(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910257876.7 (22)申请日 2019.04.01 (71)申请人 武汉轻工大学 地址 430023 湖北省武汉市汉口常青花园 学府南路68号 (72)发明人 徐玉玲 汪海波 何浪 李盛 张军涛 未本美 (74)专利代理机构 北京思创大成知识产权代理 有限公司 11614 代理人 高爽 (51)Int.Cl. C07K 14/78(2006.01) C07K 1/30(2006.01) C07K 1/14(2006.01) (54)发明名称一种胶原蛋白及其提取方法(57)摘要本发明公开了一种胶原蛋白及其提取方法。该方法包括如下步骤：1)将含有胶原蛋白的动物组织在液氮中进行冷冻、研磨；2)将研磨后的动物组织以酸/酶法提取胶原蛋白，得到胶原蛋白溶液；3)将胶原蛋白溶液透析、冻干后，得到粉末状的所述胶原蛋白。本发明采用冷冻研磨预处理方法，在液氮中预先冷冻含有胶原蛋白的动物组织一段时间，利用研磨仪在一定频率下研磨成粉末，该方法处理后，三螺旋结构及热变性温度并未受影响，能在保持天然胶原纤维化性能的基础上，比原有不冷冻研磨的酸提法的提取率提高18％-82％，这对于胶原应用及胶原基生物材料 的应用具有重要意义。权利要求书1页 说明书5页 附图2页CN 109796529 A 2019.05.24 C N 109796529 A
权 利 要 求 书1/1页CN 109796529 A 1.一种胶原蛋白提取方法，其特征在于，该方法包括如下步骤： 1)将含有胶原蛋白的动物组织在液氮中进行冷冻、研磨； 2)将研磨后的动物组织以酸/酶法提取胶原蛋白，得到胶原蛋白溶液； 3)将胶原蛋白溶液盐析、透析、冻干后，得到粉末状的所述胶原蛋白。 2.根据权利要求1所述的胶原蛋白提取方法，其中，进行步骤1)之前，还包括预处理步骤： 将含有胶原蛋白的动物组织脱脂、除杂蛋白后，干燥。 3.根据权利要求1所述的胶原蛋白提取方法，其中， 所述含有胶原蛋白的动物组织为哺乳动物皮和/或鱼类皮； 所述胶原蛋白为哺乳动物皮胶原蛋白和/或鱼皮胶原蛋白。 4.根据权利要求1所述的胶原蛋白提取方法，其中，步骤1)中，冷冻的时间为16～32h。 5.根据权利要求1所述的胶原蛋白提取方法，其中，步骤1)中，所述研磨的时间为3-25min。 6.根据权利要求5所述的胶原蛋白提取方法，其中，步骤1)中，所述研磨的时间为10-20min。 7.根据权利要求1所述的胶原蛋白提取方法，其中，步骤1)中，所述研磨的频率为10～25HZ。 8.根据权利要求1所述的胶原蛋白提取方法，其中，步骤2)中，酸/酶法提取胶原蛋白的步骤包括： 将研磨后的样品使用0.4～0.6mol/L乙酸浸泡并搅拌3～5d，再加入胃蛋白酶使混合溶液中胃蛋白酶的浓度为1.5～2.5％，搅拌16～32h后得到胶原蛋白溶液。 9.根据权利要求1所述的胶原蛋白提取方法，其中，步骤3)中，所述透析的时间≥3d。 10.由权利要求1-9中任意一项所述的胶原蛋白提取方法得到的胶原蛋白。 2
猪皮熬胶原蛋白的方法 猪皮是我们常吃的一种荤类食物。猪皮的美容功效是众所周知的。猪皮含有丰富蛋白质，胶原蛋白。正是因为胶原蛋白的丰富，才使得猪皮拥有美容的功效。胶原蛋白会使得我们的脸看起来更嫩，更滑，可以让肌肤看上去更加年轻。所以猪皮就成了补充胶原蛋白的不二选择。那么猪皮怎样熬制胶原蛋白呢？接下来我们就一起来了解一下吧！ 一、胶原蛋白在营养价值上与蛋、肉、奶（完全蛋白，必需氨基酸齐全，可以维持生命，促进生长发育）等不同，属于不完全蛋白质，必需氨基酸不齐全，不可以维持生命和促进生长发育。 二、首先要把买来猪皮清洗干净，除毛。接着用砂锅或者锅子用水煮，直到猪皮融化成胶状。然后冷却；或者冷却后进行冷藏。 三、胶原蛋白的特点： 1、温和：不刺激皮肤和眼睛，性质温和。用于面部肌肤护理可渗透至肌肤内层。
2、保湿：胶原蛋白富含亲水性的天然保湿因子，它与皮肤表面的蛋白质结合，可补充人体流失的胶原蛋白、氨基酸，能涵养皮肤水分，使皮肤有着良好的亲合性。 3、防皱：由于活性胶原蛋白的分子结构和人体皮肤胶原蛋白相容性极好，所以能完全被皮肤吸收、填充在皮肤基质层之间，从而使皮肤丰满、皱纹舒展，同时提高皮肤密度，产生张力。 4、修复：胶原蛋白具有独特的修复功能，胶原蛋白和周围组织的亲合性好，具有修复组织的作用，有痘痘留下的皮肤坑洞可以填洞好。 5、赋予肌肤弹性：胶原蛋白可以使皮肤柔软丰满富有弹性，润滑角质层，刺激皮肤微循环，促进皮肤的新陈代谢，使皮肤光滑、亮泽，减少皱纹。
6、产品为可溶性活性胶原蛋白多肽精华粉，100%纯活性胶原蛋白，均不含任何防腐剂、添加剂或填充剂。 7、胶原蛋白与丰胸 胶原蛋白对丰胸的作用早已为人们所熟知。乳房主要由结缔组织和脂肪组织构成，而挺拔丰满的乳房很大程度上依靠结缔组织的承托，胶原蛋白是结缔组织的主要成分，"在结缔组织中胶原蛋白常与及多糖蛋白相互交织成网状结构，产生一定的机械强度，是承托人体曲线，体现挺拔体态的物质基础。"
