微
生
物
学
综
述
题目：蓝细菌的应用与研究发展
班级：生物技术2013（生物制药）
蓝细菌的应用和研究发展
摘要：蓝细菌 (Cyanobacteria)旧名蓝藻或蓝绿藻，是一类进化历史悠久、革兰氏染色阴性、无鞭毛、含叶绿素和藻蓝素（但不形成叶绿体）、能进行产氧性光合作用的大型原核微生物。本文就蓝细菌的光合作用、固氮作用、食品功用、医疗功效、环境监测等，以及其研究发展进行了综述。
关键词：蓝细菌，光合作用，生物固氮，制氢研究，功能食品，环境监测蓝细菌是原核生物，又叫蓝藻、蓝绿藻，大多数蓝藻的细胞壁外面有胶质衣，因此又叫粘藻。在所有藻类生物中，蓝藻是最简单、最原始的一种。其应用是多方面的，主要有光合作用、固氮作用、功能食品等。常见种类有蓝球藻、颤藻、念珠藻、鱼腥藻、螺旋藻等。蓝细菌是海洋生态系统的重要组成部分，在初级生产中占有重要地位，对海洋生态系统的稳定性和多样性具有重要意义。
一．分布
目前蓝细菌约有2 000种，由于可耐受恶劣的极端环境，因此广泛地分布在淡水、湖沼和海洋等水体中以及潮湿土壤、岩石、树木等处，即使在寒冷的南极和高达85℃的温泉中，甚至在贫瘠的沙质海滩和荒漠的岩石上都能存在。蓝细菌在地球环境的演变和生物的进化中也起到非常重要的作用，因为蓝细菌是地球上最早的放氧型光养生物，担负着地球大气从无氧到有氧的转换功能。蓝细菌目前至少有三方面的开发应用：一是它可直接食用，蓝细菌是目前已知生物蛋白质含量最高的，可达50％以上，如发菜、螺旋藻等是极具开发前景的食品；二是在基因改造方面的应用，可将蓝细菌中能够抵抗恶劣环境的基因鉴定并分离出来，构建有更好地抵抗恶劣环境能力的转基因作物；三是在环保领域的应用。利用蓝细菌能结合并清除水中有害金属、有害化学物质以及利用其对海水淡化的能力，进行环境污染监测和污染水的处理。但应注意，当淡水、海水中的N、P营养成分增加造成水体富营养化时，蓝细菌会形成赤潮和水华这种自然生态现象，使水中含氧量降低和有毒物质积累，造成鱼类等水生生物死亡。另外，蓝细菌的次生代谢产物能损害肝，具有促癌效应，通过食物链和饮用水直接威胁人类的生存和健康。
二. 应用
2.1光合作用
蓝细菌体内含有一种天蓝色的色素蛋白-藻蓝蛋白，蓝细菌正是利用这种蛋白质来捕光，进行光合作用。蓝细菌体内没有叶绿体, 但含有叶绿素，和植物中进行光合作用的色素是一样的。蓝细菌细胞内进行光合作用的部位称类囊体, 类囊体膜上含有叶绿素α、β-胡萝卜素以及与光合电子传递链有关的组分。类囊体所特有的藻胆蛋白可以吸收光能, 并把它转移到光系统Ⅱ中。由于光合蓝细菌能够利用太阳能和CO2作为唯一能源和碳源进行生长,进而经基因工程修饰后生产各种生物燃料以及精细化学品，因而作为“微生物细胞工厂”而备受关注。作为一个新兴的基因工程宿主菌，蓝细菌具有以下优势：1) 蓝细菌拥有复杂的光合系统，能够吸收广泛波长的太阳光并将其能量直接传递给其他形式的能量载体。同时，蓝细菌光能利用率是陆生植物的数倍(蓝细菌3％~9％，陆生植物≤0.25％~3％)。
2) 蓝细菌种类多样、分布广泛，培养不需要耕地，甚至可以在极端环境下生长。
3) 蓝细菌的生长营养需求低，只需空气(CO2和N2来源)、水、简单的无机盐和
光(能源)，降低了生产成本。同时，利用大气中的温室气体CO2作为碳源，有希望扭转或减缓全球变暖进程。4) 蓝细菌生长比植物快，培养周期短，生长密度高。
伴随着对蓝细菌代谢途径理解的深入以及几十种蓝细菌基因组测序的完成，使得人工改造蓝细菌并将之利用于各种工业产品的规模化生产成为可能。
2.2固氮作用
蓝藻的种类有2000多种，其中有固氮能力的只有20种。多数固氮蓝藻是水生植物，每年能固氮25-100kg/ml。1961年发现的束毛藻目前固氮量最大的一种群体海洋细菌。目前，蓝细菌仍然是在藻类和豆类作物提供氮肥的重要来源。这已经在稻类的耕作中利用起来，如满江红被散布在水稻周围。蕨类植物的叶子为鱼腥蓝细菌提供生存场所，进行固氮作用；而蕨类植物在过季时死亡后则为稻物提供了一种低成本的天然化肥和氮源。实践表明对蓝细菌的固氮特性，若将其固氮能力转移到水稻、小麦等作物体内，使之实现氮肥自给，将导致农业生产的革命。
2.3制氢研究
蓝细菌具有很低的营养要求，能够利用太阳能直接光解水产生氢能。能够产氢的蓝细菌有丝状异形胞蓝细菌、丝状非异形胞蓝细菌、单细胞不固氮蓝细菌三大类。
蓝细菌中参与氢代谢主要有固氮酶、吸氢酶和可逆氢酶，其中，固氮酶在催化固氮
的同时催化氢的产生，吸氢酶可氧化固氮酶放出的氢，可逆氢酶可以吸收也可以释放氢气。而蓝细菌放氢是这三种酶共同作用的结果。目前，蓝细菌氢的产率和光能转化效率尚未达到实际应用的要求，但已进行的研究工作为进一步提高蓝细菌产氢的效率奠定了基础。蓝细菌产氢的主要障碍在于：产氢酶受氧的抑制，产生的氢被吸氢酶消耗，以及氢的产率较低。提高蓝细菌的产氢率需要在蓝细菌遗传、生理和培养等方面进行深入的研究，这包括分离和研究更多的蓝细菌。值得注意的是蓝细菌可逆氢酶在进行催化作用时仅需要很少的能量，在理论上具有比固氮酶更强的放氢能力，蓝细菌可逆氢酶的放氢能力值得深入研究和利用。
2.4 功能食品
蓝细菌特别是螺旋藻被认为是最理想的功能食品,它的蛋白质含量非常的高，培养却非常简单。研究表明螺旋藻是所有已被发现的生物中营养最丰富、最全面均衡的海洋生物,1987年被联合国粮农组织推荐为21世纪人类最理想的保健食品。蓝细菌分布广泛,是海洋生态系统的重要组成部分和海洋初级生产力的重要组成部分。功能食品最新定义为一种含有能对生理功能产生正面调节作用的有效成分, 并可以对身体健康提供超过基础营养功效的食品。功能性食品的市场已经遍及全球并且发展迅猛,2006年11月中国食品科学技术学会( CIFST)功能食品分会正式成立, 并宣称将大力加强国际国内功能食品领域的交流与合作。据调查显示螺旋藻蛋白质含量相当于大豆蛋白质含量的20倍;β-胡萝卜素含量是一般胡萝卜的10~15倍;其所含的一般植物中缺乏的VB12比牛肝所含的量高出2.5倍; 其γ-亚麻酸含量更是一切天然食物中最丰富的。螺旋藻还含有铁、锌、铜、钙及其它微量元素, 其叶绿素、叶黄素、藻蓝素的含量也是其它食物无法媲美的。作为最理想的功能食品, 螺旋藻易于被人体消化吸收, 长期食用, 可以调节人体生理机能, 促进细胞新陈代谢。
2.5 保健功效
蓝细菌中的螺旋藻可以产生多糖，经试验证明，螺旋藻多糖具有提高机体免疫力和抑制癌细胞增殖的能力。Richmond等报道，螺旋藻多糖能有效的提高淋巴细胞的活性，改善造血功能，还可以显著降低血清尿素氮增量，提高血清中乳酸脱氢酶活力，降低运动后血乳酸水平，具有明显的抗疲劳作用。最近发现硫酸化多糖能阻止病毒对宿主细胞的附着与融合，同样能够阻止受HIV感染的细胞与未感染的CD4+胸腺淋巴细胞的融合，大大降低了病毒的传染性。
