补体依赖的细胞毒实验报告
篇一：补体依赖的细胞毒性
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2014-06-28
报告目录
报告核心要素................................................................. ........................................ I
一、主题简介................................................................. (1)
二、主题相关科研产出总体分析................................................................. . (1)
文献总体产出统计...............................................................
(1)
学术关注趋势分析............................................................... .. (2)
三、主题相关科技论文产出分析................................................................. . (2)
中文期刊论文............................................................... . (2)
近十年中文期刊论文分布列表 (2)
中文期刊论文增长趋势 (3)
发文较多期刊............................................................... .. (4)
发文较多的机构............................................................... . (4)
发文较多的人
(4)
核心期刊分布数量对比 (4)
最近相关中文期刊论文 (7)
被引较多的相关期刊论文 (7)
学位论文............................................................... (8)
近十年学位论文年代分布列表 (8)
学位论文增长趋势............................................................... (9)
硕博学位论文数量对比...........................................................
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发文较多的机
(10)
发文较多的人物............................................................... .. (10)
最近相关学位论文............................................................... . (11)
中文会议论文............................................................... .. (11)
近十年中文会议论文年代分布列表 (11)
中文会议论文增长趋势...........................................................
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中文会议论文主办单位分布 (13)
发文较多的机构............................................................... .. (13)
发文较多的人
(13)
最近相关中文会议论文............................................................
13
外文期刊论文............................................................... .. (14)
近十年外文期刊论文年代分布列表 (14)
外文期刊论文增长趋势...........................................................
14
最近相关外文期刊论文...........................................................
15
外文会议论文................................................................. ...................... 15 I
篇二：CDC ADCC细胞毒性
1 Antibody-dependent cellular cytotoxicity 抗体依赖的细胞介导的细胞
毒性作用
In antibody-dependent cellular cytotoxicity , Fc gamma
receptors on the surface of immune effector cells bind the Fc region of an antibody, itself specifically bound to a target cell. The cells that can mediate ADCC are nonspecific cytotoxic cells such as natural killer cells, macrophages, monocytes and eosinophils. Upon
FCGR binding to the antibody, the FCGR ITAM is phosphorylated, which triggers the activation of the effector cell and the secretion of various substances that mediate the destruction of the target cell.
The level of ADCC effector function is high for human IgG1 and IgG3, low for IgG2 and IgG4, and for these last two subclasses, the level of binding depends on the FCGR isotype and on the cell type.
2 Complement-dependent
cytotoxicity 补体依赖的细胞毒性作用In complement-dependent cytotoxicity , the C1q binds the
antibody and this binding triggers the complement cascade which leads to the formation of the membrane attack complex at the surface of the target cell, as a result of the classical pathway complement activation.
The level of CDC effector function is high for human IgG1 and IgG3, low for IgG2, and null for IgG4.
篇三：医学免疫学实验
第一章免疫学概要
1.
2.
机制。
3.
4.
生长。
5.
6.
7. TCR：TCR即T细胞抗原受体，是T细胞表面特异性识别和结合抗原的结构。SIg：即B细胞表面的膜免疫球蛋白，为B细胞的抗原受体，是B细胞特异识别和结合抗原的结构。免疫细胞：是指参与免疫应答或免疫应答有关的各类细胞，主要有免疫活性细胞、嗜酸性粒细和嗜碱性粒细胞及组织中的肥免疫自稳：免疫自稳是指机体识别和清除自身衰老残损的组织、细胞的能力，是机体维持正常内环境稳定的重要生理机制。免疫监视：免疫监视是指机体识别和清除病毒感染的细胞和异常突变细胞的一种生理功能，借以监视和抑制恶性肿瘤在体内免疫：免疫是指机体免疫系统识别“自身”与“非己”抗原，并通过面已经打排除抗原异物，以维持机体生理平衡的功能。免疫防御：免疫防御是指机体排斥外源性抗原异物的一种免疫保护功能，这是机体不受外来物质干扰，保持物种纯洁的生理大细胞等。
8. CD：CD即白细胞分化抗原，是
白细胞（还包括血小板、血管内皮细胞等）在正常分化成熟和记过过程中的不同阶段出现或消失的细胞表面抗原标志。
9. APC：APC即抗原呈递细胞，也称为免疫辅佐细胞，能将抗原信息呈递给T细胞，从而使T细胞活化。主要有单核巨噬细胞和树突细胞两大类。
10.
11. 外周免疫器官：包括淋巴结、脾和黏膜相关淋巴组织等，是免疫细胞聚集和免疫应答发生的场所。中枢免疫器官：中枢免疫器官又称一级免疫器官，包括骨髓、胸腺。中枢免疫器官是免疫活性细胞的产生、增值和分化成熟的场所，对外周淋巴器官发育和全身免疫功能起调节作用。
12. ADCC：ADCC即抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用。当IgG类抗体与靶细胞表面相应抗原表位特异性结合后，可通过其IgGd Fc段与NK细胞表面Fc受体结合，定向非特异性杀伤靶细胞。
填空题：
1.
2.
3.
4. 5. 6. 7.
8.
9. 免疫功能主要是免疫防御、免疫自稳和免疫监视。世界上第一例成功的疫苗是发明的牛痘苗，可预防天花。淋巴细胞包括T细胞、B细胞和大颗粒淋巴细胞（NK细胞）。免疫系统由免疫器官、免疫细胞和免疫分子组成。中枢免疫器官包括骨髓和胸腺，外周免疫器官包括淋巴结、脾和粘膜相关淋巴组织。其中形体最大的免疫器官是脾。机体发生免疫应答的场所是淋巴结。T细胞抗原受体是TCR，B细胞抗原受体是BCR （SIg）。骨髓是B细胞分化成熟的场所。胸腺是T细胞分化成熟的场所。T 细胞功能亚群主要有Th、Tc、Ts、Td。
第二章免疫化学
1. 抗原：抗原是指能够刺激机体免
疫系统产生免疫应答，又能与相应免疫应答的产物（抗体或致敏淋巴细胞）在体内或体外发生特异性结合的物质。
2.
3. 完全抗原：同时具有免疫原性和抗原性的物质称为完全抗原。半抗原：半抗原也称不完全抗原，只有抗原性而无免疫原性的物质称为半抗原。
4.
5.
6.
7.
8.
胞。
9.
10.
11.
12. 抗原表位：抗原分子中决定抗原特异性的特殊化学基因，称为抗原决定簇，又称抗原表位。嗜异性抗原：是一类与种属特异性无关的，存在于人、动物、植物及微生物之间的共同抗原，也
称为Forssman抗原。抗体：是B细胞识别抗原后活化增殖分化为浆细胞，由浆细胞产生的能与相应抗原特异性结合的球蛋白。免疫球蛋白：免疫球蛋白指具有抗体活性或化学结构与抗体相似的球蛋白。ADCC：即抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用，是指表达Fc受体的细胞通过识别抗体的Fc段，直接杀伤被抗体包被的靶细抗体调理作用：抗体的调理作用是指IgG（特别是IgG1和IgG3）能够增强吞噬细胞的吞噬功能。抗原抗体反应：是指抗原与相应抗体之间的特异性结合反应。抗原抗体的亲和力：是指抗体结合部位与抗原表位之间结合的强度。凝集反应：细菌、红细胞等颗粒性抗原，或表面覆盖抗原（或抗体）的颗粒状物质（如红细胞，聚苯乙烯胶乳等），与相应抗体（或抗原）结合，在是和电解质存在的条件下，出现肉眼可见的凝集现象，称为凝集反应。
13.
