结球甘蓝离体叶片不定芽的再生研究
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植体 。
收 稿 日期 ：２ ０ １ ３ － ０ ８ ． ２ ２
９ ，１ ０ ，１ １ ，１ ２ ｄ苗 龄 的 外 植 体 接 种 。 培 养 ３ ０—
３ ５ ｄ ，统计 不定 芽分 化率 。 ｔ ． ２ ． ４ 不定 芽生根 与植 株移 栽
菌苗。 １ ． ２ ． ２ 不 同激素 组合试 验
得 高效 高频 再生 体 系 。叶绿体 转基 因植 物作 为一 种
新 型生 物反 应器 ，具有 外源 蛋 白表 达量 高 和 环境 安 全性 好 等 优 点 ７ １ ，而 叶 片 作 为 叶 绿 体 转 基 因植 物
最 理想 的外植 体 ，研 究 其 离体 再 生 具 有 重 要 意 义 。
而 建立 稳定 可靠 的 高效离 体再 生体 系是 利用 基 因工
程 和其 他技 术育 种 的基础 。在结球 甘蓝 离体 培养 研 究 中 ，以下 胚轴 作 为外植 体 的研究 最 多 ¨ ，且 获
再 用灭 菌滤 纸吸 去种 子表 面 的水 分 ，接 种于 无激 素
的 ＭＳ基 本 培 养 基 （ 蔗糖 ３ ０ ｇ・ Ｌ ＋琼 脂 ９ ｇ・ Ｌ～， ｐ Ｈ值 ５ ． ８ ）上。于 （ ２ ５±２ ）℃ 、 光 照 强 度 １ ８ ０ ０ ｌ ｘ ，１ ６ ｈ光／ ８ ｈ暗 的 光 周 期 条 件 下 培 养 无
研 究 了不 同激素 配 比、苗 龄对 离体 子 叶不定 芽再 生 的影 响 ，以期 建立 高效 的植 株再 生 体 系 ，为今 后 通 过 叶绿 体基 因组 遗传 转化 获取 预期 优 良性状 的结 球 甘 蓝创 造条 件 ，并 为进一 步有 效地 开展 结球 甘蓝 叶
绿 体基 因工 程 的研究 奠定 基础 。现 将有 关结 果报 道
结 球 甘蓝 （ Ｂ ｒ ａ ｓ ｓ ｉ ｃ ａ ｏ ｌ ｅ ｒ ａ ｃ ｅ ａ Ｌ ．ｖ ａ ｔ ．ｃ ａ ｐ ｉ ｔ ａ ｔ ａ
１ ． ２ 方 法
Ｌ ． ）是 十字 花科 芸 薹 属 植 物 ，是Байду номын сангаас我 国重 要 的 蔬 菜
１ ． ２ ． １ 无 菌苗培 养
作 物之 一 。近年 来采 用转 基 因技术 将 目的基 因导 入
■
澎 江 右 Ｊ － ： 学 ２ ０ １ ４ 年 第 １ 期
文献著 录格式 ：黄小云 ，陶鹏 ，王五宏 ，等．结球甘蓝离体叶片不定芽的再生研 究 ［ Ｊ ］ ．浙江农业科学 ，２ ０ １ ４（ １ ） ：３ ４—３ ８
结 球 甘 蓝 离 体 叶 片不 定 芽 的再 生 研 究
黄 小云 一，陶 鹏 ，王 五宏 。 ， 李 必元 ，岳智 臣 ，雷娟 利 ，钟新 民
观察 不定 芽 的分 化情况 ，３ ０ ｄ后 统计 出芽 情况 。
１ ． ２ ． ３ 苗 龄 试 验