Jaspars和Lawton 描述了一些从蓝细菌中获得的蛋白酶抑制剂，Microginins，Aeruginosins，Cyanopeptolins。Microginins 被用于治疗高血压，丝氨酸蛋白酶抑制剂Cyanopeptolins被用于治疗哮喘和病毒性感染。
2.6 环境影响
蓝细菌与水环境有着密切的关系，在水体生长旺盛时，能使水色变蓝或其他颜色，并且有的蓝细菌能发出草腥味或霉味。然而，有某些属如：微囊蓝细菌属、鱼腥蓝细菌属和水华束丝蓝细菌属在富营养化的海湾和湖泊中由于大量繁殖，引起海湾的赤潮和湖泊的水花(华) ，导致水质恶化。有些属能分泌毒素，严重者引起水生动物大量死亡，引起一系列的环境问题。蓝细菌在污水处理、水体自净中可起到积极作用，用它可有效地去除氮和磷。在氮、磷丰富的水体中生长旺盛，可作水体富营养化的指示生物。
蓝细菌是一类能进行放氧光合作用的原核微生物,具有生长速度快、光合效率高、易于基因遗传操作等特点。它们能够将捕获的光能和二氧化碳转化为生物能源分子,在解决当前社会面临的能源紧缺和环境污染等问题上有着重要的理论和应用研究价值。近年来,随着合成生物学的迅猛发展,构建以蓝细菌为底盘的"人工细胞工厂"用于合成各类生物能源和精细化学产品取得了令人瞩目的成绩。
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微生物学题库 绪论 1．非细胞型微生物所具有的生物学特点是( C ) A．必须用选择培养基进行培养 B．细胞壁的主要成分是肽聚糖 C．只有在活细胞内才能够增殖 D．结构中缺少RNA或者 DNA 2．以下哪种病原体不属于原核细胞型微生物( A ) A．病毒 B．衣原体 C．细菌 D．螺旋体 3. 原核细胞型微生物细胞结构中不包括（A） A.线粒体 B.DNA C.核糖体 D.RNA 4．真核细胞型微生物的生物学性状有( AC) A．细胞核内有核仁 B．细胞器中缺少线粒体 C．可在无生命的培养基中生长 D．紫外线照射不能破坏其DNA 5．原核细胞型微生物与真核细胞型微生物相比较不同处在于( AB) A．原核细胞型微生物细胞壁组成成分以肽聚糖为主 B．原核细胞型微生物核糖体结构与真核微生物不同 C．原核细胞型微生物只能在有生命的细胞体内增殖 D．原核细胞型微生物不会被毒性噬菌体感染而裂解 6．非细胞型微生物可引起以下哪些疾病( AD) A．乙型脑炎 B．风湿性心脏病 C．沙眼 D．流行性感冒 7．原核细胞型微生物包括细菌、放线菌、支原体、衣原体、立克次体和螺旋体。 8．微生物分为三大类：原核细胞型微生物、真核细胞型微生物和非细胞型微生物。 9．微生物是广泛存在于自然界形体微小、结构简单，用肉眼看不见而必须应用显微镜放大数百倍、数千倍、甚至数万倍才能观察的一类微小生物。 第 1 章细菌的形态与结构 1．使用油镜头观察细菌是其优点是( D ) A．可将细菌放大900 至 1000 倍 B．可在镜下观察到细菌的包涵体 C．油液可以固定细菌的游走范围 D．油镜下视野亮度比普通镜头高 2．青霉素可用来杀灭病原菌，但对动物细胞无毒性( 除可能引起过敏外 ) 的原因是 ( D ) A．青
2012级制药专业 工业微生物学实验报告 姓名: 刘甜甜学号: 2012304090 班级: 制药12-2班指导老师：王健 日期：2014.6.11
一、实验目的 1、抑制或杀死微生物的一些物理、化学及生物的因素抑菌、杀菌的原理。 2、掌握物理、化学及生物的因素抑菌、杀菌的试验方法。 3、了解细菌的形态特征、染色特点。 4、了解细菌在普通培养基、选择培养基、血平板上的菌落特征。 5、掌握细菌分离划线培养的方法。 6、掌握细菌的初步生化反应。 7、掌握细菌密集划线法，掌握细菌K-B药敏纸片法。 二、实验内容 1 细菌Gram’s stain染色，镜检，观察记录细菌形态和特色特征 1.1 实验原理：染色原理：G+菌与Gˉ菌细胞壁不同，G+菌比Gˉ菌细胞内核糖核酸镁盐含量高，G+菌比Gˉ等电点低。 1.2 实验步骤： 1.2.1.制片：○1涂片：取半滴生理盐水置一洁净玻片上，以无菌操作技术自平板上去菌落少许，与生理盐水混匀，均匀涂布约1cm2大小，自然干燥； ②固定：取含菌膜的玻片与酒精灯火焰上来回三次，使菌膜牢固附于玻片表面； 1.2.2染色：①初染：取结晶紫一到两滴覆盖于菌膜表面，轻微摇动，维持30〃~40〃,细流水冲洗，切勿直接冲洗涂片区域； ②媒染：取卢氏碘液1~2滴覆盖菌膜表面，轻微摇动，维持30〃~40〃,用上法细流水冲洗； ③脱色：取95%酒精2~3滴于菌膜表面，轻微摇动，局部接近无色即可, 用上法细流水冲洗； ④复染：取1：10稀释石炭酸复红覆盖涂片区域，轻微摇动，用上法细流水冲洗； ⑤吸水纸初步吸干玻片水分，然后自然干燥； 1.2.3 镜检：于涂片区域加半滴香波油，油镜（100倍目镜）下。 图1：Gram’s stain（1000×）图2：染色试验 三、分离培养 1实验原理：四区划线法是把混杂着在一起的微生物或同一微生物群体的不同细胞用接种环在平板培养基表面通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞，经培养繁殖后生成个菌落。有时这些单菌落并非由单个细胞繁殖而来，故必须反复分离多次才能得到纯种。其原理是微生物样品在固体培养基表面多次作“由点到线”稀释而达到分离的目的。
第一章 1.第一个观察并描述了微生物的人是（列文·虎克）。发明了外科消毒手术的人是（约瑟夫·李斯特）。 2.微生物学奠基人是（巴斯德、柯赫）， 3巴斯德的主要贡献是： （1）彻底否定了微生物“自然发生说” （2）提出了“疾病的病原微生物巴斯德，证实发酵是由微生物引起的； （3）创立了巴斯的消毒法； （4）发明了狂犬病毒疫苗制备方法。学说”；○ 4柯赫的主要贡献是P3 （1）证明了炭疽病和结核病的病原体，并因在结核病病原体方面的工作获得1905年诺贝尔奖； （2）建立“柯赫定律”： （3）在病原微生物的研究过程中发展了微生物无菌操作技术， （4）建立了微生物纯培养分离技术，发明了培养基特别是固体培养基制备方法。 5微生物与制药工程专业有什么关系？ （1）临床广泛应用的微生物药物及其开发 （2）抗菌药物的药物敏感性试验 （3）药物生产过程中微生物的对药品质量的影响 （4）药品生产质量管理规范（ＧＭＰ）中的微生物控制 （5）药物质量控制中的微生物学检查 6微生物的基本特征 1个体微小，结构简单。2吸收多，转化快。3生长旺，繁殖快。4分布广，种类多5适应强，易变异
