNA水平检测。
结果Ki67在非萎缩性胃炎组、萎缩性胃炎组、肠化凹陷灶组、肠化隆起灶组以及胃癌组中蛋白阳性表达率渐进性增高,阳性率分别为15.0%、18.0%、23.4%、70.3%、70.8%,肠化隆起灶组与肠化凹陷灶组、非萎缩性胃炎组、萎缩性胃炎组的表达差异均有统计学意义(P<0.05),但与胃癌组无统计学意义(P>0.05);mRNA在以上5组中的表达水平分别为0.19±0.02、0.28±0.01、0.60±0.02、1.17±0.04、1.35±0.03,其统计学结果与蛋白表达相同。
3中外医疗I N FOR I GN M D I L TR TM NT 中外医疗2008NO .19CHI NA FO REI GN M EDI CAL TREATM ENT基础医学研究表明,长期热咸饮食可以导致慢性萎缩性胃炎[1]。
慢性萎缩性胃炎与胃癌发生密切相关,其被列为胃癌前状态[5]。
现已公认胃粘膜细胞癌变常需经历萎缩性胃炎/伴肠化-不典型增生-胃癌的过程[6],此过程中癌基因、抑癌基因的作用意义重大。
p53蛋白是53kD 的核磷酸蛋白质,参与细胞周期和细胞增殖的调节。
正常细胞中p53蛋白含量较低,半衰期短,用一般的免疫组化方法很难检测。
当p53基因发生突变时,所表达的p53蛋白构型发生变化,在细胞内半衰期延长,导致细胞恶性增殖,此时组织中可检测出p53蛋白[4~5]。
本研究利用激光扫描共聚焦显微镜(l as er sc anni ng conf oca l m i c r oscope ,LSC M )的高分辨性及同屏显示不同发射波长荧光色的特性,观察p53及PCN A 蛋白在大鼠萎缩性胃炎胃粘膜组织细胞中的表达情况。
1材料与方法1.1材料7周龄健康、性成熟的雄性SD 大鼠(由第四军医动物实验中心提供)64只,体质量200~250g,按随机化原则分为3组,即正常喂养组、正常对照组和热盐水组。
每组各20只。
采用架式笼养,恒温(24±1)℃,湿度50%~60%。
1.2方法大鼠萎缩性胃炎模型的制作:正常喂养组为正常喂养,饮白开水;正常对照组为25℃白开水灌胃,每次2.5m L ,1次d -1;热盐水组为55℃15%氯化钠灌胃,每次2.5m L,1次d -1。
实验开始,先处死4只正常组大鼠,并留取胃大体标本作为对照。
以后各组分别于4周、8周、12周、24周、32周、65周各随机取4只,以观察粘膜萎缩情况,具体方法参见文献[6]。
免疫荧光及激光扫描共聚焦显微镜检测技术:按身体质量与给药容积比值为0.5%腹腔注射戊巴比妥麻醉,取出鼠胃,沿大鼠胃小弯条状取材,包括胃窦及部分胃体,做组织切片。
慢性萎缩性胃炎内镜检查与病理诊断临床对比研究陈飞摘要:目的:慢性萎缩性胃炎内镜检查与病理诊断临床对比研究。
方法:将我院2015年1月-2016年10月所收治的97例慢性萎缩性胃炎患者作为研究对象,97例患者均接受内镜检查和病症诊断。
结果:本组97例内镜诊断下确诊为诶慢性萎缩性胃炎患者,在对其进行病理诊断的过程中,发现有72例患者属于慢性萎缩性胃炎患者,诊断符合率为74.22%。
在对患者进行内镜检查的过程中,有27例患者属于A型,病理学诊断有11例慢性萎缩性胃炎患者,占据40.74%;有31例患者属于B型,病理学诊断有26例慢性萎缩性胃炎患者,占据83.87%;有39例患者属于C型,病理学诊断有37例慢性萎缩性胃炎患者,占据96.87%。
三种慢性萎缩性胃炎诊断符合率在病理诊断过程中差异显著,具有统计学意义(P<0.05)。
结论:内镜诊断慢性萎缩性胃炎与病理组织学结果存在着一定的差异性,在实际诊断过程中可以将两者结合起来一起进行诊断,这样能更好提高其诊断率。
关键词:慢性萎缩性胃炎;内镜检查;病理诊断慢性萎缩性胃炎在临床中属于消化系统疾病,其主要临床表现就是胃部黏膜腺体萎缩,在临床上这类疾病被认为是胃癌常见癌前病变现象[1]。
为此,在对慢性萎缩性胃炎进行治疗的过程中,其早期诊断十分的重要,尽早对患者进行治疗能够有效地预防癌前病变的进展,使患者受到更好地治疗。
就目前而言,在对这类疾病进行诊断过程中,大多会对患者进行内镜检查,为了更好地对其进行研究,本文主要对慢性萎缩性胃炎内镜检查与病理诊断进行了临床对比研究,现报告如下。