胶原蛋白的提取方法 胶原蛋白的提取与纯化的目标是尽量使胶原提取的产率、纯度更高，并且使所提取的胶原能满足不同领域的要求。迄今为止，胶原的提取方法主要有以下4种：酸法、碱法、盐法、酶法。在实际提取过程中，不同提取方法之间往往相互结合，以取得较好的提取效果。 1、酸法提取 酸法提取主要采用低离子浓度酸性条件浸渍处理原料，从而破坏分子间的盐键和希夫碱，而引起纤维膨胀、溶解。作为溶剂使用的酸，主要有盐酸或亚硫酸、磷酸、硫酸、醋酸、柠檬酸和甲酸等。酸法是提取胶原蛋白比较常用和有效的方法，用酸法提取的胶原最大程度地保持了其三股螺旋结构。此法处理快速，所得产品的分子量是连续的，适用于医用生物材 料及原料的制备，但产品得率低，设备腐蚀严重，污染重。赵苍碧等采用0.3 %的醋酸溶液在 4 ℃下从牛腱中提取胶原蛋白，得到高纯度的胶原蛋白溶液。余海等采用0.5 mol/L的醋酸溶液在4 ℃下从鼠尾肌腱胶成功提取出I型胶原蛋白。Takeshi等胶原蛋白课题组 采用0.5 mol/L的醋酸溶液从海妒鱼、鳍鱼、金枪鱼、水母等的皮中提取、分离出纯度较高的胶原蛋白，并对所提取的胶原蛋白的理化性质作了系统的研究。2、碱法提取 碱法提取胶原蛋白常用的处理剂为石灰、氢氧化钠、碳酸钠等。如Holzer等采用1 %～1.5 %石灰水浸泡的方法提取胶原蛋白。由于它容易造成肽键水解，因此得到的水解产物分子量比较低。所以，若想保留胶原的三股螺旋结构，此法不可取。 3、盐法提取 盐法提取胶原蛋白所用的中性盐有盐酸-三羟甲基胺基甲烷(Tris-HCl)、氯化钠、柠檬酸盐等。在中性条件下，当盐的浓度达到一定量时，胶原溶解。并且可采用不同浓度的氯化钠对提取的胶原蛋白进行盐析处理，可以沉淀出不同类型的胶原蛋白。 4、酶法提取
猪皮含有胶原蛋白吗 猪皮我们都知道，其中还含有丰富蛋白质，以及脂肪。不仅如此，猪皮的含脂肪量甚至不到猪肉的一半。所以猪皮也不会使人发胖，也是许多减肥人士爱吃的休闲零食。猪皮是以有美容效果闻名的。那么猪皮内是否含有对皮肤有极大作用的胶原蛋白呢？接下来就跟随一起了解一下吧！ 一、猪皮是一种蛋白质含量很高的肉制品原料。以猪皮为原料加工成的皮花肉、皮冻、火腿等肉制品，不但韧性好，色、香、味、口感俱佳，而且对人的皮肤、筋腱、骨骼、毛发都有重要的生理保健作用。 猪皮里蛋白质含量是猪肉的2.5倍，碳水化合物的含量比猪肉高4倍，而脂肪含量却只有猪肉的一半。 二、猪皮中含有大量的胶原蛋白质在烹调过程中可转化成明胶，明胶具有网状空间结构，它能结合许多水，增强细胞生理代谢，猪皮所含蛋白质的主要成分是胶原蛋白，约占85%，其次为弹性蛋白。生物研究发现：胶原蛋白质与结合水的能力有关，人
体内如果缺少这种属于生物大分子胶类物质的胶原蛋白，会使体内细胞贮存水的机制发生障碍。细胞结合水量明显减少，人体就会发生“脱水”现象，轻则使皮肤干燥、脱屑，失去弹性，皱纹横生，重则影响生命。 ★三、一般人群均可食用： 1、适宜阴虚之人心烦、咽痛、下利者食用；适宜妇女血枯、月经不调者食用；也适宜血友病人出血者食用； 2、外感咽痛、寒下利者忌食；患有肝病疾病、动脉硬化、高血压病的患者应少食或不食为好。 四、加工好的正常猪皮具备以下特点：皮白有光泽，毛孔细
而深；去毛彻底，无残留毛、毛根；无皮伤及皮肤病； 无皮下组织，去脂干净；成型好；煮熟后具备正常的色、香、味，口感柔软，韧性良好，肉汤透明澄清，冷置后呈无色胶冻。
胶原蛋白的提取 实验原料：猪皮，氯仿，乙醇，乙酸，0.05mol/L Tris-HCl缓冲液，NaCl，NaOH，胃蛋白酶，蒸馏水。 实验器材：搅拌机，低温离心机，控温磁力搅拌器，电子天平，透析设备，PH试纸，烧杯，玻璃棒，小刀，研钵。 实验需配药品：A:氯仿/乙醇（2:1）约需400ml， B:0.5mol/L乙酸约3000ml， C:6mol/L NaOH溶液约40ml, D:质量分数0.1％、0.01％的乙酸（透析用）， E:含4.5mol/LNaCl的0.05mol/LTris-HCl缓冲液约需200ml。 实验步骤： 1,猪皮的前处理： （1）称取猪皮50g，用氯仿/乙醇（2:1，A）溶液对其进行脱脂后切除皮下脂肪，去毛并细切； （2）将组织小块用乙醇和蒸馏水洗涤多次； （3）将洗涤后的组织放入搅拌机中搅拌成糊状，用含4.5mol/L NaCl的0.05mol/L Tris-HCl 缓冲液（pH 7.5，E）充分洗涤（2h）以去除脂质及血清等成分，低温离心（8000r/min，30min，4℃）取沉淀。 2,提取胶原蛋白： （1）进行前处理后，在沉淀中加入500ml含胃蛋白酶250mg的0.5mol/L冰醋酸（B），搅拌并维持在4℃，提取48h； （2）高速冷冻离心机离心（4000r/min）吸取上清液。在上清液中加入NaCl至4.4mol/L （NaCl2.2mol）搅拌过夜； （3）低温离心，将沉淀溶于0.5mol/L冰醋酸中，再逐级用2.4mol/L（NaCl1.2mol，以500ml 冰醋酸计），1.7mol/L（NaCl0.85mol）及1.0mol/L（NaCl0.5mol）的NaCl反复盐析、酸溶。最后得到的上清液即为胶原粗提液。 3,胶原蛋白提纯: （1）在粗提胶原蛋白溶液缓慢加入6 mol/L NaOH溶液（C）调节pH值到7，冷冻离心除掉沉淀物，在剩余的溶液中加入氯化钠固体研细粉末，缓慢搅拌，4 ℃静置过夜保存；（2）离心取沉淀，用稀醋酸再次溶解，将溶解液装入透析袋中，用质量分数分别为0.1%、0.01%的乙酸溶液（D）透析1 d，再用蒸馏水透析3d，每天换透析液两次，最后得到的是纯度较高的胶原蛋白水溶液； （3）将纯化的胶原蛋白水溶液采用低温冷冻干燥法制备成纯胶原蛋白样品，备用。
猪皮胶原蛋白面膜情况介绍 我们大家知道现在的美容市场真是多种多样的，为什么这么说，主要看面膜就知道，微笑圈，qq朋友圈里面大把买面膜的，这种面膜也不知道质量怎么样，我们可以不相信他们的面膜，但是我们自己可以试着做一些面膜来看看，比如：猪皮胶原蛋白面膜，下面我们就来为大家介绍介绍关于猪皮胶原蛋白面膜情况介绍。 猪皮胶原蛋白面膜，顾名思义，“用猪皮做原料，做成面膜用以保养皮肤”。看似平常无用的猪皮却能发挥如此作用，它的横空出世来源于韩国的辣妈马胜智，曾参加韩国SBS“娃娃脸选拔赛”而一举成名，同样走红的还有她那独创美颜秘方——胶原满满的“猪皮面膜”。马美女原本是用来做料理给小孩吃了长身体，无奈小孩都不喜欢吃，不得已才突发奇想拿来敷脸，结果皮肤居然惊天地泣鬼神地越变越好