第二章原核微生物 1.细菌个体的基本形态有哪些?（球状、杆状、螺旋状）球菌根据其分裂后的排列状况可分为哪六种类型?（单球菌、双球菌、四联球菌、八叠球菌、葡萄球菌、链球菌）螺旋菌根据其形态结构可分为哪几种？（弧菌、螺菌、螺旋体） 2.细菌的一般结构和特殊结构各有哪些？（一般结构：细胞壁、细胞膜、细胞质、原 核等；特殊结构：鞭毛、性菌毛、糖被、芽孢等；）特殊结构各有什么生理功能？（鞭毛的生理功能是运动，这是原核生物实现其趋性的有效方式；菌毛具有使菌体粘附于物体表面的功能；性毛功能是供体菌向受体菌传递遗传物质，有的性毛还是RNA噬菌体的特异性吸附受体；糖被功能有保护作用、作为透性屏障或离子交换系统、表面附着作用、细菌间的信息识别作用、堆积代谢废物、储存碳源和糖源；芽孢具有抗热、抗干燥、抗化学药物、抗酸碱、抗辐射和抗静水压等生理功能） 3.细菌和病毒大小的量度单位各是什么？（细菌：微米；病毒：纳米；） 4.革兰氏染色的机理？ 革兰氏染色是基于细菌细胞壁特殊化学组分基础上的一种物理过程。通过初染和媒染后，在细菌细胞膜或原生质上染上了结晶紫和碘的大分子复合物，革兰氏阳性菌由于细胞壁较厚，肽聚糖含量较高和其分子交联度较紧密且基本上不含类脂，故用乙醇洗脱时，肽聚糖网孔会因脱水而明显收缩，结晶紫与碘的大分子复合物不能透过网孔而留在细胞壁内，故显紫色。革兰氏阴性菌因其壁薄，肽聚糖含量低和交联疏松，类脂含量高，乙醇洗脱时，类脂溶解，细胞壁上出现较大空隙，结晶紫与碘的复合物易溶出细胞壁，因此，乙醇洗脱后，细胞又呈无色。这时，再经红色染料复染，就使革兰氏阴性菌呈现红色。 5.缺壁细菌有哪几种类型？（原生质体、球状体或原生质球、L型细菌）它们是怎样产生的？（原生质体：在人工条件下用溶菌酶除尽原有细胞壁或用青霉素抑制细胞壁合成后，留下的仅由细胞膜包裹着的细胞； 球状体或原生质球：用溶菌酶或青霉素处理后还残留部分细胞壁的原生质体；L型细菌：在实验室中通过自发突变而形成的遗传稳定的细胞壁缺陷菌株） 6.细菌细胞质内有哪些内含物？（储藏物、磁小体、羧酶体、气泡）它们的成分各是 什么？（储藏物：聚-β-羟基丁酸、多糖类储藏物、聚磷酸颗粒、藻青素；磁小体：四氧化 三铁，外有一层磷脂、蛋白或蛋白膜包裹；羧酶体：1,5-二磷酸核酮糖羧化酶；气泡是充满气体的泡囊状内含物）各有什么功能？（储藏物主要功能是储存营养物；磁小体功能是导向作用，即借鞭毛游向对该菌最有利的泥、水界面微氧环境处生活；羧酶体是自养细菌固定二氧化碳的场所；气泡是调节细胞密度以使细胞漂浮在最适水层中获取光能、氧气和营养物质。） 7.放线菌的基本形态是什么？（放线菌菌体由丝状菌丝构成，由基内菌丝、气生菌丝、孢子丝、和孢子等部分组成。）是怎样进行繁殖的？（放线菌主要通过无性孢子进行繁殖，
一·什么是微生物 微生物是一切肉眼看不见货看不清的微小生物总称。他们都是一些个体微小，结构简单的低等生物。【23】由于划分微生物的标准仅仅是按照微生物的形态大小，所以微生物的成员就十分的庞大。按照粗分起来算，可以包括属于原核类的细菌（真细菌和古细菌），放线菌，蓝细菌（旧称’’蓝绿藻’’或’’蓝藻’’），支原体（又称枝原体），立克次氏体和衣原体；属于真核类的真菌（酵母菌，霉菌等），原生动物和显微藻类，以及属于非细胞类的病毒和亚病毒（类病毒，拟病毒和朊病毒）。【21】现表解如下： 微米级：光学显微镜下可见（细胞） 小（个体微小） 纳米级：电子显微镜下可见（细胞器，病毒） 单细胞 简（结构简单）简单多细胞 微生物 非细胞（即“分子生物”） 原核类：细菌（真细菌，古细菌），放线菌，蓝细 菌，支原体，立克次氏体，衣原体等低（进化地位低）真核类：真菌（酵母菌，霉菌），原生动物，显微 藻类 非细胞类：病毒，亚病毒（类病毒，拟病毒，朊 病毒） 二·人们对微生物的认识 人类对动物和植物的认识，可以追溯到人类的出现。可是，对于数量无比庞大，分布极其广泛并且始终包围在人体内外的微生物却长期缺乏认识。【17】例如，你是否会想到一个刚刚出生的新生儿，在其呱呱坠地的瞬间，就有多种微生物从其四周趁机赶上，争先恐后的前来“圈地”，“瓜分”和“占领”这么一个“无菌动物”的口腔，消化道，呼吸道，泌尿生殖道和皮肤等“风水宝地”，并且从此发展成为两者须臾不可分离的人体正常的菌群或终生伴生微生物？又如，你是否想到过，在我们每天的食物和饮料中，竟有这么多的微生物及其产物在默默地为我们提供可口的滋味，丰富的营养和健康的保障？原来，我们面前琳琅满目的食品——酸奶，酒类，馒头，面包，蛋糕，干酪，酱油，味精食醋，泡菜，腐乳和各种食用菌等都是由微生物加工而成的或者本身就有的微生物！再如，你是否想到过，在我们每天大有两万次呼吸活动中，有多少种微生物在进进出出，它们和人体会发生些什么关系？此外，在我们偶遇病原菌侵袭而不幸感染上传染病时，
山东大学实验报告2017年11月27日 ________________________________________ _________________________ 科目：微生物学实验题目：微生物大小与数量的测定姓名：丁志康 一、目的要求 1.学习并掌握用测微尺测定微生物大小的方法。 2.增强微生物细胞大小的感性认识。 3. 明确血细胞计数板计数的原理。 4. 掌握使用血细胞计数板进行微生物计数的方法。 二、基本原理 一）微生物大小的测定 1.微生物细胞的大小是微生物基本的形态特征，也是分类鉴定的依据之一。微生物 大小的测定，需要在显微镜下，借助于特殊的测量工具——测微尺，包括目镜测 微尺和镜台测微尺。 2.镜台测微尺是中央部分可有精确等分线的载玻片，一般是将1mm等分为100格每 格长0.01mm（即10μm）。镜台测微尺并不直接用来测量细胞的大小，而是用于 矫正目镜测微尺每格的相对长度。 3.目镜测微尺是一块可放入接目镜内的圆形小玻片，其中央有精确的等分刻度，有 等分为50小格和100小格两种。测量时，需将其放在接目镜中的隔板上，用以 测量经显微镜放大后的细胞物象。由于不同显微镜或不同的目镜和物镜组合放大 倍数不同，目镜测微尺每小格所代表的实际长度也不一样。因此，用目镜测微尺 测量微生物大小时，必须先用镜台测微尺进行校正，以求出该显微镜在一定大放 大倍数的目镜和物镜下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度。