还原型谷胱甘肽（Glutathione Reduced,GSH）含量测定试剂盒使用说明货号:BC1170常量法（50T/48S）
一、试剂盒组成：
试剂Ⅰ液体1瓶50ml（4℃保存）
试剂Ⅱ液体1瓶50ml（4℃保存）
试剂Ⅲ液体1瓶15ml（4℃避光保存）
标准品粉末1支10mg（4℃避光保存）
说明书一份
二、实验原理
谷胱甘肽是由谷氨酸（Glu）、半胱氨酸（Cys）和甘氨酸（Gly）组成的天然三肽，是一种含巯基（—SH）的化合物，广泛存在于动物组织、植物组织、微生物和酵母中。谷胱甘肽能和5,5’-二硫代-双-（2-硝基苯甲酸）（5,5’-dithiobis-2-nitrobenoic acid，DTNB）反应产生2-硝基-5-巯基苯甲酸和谷胱甘肽二硫化物（GSSG）。2-硝基-5-巯基苯甲酸为黄色产物，在波长412nm处具有最大光吸收。因此，利用分光光度计法可测定样品中谷胱甘肽的含量。
三、实验仪器
分析天平、微量匀浆器（规格2ml）、低温离心机、水浴锅、移液器、可见分光光度计、1ml比色皿。
四、操作步骤
1、样品的处理
组织处理
新鲜组织首先用PBS冲洗2次，然后称取动物组织或者植物组织0.1g。加入用试剂Ⅰ润洗过的匀浆器中（匀浆器提前放冰上预冷）；然后加入1ml试剂Ⅰ（组织/试剂Ⅰ比例保持不变即可），迅速冰上充分研磨（使用液氮研磨效果更好）；8000rpm4℃离心10min；取上
清液放置于4℃待测，若暂时不能完成测试可放于-80℃保存（可保存10天）。
血液处理
血浆：将收集的抗凝血于4℃，600g离心10分钟，吸取上层血浆到另一支试管中，加入等体积的试剂Ⅰ,4℃，8000g离心10分钟,将上清移入新的试管中放置于4℃待测，若暂时不能完成测试可放于-80℃保存（可保存10天）。
血细胞：将收集的抗凝血于4℃，600g离心10分钟，弃去上层血浆用3倍体积的PBS 清洗3次（用PBS重悬血细胞，600g离心10分钟），加入等体积试剂Ⅰ，混匀后4℃放置10分钟，8000g离心10分钟，吸取上清放于4℃待测，若暂时不能完成测试可放于-80℃保存（可保存10天）。
细胞处理
收集不少于108个细胞，首先用PBS清洗细胞2次（PBS重悬细胞，600g离心10分钟），加入3倍细胞沉淀体积的试剂Ⅰ重悬细胞，反复冻融2-3次（可在液氮中冻结，37℃水浴中溶解），8000g离心10分钟，收集上清于4℃待测，若暂时不能完成测试可放于-80℃保存（可保存10天）。
2、分光光度计预热30min以上，调节波长至412nm，蒸馏水调零。
3、试剂Ⅱ放置37℃（哺乳动物）或25℃（一般物种）水浴中保温30min。
4、空白管检测：取1ml比色皿，依次加入100L蒸馏水，700L试剂Ⅱ，200L试剂Ⅲ，混匀，放置2min后测定412nm吸光度A1。
5、制作标准曲线
称取1mg标准品，用1ml蒸馏水溶解，浓度为1mg/ml。取适当溶液配制浓度为200g/ml、100g/ml、50g/ml、25g/ml、12.5g/ml的标准品（试剂Ⅰ十倍稀释后进行稀释）。
试剂（L）
EP管编号
1（12.5g/ml）2（25g/ml）3（50g/ml）4（100g/ml）5（200g/ml）
标准品100100100100100
试剂Ⅱ700700700700700
试剂Ⅲ200200200200200
每管混匀后静置2min，检测412nm处吸光度，吸光度减去空白孔（A1）为横坐标，浓度为纵坐标做标准曲线。
6、样品管测定：取1ml比色皿，依次加入100L样品，700L试剂Ⅱ，200L试剂Ⅲ，混匀后静置2min检测412nm处吸光度A2。
五、GSH含量计算
样品OD412即A2减去空白管A1得到△A，将△A带入标准曲线公式，即可计算出每0.1g 组织或相应血液、细胞样品中还原性谷胱甘肽的含量。
样品鲜重中GSH的含量计算：GSH含量（g/gFW）=C/gFW其中C为1ml样品提取液中GSH的含量（g），FW为样品鲜重，FW=0.1g。
六、注意事项
1、样品处理需匀浆完全，若当天不能完成测量，可放-80℃保存。
2、标准品：还原型谷胱甘肽现配现用。
3、若不确定样品中GSH含量的高低，可稀释几个梯度后再进行测量。
4、因为试剂Ⅰ中含有蛋白质沉淀剂，因此上清液不能用于蛋白浓度测定。
5、本试剂盒所配制的试剂除测定48个样品外，至少可做4次标准曲线。
阿拓莫兰(注射用还原型谷胱甘肽) 【药品名称】 商品名称：阿拓莫兰 通用名称：注射用还原型谷胱甘肽 英文名称：Reduced Glutathione for Injection 【成份】 主要成分：还原型谷胱甘肽，化学名：N（N-L-r谷氨酰基-L—半胱氨酰基）甘氨酸 【适应症】 用于：①化疗患者：包括用顺氯铵铂、环磷酰胺、阿霉素、红比霉素、博来霉素化疗，尤其是大剂量化疗时；②放射治疗患者；③各种低氧血症：如急性贫血，成人呼吸窘迫综合症，败血症等；④肝脏疾病：包括病毒性、药物毒性、酒精毒性及其它化学物质毒性引起的肝脏损害。⑤亦可用于有机磷、胺基或硝基化合物中毒的辅助治疗。 【用法用量】 1．给药途径①静脉注射：将之溶解于注射用水后，加入100ml生理盐水中静脉滴注，或加入少于20ml的生理盐水中缓慢静脉注射；②肌肉注射给药：将之溶解于注射用水后肌肉注射。2．用量：①化疗患者：给化疗药物前15分钟内将1.5g/m2本品溶解于100ml生理盐水中，于15分钟内静脉输注，第2～5天每天肌注本品600mg。使用环磷酰胺（CTX）时，为预防泌尿系统损害，建议在CTX 注射完后立即静脉注射本品，于15分钟内输注完毕；用顺氯铵铂化疗时，建议本品的用量不宜超过35mg／mg顺氯铵铂，以免影响化疗效果。②肝脏疾病：每天肌肉注射本品300 mg或600mg。③其它疾病：如低氧血症，可将1.5g/m2 本品溶解于100ml生理盐水中静脉输注，病情好转后每天肌肉注射300～600mg维持。3．疗程：肝脏疾病一般30天为一疗程，其它情况根据病情决定。