14. 沉淀反应：可溶性抗原与相应抗
体特异性结合，在适合的条件下出现沉淀的现象，称为沉淀反应。补体：补体是存在于正常人和动物血清与组织液中的一组不耐热、经活化后具有酶活性的蛋白质，是抗体发挥溶血作用的必要补充条件，故称为补体。
15. 补体调理作用：血清调理素（如抗体和补体）与细菌或其他颗粒性抗原物质结合，课促进吞噬细胞的吞噬作用，称为补体的调理作用。
16. 免疫黏附作用：C3b与免疫复合物或病毒结合后，通过C3b介导也可与具有相应受体的人红细胞、血小板或某些淋巴细胞结合，形成较大的聚合物，而有利于吞噬细胞吞噬清除，此现象称为免疫黏附作用。
17. 过敏毒素作用：是指C3a，C4a 和C5a均具有过敏毒素作用，可使肥大细胞和嗜碱性粒细胞，释放组胶等血管活性介质，引起毛细血管扩张，血管通透性增强，平滑肌痉挛等。
18. 补体灭活：加热61℃2min或
56℃30min可使血清中绝大部分补体丧失活性，称为补体灭活。
填空题：
1. 2. 3. 4.
5. 6.
7. 8. 9. 抗原有两个基本特征，即免疫原性和抗原性。半抗原与蛋白质结合后，即可获得免疫原性，称为完全抗原。赋予半抗原以免疫原性的蛋白质，称为载体。具备异物性的抗原物质通常包括以下三类：异种物质、同种异体物质、某些自身物质。人类的同种异型抗原有ABO血型抗原和HLA。抗原的特异性由抗原表位决定的。据产生抗体时是否需要T小宝的辅助，可将抗原分为TD-Ag、TI-Ag两大类。交叉反应的出现是由于共同抗原的存在。抗原特异性表现在免疫原性和抗原性两个方面。Ig 单体分子由两条重链和两条轻链组成，二硫键将其连接在一起。
10. 根据Ig重链恒定区的氨基酸组成和排列顺序的差异，将Ig分为5类，
分别
为：IgA、IgG、IgM、IgE、IgD。
11. 在重链CH1和CH2之间富含脯氨酸，这一自由柔和的肽段称为铰链区。
12. Ig分子可被木瓜蛋白质酶水解为两个完全相同的Fab和一个Fc片段，其中Fab片段具有结合抗原的特性。
13. 五类Ig中，在血清中含量最多的是IgG，机体最先出现的是IgM，能通过胎盘的是IgG，参与I型超敏反应的是IgE，与机体黏膜局部免疫密切相关的是IgA。
14. 存在于黏膜表面的IgA称为SIgA，它由两个IgA单体一条J链和一个分泌片组成。
15. 如果宫内感染，脐血或胎盘学中升高的Ig是IgM。通过被动免疫，胎儿和婴儿可从母体获得IgG 、IgA两类Ig。
16. 血清中含量最高的补体成分是C3，含量最少的补体成分是D因子。
17. 根据补体体系各成分的功能不同，可将其分为三类：补体固有成分、
补体调节蛋白、补体受体。
18. 能使补体灭活但不使抗体灭活的温度和时间分别是61℃2min和56℃30min。
19. 在细菌感染发生早期，补体的抗感染作用以旁路途径激活为主，在感染发生晚期，则以经典途径激活为主。
20. 经典激活途径整个过程可分为识别、活化、膜攻击三个阶段，激活物主要是免疫复合物。
21. 抗原抗体的结合是分子表面的非共价键结合，故形成的复合物是不牢固的。
22. 颗粒性抗原与相应的抗体结合所发生的反应称为凝集反应。
23. 抗原抗体反应的特点有特异性、比例性、可逆性、阶段性。
24. 在抗原抗体反应中，适当的温度条件下振摇可促使抗原抗体分子的接触，加速其反应。
25. 抗原抗体反应的温度一般以15~40℃为宜，最适温度为37℃。
第三章免疫信息分子
1.
2.
3. 细胞因子：是指由免疫细胞或非免疫细胞产生的一类与免疫效应有关或具有免疫调节作用的激素样的物质。干扰素：是指一类由宿主细胞产生的，能干扰病毒在宿主细胞内增殖的蛋白质。HLA复合体：就是人类MHC，位于第6号染色体短臂，是编码HLA的基因群。
填空:
1. 2. 细胞因子的共同特点是分子量较低、高效性、多效性和多源性、通过受体发挥作用。干扰素生物活性基本相同，主要是抗病毒、抗肿瘤、免疫调节。
第四章免疫应答
1. 免疫应答：免疫应答是指机体免疫系统接受抗原刺激后，淋巴细胞特异识别抗原，发生活化、增殖、分化或失能、凋亡，进而发挥特异性生物学功能的全过程。
2.
3.
4.
5.
6. 抗原呈递：抗原呈递是指由抗原呈递细胞将抗原物质吞噬、处理成T细胞可以识别的形式的过程。初次免疫应答：是指特定抗原初次刺激机体后，机体血清中逐渐出现抗原特异性抗体的过程。再次免疫应答：是指曾被某种抗原免疫过的机体再次接触相同抗原时，血清中迅速出现该抗原特异性抗体的过程。免疫耐受：免疫耐受是机体免疫系统在接触特定抗原后产生的对该抗原特异性免疫无反应状态，或称负免疫反应。超敏反应：是指集体收到抗原的持续刺激或同一抗原再次刺激后产生的一种以生理功能紊乱和炎症性损伤为主要表现的病理性免疫反应。
填空
1. 2. 免疫应答的基本过程包括抗原呈递和识别阶段、增殖分化阶段和效应阶段。免疫应答的基本类型可分为由T
细胞介导的细胞免疫应答和由B细胞接到的体液免疫应答。
5. 6.
7. 临床上给患者错输异型血，可发生输血反应，其发生机制为II型超敏反应。列举四种临床常见的I型超敏反应性疾病过敏性休克、支气管哮喘、过敏性鼻炎、荨麻疹。引起超敏反应的抗原称过敏原。
第五章抗原抗体的制备技术
1.
2.
3.
4.
5.
6. 佐剂：佐剂是指与抗原或预先注射于机体能够增强机体免疫应答或改变免疫应答类型的物质。多克隆抗体：多克隆抗体是指抗原免疫动物后，刺激产生的针对抗原不同表位的抗体。单克隆抗体：单克隆抗体是由单一抗原表位特异性B细胞克隆融合、筛选和克隆化获
得的杂交瘤细胞所产生的同源抗体。杂交瘤细胞：是指免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞融合保持双亲特性的单克隆细胞。HAT培养基：HAT培养基是含有次黄呤（H），氨基蝶呤（A），胸腺嘧啶（T）的一种用于筛选杂交瘤细胞的选择培养基。基因工程抗体：基因工程抗体是指应用DNA重组和蛋白质工程技术，按人们的意愿在基因水平上对免疫球蛋白分子进行切割、拼接或修饰，重新组装成的新型抗体分子。
填空:
1. 2. 3. 4.