成分：水解胶原蛋白、甘油、硬脂酸甘油酯、PEG-100硬脂酸酯、澳洲胡桃油、聚二甲基硅氧烷、透明质酸钠、尿囊素、可可籽萃取物、聚谷氨酸、大豆发酵萃取物等。 一、制作方法 1.沸水煮1个小时后切块。 2.搅拌猪皮成膏状。 3.猪皮膏凝结，切块，冷冻。 5.加入绿茶、薏仁粉、蜂蜜等，锦上添花
二、产品特点 1、含量高达50000mg的猪皮胶原蛋白成分 2、不含任何化学添加剂，无异味 三、使用方法 1、洁面后进行日常脸部基础护理； 2、取适量的猪皮面膜均匀涂抹于脸部； 3、20分钟左右吸收后即可清洗。 四、媒体报道
45岁韩国辣妈嫩过大学生猪皮面膜成独门秘方 传说中那胶原满满的猪皮面膜 好了，上面就是我们关于猪皮胶原蛋白面膜情况介绍了，大家看完之后感觉是怎么样的呢？是不是能够自己亲手去做做猪皮胶原蛋白面膜呢？这个就是我们自己所要知道的，也是我们自己所需要去制作的，为什么这么说，因为我们用的面膜太多，还不如自己制作！
中草药所含成分十分复杂，既有有效成分，又有无效成分和有毒成分。为了提高中草药的治疗效果，就要尽最大限度提取有效成分，去除无效成分及有毒成分。因此，中草药提取对于提高中药制剂的内在质量和临床疗效最为重要。但常用的提取方法（如煎煮法。回流法、浸渍法。渗漉法等）在保留有效成分，去除无效成分方面，存在着有效成分损失大、周期长、工序多。提取率不高等缺点。近10年来，在中药提取方面出现了许多新技术、新方法，这些新技术和方法的应用，使得中草药提取既符合传统的中医理论，又能达到提高有效成分的收率和纯度的目的。本文就这方面作一综述。 1. 超临界流体萃取技术 超临界流体萃取（简称SC FEFE）是一种以超临界流体（简称SCF）代替常规有机溶剂对中草药有效成分进行革取和分离的新型技术，其原理是利用流体（溶剂）在临界点附近某区域（超临界区）内与待分离混合物中的溶质具有异常相平衡行为和传递性能，且对溶质的溶解能力随压力和温度的改变而在相当宽的范围内变动，利用这种SCF作溶剂，可以从多种液态或固态混合物中萃取出待分离组分。常用的SCF为CO。，因为CO。无毒，不易燃易爆，价廉，有较低的临界压力和温度，易于安全地从混合物中分离出来。超临界CO。萃取法与传统提取方法相比，最大的优点是可以在近常温的条件下提取分离，几乎保留产品中全部有效成分，无有机溶剂残留，产品纯度高，操作简单，节能。 廖周坤等用不同浓度的乙醇作夹带剂，对藏药雪灵芝进行了总皂苷粗品及多糖的苹取试验，与传统溶剂萃取工艺相比较，收率分别提高至旧．9倍和 1．62倍。何春茂、梁忠云利用超临界CO。卒取技术从黄花蒿中革取所得的萃取物中杂质（蜡状物）含量低，青蒿素提纯精制简单，收率高产品质量好。雷正杰等利用超临界CO。流体萃取技术，对厚朴的有效成分进行萃取和分离，革取物为淡黄色膏状物，经分析该萃取物由厚朴酚等11个化学成分组成，其中厚朴酚和厚朴酚的相对含量高达46．81％和45．00％。葛发欢等探讨了从黄山药中萃取薯预皂素的最佳条件，同时进行了中试放大，证明应用超临界CO。萃取薯预皂素进行工业化生产是可行的，与传统的汽油法相比较，收率提高15倍，生产周期大大缩短，避免使用汽油有易燃易爆的危险。葛发欢等研究了超临界CO。萃取柴胡挥发油和皂苷的工艺，STh－CO。法提取柴胡挥发油，与传统水蒸气蒸馏法相比较，能大大提高收率，缩短提取时间，而挥发油组成一致，只是各成分含量有差异。原永芳等通过五因素一四水平正交试 验法，用超临界流体萃取技术对川穹的挥发油萃取条件进行了优化选择，结果最佳萃取条件为压力34．smPa，温度60℃，改性剂乙醇0．3ml，静态苹取时间10min，动态萃取量10ml，以水作为吸收。与水蒸气蒸馏法相比较，该法具有耗时少，提取安全等优点。 SCFE技术对于提取分离挥发性成分、脂溶性物质、高热敏性物质以及贵重药材的有效成分显示出独特的优点，但SCFE设备属高压设备，一次性投资较大，运行成本高，因此这一技术目前在工业生产中还难以普及。 2. 超声提取技术 超声提取技术的基本原理主要是利用超声波的空化作用加速植物有效成分的浸出提取，另外超声波的次级效应，如机械振动、乳化、扩散。击碎、化学效应等也能加速欲提取成分的扩散释放并充分与溶剂混合，利于提取。与常规提取法相比，具有提取时间短、产率高、
胶原蛋白的提取、结构以及分子量测量综述 一、前言 胶原蛋白(collagen)是与各组织、器官机能有关的功能性蛋白 约占人体总蛋白的三分之一,存在于细胞外间质 是具有三股螺旋结构的蛋白质家族[1]。胶原是人体重要的细胞外基质成分,在细胞生物学中有重要应用价值。胶原是一个大的蛋白家族 至少有15个型别，各型胶原都具有一定的分子构型和组织分布特点，其中以Ⅰ型胶原分布最广含量最多 [2]。胶原蛋白 或称胶原 是按是否形成有周期性横纹的胶原原纤维collagenous fibril可将其分为原纤维胶原蛋白fibrillar or fibril-forming collagen和非原纤维收原蛋白nonfibrillar or non fibril forming collagen两大类。目前己发现的胶原蛋白类型己不下19种 原纤维胶原蛋白包括I、II、III、V、XI型胶原 在体内以胶原纤维的形式存在。胶原纤维是骨骼、肌腱、骨间膜、皮肤、软骨、韧带等器官的基本结构物质 使这些器官具有很高的抗张强度。胶原纤维与组织器官的生物力学特性密切相夫原纤维胶原蛋白包括I、II、III、V、和XI型胶原 其余均属于非原纤维胶原蛋白。非原纤维胶原蛋白具有胶原蛋白的基本特征 即三股螺旋结构 但其结构、分布和功能更具有多样性、非原纤维胶原蛋白按其超分了结构可进一步分类。 