【不良反应】 偶见脸色苍白，血压下降，脉博异常等类过敏症状，应停药。偶见皮疹等过敏症状，应停药。偶有食欲不振、恶心、呕吐、胃痛等消化道症状，停药后消失。注射局部轻度疼痛。【禁忌】 对本品过敏者禁用。 【注意事项】 ①在医生的监护下，在医院内使用本品。②注射前必须完全溶解，外观澄清、无色；溶解后的本品在室温下可保存2小时，0～5 ℃保存8小时。③放在儿童不易触及的地方。【特殊人群用药】 儿童注意事项： 新生儿、早产儿、婴儿和儿童应谨慎用药，尤其是肌内注射。 妊娠与哺乳期注意事项： 老人注意事项： 老年患者应适当减少用药剂量。并在用药过程中严密监视。 【药物相互作用】 本品不得与维生素B12、甲萘醌、泛酸钙、乳清酸、抗组胺制剂、磺胺药及四环素等混合使用。 【药理作用】 还原型谷胱甘肽（GSH）是人类细胞质中自然合成的一种肽，由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸组成，含有巯基（－SH），广泛分布于机体各器官内，为维持细胞生物功能已呈有重要作用。它是甘油醛磷酸脱氢酶的辅基，又是乙二醛酶及丙糖脱氢酶的辅酶，参与体内三羧酸循环及糖代谢。本品能激活多种酶[如巯基(-SH)酶等]，从而促进糖、脂肪及蛋白质代谢，并
谷胱甘肽 1.定义 谷胱甘肽（glutathione GSH）CAS号：70-18-8。谷胱甘肽是一种存在于自然界中的氨基酸复合物，由谷氨酸、半胱氨酸、甘氨酸等三种氨基酸组合而成的寡肽。谷胱甘肽在体内以两种形态存在，即还原型谷胱甘肽和氧化型谷胱甘肽（oxidized glutathione，简称GSSG）。通常人们所指的谷胱甘肽是还原型谷胱甘肽。还原型谷胱甘肽很容易被氧化，两分子谷胱甘肽的活泼巯基氧化脱氢后以二硫键相连得到的二聚体，即是氧化型谷胱甘肽。其中只有还原型谷胱甘肽才具有生理活性，而生物体内的氧化型谷胱甘肽需经还原后才能发挥生理功能。 2.结构和理化性质 谷胱甘肽是一种白色晶体，化学名为γ-L-谷氨酰-L-半胱氨酰-甘氨酸，其结构如图1所示。相对分子质量为307.33，熔点是192～195 °C （分解），等电点为5.93。比旋光度[α]D20为+17.60°(C=0.05，H2O)，易溶于水、稀醇、液氨和二甲基甲酰氨，不溶于乙醚和丙酮。谷胱甘肽固体较为稳定，而水溶液在空气中易被氧化，谷胱甘肽在高水分活度下不易保存，只有将水分活度控制在0.3以下才能长期稳定保存。 3.生理功能
谷胱甘肽是细胞内存在最丰富的小分子硫醇类化合物，其分子中含有一个特异的γ-肽键，由谷氨酸的γ-羧基与半胱氨酸的α-氨基缩合而成，并且半胱氨酸侧链基团上连有一个活泼巯基，是谷胱甘肽许多重要生理功能的结构基础。 3.1抗氧化作用 还原型谷胱甘肽结构中含有一个活泼的巯基—SH，易被氧化脱氢。它在体内能够保护许多蛋白质和酶等分子中的巯基不被如自由基等有害物质氧化，让蛋白质和酶等分子发挥其生理功能。同时清除自由基。 机体内新陈代谢产生的许多自由基会损伤细胞膜，毁坏免疫系统，侵袭生命大分子，促进机体衰老，并诱发肿瘤或动脉粥样硬化的产生。由此，谷胱甘肽具有抗衰老和强化免疫系统等作用。 3.2整合解毒作用 谷胱甘肽半胱氨酸上的巯基为其活性基团（故谷胱甘肽常简写为G-SH），易与碘乙酸、芥子气（一种毒气）、铅、汞、砷等重金属盐或致癌物质等相结合，并促进其排出体外，起到中和解毒作用。4. 应用 4.1 谷胱甘肽在临床上的应用 谷胱甘肽在临床上有广泛的作用，对细胞有保护作用，可防止红细胞溶血，从而减少高铁血红蛋白的损失；抑制脂肪肝的形成，改善中毒性肝炎和感染性肝炎的症状；对丙烯腈、氟化物、一氧化碳、有机溶剂、重金属等中毒具有解毒作用；对缺氧血症的不适、恶心、呕
主要目的： ——测定物质还原性谷胱甘肽（GSH）的含量。 主要原理： 参照 GSH检测分析试剂盒说明书， 5,5 ’–二硫代–双–（2–硝基苯甲酸）能和 谷胱甘肽（GSH）反应产生 2–硝基– 5–巯基苯甲酸和谷胱甘肽二硫化物（ GSSG）， 由于 2–硝基– 5–巯基苯甲酸是一黄色产物，通过测定其在412 nm处的最大吸 收可确定样品中谷胱甘肽的含量用纯化的谷胱甘肽（GSH）抗体包被微孔板，制 成固相抗体，往包被单抗的微孔中加入谷胱甘肽（GSH），再与HRP标记的谷胱甘 肽（ GSH）抗体结合，形成抗体 - 抗原 - 酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB显色。 TMB在 HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的谷胱甘肽（GSH）呈正相关。用酶标仪在412 nm波长下测定吸光度（ OD值），通过标准曲线计算样品中谷胱甘肽（GSH）的含量。
实验室签章
一、试剂 ——谷还原性胱甘肽（ GSH）测定试剂盒（南京建成生物研究所） 二、仪器设备 —— 96 孔酶标板 —— UV-Vis 可见多功能酶标 仪——旋涡混匀器——离心机 ——移液枪及其相应量程枪头
三、实验方法 根据试剂盒说明书具体操作步骤如下: 1.上清液的制备：取稀释后的血清或组织匀浆液 mL，加试剂一应用液 2 mL 混匀， 4000 rpm 离心 10 分钟，取上清液 1 mL 进行显色反应。 2.显色反应：空白管中加入 1 mL 试剂一，标准管加入 20μmol/LGSH标准 液 1 mL，测定管加入上步骤得到的上清液 1 mL，然后各管中分别加入mL 试剂 二、试剂三、 mL 试剂四。 3.混匀，室温静置 5 分钟后，在 412 nm处将酶标板空板进行扫描，准确吸 取 mL 各管反应液加入到新的 96 孔板中，酶标仪测定各孔吸光度（ OD值）。 4.血清中 GSH含量计算公式 GSH含量（ mg/L） 测定 OD值 -空白 OD 值 -3 mmol/L） ×标准品浓度（ 20×10 标准 OD值-空白 OD值 ×GSH分子量（ 307）×样本测试前稀释倍数 组织中 GSH含量公式 测定OD值-空白OD值 -3 GSH含量（mg/gprot ）×标准品浓度（20×10 mmol/L） ×GSH分子量（ 307）×样本测试前稀释倍数÷待测组织匀浆液蛋白浓度 （gprot/L ） 参考文献 Lapshina E A, Sudnikovich E J, Maksimchik J Z, et al. Antioxidative enzyme and glutathione S-transferase activities in diabetic rats exposed to long-term ASA treatment [J]. Life sciences, 2006, 79(19): 1804-1811.
