食品中苯甲酸、山梨酸与糖精钠的测定
高效液相色谱法 2、1原理 不同样品经提取后,将提取液过滤,经反相高效液相色谱分离测定,根据保留时间定性,外标峰面积定量。 2、2试剂与材料 除另有说明外,所用试剂均为分析纯,实验用水符合GB/T 6682要求。 2、2、1 甲醇:色谱纯。 2、2、2 乙酸铵溶液:称取1、54g乙酸铵,加水溶解并稀释至1000mL,经微孔滤膜过滤。 2、2、3 亚铁氰化钾溶液:称取106g亚铁氰化钾[K 4Fe(CN) 6 ·3H 2 O]加水至1000mL。 2、2、4 乙酸锌溶液:称取220g乙酸锌[Zn(CH 3COO) 2 ·2H 2 O]溶于少量水中,加入 30mL冰醋酸,加水稀释至1000mL。 2、2、5 氨水(1+1):氨水与水等体积混合。 2、2、6 正己烷。 2、2、7 pH4、4乙酸盐缓冲溶液: a)乙酸钠溶液:称取6、80g乙酸钠(CH 3COONa·3H 2 O),用水溶解后定容至1000mL。 b)乙酸溶液:称取4、3mL冰乙酸,用水稀释至1000mL。 将上述两种溶液按体积比37:63混合,即得pH4、4乙酸盐缓冲溶液。 2、2、8 pH7、2磷酸盐缓冲溶液: a)称取23、88g磷酸氢二钠(Na 2HPO 4 ·12H 2 O),用水溶解后定容至1000mL。 b)称取9、07g磷酸二氢钾(KH 2PO 4 ),用水溶解后定容至1000mL。 将上述两种磷酸盐溶液按体积比7:3混合,即得pH7、2磷酸盐缓冲液。 2、2、9 标准溶液的配制: a)苯甲酸标准储备液:准确称取0、2360g苯甲酸钠,加水溶解并定容至200mL。此溶液每毫升相当于含苯甲酸1、00mg。 b)山梨酸标准储备液:准确称取0、2680g山梨酸钾,加水溶解并定容至200mL。此溶液每毫升相当于含山梨酸1、00mg。 c)糖精钠标准储备液:准确称取0、1702g糖精钠(C 6H 4 CONNaSO 2 )(120℃烘干
高效液相色谱法测定酱油中苯甲酸含量 发表时间：2019-11-27T13:34:26.213Z 来源：《中国西部科技》2019年第24期作者：雷学梅 [导读] 本文提供一种高效液相色谱法测定酱油中苯甲酸含量的实验方法，通过实验分析：苯甲酸标准溶液在2.5mg/L～50mg/L内线性良好，其线性相关系数为0.9991，加标回收率为91.7%，测量结果的相对标准偏差（RSD）为2.77%，苯甲酸的检测限为0.90mg/kg。该法简单，快速，具有良好的准确度和灵敏度，可用于酱油中苯甲酸的快速定量检测。 【摘要】本文提供一种高效液相色谱法测定酱油中苯甲酸含量的实验方法，通过实验分析：苯甲酸标准溶液在2.5mg/L～50mg/L内线性良好，其线性相关系数为0.9991，加标回收率为91.7%，测量结果的相对标准偏差（RSD）为2.77%，苯甲酸的检测限为0.90mg/kg。该法简单，快速，具有良好的准确度和灵敏度，可用于酱油中苯甲酸的快速定量检测。 1 概述 酱油是我国传统的、使用最广的调味品，它赋予食品以适当的色、香、味，具有调味之功用。由于酱油营养丰富，适于微生物生长繁殖，为了防止酱油腐败变质，保持酱油的鲜度和良好的品质，达到其对保质期的要求，酱油中一般都会添加防腐剂苯甲酸。因此在酱油的卫生检测中，苯甲酸是一个较为重要的指标。苯甲酸作为防腐剂，由于它们都是人工合成的，过量摄入会对人体造成一定损害。 食品添加剂卫生标准《GB 2760-2014 食品安全国家标准食品添加剂使用标准》作为现行中华人民共和国国标，批准并允许在我国使用的食品防腐剂中最常见的是苯甲酸，并且规定在酱油中苯甲酸最大允许使用量为1.0g/kg。因此，测定苯甲酸的含量，控制其生产使用量，把可能存在的任何风险降低到最低限度，科学保护消费者的利益和健康，是十分必要的，而且具有重要的现实意义。 2 实验部分 2.1 仪器与试剂 （1）仪器：美国Agilent公司1100型高效液相色谱仪；昆山市超声仪器厂KQ-100TDB超声波清洗器；Millipore公司Milli-Q超纯水机。 （2）试剂：色谱纯甲醇；超纯水；色谱纯乙酸铵；10.6%亚铁氰化钾；22%乙酸锌；1.0mg/mL苯甲酸。 2.2 色谱条件 色谱柱：Agillent C18柱（250mm×4.0mm×5μm）；柱温：30℃；紫外检测波长：230nm；流动相：甲醇：0.02mol/L乙酸铵（7∶93）；流速：1.0mL/min；进样体积：10μL。 2.3 样品处理 取样10g，于100mL容量瓶中，加入20mL-30mL纯水混匀，加入10.6%亚铁氰化钾、22%乙酸锌各5.0mL，加水至刻度混匀，静置30min 后用滤纸过滤，取滤液过0.45μm滤膜，待测。 2.4 标准曲线的制作 分别移取浓度为1.0mg/mL的苯甲酸标准储备液0.25mL，0.5mL，1mL，2mL，5mL，至100mL容量瓶中，用水稀释成浓度分别为 2.5μg/mL，5.0μg/mL，10.0μg/mL，20.0μg/mL，50.0μg/mL的混合标准使用溶液，按上面的色谱条件进样分析，以标准浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，制作标准曲线。 3 结果与讨论 3.1 高效液相色谱条件的选择 乙酸铵缓冲液（0.02mol/mL）作为流动相体系，以抑制苯甲酸的电离效应。实验采用Agillent C18柱（250mm×4.0mm×5μm），通过调整甲醇与乙酸铵的比例，发现当甲醇：乙酸铵为7∶93时，苯甲酸可与干扰峰完全分离，且保留时间适当，分离度较好。 3.2 标准工作曲线 分别配制苯甲酸标准系列溶液，绘制标准工作曲线，结果表明：苯甲酸在2.5mg/L-50mg/L内线性良好，相关系数分别为0.9991，苯甲酸标准曲线如图1。若按本方法中的取样量和定容体积计算，按S/N=3确定检出限，则苯甲酸的检出限分别为0.90mg/L。
