峨眉黄连及近缘种DNA提取与RAPD反应的优化

乌药等4种中药饮片基因组DNA提取方法的改进
郭纯;鲁耀邦;聂媛媛;唐金凤
【期刊名称】《中南药学》
【年(卷),期】2009(7)11
【摘要】目的从乌药、云木香、枳壳、槟榔中药饮片中提取可用于RAPD扩增的高质量基因组DNA。

方法采用改良CTAB法粗提基因组DNA,部分基因组DNA 再进一步用试剂盒纯化,采用琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度法及RAPD扩增效果进行检测并比较。

结果饮片基因组DNA纯化后,以随机引物S28进行PCR扩增获得谱带更丰富、条带更清晰的RAPD条带。

结论本文所建立的DNA提取方法可适合多数中药饮片基因组DNA的提取,并可进一步用于RAPD分析。

【总页数】4页(P803-806)
【关键词】乌药;云木香;枳壳;槟榔;DNA提取
【作者】郭纯;鲁耀邦;聂媛媛;唐金凤
【作者单位】湖南中医药大学药学院
【正文语种】中文
【中图分类】R284
【相关文献】
1.豆象干标本基因组DNA提取方法的改进 [J], 李金庆;鲁闽;粟智平;段效辉;王颖;孙超;卢经
2.农业院校分子生物学实验方法的改进和探索——以"植物基因组DNA提取实验"
为例 [J], 蔡春梅;李帅
3.玉米干种子基因组DNA提取方法的改进 [J], 董永军;庞冰;张婷婷;王陆军;郝建平;王艳梅;李培良;王创云;邓艳芳;周琼;李志敏
4.从固定液保存的刺参样品中提取基因组 DNA 的改进方法 [J], 王祖哲;王利;顾晨雷;马普;王秀利
5.早食李基因组DNA提取方法的改进 [J], 谢志亮;何业华
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药用百合DNA提取和RAPD条件的优化童巧珍;盛孝邦;刘湘丹;周日宝;吴佳【期刊名称】《湖南中医药大学学报》【年(卷),期】2008(28)2【摘要】目的确定药用百合最佳随机扩增多态DNA(RAPD)分析方法 .方法以药用百合新鲜鳞叶为材料,研究DNA的提取方法 ,并对影响RAPD反应的各因素进行优化.结果药用百合RAPD反应体系及程序为:在40 μL反应体系中,含40 ng模板DNA,0.3 μmol/L随机引物,0.2 mmol/L dNTPs,1.7 mmol/L Mg2+,3 μL10×PCRBuffer,1.5 U Taq酶;扩增程序为:第一步94℃预变性2 min,第二步94℃变性1 min,第三步36℃退火45s,第四步72℃延伸90s.返回至第二步重复40个循环,第六步72℃延伸10 min,最后4℃保存以备电泳.结论建立了药用百合RAPD 的优化反应体系及程序.【总页数】4页(P33-36)【作者】童巧珍;盛孝邦;刘湘丹;周日宝;吴佳【作者单位】湖南农业大学,湖南,长沙,410128;湖南中医药大学,湖南,长沙,410007;湖南农业大学,湖南,长沙,410128;湖南中医药大学,湖南,长沙,410007;湖南中医药大学,湖南,长沙,410007;湖南中医药大学,湖南,长沙,410007【正文语种】中文【中图分类】R284.2【相关文献】1.兰州百合DNA提取方法比较及RAPD体系的快速优化 [J], 崔文娟;林玉红;欧巧明;石有太;罗俊杰2.广东野百合DNA提取和RAPD条件的优化 [J], 黄永芳;杨懋勋;柳军;周锦平3.兰州百合DNA提取方法比较及RAPD体系的快速优化 [J], 崔文娟;林玉红;欧巧明;石有太;罗俊杰4.濒危药用植物降香黄檀DNA提取及RAPD反应体系优化 [J], 杨新全;冯锦东;杨成民;魏建和;李榕涛;何明军5.亚洲百合DNA的提取及RAPD-PCR反应体系的优化 [J], 赵琛因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

究,以阐明防治肝纤维化的现代作用机理中药复方抗肝纤维化的现代药理学研究包括药效学和药动力学,其中药效学研究开展的较早相对容易,但多数研究局限于药物效应方面,真正涉及到作用机制方面的研究还不广泛和深入。