还原型谷胱甘肽(GSH)检测试剂盒(DTNB 速率比色法) 简介： 谷胱甘肽(glutathione ，GSH)存在于几乎身体的每一个细胞，参与细胞许多功能活动，是一种氧自由基消除剂。谷胱甘肽是研究活性氧和自由基的重要指标，亦是机体氧化物牵累的重要指标。还原型谷胱甘肽(GSH)是一种含γ-酰胺键和巯基的三肽，由谷氨酸、半胱氨酸及甘氨酸组成，能可逆的转变为氧化型谷胱甘肽(GSSG)，其存在形式会随着细胞内代谢的情况而发生相互转变。 还原型谷胱甘肽(GSH)检测试剂盒(DTNB 速率比色法)(Glutathione Assay Kit)是一种简单易行的检测还原型谷胱甘肽的试剂盒，其检测原理是待测样品中的还原型谷胱甘肽(GSH)与发色底物DTNB 反应，产生稳定黄色的TNB 和GSSG ，获得样品的GSH 含量。该试剂盒可用于检测血浆、血清、组织、细胞等样品中还原型谷胱甘肽(GSH)含量。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。 产品组成： 操作步骤(仅供参考)： 1、 配制GSH 标准储存液：取10mg 还原型谷胱甘肽(GSH)标准加入3.25ml ddH 2O ，溶 解并混匀，即为还原型GSH 标准储存液(10mM)。一部分立即使用，其余适当分装后-20℃保存。 2、 配制GSH 检测工作液：按下表配制GSH 检测工作液。 1个样品 10个样品 50个样品 GSH assay buffer 1.6ml 16ml 80ml DTNB 储存液 10μl 100μl 500μl 3、 配制标准品：注意：由于GSH 标准在蛋白沉淀工作液中不太稳定，用蛋白沉淀工作液 配制的GSH 溶液必须新鲜配制后使用，不可冻存后再使用。 4、 配制NADPH 工作液：在本试剂盒提供的10mg NADPH 中加入1ml ddH 2O ，溶解并 编号 名称 TO1037 100T Storage 试剂(A): 还原型谷胱甘肽(GSH)标准 10mg 4℃ 避光 试剂(B): GSH assay buffer 250ml RT 试剂(E): NADPH 10mg -20℃ 避光 试剂(F): DMSO 1.5ml RT 避光 试剂(G): ddH 2O 50ml RT 避光 使用说明书 1份
注射用还原型谷胱甘肽 以下内容仅供参考，请以药品包装盒中的说明书为准。 妊娠：在医疗监护下使用 儿童：新生儿、早产儿、婴儿和儿童应谨慎用药，尤其是肌内注射 注射用还原型谷胱甘肽说明书 【说明书修订日期】 核准日期：2007年01月30日 修改日期：2013年01月04日 【药品名称】 注射用还原型谷胱甘肽 【英文名】 Reduced Glutathione for Injection 【汉语拼音】 Zhusheyong Huanyuanxing Guguanggantai 【成份】
本品主要成份：还原型谷胱甘肽 化学名称：N-（N-L-γ-谷氨酰基-L-半胱氨酰基）甘氨酸 辅料：氢氧化钠 【性状】 本品为白色多孔的块状物或粉末。 【适应症】 ①化疗患者：包括用顺氯铵铂、环磷酰胺、阿霉素、红比霉素、博来霉素化疗，尤其是大剂量化疗时；②放射治疗患者； ③各种低氧血症：如急性贫血，成人呼吸窘迫综合症，败血症等；④肝脏疾病：包括病毒性、药物毒性、酒精毒性（包括酒精性脂肪肝、酒精性肝纤维化、酒精性肝硬化、急性酒精性肝炎）及其他化学物质毒性引起的肝脏损害；⑤亦可用于有机磷、胺基或硝基化合物中毒的辅助治疗；⑥解药物毒性(如肿瘤化疗药物，抗结核药物，精神神经科药物，抗抑郁药物，扑热息痛等)。 【规格】 0.3g、0.6g、0.9g、1.0g、1.2g、1.5g、1.8g、2.0g 【用法用量】
1．给药途径：①静脉注射：将之溶解于注射用水后，加入100ml、250～500ml生理盐水或5%葡萄糖注射液中静脉滴注。 ②肌内注射给药：将之溶解于注射用水后肌内注射。 2．用量：①化疗患者：给化疗药物前15分钟内将1.5g/m2本品溶解于100ml生理盐水中，于15分钟内静脉输注，第2～5天每天肌注本品0.6g。使用环磷酰胺（CTX）时，为预防泌尿系统损害，建议在CTX注射完后立即静脉注射本品，于15分钟内输注完毕；用顺氯铵铂化疗时，建议本品的用量不宜超过35mg/mg顺氯铵铂，以免影响化疗效果。②肝脏疾病的辅助治疗。对于病毒性肝炎，1.2g，qd，iv，30天；重症肝炎：1.2-2.4g，qd，iv，30天；活动性肝硬化：1.2g，qd，iv，30天；脂肪肝：1.8g，qd，iv，30天；酒精性肝炎：1.8g，qd，iv，14-30天；药物性肝炎：1.2-1.8g，qd，iv，14-30天；滴注时间为1～2小时。③用于放疗辅助用药，照射后给药，剂量1.5g/ m2，或遵医嘱。④其他疾病：如低氧血症，可将1.5g/m2本品溶解于100ml生理盐水中静脉输注，病情好转后每天肌内注射0.3～0.6g维持。 3．疗程：肝脏疾病一般30天为一疗程，其他情况根据病情决定。 【不良反应】
小鼠谷胱甘肽S转移酶（GST）酶联免疫分析（ELISA） 试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定小鼠血清，组织及相关液体样本中谷胱甘肽S转移酶（GST）的含量。 实验原理： 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠谷胱甘肽S转移酶（GST）水平。用纯化的谷胱甘肽S转移酶（GST）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入谷胱甘肽S转移酶（GST），再与HRP标记的谷胱甘肽S转移酶（GST）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的谷胱甘肽S转移酶（GST）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠谷胱甘肽S转移酶（GST）浓度。 试剂盒组成48孔配置96孔配置保存 说明书1份1份 封板膜2片（48）2片（96） 密封袋1个1个 酶标包被板1×48 1×96 2-8℃保存 标准品：450pg/ml ×1瓶×1瓶2-8℃保存标准品稀释液×1瓶×1瓶2-8℃保存酶标试剂 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存 样本处理及要求： 1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上 清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。 2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心 20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。 3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程 中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。 4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/
