SDS-CTAB改进方法提取细菌基因组DNA

菌dna提取方法
菌DNA提取方法主要有以下几种常用的方法：
1. 热裂解法：将菌株经过培养后，取一部分菌体加入到含有蛋白酶K和SDS等裂解液的管内，经过高温加热和高速离心等步骤，将细胞裂解，使DNA释放到溶液中。

2. 真菌细胞壁裂解法：对于真菌等含有较坚硬的细胞壁的菌株，可以先用混合酶或纤维素酶等酶解细胞壁，然后再用热裂解法或理化方法提取DNA。

3. CTAB方法：CTAB（盐基洗脱法）常用于提取高质量的食管菌和黄杆菌等高GC含量的菌株DNA。

首先，将菌体经过裂解后，使用CTAB裂解液中的盐离子与DNA结合形成沉淀，然后通过洗脱步骤将DNA纯化。

4. 醋酸盐方法：醋酸盐方法适用于提取低GC含量的菌株DNA。

将菌体经过裂解后，通过添加醋酸盐裂解液，使DNA与醋酸和盐结合成为可溶性复合物，后续通过酒精沉淀等步骤将DNA沉淀出来。

5. 商业化基因提取试剂盒：市面上还有许多商业化的基因提取试剂盒，这些试剂盒提供了一套完整的操作流程和试剂，能够方便快速地提取和纯化菌DNA。

不同的菌株和研究目的可能需要使用不同的提取方法，因此在选择提取方法时需
要根据具体情况进行选择。

ctab法提取dna实验报告CTAB 法提取 DNA 实验报告一、实验目的掌握 CTAB 法提取 DNA 的原理和操作方法，提取高质量的植物或微生物 DNA，为后续的分子生物学实验（如 PCR、基因测序等）提供纯净的 DNA 样本。

二、实验原理CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）是一种阳离子去污剂，在高离子强度的溶液中能与核酸形成复合物，并通过离心将其与蛋白质、多糖等杂质分离。

随后，用乙醇或异丙醇沉淀 DNA，使其从溶液中析出。

三、实验材料与试剂1、实验材料选取新鲜的植物叶片（或微生物培养物）。

2、实验试剂CTAB 提取缓冲液：2% CTAB，14 M NaCl，20 mM EDTA，100 mM TrisHCl（pH 80），02% β巯基乙醇（使用前加入）。

氯仿异戊醇（24 ： 1）异丙醇70% 乙醇TE 缓冲液（10 mM TrisHCl，1 mM EDTA，pH 80）四、实验仪器与设备1、高速冷冻离心机2、恒温水浴锅3、移液器4、涡旋振荡器5、微量紫外分光光度计五、实验步骤1、材料处理植物材料：取新鲜植物叶片约 2 g，用液氮速冻后研磨成粉末。

微生物材料：收集一定量的微生物培养物，离心收集菌体，用无菌水洗涤后重悬。

2、加入提取缓冲液将研磨好的植物粉末（或重悬的微生物）迅速转移至离心管中，加入预热至 65℃的 CTAB 提取缓冲液，充分混匀，65℃水浴保温 30 60 分钟，期间不时轻轻颠倒混匀。

3、抽提加入等体积的氯仿异戊醇（24 ： 1），涡旋振荡 10 15 分钟，使其充分混匀，然后 12000 rpm 离心 10 15 分钟。

4、转移上清用移液器小心吸取上清液至新的离心管中，避免吸取中间的蛋白质层。

5、 DNA 沉淀向上清液中加入 06 07 倍体积的异丙醇，轻轻颠倒混匀，室温放置10 20 分钟，使 DNA 沉淀。

6、离心收集12000 rpm 离心 10 15 分钟，弃上清。

7、洗涤用 70% 乙醇洗涤沉淀 2 3 次，每次离心 5 10 分钟，弃上清。

前言：今天终于把一株黑曲霉DNA提取出来了，由于实验室条件简陋，购买试剂盒不划算，只好发挥实验室一切能用到的方法：冰冻、水煮、微波、超声波、溶菌酶解，等等效果都不佳，无奈，这次结合几种方法在一起，虽然有点麻烦，但是效果还可以，用来扩增16S没有一点问题，提取霉菌DNA只是雕虫小技，在此献丑了。