1.资料与方法1.1一般资料将我院2015年1月-2016年10月所收治的97例慢性萎缩性胃炎患者作为研究对象,其中,男性患者有53例,女性患者34例;患者年龄段为24-70岁,平均年龄为(62.78±5.78)岁;主要临床表现为饱胀、上腹部疼痛等现象,同时还伴有恶心呕吐、食欲不振等症状。
慢性萎缩性胃炎中医证型与胃镜、胃黏膜病理及幽门螺杆菌感染的相关性研究目的:对慢性萎缩性胃炎(CAG)中医证型与胃镜、胃黏膜病理及幽门螺杆菌感染的相关性进行分析探讨。
方法:选取本院2015年1月-2017年10月收治的110例CAG患者作为研究对象,对所有患者行中医证型分型,对证型分布特点、患者的年龄、性别、胃镜检查、幽门螺杆菌感染及胃黏膜病理检查的相关性进行分析探讨。
结果:110例患者中医证型中脾胃虚弱证41例,占37.27%,明显高于其他证型。
胃镜表现方面,单纯性萎缩性形态患者仅占13.64%,其中以脾胃湿热证所占比例最低。
患者的萎缩多以轻、中度为主。
脾胃虚弱证患者的重度萎缩比例明显低于肝胃不和证、胃络瘀血证及脾胃湿热证。
幽门螺杆菌感染者为51例,占46.36%。
结论:慢性萎缩性胃炎病理演变同中医证型、幽门螺杆菌感染等有着一定相关性,在病变早期以实证为主,幽门螺杆菌的感染率较低,在病变中晚期多以虚实夹杂证为主,幽门螺杆菌的感染率较高。
慢性萎縮性胃炎(chronic atrophic gastritis,CAG)为消化科常见性疾病,发生率约为受检人数的15%[1]。
研究显示,CAG是胃癌的独立危险因素[2],特别是CAG伴上皮化或胃黏膜异型增生患者的癌变风险更高,被称作癌前病变[3]。
临床上目前关于CAG癌前病变的发病机制没有完全明确,西方医学对于该病目前尚无确切的治疗方法,而中医在此类疾病的治疗及预防方面有着独特优势,叫作治未病[4]。
所以,如何从中医角度预防、治疗CAG癌前病变已经成为临床研究的热点。
为了进一步对CAG中医证型、胃镜、胃黏膜病理及幽门螺杆菌感染之间的相关性进行分析探讨,笔者对本院2015年1月-2017年10月收治的110例CAG患者的临床资料进行回顾性分析,现报道如下。
1 资料与方法1.1 一般资料选取本院2015年1月-2017年10月收治的110例CAG患者作为研究对象,其中男61例,女49例;年龄32~78岁,平均(53.93±2.29)岁;病程0.5~18.5年,平均(7.88±0.96)年。
基金项目:上海市重点学科建设项目资助作者单位:200001上海第二医科大学仁济医院上海市消化疾病研究所#论著#萎缩性胃炎与非萎缩性胃炎胃黏膜基因表达谱的对照研究陈胜良萧树东陈晓宇=摘要>目的萎缩性胃炎是癌前疾病之一,常为非萎缩性胃炎演变的后果。
应用生物芯片技术观察萎缩性胃炎和非萎缩性胃炎胃黏膜组织基因表达谱的差异,探讨萎缩性胃炎发生的分子生物学机制。
方法连续登记在门诊接受胃镜检查的萎缩性胃炎和非萎缩性胃炎患者227例,男143例,女84例,平均年龄48.6岁(16~72岁)。
胃镜检查时获取胃体和胃窦黏膜活检标本进行病理学检查,其余活检黏膜组织液氮冻存。
根据病理学检查结果将冻存的组织标本分成萎缩性胃炎组和非萎缩性胃炎组,分别抽提两组组织的总RNA,逆转录制备荧光cDN A探针,用含有8464条人类体细胞基因模板的表达谱cDN A芯片进行杂交实验。
结果与非萎缩性胃炎相比,萎缩性胃炎的活检胃黏膜组织中165项基因的表达水平上调2倍以上,460项的表达水平下调50%以上。
表达下调者占73.6%。
结论基因表达谱生物芯片技术可以获得萎缩性胃炎胃黏膜组织基因在表达水平上改变情况的较全面的信息;萎缩性胃炎涉及多基因在表达水平上的改变。
=关键词>萎缩性胃炎;基因;基因芯片C omparison of gene expression profiles in atrophic and non-atrophic gastritis CH EN S heng-liang,XIA O Shu-dong,CH EN X iao-y u.Shanghai I nstitute of Diges tiveD iseases,Renj i H osp ital,Shanghai Second M edical University,Shanghai200001,China=Abstract>Objective A trophic g ast