然后根据微生物 细胞相当于目镜测微尺的格数，即可计算出细胞的实际大小。 4.球菌用直径来表示其大小；杆菌则用宽和长的范围来表示。如金黄色葡萄球菌直 径约为0.8μm，枯草芽孢杆菌大小为0.7~0.8×2~3μm。 二）微生物数量的测定 1.微生物数量的测定有多种方法，本次试验中使用显微镜直接计数法。显微镜直接 计数法是将少量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻 片上(又称计菌器)，于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法。目前 国内外常用的计菌器有：血细胞计数板、Peteroff-Hauser计菌器以及Hawksley 计菌器等，它们都可用于酵母、细菌、霉菌孢子等悬液的计数，基本原理相同。 后两种计菌器由于盖上盖玻片后，总容积为0.02mm3，而且盖玻片和载波片之间 的距离只有0.02mm，因此可用油浸物镜对细菌等较小的细胞进行观察和计数。（除 了用这些计菌器外，还有在显微镜下直接观察涂片面积与视野面积之比的估算法， 此法一般用于牛乳的细菌学检查。)显微镜直接计数法的优点是直观、快速、操
山东大学实验报告2012年 12 月 4日 姓名系年级 2011级生科2班组别四 科目微生物学实验题目微生物的生理生化反应 微生物的生理生化反应 一、【实验目的】 1. 证明不同微生物对各种有机大分子物质的水解能力不同，从而说明不同微生物有着不同的酶系统。 2.掌握进行微生物大分子物质水解试验的原理和方法。 3.了解糖发酵的原理和在肠细菌坚定中的重要作用。 4.掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。 5. 了解吲哚和甲基红试验的原理以及其在肠道细菌鉴定中的意义和方法。 二、【实验仪器与试剂】 菌种：枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、普通变形杆菌、产气肠杆菌培养基：培养基：固体淀粉培养基、固体油脂培养基（大分子水解试验）；葡萄糖发酵培养基、乳糖发酵培养基（内装有倒置的德汉氏小管）（糖发酵试验）；蛋白胨水培养基（吲哚试验）；葡萄 糖蛋白胨水培养基； 试剂：卢戈氏碘液、乙醚、吲哚试剂、甲基红试剂、蒸馏水、 仪器：酒精灯、接种针、培养皿、试管、试管架、烧杯、量筒、德汉氏小管 三、【实验原理】 1.在所有生活细胞中存在的全部生物化学反应称之为代谢，代谢过程主要是酶促反应过程，由于各种 微生物具有不同的酶系统，所以他们能利用的底物不同，或虽利用相同的底物但产生的代谢产物却不同，因此可以利用各种生理生化反应来鉴别不同的细菌，尤其是在肠杆菌科细菌的鉴定中，生理生化试验占有重要的地位。 2.淀粉的水解：由于微生物对淀粉这种大分子物质不能直接利用，必须靠产生的胞外酶将大分子物质 分解才能被微生物吸收利用.胞外酶主要为水解酶,通过加水裂解大的物质为较小的化合物,使其能被运输至细胞内.如淀粉酶水解淀粉为小分子的糊精,双糖和单糖；而淀粉遇碘液会产生蓝色，因此能分泌胞外淀粉酶的微生物，则能利用其周围的淀粉，在淀粉培养基上培养用碘处理其菌落周围不呈蓝色，而是无色透明圈，据此可分辨微生物能否产生淀粉酶。 3.油脂的水解：在油脂培养基上接种细菌，培养一段时间后观察菌苔的颜色，若出现红色斑点，则说 明此中菌可产生分解油脂的酶。 4.糖发酵试验：糖发酵试验是常用的鉴别微生物的生化反应,在肠道细菌的鉴定上尤为重要.绝大多数 细菌都能利用糖类作为碳源和能源,但是它们在分解糖类物质的能力上有很大的差异.有些细菌能分解某种糖产生有机酸(如乳酸,醋酸,丙酸等)和气体(如氢气,甲烷,二氧化碳等);有些细菌只产酸不产气. 例如大肠杆菌能分解乳糖和葡萄糖产酸并产气。产酸后再加入溴甲酚指示剂后会使溶液呈黄色，且德汉氏小管中会收集到一部分气体。若细菌不能使糖产酸产气，则最后溶液为指示剂的紫色，且德汉氏小管中无气体。 5.IMVC实验主要用于快速鉴别大肠杆菌和产气肠杆菌。 （1）吲哚试验：是用来检测吲哚的产生，在蛋白胨培养基中，若细菌能产生色氨酸酶，则可将蛋白胨中的色氨酸分解为丙酮酸和吲哚，吲哚与对二甲基苯甲醛反应生成玫瑰色的玫瑰吲哚。但并 非所有的微生物都具有分解色氨酸产生吲哚的能力，所以吲哚实验可以作为一个生物化学检测
《微生物学》复习思考题 第1章绪论 1.名词解释：微生物，微生物学 2.用具体事例说明人类与微生物的关系。 3.微生物包括哪些类群？它有哪些特点? 4.为什么说巴斯德和柯赫是微生物学的奠基人? 5.试根据微生物的特点，谈谈为什么说微生物既是人类的敌人，更是人类的朋友？ 6.简述21世纪微生物学发展的主要趋势。 第2章原核微生物 1.名词解释：肽聚糖、溶菌酶、核区、异形胞 2.根据革兰氏阳性细菌与革兰氏阴性细菌细胞壁通透性来说明革兰氏染色的机制。 3.什么是芽孢？它在什么时候形成？试从其特殊的结构与成分 说明芽孢的抗逆性。渗透调节皮层膨胀学说是如何解释芽孢耐热机制的？ 4.立克次氏体有哪些与专性活细胞内寄生有关的特性？它们有什么特殊的生活方式？衣 原体与立克次氏体都为专性活细胞内寄生，两者有何差别？ 5.螺旋体和螺旋菌有何不同？ 6.什么是缺壁细菌？试简述四类缺壁细菌的形成、特点和实践意义。 7.举例说明细菌的属名和种名。 8.试述古生菌和细菌的主要区别。 9.试根据细菌和古生菌细胞结构的特点，分析并举例说明为什么它们能在自然界中分布 泛。 10.细菌（狭义）、放线菌、霉菌、酵母在繁殖方式上各有什么特点？ 第三章真核微生物 1.名词解释：真菌、霉菌、酵母菌、真酵母、假酵母。 2.举例说明霉菌与酵母菌与人类的关系。 3.试列表说明真核微生物与原核微生物的主要区别。 4.试图示真核生物“9+2型”鞭毛的横切面构造，并简述其运动机理。 5.细菌(狭义)、放线菌、酵母菌和霉菌的菌落有何不同？ 6.试比较细菌(狭义)、放线菌、酵母菌和霉菌细胞壁成分的异同，并讨论它们的原生 质体的制备方法。 7.丝状真菌的营养菌丝和气生菌丝各有何特点？它们可以分化出哪些特殊结构？ 8.试述真菌的孢子类型和特点。 第4章病毒 1. 名词解释：病毒粒子、烈性噬菌体、温和噬菌体、溶源性转变、前噬菌体、溶源性细菌、 裂解量、类病毒、朊病毒。 2. 病毒区别于其他生物的特点是什么? 根据你的理解，病毒应如何定义? 3. 试述病毒的主要化学组成及其功能。 4. 病毒壳体结构有哪几种对称形式? 毒粒的主要结构类型有哪些?