改良的CTAB法提取霉菌DNA1、PDA液体培养基，32℃过夜培养菌体，取1ml菌液于1.5ml 离心管，8000rpm离心3min，去上清，再取1ml 1倍PBS漂洗，去上清，吸干水分，65℃烘箱中烘约30min，至半干燥2、液氮充分研磨后，加入0.3 ml 3% CTAB提取缓冲液；3、65℃水浴45 min，取上清转到离心管中，加入40 μl 1 mg/ml蛋白酶K，15ul 10mg/ml 溶菌酶，37℃水浴30min；4、加入350 μl Tris饱和酚，摇匀，13000 r/min离心10min；5、取上清，加入等体积的氯仿/异戊醇，摇匀，13000 r/min离心10 min；6、1/10体积3M醋酸，等体积异丙醇沉淀1h7、离心，弃上清，70%酒精洗涤1-2次。

8、弃上清，晾干后用ddH2ORanase水溶解。

附效果：左边：DNA扩增16SrDNA 中间：Marker 2000bp-100bp 右边：DNA 效果图参考：1、吴发红，黄东益，黄小龙等，几种真菌DNA提取方法的比较，中国农学通报20092、scau 农学院分子遗传实验室历届研究生内部资料。

后记：参考吴等人的方法，其步骤更为复杂，要用到大离心管，小量抽提DNA不太可取，若小量抽提用他们的方法，结果是没有DNA.故此我做了两点改变：1、65℃水浴后，直接加酶，37℃温浴，时间可以不变，2、第一次氯仿：异戊醇抽提后，直接用异丙醇沉淀，酒精洗涤。

省时，且能保证DNA的量。

另外我多了溶菌酶，没做对照，也不知道有没有起作用，如果实验室没有条件，也可以不加试试。

基因组DNA的提取（改良CTAB法）5× CTAB Buffer：100 mM Tris-Cl (pH 8.0)，20 mM EDTA (pH 8.0)，1.4 M NaCl，5% CTAB，2% PVP 10，1% SDS。

按3.2.4.3所述混养培养方法收集培养5天的冻干藻体。

1) 取野生藻株和转基因藻株多个株系各约0.5 g冻干藻于液氮下快速研磨，将粉末转移至7 mL离心管中；2) 加入2 mL 60 ℃预热的5×CTAB提取缓冲液，倒转轻轻混匀后置60 ℃水浴30 - 60 min；3) 取出凉至室温后加入等体积的氯仿：异戊醇（24:1），倒转轻轻混匀后，在室温下静止10 min，12,000 rpm离心10 min；4) 吸取上清，重复抽提一次（务必保证上相不浑浊）；5) 往上清中加入1/2体积的3 M NaAC，混匀后再加入两倍体积的- 20 ℃预冷的无水乙醇，混匀后- 20 ℃放置30 min；6) 4 ℃，5,000 rpm 离心6 min；7) 弃上清，并用冷的70%乙醇清洗沉淀，37 ℃干燥沉淀；8) 溶于500 μL TE溶液并转移至1.5 mL的离心管中；加入5 μL RNaseA，37 ℃保温1 h；9) 加入等体积的酚:氯仿（1:1），倒转轻轻的混匀后，于12,000 rpm离心10 min；10) 取上清用等体积的酚:氯仿:异戊醇（25:24:1）再抽提两次；11) 往上清中加入1/10体积的3 M NaAC，混匀后再加入两倍体积的无水乙醇，混匀后4 ℃放置1 h。