【实验目的】 了解植物组中中抗坏血酸-谷胱甘肽循环代谢过程，学习还原型谷胱甘肽含量的测定原理和方法。 【实验原理】 谷胱甘肽是有谷氨酸（Glu）、半胱氨酸（Gly）组成的天然三肽，是一种含巯基（—SH）的化合物，广泛存在于动物组织、植物组织、微生物和酵母中。谷胱甘肽能和5,5’-二硫代-双-（2-硝基苯甲酸）（5,5’-dithiobis-2-nitrobenoic acid，DTNB）反应产生2-硝基-5-巯基苯甲酸和谷胱甘肽二硫化物（GSSG）。2-硝基-5-巯基苯甲酸为一黄色产物，在波长412nm处具有最大光吸收。因此，利用分光光度计法可测定样品中谷胱甘肽的含量。 【器材与试剂】 1.实验仪器与用具 研钵、高速离心机、移液管、离心管、试管、分光光度计 2.实验试剂 还原型谷胱甘肽标准液；偏磷酸溶液；磷酸溶液缓冲液（pH7）；二硫代硝基苯甲酸（5,5’-dithiobis-2-nitrobenoic acid，DTNB）溶液；蒸馏水。 3.实验材料 小麦叶片 【实验步骤】 1.标准曲线制作 取7支试管，编号，按照下表加入各种试剂，混匀，25℃保温反应10min。以1号管为参比调零，测定显色液在412nm处的吸光度。以吸光度为纵坐标，还原型谷胱甘肽物质的量（μmol）为横坐标，绘制标准曲线。 试管号 试剂（ml） 1 2 3 4 5 6 7 10μg/ml GSH标准液0 0.1 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0
蒸馏水 2.0 1.9 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 pH7磷酸缓冲液 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 DTNB试剂0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 GSH浓度μg/2ml 0 1 2 4 6 8 10 2.提取 取材后，称取0.2g样品置于研钵中，加入少量5%偏磷酸研磨成匀浆后，定容至6ml, 8000转离心10min。收集上清液来测定谷胱甘肽含量，测量提取液体积。 3.测定 取上清液2ml，显色，操作同标准曲线。重复3次。 显色反应后，分别记录样品管混合液的吸光度和空白对照管反应混合液的吸光度。根据吸光度差值，从标准曲线上查出相应的还原型谷胱甘肽量，计算还原型谷胱甘肽含量（μmol/g）。 4.计算 GSH含量（μmol/g）=（C x×V t）/ （FW×V S） 式中，C x为2ml样品中GSH的含量（μg）；V t为样品提取液总体积（ml）；V s为显色时样品液体积（ml）；FW为样品质量（g）。 【实验结果】 1.标准曲线 试管编号 1 2 3 4 5 6 7 GSH浓度（μg/2ml）0 1 2 4 6 8 10 吸光度值A 0 0.067 0.134 0.314 0.452 0.579 0.723 以GSH浓度（μg/2ml）为横坐标，吸光度值为纵坐标，建立标准曲线。
注射用还原型谷胱甘肽说明书 【药品名称】 通用名：还原型谷胱甘肽 商品名： 英文名：Reduced glutathione for Injection 汉语拼音：Zhusheyong Huanyuanxing Guguanggantai 其主要成份为还原型谷胱甘肽 其结构式为： 分子式：C10H18O6N3S 分子量：308.33 【性状】 【药理毒理】 还原型谷胱甘肽（GSH）是人类细胞质中自然合成的一种肽，由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸组成，含有巯基（－SH），广泛分布于机体各器官内，为维持细胞生物功能已呈有重要作用。它是甘油醛磷酸脱氢酶的辅基，又是乙二醛酶及丙糖脱氢酶的辅酶，参与体内三羧酸循环及糖代谢。本品能激活多种酶[如巯基(-SH)酶等]，从而促进糖、脂肪及蛋白质代谢，并能影响细胞的代谢过程；它可通过巯基与体内的自由基结合，可以转化成容易代谢的酸类物质从而加速自由基的排泄，有助于减轻化疗、放疗的毒副作用，对化疗、放疗的疗效无明显影响，如保护肾小管免受顺铂损害的主要机制为肾小管细胞内含谷胱肽解毒时所需的r-谷酰氨转肽酶，而痛细胞却无此酶，故在不影响本品的细胞毒效应同时保护了，正常组织但器官。且对放射性肠炎治疗效果较明显；对于贫血、中毒或组织炎症造成的全身或局部低氧血症患者应用，可减轻组织损伤，促进修复。通过转甲基及转丙氨基反应，GSH还能保护肝脏的合成、解毒、灭活激素等功能，并促进胆酸代谢，有利于消化道吸收脂肪及脂溶性维生素（A、D、E、K）。 【药代动力学】 小鼠肝注约5小时达血浓峰位，t1/2约24小时，在肝、肾、肌肉分布最多。 【适应症】 用于： ①化疗患者：包括用顺氯铵铂、环磷酰胺、阿霉素、红比霉素、博来霉素化疗，尤其是大剂量化疗时；
谷胱甘肽的制备 背景 谷胱甘肽(glutathione，GSH)是由L一谷氨酸、L一半胱氨酸和甘氨酸经肽键缩合而成的一种同时具有1一谷氨酰基和巯基的生物活性三肽化合物?，在生物体内具有多种重要的、独特的生理功能，因此又被称为长寿因子和抗衰老因子。作为一种重要的生理活性物质，GSH在解毒、抗辐射、肿瘤、癌症、氧化衰老和协调内分泌的治疗中效果明显且无副作用，这些同类药物所不具有的优点使得GSH在临床和医药领域有着极为广泛的用途【21。在食品加T中，GSH具有抗氧化、防止褐变、强化风味和营养等功能，已被作为生物活性添加剂应用于保健食品的生产中。但GSH在体内循环周期短、易氧化、不能穿过细胞膜，从而限制了其保健和治疗作用的发挥。据报道，脂质体包埋技术能够有效地提高GSH的保护和治疗作用。 试验步骤 1试验材料 谷胱甘肽(纯度≥98．0％) Amresco公司；乙醇、乙醚、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、柠檬酸(均为分析纯)、吐温一80(化学纯)、卵磷脂、胆固醇国药集团化学试剂有限公司；0．05m01·L。磷酸盐缓冲液(PBS) 自制。