5. 6. 7. 单克隆抗体的批量生产主要有体外培养法、体内诱生法两种。纯化抗原的鉴定包括蛋白含量检测、分子量测定、纯度鉴定、免疫活性鉴定。人工制备抗体可分为多克隆抗体、单克隆抗体、基因工程抗体。HAT培养基中三种关键成分是次黄嘌呤、氨基蝶呤、胸腺嘧啶。半抗原免疫原的制备过程中，常用的载体有蛋白质、多肽聚合物、大分
细胞毒性实验设计方案 1.准备材料：DMEM(高糖) 胰酶双抗(青霉素/链霉素）DAPI MTT(5mg/mL) DMSO PBS 4%多聚甲醛指甲油 6孔培养板 96孔培养板超薄载玻片培养瓶(25mL) 一包0.45μm滤膜 灭菌： 50mL，10mL，5mL离心管两种枪头 2.实验方案 本实验所用的材料为载药的通过二硫键桥连透明质酸的夹心二氧化硅 （SiO 2 -SS-HA/DOX），在高谷胱甘肽条件下，二硫键断裂，透明质酸脱离，同时 夹心二氧化硅中药物得以释放。本实验的目的为测定透明质酸修饰的夹心二氧化 硅（SiO 2-SS-HA/DOX）的细胞毒性。实验组为SiO 2 -SS-HA/DOX、SiO 2 -SS-HA、DOX， 空白对照组为纯细胞,分别采用HepG2人肝癌细胞为肿瘤细胞模型和L929成纤维 细胞为正常细胞模型。 采用HepG2人肝癌细胞为肿瘤细胞模型，实验组为SiO 2 -SS-HA/DOX、 SiO 2 -SS-HA、DOX，空白对照组为纯细胞。培养基中含有10% (v/v) FBS和1% (w/v) 双抗(青霉素/链霉素)。配制不同浓度的SiO 2-SS-HA/DOX、SiO 2 、HA、DOX药物载 体培养基溶液。 (1).以HepG2人肝癌细胞为肿瘤细胞模型: 培养基的配置：双抗 1% 血清12% DMEM 87% 具体操作步骤： 细胞的复活： ①将冻存于液氮中的细胞取出，迅速放入37℃温水中，使细胞快速溶解。 ②将悬浮的细胞移至离心管中，加5mL无血清培养基，1000rmp,5min离心去上清，再加5mL有血清培养基，转移至培养瓶中。（每次转移时，将之前的离心管洗涤，并用移液枪来回吸，使液体混合均匀。） ③将培养瓶放入培养箱中培养。 细胞的传代： 将0.25%的胰酶分装至小离心管中，每个管中2mL，冻存于-20℃，每次使用一管，避免反复冻融。 ①将培养瓶从培养箱中取出，盖子旋紧，喷75%的酒精放入超净台。 ②将培养液倒入废液缸，残留培养基用吸管吸干净，操作完成后，培养瓶口
实验二传代细胞培养与病毒在传代细胞中的培养 一、实验目的 了解倒置显微镜的构造与使用，了解不同传代细胞的形态及接毒后的病变特征，掌握细胞的传代培养法、病毒接种法及收毒法。 二、常用细胞的种类 BHK-21：仓鼠肾传代细胞 PK-15：猪肾传代细胞 IBRS-2：猪肾传代细胞 Hela：人的子宫瘤细胞 Vero：非洲绿猴肾细胞 Marc-145：来源于Vero细胞 TK-143：人的胸苷激酶阴性细胞 Sf9：昆虫细胞 三、材料 1、100ml细胞瓶、吸管、吸球、96细胞培养板、加样器、枪头 2、BHK-21（baby hamster kidney）细胞
3、0.25%胰酶 4、生长液：含10%犊牛血清、200U/ml青、链霉素的DMEM 维持液：含2-5%犊牛血清、200U/ml青、链霉素的DMEM 5、伪狂犬病病毒液（PRV） 四、传代细胞培养的条件要求 1）细胞密度：2-3×105个/ml 2）pH围最适pH7.0-7.4，耐受pH6.6-7.8 3）培养温度 哺乳动物细胞一般为37℃ 昆虫细胞28-30℃ 五、常用细胞分散剂与作用原理 1、胰酶使精氨酸或赖氨酸的羧基和其他氨基酸的氨基之间的多肽链发生水解， 导致细胞间质水解而使细胞或组织块消化为分散的单个细胞。 2、乙二胺四乙酸二钠（EDTA）：与二价钙、镁离子结合，从而使细胞分散。 3、灰色链丝菌酶：由灰色链丝菌提取的一种酶制剂，是蛋白酶、氨肽酶和羧肽 酶的混合物。
六、营养液 1、人工综合营养液 氨基酸、糖类、无机盐类、维生素、辅酶、嘌呤、嘧啶、辅助生长因子。2、血清 1）血清的种类 胎牛血清、新生犊牛血清、成年牛血清、马血清、鸡血清、兔血清、羊血清、人血清，其中以新生犊牛血清使用最为广泛。 2）血清的处理 无菌采集，过滤除菌。用前56℃灭活30min。 3）血清的作用 A、能提供细胞生存、生长和增生所必须的生长调节因子。 B、能补充基础培养液中没有或量不足的营养成分。 C、含有一些可供贴壁依赖型细胞在培养器皿表面贴附和铺展的生长基质成分。 D、有中和毒性物质保护细胞不受伤害的作用。 E、给培养液提供良好的缓冲系统。 F、提供蛋白酶抑制剂，保护细胞免受细胞释放的蛋白酶的损害。
免疫学期末复习参考 第四章抗体 抗体概述 免疫球蛋白(Ig):具有抗体活性或化学结构类似于抗体的免疫球蛋白抗体(抗体，Ab):一种免疫球蛋白(Ig)，其中b细胞被抗原刺激增殖并分化成浆细胞产生的糖蛋白，该糖蛋白与相应的抗原特异性结合并存在于体液中它以分泌型(sIg)和膜型(mIg)存在。 血清蛋白分为白蛋白、α1、α2、β和γ球蛋白，抗体活性主要存在于γ球蛋白区 免疫球蛋白(Ig):具有抗体活性或化学结构类似于抗体的球蛋白；抗体是免疫球蛋白，其不一定是抗体 第一抗体(1)的重链和轻链 重链的结构，450-550个氨基酸残基，五大类 IgG-γIgA-αIgM-mu(μ)* IgD-δIgE-ε(ε) 轻链，轻链是重链的1/2。约214个氨基酸κ型:λ型= 2: 1 (2)可变区和恒定区 1。在可变区(V区)的 重链和轻链的N-末端附近的大约110个氨基酸的序列变化很大，在高变区(HVR)，以及在V区中变化最剧烈的特定部分有3个L链和3个H链，也称为互补决定区的框架区。V区高变区以外的位置是2。恒定区(C区)的C端附近的其余氨基酸序列是相对稳定的(III)链区
位于CH1和CH2之间；对蛋白酶敏感，易于拉伸和弯曲 (iv)结构域 结构域:h链和l链可以通过链内二硫键折叠成几个球形结构。每个结构域包含约110个氨基酸 。本节总结了 1。抗体的基本结构:由两条相同的重链(h链)和两条相同的轻链(l 链)通过链间二硫键连接而成的四肽链结构？(1)重链和轻链: ？1.重链-由450–550个氨基酸残基组成: ？？根据氢链恒定区的结构特异性，免疫球蛋白分为五类: γ-免疫球蛋白；α—IGa；μ—IgM；δ—IgD；ε—IgE？2.轻链-由大约214个氨基酸残基组成: ？？根据L链的结构特异性，Ig分为κ型和λ型，比例为2: 1？(2)可变面积和恒定面积: ？1.可变区(V区):重链和轻链N端附近的大约110个氨基酸的序列变化很大，为 ？？高变区(HVR)和互补决定区(CDR):V区变化最大的区域是 ，其中重链和轻链各有3个特定位置，总共有6个区域可以与表位紧密互补。？骨架区:在V区高变区之外的区域稳定了高变区的结构；？2.恒定区(c区):重链和轻链c端附近的其余氨基酸序列相对稳定，不同类型ig的重链结构和长度相差 ？(3)铰链区:位于CH1~CH2之间，容易拉伸和弯曲？(4)结构域:每个结构域包含约110个氨基酸
实验报告