12) 4 ℃12,000 rpm离心10 min。

13) 70 %乙醇清洗沉淀后，37 ℃干燥沉淀。

用500 - 100 μL的双蒸水溶解DNA后置于4 ℃保存。

3.2.4.5 转。

CTAB法提取微生物DNACTAB法提取微生物DNACTAB法提取细菌DNA一. 细菌总DNA提取1. 将菌株接种于液体LB培养基中，37℃震荡培养过夜。

2. 取1.5ml培养物12000rpm离心2min。

3. 沉淀物加入567μl的TE缓冲液，反复吹打使之重新悬浮，加入30μl 10%SDS和15μl的蛋白酶K，混匀，于37℃温育1h。

4. 加入100μl 5mol/L NaCl，加入80μl CTAB/ NaCl溶液，混匀后65℃温育10min。

5. 加入等体积酚/氯仿/异戊醇混匀，离心4-5min，将上清转入另一只离心管中，加入0.6-0.8倍体积的异丙醇，轻轻混匀直到DNA沉淀下来，沉淀可稍微离心。

6. 沉淀用1ml的70%乙醇洗涤后，离心弃乙醇，在洁净工作台稍加干燥，重溶于20μl TE缓冲液（含RNaseA＜25ng/ml）中，准备电泳检测。

二．琼脂糖凝胶电泳。

1. 制胶：称取琼脂糖粉末，置于三角瓶中，加入TAE缓冲液配成0.8%的浓度，加热脂使琼脂糖全部融化于缓冲液中，待溶液温度降至65℃时，立即倒入制胶槽中，插入样品梳。

在室温放置0.5-1h，待凝胶全部凝结后，轻轻拔出样品梳。

然后在电泳槽中加入电泳缓冲液直到没过凝胶为止。

2. 加样：取0.5-1 ug 左右的样品，体积为10-20ul，加入1/4体积的溴酚兰-甘油指示剂，混匀后小心地加到样品槽中。

同时另取一个已知分子量的标准DNA水解液，在同一凝胶板上进行电泳。

3. 电泳：维持恒压100V，电泳0.5-1h，直到溴酚兰指示剂移动到凝胶底部，停止电泳。

4. 染色：将凝胶取出后浸入0.5mg/ml 溴乙啶溶液中，染色0.5-1h。

染液可反复多次使用。

5. 观察：将凝胶板置于254nm波长紫外灯下进行观察。

DNA存在的位置呈现橙黄色荧光。

CTAB法提取真菌DNA1. 真菌培养菌丝，真空抽滤后，无菌水洗涤3次，再用80％乙醇洗1次。

2. 取50mg左右吸干的新鲜菌丝，加入600ul2×CTAB 提取缓冲液 (含0.7mol/L NaC1，100mmol/L Tris-HC1 pH8.0，20 mmol/L EDTA ，10 g/L PVP-360，20g/LCTAB ,0.1％13-巯基乙醇) ，少许灭菌石英砂，在研钵中将菌丝充分研磨。

小白鼠6种组织部位总DNA不同提取方法的比较DNA是生物体的基本遗传物质。

基因组DNA的提取是分子生物学的基础试验操作，其提取效率和质量的好坏直接决定了后面一系列基因工程试验的成败，如基因分离、AFLP、RAPD、SSR等。

因此•学习、掌握DNA提取方法并对其迸行比较、总结，有利于后续试验的顺利开展。

国内外研究人员已经发现并使用了许多种DNA提取方法［2-7］，并且针对不同生物体的具体特点，对许多方法逬行了改良，摸索出适用于具体物种的高效方法［8-15］。

目前，传统的SDS法和CTAB 法由于其成本低廉、提取的DNA质量相对较好，在实际应用中仍占有主要地位。

随着生物技术的普及和应用，使用试剂盒提取基因组DNA逐渐增多［16-19］。

基因组提取试剂盒具有操作简便、节省时间等独特优势，但是对于一般的实验室、特别是普通高等学校来说，由于价格较为昂贵，在很大程度上限制了其使用范围；尤其对刚接触分子生物学试验的初学者，只知道按照说明书流程操作，不了解试剂的化学成分、具体配制方法及作用，不利于理解、掌握试验的基本原理，动手能力差、试验技能得不到提高，最终出现一旦离开试剂盒，什么试验也不会做的情况。

本试验以普通试验动物小白鼠作为提取基因组DNA的材料，选取小白鼠的6个组织部位，分别是肝、脾、肾、尾、肺和心脏，采用提取基因组DNA的经典方法SDS法和CTAB法，提取小白鼠的基因组DNA，并对其质量、浓度、纯度进行检测，从中筛选出经济、简便、易于操作、质量良好的基因组DNA，这对于今后的试验教学和科研工作具有重要的指导作用。