2 实验方法 1．2．1脂质体的分离方法 1．2．1．1凝胶柱过滤法选用Sephadex G一25凝胶柱，取lmL脂质体混悬液进行上样分离，采用一定的洗脱剂洗脱，洗脱速度控制在0．5—1．0mL-min～，进行分部收集，测定游离的谷胱甘肽总量，计算包封率。 1．2．1．2洗脱剂的选择取1mg·mL“的谷胱甘肽溶液1mL上柱分离，分别选用去离子水、NaCI、乙醇、PBS、乙酸和PBS(NaCl)为洗脱剂进行洗脱，洗脱速度控制在0．5～1．0mL·min～，进行分部收集，。测定洗脱液中的谷胱甘肽总量，计算回收率。1．2．2脂质体包封率的测定方法 1．2．2．1 游离GSH的测定方法采用优化的Ellman?s测定法”1。 1．2．2．2包封率的计算方法将脂质体与游离谷胱甘肽分离，测定游离的谷胱甘肽量，根据下式计算脂质体包埋率：EE(％)=(1一Cf／Ct)×100％。其中：EE—GSH脂质体包封率；Cf一游离GSH含鼍；Ct一总GSH含量。 1．2．3 pH梯度法制备谷胱甘肽脂质体称取一定量的卵磷脂、胆固醇和叶温一80，溶于乙醚，得到类脂溶液；将类脂溶液置于圆底烧瓶中，在40'(2水浴中旋转蒸发除去乙醚，待类脂物在烧瓶壁上成膜后，加入一定pH的0．3tool·L。1柠檬酸10mL，继续旋转蒸发水合30min，得空白脂质体溶液；将谷胱甘肽加入空白脂质体溶液中，用0．5mol·L。1的磷酸氢二钠溶液调节pH，使pH增加3，将上述混合液在冰浴中短时超声(间歇超声，1s／1s)，静置2h，即得脂质体p。 1．2．4脂质体平均粒径和粒度分布吸取少量脂质体悬液，稀释至卵磷脂的含量在0．025％(W／W)，装入预处理过的透明小瓶中。用丙酮擦拭瓶外部并吹干。放人激光散射仪中进行检测旧?。激光散射测试条4r牛-：温度：25±0．1℃；角度：90。(即垂直照射)；波长：632．8nm；扫描时间：300s／样 2结果与讨论 2．1 脂质体分离方法的确定 2．1．1 分离方法的选择测定包封率的前提是将未包封的游离GSH与脂质体分开，凝胶
919 还原型谷胱甘肽的稳定性研究 朱义福 （星湖生物科技股份有限公司，广东肇庆 526040） 摘要：本文研究了pH 、温度、光照以及外加抗氧化剂等因素对还原型谷胱甘肽(GSH)纯品溶液稳定性的影响。结果表明，GSH 水溶液在pH=2.0~4.0范围内最为稳定；在30 ℃以下，24 h 内自身氧化较少；应避光处理或保存；外加抗氧化剂在pH=6.0时，保护作用明显。 关键词：谷胱甘肽；稳定性；抗氧化剂 文章篇号：1673-9078(2011)8-919-923 Stability of Reduced Glutathione under Different Conditions ZHU Yi-fu (Star Lake Bioscience Co., Inc., Zhaoqing 526040, China) Abstract: The effects of pH, temperature, sunlight and antioxidant on the stability of reduced glutathione (GSH) solution were studied in this paper. Results indicated that GSH solution was relative stabile under the following conditions: pH 2.0~4.0 and temperature <30℃. And it should be kept in dark place. Besides, the GSH solution showed the highest stability in the presence of antioxidant at pH 6.0. Key words: glutathione; stability; antioxidant 谷胱甘肽（Glutathione ，GSH ），即γ-L-谷氨酰-L-半胱氨酰-甘氨酸，是由L-谷氨酸、L-半胱氨酸和甘氨酸经肽键缩合而成的生物活性三肽化合物。GSH 是许多酶反应的辅基，在生物体内具有清除体内自由基、解毒等多种重要的生理功能，特别是对于维持生物体内适宜的氧化还原环境具有重要意义[1]。国内外关于GSH 的研究主要集中在菌种选育[2]、培养条件优化[3]、分离纯化[4]和临床应用上[5]，其工业化生产技术一直被国外极少数发达国家所垄断，国内尚未实现工业化生产，从而造成GSH 的市场价格居高不下，影响了GSH 的推广和应用。 GSH 易溶于水、稀醇、液氨和N,N-2甲基甲酰胺，而微溶于或不溶于醇、醚和酮。GSH 的固体较稳定，而水溶液在外界环境中受温度、pH 、光照等条件影响，易氧化，产生氧化型谷胱甘肽（即GSSG ），GSSG 是由两分子GSH 脱氢后通过二硫键相连的二聚体，其反应如下： 氧化型GSSG 不具有生理活性，只有还原型GSH 才能发挥重要的生理功能。GSH 的不稳定性是造成较难分离纯化、产品纯度不高的重要原因。因此，本文通过大量的试验对GSH 稳定性进行研究，为国内GSH 的工业化生产提供参考。 收稿日期：2011-03-26 作者简介：朱义福（1976-），男，工程师，研究方向：生物医药分离纯化技术 1 材料与方法 1.1 材料与试剂 GSH 纯品（纯度>98%）：日本Kyowa 公司。四氧嘧啶（Alloxan ）：美国sigma ； 二硫苏糖醇（DTT ）：上海生工所；抗坏血酸（Vc ）：广州化学试验厂；保险粉（Na 2S 2O 4）：上海国药集团化学试剂公司；其它试剂为国产分析纯。 1.2 主要仪器 SC-15数控超级恒温槽：宁波新芝生物科技公司；CR21G 高速冷冻离心机：日本Hitachi 公司；752型紫外可见光分光光度计：南京第四分析仪器公司；S40 pH 精密测量仪，AB54-S 分析天平：瑞士METTLER TOLEDO 公司；RW20D 搅拌器：德国IKA 公司；Agilent LC1100液相色谱仪：美国HP 公司。 1.3 分析方法 GSH 含量测定采用四氧嘧啶Alloxan 试剂法 [6]：（1）标准曲线的制作：准确称取6.146 mg 的GSH 标准品，用40%乙醇溶解，定容至100 mL ，得到浓度为200 μmol/L 的标准液。取0 mL 、0.2 mL 、0.4 mL 、0.6 mL 、0.8 mL 、1.0 mL 上述标准液于试管中，补加去离子水至1.0 mL ，配成浓度为0 μmol/L 、40 μmol/L 、80 μmol/L 、120 μmol/L 、160 μmol/L 、200 μmol/L 的GSH 溶液。然后依次加入pH 7.6的磷酸缓冲液2.5 mL ，0.1 mol/L 的甘氨酸溶液0.5 mL ，以及Alloxan 试剂1.0 mL ，反应20