苯甲酸在食品中的应用情况 摘要：防腐剂与我们的生活息息相关，它是用以保持食品原有品质和营养价值为目的的食品添加剂，它能抑制微生物活动、防止食品腐败变质从而延长保质期，苯甲酸是常用的防腐剂之一，在食品生产中应用较多，本文就从苯甲酸的性质、防腐机理、安全性（对人体的影响）、在食品中的使用情况以及其发展趋势进行研讨。 关键字：添加剂、防腐剂、防腐机理、苯甲酸、安全性、发展趋势 正文： 一、苯甲酸的性质 苯甲酸是常用的防腐剂之一。苯甲酸，别名安息香酸，分子式为：C 7H 6 O 2 ；相对 分子量: 122.12 呈白色有荧光的鳞片状结晶或针状结晶，或单斜棱晶，质轻无味或微微有安息香或苯甲醛的气味；蒸汽压: 0.13kPa/96℃；闪点：121℃；熔点: 121~123℃；沸点：249.2℃；溶解性: 微溶于水，溶于热水，溶于乙醇、乙醚、氯仿、苯、四氯化碳、丙酮、二硫化碳和挥发性、非挥发性油中，微溶于乙烷；苯甲酸的相对密度(水=1)1.2659；相对密度(空气=1)4.21；稳定性: 稳定，但可吸潮。 苯甲酸为一元芳香羧酸，酸性较弱，其25%（质量）饱和水溶液的pH值为2.8，所以其杀菌、抑菌作用随介质的酸度增高而增强。在碱性介质中则失去杀菌、抑菌作用。pH值为3.5时，0.125%（质量）的溶液在1h内可杀死葡萄球菌和其他菌；pH值为4.5时，对一般菌类的抑制最小溶液含量约为0.1%（质量）；pH值为5时，即使5%（质量）的溶液，杀菌效果也不可靠；其防腐的最适pH 值为2.5~4.0。 二、苯甲酸的防腐机理
苯甲酸类防腐剂]1[是以其未离解的分子发生作用的，未离解的苯甲酸亲油性强，易通过细胞膜，进入细胞内，干扰霉菌和细菌等微生物细胞膜的通透性，阻碍细胞膜对氨基酸的吸收，进入细胞内的苯甲酸分子，酸化细胞内的储碱，抑制微生物细胞内的呼吸酶系的活性，从而起到防腐作用（侯振建，2004）。 苯甲酸是一种广谱抗微生物试剂，对酵母菌、霉菌、部分细菌作用效果很好，在允许最大使用范围内，在pH值4．5以下，对各种菌都有抑制作用。 三、苯甲酸的安全性（对人体的影响） 为确保食品添加剂的绝对安全使用，世界各国对各种食品添加剂能否使用、适用范围和最大使用量，都有严格的规定，要受法规法律的制约。在国际上被公认的食品添加剂安全性指标有LD 、50GRAS 和ADI（凌关庭，2003）LD （大鼠，经口）是判断食品添加剂安全性的常50用指标，也是任何食品添加剂都必须进行的毒理学评价中的第一个阶段急性毒性试验指标，LD越大表明其毒性越小，在食品使用时其安全性越高，根据我国卫生部《食品安全性毒理学评价标准》（1994）的毒性划分规定，苯甲酸和苯甲酸钠属于实际无毒类，而肉制品中常用作发色剂的亚硝酸钠LD为220 mg．kg－1，属于中等毒类。 GRAS 是美国FDA 评价食品添加剂的安全性指标。根据FDA的规定，苯甲酸（FDA，§184．1021，2000 ）被列为一般公认的安全类食品添加剂（GRAS）。ADI（Acceptable Daily Intakes）值为每日人体每千克体重允许摄入的毫克数，数值是由FAO/WHO（1994）规定的，苯甲酸在食品中的使用量为0．2－1g/kg。只要按照国标规定的添加量使用是不会有安全问题的。 世界各国多年来的应用和毒性试验表明，如按0．06g/kg添加，苯甲酸均无蓄积性、致癌、致畸、致突变和抗原等作用。苯甲酸在体内能很快被吸收，苯甲酸会与甘氨酸结合形成马尿酸（甘氨酸苯甲酰），其余的会与葡萄糖醛酸结合而形成1－苯甲酰葡萄糖醛酸。75－80%的苯甲酸在6h内从人体排出]2[，10－14h
食品中总酸的测定 1.实验原理 食品中的酒石酸、苹果酸、柠檬酸、草酸、醋酸等有机酸，其电离常数Ka均大于10^(-8),可以用强碱标准溶液直接滴定试样中的酸，以酚酞为指示剂确定滴定终点。按碱液的消耗量计算食品中的总酸含量。测定结果包括了未离解的酸的浓度和已离解的酸的浓度。 2.仪器与试剂 （1）仪器酸碱滴定装置；分析天平，感量分别为0.0001g及0.001g；组织捣碎机；研钵。 （2）实验用水实验用水应符合GB/T6682规定的二级水规格或蒸馏水，使用前应经煮沸，冷却。 （3）试剂 ①NaOH标准滴定溶液（0.1mol/L） ②1%酚酞溶液称取1g酚酞，溶于60ml95%乙醇中，用水稀释 至100ml。 3.实验步骤 （1）样品预处理 ①固体样品。取有代表性的固体样品至少200g，用捣碎机捣碎 至均匀，置于密闭玻璃容器内。 ②固、液样品。取按比例组成的固、液样品至少200g，用研 钵或组织捣碎机捣碎混匀后置于密闭的玻璃容器内。