１ 材 料 与方 法
１ ． １ 材 料
在 筛选 出来 的 出芽较 好 的培 养 基 上 ，取 ７ ，８ ，
供试 材料 为 结 球 甘 蓝 Ｑ Ｌ ５ ０ ， 由浙 江 省农 业科 学 院蔬 菜 研 究 所 提 供 ，取 其 无 菌 实 生 苗 叶 片 为 外
（ １ ．浙 江省 农 业 科 学 院 蔬 菜 研究 所 ，浙 江 杭 州 ３ １ ０ ０ ２ １ ； ２ ．南 京 农 业 大 学 园 艺 学 院 ，江 苏 南 京
２ １ ０ ０ ９ ５ ）
摘
要 ：以结 球 甘蓝 强力 ５ ０组 培 苗 叶 片 为 外 植 体 ，研 究 不 同 激 素 配 比、 苗 龄 对 其 不 定 芽 再 生 的 影 响 。 结 果
根率达 １ ０ ０ ． ０ ％ ，且 根 系 生 长 健 壮 。
关 键 词 ：结 球 甘 蓝 ； 不 同激 素 配 比 ；叶 片 ；离 体 培 养
中 图 分 类 号 ：Ｓ ６ ３ ５ ． １ 文献 标 志码 ：Ａ 文章 编 号 ：０ ５ ２ ８ ． ９ ０ １ ７ （ ２ ０ １ ４ ） ０ １ ４ ） ０ ３ ４ — ０ ４
本试 验 以结 球 甘 蓝 强 力 ５ ０（ 简称 Ｑ Ｌ ５ ０ ） 为材 料 ，
试 验 ２种 激 素 的不 同组 合 ，６ ． 苄 氨基 腺 嘌 呤
（ ６ － Ｂ Ａ） 浓度 为 ０ ，１ ，２ ，３ ，４ ｍ ｇ・ Ｌ～，萘 乙 酸 （ Ｎ Ａ Ａ） 浓 度 为 ０，０ ． ０ ２ ，０ ． ０ ４，０ ． ２ ０ ，０ ． ４ ０ ，
结 球甘 蓝 ，已成 为 培 育 抗 逆新 品种 的一 种 新 手段 ，
选 取籽粒 饱 满 、大小 均一 的甘 蓝种 子 ，用清水
冲洗 干净 ，置于 ７ ５ ％ 的酒 精 中浸 泡 ３ ０ ｓ ，用 ０ ． １ ％ 的Ｈ ｇ Ｃ １ ， 表 面消 毒 ５ ｍｉ ｎ ，最 后用 无菌 水 冲洗 ４次 ，
表 明 ，在 不 含 任 何 激 素 以 及单 独 添 加 不 同 浓 度 的 ６ － Ｂ Ａ或 Ｎ Ａ Ａ 的 ＭＳ培 养 基 上 ，均 不 能 诱 导 外 植 体 不 定 芽 的 分 化 ；结 球 甘 蓝 离 体 叶 片 不 定 芽 在 Ｍｓ＋ ６ 一 Ｂ Ａ ２ ｍ ｇ・Ｌ ～ ＋Ｎ Ａ Ａ ０ ． ８ ０ ｍ ｇ・Ｌ 分 化 培 养 基 上 再 生 频 率 最 高 ，为 ７ ９ ． ８ ６ ％ ，最 适 宜 的苗 龄 为 ８ ｄ ；外 植 体 在 生 根 培 养 基 １ ／ ２ ＭＳ＋ ０ ． ３ ０ ｍｇ・ Ｌ Ｎ Ａ Ａ中 ，不 定 芽 的 生 根 效 果 好 ，生
如下。
０ ． ８ ０ ｍｇ・ Ｌ 一，进 行完 全 随机组合 。在材 料苗 长 约
７ ｃ ｍ，切取 ０ ． ３ ｃ ｍ× ０ ． ３ ｃ ｍ 的 叶 片放 入 加 有不 同
激 素组 合 的 ＭＳ分 化 培 养 基 中。用 培 养 皿 进 行 培 养 ，每 皿接 种 ３ ０个外植 体 ，重 复 ３次 。培 养 ２ ０ ｄ ，