年级：2009 专业：医学检验班级：一班姓名：赵富海学号：2009221792 实验八、细菌的药物敏感试验 【K-B法】 菌种（均为幼龄菌）：金黄色葡萄球菌1.5×108/ml、大肠埃希菌1.5×108/ml 药物纸片：青霉素、庆大霉素、新诺明、环丙沙星 方法： 1.涂菌（棋盘划线法），室温放10min； 2.贴药敏纸片，注意间距（大于24mm）和边距（大于15mm）； 3.置35℃24h判读结果。 结果如图所示： 金黄色葡萄球菌 金黄色葡萄球菌抗菌药物敏感性试验评价结果 实验结论：金黄色葡萄球菌对青霉素耐药，对庆大霉素、新诺明、环丙沙星敏感。 【试管稀释法】 菌种：金黄色葡萄球菌1.5×108/ml、大肠b1.5×108/ml 抗生素：庆大霉素32u/ml 方法： 1.对倍稀释抗生素
2.加菌液0.1ml/管，摇均35℃16—18h 3.判读MIC 试验操作如下图所示： 注意:设立对照管(肉汤对照管,待测菌生长对照管和质控菌生长对照管) 结果判断: 不出现肉眼可见生长的最低药物浓度为该药对该细菌的MIC. 如图： 实验结论：MIC=原药物浓度(32u/ml) ×稀释倍数(1:24)=2u/ml 【联合药敏试验】（示教） 金黄色葡萄球菌大肠b 结果判断： 金黄色葡萄球菌联合药敏试验结果判读：
①青+链=青单+链单→相加作用 ②青+红=青单+红单→相加作用 ③青+万=青单+万单→相加作用 ④青+林＞青单+林单→协同作用 大肠b联合药敏试验结果判读： ①青+红=青单+红单→相加作用 ②青+链=青单+链单→相加作用 ③青+林=青单或林单→无关作用 ④青+南＞青单+南单→协同作用 【实验讨论】 1．K-B法原理 将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上。纸片中所含有的药物吸取琼脂中的水分溶解后便不断地向纸片周围区域扩散形成递减的梯度浓度。在纸片周围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制，从而形成透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度。并与该药对测试菌的最低抑菌浓度（MIC）呈负相关关系，即抑菌圈愈大，MIC 愈小。 2. K-B法影响因素 ①培养基的质量，如PH、深度、硬度和表面湿度等； ②药敏纸片的质量，含药量和保存方式； ③接种菌量正确与否是影响结果的重要因素之一，取决于比浊标准的配制，正确使用和保存； ④试验操作质量：接种细菌后贴片时5~15分钟； ⑤孵育条件，温度和时间：培养时间16~18h,不要超过24h。 3．稀释法原理： 以水解酪蛋白（MH）液体培养基将抗生素作不同浓度的稀释，然后种入待测细菌，定量测定抗菌药物对被测菌的最低抑菌浓度(MIC)或最低杀菌浓度（MBC）。 4. 稀释法影响因素：培养基、接种菌量、蛋白质结合率、抗菌药物的配制、结果观察的时间等因素均能影响本试验的结果。 5．抗生素药物敏感性试验（AST）的意义 ①可预测抗生素治疗的效果，既AST试验结果为“敏感”时，治疗可能有效；试验结果为“耐药”时，使用该药物治疗肯定失败； ②指导临床医生选择使用抗生素，AST的结果往往在给予病人经验性治疗24~48h之后，若AST结果为“敏感”，该治疗为有效，若结果为“耐药”，即应更换药物； ③提供所选择药物的依据； ④监测耐药性，分析耐药菌的变迁，掌握耐药菌感染病的流行病学，控制和预防耐药菌感染的发生和流行。 6．通过此次实验掌握纸片扩散法（K-B法）、试管稀释法的原理、操作方法、结果的判读及其临床意义，并掌握联合药敏试验结果的观察、判断。
微生物学实验报告格式 专业学号 姓名 实验一、???培养基的配制和高压蒸汽灭菌 一、实验目的 二、实验原理 三、实验材料（实际用到哪些试剂、材料、玻璃器皿等都要写出，包括数量） 四、实验步骤（按照实际步骤填写,切忌抄袭） 五、注意事项（自己总结实验过程中的注意点） 六、思考题 1、简述培养基的配制原则？ 2.为什么湿热灭菌比干热灭菌法更有效？ 3.高压蒸汽灭菌时，为什么要先将灭菌锅锅内的冷空气完全排尽？ 实验二自生固氮菌的分离纯化 （这是个综合实验，请大家回顾三周来的所有操作步骤，将其整理成连贯完整的一份报告，注意每次实验的衔接，不要把其他的实验项目写进来，但也不要漏写该实验的相关步骤。） 一、实验目的
二、实验原理 三、实验材料（整个综合实验有涉及到的材料都要列出） 四、实验步骤（详叙每周所做的相关步骤） 五、注意事项（自己总结实验过程中的注意点） 六、思考题 1、划线分离时，为什么每次都要将接种环上多余的菌体烧掉？划线为何不能重叠？ 2、如何从自然界中分离自己所需要的纯培养？ 实验三平板培养测数法 一、实验目的 二、实验原理 三、实验材料（实际操作有涉及到的材料都要列出） 四、实验步骤（详叙相关步骤） 五、实验结果 六、注意事项（自己总结实验过程中的注意点） 七、思考题 1、平板菌落计数法中，为什么溶化后的培养基再冷却至45℃左右才能倒平板？
2、本次实验是否成功？如果失败，试分析原因。 实验四简单染色 一、实验目的 二、实验原理 三、实验材料（包括菌种、染料、玻璃器皿） 四、实验步骤 五、实验结果（黏贴染色结果图片并描述所观察到的细菌的显微形态） 六、思考题 1、简单染色要获得成功，有哪些问题需要注意，为什么？ 实验五革兰氏染色 一、实验目的 二、实验原理 三、实验材料（包括菌种、染料、玻璃器皿） 四、实验步骤 五、实验结果（黏贴染色结果图片并判断自己分离到的菌种是G还是G+-？） 六、思考题 1、革兰氏染色要获得成功，有哪些问题需要注意，为什么？
微生物学题库
A．青霉素只能切断细菌的DNA链 B．青霉素只能作用于细菌的核糖体 C．青霉素只能抑制细菌的吸附细胞 D．青霉素只能抑制细菌肽聚糖合成 3．细菌核糖体大亚基可与以下哪种抗生素结合而终止蛋白质合成( B ) A．利福平 B．红霉素 C．链霉素 D．多粘菌素 4．能够使细菌在宿主体内运动的结构是( B ) A．荚膜 B．鞭毛 C．普通菌毛 D．性菌毛 5．卢戈氏碘液在革兰染色过程中的作用是( C ) A．杀灭标本中存在的活菌 B．析出菌体内多余的染液 C．使菌体与染液结合牢固 D．主要担当脱色剂的作用 6．某些细菌可形成L型变异，变异后的细菌丢失了哪种结构( A ) A．细胞壁 B．荚膜 C．鞭毛 D．菌毛 7. 控制细菌能否形成性菌毛的质粒是( D ) A．R质粒 B．col质粒 C．Vi质粒 D．F质粒 8．与细菌核糖体大亚基结合，抑制细菌蛋白质合成的抗生素是( C ) A．青霉素 B．溶菌酶 C．红霉素 D．链霉素 9. 细菌细胞壁的功能是（B） A. 菌蛋白质合成场所 B. 维持细菌固有形态 C. 耐药性的相互传递 D. 抵抗吞噬细胞吞噬 10. 革兰阳性细菌细胞壁所具有的结构成分是（A） A. 磷壁酸 B. 脂多糖 C. 几丁质 D. 胆固醇 11. 能够抑制细菌蛋白质合成的抗生素是（C） A. 青霉素