1.结合于胶原原纤维表面的胶原蛋白（fibril associated collagens with interrupted triple helice FACIT）包括IX XII XIV XVI X XI型胶原。 2.形成网状结构的胶原蛋白，包括IV VIII X型胶原。 3.形成串珠状纤维beaded filament的胶原蛋白有VI型胶原。 4.形成固着原纤维anchoring fibril 的胶原蛋白有VII型胶原。 5.有跨膜区的胶原蛋白有XIII和XVII型胶原。 6.结构尚未明确的胶原蛋白包括XV和XVIII型胶原等。胶原不仅作为组织的支持物,而且对细胞、组织乃至器官行使正常功能及伤口愈合都有重大影响。胶原作为医用生物材料比以往应用的金属、陶瓷或化学材料具有更大的优越，因此近20年来已被广泛用于临床 近年来 世界各国已将胶原制品广泛应用于临床修复软组织缺损覆盖烧伤创面、整形、牙周引导组织再生、口腔种植体、牙槽嵴再建及颌骨空腔修复。 二、胶原蛋白的提取 胶原多从牛皮、肌腱、鼠尾等部位提取，由于胶原是一个大的蛋白家族是细胞外间质的四大组分之一，几乎分布于所有的组织中。到目前为止已发现脊椎动物的胶原类型达十多种之多各型作用不一。胶原的异常改变涉及许多纤维化疾病。在肿瘤的发生与转移中胶原的分布和类型也发生改受。因此在提取时常将各型分别提取。目前从组织提取胶原多采用分级盐析的方法。在酸性条件下，I型和Ill型胶原沉淀的盐浓度临界点相近 在中性条件下III型和IV型胶原沉淀的盐浓度临界点又很接近。因此提取时难度较大，程序复杂，需过柱纯化，而且花费时间长，易发生胶原变性。主要的提取方法分述如下：I型和II型胶原主要分布于细胞，组织之间及结缔组织间质中，属于间质胶原，在脏器纤维化病理过程中I型和II型胶原起着重要作用。I型胶原是结缔组织间质中最主要的成分。一般制品多以I型胶原为材料文献上I型胶原的提取一般采用多次超速高心的办法。李成章、樊明文[3]。从人胚骨中提取了I型胶原，用于胶原制品的制作。采用胚胎骨组织来提取胶原，一般认为骨组织仅含有I 型胶原，选用骨组织作为提取原料可省去分型、过柱纯化等烦杂工序，简便经济，易获得纯度较高的I型胶原，他们的方法为将脱钙骨粉浸入0.5mol/LHAc24，48h，取上清缓慢加入研磨精细的NaCl，终浓度为4mol/L，搅拌过夜离心35 000×g，20min，下同，去上清，其沉淀物加入0.5 mol/L HAc透析溶解，离心，取上清依次加入0.lmol/LTris-HCI终浓度为0.01mol/L，5mol/LNaOH调pH至7.4，NaCl终浓度为4mol/L，搅拌过夜，离心，去上清，沉淀以4 mol/L NaCI，0.05 mol/L Tris-HCI洗一次，再加0.5mol/LHAC透析溶解，离心去沉淀，上清装入透析袋内，对NaCl溶府透析，平衡后NaCl浓度为1O离心去上清，沉淀物用0.5mol/LHAC透析去盐溶解，离心去沉淀，上清浓缩冻干以上所有液体及操作温度均为4℃。为提高抽提纯度骨粉应越细越好，脱钙必须完全，采用EDTA脱钙，可使一些非胶原蛋白，如骨连接蛋白
猪皮里的胶原蛋白一周吃几次猪皮是很多人都喜欢吃的一种东西，特别是喜欢弄成猪皮冻或者其他的一些猪皮制作的食物。主要是猪皮里面还有很多胶原蛋白，对于人体来说很有帮助，特别是对于女性的美容来说有着极好的效果。但每个人都知道，不管再好的东西都要有一个量。其他的猪皮会对身体产生一定的负担，那么猪皮里的胶原蛋白一周吃几次是最好的了。 胶原蛋白实际上是多种氨基酸组成的。猪皮和人体皮肤的氨基酸模式大致接近，不过，猪皮虽然富含胶原蛋白，但也是合成后的胶原蛋白大分子，并不能被人体直接吸收。即使服用了，最终还是被分解成各种氨基酸。 这样看来，直接吃猪皮补充胶原蛋白的想法还是太过单纯了。而且，猪皮脂肪含量很高，对于易胖体质的姑娘来说可能不是很好的选择，这类食物还有鸡皮、鱼皮、蹄筋等。 那么，应该如何有效补充人体所需的胶原蛋白呢? 1.补充优质蛋白。不能执着于某种看似富含蛋白实际只是富含胶质的食物，要补充优质蛋白的话，鱼、蛋、奶、豆等已经足够提供人体所需了。 例如，鱼类当中补充胶原蛋白效果最佳的首推金枪鱼和鲑鱼，它们可以很好的防止蛋白质流失，为弹性皮肤提供足够支撑。而各种豆制品，如豆腐、豆皮等则可以加速胶原蛋白合成，还能抑制对皮肤不利的酶的活性，延缓皮肤衰老的速度。
2.多补充维生素C，以促进其他生物酶的辅酶活性，进而使人体皮肤有光泽、有弹性，而补充维生素C首选就是蔬菜和水果了。 蔬菜当中推荐甘蓝、菠菜等富含维生素C的绿色蔬菜，维生素C的抗氧化作用可以稳定酶的活性，防止胶原蛋白遭到破坏。而胡萝卜、番薯等根茎类蔬菜所富含的维生素A可以修复受损的胶原蛋白。另外，一些含有番茄红素的蔬菜，如红椒、番茄等，也能提升皮肤中的胶原蛋白。 3.最后推荐一款比较冷门的胶原蛋白：白茶。白茶对于保护皮肤中的胶原蛋白有较好的效果。 人体皮肤的胶原蛋白随着年龄的增长而流失是一件非常正常的事情，不必有过大的负担，合理饮食，规律作息，保持充足的精力和愉悦的心情，抗皱的效果比市面上一些打着“蛋白质分子”噱头的产品更有效，更健康。