收 稿 日期 ：２ ０ １ ３ － ０ ８ ． ２ ２
９ ，１ ０ ，１ １ ，１ ２ ｄ苗 龄 的 外 植 体 接 种 。 培 养 ３ ０—
３ ５ ｄ ，统计 不定 芽分 化率 。 ｔ ． ２ ． ４ 不定 芽生根 与植 株移 栽
菌苗。 １ ． ２ ． ２ 不 同激素 组合试 验
得 高效 高频 再生 体 系 。叶绿体 转基 因植 物作 为一 种
新 型生 物反 应器 ，具有 外源 蛋 白表 达量 高 和 环境 安 全性 好 等 优 点 ７ １ ，而 叶 片 作 为 叶 绿 体 转 基 因植 物
最 理想 的外植 体 ，研 究 其 离体 再 生 具 有 重 要 意 义 。
而 建立 稳定 可靠 的 高效离 体再 生体 系是 利用 基 因工
程 和其 他技 术育 种 的基础 。在结球 甘蓝 离体 培养 研 究 中 ，以下 胚轴 作 为外植 体 的研究 最 多 ¨ ，且 获
再 用灭 菌滤 纸吸 去种 子表 面 的水 分 ，接 种于 无激 素
的 ＭＳ基 本 培 养 基 （ 蔗糖 ３ ０ ｇ・ Ｌ ＋琼 脂 ９ ｇ・ Ｌ～， ｐ Ｈ值 ５ ． ８ ）上。于 （ ２ ５±２ ）℃ 、 光 照 强 度 １ ８ ０ ０ ｌ ｘ ，１ ６ ｈ光／ ８ ｈ暗 的 光 周 期 条 件 下 培 养 无
研 究 了不 同激素 配 比、苗 龄对 离体 子 叶不定 芽再 生 的影 响 ，以期 建立 高效 的植 株再 生 体 系 ，为今 后 通 过 叶绿 体基 因组 遗传 转化 获取 预期 优 良性状 的结 球 甘 蓝创 造条 件 ，并 为进一 步有 效地 开展 结球 甘蓝 叶
绿 体基 因工 程 的研究 奠定 基础 。现 将有 关结 果报 道
结 球 甘蓝 （ Ｂ ｒ ａ ｓ ｓ ｉ ｃ ａ ｏ ｌ ｅ ｒ ａ ｃ ｅ ａ Ｌ ．ｖ ａ ｔ ．ｃ ａ ｐ ｉ ｔ ａ ｔ ａ
１ ． ２ 方 法
Ｌ ． ）是 十字 花科 芸 薹 属 植 物 ，是Байду номын сангаас我 国重 要 的 蔬 菜
１ ． ２ ． １ 无 菌苗培 养
作 物之 一 。近年 来采 用转 基 因技术 将 目的基 因导 入
■
澎 江 右 Ｊ － ： 学 ２ ０ １ ４ 年 第 １ 期
文献著 录格式 ：黄小云 ，陶鹏 ，王五宏 ，等．结球甘蓝离体叶片不定芽的再生研 究 ［ Ｊ ］ ．浙江农业科学 ，２ ０ １ ４（ １ ） ：３ ４—３ ８
结 球 甘 蓝 离 体 叶 片不 定 芽 的再 生 研 究
黄 小云 一，陶 鹏 ，王 五宏 。 ， 李 必元 ，岳智 臣 ，雷娟 利 ，钟新 民
观察 不定 芽 的分 化情况 ，３ ０ ｄ后 统计 出芽 情况 。
１ ． ２ ． ３ 苗 龄 试 验
１ 材 料 与方 法
１ ． １ 材 料
在 筛选 出来 的 出芽较 好 的培 养 基 上 ，取 ７ ，８ ，