B. 溶菌酶 C. 红霉素 D. 利福平 12. 细菌普通菌毛的功能是（A） A. 粘附作用 B. 抗吞噬 C. 运动 D. 抵抗外界不良环境 13. 决定细菌能否运动的结构是（B） A. 荚膜 B. 鞭毛 C. 普通菌毛 D. 性菌毛 14. L-型细菌的生物学性状是（C） A. 缺少脂多糖 B. 缺少核糖体 C. 缺少细胞壁 D. 缺少磷壁酸 15．磷壁酸是以下哪种细菌细胞壁的组成成分( B ) A．大肠杆菌 B．金黄色葡萄球菌 C．伤寒杆菌 D．霍乱弧菌 16．对细菌进行革兰染色时应注意的事项是( BD ) A．添加结晶紫时一定要加热 B．乙醇脱色时间不能过长 C．媒染的时间应大于五分钟 D．复染时要用稀释复红染液 17．细菌大小的衡量单位是微米，病毒大小的衡量单位是纳米。 18．L-型细菌是一种细胞壁丢失的细菌，这类细菌只能在高渗环境中生存。 19．革兰染色法步骤：初染结晶紫；媒染碘液；脱色 95%乙醇和复染稀释复红或沙黄。20．细胞壁主要的化学组成成分是肽聚糖。 21．细胞壁功能是维持细菌外形，保护细菌不受外界低渗环境的破坏。 22．细菌质粒的基本定义是染色体外遗传物质，由DNA组成，控制细菌某些特定的生物学性状，非细菌存活所必须。 23．革兰染色法步骤中初染使用的试剂是结晶紫染液；媒染使用的试剂是碘液；脱色使用的试剂是乙醇以及复染使用的试剂是稀释复红。 24．细菌的三种形态是球菌、杆菌和螺形菌。细菌的测量单位是微米。 25. 细菌荚膜的功能是抗吞噬，鞭毛的功能是运动，普通菌毛的功能是助黏附，性菌毛的功能是传递遗传物质。 26．临床上常用的抗生素类药物如青霉素是通过抑制细菌细胞壁合成机制杀灭细菌的。 27．细菌的特殊结构包括荚膜、鞭毛、菌毛和芽胞。 抗生素杀菌机制 青霉素争夺转肽酶，作用于细胞壁的肽聚糖，抑制细胞壁合成
微生物学重点内容(考试必看)
十章、细菌学概论 细菌（bacteria）：一类具有细胞壁、单细胞、以无性二分裂方式进行繁殖的原核细胞型微生物。 一、细菌的形态、结构与分类（p123-137） 一）大小与形态 1.大小：微米、光学显微镜 2.基本形态（适宜条件、8-18h、主要有3种；观察选对数生长期最优） 3.多形性： 细菌在条件改变时，出现不规则形态，呈梨形、气球状、丝状等，条件适宜，可以恢复。 二）细菌的细菌结构（10分） 1.基本结构（所有细菌共有的结构）：细胞壁、细胞膜、细胞浆及核质。
1）细胞壁：坚韧、有弹性；保护细菌；含主要成分肽聚糖，特殊成分磷酸壁、脂多糖等。 A.革兰氏阳性菌细胞壁 较厚，含丰富肽聚糖，少量磷壁酸 a.肽聚糖 由40层左右的网格状分子交织成厚的三维立体网状结构， 由聚糖骨架和四肽侧链及五肽桥组成。 聚糖骨架由N-乙酰葡糖胺（G）和N-乙酰胞壁酸（M）经-1,4糖苷键交替间隔排列而成。 肽聚糖支架相同，肽链肽桥随菌而异。 b.磷壁酸（G+特有成分） 酸性多糖， 由核糖醇或甘油残基经磷酸二酯键互相连接而成的链状聚合物。
分壁磷壁酸（核糖醇型）和膜磷壁酸（甘油型）具重要生理功能： ①.P-结合阳离子，Mg2+提高细胞表面酶活性 ②.细胞壁表面抗原成分 ③.噬菌体吸附的特异受体 ④.调节自溶素活力 ⑤.增加细菌粘附性，与致病性有关。 B.革兰氏阴性菌细胞壁 较薄，肽聚糖含量低。外膜层位于细胞壁肽聚糖层的外侧， 包括脂多糖、脂质双层、脂蛋白三部分 a.肽聚糖 b.外膜 ①.脂蛋白：一端以蛋白质部分共价键连接于肽聚糖的四肽侧链上另一端以脂质部分连接在外膜的磷酸上，其功能是稳定外膜并将之固定于肽聚糖层。 ②.脂质双层：脂蛋白外侧，脂质双层结构。含有外膜蛋白。 ③.脂多糖（LPS）：习惯称细菌内毒素，由脂质双层向细胞外伸出， 含类脂A、核心多糖、特异
微生物学实验报告 实验一普通光学显微镜的使用及细菌染色与形态观察 第一部分：显微镜的使用 一、目的要求 1．熟悉普通光学显微镜的构造、油镜的使用原理和显微镜的维护方法。 2．学会正确使用油镜观察细菌的基本形态和特殊构造。 3．了解各种显微镜的主要特征。 二、实验原理 （一）光学显微镜的构造 微生物实验室中最常用的是普通光学显微镜，它的构造可分为机械部分和光学部分。 1、机械部分 普通复式光学显微镜的机械部分通常包括以下几个部分：目镜、镜筒、基座回转器、物镜、载物台、光圈、聚光器、光源、镜臂、细调节器、粗调节器等。 2、光学部分：目镜、物镜、聚光器、光圈、光源。 （二）放大倍数 标本首先经物镜放大，在目镜的焦距平面上形成一个实像，再经过目镜放大成最终的虚像。总的放大倍数是物镜放大倍数与目镜放大倍数的乘积。 物镜的放大倍数愈大，其工作距离（物镜镜头到标本片之间的距离）愈短，这时光圈就要打开得愈大。 显微镜的性能受物镜的分辨距离或分辨力所限制。分辨距离即透镜所能分辨的两个物点之间的最小距离，分辨距离愈小，透镜的分辨力愈高，物像也就愈清晰。因此常以分辨距离来衡量显微镜的分辨力。 R=0.61λ/N.A 式中：R-----分辨距离； λ------作用光的波长； N.A------数值口径。 一些介质的折射率
介质折射率 空气 水玻璃香柏油 1 13 55 1.56 三、实验内容 （一）材料：显微镜，香柏油，擦镜纸。 （二）方法： 细菌很小，须使用油镜方可观察到。油镜是显微镜上最重要的部件之一，观察时与玻片非常接近，稍不小心即可压碎玻片，更严重的是损坏镜头，故必须极其仔细地学习油镜的使用方法： 1、为使低倍镜取得最适之光源，可将低倍镜头调节到离载物台约1cm的高度，将聚光器提高，光圈完全打开，然后调节电压旋钮至视野最合适。 2、滴一滴香柏油，固定于载物台上，用推动器调节到载物台正中。在双目侧视下，下旋粗调节器，使油镜头浸入油中几乎与标本片相接触。然后眼睛从目镜观察（如光线不足，可适当增大电源电压），徐徐上旋粗调节器至看到模糊物像之后，再用细调节器调节以使物像清晰。如镜头已离开油面还未看到物像，则再重新操作。 3、更换标本时应先提高油镜头，再更换玻片，切勿随意移动显微镜的位置。 4、油镜观察完毕后，按“显微镜保护”中（6）项处理。 