4. 补体结合反应实验原理 补体结合反应是一种有补体参与，并以绵羊红细胞和溶血素作为指示系统的抗原抗体反应。参与本反应的五种成分可分为两个系统： 一为待检系统，即为已知抗原（或抗体）和待检抗体（或抗原）； 另一个为指示系统，即绵羊红细胞和其相应的溶血素。待检抗原、抗体和补体作用后，再加入指示系统。若待检系统中的抗原和抗体相对应，两者特异性结合后激活补体，补体被消耗。再加入的指示系统无补体结合，不出现溶血；若待检系统中的抗原与抗体不对应或缺少一方，补体不被激活，当指示系统加入后，绵羊红细胞和溶血素复合物激活补体，产生溶血现象。 5. 空斑形成实验 是一种体外检测IgM、IgG类型抗体产生细胞的实验方法，又称空斑形成细胞（PFC)测定。可作为评估药物影响抗体产生水平以及临床筛选抗肿瘤新药的重要依据。 经绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞与一定量的绵羊红细胞混合后，抗体形成细胞产生的抗体与绵羊红细胞结合；在补体参与下，绵羊红细胞溶解，形成肉眼可见的溶血空斑。一个空斑即代表一个抗体形成细胞。
一、SRBC的制备 （一）无菌抽取绵羊血 1.手术剪减去绵羊颈部毛发备皮，止血带扎住颈部，碘酒消毒，酒精棉球再擦拭。 2.抽取一定量的绵羊血，注入无菌玻璃瓶，轻轻摇晃获得抗凝绵羊血，摇晃时不能用力过猛，防止SRBC破裂。 （二）绵羊红细胞的制备 1.在无菌实验室中，用移液枪吸取5ml抗凝绵羊血于试管中，共4支试管。 2.配平后对称放入离心机中2000rpm离心10分钟。 3.4支试管，胶头滴管吸去上清液，加入适量的灭菌生理盐水后轻轻摇晃混匀。 4.再次配平后，2000rpm离心10分钟，2-3次。 5.吸去上清液，获得绵羊红细胞。 （三）绵羊红细胞悬液制备 1.20%绵羊红细胞悬液制备 在无菌实验室中，用移液枪吸取2ml绵羊红细胞于锥形瓶中，用移液管再加入8ml灭菌生理盐水，混合均匀。 2.2%绵羊红细胞悬液制备 在无菌实验室中，用移液枪吸取1ml绵羊红细胞于锥形瓶中，量筒量取49ml无菌生理盐水加入锥形瓶，混合均匀。 二、溶血素的制备 （一）免疫接种程序
1 Antibody-dependent cellular cytotoxicity (ADCC)抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用 In antibody-dependent cellular cytotoxicity (ADCC), Fc gamma receptors (FcγR or FCGR) on the surface of immune effector cells bind the Fc region of an antibody, itself specifically bound to a target cell. The cells that can mediate ADCC are nonspecific cytotoxic cells such as natural killer cells, macrophages, monocytes and eosinophils. Upon FCGR binding to the antibody, the FCGR ITAM is phosphorylated, which triggers the activation of the effector cell and the secretion of various substances (lytic enzymes, perforin, granzymes, TNF) that mediate the destruction of the target cell. The level of ADCC effector function is high for human IgG1 and IgG3, low for IgG2 and IgG4, and for these last two subclasses, the level of binding depends on the FCGR isotype and on the cell type. 2 Complement-dependent cytotoxicity (CDC) 补体依赖的细胞毒性作用 In complement-dependent cytotoxicity (CDC), the C1q binds the antibody and this binding triggers the complement cascade which leads to the formation of the membrane attack complex (MAC) (C5b to C9) at the surface of the target cell, as a result of the classical pathway complement activation.
第十九章补体参与的反应及补体测定 Complement Mediated Reactions and Assays of Complement 第一部分目的要求和教学内容 一、目的要求 掌握：免疫溶血试验及CH，。测定的原理及意义；熟悉：补体参与的反应试验类型、补体依赖的细胞毒试验的原理、旁路途径溶血活性测定；了解：补体结合试验和免疫黏附试验的原理、C4和B因子活性测定的原理。 二、教学内容 1．补体参与的反应：免疫溶血试验，补体结合试验，补体依赖的细胞毒试验，免疫黏附试验。 2．补体的测定：补体活性的测定，补体含量的测定，补体测定的临床意义。 第二部分测试题 一、选择题 (一)单项选择题(A型题) 1．溶血素效价滴定判定的温度和时间是 A．37℃、30min B．4℃、30min C．37℃、15min D．40℃、30min E．56℃、30min 2．在补体连锁反应中最终形成的攻膜复合体是 A．C5b6789 B．C4b2a3b C．C4b2b D．C3bBb E．C3b4b 3. 下列哪项试验没有补体参加 A．CH试验 B．CDC试验 C．溶血空斑试验 D．ADCC试验 E．Raji细胞试验 4．补体结合试验中所用补体是哪种动物血清 A．马血清 B．绵羊新鲜血清 C．豚鼠新鲜血清 D．大白鼠新鲜血清 E．山羊新鲜血清
5．下列哪项试验不能用于补体缺陷的过筛诊断 A．CDC式验 B．CH50试验 C．血清C3含量测定 D．血清Cl含量测定 E．C4溶血活性试验 6．B因子溶血活性测定中，在缓冲液中加．),．EGTA是为了螯合反应体系中的A．Mg2+离子 B．Ca2+离子 C．zn2+离子 D．Fe3+离子 E．P3+离子 7．在单个补体成分溶血活性测定中，用氨水处理是为了去除哪个补体成分A．C1 B．C2 C．C4 D．C5 E．C3 8．检测免疫小鼠脾细胞分泌到细胞外的抗SRBC抗体的试验是 A．CH50试验 B． CFT C，APH50测定 D．B因子活性测定 E．溶血空斑试验 9．利用溶血反应作为指示系统，判断抗原抗体是否相对应的试验是 A．CHs50试验 B．CFT C．APH50测定 D．B因子活性测定 E．抗补体试验 10．补体经典途径的最重要激活物是 A．特异性抗原 B．特异性抗体 C．抗原抗体复合物 D．细菌脂多糖 E、酵母多糖 11.正常血清中,补体含量最低的是 A.C1q B. C5aR C. C1rR D.Df E.C1INH 12.正常血清中,补体含量最高的是 A.C1 B.C2 C.C3
