比色法以及比色法特点

1 VFA分析操作规程

------比色法

VFA是厌氧发酵中微生物代谢的重要中间产物，甲烷菌利用VFA形成甲烷，属于产甲烷的原料，但厌氧反应器中过多积累VFA抑制甲烷菌的活性，测定VFA含量作为分析厌氧发酵好坏的重要指标

一.实验原理

含挥发性脂肪酸的样液，在加热的条件下，与酸性乙二醇作用生成酯，此酯与羧胺反应，形成氧肟酸。在高铁试剂存在下，氧肟酸转化为高铁氧肟酸的棕红色络合物，其颜色的深浅在一个较大的范围内与反应初始物——挥发性脂肪酸的含量成正比，故可用比色法测定。

二.试验药品

1. 1：1硫酸

浓硫酸（相对密度1.84，C.P.）加到同体积蒸馏水中稀释配制。

2. 4.5mol/L的氢氧化钠

称取180g氢氧化钠(C.P.)溶于水中，冷后以蒸馏水稀释至1L

3. 10%硫酸羟胺溶液

称取硫酸羟胺(C.P.)10.0g，溶于100mL蒸馏水中。

4. 酸性氯化铁试剂

将20.0g分析纯FeCl3 ·6H2O溶于500mL水中，准确加入20.0 mL浓硫酸并以蒸馏水稀释至1L。

5. 乙二醇

分析纯 乙二醇

三. 试验仪器及设备

800B型离心机

25ml比色管

电炉 2 752紫外分光光度计

PH计

容量瓶、移液管、烧杯

四、测定步骤

1、采样

测定脂肪酸的样品应特别注意样品的代表性，采集的样品应尽快分析测定，如需放置，应密闭储存在4℃冷藏冰箱中，保存时间不能超过24h。

2、步骤

2.1 乙酸标准液的配制及标准曲线的绘制

2.1.1 精确称取乙酸（分析纯，相对密度1.045，含量99.0%）1.010g，以蒸馏水稀释至100mL，此溶液含乙酸10mg/mL。

2.1.2 准确吸取10 mg/mL乙酸标准溶液1.0mL、5.0mL、10.0mL、15.0mL、20.0mL、25.0mL、30.0mL，分别置于100.0mL容量瓶内，以蒸馏水定容至刻度，摇匀，即得100mg/L、500 mg /L、1000 mg /L、1500 mg /L、2000 mg /L、2500 mg /L、3000 mg /L的乙酸标准系列液。

真空检测管-电子比色法快速测定水中铜离子

一、引言

目前，电子比色法被广泛应用于水中重金属离子的测定中。其原理是利用金属离子与特定试剂形成显色络合物，通过测量络合物的吸光度来间接测定金属离子的含量。而真空检测管则是电子比色法中的一种快速准确的检测工具，其具有检测速度快、准确性高、操作简便等特点。

二、实验原理

1. 电子比色法原理

电子比色法是一种利用光学测量金属离子含量的方法。其原理是通过金属离子与特定试剂形成显色的络合物，再根据络合物的吸光度来间接测定金属离子的含量。一般来说，共价键络合物的吸收最常用的区域是紫外-可见光区域，即200-800nm。根据试剂和金属络合物的吸收特性，我们可以选择合适的波长进行测量。通过比较标准曲线或者校准曲线来确定金属离子的含量。

2. 真空检测管原理

真空检测管是一种通过溶液对空气进行置换，迅速形成负压，然后将试剂吸入的一种设备。这种快速形成真空的方法有点类似打电话时快速吸气，形成负压的原理。通过真空检测管，可以迅速完成试剂与水样中金属离子形成显色络合物的反应过程，并使反应物充分混合。相比于传统的手工操作，真空检测管可以极大地提高实验效率，同时减少了操作中的误差。

三、实验步骤

1. 样品处理

将水样取一定量置于容器中，样品处理可以通过前处理方法进行，如离心、过滤、上样处理等。确保取样的准确性和可靠性。

2. 样品分析

将处理好的水样取一定量加入到真空检测管中，然后添加适量的铜离子试剂。通过真空检测管快速形成真空，使试剂与水样充分混合，并形成显色的络合物。然后将真空检测管放入光度计中，在特定波长下测量络合物的吸光度。