1材料和方法1.1材料1.1.1试验材料小白鼠购自沈阳医学院实验中心。

1.1.2试剂dNTP 'DNA Marker 高保真酶均购自宝生物工程（大连）有限公司‘引物于Invitrogen北京分公司合成» CTAB和SDS法提取液配制所需药品购自Sigma，其余所用的化学试剂（氯仿、异戊醇、异丙醇、乙醇等）均为国产分析纯试剂。

CTAB法[30]提取玉米（或其余植物）基因组DNA1) 取 ~1 g 玉米叶片，加入液氮粉碎，加入2mL 2% 65℃保温的 2×CTAB抽提液，混匀， 65℃保温 30～60min。

2)加入等体积的氯仿 / 异戊醇（24：1），轻缓颠倒混匀， 10000r/min ，离心 5min。

3)取上清，加入 1/10 体积（约）的 65℃的 10× CTAB/NaCl溶液，颠倒混匀。

4)用等体积的氯仿 / 异戊醇（ 24：1）抽提， 10000r/min ，离心 5min。

5)取上清，加入（正好）等体积的 CTAB积淀液，颠倒混匀，如积淀可见，持续做下步，否则， 65℃保温 30min。

6)4℃， 2700 r/min ，离心 5min。

7)去上清，用高盐的 TE buffer 重悬（～）。

（可 65℃保温 30min，至大多数溶解）。

8) 加入体积的异丙醇积淀核酸，充分混匀， 4℃， 10000 r/min ，离心 15min。

9) 去上清， 80%乙醇洗涤积淀，干燥，用尽可能少的 TE buffer 重悬。

高盐的 TE buffer终浓度配制 50ml10mM , (1M 母液 )0.1mM EDTA, (0.5M 母液 )1M NaCl 1.8g室温可保留几年CTAB提取液终浓度配制 200ml2%(W/V) CTAB 4g100mM , 20ml(1M 母液 )20mM EDTA, 8ml(0.5M 母液 )1.4M NaCl 10.22g室温可保留几年10×CTAB/NaCl溶液 (10%CTAB/0.7M NaCl)在 80ml H2O 中溶解 4.1g NaCl ，迟缓加入 10g CTAB，同时加热并搅拌。

如果需要，可加热至 65℃溶解。

定容至 100ml。

CTAB积淀液终浓度配制 100ml1%(W/V) CTAB 1g50mM , 5ml(1M 母液 )10mM EDTA, 2ml(0.5M 母液 )室温可保留几年CTAB法提取植物干品（或真菌）基因组DNA（自己改良版）10)取 0.2g 叶片，加入液氮粉碎，加入 800μL 2% 65℃保温的 2×CTAB抽提液，混匀， 65℃保温 30～60min。

改进SDS-CTAB方法提取细菌基因组具体步骤1.将待检测菌株接种于3 mL LB或BHI培养基中37℃培养过夜2.取1.5 mL上述菌液于2 mL离心管10,000~15,000 rpm，离心10~15 min，去上清，若所得菌体过少可重复此步骤一次3.加入564 μL TE缓冲液pH 8.0重悬菌体，此时不得涡旋，上下颠倒离心管几次使其混合均匀，然后37℃放置10~60 min。

4.加入30 μL 10%~20% SDS混合均匀、不得涡旋，置于37℃条件反应1~2h，使悬液相对清澈有粘性为止。

5.加入100μL 5M NaCl混合均匀、不得涡旋，65℃反应2 min。

然后加入80μL CTAB/NaCl，混合均匀、不得涡旋，65℃反应10 min。

（注：在加入CTAB/NaCl之前,必须用5M NaCl充分混匀裂解产物且CTAB/NaCl溶液加之前得先预热至65℃，并且吸取时移液器枪头应去除尖端）6.加入等体积约800 μL氯仿/异戊醇24:1充分混匀，10,000 rpm离心5 min。