阿拓莫兰（还原型谷胱甘肽片）说明书 【阿拓莫兰药品名称】 通用名：还原型谷胱甘肽片 商品名：阿拓莫兰 英文名：Reduced glutathione Tablets 汉语拼音：Huanyuanxing Guguanggantai Pian 【阿拓莫兰成份】 阿拓莫兰主要成份为还原型谷胱甘肽，其化学名为N-（N-L-γ-谷氨酰基-L-半胱氨酰基）甘氨酸。 【阿拓莫兰性状】 阿拓莫兰为薄膜衣片，除去包衣后显白色。 【阿拓莫兰产品介绍】 阿拓莫兰的主要成分是还原型谷胱甘肽（GSH），GSH是哺乳动物细胞内含量丰富的低分子量多肽，由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸残基组成，对人体具有十分重要的生理功能：解酒精毒性、保护肝脏； 解药物毒性（抗肿瘤药、抗结核药、中枢神经药物、对乙酰氨基酚等中毒），防止抗癌药物的副作用，预防和治疗放射线损害；对抗自由基，抗氧化；提高机体免疫力。 人体在许多状态下都可以使细胞内GSH生物合成能力降低，含量下降，尤其是在病理状态下。外源性GSH的补充，可以预防、减轻、中止、组织细胞的损伤，改变病理生理过程。药理毒理研究表明： 阿拓莫兰的主要成分（还原型谷胱甘肽）是含有巯基（SH）的三肽类化合物，在人体内具有活化氧化还原系统，激活SH酶、解毒作用等重要生理活性。参与体内三羧酸循环和糖代谢，促进体内产生高能量，起到辅酶作用。还原型谷胱甘肽是甘油醛磷酸脱氢酶的辅基，又是乙二醛酶及磷酸丙糖脱氢酶的辅酶。还原型谷胱甘肽能激活体内SH酶等，促进碳水化合物、脂肪及蛋白质的代谢，以调节细胞膜的代谢过程。还原型谷胱甘肽参与多种外源性、内源性有毒物质结合生成减毒物质。 【阿拓莫兰适应症】 1）肝损伤：病毒性肝病，药物性肝病，中毒性肝损伤，脂肪肝，肝硬化等； 2）肾损伤：急性药物性肾损伤，尿毒症； 3）化放疗保护； 4）糖尿病：并发症，神经病变； 5）缺血缺氧性脑病；各种低氧血症。 【阿拓莫兰用法用量】 成人常用量为每次口服400mg（4片），每日三次。疗程12周。 【阿拓莫兰不良反应】 1、过敏症：偶有皮疹等过敏症状，应停药。
主要目的： ——测定物质谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px ）活力。 主要原理： ——谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px ）可以促使过氧化氢（H 2O 2）与还原性谷胱甘肽（GSH ）反应生成H 2O 及氧化性谷胱甘肽（GSSG ）,谷胱甘肽过氧化物酶的活力可用其酶促反应的速度来表示，测定此酶促反应中还原型谷胱甘肽的消耗，则可求出酶的活力。 H 2O 2+2GSH 2H 2O+GSSG GSH-Px 的活力以催化GSH 的反应速度来表示，由于这两个底物在没有酶的条件下，也能进行氧化还原反应（称为非酶促反应），所以最后计算此酶活力时必须扣除非酶促反应引起的GSH 减少的部分。而GSH 含量的测定可以跟据GSH 和二硫代二硝基苯甲酸作用生成5-硫代二硝基苯甲酸阴离子呈现较稳定的黄色，在412nm 处测其吸光度即可计算出 实验室签章 GSH-Px
一、试剂 ——谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）测定试剂盒（南京建成生物研究所） 二、仪器设备 ——96孔酶标板 ——UV-Vis可见多功能酶标仪 ——旋涡混匀器 ——离心机 ——水浴锅 ——移液枪及其相应量程枪头
三、实验方法 根据试剂盒说明书具体操作步骤如下: 1. 非酶管和酶管各加入1 mmol/LGSH 0.2 mL ，酶管加入稀释后的待测血清和组织匀浆液0.2 mL ，37 oC 水浴预温5分钟，酶管和非酶管分别加入试剂一应用液0.1 mL ，37 oC 水浴准确反应5分钟，酶管和非酶管分别加入试剂二应用液2 mL ，同时非酶管加入待测细胞上清液0.2 mL 。混匀，3500-4000转/分，离心10分钟，取上清1 mL 作显色反应。 2. 空白管加入1 mL GSH 标准品溶剂应用液，标准管加入1 mL 20 μmol/LGSH 标准液，非酶管和酶管各加入上一步骤1 mL 上清液，然后空白管、标准管、非酶管和酶管各加入1 mL 试剂三应用液，0.25 mL 试剂四应用液和0.05 mL 试剂五应用液。 3. 混匀，室温静置15分钟后，在412 nm 处将酶标板空板进行扫描，准确吸取 0.2 mL 各管反应液加入到新的96孔板中，酶标仪测定各孔吸光度（OD 值）。 4. 血清中GSH-Px 活力计算公式 GSH-Px 活力（U/mgprot ）--OD = 非酶管值酶管OD 值标准管OD 值空白管OD 值 ×标准品浓度（20 μmol/L ）×稀释倍数 组织中GSH-Px 活力计算公式 GSH-Px 活力（U/mgprot ） --OD =非酶管值酶管OD 值标准管OD 值空白管OD 值×标准品浓度×min 稀释倍数（5）反应时间（5) ÷[取样量（0.2 mL ）×待测组织蛋白浓度（mgprot/ mL ）] 参考文献 Oliveira Lazarin M, Ishii-Iwamoto E L, Yamamoto N S, et al. Liver mitochondrial function and redox status in an experimental model of non-alcoholic fatty liver disease induced by monosodium L-glutamate in rats [J]. Experimental and molecular pathology, 2011, 91(3): 687-694.
谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)试剂盒使用说明 微量法注意：正是测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。 货号：BC1195 规格：100管/96样 产品内容： 试剂一：液体×1瓶，4℃保存。 试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。 试剂三：液体×1支，-20℃保存。 混合试剂配制：临用前，在试剂二中加入试剂一20mL，充分震荡溶解后加入全部试剂三，混匀。（注意：必须现配现用，当天使用完） 试剂四：液体×1瓶，4℃保存。 产品说明： GSH-Px是谷胱甘肽氧化还原循环中催化还原型谷胱甘肽（GSH）氧化的主要酶之一。GSH-Px不仅能够特异地催化还原型谷胱甘肽与ROS反应，生成氧化型谷胱甘肽GSSG，从而保护生物膜免受ROS的损害，维持细胞的正常功能；而且具有保护肝脏、提高机体免疫力、拮抗有害金属离子对机体的伤害和增加机体抗辐射等能力。 GSH-Px催化H2O2氧化GSH，产生GSSG；谷胱甘肽还原酶（GR）催化NADPH还原GSSG，再生GSH，同时NADPH氧化生成NADP+；NADPH在340nm有特征吸收峰，而NADP+没有；通过测定340nm光吸收减少速率来计算GSH-Px活性。 自备仪器和用品：
紫外分光光度计/酶标仪、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸馏水。 操作步骤： 一、粗酶液提取： 1.组织：按照组织质量（g）:试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取0.1g组织， 加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。10000rpm，4℃离心10min，取上清置冰上待测。 2.细菌、真菌：按照细胞数量104个：试剂一体积（ml）500~1000:1的比例,建议500万细 胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（率300w，超声3s，间隔7s，总时间3min）然后10000rpm，4℃，离心10min，取上清置冰上待测。 3.血清等液体：直接测定。 二、测定操作: 1.分光光度计预热30min，调节波长到340nm，蒸馏水调零。 2.混合试剂在25℃或者37℃（哺乳动物）水浴中预热30min以上。 3.空白管：依次在1mL石英比色皿中加入20μL蒸馏水、160μL预热的混合试剂，20μL 试剂四，迅速混匀后于340nm处测定第10s和第190s的吸光值，分别记为A空1和A空，△A空白管=A空1﹣A空2。 4.测定管：依次在1mL石英比色皿中加入20μL上清液、160μL预热的混合试剂，20μL 试剂四，迅速混匀后于340nm处测定第10s和第190s的吸光值，分别记为A测1和A测2，△A测定管=A测1﹣A测2。 注意：空白管只需测定一次。 三、GSH-Px活性计算：
还原型谷胱甘肽（GSH） 还原型谷胱甘肽（GSH） 还原型谷胱甘肽（GSH） 还原型谷胱甘肽（GSH） 中文别名：L-谷胱甘肽;5-L-谷氨酰-L-半胱氨酰甘氨酸;还原型谷胱甘肽;谷胱甘肽(还原型) 产品信息： 【分子式】C10H17N3O6S 【分子量】307.32 【CAS号】70-18-8 【外观】白色结晶性粉末 【产品规格】 1、含量：98%-101% 还原型谷胱甘肽原料药。 2、含量：8%，15%，50% 的谷胱甘肽酵母抽提物。 【产品的应用】 谷胱甘肽广泛应用在医药、保健品、食品添加剂、饮料、化妆品、生化试剂等领域，8%，15%，50% 的谷胱甘肽酵母抽提物，更是富含蛋白质、氨基酸、核酸、多种有机酸及丰富的B族维生素，能够提供更加全面的营养。 【产品包装与贮存】 1、1kg，5kg，10kg，20kg或25kg纸桶。 2、置于阴凉、干燥、通风处密封存放。 产品概述： 1、谷胱甘肽(GSH)是由谷氨酸（Glu）、半胱氨酸（Cys）和甘氨酸（Gly）通过肽键缩合而成的非蛋白巯基三肽化合物，是用途极广泛的活性短肽。 2、谷胱甘肽溶于水、稀醇、液氨和二甲基甲酰胺，而不溶于乙醇、醚和丙酮。谷胱甘肽的固体状态较为稳定，其水溶液在空气中易被氧化。 产品功能： 1、谷胱甘肽（GSH）是神奇的抗氧化剂 谷胱甘肽是含巯基的抗氧化剂，能够清除影响人体健康的自由基，现代医学认为，自由基是导致衰老和疾病的主要原因之一。人体细胞的抗氧化系统中含量最多和最重要的就是谷胱甘肽，谷胱甘肽是清除自由基的主力军，被科学家誉为“大师级抗氧化剂”和“谷胱甘肽防御系统”。谷胱甘肽不仅直接参于清除自由基，还对外来的抗氧化剂如维生素C和E等起到调节作用，保持它们的活性（还原）状态。 