③含二氧化碳的液体样品。至少取200g样品至500ml烧杯中置于电炉上，边搅拌边加热至微沸腾，保持2min，冷却，称量，用煮沸过的水补至煮沸前的质量，置于密闭玻璃容器中。 ④不含二氧化碳的液体样品。充分混匀均匀，置于密闭玻璃容器内。 （2）测定试液的制备 ①液体样品。若总酸含量小于或等于4g/kg，将试液用快速滤纸过滤。收集滤液，用于测定。若总酸含量大于4g/kg，称取10~50g 样品，用煮沸过的水定容至250ml，过滤。收集滤液，用于测定。 ②固体、半固体样品。称取均匀样品10~50g，精确至0.001g，置于烧杯中。用约80 煮沸过的水150ml将烧杯中的内容物转移到250ml容量瓶中，置于沸水浴中煮沸30min（摇动2~3次，使试样中的有机酸全部溶解于溶液中），取出，冷却至室温，用煮沸过的水定容至250ml。用快速滤纸过滤。收集滤液，用于测定。 （3）样品测定 ①准确吸取试样滤液25~50ml，使之含0.035~0.07g酸，置于250ml 锥形瓶中，加水40~60ml及0.2 1%的酚酞指示剂，用0.1mol/L NaOH 标准溶液滴定至微红色且30s不褪色。记录消耗0.1mol/L NaOH标准滴定溶液的体积（V1）。同一被测样品须滴定两次。 ②用水代替样品做空白试验，操作相同。记录消耗0.1mol/L NaOH 标准滴定溶液的体积（V2）。 （4）实验数据记录见表
高效液相色谱法检测酱油中的苯甲酸钠 1．原理 酱油样品经酸化后，用乙醚提取苯甲酸，定容过滤后进高效液相色谱仪，经反相色谱分离后，根据保留时间定性和峰面积定量。 2．试剂 2.1甲醇:分析纯，经滤膜（HF 0.5）过滤； 2.2无水乙醚：分析纯； 2.3无水乙醇：分析纯； 2.46N盐酸：取36~38%的盐酸500ml，定容至1000ml； 2.54%氯化钠溶液：称取40.0g氯化钠,定容至1000ml； 2.60.02M乙酸铵溶液：1.54g乙酸铵定容至1000ml,溶解后经滤膜(HA 0.45)过滤； 2.7苯甲酸标准储备液：称取苯甲酸0.1000g加2%碳酸氢钠溶液1ml,搅 拌溶解,加水定容到100ml，苯甲酸浓度为1mg/ml； 2.8苯甲酸标准使用液：取苯甲酸标准储备液10ml，放入100ml容量瓶 中，定容至刻度，苯甲酸浓度为0.1mg/ml。 3．高效液相色谱条件 3.1Spectra-Physics 高效液相色谱仪； 3.2色谱柱：Spherisorb ODS1 Ф 4.6mm200mm； 3.3检测器：紫外检测器，波长230nm，灵敏度0.2 AUFS；
3.4流动相：甲醇:0.02M乙酸铵（5：95）； 3.5流速：1ml/min； 3.6进样量：10l； 3.7允许差：相对误差≤10%。 4．操作方法： 4.1样品预处理： 称取均匀的酱油样品5.0g放入125ml的分液漏斗中，加入6N盐酸1ml酸化，用15﹑10ml无水乙醚萃取两次，合并乙醚放入125ml分液漏斗中，用4%的氯化钠溶液约10ml分别洗涤两次，将洗涤后的乙醚移入80ml蒸发皿中，温水浴挥干，分别用10ml无水乙醇洗涤蒸发皿两次，放入100ml容量瓶中，再用蒸馏水洗涤蒸发皿两次，并入上容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，用0.45（HA）滤膜过滤，供高效液相色谱测定用。4.2测定操作： 开机预热30min并对流动相进行脱气操作，待流动相流速恒定及检测器稳定后，用25l微量进样器吸取供试液进样，绘图积分，得供试样品的吸收峰面积，并进样测定苯甲酸标准吸收峰的面积，根据计算公式算出样品中苯甲酸的含量。 4.3计算公式： A i C o 1 C i = —————— n —— A o m 式中Ci——样品中苯甲酸的含量;
图-1标准物质色谱图 表-1标准物质色谱图积分结果 积分结果 序号峰名称保留时间峰面积峰高相对峰面积相对峰高样品量 min mAU*min mAU % % 1 2.780 1.436 8.774 0.87 3.99 n.a. 2 3.090 0.068 0.304 0.04 0.14 n.a. 3 3.893 0.069 0.267 0.0 4 0.12 n.a. 4 山梨酸钾11.583 59.573 94.722 36.17 43.02 0.1556 5 苯甲酸钠16.460 103.564 116.092 62.88 52.73 0.1553 总和: 164.710 220.159 100.00 100.00 表-2 标准溶液的测定 峰面积（单位:mAU*min） 0.02mg/ml 0.04mg/ml 0.08mg/ml 0.16mg/ml 0.32mg/ml 山梨酸钾 5.771 14.91 28.717 59.573 123.639 苯甲酸钠10.277 24.129 52.067 103.564 214.488
山梨酸钾 图-3 待测物质色谱图 表-4 待测物质积分结果分析 积分结果 序号峰名称保留时间峰面积峰高相对峰面积相对峰高样品量min mAU*min mAU % % 1 1.683 2.843 3.058 4.00 0.57 n.a. 2 2.24 3 5.267 93.777 7.41 17.38 n.a. 3 2.290 14.12 4 174.078 19.88 32.27 n.a. 4 2.360 13.416 115.601 18.89 21.43 n.a. 5 2.630 1.363 17.059 1.92 3.1 6 n.a. 6 2.69 7 0.562 11.160 0.79 2.07 n.a. 7 2.830 0.243 3.887 0.34 0.72 n.a. 8 2.933 1.076 10.714 1.51 1.99 n.a.