而药动学的研究尚处在起步阶段,更深层次的研究较为少见,故中药复方药效学和药代动力学的研究应是今后重点研究方向之一。

由于中药复方对器官或组织的选择性不明显,药物活性不强烈,药效作用温和,往往长期服用才显现药效,所以应用中药复方进行抗肝纤维化的防治研究时应注意时效和量效关系的研究,但由于复方药物成分复杂,各药配合后药性、药效的变异,给复方抗肝纤维化的药动学研究增加了很多困难,所以目前从时效和量效关系方面着手的抗肝纤维化复方研究并不很多。

杜以兰等[3]提出采用由量—效关系和时—效关系求效量半衰期的方法研究其药动学。

还有人提出证治药动学伪说,根据证候与治疗的关系探讨方剂的效应,并相继提出“效应成分动力学”“中药复方活性成分群”等概念,代表了复方药理学研究的新思路。

中药复方抗肝纤维化的药效学和药动学研究是研究中药的药理效应及引起这种效应的有效成份在体内吸收、分布、代谢和排泄等量变规律的科学,可为临床抗肝纤维化时合理用药,优选用药方案及精选复方中的药味提供重要的理论依据,所以应是中药复方抗肝纤维化现代研究中新的研究思路和研究方向。

综上所述,若能立足于中药复方抗肝纤维化多靶点、多环节、多层次的整体优势,把握肝纤维化复杂的病理变化,建立起方证相符的病理学模型,有效开展中药复方的药理学研究,以中医理论为指导,筛选出疗效确定、临床与实验结果一致、经得起重复的复方制剂,那么,相信中药复方抗肝纤维化的防治研究和临床疗效将会跨上一个新的台阶。

参考文献:[1]王宝恩.中药复方861冲剂治疗肝纤维化远期疗效的观察[J ].中西医结合肝病杂志,1993,1(2):69.[2]董筠.乙肝抗纤方治疗慢性乙型肝炎肝纤维化的临床与实验研究[J ].南京中医药大学学报,1998,14(6):335-338.[3]李成韶,杜以兰.以药效为指标进行中药药动学研究的思路和体会[J ].中药药理与临床,1998,4(1).(收稿日期:2004-03-16)DNA 分子诊断技术在中药鉴定中应用刘雯霞1　雷国莲2(1.陕西中医学院研究生,陕西咸阳712046;2.陕西中医学院药学系生药教研室,陕西咸阳712083)摘　要:综述DNA 分子诊断技术在中药鉴定中的应用研究,重点论述分子诊断技术的分类及常用RAPD 技术,AFL P 技术及基因片段序列研究状况。

何首乌基因组DNA提取及RAPD反应体系正交设计优化(作者：_________ 单位： ____________ 邮编： __________ )【摘要】目的确定适合何首乌RAPD-PC的基因组DNA 提取方法及最适宜反应体系。

方法通过改良的CTAB法提取何首乌基因组DNA研究其用于RAPD-PCR勺可行性。

利用正交设计方法L16 (45)，针对Tag酶，引物，dNTP镁离子，模板设计了5因素4水平的正交实验，优化RAPD-PC反应体系。

结果正交设计结果表明，可以得到几种不同的有效扩增反应体系组合。

根据实际需求，最适宜的RAPD-PC 反应体系为20 卩I，其中1X PCR buffer, Tag 酶1U，弓I 物 1 卩mol/L，镁离子2 mmol/L，dNTP 300 卩mol/L，模板40 ng。

结论改良的CTAB法和正交优化得到的反应体系适合用于何首乌RAPD 遗传多样性分析。

【关键词】何首乌；DNA提取；RAPD正交设计何首乌是我国传统医药中的名贵药材，何首乌块根及茎叶均可入药。

何首乌具有补肝肾、益精血、乌须黑发、养心安神等功效，主治血虚身痛、心烦失眠、劳伤多汗等症。

同时可用于保健和食品等多方面，何首乌块根富含淀粉，含量高达45.2%,药食两用。

RAPD(Random Amplified Polymorphic DNA)技术是由美国学者Williams : 1］和Welsh :2］两个研究团队在1990年几乎同时发展起来的。