实验二传代细胞培养与病毒在传代细胞中得培养 一. 实验目得 了解倒置显微镜得构造与使用，了解不同传代细胞得形态及接毒后得病变特 征,掌握细胞得传代培养方法、病毒接利方法及收毒方法。 二、常用细胞得种类 BHK-21:仓鼠肾传代细胞 PK-15：猪肾传代细胞 IBRS-2:猪肾传代细胞 Hela ：人得子宫瘤细胞 Ver 。：非洲绿猴肾细胞 Marc-145:来源于Vero 细胞 TK-143:人得胸昔激酶阴性细胞 Sf9：昆虫细胞 三、材料 1、lOOml 细胞瓶、吸管、吸球、96孔细胞培养板、加样器、枪头 BHK-21 (baby hamster kidney)细胞 生长液:含10%犊牛血清、200U/inl 青、链霉素得DMEM 2、 3、 0、25%胰酶 4、
维持液:含2-5%犊牛血清、200U/inl青、链霉素得DMEM 5、伪狂犬病病毒液(PRV) 四.传代细胞培养得条件要求 1)细胞密度:2-3X105个/ml 2)pH 范围最适 pH7、0-7、4,耐受 pH6、6-7、8 3)培养温度 哺乳动物细胞一般为37°C 昆虫细胞28-3(rC 五、常用细胞分散剂与作用原理 1、胰酶使精氨酸或赖氨酸得竣基与其她氨基酸得氨基之间得多肽链发生水解, 导 致细胞间质水解而使细胞或组织块消化为分散得单个细胞。 2、乙二胺四乙酸二钠(EDTA):与二价钙、镁离子结合■从而使细胞分散。 3、灰色链丝菌酶川I灰色链丝菌提取得一种酶制剂,就是蛋口酶、氨肽酶与竣肽 酶得混合物。 六、营养液 1、人工综合营养液 氨基酸、糖类、无机盐类、维生素、辅酶、嚓吟、陀唏、辅助生长因子。 2、血清 1)血清得种类 胎牛血清、新生犊牛血清、成年牛血清、马血清、鸡血清、兔血清、羊血清、人血清，其中以新生犊牛血清使用最为广泛。
一、单选题(A1／A2型题) 1．最早将抗原抗体反应原理及方法应用于临床血清学诊断的学者是(A ) A．Widal B．Landsteiner C．KOhler D．ManciniE．Coons 2．下列各项用于反映B细胞功能的试验是( B) A。淋巴细胞转化B．血清免疫球蛋白检测C．迟发型超敏反应皮肤试验D．移动抑制试验E．CD3检测 3．对流免疫电泳的沉淀线出现在抗原抗体之间且靠近抗原孔可说明(B) A．抗原强阳性B．抗原弱阳性C．抗原阴性 D．抗体弱阳性E．抗体阴性 4。下列何种抗原是触发移植排斥反应的首要抗原(D) A．HLA-A、B 、C B．HLA-DP C．HLA-DQ D．HLA-DR E．HLA-D 5．人类MHC基因位于第几对染色体上(B ) A．第1对B．第6 对C．第9对D．第12 对E．第19 对 6．机体的免疫系统具有杀灭或排斥突变细胞功能称为(C ) A．免疫防御B.免疫自稳 C.免疫监视D.免疫应答 E.兔疫识别7．用异硫氰荧光色素(FITC)作标记时其激发光波长近于(D ) A．365nm B．435nm C．450mn D．490nm E．500nm 8.血清中含量最高的补体分子是( C) A．C1 B．C2 C．C3 D．C4 E．C5 9．检测不完全抗体可使用的凝集反应(D ) A．协同凝集反应B．间接凝集反应C．间接血凝试验 D．Coombs试验E．直接凝集反应
10．ELISA试验时易造成空白值增高的原因主要来自于(C ) A．加样不准B保温时间短C洗涤不彻底D比色误差E包被不好11．GVHR的中文全称为( B) A．宿主抗移植物反应B移植物抗宿主反应C补体依赖的细胞毒作用D．荧光偏振免疫分析E人类白细胞抗原 12．为提取高纯度特异性IgG通常采用的方法是(C) A．区带电泳B．凝胶过滤C．亲和层析D．选择性沉淀E．超速离心13．初次应答中首先产生的抗体是(C ) A．1gA B．IgG C．IgM D．IgE E．IgD 14．用于前列腺癌初筛的首选肿瘤标志物是(B ) A．AFP B．PSA C．CEA D．CAl9-9 E．HCG 15．不完全抗原的特点是(B ) A．仅具有免疫原性B仅具有反应原性C具有免疫原性及反应原性D．与抗体不产生沉淀反应E．不可能是病原微生物的产物16．化学发光的基本原理是发光物由于(D ) A．在一定波长激发光照射下发光B．在化学反应中获得能量而发光C．在电子激发态时发光D在电子激发态返回基态时释放能量而发光E．某物在化学反应中生成发光物而发光 17．组织相容性抗原指的是(C ) A．同种异型抗原B．隐蔽的自身抗原C同种移植抗原 D．有核细胞表面抗原E．N曾异性抗原
细胞毒性实验设计方案 1. 准备材料：DMEM高糖)胰酶双抗(青霉素/链霉素)DAPI MTT(5mg/mL) DMSO PBS 4% 多聚甲醛指甲油6 孔培养板 96孔培养板超薄载玻片培养瓶(25mL) 一包0.45 pm滤膜 灭菌：50mL , 10mL 5mL离心管两种枪头 2. 实验方案 本实验所用的材料为载药的通过二硫键桥连透明质酸的夹心二氧化硅 (SiO^SS-HA/DOX ,在高谷胱甘肽条件下，二硫键断裂，透明质酸脱离，同时夹心二氧化硅中药物得以释放。本实验的目的为测定透明质酸修饰的夹心二氧化硅(SiO2-SS-HA/DOX 的细胞毒性。实验组为SiO2-SS-HA/DOX SQ2-SS-HA、DOX 空白对照组为纯细胞,分别采用HepG2人肝癌细胞为肿瘤细胞模型和L929成纤维细胞为正常细胞模型。 采用HepG2人肝癌细胞为肿瘤细胞模型，实验组为SiO2-SS-HA/DOX SQ2-SS-HA、DOX空白对照组为纯细胞。培养基中含有10%(v/v) FBS和1%(w/v) 双抗(青霉素/链霉素)。配制不同浓度的SQ2-SS-HA/DOX SiO2、HA DOX药物载体培养基溶液。 (1).以HepG2人肝癌细胞为肿瘤细胞模型： 培养基的配置：双抗1% 血清12% DMEM 87% 具体操作步骤： 细胞的复活： ①将冻存于液氮中的细胞取出，迅速放入37°C温水中，使细胞快速溶解。 ②将悬浮的细胞移至离心管中，力卩5mL无血清培养基，1000rmp,5min离心去上清，再加5mL有血清培养基，转移至培养瓶中。(每次转移时，将之前的离心管洗涤，并用移液枪来回吸，使液体混合均匀。) ③将培养瓶放入培养箱中培养。 细胞的传代： 将0.25%的胰酶分装至小离心管中，每个管中2mL冻存于-20 C，每次使用一管，避免反复冻融。 ①将培养瓶从培养箱中取出，盖子旋紧，喷75%勺酒精放入超净台。