食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定
高效液相色谱法 ２.1原理 不同样品经提取后，将提取液过滤，经反相高效液相色谱分离测定,根据保留时间定性，外标峰面积定量。 ２。２试剂和材料 除另有说明外,所用试剂均为分析纯，实验用水符合GB/Ｔ 6６82要求。 2.2。１甲醇：色谱纯。 2.2.2 乙酸铵溶液：称取1.5４g乙酸铵，加水溶解并稀释至１00０mＬ,经微孔滤膜过滤。 2。2。３亚铁氰化钾溶液:称取10６g亚铁氰化钾[Ｋ 4Ｆe（CN） 6 ·3Ｈ ２ Ｏ］加 水至1000mＬ。 ２。2.4 乙酸锌溶液：称取2２0g乙酸锌[Zn(ＣH 3CＯＯ) 2 ·2Ｈ 2 O］溶于少量水 中,加入30mＬ冰醋酸,加水稀释至100０mL。2。２．5 氨水(1+１）：氨水与水等体积混合. 2。2。6 正己烷. 2.2．7 pH4。4乙酸盐缓冲溶液: a）乙酸钠溶液:称取6．80ｇ乙酸钠（CH 3COONa·３H ２ Ｏ），用水溶解后定容至1 ０00mL。 b）乙酸溶液：称取４。3mL冰乙酸，用水稀释至１0０0mL。 将上述两种溶液按体积比37：63混合，即得pＨ4．4乙酸盐缓冲溶液. 2．2.８ pＨ7.2磷酸盐缓冲溶液: a）称取2３．88g磷酸氢二钠(Na 2ＨPO 4 ·12Ｈ ２ Ｏ)，用水溶解后定容至1０ ００mＬ。 b）称取９.07g磷酸二氢钾（ＫH 2PO 4 ），用水溶解后定容至1０00mL。 将上述两种磷酸盐溶液按体积比7:3混合,即得pＨ7。２磷酸盐缓冲液. 2.2。9 标准溶液的配制: a）苯甲酸标准储备液：准确称取0.２360g苯甲酸钠，加水溶解并定容至200ｍL。此溶液每毫升相当于含苯甲酸1．00mg。
学号姓名 实验三食品中总酸的测定（滴定法） 一、实验原理 果汁具有酸性反应，这些反应取决于游离态的酸以及酸式盐存在的数量。总酸度包括未解离酸的浓度和已解离酸的浓度。酸的浓度以摩尔浓度表示时，称为总酸度。含量用滴定法测定。果蔬中含有各种有机酸，主要有苹果酸、柠檬酸、酒石酸、草酸……。果蔬种类不同，含有机酸的种类和数量也不同，食品中酸的测定是根据酸碱中和的原理，即用标定的氢氧化钠溶液进行滴定。 二、材料、仪器与试剂 （一）材料：西红柿、苹果、果汁等 （二）仪器：碱式滴定管（20mL）、容量瓶（100mL）、移液管（10mL）、烧杯（100mL）、研钵或组织捣碎机、100ml量筒(量酒精)、1%酚酞指示剂、胶头滴管/滴瓶、容量瓶（1000mL）、布氏漏斗+滤纸、天平、三角烧瓶、洗瓶、活性炭（脱色）、和板、蒸馏水。 （三）试剂 1）．0.1mol/L氢氧化钠：称4.0g氢氧化钠定容至1000mL，然后用0.1mol/L邻苯二甲酸氢钾标定，若浓度太高可酌情稀释。 2）．1%酚酞指示剂：称1.0g酚酞，加入100mL50%的乙醇溶解。 三、操作步骤 1）0.1mol/L NaOH标准溶液的标定：将基准邻苯二甲酸氢钾加入干燥的称量瓶内，于105-110℃烘至恒重，用减量法准确称取邻苯二甲酸氢钾约0.6000克，置于250 mL锥形瓶中，加50 mL无CO2蒸馏水，温热使之溶解，冷却，加酚酞指示剂2-3滴，用欲标定的0.1mol/L NaOH溶液滴定，直到溶液呈粉红色，半分钟不褪色。同时做空白试验。 2）样品的处理与测定：准确称取混合均匀磨碎的样品10.0g（或吸10.0mL样品液），转移到100mL容量瓶中，加蒸馏水至刻度、摇匀。用滤纸过滤，准确吸取滤液20mL放入100mL 三角瓶中，加入1%酚酞2滴，用标定的氢氧化钠滴定至初显粉色在0.5min内不褪色为终点，记下氢氧化钠用量，重复三次，取平均值。 四、实验结果 式中：V——样品稀释总体积（mL）V1——滴定时取样液体积V2——消耗氢氧化
第22卷,第5期光 谱 实 验 室 Vol .22,No .5 2005年9月 Chinese J ournal of Spectrosco py Labora tory September ,2005 HPLC 测定糕点类食品中的苯甲酸 1联系人,电话:(0754)8674054;E-mail:ywfang @https://www.doczj.com/doc/fb13692555.html, 作者简介:徐宁(1975—),男,广东省汕头市人,助理工程师,主要从事化学分析检测和质量检验工作。收稿日期:2005-07-09 徐宁 1 (汕头质量计量监督检测所 广东省汕头市金砂路中段 515041) 摘 要 以亚铁氰化钾和乙酸锌作为沉淀剂对糕点类食品进行预处理,并用HP LC 法测定处理后样品溶液中苯甲酸的含量。方法加标回收率为91.52%—103.20%,相对标准偏差小于2.25%,苯甲酸检出限为0.50mg /L 。该方法操作方便,分析速度快,结果准确。 关键词 高效液相色谱,苯甲酸,糕点类食品。 中图分类号:O 657.7+2 文献标识码:A 文章编号:1004-8138(2005)05-1105-03 1 引言 糕点类食品的主要原料是面粉,奶油。我国食品卫生标准明文规定,糕点类食品不能添加苯甲酸[1],但为了颜色的美观,一些面粉厂商仍在面粉中添加过氧化苯甲酰,该物质最终以苯甲酸的形式存在。一些奶油厂家也可能为节约成本而在奶油中添加苯甲酸。因此,准确测定糕点类食品中苯甲酸的含量,对于保护人们身体健康有重要意义。 目前,食品中苯甲酸的检验方法主要有薄层色谱法[2]、气相色谱法[3],液相色谱法[4]等。其中薄层色谱法和气相色谱法都是将样品酸化后用有机溶剂多次萃取,这种方法费时费力,苯甲酸的损耗较大。液相色谱法主要用于汽水饮料、果汁及酒类等食品中苯甲酸含量的测定,而用于糕点类这种高蛋白高脂肪食品中苯甲酸的测定,还鲜见文献报道。本文采用亚铁氰化钾和乙酸锌作为沉淀剂,用以去除糕点类食品中的蛋白质和油脂等杂质,并用HPLC 测定苯甲酸的含量,取得了满意的结果。 2 实验部分 2.1 样品与试剂 糕点类食品:市售蛋糕类食品。 试剂:甲醇,专用试剂;乙酸铵,优级纯;亚铁氰化钾,分析纯;乙酸锌,分析纯;碳酸氢钠,分析纯(广州化学试剂厂)。 苯甲酸标准溶液,1.0mg/mL(国家标准物质研究中心)。实验用水为蒸馏水。