羊软骨Ⅱ型胶原蛋白的提取纯化与鉴定 作者：肖旭，石文达，姚青，陈虎，王基云，李晓兵，高岭 【摘要】目的从羊肋软骨中提取纯化Ⅱ型胶原蛋白，并对其进行鉴定。方法选择羊肋软骨为原料经脱脂、脱钙后，用盐酸胍去除蛋白多糖，经胃蛋白酶消化、氯化钠盐析等步骤，提取纯化蛋白，然后进行鉴定。结果 4mol/L盐酸胍能有效去除蛋白多糖，用胃蛋白酶的限制性酶解结果满意；氯化钠盐析浓度为3mol/L时最佳。SDS-PAGE 电泳结果显示提取纯化的蛋白与Sigma公司的Ⅱ型胶原蛋白一致。Ⅱ型胶原蛋白最大吸收峰为212 nm。结论从羊肋软骨提取的Ⅱ型胶原蛋白纯度高，且符合II型胶原蛋白的特征。 【关键词】Ⅱ型胶原蛋白；软骨；蛋白多糖 Abstract: Objective To isolate and purify collagen type Ⅱ(CⅡ) from Sheep cartilage and to identify its purity. Methods The Sheep cartilages were collected as raw materials. After degreasing and decalcification, Guanidine hydrochloride was used to remove the proteoglycans. The digestion of pepsin, salting of sodium chloride were performed for extracting CⅡand identification. Results The proteoglycans could be efficiently removed by 4mol?L 1 guanidine hydrochloride. The results were obtained by limited enzyme digestion of pepsin added. The optimizing concentration of sodium chloride for salting CⅡwas 3mol?L 1. It was found that the protein and Sigma
开题报告 食品质量与安全 酶解法提取牛皮胶原蛋白的条件优化 一、选题的背景与意义 胶原蛋白，主要存在于动物的皮、骨、软骨、牙齿、肌腱、韧带和血管中，是结缔组织极重要的结构蛋白。由于胶原蛋白具有良好的物理性能和生物学特性，因而其被广泛的应用于化工、食品、医学、生物材料以及农业等诸多领域。因此，胶原蛋白的提取一直是研究的热点。 目前国际上已开发出许多胶原保健品和功能性胶原生物材料。相对于我国，其在胶原蛋白的基础研究上已经具有一些优势并拥有一定的国际专利，而且部分已经投入市场，形成一定的市场规模。而我国的高质量胶原蛋白基础研究还有差距，有关这方面的核心专利技术不多。 但就目前的消费趋势来看，我国胶原蛋白的需求量逐渐增加，特别是随着人们对饮食和健康的不断重视，因此市场前景较为关阔。另一方面在肉制品和制革加工过程中含有丰富胶原物质的副产物（皮、内脏、肉骨头）利用的附加值很低。这样既浪费资源又污染环境，利用这些废弃物生成胶原蛋白实现资源的合理和有价值的利用，实现经济和社会效益的双赢。 本实验的以牛肉制品的下脚料——牛皮为原料，利用酶解法提取胶原蛋白，同时通过试验条件的优化，得到较优的提取条件，为今后的进一步研究提供参考。 二、研究的基本内容与拟解决的主要问题： 基本内容： 1、对牛皮成分的测定：主要测其水分、脂肪、粗蛋白、胶原蛋白等。 2、酶制剂的选择和复合：选择两种胶原蛋白提取率比较高的酶，然后按一定比例进行 复合试验。 3、研究不同实验条件对胶原蛋白提取率的影响：通过对加酶量、水解pH、水解温度、 水解时间、固液比等因素进行单因素试验，并在此基础上进行正交试验得出优化的 工艺条件。 拟解决的问题： 1、如何选择合适的比例对两种单酶进行复合。 2、如何提高胶原蛋白的提取率。
用酶法从虎杖中提取白藜芦醇的工艺流程图 45—50℃, PH4.8±0.2,沿壁缓慢 加入HCl调节PH值,轻轻搅拌 加复合酶增加收率原因：一是植物细胞壁被破坏，使内容物溶出率增加；二是白藜芦醇苷在复合酶的作用下被转化成白藜芦醇。 可用复合酶SPE—002、SPE—007醇提前和醇提后的酶解结果与单独进行乙醇提取得率进行比较。
从茶叶中提取茶多酚 过滤 提取物 酶提法优点： ○1可以软化植物细胞壁，使有效成分最大限度溶出，提高收率；对茶叶进行复合酶法提取, 茶多酚提取率可达98 %以上; 酶解法提取的茶多酚中儿茶素相对含量较沸水提取的高出9 %～10 %。○2酶法提取茶多酚及多糖具有提取率高, 且茶多酚的主要活性成分———儿茶素氧化损失少, 原料茶叶不需粉碎○3节省时间，降低成本；
酶法提取红景天有效成分的工艺流程图 1、酶提法 红景天 SPE —001或007 提取物〈 2、醇提法（略） 3、水提法（略） 酶提法优点： ○1可以使植物细胞壁破裂，使有效成分最大限度溶出，提高收率； ○ 2可替代水提醇沉工艺，节省时间，降低成本； ○ 3可降解红景天中的氨基酸、多肽、多糖、易于滤过。 每次分别为3、2、1小时 粉碎
1、酶提法 菊花 SPE — 007 提取物 2、醇提法（略） 3、水提法（略） 酶提法、醇提法与水提法进行比较 SPE-007：主要用于破除植物细胞壁，使有效成分最大限度溶出。SPE-006：主要用于提取液的沉清，加快滤过速度，降低成本。 加7倍量水 60℃水浸泡30min 40℃温水，PH ：4.8 活化5—10min 1∶10倍量水溶解酶 用水煎煮3h 温度降至45-52℃，PH ：3.5—4.5,时间1.5h 提取液 用SPE-006（干物 质重量）的40ppm
毕业论文外文资料翻译 学院：生物科学与工程学院 专业：生物工程 姓名：李秀莉 学号：120302214 外文出处：Food Chemistry 190(2016) 186-193 附件： 1.外文资料翻译译文；2.外文原文。