自由基是人体细胞代谢过程中产生的一类高化学活性的中间物质，它能够攻击蛋白质、DNA和细胞膜中的脂质大分子，破坏这些生物大分子的生理功能，使细胞膜变硬变脆而丧失功能，缩短细胞的寿命；能导致细胞膜形成空隙，使致病菌、病毒等侵入细胞，进一步破坏核膜，使遗传物质暴露，致使遗传物质受损，引起突变和破坏；加重免疫细胞受损，使受损的机体，免疫力低下，许多病症更容易发生。1956年，哈曼教授首先提出了自由基理论，他发现长期在强日光下作业的渔夫寿命比较短，进一步研究证明紫外线会刺激体内产生自由基，而自由基会促进生理周期老化，使死亡提前到来。 在正常状态下，人体细胞内的谷胱甘肽能够及时和人体代谢过程中产生的自由基结合，转化为低活性的物质，消除自由基对人体的伤害。但是，随着人年龄的增长，人体自身产生谷胱甘肽的能力变弱，产生的谷胱甘肽的量不足以及时清除掉人体内的自由基，多余的自由基开始破坏细胞内的生物大分子物质，细胞功能受到影响，人体开始出现衰老，疾病开始增多；另外，一些外界因素：如紫外线辐射，饮酒，吸烟，环境污染，某些药物等，也会导致人体产生过多的自由基，会加大人体内谷胱甘肽的需求，一旦谷胱甘肽供应不足，多余的自由基就会损害人的健康，影响人的寿命。
谷胱甘肽的化学与医疗作用 卢 薇 (江苏职工医科大学 南京 210029) 摘要 谷胱甘肽(glutathione,GSH)在体内以氧化型(GSSG)和还原型(GSH)2种形式 存在。GSH分子中的巯基容易失氢氧化,因而可以消除体内的活性氧,具有保护酶和蛋白 质免受氧化,保护脏器免受损伤的功效。人工合成的GSH已广泛用于临床。 关键词 谷胱甘肽 活性氧 酶 解毒作用 谷胱甘肽(glutathione,GSH)是体内最早发现的天然的游离三肽,普遍存在于动物组织中,如肝、肾、心肌、脾、肠、脑和红细胞等,细胞内浓度为0.5mmol/L～10mmol/L;血浆内浓度仅1μmol/L～5μmol/L,约为细胞内浓度的千分之一。 GSH是由谷氨酸(G lu)、半胱酸(Cys)和甘氨酸(G ly)组成的非蛋白巯基化合物,含有γ-羧基形成的酰胺键,其化学结构及合成反应如图1。 2分子GSH脱氢氧化成为GSSG,后者又可通过磷酸戊糖代谢通路中所产生的还原型辅酶Ⅱ(NADPH)和GSH还原酶的作用,还原成GSH。 还原型谷胱甘肽分子中最重要的结构是巯基(-SH),-SH容易失氢发生氧化,因此,GSH可以保护一些含-SH的蛋白质及酶免受氧化剂的损害;同时,-SH中的氢容易被自由基提取,如下式所示: -SH+?R-S?+HR 因而具有清除自由基的能力。 还原型谷胱甘肽与氧化型谷胱甘肽在细胞内维持一定的比值(GSH/GSSG=100/1),GSH的含量随年龄、营养状况及内分泌的不同而变化,如甲状腺机能低下或肝脏疾病、药物中毒等情况下会引起GSH水平降低。GSH/GSSG保持稳态关系对维护组织细胞、多种蛋白质、酶的结构及其功能有重要意义。 1 谷胱甘肽的生理功能 1.1 清除体内的过氧化物及自由基 GSH可在含硒过氧化物酶(GSHpx)的催化下将体内有害的过氧化物、自由基(O2-?、HO?)加以化解和清除,如下式所示: 2GSH+ROOH GSHpx GSSG+2ROH ROOH和自由基不仅氧化某些具有重要生理作用的含巯基的酶和蛋白质,使之丧失活力,而且还将细胞膜磷脂分子中多不饱和脂肪酸氧化生成过氧化物;而生成的过氧化脂质又通过自身的催化连续生成大量过氧化物,因此GSH通过自身氧化能中止脂质过氧化的连锁反应。
植物生理学模块实验指导 玲主编 科学 还原型谷胱甘肽含量的测定方法（分光光度计法） 【实验目的】 了解植物组中中抗坏血酸-谷胱甘肽循环代过程，学习还原型谷胱甘肽含量的测定原理和方法。 【实验原理】 谷胱甘肽是有谷氨酸（Glu）、半胱氨酸（Gly）组成的天然三肽，是一种含巯基（—SH）的化合物，广泛存在于动物组织、植物组织、微生物和酵母中。谷胱甘肽能和5,5’-二硫代-双-（2-硝基苯甲酸）（5,5’-dithiobis-2-nitrobenoic acid，DTNB）反应产生2-硝基-5-巯基苯甲酸和谷胱甘肽二硫化物（GSSG）。2-硝基-5-巯基苯甲酸为一黄色产物，在波长412nm处具有最大光吸收。因此，利用分光光度计法可测定样品中谷胱甘肽的含量。 【器材与试剂】 1.实验仪器与用具 研钵、高速冷冻离心机、微量移液枪、离心管、试管、水浴锅、容量瓶（100ml、200ml、1000ml）、分光光度计 2.实验试剂 50g/L三氯乙酸（TCA）溶液（含5mmol/L Na 2 -EDTA）：称取5g三氯乙酸，用蒸馏水溶 解稀释至100ml。再称取186mg Na 2-EDTA·2H 2 O，加入到100ml 50g/L三氯乙酸溶液中溶解。 0.1mol/L磷酸钠溶液缓冲液（pH7.7）：配制方法见附录。 0.1mol/L(pH6.8)磷酸钠缓冲液：配制方法见附录。 4mmol/L二硫代硝基苯甲酸（5,5’-dithiobis-2-nitrobenoic acid，DTNB）溶液：称取15.8mg DTNB，用0.1mol/L、pH6.8磷酸缓冲液溶解，定容至10ml，混匀，4℃保存。现用现配。