紫外可见分光光度法测食品中苯甲酸含量实验目的 １、掌握紫外分光光度计的使用方法及正确操作方法； ２、了解不同食品中防腐剂测定的预处理方法及测定方法； 实验原理 为了防止食品在储存、运输过程中发生腐败、变质，常在食品中添加少量防腐剂。防腐剂使用的品种和用量在食品卫生标准中都有严格的规定，苯甲酸及其钠盐、钾盐是食品卫生标准允许使用的主要防腐剂之一。其使用量一般在0.1%左右。苯甲酸具有芳香结构，在波长225nm和272nm处有K吸收带和B吸收带。 由于食品中苯甲酸用量很少，同时食品中其它成分也可能产生干扰，因此一般需要预先将苯甲酸与其它成分分离。从食品中分离防腐剂常用的方法有蒸馏法和溶剂萃取法等。本实验测定雪碧中苯甲酸，样品不用处理，苯甲酸（钠）在225nm处有最大吸收，可在225nm 波长处测定标准溶液及样品溶液的吸光度，绘制标准曲线法，可求出样品中苯甲酸的含量。实验步骤 一、样品处理: 液体样品: 取酱油10ml于１２５ml分流漏斗中，加入(1+2v)盐酸溶液２ml进行酸化，用无水乙醚萃取二次，每次３０ml，每次振摇１min。 合并乙醚层于另一干净分流漏斗中，用５％NaCL溶液洗涤二次，每次５～１０ml。然后蒸馏瓶回收乙醚，用20ml5%NaHCO3溶液溶解，定容至１00ml备用。 固体或半固体样品：如果冻等，将样品捣碎，称取10g左右，用10%NaOH溶液调节到碱性，定容至100ml,放置30min，过滤，取10ml滤液于125ml分液漏斗中，加入(1+2v)盐酸溶液酸化，然后用乙醚进行萃取，其余过程与液体样品处理相同。 二、标准曲线的绘制： 取苯甲酸标准使用液0、1、2、4、6ml分别置于100ml容量瓶中，各加入5%NaHCO3溶液2ml，(1+2v)盐酸溶液２ml，加水至刻度，摇匀。放置15min,尽量让CO２逸尽。 用1cm吸收池于波长230nm处测定其吸光度。以吸光度为纵坐标，以浓度为横坐标绘制标准曲线。 取样品处理液10ml于容量瓶中加入(1+2v)盐酸溶液2ml,摇荡以排除CO２，加水至刻度、摇匀、放置15min，与标准系列一起进行比色测定，根据测得吸光度，在标准曲线上查出其对应量，就可以计算出样品中苯甲酸（钠）的含量。 三、计算与结果 1．记录数据 将标准溶液的质量浓度ρ和扣除A0的吸光度A数据填入表1中 表1 苯甲酸标准溶液浓度及吸光度测定数据 测定0ml 1ml 2ml 4ml 6ml 酱油果冻ρ /mg · mL－1 A
高效液相色谱法测定酱油中苯甲酸的含量 摘要：本文采用高效液相色谱法测定酱油中防腐剂苯甲酸的含量。根据苯甲酸 的性质选择分离分离色谱柱为 C18(4.6mm×250mm,粒径5μm)柱，流动相为乙酸铵-甲醇（91：9），流速1mL/min，柱温30℃。当波长为230 nm时测得苯甲酸标 准溶液的浓度与峰面积的线性关系良好，线性回归方程为y=3063.46746x＋0.4971，r2 = 0.9998。一般实验要求加标回收率为90％-110％，苯甲酸检出限量为1g/kg。 实验测得加标回收率为96％-98％，三个样品的苯甲酸含量分别为0.39g/kg、 0.50g/kg、0.81g/kg，均符合食品安全国家标准。本实验方法简单快捷，准确度， 灵敏度也均达到国家相关分析要求，适用于测定酱油中苯甲酸的测定。 关键词：高效液相色谱；酱油；防腐剂；苯甲酸 为了减少防腐剂对人类带来的负面影响，对防腐剂进行一定的分析研究是很有必要的。 针对同一防腐剂的检测，不同的检测技术其特异性和快速性等也各有不同。国家食品检测标 准GB/T5009.29-2003《食品中山梨酸、苯甲酸的测定》介绍了三种检测苯甲酸的方法，分别 是气相色谱法、高效液相色谱法和薄层色谱法。此外据网上报道，可用于检测酱油中苯甲酸 含量的方法还有紫外分光光度法、毛细管电泳法等。因高效液相色谱法精确度高、简单、快速，是现阶段测定苯甲酸含量的首选。现重点介绍高效液相色谱法测定酱油中的苯甲酸。 实验主要试剂及设备： 甲醇（GR）；乙酸铵（GR）；苯甲酸钠标准品（GR）；乙酸锌（AR）；亚铁氰化钾（AR）；氨水（≥99.0％）。 高效液相色谱仪（LC-20ADRF）；电子分析天平（BSM--120.4）；超声波清洗仪 （SG5200HDT）；高速离心机（TGL-16G-A）。 色谱条件： 以C18柱（4.6mm×250mm,粒径5μm）为色谱柱；以A相1.54mg/mL乙酸铵溶液+B相甲 醇溶液（91:9）为流动相；柱温：30℃；进样量：10μL；流速：1.0 mL/min；检测波长为 230nm；检测器为紫外吸收检测器。 一、样品分析 1.样品中苯甲酸含量的测定 精确称取酱油2.0g，置于具塞塑料离心管中，样品称取质量为2.0135g。