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（教案续页） 基本内容辅助手段和时间分配备注 第一节补体系统的性质与活化途径 一、补体系统的组成与性质 补体(complement，C)是存在于人和脊椎动物血清及组织中的一组具有酶样活性、不耐热和功能上连续反应的球蛋白，是抗体发挥溶细胞作用的必要补充条件，故称为补体系统。补体并非单一成分，而是由补体及其调节因子和相关膜蛋白以及补体受体共同组成的补体系统。补体系统广泛参与机体的抗感染防御反应，具有介导细胞溶解、调理吞噬、免疫黏附以及参与炎症反应引起机体免疫损伤等作用，是体内具有重要生物学功能的免疫效应和放大系统。 补体系统由30多种活性成分组成，按其性质和功能可以分为三大类：①补体系统的固有成分；②以可溶性或膜结合形式存在的补体调节蛋白； ③结合补体片段或调节补体生物学效应的补体受体受体(complement receptor，CR)。 由于由于补体系统组成和功能的复杂性，其命名较为复杂，一般有以下规律可循：参与补体经典邀活途径的固有成份，按其被发现的先后次序命名为C1、C2、……C9，其中Cl由Clq、Clr、Cls三种亚单位组成；补体系统的其他成分以英文大写字母表示，如B因子、D因子、P因子、H因子；补体调节蛋白多以功能命名，如Cl抑制物、C4结合蛋白和膜协同因子蛋白等；补体活化后的裂解片段，以该成分的符号后面附加小写英文字母表示，如C3a、C3b等；具有酶活性的成分或复合物，在其符号上划一横线表示，如Ci、C—3bB—b等；灭活的补体片段，在其符号前加英文字母i表示，如iC3b。补体性质不稳定，易受各种理化因素影响，加热、紫外线照射、机械振荡或某些添加剂等理化因素均可能破坏补体。在0-10℃补体活性可保持3～4天，冷冻干燥可较长时间保持其活性，加热56℃30 min即被灭活，所以补体活性检测标本应尽快进行测定。 补体多为糖蛋白，且多属于B球蛋白，少数为7球蛋白或a球蛋白，其中Clq分子量最大，D因子最小。正常血清中补体各组分含量相差较大，以C3含量最多，D因子最少。 二、补体活化途径 补体系统各组分通常以非活性的酶前体形式存在，只有在某些活化物的作用下，补体各组分便产生连锁酶促反应，又称级联反应，才表现出生
细胞毒性实验方案 Prepared on 22 November 2020
细胞毒性实验设计方案 1.准备材料：DMEM(高糖)胰酶双抗(青霉素/链霉素） DAPIMTT(5mg/mL)DMSOPBS4%多聚甲醛指甲油6孔培养板96孔培养板超薄载玻片培养瓶(25mL)一包μm滤膜 灭菌：50mL，10mL，5mL离心管两种枪头 2.实验方案 本实验所用的材料为载药的通过二硫键桥连透明质酸的夹心二氧化硅（SiO2-SS-HA/DOX），在高谷胱甘肽条件下，二硫键断裂，透明质酸脱离，同时夹心二氧化硅中药物得以释放。本实验的目的为测定透明质酸修饰的夹心二氧化硅（SiO2-SS-HA/DOX）的细胞毒性。实验组为SiO2-SS-HA/DOX、SiO2-SS-HA、DOX，空白对照组为纯细胞,分别采用HepG2人肝癌细胞为肿瘤细胞模型和L929成纤维细胞为正常细胞模型。 采用HepG2人肝癌细胞为肿瘤细胞模型，实验组为SiO2-SS-HA/DOX、SiO2-SS-HA、DOX，空白对照组为纯细胞。培养基中含有10%(v/v)FBS和1%(w/v)双抗(青霉素/链霉素)。配制不同浓度的SiO2-SS-HA/DOX、SiO2、HA、DOX药物载体培养基溶液。 (1).以HepG2人肝癌细胞为肿瘤细胞模型: 培养基的配置：双抗1%血清12%DMEM87% 具体操作步骤： 细胞的复活： ①将冻存于液氮中的细胞取出，迅速放入37℃温水中，使细胞快速溶解。 ②将悬浮的细胞移至离心管中，加5mL无血清培养基，1000rmp,5min离心去上清，再加5mL有血清培养基，转移至培养瓶中。（每次转移时，将之前的离心管洗涤，并用移液枪来回吸，使液体混合均匀。） ③将培养瓶放入培养箱中培养。 细胞的传代：
医疗器械生物学评价 第5部分：体外细胞毒性试验 1范围 GB/T16886的本部分阐述了评价医疗器械体外细胞毒性的试验方法。 这些方法规定了下列供试品以直接或通过扩散的方式与培养细胞接触和进行孵 育； a）用器械的浸提液，和／或 b）与器械接触。 这些方法是用相应的生物参数测定哺乳动物细胞的体外生物学反应。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过GB/T16886的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本部分。 GB/T16886.1医疗器械生物学评价第1部分：评价与试验 （GB/T16886.1-2001,idtISO10993-1:1997） CB/T16886.12-2000医疗器械生物学评价第12部分：样品制备和参照材料 （idtISO10993- 12:1996）
3术语与定义 GB/T16886.1/ISO1993-1中确立的以及下列术语和定义适用于本部分。 3.1 阴性对照材料negativecontrolmaterial 按照本部分试验时不产生细胞毒性反应的材料。 注：阴性对照的目的是验证背景反应，例如高密度聚乙烯1）已作为合成聚合物的阴性对照材料，氧化陶瓷棒则用作牙科材 料的阴性对照物。 3.2 阳性对照材料pos itivecontrolmaterial 按照本部分试验时可重现细胞毒性反应的材料。 注：阳性对照的白目的是验证相应试验系统的反应，例如用有机锡作稳定剂的聚氯乙烯2）已用作固体材料和浸提液的阳性 对照，酚的稀释液用于浸提液的阳性对照。 _____________________________________ 1)高密度聚乙烯可从美国药典委员会（Rockvillie,Maryland,USA）和Hatano研究所食品和药品安全中心 （Ochiai729-5,Hanagawa.257-Japan）获得。提供这一信息是为本部分的使用者提供方便，但ISO对使用该产品不提供担保。 2)有机锡聚氯乙烯阳性对照材料可从SIMSPortexLtd,Hythe,Kent,CT216JL,UK（产品号码499-300-000）获得。ZDEC和ZDBC 聚氨甲酸乙酯可从Hatano研究所食品和药品安全中心（Ochiai729-5,Hanagawa257-Japan)获得。提供这一信息是为本部分的使用 者提供方便，但ISO对使用该产品不提供担保。 3.3 试剂对照reagentcontrol 在不加试验材料的条件下，按浸提条件和试验步骤得到的浸提介质。 注：在本部分中，该定义取代GB/T16886.12/lSO10993-12中3.1给出的定义。 3.4 培养器皿culturevessels
1. 试述补体活化的三条途径。 答：1、经典激活途径： （1）激活物：主要是由IgG或IgM类抗体与相应抗原结合形成的免疫复合物。 （2）参与成分：C1、C2、C3、C4、C5、C6、C7、C8、C9。 （3）激活过程：分为识别阶段、活化阶段、膜攻击阶段。 （4）激活顺序：依次为C1、C4、C2、C3、C5--C9。 （5）转化酶：C3转化酶：C4b2b；C5转化酶：C4b2b3b。 （6）生物学作用：可在特异性免疫的效应阶段发挥作用。C5转化酶裂解C5后形成膜攻击复合物，最终溶解靶细胞；补体裂解形成的小片段C4a、C2a、C3a 在血清等体液中可发挥多种生物学效应。 2、旁路激活途径： （1）激活物：主要是病原体胞壁成分，如脂多糖、肽聚糖、磷壁酸等。 （2）参与成分：除C3、C5、C6、C7、C8、C9外，还有B因子、D因子、P 因子等。 （3）激活过程：首先激活C3，然后完成C5--C9的活化过程。 （4）激活顺序：依次为C1、C4、C2、C3、C5--C9。 （5）转化酶：C3转化酶：C3bBb；C5转化酶：C3bBb3b或C3bnBb （6）生物学作用：参与非特异性免疫，在感染早期发挥重要作用。