Williams等在发现RAPD多态性的同时还证明了RAPD标记的分离情况符合孟德尔遗传规律，因而明确了RAPD乍为分子标记用于研究生物遗传变异的理论基础。

RAPD分子标记建立在PCR基础之上。

通过使用一系列具有10个碱基的单链随机引物，对基因组的全部DNA进行PCR扩增以检测多态性。

RAPD^术因其操作简便、反应迅速、成本低和DNA用量少等优点而被广泛应用于药用植物种内或种间亲缘关系和遗传多样性方面的研究。

菜心基因组DNA提取及RAPD反应体系的优化王丽;乔爱民;孙一铭;孙敏【期刊名称】《西南师范大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2006(031)002【摘要】用改良的CTAB法提取菜心基因组DNA,并利用紫外分光光度法测定其纯度和含量,用琼脂糖凝胶电泳法检测DNA的降解状况和纯度.结果表明:此法提取的DNA具有典型的天然DNA分子的标准紫外吸收光谱特点,且适于进行RAPD 分析.RAPD分析的优化反应体系为:25μL的反应液中含有0.8 U的Taq酶,0.28 μmol/Lprimer,30 ng的DNA,2.0 mmol/L Mg2+,0.20 mmol/L dNTPs.PCR扩增循环为94℃、5 min;94℃、1 min;36℃、1 min; 72℃、2 min,37个循环;72℃延伸10 min.【总页数】5页(P124-128)【作者】王丽;乔爱民;孙一铭;孙敏【作者单位】西南大学,生命科学学院,重庆,400715;仲恺农业技术学院,园艺系,广州,510225;仲恺农业技术学院,园艺系,广州,510225;西南大学,生命科学学院,重庆,400715;西南大学,生命科学学院,重庆,400715【正文语种】中文【中图分类】Q946【相关文献】1.巢蕨基因组DNA提取与RAPD反应体系优化 [J], 王雪兵;于旭东;朱会军;吴繁花;黄小凤;胡新文2.烟草靶斑病菌基因组DNA提取及RAPD反应体系的优化 [J], 伏颖;吴元华;穆凌霄;赵秀香3.蜡梅花瓣基因组DNA提取及RAPD-PCR反应体系优化 [J], 叶丽娟;禄久幸;杨秋生4.橡胶草基因组DNA提取及RAPD反应体系的优化 [J], 李若霖;崔百明;王颖;张秀春;陈雄庭;吴坤鑫5.何首乌基因组DNA提取及RAPD反应体系正交设计优化 [J], 胡裕清;赵树进因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

中药材DNA分子标记研究的技术问题Ⅱ.RAPD实验技术和
方法学论述
郭宝林;戴波
【期刊名称】《中草药》
【年(卷),期】2002(33)2
【摘要】主要根据作者的经验 ,对 RAPD实验技术中的扩增仪及扩增程度、DNA 模板浓度及纯度、引物的种类与浓度、Taq酶、缓冲系统、Mg2 +、d NTP的浓度、设立空白对照、扩增产物鉴定、条带统计和同源性认定、RAPD反应程序标准化等问题进行了论述 ,其中降解了的 DNA模板在不同的浓度时会产生不同的扩增式样 ,国产 Taq酶的不同批次间会产生较大的扩增差异为首次报道 ,并提供了获得清晰条带的电泳策略。

概述了 RAPD的主要特点和适用范围。

【总页数】3页(P178-180)
【关键词】RAPD技术;DNA模板;Taq酶;中药;分子标记
【作者】郭宝林;戴波
【作者单位】北京中医药大学中药鉴定室;云南大学
【正文语种】中文
【中图分类】R282.5
【相关文献】
1.中药材DNA分子标记技术的研究进展 [J], 邱永辉;薛兆坤
2.一种新的分子标记技术—DNA随机扩增多态性（RAPD）技术 [J], 蔡其华
3.花粉抗脑衰老大鼠基因组DNA RAPD分子标记的实验研究 [J], 李兴安;蒋滢;王尉平
4.中药材DNA分子标记研究的技术问题Ⅰ.植物药基因组DNA的提取 [J], 郭宝林;李家实;阎玉凝
5.基于RAPD分子标记技术的中药材鉴定研究进展 [J], 任爱农;秦民坚
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中国苏铁科（Cycadaceae）部分种类的RAPD分析及其亲缘关系的研究苏铁科植物（Cycadaceae）是现存最古老的一类种子植物,具有重要的学术价值与经济价值。