离心后，转移含有核酸的上清液水相即上清液A，至新的2 mL 离心管中。

7.加入等体积约800 μL酚/氯仿/异戊醇25:24:于上清液A中充分混匀，15,000 rpm离心5 min。

离心后，转移含有核酸的上清液水相即上清液B，至新的2 mL离心管中。

8.加入等体积约800 μL氯仿/异戊醇24:1于上清液B中，充分混匀10,000 rpm离心5 min。

离心后，转移含有核酸的上清液水相即上清液C，至新的2 mL离心管中。

9.加入0.7倍体积约560 μL异丙醇至上清液C以沉淀DNA，上下轻柔颠倒离心管几次，可见白色、黏样沉淀即为DNA。

常温静置5~60 min后，12,000~15,000 rpm常温离心15~30 min。

可见DNA团集于离心管壁边上。

然后小心去除异丙醇，避免碰到DNA团。

10.加入500μL70%乙醇后上下颠倒离心管几次以洗涤DNA团，再常温12,000~15,000 rpm离心15~30 min。

植物病理学报ＡＣＴＡＰＨＹＴＯＰＡＴＨＯＬＯＧＩＣＡＳＩＮＩＣＡ３５（４）：３６２－３６５（２００５）一种快速简便的植物病原真菌基因组ＤＮＡ提取方法刘少华１’２，陆金萍２，朱瑞良１，戴富明２（１华东师范大学生命科学学院，上海２０００６２；２上海市农业科学院植物保护研究所上海市设施园艺重点实验室，上海２０１１０６）摘要：尿素提取法是最新报道的一种植物拟南芥基因组ＤＮＡ的提取方法，但是还没有应用于植物病原真菌ＤＮＡ的提取。

本研究采用改进的４种不同的方法（尿素提取法、ＣｒＡＢ提取法、氯化苄提取法以及ＳＤＳ—ＣＴＡＢ提取法），分别对５种分类地位不同的植物病原真菌（草莓疫霉病菌、西瓜蔓枯病菌、草莓炭疽病菌、西瓜枯萎病菌和水稻纹枯病菌）的基因组ＤＮＡ进行提取和比较。

结果表明，尿素提取法和ＳＤＳ－ＣｒＡＢ法均能提取到所有５种真菌的基因组ＤＮＡ，而尿素提取法提取ＤＮＡ的效率更高、质量更好，操作步骤更为快速简单。

关键词：植物病原真菌；基因组ＤＮＡ；尿素提取法ＡｒａｐｉｄａｎｄｓｉｍｐｌｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｆｏｒｐｌａｎｔｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｆｕｎｇｉＬＩＵＳｈａｏ．ｈｕａｌ”，ＬＵＪｉｎ—ｐｉｎ９２，ＺＨＵＲｕｉ—ｌｉａｎ９１，ＤＡＩＦｕ—ｍｉｎ９２（１ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，ｔｈｅＥａｓｔＣｈｉｎａＮｏｒｍａｌｕＩｌｉｖｅｒｓ时，Ｓｈａｎｇｈａｉ２０００６２，Ｃｈｉｎａ；２ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＰｌａｎｔＰｒｏｔｅｃｔｉｏｎ，ＳｈａｎｇｈａｉＡｃａｄｅｍｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＳｈａｎｇｈａｉＫｅｙＬａｂｏｆＰｒｏ．ｔｅｃｔｅｄＨｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒａｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ２０１１０６，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＵｒｅａｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｈａｓｂｅｅｎｒｅｃｅｎｔｌｙｒｅｐｏｒｔｅｄａｓａｍｅｔｈｏｄｏｎｌｙｆｏｒｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｏｆＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓｇｅｎｏｍｉｃＤＮＡ，ｗｈｉｃｈｈａｓｎｏｔａｐｐｌｉｅｄｉｎｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｏｆｐｌａｎｔｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｆｕｎｇａｌＤＮＡ．Ｉｎｔｈｉｓｐａｐｅｒ，ｆｏｕｒｋｉｎｄｓｏｆｅｘｔｒａｃ—ｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｓ（ｍｏｄｉｆｉｅｄｕｒｅａ，ＣＴＡＢ，ｂｅｎｚｙｌｃｈｌｏｒｉｄｅａｎｄＳＤＳ—ＣＴＡＢ）ｗｅｒｅａｐｐｌｉｅｄｔｏｅｘｔｒａｃｔｔｈｅｇｅｎｏｍｉｃＤＮＡｏｆｆｉｖｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｐｌａｎｔｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｆｕｎｇｉ（Ｐ缈ｔｏｐｈｔｈｏｒａｆｒａｇａｒｉａｅ，Ｄｉｄｙｍｅｌｌａｂｒｙｏｎｉａｅ，Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍｆｒａ—ｇａｄａｅ，Ｆｕｓａｒｉｕｍｏｘｙｓｐｏｒｕｍｆ．ｓｐ．ｃｕｃｕｍｅｒｉｒｕｍ，Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａｓｏｌａｎｉ）ａｎｄｔｈｅｙａｒｅａｓｓｅｓｓｅｄｏｎｓｉｍｐｌｉｃｉｔｙ，ｒａ－ｐｉｄｉｔｙａｎｄｅｆｆｉｃａｃｙ．ＲｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｕｒｅａｍｅｔｈｏｄｈａｄｂｅＲｅｒｅｆｆｉｃａｃｙ，ｓｉｍｐｌｅｒ，ｍｏｉｌｃｏｎｖｅｎｉｅｎｔｐｒｏｃｅ—ｄｕｒｅａｎｄｂｒｏａｄｅｒａｐｐｌｉｃａｂｉｌｉｔｙ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｐｌａｎｔｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｆｕｎｇｉ；ｇｅｎｏｍｉｃＤＮＡ；ｕｒｅａｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄ文章编号：０４１２－０９１４（２００５）０４－０３６２－０４国内外用于真核生物基因组ＤＮＡ提取的方法很多，植物病原真菌基因组ＤＮＡ提取主要借鉴植物基因组ＤＮＡ的提取方法，然而，有些方法试剂昂贵或者步骤繁琐。