附件1：外文资料翻译译文 响应面优化蛋壳膜中胃蛋白酶溶性胶原蛋白提取工艺关键词： 蛋壳膜、响应面优化法、胃蛋白酶溶性胶原蛋白 摘要： 本文利用响应面优化法（RSM）确定了自变量对蛋壳膜中胃蛋白酶溶性胶原蛋白（PSC）提取产率的影响。采用中心复合设计（CCD）的实验设计和结果分析方法，选取最有可能的条件范围进行了优化实验：NaOH浓度（X1：0.4-1.2mol/L）,碱处理时间（X2：6-30h），酶浓度（X3：15-75U/mg）以及水解时间（X4：12-60h）。实验数据用适当的统计学方法通过多元线性回归分析得到一个二阶多项式方程，分析表明最佳提取条件为：NaOH浓度为0.76mol/L，碱处理时间为18h，酶浓度为50U/mg，水解时间为43.42h。在最佳提取条件下的提取率实验值是30.049%，这与预测值30.054%高度一致。 1.前言 胶原蛋白是脊椎动物的主要结构蛋白，大约占一个动物总蛋白的30%（Muyonga, Cole, & Duodo, 2004)。胶原蛋白的分子结构由三个多肽α-链扭曲在一起形成的一个三股螺旋体。在所有胶原蛋白的“胶原域”都发现了(Gly-X-Y)n重复。X和Y的位置往往分别被脯氨酸和羟脯氨酸占用（Gelse, Poschl, & Aigener, 2003）。目前，至少已有27中胶原蛋白类型已确定，其氨基酸序列、分子结构和功能明显不同（Canty & Kadler, 2005; Cheng, Hsu, Chang, Lin, & Sakata, 2009）。胶原蛋白已被广泛用作医药、化妆品、生物医学和食品行业的材料（Cheng et al.,2009）。一般来说，工业应用的胶原蛋白的主要来源是牛与猪的皮肤和骨头。然而，阮病毒疾病的爆发，如海绵脑病（BSE），传染性海绵脑病（TSE）和口蹄疫（FMD），以及禽流感，导致一些消费者对从这些动物体提取的胶原蛋白和胶原蛋白产品的担忧。此外，以猪为原料提取胶原蛋白不能被犹太人和穆斯林接收（Liu, Liang, Regenstein, & Zhou, 2012; Regenstein & Zhou, 2007）。因此，全球对胶原蛋白的代替原料的需求增加了，如水生动物。但是，关于胶原蛋白提取的其他来源的信息是有限的。 蛋壳作为副产品大约占了一个鸡蛋总重量（60g）的10%（Nys, Bain, & Immerseel, 2011）。据估计每年在伊朗蛋制品工业都产生100000吨的蛋壳。蛋壳膜存在于白色液体和固体蛋壳内表面之间。胶原蛋白占蛋壳膜总蛋白含量的10%（MacNeil, 2006）。在蛋
鱼鳞胶原蛋白的提取方法 摘要：人口、资源和环境是当前全球性的重大问题，加强对水产品的废弃物鱼鳞的加工利用和实现渔业生产的可持续发展已成为当今热门研究课题。文章简述了鱼鳞的结构特点，介绍了目前对鱼鳞胶原蛋白的提取方法，旨在使人们了解鱼鳞的真正价值所在，为其开发利用作参考。 关键词：鱼鳞胶原蛋白提取方法 近年来，淡水鱼加工业随着我国淡水鱼产量的增长而得到了较快的发展，鱼品加工也越来越广泛。但是，许多淡水鱼加工过程仅局限于对鱼体肌肉的利用，而对鱼鳞等废弃物的加工利用甚少。每年淡水鱼加工业的废弃物总量达到200万吨以上，其中鱼鳞约占15%，即30万吨。若能合理利用，可有效减少环境污染，又可提高企业效益，因此加大对鱼鳞含有物质的利用，可应用多个行业，其利用价值巨大，发展前景广阔。 1 鱼鳞的结构与组成 鱼鳞是鱼体与外界接触的组织，是鱼类真皮层的变形物，通常占鱼体重量的1%~5%，起保护鱼体免受伤害的作用。通常鱼鳞可分为三种：(1)板鳃鱼所特有的木盾鳞；(2)斜方型、边缘相联的硬鳞；(3)最常见的骨鳞，在硬骨鱼中最多。鱼鳞主要由蛋白质，卵磷脂，羟基磷灰石和鸟嘌呤组成，其中有机物占41％一55％，钙盐38％～46％。蛋白质占总重的70％，主要为胶原蛋白和鱼鳞角蛋白。鱼鳞胶原蛋白主要为I型胶原。I型胶原蛋白为三股超螺旋结构，即三条多肽链每条都向左旋转形成左手螺旋结构，这三条肽链再以氢键相互结合形成右手超螺旋结构。这种结构非常稳定，胶原一般不溶于水和中性盐溶液、稀酸、稀碱及一般有机溶剂，溶于强酸和强碱。 2 鱼鳞胶原蛋白的提取方法 2.1鱼鳞提取胶原蛋白的前处理 在鱼鳞的前处理中主要做的是脱钙，方法主要有酸脱钙和EDTA脱钙。酸脱
收稿日期：２００６－０９－０２ ＊通讯作者基金项目：上海市科委科研项目（０３ＪＧ０５００１） 作者简介：王川（１９８１－），男，学士，研究方向为功能食品和食品生化技术。 几种酶法从猪皮中提取胶原蛋白的对比研究 王 川１，李 燕２，马志英１，＊，蓝蔚青２ （１．上海市食品研究所，上海 ２００２３５；２．上海水产大学食品学院，上海 ２０００９０） 摘 要：研究了用胰酶、木瓜蛋白酶和胃蛋白酶从猪皮中提取胶原蛋白。研究发现，猪皮的蛋白质含量约为２４．５９％，羟脯氨酸含量为２．３％。猪皮经酶解处理后，即得到胶原蛋白粗提取液，粗提液再经过透析、浓缩，最后进行冷冻干燥，可得到纯度较高的胶原蛋白制品。研究结果显示：三种酶处理猪皮，其中以胰酶提取物得率最高，但结构破坏较严重，用胃蛋白酶提取的胶原蛋白制品的结构最完整，色泽最为洁白，但得率最低。关键词：胶原蛋白；酶解；羟脯氨酸；提取 Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ Ｓｔｕｄｙ ｏｎ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｏｌｌａｇｅｎ ｆｒｏｍ Ｐｏｒｃｉｎｅ Ｓｋｉｎ ｂｙ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ Ｅｎｚｙｍｅｓ ＷＡＮＧ Ｃｈｕａｎ１，ＬＩ Ｙａｎ２，ＭＡ Ｚｈｉ－ｙｉｎｇ１，＊，ＬＡＮ Ｗｅｉ－ｑｉｎｇ２（１．Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｆｏｏｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ， Ｓｈａｎｇｈａｉ ２００２３５， Ｃｈｉｎａ； ２．Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｆｏｏｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ， Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｆｉｓｈｅｒｉｅｓ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｓｈａｎｇｈａｉ ２０００９０， Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ ：Ｔｈｉｓ ｐａｐｅｒ ｈａｓ ｓｔｕｄｉｅｄ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｃｏｌｌａｇｅｎ ｆｒｏｍ ｐｏｒｃｉｎｅ ｓｋｉｎ ｂｙ ｔｒｙｐｓｉｎ， ｐａｐａｉｎ ａｎｄ ｐｅｐｓｉｎ． Ｔｈｅｒｅ ｈａｖｅ ｂｅｅｎｆｏｕｎｄ ｔｏ ｃｏｎｔａｉｎ ２４．５９％ ｐｒｏｔｅｉｎ， ａｎｄ ２．３％ ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｌｉｎｅ， ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ ｏｆ ｐｏｒｃｉｎｅ ｓｋｉｎ． Ｃｏｌｌａｇｅｎ ｆｒｏｍ ｐｏｒｃｉｎｅ ｓｋｉｎ ｗａｓｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｂｙ ｔｈｒｅｅ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ｅｎｚｙｍｅｓ． Ａｆｔｅｒ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｉｔ ｗａｓ ｐｕｒｉｆｉｅｄ ｆｕｒｔｈｅｒ ｂｙ ｄｉａｌｙｚｉｎｇ， ｃｏｎｄｅｎｓｉｎｇ ａｎｄ ｌｙｏｐｈｉｌｉｚｉｎｇ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄ： Ａｍｏｎｇ ｔｈｅ ｃｏｌｌａｇｅｎｓ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｂｙ ｔｈｒｅｅ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ｅｎｚｙｍｅｓ， ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ ｔｒｙｐｓｉｎ ｉｓ ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ， ｂｕｔ ｔｈｅ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｏｆ ｃｏｌｌａｇｅｎ ｉｓ ｓｅｖｅｒｅｌｙ ｄｅｓｔｒｏｙｅｄ， ｗｈｉｌｅ ｔｈｅ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｃｏｌｌａｇｅｎ ｂｙ ｐａｐａｉｎ ｉｓ ｔｈｅ ｂｅｓｔ， ａｎｄ ａｌｓｏ ｔｈｅ ｗｈｉｔｅｎｅｓｓ ｗａｓ ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ ａｍｏｎｇｔｈｅ ｃｏｌｌａｇｅｎｓ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ， ｂｕｔ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｉｓ ｔｈｅ ｌｏｗｅｓｔ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｃｏｌｌａｇｅｎ；ｅｎｚｙｍａｔｉｃ ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ；ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｌｉｎｅ；ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ 中图分类号：Ｑ８１４．９ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００２－６６３０（２００７）０１－０２０１－０４ 胶原蛋白是构成动物支持组织的结构蛋白质，能有 效地增加皮肤组织细胞的储水功能［１］，增加肌肤弹性，保持皮肤柔软、细嫩，也能使人体内的血管和神经保持韧性和弹性，头发光亮，对人体抗衰老及美容具有特殊功效［２］。 从动物组织中提取胶原蛋白，常用的方法有：碱法、酸法、酶法和热处理等［３－６］。利用酶法提取胶原蛋白，具有较高的回收率，水解反应速度快，时间短，无环境污染等优点。酶法提取的水解胶原蛋白纯度高，水溶性好，理化性质稳定。 目前国际上已开发出许多胶原保健品和功能性胶原生物材料。其在胶原蛋白的基础研究上具有一些优势，拥有一定的国际专利，并形成部分的市场规模。目前我国的高质量胶原蛋白基础研究还有差距，有关这方面的核心专利技术不多。