样品称量后，加 水至30mL，再加1mL亚铁氰化钾溶液（10.6％）和1mL乙酸锌溶液（21.9％），混匀。用 （1+1）氨水调pH至中性，再用超纯水定容至40mL。盖好管塞，在高速离心机中离心至沉 淀完全，清液经微孔滤膜（4.5um）过滤，滤液在超声波清洗仪超声后注入色谱进样瓶中， 按色谱条件中所述上机检测、分析。 酱油样品中苯甲酸含量的计算公式： 式中： y--酱油样品中苯甲酸组分含量，单位为克每千克(g/kg)； c--由苯甲酸溶液标准曲线得出的样液中苯甲酸的浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL）； v--样品定容体积，单位为毫升（mL）； m--样品质量，单位为克（g）。 按照相关实验要求，同一实验室内两次独立测定结果的绝对差值应不超过算术平均值的10%，计算结果保留两位有效数字。 2.重复性实验 准确称取酱油样品5份于5支具塞塑料离心管中，样品称取质量分别是2.0129g、 2.0036g、2.0437g、2.0152g、2.0082g。按上处前处理方法处理制得样品进样溶液，将制得样 液注入色谱进样瓶中，将样品放入液相色谱仪依次进样测定，检测实验的重复性。 3.加标回收实验 准确称取4份酱油样品于4支具塞塑料离心管中，样品称取质量分别为2.0736g、
气相色谱法测定食品中的山梨酸、苯甲酸 邓燕 雅安职业技术学院 【摘要】本文介绍了采用氢火焰离子检测器及毛细管柱气相色谱测定食品中山梨酸、苯甲酸的快速检测方法。采用无水乙醚提取样品中的山梨酸、苯甲酸，反复振荡提取两次，经氯化钠酸性溶液盐析，无水硫酸钠脱水，旋转蒸发仪蒸干，丙酮定容后待测。用外标法定量，取1ul待测样，HP-FFAP石英毛细管柱内分离后进入FID检测器验证。结果表明100ug/ml浓度与峰面积有着良好的线性关系，相关系数大于0.999，山梨酸、苯甲酸的检出限为 1.0mg/kg，回收率为82.4%~92.0%，相对偏差为6.1%。此方法具有检出限低，检测快速，定量准确，操作性强，适用于山梨酸、苯甲酸的检测工作。 【关键词】气相色谱；山梨酸；苯甲酸；食品；测定 食品的保鲜和保存通常主要依赖于防腐剂，山梨酸又是被国际粮农组织和世界卫生组织重点推荐的，低毒、高效的防腐剂，主要用于儿童食品等新兴食品领域，而传统领域还在大量使用苯甲酸及其钠盐[1]。并且，每年山梨酸的需求量可达6500t,苯甲酸的需求也很可观[2]。并且，大量的毒理学试验表明：防腐剂成分用量过多会对人体肝脏产生危害，甚至致癌。因此，对山梨酸、苯甲酸的检测技术的研究已成为一种必然。目前，对其进行检测主要方法有气相色谱法、高效液相色谱法及毛细管电泳法等。[3]]本文选用气相色谱法测定食品中的山梨酸、苯甲酸，探求有效提取食品中的山梨酸、苯甲酸的有效方法，确定检测的最佳线性关系及最低检测限值。 1实验方法 1.1主要仪器和试剂
美国Agilent7890A气相色谱仪，配置有自动进样器，附有FID检测器，选配Agilent的HP-FFAP(30m×0.32mm×0.25um)毛细柱。瑞士旋转蒸发仪、50ml 的比色管。 丙酮（色谱纯）、无水乙醚（分析纯）、氯化钠（分析纯）、无水硫酸钠（分析纯）、浓盐酸、山梨酸、苯甲酸的标准品均购自德国Dr.Ehrenstorfer公司。 1.2 试剂配制及前期处理 6mol/ml的盐酸配制：用浓盐酸的浓度12mol/l，稀释至6mol/ml备用 5%氯化钠酸性溶液的配制：在5%的氯化钠溶液中，加入10ml的冰醋酸，使其呈酸性(PH=4.5)。 无水硫酸钠（分析纯）:在700摄氏度下烧灼4小时，密封瓶中备用。 1.3 GC条件 选配毛细柱HP-FFAP（30m×0.32mm×0.25um），载气为高纯氮气（纯度≧99.9%），进样方式：分流进样（分流比=10:1）。进样器温度：200℃检测器温度：250℃ 柱温： 150℃→220℃（3min）,以30℃/min的速率升温 载气流速（氮气）：2.0ml/min 氢气流速：30ml/min 空气流速：400ml/min 1.4标准溶液的配制; 储备液的配制： 1.4.1山梨酸储备液的配制：称取0.050g的山梨酸的标准品，于50ml的容量
常用食品防腐剂 1、苯甲酸和苯甲酸钠 苯甲酸又名安息香酸，是各国允许使用而且历史比较悠久的食品防腐剂。苯甲酸为白色鳞片状或针状结晶，难溶于水，易溶于乙醇。苯甲酸钠易溶于水，生产上使用较为广泛。 苯甲酸和苯甲酸钠在酸性条件下，以未解离的分子起抑菌作用，其防腐效果视介质的PH而异，一般PH＜5时抑菌效果较好，~时抑菌效果最好。例如，当PH由7降至时，其防腐效力可提高5~10倍。FAO（联合国粮农组织）和WHO（世界卫生组织）1994年规定，苯甲酸的ADI（每日允许摄入量）为0~5mg/kg。根据我国食品添加剂使用卫生标准（GB2760－1996）规定，苯甲酸和苯甲酸钠的使用标准见表： 苯甲酸与苯甲酸钠的使用标准 使用苯甲酸时，先用少量乙醇溶解，再添加到食品中。使用苯甲酸钠时，
一般先配制成20%~30%的水溶液，再加入到食品中，搅拌均匀即可。 2、山梨酸和山梨酸钾 山梨酸又名花楸酸，为无色针状或白色粉末状结晶，无臭或稍有刺臭，耐光耐热，但在空气中长期放置易被氧化变色，防腐效果也有所降低。山梨酸难溶于水而易溶于乙醇等有机溶剂。山梨酸钾极易溶于水，也易溶于高浓度蔗糖和食盐溶液，因而在生产上被广泛使用。 山梨酸是一种不饱和脂肪酸，能在人体内参与正常的代谢活动，最后被氧化成二氧化碳和水，故国际上公认其为无害的食品防腐剂。山梨酸的ADI 为0~kg（FAO/WHO,1994）。 山梨酸和山梨酸钾属于酸型防腐剂，以未解离的分子起抑菌作用，其防腐效果随PH降低而增强，但适宜的PH范围比苯甲酸广，以PH＜6的介质中使用未宜。根据我国食品添加剂使用卫生规定（GB2760－1996）规定，山梨酸与山梨酸钾的使用标准如下：