其生物学效应与经典途径相似。 3、MBL激活途径： （1）激活物：表面具有甘露糖、葡萄糖的病原微生物。 （2）参与成分：MBL、C反应蛋白、C2、C3、C4、C5、C6、C7、C8、C9。 （3）激活过程：A、MBL：MBL激活起始于炎症急性蛋白与病原体的结合。MBL 与病原体表面的甘露糖等糖类配体结合后，激活与之相连的MBL相关的丝氨酸蛋白酶（MASP）。MASP2与C1s活性相似，其激活补体的过程与经典途径相似；MASP1具有C3转化酶活性，其激活补体过程与旁路途径相似。B、C反应蛋白：C反应蛋白与C1q结合使之活化，激活过程与经典途径相似。 （5）转化酶：C3转化酶、C5转化酶与经典途径相同。 （6）生物学作用：参与非特异性免疫，在感染早期发挥重要作用。其生物学效应与经典途径、旁路途径相似。 2. 何为MAC？ 答：MAC即膜攻击复合物，C5转化酶裂解C5形成C5b，C5b与C6、C7结合形成C5b67，该复合物插入靶细胞膜中，与C8结合形成C5b678附着与细胞表面，又与12个到19个C9结合，形成大分子C5b6789即膜攻击复合物。MAC裂解靶细胞，使靶细胞死亡。 第五章细胞因子 1.何为细胞因子和趋化因子？ 答：细胞因子（CK）是由基质细胞产生或活化免疫细胞分泌的具有一定生物活性的一类小分子蛋白质的总称。细胞因子分为：白细胞介素、干扰素、肿瘤坏死因子、集落刺激因子、生长因子和趋化因子。 趋化因子是一类由多种细胞产生的相对分子质量多为7—10KDa的促炎症细胞因子，具有激活和趋化白细胞的作用。
第二节补体结合试验 补体结合试验（complementfixationtest，cft）是用免疫溶血机制做指示系统，来检测另一反应系统抗原或抗体的试验。早在1906年wasermann就将其应用于梅毒的诊断，即著名的华氏反应。这一传统的试验经不断改进，除了用于传染病诊断和流行病学调查以外，在一些自身抗体、肿瘤相关以原以及hla的检测和分析中也有应用。 一、类型及原理 该试验中有5种成分参与反应，分属于3个系统：①反应系统，即已知的抗原（或抗体）与待测的抗体（或抗原）；②补体系统；③指示系统，即srbc与相应溶血素，试验时常将其预先结合在一起，形成致敏红细胞。反应系统与指示系统争夺补体系统，先加入反应系统给其以优先结合补体的机会。如果反应系统中存在待测的抗体（或抗原），则抗原抗体发生反应后可结合补体；再加入指示系统时，由于反应液中已没有游离的补体而不出现溶血，是为补体结合试验阳性。如果反应系统中不存在的待检的抗体（或抗原），则在液体中仍有游离的补体存在，当加入指示系统时会出现溶血，是为补体结合试验阴性（图14-2）。因此补体结合试验可用已知抗原来检测相应抗体，或用已知抗体来检测相应抗原。
图14-2补体结合试验示意图 二、试验方法 补体结合试验的改良方法较多，较常用的有全量法(3ml)、半量法(1.5ml)、小量法(0.6ml)和微量法（塑板法）等。目前以后两种方法应用较为广泛，因为可以节省抗原，血清标本用量较少，特异性也较好。以下叙述以小量法为例，即抗原、抗体、溶血素、羊红细胞各加0.1ml，补体加0.2ml，总量为0.6ml。 （一）试剂 1．抗原试验中用于检测抗体的抗原应适当提纯，纯度愈高，特异性愈强。如使用粗制抗原时，须经同样处理的正常组织作抗原对照，以识别待检血清中可能存在的、对正常组织成分的非特异性反应。2．抗原和抗本的滴定补体结合试验中，抗原与抗体按一定比例结合，因而应通过试验选择适宜的浓
（一）实验前应明确的问题 1.选择适当的细胞接种浓度。一般情况下，96孔培养板的一内贴壁细胞长满时约有105个细胞。但由于不同细胞贴壁后面积差异很大，因此，在进行MTT试验前，要进行预实验检测其贴壁率、倍增时间以及不同接种细胞数条件下的生长曲线，确定试验中每孔的接种细胞数和培养时间，以保证培养终止致细胞过满。这样，才能保证MTT结晶形成酌量与细胞数呈的线性关系。否则细胞数太多敏感性降低，太少观察不到差异。 2.药物浓度的设定。一定要多看文献，参考别人的结果再定个比较大的范围先初筛。根据自己初筛的结果缩小浓度和时间范围再细筛。切记！否则，可能你用的时间和浓度根本不是药物的有效浓度和时间。 3. 时间点的设定。在不同时间点的测定OD值，输入excel表，最后得到不同时间点的抑制率变化情况，画出变化的曲线，曲线什么时候变得平坦了（到了平台期）那个时间点应该就是最好的时间点（因为这个时候的细胞增殖抑制表现的最明显）。 4.培养时间。200ul的培养液对于10的4～5次方的增殖期细胞来说，很难维持68h，如果营养不够的话，细胞会由增殖期渐渐趋向G0期而趋于静止，影响结果，我们是在48h换液的。 5.MTT法只能测定细胞相对数和相对活力，不能测定细胞绝对数。做MTT时，尽量无菌操作，因为细菌也可以导致MTT比色OD值的升高。 6.理论未必都是对的。要根据自己的实际情况调整。 7.实验时应设置调零孔，对照孔，加药孔。调零孔加培养基、MTT、二甲基亚砜。对照孔和加药孔都要加细胞、培养液、MTT、二甲基亚砜，不同的是对照孔加溶解药物的介质，而加药组加入不同浓度的药物。 8.避免血清干扰。用含15％胎牛血清培养液培养细胞时，高的血清物质会影响试验孔的光吸收值。由于试验本底增加，会试验敏感性。因此，一般选小于10％胎牛血清的培养液进行。在呈色后，尽量吸净培养孔内残余培养液。 （二）实验步骤 贴壁细胞： 1.收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度，每孔加入100ul,铺板使待测细胞调密度至1000-10000孔，（边缘孔用无菌PBS填充）。 2.5%CO2，37℃孵育，至细胞单层铺满孔底（96孔平底板）,加入浓度梯度的药物,原则上，
模拟试题 【】一.名词解释（每题3分，共42分） ( ) 1.适应性免疫 ( ) 2.超抗原 ( ) 3.Fab段 ( ) 4.MAC（攻膜复合体） ( ) 5.细胞因子 ( ) 6.模式识别受体（PRR） ( ) 7.ADCC ( ) 8.B7-CTLA-4 ( ) 9.TCR-CD3 ( ) 10.CD4+CD25+调节性T细胞（Tr） ( ) 11.同种异体移植排斥的间接识别 ( ) 12.激活诱导的细胞死亡（AICD） ( ) 13.人工主动免疫 ( ) 14.补体依赖的微量细胞毒试验（CDC） 【】二.选择题（每题1分，共10分，请将选项填入括号内） ( ) 1.下列哪种说法是正确的： A．未成熟DC具有强的抗原摄取能力和激活初始T细胞能力 B．未成熟DC具有弱的抗原摄取能力和激活初始T细胞能力 C．未成熟DC具有强的抗原摄取能力和弱的激活初始T细胞能力 D．未成熟DC具有弱的抗原摄取能力和强的激活初始T细胞能力( ) 2.下列哪个分子可为B细胞的活化提供第二信号： A．CD3 B．CD4 C．CD40 D．CD80 ( ) 3.下列哪项不属再次应答的特点： A．抗体亲和力增高B．以B细胞为主要的APC C．潜伏期延长D．抗体维持时间延长 ( ) 4.下列哪一过程不能列入免疫应答活动： A．APC对抗原的处理、提呈B．Tc对靶细胞的特异性杀伤 C．T细胞由双阳性细胞转为单阳性细胞D．B细胞活化、增殖形成浆细胞( ) 5.下列哪种与外周耐受的形成无关： A．克隆无能B．免疫忽视C．克隆流产D．免疫豁免( ) 6.一般不引起明显组织细胞损伤的是： A．Ⅰ型超敏反应B．Ⅱ型超敏反应 C．Ⅲ型超敏反应D．Ⅳ型超敏反应 ( ) 7.单只眼睛外伤后引起的交感性眼炎（双眼反复炎症）的原因是：