就目前的消费趋势来看，我国胶原蛋白的需求量逐渐增加，因此市场前景较为广阔。另一方面在肉制品加工过程中含有丰富胶原物质的副产 物（皮、内脏、肉骨头）利用的附加值很低，既浪费资 源又污染环境。利用这些废弃物生产胶原蛋白，可以实现资源的合理和有价值的利用，实现经济和社会效益的双赢。 本文分别用胰酶、木瓜蛋白酶和胃蛋白酶对猪皮进行胶原蛋白的提取，并对酶解提取物进行分子量、特性粘度、羟脯氨酸含量测定，对比其结果，对酶法提取胶原蛋白进行对比研究，为进一步对不同用途和性能的胶原蛋白研究提供技术基础。１材料与方法 １．１ 原料 选用经检疫合格的生猪，屠宰后生剥皮。初步处理后，－１８℃冻藏备用，实验时４℃解冻。１．２ 仪器 分光光度计（Ｕｎｉｃｏ ＵＶ－２０００）；Ｃｈｒｉｓｔ冻干机 （Ａｌｐｈ Ａ１－２）；Ｂｅｃｋｍａｎ高速离心机（ＬＧ１０－２．４Ａ）；凯
龙源期刊网 https://www.doczj.com/doc/fb8366071.html, 胶原蛋白肽粉的提取工艺 作者：蔡比泰 来源：《现代食品·下》2017年第03期 摘要：作为一种新兴的功能型蛋白配料，胶原蛋白肽近年来在国内外受到广泛关注，取 得了快速发展。本文主要分析胶原蛋白肽的功能特性以及提取工艺，并提出未来胶原蛋白肽产品的发展趋势，以供相关企业参考。 关键词：胶原蛋白肽；胶原蛋白；提取工艺 Abstract：As a new type of functional protein ingredient， collagen peptide has been paid more and more attention in recent years. In this paper， the functional properties and extraction technology of collagen peptide were analyzed， and the future development trend of collagen peptide was put forward， for reference to relevant enterprises. Key words：Collagen peptide； Collagen； Extraction technology 中图分类号：TS254.4 在国家经济水平不断提升的今天，人们更加关注生活质量和个人身体质量。而胶原蛋白肽产品以其良好的补水、锁水、抗氧化、抗肿瘤和起泡性等功能，被越来越多的应用于各种护肤、药物以及食品中。 1 胶原蛋白肽概述 胶原蛋白是一种纤维性蛋白质，广泛存在于动物的骨骼、皮肤、毛发和血管中，主要起到支持、维护和修复机体的作用。胶原蛋白的主要构成物质是氨基酸，经过水解之后会生成胶原蛋白肽以及副产品氨基酸。下面将从两个方面阐述胶原蛋白肽。 1.1 胶原蛋白肽的理化性质 由于胶原蛋白肽的分子量比较小，比胶原蛋白更容易溶解。在浓度达到50%的情况下，胶原蛋白肽依然不会出现浑浊现象，且黏稠度非常低。此外，在一般的pH下，其溶解度会增强。正是由于这些特性，胶原蛋白肽在饮料等产品中的应用非常广泛。 1.2 胶原蛋白肽的功能特性 胶原蛋白肽是胶原蛋白水解后制成的，大量的亲水基团暴露在外面，胶原蛋白肽的吸水性能和锁水性要比胶原蛋白强很多。所以，胶原蛋白肽被大量应用于护肤品中，主要起到锁住皮肤的水分以及补水的功效。胶原蛋白肽还经常作为食品添加剂被广泛应用到食物烹饪中，主要
实验21 胶原蛋白的提取工艺研究 一、实验目的 1．掌握胶原提取与分离的工艺方法。 2．掌握冷冻离心机的使用。 3．了解胶原提取的实验原理。 二、实验原理 胶原是生物体内一种纤维蛋白，主要存在于皮肤、骨、软骨及肌腱等组织中，占人体或其他动物体总蛋白含量的25～33%。胶原分为可溶性胶原和不溶性胶原。随着年龄的增长，胶原分子间出现共价键架桥。这些架桥大多位于胶原分子N及c端的非胶原性肽(端肽)部分，因而易被蛋白酶切断。在酸性条件下，以胃蛋白酶处理(底物﹕酶＝20～100﹕1)或中性条件下经木瓜蛋白酶处理，被切除部分端肽的胶原分子便变为可溶性。本实验采用胃蛋白酶消化法从猪皮或肌腱中提取胶原蛋白。 三、主要仪器与试剂 1．主要仪器 控温磁力搅拌器，高速组织捣碎机，酸度计（或pH试纸），高速冷冻离心机。 2．试剂 猪皮或肌腱，胃蛋白酶，醋酸，硫酸铜，硫酸钾，氢氧化钠，硫酸，硼酸，盐酸。 四、实验步骤 安全预防：醋酸具有刺激性气味，需要在通风橱中进行。 1．原料前处理 将新鲜猪皮或肌腱去脂肪、筋膜后，切成5 mm以下的薄片，越少越有利于提取胶原蛋白。然后除血，脱脂，再用蒸馏水漂洗干净，晾干备用。前处理时必须充分去除脂肪组织，胶原中一旦有脂质混入，无论是进行中性，还是酸性沉淀溶解都是不能去除的，最后只能得到乳浊状的胶原溶液。 2．胶原蛋白的提取 将上述预处理好的猪皮或肌腱称重后放入三角烧瓶中，分别加入一定量的酶和一定浓度的乙酸溶液进行水解，控制温度4 ℃左右缓慢搅拌3 d，然后用高速冷冻离心机以4000 r·min －1离心，取上清溶液，即可得粗提胶原蛋白溶液。 3．胶原蛋白提纯 在粗提胶原蛋白溶液缓慢加入6mol·L－1氢氧化钠溶液调节pH值到7，冷冻离心除掉沉淀物，在剩余的溶液中加入氯化钠固体研细粉末，缓慢搅拌，4 ℃静置过夜保存。离心取沉淀，用稀醋酸再次溶解，将溶解液装入透析袋中，用质量分数分别为0.1%的乙酸溶液透析1 d，再用蒸馏水透析，最后得到的是纯度较高的胶原蛋白水溶液。 4．蛋白质含量的测定 凯氏定氮法。 五、思考题 1．原料前处理时，为什么必须充分去除脂肪组织？ 2．胶原蛋白提纯过程中，在剩余溶液中加入氯化钠的作用是什么？ 3．酶解时，对提取温度和pH值有何要求？ 参考文献