本研究建立了苏铁科植物RAPD的反应体系,进而用于探讨苏铁科苏铁属21个不同种类的亲缘关系。

研究结果表明: 1.用改良的CTAB法能够提取浓度与纯度都较高的苏铁科植物基因组DNA,且经RAPD扩增后能取得比较理想的扩增效果。

2.优化了RAPD反应体系,确定了适合于苏铁RAPD-PCR的反应体系:20ül反应体系,其中含超纯水9.04 ül,10×TaqBuffer2.0ül,25mmol/LMg²⁺1.6ül,2.5mmol/L dNTP 1.6ül,10ümol/L随机引物0.6 ül,5U/ül Taq DNA聚合酶0.2ül,10ng/ül模板DNA 5ül。

确定了适合的PCR扩增程序为:94℃预变性5min;94℃变性30sec,37℃退火40sec,72℃延伸110sec,共35个循环;72℃延伸7min。

反应产物4℃保存。

3.RAPD分析结果表明:各种间的遗传相似系数在0.2903-0.7016之间,各种间的遗传相似系数跨越的幅度较大,表明苏铁科苏铁属内种间的遗传背景十分复杂。

所有供试种类中,多裂苏铁（C.multifida）与叉孢苏铁（C.segmentifida）的遗传相似系数最大,为0.7016,表明它们之间的亲缘关系最近。

隆林苏铁（C.longlinensis）与多羽叉叶苏铁（C.multifromlis）的遗传相似系数最小,为0.2903,表明它们之间的亲缘关系最远。

所有供试材料中,滇南苏铁（C.diannanensis）不同性别的雌雄类群之间的相似系数最大,为0.9098,聚类时最先聚在在一起。

西北农业学报　2001,10(3):32～34A cta A g riculturae Bor eali-occident alis Sinica用于RAPD分析的油菜总DNA的快速提取王灏,王道杰,谭小力,胡选萍,李殿荣(陕西省杂交油菜研究中心,陕西大荔　715105)摘　要:通过CT A B法、纯化法和简便法所提DN A质量效率和PCR-RA P D扩增效果的比较,优化和建立了无液氮处理,可用于RA PD分析的油菜总DN A的提取方法。

该方法能在油菜生长发育早期进行单株微量的提取,快速进行RA PD分析和品种鉴定。

关键词:油菜DN A;快速提取;RA PD分析中图分类号:S634.3文献标识码:A 文章编号:1004-1389(2001)03-0032-03A Simple and Rapid Method for the Preparation of PlantGenomic DNA by RAPD AnalysisWang Hao,Wang Dao-jie,T an Xiao-li,Hu Xuan-ping,Li Dian-rong(Hybrid Rapeseed Research Center of S haanxi Provin ce,Dali S haanxi　715105)Abstract:Based on experim ents and comparison of quality and RAPD results of g enom ic DNA w ith differ-ent ex traction method,including CTAB method,purification method and simple method,w as established a sim ple,rapid and low cost method on DNA ex traction from rapeseed leaves and shoots.It was especially suitable to DNA trace ex traction from rapeseed single shoot or young plant.With this method,materials need not to be treated w ith liquid nitrogen.Key words:Rapeseed DNA;Ripd ex traction;RAPD analysis DNA的快速提取是分子标记技术实用化的基础。

峨眉山车前草、水辣蓼及天名精RAPD遗传多样性分析熊莉丽;王万军;谭睿;李迪强;茆灿泉【期刊名称】《现代农业科学》【年(卷),期】2009(000)006【摘要】采用RAPD分子标记技术对峨眉山保护区不同海拔高度的车前草、水辣蓼、天名精野生资源进行遗传多样性分析。

从24条随机引物中分别筛选得到5条（车前草）、3条（水辣蓼）、5条（天名精）能够产生可重复DNA片段的随机引物，PCR扩增片段的多态率分别为45％、63．9％、71％；通过遗传距离的计算和聚类分析，结果表明峨眉山不同海拔高度的车前草、水辣蓼、天名精在遗传距离上存在着一定的差异，遗传距离最大的是不同海拔之间的天名精，其次是水辣蓼，最小的是车前草。