供试 材料 为 结 球 甘 蓝 Ｑ Ｌ ５ ０ ， 由浙 江 省农 业科 学 院蔬 菜 研 究 所 提 供 ，取 其 无 菌 实 生 苗 叶 片 为 外
（ １ ．浙 江省 农 业 科 学 院 蔬 菜 研究 所 ，浙 江 杭 州 ３ １ ０ ０ ２ １ ； ２ ．南 京 农 业 大 学 园 艺 学 院 ，江 苏 南 京
２ １ ０ ０ ９ ５ ）
摘
要 ：以结 球 甘蓝 强力 ５ ０组 培 苗 叶 片 为 外 植 体 ，研 究 不 同 激 素 配 比、 苗 龄 对 其 不 定 芽 再 生 的 影 响 。 结 果
根率达 １ ０ ０ ． ０ ％ ，且 根 系 生 长 健 壮 。
关 键 词 ：结 球 甘 蓝 ； 不 同激 素 配 比 ；叶 片 ；离 体 培 养
中 图 分 类 号 ：Ｓ ６ ３ ５ ． １ 文献 标 志码 ：Ａ 文章 编 号 ：０ ５ ２ ８ ． ９ ０ １ ７ （ ２ ０ １ ４ ） ０ １ ４ ） ０ ３ ４ — ０ ４
本试 验 以结 球 甘 蓝 强 力 ５ ０（ 简称 Ｑ Ｌ ５ ０ ） 为材 料 ，
试 验 ２种 激 素 的不 同组 合 ，６ ． 苄 氨基 腺 嘌 呤
（ ６ － Ｂ Ａ） 浓度 为 ０ ，１ ，２ ，３ ，４ ｍ ｇ・ Ｌ～，萘 乙 酸 （ Ｎ Ａ Ａ） 浓 度 为 ０，０ ． ０ ２ ，０ ． ０ ４，０ ． ２ ０ ，０ ． ４ ０ ，
结 球甘 蓝 ，已成 为 培 育 抗 逆新 品种 的一 种 新 手段 ，
选 取籽粒 饱 满 、大小 均一 的甘 蓝种 子 ，用清水
冲洗 干净 ，置于 ７ ５ ％ 的酒 精 中浸 泡 ３ ０ ｓ ，用 ０ ． １ ％ 的Ｈ ｇ Ｃ １ ， 表 面消 毒 ５ ｍｉ ｎ ，最 后用 无菌 水 冲洗 ４次 ，
表 明 ，在 不 含 任 何 激 素 以 及单 独 添 加 不 同 浓 度 的 ６ － Ｂ Ａ或 Ｎ Ａ Ａ 的 ＭＳ培 养 基 上 ，均 不 能 诱 导 外 植 体 不 定 芽 的 分 化 ；结 球 甘 蓝 离 体 叶 片 不 定 芽 在 Ｍｓ＋ ６ 一 Ｂ Ａ ２ ｍ ｇ・Ｌ ～ ＋Ｎ Ａ Ａ ０ ． ８ ０ ｍ ｇ・Ｌ 分 化 培 养 基 上 再 生 频 率 最 高 ，为 ７ ９ ． ８ ６ ％ ，最 适 宜 的苗 龄 为 ８ ｄ ；外 植 体 在 生 根 培 养 基 １ ／ ２ ＭＳ＋ ０ ． ３ ０ ｍｇ・ Ｌ Ｎ Ａ Ａ中 ，不 定 芽 的 生 根 效 果 好 ，生
如下。
０ ． ８ ０ ｍｇ・ Ｌ 一，进 行完 全 随机组合 。在材 料苗 长 约
７ ｃ ｍ，切取 ０ ． ３ ｃ ｍ× ０ ． ３ ｃ ｍ 的 叶 片放 入 加 有不 同
激 素组 合 的 ＭＳ分 化 培 养 基 中。用 培 养 皿 进 行 培 养 ，每 皿接 种 ３ ０个外植 体 ，重 复 ３次 。培 养 ２ ０ ｄ ，