ritis,as a pr e-cancerous condition of gastr ic cancer,is developed from non-atrophic gastritis.T he aims of this study was to compare the gene ex pr ession pro files betw een atroph-ic gastr itis and non-atrophic gastritis using cDNA microarr ay and to ex plore the molecular mechanisms in the development of atrophic gastritis.Methods Endosco py and biopsy were performed consecutively in227pa-tients(143male,84female,age range between16-72years,w ith average age48.6years).Diag nosis of non-atrophic g astritis and atrophic gastrit i s was made according to histolog ical ex amination,and120patients were in non-atrophic g roup and107in atrophic gr oup.T he total R NA w as ex tracted from the biopsy specimens of t wo groups w ith T rizo l reag ent.cDNA micr oar ray consisting8464human genes(HG EC-80s kit)w as used, and labeled cDN A with fluorescence probes were hybridized to microarray,and then the compar ison of gene ex pression profiles was made between atr ophic and non-atrophic gastritis.Results I t w as identified that in g ene ex pr ession profiles of atrophic gastrit i s there were165genes showing a greater than2-fold increase and 460genes showing a gr eater than50%decrease as compared to non-atrophic gastr itis.RT-P CR analysi s re-vealed similar results as in DNA microarray.Conclusions T here is differ ent ex pression in many genes be-tw een the gastric mucosal cells of non-atrophic and atrophic gastr itis mucosa.M any genes expression pro files are involved in atrophic gastritis that would be of help in furt her understanding the dev elopment o f atrophic g astritis.=Key words>Atrophic gastr itis;Gene;M icroarray近年来,生物芯片技术已被引入消化病学基础和临床的研究领域[1,2]。
本研究采用cDNA微矩阵芯片(cDNA microarray)杂交和扫描技术,利用生物芯片技术的信息集约化、平行处理、高效、快速和多参量的特点[3,4],以非萎缩性胃炎为对照,对大样本慢性萎缩性胃炎胃黏膜细胞中在表达水平上有明显改变的基因作了筛选。