3. 数据处理

将测得的吸光度值代入标准曲线中进行计算，得出水样中铜离子的含量。 四、实验结果及讨论

1. 实验数据精准

食盐中碘含量测定问题的探讨

杨荣淇

碘是合成甲状腺激素的主要成分，适量的碘可供应人体合成生长发育所必需的甲状腺激素，如果缺乏碘，会产生地方性甲状腺肿和地方性克汀病，但碘过量则又可引起甲状腺功能低下和甲状腺肿大。为了保障人民群众的健康，国家规定食用盐中必须加碘，且严格控制碘加入量，因而对于食用盐中碘含量的测定十分重要。目前我国国家标准GB/T 13025.7—91《制盐工业通用试验方法碘离子的测定》(简称国标法)•采用的是溴水氧化法，即在酸性溶液中碘离子经溴氧化为碘酸根，再加碘化钾析出碘，而后用硫代硫酸钠标准溶液滴定，测定碘离子含量。这种方法需消除过量氧化剂，否则将对结果数据产生影响，使试验数据不准确；另外，由于此法使用饱和溴水，对人体的危害和化验室环境的污染较为严重。为此，本人查阅有关资料，设计了“双氧水氧化—吸光光度法”测定食盐中碘含量的试验方法，通过反复对比试验，认为采用该法能够达到精确度高、操作简便、不需消除过量氧化剂的影响且无污染的效果。

一、试验部分

1、原理

在酸性条件下，溶液中的碘离子经过过氧化氢(双氧水)氧化为碘，碘与淀粉反应使溶液变蓝，在一定条件下，颜色随碘浓度的增大而加深。通过分光光度计测量溶液的吸光度后，在标准曲线上查出碘离子的含量。

2I-＋H2O2＋2H+ → I2＋2H2O

本试验采用在氯化钠溶液中加入已知浓度的碘化钾溶液来模拟加碘食盐溶液，通过测定出的碘含量与已知值比较，来判断试验的准确性与精确度。

2、试验

（1）主要仪器与试剂

721分光光度计(上海分析仪器厂)。

本法所有试剂和水未特别注明要求的，均使用分析纯试剂和蒸馏水。

碘化钾标准溶液：100ug/ml，准确称取碘化钾0.1000g溶于水，定容至1l (用时新配)。

碘化钾标准使用液：10ug/ml，准确移取10.00mL碘化钾标准溶液于100ml容量瓶中，用水定容至刻度。

北京雷根生物技术有限公司

Caspase 1活性检测试剂盒(比色法)

简介：

Caspase(Cysteine-requiring Aspartate Protease)家族在介导细胞凋亡过程的起着极其重要的作用，其成员包括Caspase1～11等，均属于蛋白酶家族。Caspase 1又称Interkeukin 1 conberting enzyme (ICE)或caspase-1，是唯一可以剪切IL-1前体蛋白或IL-18前体产生相应成熟细胞因子的Caspase家族成员。Caspase 1通过剪切Bcl-XL来调节细胞凋亡，并通过对一些细胞因子前体的剪切来调控相关免疫反应。Caspase 1活性检测试剂盒(比色法) (Caspase 1 Colorimetric Assay Kit) 的检测原理是利用Caspase 1催化底物 Ac-YVAD-pNA)产生黄色的游离硝基苯胺pNA(p-nitroaniline)，通过测定分光光度比色法测定pNA在400～410nm处吸光值，从而间接获得caspase 1的活性。

组成：

操作步骤(仅供参考)：

1、 制备标准曲线：

① 配制适量的标准品稀释液。

② 用标准品稀释液稀释pNA(10mM)，使pNA分别达到200μM、100μM、50μM、25μM、12.5μM、6.25μM，另外设置一管不加pNA仅含标准品稀释液作为零管，把以上系列浓度物质作为标准品。

③ 取pNA浓度分别为200μM、100μM、50μM、25μM、12.5μM、6.25μM 、0的标准品各100 μl加入至96孔板或取适量体积加入至容量不超过100μl的比色杯，测定405nm处吸光值即A405。

④ 用每一个标准品的A405减去不含pNA的空白对照的A405，计算出实际的吸光值。以每个浓度的标准品A405为x轴，以对应的pNA浓度为y轴，用Excel制作pNA浓度对A405值的标准曲线。