万方数据　万方数据２００８年第１０期ＳＤＳ法相比，获得的基因组ＤＮＡ量明显减少，此法可用于ＤＮＡ的少蹙快速制备。

生二素链霉菌、淡青链霉菌，天蓝色链霉菌、委内瑞拉链霉菌基因组ＤＮＡ的ＯＤ：。

／ＯＤｚ。

的比值分别为１．８９，１．８９，１．９２，１．８３，１。

９０。

紫外检测结果表明，在６种方法中，优化ＳＤＳ法提取方法可靠，提取的ＤＮＡ质量好．产帚高。

１．优化ＳＤＳ法；２．ＳＤＳ法；３．优化ＣＴＡＢ法；４．ＣＴＡＢ法ｆ５．液氮研磨法；６．微波法；Ｍ．＾一ＨｉｎｄⅢｄｉｇｅｓｔＭａｒｋｅｒ图ｌ６种方法提取委内瑞拉链霉菌基因组ＤＮＡ电泳图谱２．１．２ＤＮＡ纯度、浓度检测从表１的紫外检测１～５分别为菌株ｓ．／。

ｄｉａｅ，Ｓ．。

ｍａｏＪ。

加，，ｓ．ｇｌａｕｃｅｓｃｅｎｓ，ｓ．。

ｌｉ一结果可知，６种方法所获得委内瑞拉链霉菌基因组ｃｏｌｏｒ，Ｓ．＂ｏｅｎｅｚｕｅ／ａｅ基因组ＤＮＡ，Ｍ为Ｘ－－ＨｉｎｄｎｌｄｉｇｅｓｔＭａｒｋｅｒＤＮＡ的ＯＤ２６０／ＯＤ２８。