旨在探讨生物芯片技术在本研究领域中的应用价值,并初步了解萎缩性胃炎和非萎缩性胃炎胃黏膜基因在表达水平上改变的特点,探讨萎缩性胃炎发生发展的分子学基础。
资料与方法一、临床资料2001年6月~10月,连续登记了在我院接受门诊胃镜检查的慢性胃炎患者227例,取胃黏膜作病理检查,进行诊断和分组。
1.慢性胃炎的诊断和分组:胃镜检查时分别取胃体(距胃角4cm处)黏膜3块和胃窦(距幽门3 cm处)黏膜4块,胃体和胃窦各2块进行组织病理学检查,其余活检黏膜组织冻存于液氮中。
病理学检查由两位专业医师依照慢性胃炎病理学诊断新的悉尼标准判定[5],2块以上黏膜的病理学检查出现萎缩征象归于非萎缩性胃炎组。
2.病例:研究共纳入227例慢性胃炎患者,男143例,女84例,平均年龄(48.6?9.7)岁(16~72岁)。
萎缩性胃炎组107例,男69例,女38例,平均年龄(51.3 ?10.6)岁(27~72岁);非萎缩性胃炎组120例,男84例,女46例,平均年龄(46.1?9.1)岁(16~62岁)。
二、基因表达谱芯片实验1.cDNA基因芯片及相关试剂盒:采用人类基因表达谱基因芯片及分析试剂盒(H GEC-80s kit),由上海博兴基因芯片公司生产。
2.总RNA抽提:准确称量等量的两组胃炎黏膜组织,分别于液氮内研成粉末状,转移至盛有T RIzol试剂的匀浆管中,置于冰浴中,匀浆机上匀浆处理。
在4e条件下将组织匀浆在15ml离心管中12000g离心10min;将上清液移入15ml离心管,室温放置5min;然后加入氯仿,加盖用力振荡1 min,室温放置3m in;于4e12000g离心15min;将上清液移至另一支15ml离心管;加入异丙醇,轻轻颠倒混匀,室温放置10min;4e12000g离心10m in,弃上清液后沿管壁缓慢加入75%乙醇10 ml,短暂涡旋后4e8000g离心10min;弃上清液,在超净台内干燥5min;加入无RNase的M ill-i Q 水完全溶解后,紫外线分光光度计和琼脂糖凝胶电泳监测总RNA质量,-80e保存。
3.探针标记和杂交:逆转录制备样本荧光cDNA探针,萎缩性胃炎组应用Cy5-dCTP、非萎缩胃炎组用Cy3-dCT P进行逆转录反应。
合并2组探针样本,经DNA纯化柱纯化处理后真空抽干。
预先将芯片进行预杂交处理,再经变性和过夜杂交。
用洗片试剂洗脱多余探针,晾干以备扫描。
4.扫描:采用GenePix4000B型荧光扫描仪进行杂交芯片扫描。
激光激发功率(Laser Power)分别为:4.09(Cy5)和5.74(Cy3),光电倍增管基值(PM I Volts)分别为:770(Cy5)和810(Cy3)。
5.数据筛选:荧光标记的强度值(Cy5或Cy3) =前景值-背景值(Cy5的荧光强度值小于200时,记为200)。
计算有效基因(select值=1或Cy3、Cy5值两者皆大于200或其一大于800)的Cy5/Cy3自然对数值Ini=In(Cy5/Cy3),以该值在0.1~ 1.0之间的有效基因作为均一化标准依据,其均值作为均一化系数(0.853)。
将所有数据项的Cy3标记强度乘以均一化(normalization)系数,得到标准化的Cy3值,该值如小于200,则以200取代。
计算Cy5/Cy3的比值。
将比值小于0.5和大于2.0的数据所对应的基因列出。
6.重复性试验:因受标本量的限制,未进行基因芯片杂交的进行重复试验。
采用胃癌组织和癌旁胃黏膜组织进行同条件芯片杂交重复实验,以比值小于0.5和大于2.0为标准,阳性结果的重复率为71.3%(2次筛选相同阳性基因数/第1次实验阳性基因数)。
三、用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术对基因芯片技术进行部分验证选用BRAF、人鼠同源P21、P53为引物,以萎缩性胃炎和非萎缩性胃炎总RNA为样本逆转录获得的cDNA为模板进行PCR,以琼脂糖凝胶电泳PCR 产物条带的亮度比较对应基因表达水平上的差异。
逆转录反应包括总RNA5L g、寡脱氧胸苷酸1 L l,加DEPC水至12L l,7e10min,插冰,分别加入鼠白血病病毒5缓冲液5L l、dNT P1L l、Rnasin25 U、鼠白血病病毒反转录酶20U,加DEPC水至25 L l,42e反应60min,94e变性5min。