笔者对峨眉山车前草等3种药用植物的鉴定和资源保护、利用具有一定的指导意义。

【总页数】3页(P31-33)【作者】熊莉丽;王万军;谭睿;李迪强;茆灿泉【作者单位】西南交通大学生物工程学院,四川成都610031;中国林业科学院森林生态环境与保护研究所,北京100091【正文语种】中文【中图分类】Q311.3【相关文献】1.基于RAPD标记的新疆荒漠稻区稻水象甲遗传多样性分析 [J], 王小武;付开;丁新华;吐尔逊·阿合买提;何江;郭文超2.世界双遗产四川峨眉山民族医药代表植物RAPD指纹分析 [J], 熊莉丽;王万军;郭志云;李迪强;茆灿泉3.大麦条纹病原菌的RAPD遗传多样性分析及大麦亲本抗性评价 [J], 侯静静; 马小乐; 王化俊; 何智宏; 司二静; 姚立蓉; 汪军成; 马占军; 李葆春; 杨轲; 孟亚雄4.花生RAPD反应体系的优化及其遗传多样性分析 [J], 徐彪;冯艺川;李玉发;何中国;吴松权5.贵州3种车前草的随机扩增多态性DNA(RAPD)亲缘关系分析 [J], 谭萍;李煜;赵饮虹因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