5、最后将油镜各部分还原，聚光器下降，反光镜垂直于镜座，镜头转成八字形， 以免与聚光器发生碰撞。 四、思考题 1、使用显微镜时为何调节下列构造？反光镜，光圈，聚光器，粗调节器，细调节器，镜头回转器。 答：聚光器的位置之升降可影响视野的明亮度，上升则视野明亮，下降则光线减弱。光圈的放大或缩小也可控制视野明亮程度。粗调节器和细调节器均是调节焦距的装置。镜头回转器为装置物镜和转换物镜之用。 2、使用不同放大倍数的物镜时，工作距离与光圈的关系。如何利用这一原理用好显微镜？ 答：物镜的放大倍数愈大，其工作距离（物镜镜头到标本片之间的距离）愈短。标本首先经物镜放大，在目镜的焦距平面上形成一个实像，再经过目镜放大成最终的虚像。总的放大倍数是物镜放大倍数与目镜放大倍数的乘积。 3、为何要选用与玻璃折射率相似的香柏油作为油镜的介质？油镜的原理是什么？ 答：香柏油只在使用油镜头时（100倍物镜）使用，因为当镜与装片之间的介质为空气时，由于空气（n= 1.52）的折射率不同，光线会发生折射，不仅使进入物镜的光线减少，降低了视野的照明度，而且会减少镜口角。当以香柏油（n=1.515）为介质时，由于它的折射率与玻璃相近，光线经过载玻片后可直接通过香柏油进入物镜而不发生折射，不仅增加了视野的照明度，更重要的是通过增加数值孔径达到提高分辨率的目的。可见光的波长平均为0.55μm。当使用数值孔径为0.65的高倍镜时，它能辨别两点之间的距离为0.42μm；而使用数值孔径为1.25的
《临床微生物学及检验》期末复习题集 （第一部分） 一、名词解释 1.糖（醇、苷）类发酵试验 2.O/F试验 3.七叶苷水解试验 4.甲基红试验 5.VP 试验 6.吲哚试验 7.枸橼酸盐利用试验 8.硫化氢试验 9.尿素酶试验 10.氧化酶试验 11.触酶试验 12.凝固酶试验 13.克氏双糖铁（KIA）试验 14.MIU 15.胆汁溶菌试验 16.奥普托欣敏感试验 17.协同凝集试验
二、问答题 1.简述临床标本采集的一般原则和标本的处理。 2.哪些细菌可用不染色标本动力检查而作出判断？主要依据是什么？ 3.用于观察细菌动力及运动情况可用哪些方法？ 4.常用染料有哪些？其中哪些常用于细菌的染色。 5.简述常用的染色方法，其中有哪些是鉴别染色法？ 6.何为培养基，按性质和用途可分为哪几类？并举例说明。 7.细菌常用的分离培养基有哪些？ 8.细菌接种方法有哪些？有何用途？ 9.常用的细菌培养方法有哪些？ 10.如何检测细菌的内毒素和外毒素？ 11.简述细菌生化反应的概念。常见的碳水化合物代谢试验、蛋白质和氨基酸代谢试验、碳源和 氮源利用试验及酶类试验有哪些？ 第4章抗菌药物的敏感性试验 Antimicrobial Susceptibility Tests 一、名词解释 1. E试验 二、问答题 1.常见的药物敏感试验有哪些方法？简述其原理、方法及结果解释。 2.试述结核分枝杆菌的体外药敏试验所用培养基和细菌接种方法？ 3.厌氧菌体外药敏试验纸片扩散法和稀释法常用培养基是什么？孵育条件是什么？
第5章细菌的分类与命名 Classification and Gram Naming 1.细菌学名是如何命名的？ 2.细菌的分类方法常见的有那两类？其主要依据主要是什么？ 第6章革兰阳性球菌 Gram Positive Coccus 一、名词解释 1.SPA 2.血浆凝固酶 3.血浆凝固酶试验 4.玻片法凝固酶试验 5.试管法凝固酶试验 6.胆汁溶菌试验 7.optochin试验 8.M蛋白 9.链道酶 10.链激酶 二、问答题 1.简述金黄色葡萄球菌的致病物质。 2.简述葡萄球菌的培养特性和抵抗力。 3.致病性葡萄球菌有哪些重要特点？如何鉴别？
微生物学检验一、微生物污染的因素有以下几方面：
三、方法验证： 在化学测试中，药品含量测定方法需要验证，与此相应，微生物检测方法也需要验证，尽管药品的微生物学检测方法在各国药典中均有规定。但是，不同的检品、不同的仪器或材料及实验环境条件均可能对检验结果产生影响。例如，当检测药品具有抑菌性时，它们会掩盖无菌药品已受污染的事实或造成低于实际污染水平的菌检结果；选用不适当的培养基，其促菌生长能力不符合要求，也会造成类似的后果。另外，为了保证药品使用的安全性，有些药品加了一定的防腐剂，当对防腐剂的防腐性能进行验证试验时，微生物的种类、生长的状态、介质的pH等因素又对验证的结果产生影响，此外微生物学检测除具有一般的理化检查的特点与要求外，还有自身特点与要求，为了使微生物学检验方法的结果准确可靠，需要对每个品种的具体检验方法进行验证，微生物检验方法验证的内容包括：微生物检测实验室的设施与设备验证，菌种的使用保存与管理验证，消毒剂的使用及效力验证，培
养基、缓冲液和试剂验证及有效期的确认与验证，灭菌方法的验证，药品微生物学检验方法学验证，同化学检验方法验证的原理相似，将药品的微生物学检验方法具体应用于某一品种时，需进行方法验证，摸清微生物学检验方法适用的条件，即通过试验，寻找并确定合适的稀释材料、条件和方法。在这一工作的基础上，通过验证试验，最终确认检验方法，批准成为正式检验方法。 4.2.4. 菌液组测定所加的试验菌数。采用平皿法，取试验用的1ml菌液（约50～100cfu）分别注入平皿中，立即倾入培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，按平皿法测定其菌落数。4.2. 5.试验组4.2.5.1.平皿法：取试验可能用的最低稀释级1ml供试液和50～100cfu试验菌，分别注入平皿中，立即倾入培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，按平皿法测定其菌落数。4.2.5.2.培养基稀释法（平皿法）：取试验可能用的最低稀释级1ml供试液分别注入N个平皿中，每个平皿再注入50～100cfu试验菌，分别注入平皿中，立即倾入培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，按平皿法测定其菌落数。4.2.5.3薄膜过滤法：取规定量试验可能用的最低稀释级供试液，过滤，冲洗，在最后一次的冲洗液中加入50～100cfu试验菌，过滤，按薄膜过滤法测定其菌落数。至少要一张膜。4.2.5.4.离心沉淀集菌法：取规定量试验可能用的最低稀释级供试液，如供试液含许多药渣，先以500转/分钟离心3~5分钟，取全部上清液，再以3000转/分离心20分钟，取下面1ml液体，并用稀释剂洗涤管底，将洗涤液与1ml