比值在１．９０９～２．２３４。

从纯图２优化ＳＤＳ法提取的基因组ＤＮＡ电泳图谱度上看，微波法获得的基因组ＤＮＡ纯度最高２．３１６ＳｒＤＮＡＰＣＲ扩增结果（ＯＤ：。

／ＯＤ２。

比值为１．９０９），优化ＳＤＳ法次之将优化ＳＤＳ法所提取的供试菌株进行１６Ｓ（ＯＤ：。

／ＯＤ：∞比值为１．９１４）。

从产率来看，优化ｒＤＮＡＦｔ曾，扩增效果见图３，ＰＣＲ产物基本无拖带ＣＴＡＢ法的产率为４５．８７”ｇ／ｇ，高于优化ＳＤＳ法产与杂带·得到满意的扩增效果。

率２９．６０，ｕｇ／ｇ，但优化ＣＴＡＢ法ＯＤ２６。

／０Ｄ２。

的比值说明ＲＮＡ等杂质较多，这与电泳观察到的结果一致。

因此，优化ＳＤＳ法最适合从委内瑞拉链霉菌中提取基因组ＤＮＡ。

表ｌ不同提取方法获得的委内瑞拉链霉菌基因组ＤＮＡ紫外检测结果２．２优化ＳＤＳ法提取的基因组ＤＮＡ由于优化ＳＤＳ法获得的委内瑞拉链霉菌基因组ＤＮＡ效果好，因而，用此法继续提取弗氏链霉菌、生二素链霉菌、淡青链霉菌、天蓝色链霉菌基因组ＤＮＡ。

总dna提取的方法
总DNA提取法是一种从细胞或组织中提取总DNA的方法。

下面列举了几种常用的总DNA提取方法：
1. 高盐法：该方法使用含有高浓度盐的提取缓冲液，通过离心将细胞膜和蛋白质沉淀，然后使用酒精沉淀DNA。

2. CTAB法：该方法使用聚合物CTAB（正十六烷基三甲基溴化铵）来沉淀DNA，然后使用酒精沉淀纯化。

3. CTAB-SDS法：该方法结合了CTAB和SDS（十二烷基硫酸钠），通过聚合物的沉淀作用来沉淀DNA。

4. 氯仿提取法：该方法使用氯仿来去除脂质和蛋白质，然后使用酒精沉淀纯化。

5. 酚/氯仿提取法：该方法使用酚和氯仿来提取DNA，通过酚的分配和氯仿的去脂作用。

6. 硅胶膜柱法：该方法使用硅胶膜柱来吸附DNA，然后通过洗涤和洗脱得到纯化的DNA。

这些方法的选择取决于样品类型、DNA纯化的目的以及实验室的设备和资源等
因素。

黄瓜白粉菌基因组DNA提取方法比较柳利龙;张爱琴;张环【摘要】以黄瓜白粉病菌为试验材料,比较分析了改良CTAB法、SDS法和真菌试剂盒法对黄瓜白粉病菌基因组DNA提取的效果.结果表明,CTAB法提取的黄瓜白粉菌基因组DNA在纯度(R=A260 nm/A 280 nm)和产量上均优于SDS法和真菌试剂盒法,且杂质少.CTAB法提取的黄瓜白粉菌基因组DNA产率为204.3μg/g,而SDS法和真菌试剂盒法分别为147.7、117.7μg/g,且方法产率之间差异极显著.采用CTAB法提取的DNA纯度较高,为1.9696;SDS法和真菌试剂盒法提取的DND 纯度较低,分别为1.8322和1.5079.【期刊名称】《甘肃农业科技》【年(卷),期】2018(000)006【总页数】5页(P14-18)【关键词】黄瓜白粉病菌;基因组DNA;提取方法【作者】柳利龙;张爱琴;张环【作者单位】甘肃省农业科学院畜草与绿色农业研究所, 甘肃兰州 730070;甘肃省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所, 甘肃兰州 730070;甘肃省农业科学院畜草与绿色农业研究所, 甘肃兰州 730070;甘肃省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所, 甘肃兰州 730070;甘肃省农业科学院畜草与绿色农业研究所, 甘肃兰州 730070;甘肃省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所, 甘肃兰州 730070【正文语种】中文【中图分类】S436.421.1黄瓜白粉病又称粉霉病、白毛病，是严重危害黄瓜的主要病害之一，具有潜伏期短、再侵染频繁、流行性强和周年发生等特点［1-3］。

其主要为害叶片，影响叶片的光合作用，故通常在黄瓜生长过程中、后期发病重，造成黄瓜减产，甚至造成提前拉秧［4］。

果实感染后不能正常膨大，呈瘦长形［5］，丧失商品价值。

黄瓜白粉病病菌有2种，包括单囊壳白粉菌{Podosphaera xanthii［Sphaerotheca fuliginea（Schlecht）poll］}和二孢白粉菌［Golorinomyces cichoracearum （Erysiphe cichoracearum D C）］，我国黄瓜上多以单囊壳白粉菌Podosphaera xanthii为主［6］。