作者单位㊀1长治医学院药学系(046000)㊀2中国科学院成都生物研究所㊀3山东宏济堂制药集团有限公司基金项目㊀国家自然科学基金(21202161);中国博士后科学基金(2013T60863)∗通信作者(E -mail :q in g .l.s@ )峨眉产黄连水分灰分和浸出物的含量测定刘㊀芳1㊀雷静雯1㊀青琳森2∗㊀武㊀勇3摘㊀要㊀目的:测定峨眉产黄连药材的水分㊁灰分和浸出物,为建立峨眉产黄连药材质量标准提供依据㊂方法:按‘中国药典“(2010版一部)对黄连中的水分㊁灰分及浸出物进行测定,并对浸出物的提取条件进行优化㊂结果:测得黄连药材水分11.68%~19.04%,总灰分2.51%~3.79%,酸不溶性灰分0.34%~1.48%,醇溶性浸出物量24.82%~36.14%㊂结论:峨眉产黄连药材水分不超过14%,总灰分不高于5%,酸不溶性灰分不高于1%,醇溶性浸出物量不低于15%㊂关键词㊀黄连;水分测定;灰分测定;浸出物测定中图分类号㊀R284.1㊀㊀文献标志码㊀A㊀㊀文献编号1006-(2015)02-089-03Determination of moisture ,ashes and extracts from Co p tidis Rhizoma from E mei count yLiu Fan g ,Lei Jin g wen ,Qin g Linsen ,et alDe p artment f acult y o f p harmac y ,Chan g zhi Medical Colle g eAbstract ㊀Ob j ective :To determine the moisture ,ashes ,and extracts from the Co p tidis Rhizoma for establishin g ofq ualit y standards.Methods :Accordin g to the p rocedures recorded in Chinese Pharmaco p oeia ,p ublished in 2010,moisture ,ashes and extracts of sam p les were measured res p ectivel y .And the extraction conditions of extract was o p timized.Results :The moisture in E mei Co p tidis Rhizoma was 11.68%~19.04%,the total ashes content was 2.51%~3.79%,the acidinsoluble ash content was 0.34%~1.48%,and the content of ethanol extract was 24.82%~36.14%.Conclusion :The moisture in E mei Co p tidis Rhizoma was less than 14%,the total ashes content was less than 5%,with the acid insoluble ashcontent was less than 1%,the content of ethanol extract was not less than 15%.Ke y words ㊀Co p tidis Rhizoma ;moisture determination ;ashes determination ;extract determination㊀㊀黄连来源于毛茛科植物黄连Co p tis chinensis Franch 的干燥根茎,习称 味连 ,是最常用中药材之一㊂始载于‘神农本草经“,被列为上品,具有清热燥湿㊁泻火解毒之功效[1]㊂峨眉黄连名扬天下,峨眉地区是黄连的道地产区之一,栽培历史悠久,在‘名医别录“㊁‘新修本草“㊁‘本草纲目“等本草中均有记载[2],产量亦居全国前列㊂本课题组在长期对黄连化学成分和生物活性研究的基础上,建立了峨眉产黄连数字化指纹图谱及其7种主要生物碱的多指标定量方法,为黄连的质量控制提供了有效方法[3]㊂‘中国药典“对黄连的水分㊁总灰分和浸出物的限度做出了相关规定,但未对能够较准确表明药材中是否掺杂泥沙及其含量的酸不溶性灰分做出规定㊂本实验对峨眉产黄连药材的水分㊁总灰分㊁酸不溶性灰分和浸出物含量等常规检测项目进行测定,并对酸不溶性灰分做出限度规定,全面对峨眉产黄连进行评价,为建立黄连药材的质量标准提供实验数据㊂1㊀仪器㊁试药与材料Sartorius BP211D 电子天平,箱型电阻炉(长沙实验电炉厂),恒温鼓风干燥箱(上海琅玕实验设备有限公司);盐酸㊁乙醇为分析纯,水为蒸馏水;黄连药材样品来源于四川峨眉地区GAP 生产示范基地,为移栽后4年生药材,在产地采收加工,经作者鉴定为黄连Co p tis chinensis Franch ㊂2㊀方法与结果2.1㊀水分测定取10批次峨眉产黄连药材粉末(过2号筛)约1.0g ,精密称定,依照‘中国药典“(2010版一部)附录IX H 项下水分测定第一法[4]进行,测定结果见表1㊂98第29卷㊀第2期2015年㊀㊀4月㊀㊀长治医学院学报㊀㊀㊀㊀㊀JOURNAL㊀OF㊀CHANGZHI㊀MEDICAL㊀COLLEGE ㊀㊀㊀Vol.29㊀No.2㊀㊀A p r.