紫外分光光度法测定山梨酸及苯甲酸 2009-11-10 15:16:32| 分类：默认分类| 标签：|字号大中小订阅 为了防止食品在储存、运输过程中发生变质、腐败，常在食品中添加少量防腐剂。防腐剂使用的品种和用量在食品卫生标准中都有严格规定。苯甲酸和山梨酸以及它们的钠盐、钾盐是食品卫生标准允许使用的两种防腐剂。苯甲酸具有芳烃结构。在波长228nm和272nm处有K吸收带和B吸收带；山梨酸具有α、β不饱和羰基结构。又称花椒酸，其化学结构为： 为了防止食品在储存、运输过程中发生变质、腐败，常在食品中添加少量防腐剂。防腐剂使用的品种和用量在食品卫生标准中都有严格规定。苯甲酸和山梨酸以及它们的钠盐、钾盐是食品卫生标准允许使用的两种防腐剂。苯甲酸具有芳烃结构。在波长228nm和272nm处有K吸收带和B吸收带；山梨酸具有α、β不饱和羰基结构。又称花椒酸，其化学结构为：CH3CH=CHCH=CHCOOH 在波长250nm处有π→π*跃迁K吸收带，因此，根据它们的紫外吸收光谱特征可以对它们进行定性 和定量测定。 由于食品中防腐剂用量很少，一般在1/1000左右，同时食品中其它成分也可能产生干扰，因此，需要预先将防腐剂与其它成分分离，并经提纯浓缩后进行测定。常用的从食品中分离防腐剂的方法有蒸馏法和溶剂萃取法等。本实验采用溶剂萃取法，用乙醚将防腐剂从样品中提取出来，再经碱性水溶液处理及乙 醚萃取以达到分离、提纯的目的。 采用最小二乘法处理标准溶液的浓度和吸光度数据，以求得浓度与吸光度之间的回归直线方程，并 根据直线方程计算样品中防腐剂的含量。 在波长250nm处有π→π*跃迁K吸收带，因此，根据它们的紫外吸收光谱特征可以对它们进行定性 和定量测定。 由于食品中防腐剂用量很少，一般在1/1000左右，同时食品中其它成分也可能产生干扰，因此，需要预先将防腐剂与其它成分分离，并经提纯浓缩后进行测定。常用的从食品中分离防腐剂的方法有蒸馏法和溶剂萃取法等。本实验采用溶剂萃取法，用乙醚将防腐剂从样品中提取出来，再经碱性水溶液处理及乙 醚萃取以达到分离、提纯的目的。 采用最小二乘法处理标准溶液的浓度和吸光度数据，以求得浓度与吸光度之间的回归直线方程，并 根据直线方程计算样品中防腐剂的含量。
苯甲酸钠 苯甲酸钠Sodium benzoate 又称:安息香酸钠。CAS:532-32-1 产品规格:工业级、食品级[分子式]:C7H5NaO2 [性状]:白色颗粒或结晶性粉末。无气味,有甜涩味。[用途]:化学分析用试剂;用于医药工业和植物遗传研究 苯甲酸又称为安息香酸，故苯甲酸钠又称安息香酸钠。苯甲酸在常温下难溶于水，在空气（特别是热空气）中微挥发，有吸湿性，大约常温下0.34g/100ml；但溶于热水；也溶于乙醇、氯仿和非挥发性油。在使用中多选用苯甲酸钠；苯甲酸和苯甲酸钠的性状和防腐性能都差不多。我简单介绍一下苯甲酸钠：苯甲酸钠大多为白色颗粒，无臭或微带安息香气味，味微甜，有收敛性；易溶于水（常温）53.0g/100ml左右，PH在8左右；苯甲酸钠也是酸性防腐剂，在碱性介质中无杀菌、抑菌作用；其防腐最佳PH是2.5-4.0，在PH5.0时5%的溶液杀菌效果也不是很好。苯甲酸钠亲油性较大，易穿透细胞膜进入细胞体内，干扰细胞膜的通透性，抑制细胞膜对氨基酸的吸收；进入细胞体内电离酸化细胞内的碱储，并抑制细胞的呼吸酶系的活性，阻止乙酰辅酶A缩合反应，从而起到食品防腐的目的 物化性质(Physical Properties) 1、含量：≥99.5%； 2、外观：合格； 3、水不溶物：0.01； 4、碱度：合格； 5、氯化物：0.01； 6、硫酸盐：0.005； 7、铁：0.0005；
苯甲酸钠是用于内服液体药剂的防腐剂，有防止变质发酸、延长保质期的效果，用量过多会对人体肝脏产生危害，甚至致癌. 根据GB2760—1996国家卫生标准规定，在食品加工中不得使用苯甲酸钠。 “苏丹红”事件发生后，各种食品添加剂随之引起了公众的极大关注而被频频“曝光”。根据我国GB2760-1996《食品添加剂使用卫生标准》规定，在肉制品中，食品防腐剂苯甲酸和苯甲酸钠不得检出。但是有些报道，如“苯甲酸和苯甲酸钠在肉制品中是强制禁止使用的，因为有毒”，“苯甲酸含有苯，苯是致癌物质”等等，这些报道是否准确科学？本文通过介绍苯甲酸和苯甲酸钠的理化性质、防腐机理、毒性试验及其在人体内的解毒机理，以及国外对这两种防腐剂的使用情况，旨在为探讨苯甲酸和苯甲酸钠能否在肉制品中添加使用提供参考依据。 1．苯甲酸和苯甲酸钠 目前，我国食品防腐剂主要采用苯甲酸钠及山梨酸钾，由于苯甲酸钠价格便宜，被食品企业广泛使用。 物理化学性质（万素英，1998；凌关庭，2003）： 苯甲酸（Benzoic Acid） 分子式：C6H5COOH 又称安息香酸，无嗅或略带安息香气味，广泛用作食品防腐剂，天然存在于酸果蔓、梅干、肉桂、丁香中，是一种芳香族酸，还可以作为香料添加。未离解酸具有抗菌活性，在PH值2.5－4.0范围内，呈最佳活性。毒理学依据：LD 大鼠口服 2530mg．kg-1（bw）50GRAS FDA-21CFR 184.1021ADI 0-5mg．kg-1（bw）（本甲酸及其盐的总量，以苯甲酸计）（FAO／WHO，1994）。 苯甲酸钠（Sodium Benzoate）分子式：CH COONa
