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本发明提供一种核酸吸附性多孔膜以及一种使用该膜的装置, 该膜具有优异的分离能力、良好的洗涤效率,可以使操作过程方便快捷,并具有自动操作适应性和尺寸减小适应性,可以批量生产分离能力基本上相同的这种膜,并且该膜适用于分离和纯化核酸的方法;用于分离和纯化核酸的核酸吸附性多孔膜具有核酸吸附性固相,该核酸吸附性固相用在分离和纯化核酸的方法中,该固相吸附核酸,该方法包括以下步骤:(1)通过使含有核酸的样品溶液与核酸吸附性固相接触,使得所述核酸吸附到所述固相上;(2)通过使洗涤液与所述固相接触来洗涤该固相,在此期间所述核酸仍吸附在所述固相上;以及(3)通过使回收液与所述固相接触,使得所述核酸从所述固相解吸附。
本发明公开了一种从包含核酸的病毒或细胞的样品中分离纯化核酸的方法及专用磁性分离器。
本发明的方法包括(1)按已有技术加入裂解液裂解释放核酸;(2)核酸分子在磁性分离器上进行磁性分离;(3)加入无机洗涤液和有机疏水物洗涤纯化1-3次。
本发明只需要加入简单的两种溶液,采用一个磁性分离器就可以完成对核酸的分离和纯化,简化了设备,操作过程简单快速、使用试剂少。
使核酸分子的分离数量增加,能够通过一个流程同时有效地分离和纯化双链DNA、单链DNA和RNA分子,所获得的核酸纯度更高。
草鱼和鲤鱼线粒体 DNA 的分离纯化及其 COI 基因的分子克隆
吴乃虎王钢锋阎景智郭玲严绍颐秦鹏春
【摘要】:本文报道配合使用差速离心和DNaseI核酸酶处理等步骤,从草鱼和鲤鱼新鲜肝组织分离线粒体DNA(mtDNA)的实验方法。
这种方法经济简便,纯化的mtDNA产率多,纯度高,经限制性内切酶消化后进行琼脂糖凝胶电泳分离,可以得到清晰的DNA片段谱带,并可直接用于构建酶切图谱和线粒体基因的分子克隆。
用这样的mtDNA,我们已克隆了草鱼和鲤鱼的细胞色素氧化酶亚基I基因(COI基因)。
【作者单位】:中国科学院发育生物学研究所中国科学院发育生物学研究所中国科学院发育生物学研究所中国科学院发育生物学研究所中国科学院发育生物学研究所东北农学院生物工程系
【关键词】:线粒体DNA限制酶图谱COI基因克隆
【正文快照】:
在发育生物学和分子遗传学的研究中,动物线粒体基因组具有许多十分有用的特点。
首先,动物线粒体基因组比较小,一般仅有16kb左右,而且结构简单,只编码少量的蛋白质;其次,动物线粒体基因组在DNA复制与修复以及蛋白质合成与酶促系统等方面,都要比真核和原核基因组简单得多(Brown,
摘要:目的:转化鱼类脏器废弃物为高值生物大分子,利用活性载体处理鱿鱼肝脏,获得有效成分核酸。
方法:在分析鱿鱼肝脏中核酸类物质含量的基础上,研究活性载体处理鱿鱼肝脏的最适浓度、最适培养时间、最适温度、最适光照条件及氧含量等作用条件,得到核酸分离纯化的有效方案。
进一步,通过离子交换色谱法研究了核酸精化的分离条件。
结果:从鱿鱼肝脏中分离核酸的最适条件:10%的活性载体与鱿鱼肝脏废弃物混合,37℃、培养36h、暗光、无氧。
色谱分析条件为:固定相为DEAE-纤维素,色谱柱:8cm×1cm,流速:1ml/min,260nm紫外检测,浓度梯度NaCl(pH7.4Tris-Cl缓冲液)溶液洗脱。
结论:产
物经透析、真空冻干,可获得纯度达87%-90%的核酸纯品,可用于医药及食品工业。