㊀20152.2㊀灰分测定2.2.1㊀总灰分测定:取10批次峨眉产黄连药材粉末(过2号筛)约4.0g ,精密称定,依照‘中国药典“(2010版一部)附录IX K 项下总灰分测定法[4]进行,测定结果见表1㊂2.2.2㊀酸不溶性灰分测定:取 2.2.1 项下所得灰分,依照‘中国药典“(2010版一部)附录IX K 项下酸不溶性灰分测定法[4]进行,测定结果见表1㊂表1㊀黄连药材常规理化项目测定结果㊀(%,n =3)序号产地水分总灰分酸不溶性灰分醇溶性浸出物1龙池镇高万村13.77 2.690.4235.192龙池镇陶渊村14.66 3.080.6930.413龙池镇金川村12.88 2.690.5027.794龙池镇富友村11.68 2.550.3424.825沙溪乡林坝村13.86 2.740.5431.836高庙镇黄茅村12.35 2.510.3726.797高桥镇张沟村12.69 3.59 1.2630.418龙门乡杨林村14.08 2.680.7226.429川主乡荷叶村16.193.791.4827.6110大为镇中山村19.042.940.7736.142.3㊀醇溶性浸出物测定2.3.1㊀提取方法的选择:取4#黄连药材粉末(过2号筛)约4.0g ,精密称定,用60%乙醇作溶剂,依照‘中国药典“(2010版一部)附录X A 醇溶性浸出物测定法项下进行冷浸法㊁热浸法测定[4]㊂测定结果表明,采用热浸法所得醇溶性浸出物含量24.82%,高于冷浸法,所得醇溶性浸出物含量22.32%,故选用热浸法㊂2.3.2㊀乙醇浓度的选择:取4#黄连药材粉末(过2号筛)约4.0g ,精密称定,用不同浓度乙醇作溶剂,依照‘中国药典“(2010版一部)附录X A 醇溶性浸出物测定法项下热浸法进行测定㊂测定结果见表2㊂表2㊀不同浓度乙醇黄连浸出物测定结果㊀(n =3)醇浓度(%)水2040608095浸出物含量(%)20.1522.5924.1124.8222.2618.49结果表明,采用60%乙醇所得醇溶性浸出物含量24.82%最高,故选用60%乙醇为提取溶剂㊂2.3.3㊀样品测定:取10批次峨眉产黄连药材粉末(过2号筛)约4.0g ,精密称定,用60%乙醇作溶剂,依照中国药典(2000版一部)附录X A 醇溶性浸出物测定法项下热浸法进行测定[4],测定结果见表1㊂3㊀讨论进行水分测定是为了保证药材不因含水分超过限度而发霉变质;总灰分含量高表明掺有泥土㊁矿石等无机物质,但总灰分不足以说明外来无机物的存在,故测定酸不溶性灰分能较准确的表明药材中是否掺杂泥沙及其含量[5]㊂因此,水分㊁总灰分和酸不溶性灰分直接影响药材有效成分含量,从而影响临床疗效,故三者是药材质量标准的重要组成部分㊂‘中国药典“规定,黄连药材适宜含水量应不得高于14%,总灰分不得超过5%,未对酸不溶性灰分作出规定㊂测得峨眉产黄连10批次药材中酸不溶性灰分在0.34%~1.48%之间,平均0.71,按照上下20%的限度,综合考虑,建议酸不溶性灰分限度不得超过1%㊂在峨眉产黄连质量标准中增加酸不溶性灰分不得超过1%㊂经测定,2#,8#,9#,10#药材含水量高于14%,10#样品竟高达19.04%;10批次样品总灰分均低于5%,但7#与9#样品的酸不溶性灰分达到了1.26%和1.48%,高于1%的限度㊂可见,黄连药材的洁净度有待进一步提高,特别是水分监测要大力加强,否则药材易发霉变质,造成巨大损失㊂黄连的主要化学成分为季胺型生物碱,易溶于水和乙醇,因此对提取溶剂进行了考察,最终选择浸出物含量高的60%乙醇热浸法作为浸出物测定方法㊂‘中国药典“规定黄连药材的醇溶性浸出物不得低于15%,10批次样品均远远高于此限度,最高达到36.14%说明峨眉产黄连质量上乘㊂中药材是复方制剂的原料,其自身质量的稳定性是制剂质量稳定性的基础,如果单纯以有效成分或指标成分含量为评价指标,则是不全面的,中药材质量的稳定性应为多种因素的平衡配置㊂为此,本文将黄连药材的水分㊁总灰分㊁酸不溶性灰分以及醇溶性浸出物设定为质量评价因子,综合反映峨眉产黄连药材各理化评价指数,为制定峨眉产黄连质量标准提供科学依据㊂参考文献[1]㊀国家药典委员会.中国药典[S ].北京:中国医药科技出版社,2010:285.[2]㊀肖培根主编.新编中药志[M ].北京:化学工业出版社,2002:894.09长治医学院学报作者单位㊀1长治医学院2011级教改班(046000)㊀2长治医学院病理生理学教研室基金项目㊀山西省2013年国家级大学生创新创业训练资助项目(2013083)∗通信作者(E -mail :y zlu1957@163.com )一氧化氮在白藜芦醇减轻大鼠肝缺血再灌注损伤中的作用郭雅玲1㊀郭红梅1㊀张㊀瑜1㊀崔乐乐1㊀任广宗1㊀宋㊀娟2㊀卢彦珍2∗摘㊀要㊀目的:观察NO 在白藜芦醇减轻大鼠肝缺血再灌注损伤中的作用并探讨其机制㊂方法:30只健康雄性SD 大鼠随机分为3组:假手术组(SC 组)㊁缺血再灌注组(I /R 组)和白藜芦醇后处理组(Res 组)㊂测定各组大鼠再灌注后2h 血清谷丙转氨酶(ALT )㊁谷草转氨酶(AST )㊁碱性磷酸酶(AKP )㊁透明质酸酶(HA )及一氧化氮(NO )含量,及再灌注后2h 肝组织NO ㊁总一氧化氮合酶(T -NOS )及诱导型NOS (iNOS )的水平,光镜观察各组肝细胞的显微结构变化㊂结果:与SC 组相比,I /R 组血清ALT ㊁AST ㊁AKP 和HA 活性明显增高而NO 水平降低,病理学检查可见肝细胞肿胀,肝窦变窄,嗜中性粒细胞浸润和片状坏死㊂Res 组再灌注后血清ALT ㊁AST ㊁AKP 和HA 值明显下降,肝脏病理损伤改善,同时NO 和T -NOS 水平升高而iNOS 水平降低㊂结论:Res 可以通过提高I /R 大鼠体内NO 和eNOS ,降低iNOS 水平,改善肝脏微循环障碍对肝脏起保护作用㊂关键词㊀白藜芦醇;缺血再灌注损伤;NO ;肝脏中图分类号㊀R363㊀㊀文献标志码㊀A㊀㊀文献编号1006-(2015)02-091-04Role of Nitric Oxide in Protective Effects of Post -conditionin g with Resveratrol A g ainst He p atic Ischemia -re p erfusion In j ur y in RatsGuo Yalin g ,Guo Hon g mei ,Zhan g Yu ,et alDe p artment o f re