酱油中苯甲酸和山梨酸含量测定 摘要：目的：采用碱溶液反相萃取—高效液相色谱法（HPLC）测定酱油中苯甲酸和山梨酸。方法：以国标萃取法为基础，再对其用碱溶液进行反萃取的方法，对酱油样品进行前处理，通过加内标物的方法提高实验的精确度。结果：苯甲酸和山梨酸的线性回归相关指数都大于0.99、最小检出限（LOD）都低于0.1ppm，加标回收率皆大于84%，相对偏差皆小于16%。结论：该方法灵敏、可靠，可用于酱油中苯甲酸和山梨酸的快速定量检测。 关键词：反相萃取；高效液相色谱法；酱油；苯甲酸；山梨酸 酱油是我国传统的、富有特色的、使用最广的、味道鲜美的调味品，它赋予食品以适当的色、香、味，具有杀菌治病、调味之功用。由于酱油营养丰富，适于微生物生长繁殖，而微生物又是到处不在无孔不入，所以细菌、霉菌和酵母之类微生物的侵袭通常是导致酱油败坏的主要因素。为了保藏酱油，防止酱油腐败变质，保持酱油的鲜度和良好的品质，达到其对保质期的要求，酱油中一般都使用食品常用防腐剂—苯甲酸和山梨酸，但过多防腐剂会严重损害人体健康，国家对防腐剂的使用有严格限量规定，因而检测酱油中防腐剂的含量具有重要意义。 目前酱油中苯甲酸和山梨酸的测定方法主要有气相色谱法、高效液相色谱法和薄层色谱法，其中高效液相色谱法因其仪器精确度高，在苯甲酸和山梨酸的检测中最常用。对于酱油的前处理国标是对其先进行酸化，再通过乙醚进行萃取，除此之外还有其他诸多方法，如对粘度比较大的进行固相萃取、通过加入亚铁氰化钾和乙酸锌溶液沉淀蛋白质、脂肪并过滤后进行测定、还有就是本文所用的对国标处理后的样品进行碱溶液反相萃取。这样可以大大的减少样品中的杂质，从而减少了杂质峰对高效液相色谱检测的影响。另外本文所采用的内标法的处理方法是一个创新之举，避免了外标法测定时前处理萃取不完全以及其他处理过程带来的损失从而大大的提高了检测的准确度。 1 实验部分 1.1 溶液配制 乙酸铵溶液( 0. 02 mol /L) : 准确称取乙酸铵1. 542 g, 用水溶解, 定容至1 000 mL, 经0. 45Lm 膜过滤。 苯甲酸、山梨酸、肉桂酸储备液（1000lg/ml）：准确称取100mg苯甲酸、山梨酸对照品，50mg肉桂酸标准品与3个不同的50ml小烧杯中，加甲醇溶解后，转移到对应的100ml、100ml、50ml的容量瓶中，苯甲酸、山梨酸对照品加水稀释至刻度，肉桂酸标准品加甲醇稀释至刻度。置于4℃冰箱中。 苯甲酸、山梨酸混合溶液的标准溶液：用移液管分别移取苯甲酸储备液和山梨酸储备液各2ml、4ml、6ml、8ml、10ml于5个不同的100ml容量瓶中，再分别向个容量瓶中加5ml肉桂酸储备液，然后加超纯水稀释至刻度，由此得到20ppm、40ppm、60ppm、80ppm、100ppm的苯甲酸和山梨酸混合溶液的一系列标准溶液，其中每份苯甲酸、山梨酸混合溶液标准溶液中均含内标物肉桂酸50ppm。 1.2 样品的制备 1.2.1 乙醚萃取 称取1g左右（精确至0.0001g）酱油样品与25ml带塞锥形瓶中，加2.5ml 100ppm肉桂酸标液，0.25ml 的0.1mol/l盐酸溶液混均，加乙醚9ml，超声一分钟，静置分层，用针筒吸取乙醚萃取液至10ml大试管中。 1.2.2 碱液反萃取 向乙醚萃取液试管中加1ml的0.1mol/l的氢氧化钠溶液反萃取1分钟，静置分层，乙醚层尽量吸去，将氢氧化钠萃取液试管加入40℃水浴中10分钟挥去残留乙醚，将溶液5ml容量瓶中，加水稀释至刻度，使用前测定ph（ph需大于3，否则会损坏色谱柱），过0.45lm水系滤膜2次，供液相色谱仪分析。
食品防腐剂--苯甲酸 苯甲酰是食品行业通用的防腐剂，据科学报道，目前影响我们食品安全的最大问题是食品腐败和微生物的繁殖，正是由于食品中使用了防腐剂，而使我们避免了更多食品中的不安全因素。面粉中添加了增白剂最终转化成的苯甲酸不超过60ppm，我国GB2760－1996《食品添加剂卫生使用标准》中规定，苯甲酸在酱油、醋中的最大使用量为1000ppm，葡萄酒中为800ppm，碳酸饮料中为200ppm。关于过氧化苯甲酰对人体造成致癌的一些传说，不知源于何处，是没有充分的科学依据的。 苯甲酸是我国目前最常用的食品防腐剂，其主要作用是防止由微生物的活动而引起的食品变质。根据卫生部调查统计，认为食品中危害最大的是微生物污染和营养不均衡，其危害要比滥用食品添加剂的危害大10万倍。所以，食品防腐剂是许多食品不可缺少的合法添加剂，是食品卫生安全的卫士，是许多食品不可缺少的食品添加剂。 表1①苯甲酸在各类食品中的最大使用量
苯甲酸没有慢毒性，以含苯甲酸0，0.5%和1%的食品饲料喂养雄性大鼠和雌性大鼠连续8周，通过对其子代（二、三和四代）的观察和形态解剖测定其慢毒性，结果表明小鼠子代的生长、繁殖和形态上没有异常的改变。其他一些试验也表明苯甲酸无蓄积性、致癌、致突变和抗原作用。 苯甲酸的ADI值为0-5mg/kg②， LD50为2530mg/kg （大鼠，经口），GRAS（FDA，§184.10212000），苯甲酸在动物体内会很快降 解，75-80%的苯甲酸可在6h内排出，10-14h内完全排出体外。苯甲酸在动物体内的降解途径如图1所示③。苯甲酸的大部（90%）主要与甘氨酸结合形成马尿酸，其余的则与葡萄糖醛酸结合形成1-苯甲酰葡萄醛酸。 参考资料