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报告目录 报告核心要素......................................................................................................... I 一、主题简介 (1) 二、主题相关科研产出总体分析 (1) 2.1 文献总体产出统计 (1) 2.2 学术关注趋势分析 (2) 三、主题相关科技论文产出分析 (2) 3.1 中文期刊论文 (2) 3.1.1 近十年中文期刊论文分布列表 (2) 3.1.2 中文期刊论文增长趋势 (3) 3.1.3 发文较多期刊 (4) 3.1.4 发文较多的机构 (4) 3.1.5 发文较多的人物 (4) 3.1.6 核心期刊分布数量对比 (4) 3.1.7最近相关中文期刊论文 (5) 3.1.8被引较多的相关期刊论文 (6) 3.2 学位论文 (7) 3.2.1 近十年学位论文年代分布列表 (7) 3.2.2 学位论文增长趋势 (8) 3.2.3 硕博学位论文数量对比 (9) 3.2.4 发文较多的机构 (9) 3.2.5 发文较多的人物 (9) 3.2.6 最近相关学位论文 (10) 3.3 中文会议论文 (10) 3.3.1 近十年中文会议论文年代分布列表 (10) 3.3.2 中文会议论文增长趋势 (11) 3.3.3 中文会议论文主办单位分布 (12) 3.3.4 发文较多的机构 (12) 3.3.5发文较多的人物 (13) 3.3.6最近相关中文会议论文 (13) 3.4 外文期刊论文 (14) 3.4.1 近十年外文期刊论文年代分布列表 (14) 3.4.2 外文期刊论文增长趋势 (14) 3.4.3 最近相关外文期刊论文 (15) 3.5 外文会议论文 (15) I
《医学免疫学》本科考试样卷 姓名专业班 学号实验室教师 一、单项选择题（每题1分，共20分） 1. 抗原的免疫原性是指: （） A.抗原刺激机体免疫系统，产生抗体的性质 B.抗原刺激机体免疫系统，产生致敏淋巴细胞的性质 C.抗原与相应抗体在体内外特异性结合的性质 D.抗原与相应致敏淋巴细胞在体内外特异性结合的性质 E.抗原刺激机体免疫系统，产生抗体和(或)致敏淋巴细胞的性质 2. 免疫学认为的"自身物质"是: （） A.异种物质 B.同种异体物质 C.结构发生改变的自身物质 D.胚胎期免疫细胞接触过的自身物质
E.胚胎期免疫细胞未接触过的自身物质 3. 关于TD-Ag，正确的叙述是: （） A.在胸腺中加工处理的抗原 B.可直接激活B细胞产生抗体的抗原 C.不能诱导产生免疫记忆的抗原 D.只能诱导产生IgM类抗体的抗原 E.既能引起细胞免疫应答，又能引起体液免疫应答的抗原 4. 能与肥大细胞高亲和结合的Ig是: （） A.IgA C. IgE 5. 血清中半衰期最长的Ig是: （） C. IgE A 6. 补体被激活后发挥的生物学效应不包括: （） A.免疫粘附 B.溶解靶细胞 C.ADCC作用 D.炎症反应 E.调理作用 7. 与C3转化酶形成无关的补体组分是: （） A.C4 B. C3 C. C2 D. C5 因子 8. 不表达经典HLAⅠ类抗原的细胞是: （）
A.淋巴细胞 B.成熟红细胞 C.血小板 D.网织红细胞 E.粒细胞 9. MHC限制性主要表现于: （） A.NK细胞杀伤作用 B.ADCC作用 C.T细胞对抗原的识别过程 D.B细胞对TI抗原的识别 E.补体依赖的细胞毒作用 10. 细胞因子不具备的作用特点有: （） A.高效性 B.特异性 C.多效性 D.重叠型 E.网络性 11. TH1细胞可通过下列哪种作用产生免疫效应（） A.非特异性杀伤靶细胞 B.分泌抗体 C.特异性直接杀伤靶细胞
肿瘤免疫及检验 一、选择题 （一）单项选择题（A型题） 1．肿瘤特异性抗原 A．是细胞癌变过程中过度表达的抗原物质 B．非肿瘤细胞所特有，在正常细胞上也有微量表达 C．是细胞癌变过程中出现的新抗原及过度表达的抗原物质的总称 D．是仅存在于肿瘤细胞表面而不存在于正常细胞的抗原 E．有明显的病毒特异性 2．目前认为，下列属于肿瘤特异抗原的是 A．MAGE-1 B．AFP C．CEA D．EB病毒蛋白 E．HPV(人乳头瘤状病毒)蛋白 3．以下关于自发性肿瘤抗原的叙述正确的是 A．它是由病毒感染诱发的肿瘤 B．它是除病毒感染诱发的肿瘤之外的所有肿瘤 C．它是由理化因素诱发的肿瘤 D．它是无明确的诱发因素的肿瘤 E．人类肿瘤极少数属于此类 4．关于肿瘤免疫的描述，错误的是: A．实验证实在某些肿瘤细胞表面存在肿瘤特异性抗原 B．血清CEA升高有助于结肠癌的诊断 C．人乳头瘤病毒感染与人宫颈癌发生有关 D．血清抗AFP抗体水平升高可辅助诊断原发性肝癌 E．抗EB病毒抗体阳性可辅助诊断鼻咽癌 5．以下关于癌胚抗原的叙述错误的是 A．正常人血清中CEA水平极低 B．结肠癌、直肠癌患者血清中的含量急剧增加 C．观察CEA动态水平，有助于临床疗效的判断及复发、转移的观察 D．由于早期结肠癌CEA的检测率低，一般不用于早期诊断 E．它是一种分泌性胚胎抗原 6．肿瘤细胞的“漏逸”是指 A．在机体免疫系统的作用下，某些肿瘤抗原表位减少或丢失，从而逃逸免疫系统识别 B．肿瘤细胞分泌高水平唾液多糖，可“覆盖”抗原 C．由于机体抗肿瘤免疫效应的产生不能赶上肿瘤细胞迅速生长的速度，致使大量生长的肿瘤细胞不能 被有效清除 D．血清中存在的封闭性抗体与肿瘤抗原结合 E．血清中存在的分泌性抗原与肿瘤抗原竞争同TCR结合 7．高水平血清甲胎蛋白(AFP)见于 A．孕妇 B．重度嗜烟者 C．酒精性肝硬化病人 D．结肠癌切除术后病人 E．生殖细胞畸胎瘤病人 8．关于对肿瘤的排斥作用，下列哪项是正确的？ A．T细胞介导的细胞毒 B．ADCC C．补体依赖的细胞毒 D．吞噬细胞对肿瘤细胞的破坏 E．以上全部 9．下述有关系的组合是哪项 A．AFP—肿瘤相关抗原 B．备解素－淋巴因子 C．过敏毒素—免疫球蛋自 D．干扰素－佐剂 E．EPO—补体系统 10．应用IL-2抗肿瘤治疗是扩增 A．抗体产小细胞 B．单核细胞 C．TIL细胞 D．嗜中性粒细胞 E．肥大细胞 11．近年表明，应用抗独特型血清可清除B细胞淋巴瘤，但用同法治疗浆细胞瘤则无效，其原因是由于 A．浆细胞瘤无肿瘤特异抗原 B．浆细胞瘤对ADCC效应不敏感 C．浆细胞无表面Ig D．浆细胞表面的独特型与B细胞表面的独特型不同 E．浆细胞瘤只能被带有相同MHC—I类抗原的细胞毒性T细胞杀伤 12．病毒诱发的肿瘤抗原的特点是 A．无明显的个体、组织特异性，但有明显的病毒特异性 B．无明显的个体、组织特异性，也无明显的病毒特异性 C．抗原性较弱 D．有明显的个体、组织特异性，也有明显的病毒特异性 E．有明显的个体、组织特异性，但无明显的病毒特异性 13．活化的单核巨噬细胞