f orm o f education and teachin g class o f 2011y earAbstract ㊀Ob j ective :T o investi g ate the role and mechanism of nitric oxide (NO )in p rotective effects of p ost -conditionin g with resveratrol a g ainst he p atic ischemia /re p erfusion in j ur y in rats.Methods :30health y male S p ra g ue -Dawle y (SD )rats were randoml y divided into 3g rou p s :sham control (SC )g rou p ,ischemic /re p erfusion (I /R )g rou p ,and p ost -dis p osal treatment of resveratrol g rou p (Res ).The activit y of alanine aminotransferase (ALT ),as p artate aminotransferase (AST ),alkaline p hos p hatase (AKP ),the content h y aluronic acid (HA )and NO in serum were detected b y 2h re p erfusion ;The content of nitric oxide (NO ),and the activit y of total nitric oxide s y nthase (T -NOS ),inducible nitric oxide s y nthase (iNOS )in he p atic tissues was measured ;the chan g e of microstructure of he p atic cell was detected b y HE stainin g .Results :As com p ared with Sham Grou p ,the activit y of ALT ,AST ,AKP ,iNOS and the content of HA were si g nificantl y increasedin I /R Grou p .but the content of NO was decreased ;Patholo g ical examination showed swellin g of liver cells ,he p atic sinus narrow ,neutro p hil infiltration and p atch y necrosis.The activit y of ALT ,AST ,AKP ,iNOS and the content of HA were si g nificantl y decreased in Res Grou p after re p erfusion ;the amount of NO ,T -NOS were hi g her in Res Grou p ,however ,the amount of was attenuated ;The he p atic structure was im p roved at the same time.Conclusion :Our results show that resveratrol exerts a p otent p rotective effect on earl y -sta g e he p atic ischemia re p erfusion in j ur y in rats b y increasin g the content of NO derived from eNOS and reducin g he p atic microcirculation disturbance.Ke y words ㊀resveratrol ;ischemia -re p erfusion in j ur y ;nitric oxide ;liver ㊀㊀肝脏缺血再灌注损伤(H e p atic ischemia -re p erfusion in j ur y ,HIRI )是指各种原因导致的肝脏血流中断或不足使肝脏缺血,当恢复血供再灌注后,不仅不能使肝脏功能恢复,反而加重了肝细胞的功能障碍和结构破坏的病理生理过程,见于许多[3]㊀刘芳,张浩,青琳森.黄连HPLC 数字化指纹图谱研究及7种生物碱含量测定[J ].中国中药杂志,2013,38(21):3713-3719.[4]㊀国家药典委员会.中国药典[S ].北京:中国医药科技出版社,2010:附录53.[5]㊀李新中,姬生国主编.生药学[M ].北京:科学出版社,2010:54.(收稿日期:2015-01-07;修回日期:2015-02-06)19第29卷㊀第2期2015年㊀㊀4月㊀㊀长治医学院学报㊀㊀㊀㊀㊀JOURNAL㊀OF㊀CHANGZHI㊀MEDICAL㊀COLLEGE ㊀㊀㊀Vol.29㊀No.2㊀㊀A p r.㊀2015峨眉产黄连水分灰分和浸出物的含量测定作者：刘芳， 雷静雯， 青琳森， 武勇作者单位：刘芳,雷静雯(长治医学院药学系 046000)， 青琳森(中国科学院成都生物研究所)， 武勇(山东宏济堂制药集团有限公司)刊名：长治医学院学报英文刊名：Journal of Changzhi Medical College年，卷(期)：2015(2)引用本文格式：刘芳.雷静雯.青琳森.武勇峨眉产黄连水分灰分和浸出物的含量测定[期刊论文]-长治医学院学报 2015(2)。