微生物学重点知识点归纳总结 总论部分 1.绪论（掌握） 2.细菌的基本形态（掌握）和结构（熟练掌握） 3.细菌的增殖与代谢（掌握）和人工培养（了解） 4.噬菌体（了解） 5.细菌的遗传变异（了解）、实际应用（掌握） 6.消毒、灭菌、无菌、无菌操作（熟练掌握）物理及化学灭菌法（掌握） 7.细菌的致病性和机体的抗免疫性（掌握） 8.病毒概述（掌握） 9.真菌概述（掌握） 10.其他微生物（了解） 11.免疫学基础 （1）抗原、抗体的概念（熟练掌握）；（2）特异性免疫与非特异性免疫（掌握）；（3）变态反应的概念与分类（掌握）；（4）疫苗及其他生物制品如干扰素（熟练）（5）免疫学诊断的基本概念（了解） 一、绪论（掌握） 1.病原生物与病原生物学 ①微生物：个体小，显微镜才能看到 ②微生物的种类 特点举例非细胞型微生物无典型细胞结构，仅含RNA或DNA一种核酸，只能在活细胞中繁殖病毒 原核细胞型微生物双链DNA和RNA组成，无核膜、核仁、有核糖体，无内质网、线粒体等细菌 真核细胞型微生物有细胞核和各种细胞器，能在体外生长繁殖真菌 ③正常菌群：定居于人体表面和开放性腔道中。 ④条件致病菌或机会致病菌：正常情况下不致病，只是在抵抗力低下时才导致疾病。 ⑤引起人类和动物发生疾病的微生物称为病原微生物。
有完整细胞核的微生物是 A.立克次体 B.放线菌 C.细菌 D.真菌 E.衣原体 『正确答案』D 二、细菌的基本形态（掌握）和结构（熟练掌握） 球菌双球菌、链球菌和葡萄球菌等杆菌外形呈杆状 螺形菌螺菌菌体有数个弯曲 弧菌菌体只有一个弯曲，霍乱弧菌 （二）细菌的基本结构及特殊结构
微生物学实验报告 (格式标准) (生命科学专业) 教师:黎勇 目录索引 实验一油镜的使用与细菌的简单染色法 3 实验二细菌的革氏染色与芽孢染色 5 实验三常用培养基的配制7 实验四酵母菌霉菌的形态结构观察及酵母死活细胞的鉴别8 实验五、微生物大小的测定与显微计数10 实验六环境中微生物的检测与分离纯化11 实验七细菌鉴定中常用的生理生化反应12 实验八(综合实验)化能异养微生物的分离与纯化13 课程名称: 微生物学实验班级:化生系生命科学本科 实验日期: 指导教师:黎勇 实验一油镜的使用与细菌的简单染色法 〔目的要求〕学习并熟练掌握油镜的使用技术;观察细菌的基本形态;学习观察细菌的运动性的基本方法。 〔基本原理〕 1、 N·A=n·sinα 2、 D=λ/2N、A 3、目镜可提高放大倍数,但有效放大率取决于镜口率。已经分辨的物体不放大瞧不清,未分辨物放得再大也瞧不清。 4、用悬滴法或凹玻片法观察细菌的运动性时,可以通过真运动能定向地由一处快速运动来区别于颗粒的布朗运动。 〔器材用具〕显微镜、载玻片、凹玻片、盖玻片、接种环、香柏油、二甲苯、凡士林、吸水纸、擦镜纸;细菌、放线菌等固定装片;培养18小时左右的B、subtilis、 S、arueus 菌斜面培养物;无菌水、生理盐水。 〔方法步骤〕: (一) 油镜的使用 镜检装片在中倍(或高倍镜)下找到目的物,并使位于视野正中聚光镜上升到最高位置,虹彩光圈开到最大,镜头转开成八字形在玻片的镜检部位(光斑处)滴一滴香柏油油镜转入正下方侧视小心上升载物台(缩短镜头与装片距离,镜头浸入油中,至油圈不扩大为止镜头几与装片接触) 粗调器徐徐下降载物台(密切注视视野,当捕捉到物像时,立即用细调器校正) 仔细观察并绘图 取出装片,清洗油镜:擦镜纸拭去镜头上的香柏油擦镜纸沾少许二甲苯擦去残留(用手指辅助,迅速拭擦一、二次) 用清洁擦镜纸仔细擦干二甲苯(2-3次)。 (二) 细菌的简单染色法:涂片干燥火焰固定染色水洗干燥油镜观察 (三) 细菌运动性的观察取洁净盖玻片,四周涂上凡士林滴加一小滴菌悬液凹玻片的凹窝向下盖于盖玻片上翻转观察 〔结果分析〕 1、画一圆圈表示视野,选取所观察的微生物绘图,注意特殊结构、形状与排列。(描绘时按视野实际大小5－10倍绘制)
环境微生物学试题（A）参考答案 一、填空题（30分，每空2分） 1. 病毒的繁殖过程为吸附、侵入、复制、聚集、释放。 2. 细胞质膜的生化特征具有半渗透膜性质。 3. 原核微生物和真核微生物的区别在于真核微生物能进行有丝分裂而原核微生物进行无丝分裂。 4. 古菌的组分大多数蛋白质，并且是酸性的。 5. 放线菌的菌体有纤细的长短不一的菌丝组成，为单细胞。 6. 酵母菌的细胞机构有细胞壁、细胞质膜、细胞核、细胞质及内含物。 二、选择题（共10分，每小题2分） 1. A．蛋白质、 2. B．阴性菌含脂多糖，不含磷酸壁、 3. C．静止期、 4. C．净化作用、 5. D．硝化作用 三、名词解释（共20分，每小题5分） 1. 土壤自净：土壤对施入其中一定负荷的有机物或有机污染物具有吸附和生物降解能力，通过各种物理、生化过程自动分解污染物使土壤恢复到原有水平的净化过程，称土壤自净。 2. 细菌的等电点：氨基酸是两性电解质，在碱性溶液中表现出带负电荷，在酸性溶液中表现出带正电荷，在某一定pH溶液中，氨基酸所带的正电荷和负电荷相等时的pH，称为该氨基酸的等电点。 3. 好氧生物膜：好氧生物膜是由多种多样的好氧微生物和兼性厌氧微生物粘附在生物滤池滤料上或粘附在生物转盘盘片上的一层带粘性、薄膜状的微生物混合群体。 4. 酶的活性中心：是指酶蛋白分子中与底物结合，并起催化作用的小部分氨基酸微区。 四、简答题（共20分，每小题4分） 1. 病毒有什么特点？ 答；病毒具有以下特点：个体极小，能通过细菌过滤器，需借助电子显微镜观察。 寄生，无独立代谢功能，只能在特定宿主细胞内繁殖。 无细胞结构，大多病毒只是蛋白质和核酸组成地大分子。 繁殖方式，依靠宿主代谢体系进行复制。 对一般抗生素不敏感，但对于干扰素敏感。 只在宿主体内才表现出生命特征，在体外具有生物大分子特征。 2. 简述无机氮和有机氮的循环过程 答：氮素循环过程中，大气中分子态氮被微生物固定成氨，氨被植物吸收利用，合成有机氮进入食物链（固氮）；有机氮被氨化细菌分解释放出氨(氨化作用)；氨被硝化细菌氧化为硝酸盐(硝化作用)，又可被同化为有机氮；硝酸盐被还原为氮氧化物，或进一步还原为分子态氮返回大气(反硝化作用) 。 3. 为什么利用微生物可以进行污染物的净化处理？ 答：首先，微生物具有在环境中分布广、数量多的特点，能与进入到环境中的污染物进行充分接触；其次，微生物的营养类型和代谢类型多种多样，能利用多种污染物作为自己的物质或能量来源，使之转化为对环境无害或性质较为稳定的物质类型，从而达到净化目的。 4. 固定化微生物有什么特点？ 答：固定化微生物比未固定化的微生物性能好、稳定、降解有机物的能力强、耐毒、抗杂