总DNA提取1 溶菌酶+蛋白酶K法：取500uL经预处理的菌悬液于1．5 mL无菌离心管中，加20mg／mL溶菌酶25uL，37℃温浴，45 min；再加入50uL，10％SDS和15uL l0 mg／mL蛋白酶K，55℃水浴1 h并适时摇动混匀；之后，再依次用等体积酚、苯酚：氯仿：异戊醇(25：24：1)混合液、氯仿进行抽提，收集上清；再加入l／l0体积的3 mol／L醋酸钠及2倍体积的预冷无水乙醇，混匀后予一20℃静置30 min以上；离心弃上清，沉淀用75％乙醇洗涤、干燥；最后溶于l00uL无菌双蒸水中，并加入终浓度为20 mg／mL的RNA酶A，37℃放置30 min，然后于一20℃保存，备用。

2改进CTAB法：取500uL经预处理的菌悬液于1．5 mL无菌离心管中，加入20 mg／mL 溶菌酶l2uL和1uL RNase(1 mg／mL)，冰浴1 h，并间隔l0 min混匀1次；取出置于一20℃下静置20min后，放人68℃中水浴10 min，加入10％SDS 53uL，继续于68℃下水浴l5 min；接着加入5 mol／LNaCl 87 uL，CTAB／NaCl(1％CTAB，0．73 mol／LNaCl)69uL再于68℃下水浴l5 min；取出后，于一20℃下静置30 min；之后，用等体积的氯仿／异戊醇(24：1)进行抽提取上清，重复该步骤l次；然后加入1／l0体积的3 mol／L醋酸钠及2倍体积的预冷的无水乙醇，并于一20℃静置30min，然后离心弃上清；沉淀用70％乙醇进行洗涤，干燥后，沉淀溶于100uL无菌双蒸水中并加入RNase使其终浓度为20ug／mL，于37℃消化30 min，最后于-20℃保存，备用。

3试剂盒法：称取200 m9粪便样品用于DNA提取，具体步骤见QIAamp DNA Stool Mini Kit 试剂盒说明书。

所得DNA溶于l00uL无菌双蒸水中，于-20℃保存。

CTAB法提取细菌TotalDNA原理CTAB法提取细菌Total DNA原理CTAB法原理CTAB(hexadecyltrimethylammonium bromide,十六烷基三甲基溴化铵)，是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性，阳离子表面活性剂，呈白色或浅黄色结晶体至粉末状。

易溶于异丙醇，可溶于水，熔于热水、乙醇、三氯甲烷，微溶于丙酮，不溶于醚和苯。

在高离子强度的溶液中(>0.7mol/L NaCl)，CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物，只是不能沉淀核酸。

通过有机溶剂抽提，去除蛋白，多糖，酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。

CTAB提取缓冲液的经典配方Tris-HCl (pH8.0)提供一个缓冲环境，防止核酸被破坏；EDTA螯合Mg2+或Mn2+离子，抑制DNase活性；NaCl提供一个高盐环境，使DNP充分溶解，在于液相中CTAB溶解细胞膜，并结合核酸，使核酸便于分离；β-巯基乙醇是抗氧化剂，有效地防止酚氧化成醌，避免褐变，使酚容易去除PVP(聚乙烯吡咯烷酮)是酚的络合物，能与多酚形成一种不溶的络合物质，有效去除多酚，减少DNA中酚的污染；同时它也能和多糖结合，有效去除多糖。

用酚抽提细胞DNA时，有什么作用？使蛋白质变性，同时抑制了DNase的降解作用。

用苯酚处理匀浆液时,由于蛋白与DNA联结键已断,蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。

蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。

使用酚的优点：1.有效变性蛋白质；2抑制了DNase的降解作用。

缺点：1.能溶解10-15%的水，从而溶解一部分poly(A)RNA。

2.不能完全抑制RNase的活性。

氯仿的作用？氯仿：克服酚的缺点；加速有机相与液相分层。

最后用氯仿抽提：去除核酸溶液中的迹量酚。

（酚易溶于氯仿中）用酚-氯仿抽提细胞基因组DNA时，通常要在酚-氯仿中加少许异戊醇，为什么？异戊醇：减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡。