利用一测多评法同时测定栀子中6种成分含量
摘要：以栀子中的6种成分为指标，建立其他指标成分与栀子苷的相对校正因子，计算各成分的含量，实现一测多评；同时采用回归方程法测定该6种成分含量，并比较2种方法所得计算值与实测值的差异，以验证一测多评法的准确性和可行性。结果表明：12批栀子中6种成分的计算值与实测值间无显著差异，利用一测多评法控制栀子的质量是准确可行的。
关键词：一测多评；校正因子；HPLC；栀子
中图分类号：R284.1文献标志码：A文章编号：1002-1302（2015）01-0292-03
收稿日期：2014-09-28
基金项目：国家科技支撑计划（编号：2011BAI04B01）；中央本级重大增减支项目（编号：20603020110、20603020213）；江西中医药大学校级研究生创新专项（编号：JZYC14C09）。
作者简介：苗琦（1989―），男，陕西宝鸡人，硕士研究生，主要从事中药资源开发与应用研究。E-mail：
miaoqi6213963@https://www.doczj.com/doc/f34960058.html,。
通信作者：罗光明，博士，教授，主要从事中药资源开
发与应用研究。Tel：（0791）7118982；E-mail：
jzlgm11@https://www.doczj.com/doc/f34960058.html,。中药多成分定量和多指标质量控制中存在的对照品缺乏问题，是目前中药多指标质量控制和评价模式的主要瓶颈之一。仅以1种有效成分含量无法客观反映中药材的质量，在中药材对照品紧缺、价格高昂的背景下，为了能采用多指标客观反映中药材质量，王智民等率先提出了一测多评法（quantitative analysis of multi-components by single-marker，QAMS）的中药质量评价新模式，该法通过测定中药材中固有成分含量，按照相对校正因子推算该药材中其他成分含量[1]。QAMS采用仅测定1种价廉、易得的成分含量，实现多成分同步测定的模式，克服了多指标质量控制面临的对照品短缺和高昂检测成本问题。虽然目前该方法已被成功应用于木通、黄连、人参等20 种常用中药的质量评价研究[2-4]，但是该方法在栀子（Gardeniae）药材中的应用还鲜有报道。本研究探索了QAMS 技术在栀子质量评价中应用的可行性，旨在为栀子质量评价提供新途径。
1材料与方法
1.1仪器与试剂
仪器：Waters 2695 separations module型高效液相色谱仪（Waters 2996 photodiode array detector 检测器、Waters empower 化学工作站，美国Waters公司）；Agilent 1200型高效液相色谱系统，Agilent 1260型高效液相色谱系统；
BP224S型电子天平（Sartorius公司）；KQ-300E型超声波清洗器（昆山超声仪器有限公司）。
试剂：甲醇（色谱纯，美国TEDIA公司）；乙腈（色谱纯，美国ACS公司）；甲醇（分析纯，西陇化工股份有限公司）；水（娃哈哈牌）；对照品：京尼平苷酸（编号
111828-201102，纯度按96.0%计算）、绿原酸（编号110753-201314，纯度按96.6%计算）、栀子苷（编号110749-201316，纯度按97.5%计算）、西红花苷-Ⅰ（编号111588-201202，纯度按91.1%计算）、西红花苷-Ⅱ（编号111589-201304，纯度按92.4%计算）购于中国药品生物制品检定所，京尼平1-β-D龙胆二糖苷（批号为ZM0501BA14，纯度>98.0%）购于上海源叶生物科技有限公司。
1.2方法
1.2.1原理在一定线性范围内，成分的量（浓度，C）与检测器响应（峰面积，A）呈正比[5]。在进行多成分（s，a，b，…，i，…）质量评价时，用中药材中某一有效成分（廉价、易得）作为内参物（s），建立内参物与其他成分（a，b，…，i，…）间的相对校正因子RCF（fsa，fsb，fsc，…），计算公式为：
fsi=fs/fi=（As/Cs）/（Ai/Ci）
式中：As为内参物对照品s的峰面积；Cs为内参物对照品s的浓度；Ai为某待测成分对照品i的峰面积；Ci为某
待测成分对照品i的浓度。
1.2.2色谱条件Durashell C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：乙腈（A）-0.1%磷酸水（B）；梯度洗脱：0～18 min（8%～15% A），18～25 min（15%～23% A），25～40 min（23%～35% A），40～50 min（35%～50% A）；检测波长：238、330、440 nm；柱温30 ℃；流速0.8 mL/min；进样量10 μL。
1.2.3供试品溶液的制备称取供试品粉末（过四号筛）约0.1 g，置具塞锥形瓶中，加入75%甲醇25 mL，称质量，超声处理40 min（笔者前期分别考察了50%、60%、75%、100%甲醇作为提取溶剂进行超声提取，发现采用75%甲醇超声提取40 min条件下提取率高，因此本研究选用75%甲醇超声提取40 min作为提取条件），冷却后再称质量，用甲醇补足减失质量，摇匀，滤过。量取续滤液10 mL，置25 mL量瓶中，加75%甲醇至刻度，摇匀，经0.45 μm微孔滤膜滤过即得。
1.2.4对照溶液的制备称取各对照品适量，分别置于50 mL 棕色量瓶中，用适量75%甲醇溶液溶解并定容至刻度，分别制成含京尼平苷酸10.176 μg/mL、京尼平1-β-D龙胆二糖苷201.292 μg/mL、绿原酸4.444 μg/mL、栀子苷311610 μg/mL、西红花苷-Ⅰ175.276 μg/mL、西红花苷-Ⅱ17.371 μg/mL的1#对照品储备液，备用。
2结果与分析 2.1一测多评法的检测结果
2.1.1线性范围将1#混合对照品储备液，分别用75%甲醇稀释2、4、8、16、32、64倍，作为2#～7#混合对照品溶液，备用。按照上述色谱条件进行测定，进样10 μL，以进样量10 μL 中对照品质量为横坐标，最佳检测波长下的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得京尼平苷酸、京尼平1-β-D龙胆二糖苷、绿原酸、栀子苷、西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ的标准曲线。由表1可见，各化合物在相应范围内线性关系良好。
2.1.2相对校正因子的计算以栀子苷为内参物，分别计算京尼平苷酸、京尼平1-β-D龙胆二糖苷、绿原酸、西红花表1对照品质量与峰面积的线性关系
对照品名称标准曲线相关系数
（r）线性范围
（μg）京尼平苷酸京尼平1-β-
D龙胆二糖苷绿原酸栀子苷西红花苷-Ⅰ西红花苷-Ⅱ
y=1 610 765x-95y=1 144 290x-1 123y=4 025 629x+744y=1 859 824x+117y=7 633 873x+10 739y=8 706 055x-5760.999 90.999 90.999 70.999 90.999 90.999 90.001 59～0.101 760.031 45～2.012 920.000 69～0.044 440.048 68～3.116 100.027 38～1.752 760.002 71～0.173 71
苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ的相对校正因子。由表2可见，除绿原酸/栀子苷的RSD较大以外（原因可能是绿原酸含量较
低，峰面积小，检测误差大导致），其他对照品相对校正因子的RSD均小于1%。表2各对照品的相对校正因子编号f京尼平苷酸/栀子苷f京尼平1-β-D龙胆二糖苷/栀子苷f绿原酸/栀子苷f西红花苷-Ⅰ/栀子苷f西红花苷-Ⅱ/栀子苷1#1.153 91.624 60.461 10.243 90.213 52#1.163 01.632 20.459 50.241 30.214 43#1.152 71.633 40.435 30.241 70.214
14#1.156 91.625 60.435 80.242 10.215 65#1.167 91.635 60.447
00.244 00.213 76#1.179 41.628 20.442 00.246 70.211 87#1.154
01.636 90.536 00.244 70.210 0平均值1.161 11.630 90.459 50.243 50.213 3RSD0.84%0.30%7.68%0.78%0.86%
2.1.3精密度试验取2#混合对照品溶液10 μL，在上述色谱条件下连续进样5次，测定峰面积。结果表明，栀子苷、西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ、绿原酸、京尼平1-β-D龙胆二糖苷、京尼平苷酸的RSD分别为0.55%、0.50%、0.41%、048、0.49%、0.54%，表明仪器精密度良好。
2.1.4稳定性试验取2#混合对照品溶液，分别于样品制备后0、2、4、8、12、24 h进样10 μL，测峰面积。结果表明，栀子苷、西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅰ、绿原酸、京尼平1-β-D龙胆二糖苷、京尼平苷酸的RSD分别为1.21%、1.33%、097%、1.74%、1.51%、1.82%，表明供试品溶液在1 d内稳定。
2.1.5重复性试验取同一药材，按上述方法制成供试品溶
液5份，测峰面积。结果表明，栀子苷、西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ、绿原酸、京尼平1-β-D龙胆二糖苷、京尼平苷酸的RSD分别为1.36%、1.89%、0.59%、1.30%、0.77%、143%，表明该方法重复性良好。
2.1.6加样回收率试验称取已知含量的样品5份，加入 2 mL 混合对照品溶液，按照本研究方法制备供试品溶液，按照上述色谱条件进样10 μL，测定6种有效成分的峰面积，并计算平均加样回收率。结果表明，平均回收率分别为9932%、99.48%、99.19%、99.34%、99.51%、99.65%，表明该方法回收率较好。
2.2校正因子的重现性考察
2.2.1色谱柱及高效液相色谱仪考察取1#～7#混合对照品溶液，分别进样10 μL，计算京尼平苷酸、京尼平1-β-D 龙胆二糖苷、绿原酸、西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ的相对校正因子。并考察Waters 2695-2996、Agilent 1200、Agilent 1 260 等3种高效液相色谱系统和Promosil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）、Durashell C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）、Diamonsil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）等3种色谱柱下的相对校正因子。由表3中的RSD值可知，不同仪器及不同色谱柱下的相对校正因子差异并不明显。表3不同仪器和色谱柱条件下测得的相对校正因子
仪器色谱柱相对校正因子f京尼平苷酸/栀子苷f京尼平
1-β-D龙胆二糖苷/栀子苷f绿原酸/栀子苷f西红花苷-Ⅰ/栀子苷f西红花苷-Ⅱ/栀子苷Waters2695Durashell C181.161 11.630 90.459 50.243 50.213 3Promosil C181.157 81.612
40.450 30.240 60.216 6Diamonsil C181.160 41.643 70.463 90.246 20.210 9Agilent1200Durashell C181.159 01.628 30.472 70.239 10.215 1Agilent1260Durashell C181.158 41.632 10.441 20.242 20.214 7平均值1.159 31.629 50.457 50.242 30.214
1RSD0.12%0.69%2.66%1.13%1.00% 2.2.2不同试验
条件对比用同一色谱柱Durashell C18（46 mm×250 mm，5 μm），在2个实验室进行一测多评方法的试验。结果表明，除实验室1中绿原酸/栀子苷差异较大外，其他相对校正因子差异较小，RSD小于1.5%（表4）。表4不同试验条件下测得的校正因子
编号f京尼平苷酸/栀子苷f京尼平1-β-D龙胆二糖苷/栀子苷f绿原酸/栀子苷f西红花苷-Ⅰ/栀子苷f西红花苷-Ⅱ/栀子苷实验室1实验室2实验室1实验室2实验室1实验室2实验室1实验室2实验室1实验室21#1.153 91.143 91.624 61.611 60.461 10.453 10.243 90.252 10.213 50.209 12#1.163 01.149 51.632 21.620 10.459 50.454 50.241 30.251 40.214 40.205 63#1.152 71.146 61.633 41.617 70.435 30.458 10.241 70.258 30.214 10.211 14#1.156 91.147 11.625 61.614 30.435 80.457 00.242 10.257 00.215 60.206 85#1.167 91.143 31.635
61.616 50.447 00.456 30.244 00.257 30.213 70.208 66#1.179 41.145 01.628 21.618 40.442 00.459 20.246 70.250 80.211 80.210 27#1.154 01.143 61.636 91.617 20.536 00.452 70.244 70.254 90.210 00.213 5平均值1.161 11.145 61.630 91.616 50.459 50.455 80.243 50.254 50.213 30.209
2RSD0.84%0.20%0.30%0.17%7.68%0.55%0.78%1.22%0.86%
1.27%
2.2.3待测色谱峰定位对于其他待测指标成分峰的定位，普遍采用相对保留时间的定位方法，本试验利用峰的相对保留时间进行定位。试验发现，不同液相系统、色谱柱相对保留时间的RSD均小于5%（表5），由此可知，通过相对保留时间进行峰定位是可行的。表5不同仪器、色谱柱下的相对校正因子
仪器色谱柱相对校正因子r京尼平苷酸/栀子苷r京尼平1-β-D龙胆二糖苷/栀子苷r绿原酸/栀子苷r西红花苷-Ⅰ/栀子苷r西红花苷-Ⅱ/栀子苷Waters2695Durashell C180.378 20.771 60.831 11.609 31.756 8Promosil C180.360 30.803
20.880 91.620 61.798 9Diamonsil C180.374 40.799 70.858 31.647 31.813 1Agilent1200Durashell C180.364 30.755 30.806 91.552 81.706 2Agilent1260Durashell C180.367 40.756 30.845 61.678 21.902 4Mean0.3689 20.777 220.8445 61.621 641.795 4RSD1.98%2.97%3.30%2.88%4.06%
2.3一测多评法与回归方程法测定结果的比较
按照供试品溶液处理方法制备了12批栀子药材样品，分别吸取各供试品溶液10 μL注入高效液相色谱仪测定。分别采用回归方程法和一测多评法测定栀子药材中京尼平苷酸、京尼平1-β-D龙胆二糖苷、绿原酸、栀子苷、西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ含量，结果见表6。对2种方法所测含量值进行了t检验，结果显示，2种方法所得栀子药材含量不存在显著差异（P>0. 05），且2种方法所得的含量值偏差都在3%以内，说明一测多评法用于栀子药材的多成分质量评价是可行的。表6一测多评法和回归方程法测得栀子药材中各组分含量比较
样品
编号组分含量（μg/g）京尼平苷酸京尼平1-β-D龙胆二糖苷绿原酸西红花苷-Ⅰ西红花苷-Ⅱ回归方程法QAMS回归方程法QAMS回归方程法QAMS回归方程法QAMS回归方程法QAMS13 408.83 424.06 467.86 428.0715.1695.88 513.58 596.2964.3958.622 608.82 619.56 676.46
637.3805.1781.97 700.57 783.6829.0823.53245.5243.13 596.53 547.0140.5145.610 306.510 387.81 109.11 103.14225.4222.94 739.64 693.9141.4146.510 410.510 491.81 647.11
640.35211.0208.54 903.44 858.198.4105.39 910.49 991.91 614.01 607.26375.3373.76 164.06 123.1107.8114.311 041.311
122.31 610.31 603.67279.4277.38 351.68 318.31 020.1987.911 916.911 997.8904.8899.28395.5393.98 766.08
733.5150.9155.57 661.87 744.61 652.91 646.19660.8660.77 299.77 261.7150.4155.05 670.35 754.01 143.51
137.410262.9260.74 386.04 339.1103.3110.07 788.57
871.4913.3907.611300.6298.63 966.73 918.5492.9483.010 502.310 583.81 314.71 308.412232.3229.94 400.34
353.535.945.48 309.28 392.0917.9912.3 3讨论栀子具有泻火除烦、清热利湿、凉血解毒等功效。栀子果实的化学成分主要包括环烯醚萜苷类、二萜类（西红花苷类）、有机酸酯类及其他类化学成分[6]。其中栀子苷具有抗炎、解热、利胆、轻泻作用；京尼平苷酸具有抗肿瘤和抗氧化作
用；有文献报道，京尼平1-β-D龙胆二糖苷能改善戊巴比妥钠引起的心力衰竭；绿原酸为栀子中主要有机酸酯类成分，具有显著的抗癌作用及保肝利胆作用；西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ是西红花、栀子中共有的色素类成分，具有去黄疸、利胆及明显的降血脂作用[7]。本研究通过一测多评的分析方法对栀子药材中6种成分进行测定，为栀子药材中活性成分的多成分、多指标质量控制提供了新模式。
环烯醚萜类化合物是已知栀子药材中的有效成分，238 nm 为京尼平苷酸、栀子苷、京尼平1-β-D龙胆二糖苷的最
大吸收波长，330 nm为酚酸类物质绿原酸常用检测波长，440 nm为西红花苷类化合物西红花苷-Ⅰ和西红花苷-Ⅱ最佳检
测波长，因此选用238、330、440 nm为检测上述6种成分的波长。
通过比较一测多评法和传统回归方程法所得栀子6种成分含量值，发现两者之间并没有显著差异，且不同实验室、仪器、色谱柱下各有效成分间的校正因子重现性良好，说明在对照品不足的情况下，将一测多评用于栀子中药材多指标质量评价与质量控制是可行的，该方法具有一定的发展前景。
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醚菌酯50%WDG检测项目 样品名称: ROSIM(Kresoxim-methyl 50%WG) 一、有效含量测定 1.仪器条件 流动相：（甲醇：水）=85:15；流速：1mL/min；柱温：室温；检测波长：245nm；进样量：5uL 2.测定步骤 2.1 标样溶液的配制 准确称取醚菌酯标样0.05g（精确至0.0002g），置于100mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，经超声波振荡15min后，经0.45um滤膜过滤，备用。2.2 试样溶液的配制 准确称取50%醚菌酯WG 0.05g（精确至0.0002g），置于100mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，经超声波振荡15min后，经0.45um滤膜过滤，备用。 2.3 测定 在上述操作条件下，待仪器基线稳定后，连续注入数针标样溶液，待相邻两针醚菌酯峰面积的相对变化小于 1.5%，按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进行测定。 3.计算 将测得的两针试样溶液以及试样前后两针标样溶液中醚菌酯的峰面积分别进行平均，醚菌酯的质量分数为X1，按式（1）计算： (1) 式中 A1——标样溶液中，醚菌酯峰面积的平均值； A2——试样溶液中，醚菌酯峰面积的平均值； m1——醚菌酯标样的质量，g； m2——试样的质量，g； P ——标样中醚菌酯的质量分数，%。 4.结果 标样称取质量：0.0572g，含量为98.16% 试样称取质量：0.0543g
经计算，标样浓度为561.5ppm，有效含量为50.16% 5.色谱图 标样色谱图1 标样色谱图2 试样色谱图1 试样色谱图2
乙酰甲胺磷75%SP检测项目 二、有效含量测定 6.仪器条件 进样口：180℃，升温程序：80℃、1min，以20℃/min升至220℃，保持2min，检测器：280℃，进样量：1μL，N2：1.5mL/min，H2：100mL/min，空气：100mL/min，尾吹：40mL/min。 7.测定步骤 2.1 标样溶液的配制 准确称取乙酰甲胺磷标样0.05g（精确至0.0002g），置于100mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，经超声波振荡15min，移取1mL定容至20mL，超声后经0.45um滤膜过滤，备用。(25 ppm) 2.2 试样溶液的配制 分别准确称取75%乙酰甲胺磷SP 0.05g（精确至0.0002g），置于100mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，经超声波振荡15min，移取1mL定容至20mL，超声后经0.45um滤膜过滤，备用。 2.3 测定 在上述操作条件下，待仪器基线稳定后，连续注入数针标样溶液，待相邻两针醚菌酯峰面积的相对变化小于 1.5%，按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进行测定。 8.计算 将测得的两针试样溶液以及试样前后两针标样溶液中乙酰甲胺磷的峰面积分别进行平均，乙酰甲胺磷的质量分数为X1，按式（1）计算： 式中 A1——标样溶液中，乙酰甲胺磷峰面积的平均值； A2——试样溶液中，乙酰甲胺磷峰面积的平均值； m1——乙酰甲胺磷标样的质量，g； m2——试样的质量，g； P ——标样中乙酰甲胺磷的质量分数，%。 9.结果
一测多评法在中药材含量测定中应用进展 摘要：影响中药材质量因素很多，导致市场上中药材质量控制困难，目前仅凭单一成分评价中药材质量过于片面，不能很好反应中药材质量优良。一测多评法以中药材本身具有成分为内参物，同时测定多种成分，可以很好反应中药材质量。笔者结合近年一测多评法在中药材中应用实例进行探讨，为中药材质量控制提供参考。 关键词：中药材，含量测定，一测多评 影响中药材质量的因素很多，有不同产地、不同炮制加工方法、不同储藏方式等[1]。因此，目前中药材市场药材质量良莠不齐，直接影响中医临床辨证施治的治疗效果。现阶段中药标准多用单一成分含量高低来反应中药材质量，但中药材成分复杂多样，作用机制模糊，大多靠几种成分协同发挥药效，这样仅以一种成分含量无法全面反映中药质量。但如果以传统测定方法同时测中药材中几种成分不但面临对照品难得，检验周期长，还耗能、耗时。2006年王智民等[2]首次提出一测多评法（quantitative analysis of multi-components by single-marker，QAMS），该通过中药有效成分间存在的内在函数关系和比例关系法，测定一个成分（对照品易得、价廉、有效者）实现多个成分（对照品难以得到或难供应者）同步测定。不仅解决了中药多成分定量和多指标质量控制中存在的对照品缺乏问题，同时实现多指标同步质量控制反映中药质量。该法提出后得到业内学者广泛认可和应用，并于2010版《中国药典（一部）》收载。现就一测多评法原理及应用进展进行概述，并对存在的问题和发展前景进行探讨，为中药质量控制提供参考依据。 1一测多评概念与原理 研究思路起源于内标法、校正因子法、主成分自身对照法以及紫外百分吸收系数法等几个概念。在一定线性范围内，成分的量（质量或浓度）与检测器响应成正比的原理，在多指标质量评价时，引入相对校正因子的概念，以样品中某一典型成分( 有对照品供应者、价廉、有活性) 为内标，根据中药有效成分间存在的内在函数关系和比例关系，建立该成分与其他成分之间的相对校正因子(relative correction factor,RCF)，通过RCF计算其他成分的含量。这种测定一个成分，实现对多个成分定量的方法命名为“一测多评”法。 具体表现为，在多指标（s,a,b,.....,i,......）质量评价时，以药材（或成药）中某个典型有效成分作为内参物（s），建立内参物与其他待测成分（a,b,.....,i,......）之间的相对校正因子（RCF，f sa,f sb,f sc,......）按计算公式：f si=f s/f i=(A s/C s)/(A i/C i)=(A s·C i)/(A i·C s)，式中A s 为内参物峰面积，A i为其他组分峰面积，C s内参物浓度，C i为其他组分浓度。在方法学建立时，需要准备待测组分及所选内参物的对照品，求出内参物与个待测组分见的RCF，并把它作为常数用于以后的含量测定计算中[3]。含量测定过程中，只需准备内参物的对照品，因而内参物（s）浓度可按常规方法进行测定，应用RCF，结合内参物实测值计算待测组分浓度（C i）。 2 一测多评法应用 2.1 黄酮类内参物的建立 李倩等[4]建立一测多评法同时测定16批丹参中以丹参酮II A与丹参酮I、二氢丹参酮I、隐丹参酮4种指标成分的相对校正因子，计算丹参酮I、二氢丹参酮I、隐丹参酮含量实现一测多评，同时用外标法验证该方法在丹参药材中应用的准确性和可行性。结果表明，采用校正因子计算的含量值与外标法实测值之间无显著差异。范玲等[5]以大黄素为内参物测定虎
万方数据
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"一测多评"法在中药质量控制中的研究进展 作者：张红伟， 张振凌 作者单位：张红伟(河南省信阳市食品药品检验所,信阳,464000)， 张振凌(河南中医学院,郑州 ,450008) 刊名： 海峡药学 英文刊名：STRAIT PHARMACEUTICAL JOURNAL 年，卷(期)：2010,22(11) 参考文献(10条) 1.王跃生;饶毅;魏惠珍HPLC-"内标"多控法测定四逆散中芍药苷、柚皮苷、橙皮苷、甘草酸和新橙皮苷[期刊论文] -中草药 2008(09) 2.邹桂欣;尤献民;张颖一测多评法在冠脉康胶囊多种成分检测中的应用研究[期刊论文]-中国中药杂志 2008(15) 3.朱晶晶;王智民;张启伟一测多评法同时测定黄芩药材中4种黄酮类成分的含量[期刊论文]-中国中药杂志 2009(24) 4.宋亚芳;王智民;朱晶晶一测多评法测定吴茱萸中吴茱萸内酯、吴茱萸碱及吴茱萸次碱的含量[期刊论文]-中国中药杂志 2009(21) 5.匡艳辉;朱晶晶;王智民一测多评法测定黄连中小檗碱、巴马汀、黄连碱、表小檗碱、药根碱含量[期刊论文]-中国药学杂志 2009(05) 6.谢元超;金少鸿替代对照品法用于丹参和复方丹参片含量测定的研究[期刊论文]-药物分析杂志 2007(04) 7.朱晶晶;王智民;匡艳辉一测多评法同步测定人参和三七药材中多种人参皂苷的含量[期刊论文]-药学学报 2008(12) 8.黄信;郑阳;曾泽玉HPLC校正因子法测定牛蒡子提取物中总木脂素含量[期刊论文]-成都中医药大学学报 2005(04) 9.国家药典委员会中国药典.一部 2010 10.王智民;高慧敏;付雪涛"一测多评"法中药质量评价模式方法学研究[期刊论文]-中国中药杂志 2006(23) 本文链接：https://www.doczj.com/doc/f34960058.html,/Periodical_haixyx201011039.aspx
实验2 高效液相色谱法测定栀子药材中栀子苷的含量 学时分配：6学时 实验目的和要求 1.掌握高效液相色谱法的基本原理及操作步骤； 2.熟悉高效液相色谱法在中草药有效成分测定中的应用。 实验原理 高效液相色谱法是用高压输液泵将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相，泵入装有固定相的色谱柱，经进样阀注入供试品，由流动相带入色谱柱，在柱内各组分被分离后,依次进入检测器，色谱信号由记录仪或积分仪记录。 所用的仪器为高效液相色谱仪。色谱柱的填充剂和流动相的组分应按待测组分的性质而定，常用的色谱柱填充剂有硅胶和化学键合硅胶，后者以十八烷基键合硅胶最为常用，辛基硅烷键合硅胶次之，氰基或氨基键合硅胶也有使用。除另有规定外，柱温为室温，检测器有紫外检测器，二极管阵列检测器，示差折光检测器等。 影响色谱分离效率有两大主要因素，其一为热力学因素, 如不同组分容量因子(K’)，其二是动力学因素, 如色谱峰的展宽。反映这些物理过程的指标是保留时间和理论塔板数(N)。 其中K’=t R-t o / t o ；n = 5.54(t R / W1/2)2 密切注视和努力解决这两个因素引起的矛盾，组分间的分离就成功了，分离的表现指标是分离度“R”。 R = 2 (t2 - t1) / (W b1+W b2) 实验条件 1.仪器：高效液相色谱仪，超声波清洗器，Zorbax C18柱（4.6×250mm）。 2.试剂：栀子苷对照品，乙睛，甲醇，水。 实验内容 1.色谱条件：色谱柱：Zorbax C18柱（4.6×250mm）；流动相：乙睛—水（15:85）；检测波长：238nm，流速：1mL/min。 2.对照品溶液的制备和标准曲线的绘制：精密称取栀子苷对照品适量，加甲
摘要 中药以其独特的理论体系为我国民众的健康、为民族医药的发展做出了不可磨灭的贡献。随着相关科学技术的发展，测定中药有效成分含量的方法得到了改进，本文综述了中成药国内外情况和常用的中成药有效成分含量测定方法。重点介绍薄层扫描法(TLCS)，薄层扫描法将以其高效优势和多种检测方法在中成药有效成分含量测定的研究中发挥重要作用。展望中成药中有效成分含量测定的未来。 关键词：中成药，有效成分，含量测定，薄层扫描法，发展 目录 一、中成药在国内外情况 5 （一）国外中成药情况 5 （二）国内中成药情况 5 二、中成药有效成分含量测定检测方法 6 （一）化学定量法 6 （二）比色法 6 （三）紫外分光光度法 6 （四）红外光谱法7 （五）柱层析或纸层析一紫外分光光度法7 （六）气相色谱法7 （七）薄层扫描法7 （八）高效液相色谱法7 三、薄层扫描法。8 （一）薄层扫描法原理和特点8 （二）中成药中黄芩的功效和测定分析方法8 （三）测定中成药中黄芩含量实验8 四、中成药有效成分含量测定的发展9 五、结束语9 六、参考文献9 引言 中药是我国传统防治疾病的重要武器，千百年来，在我国人民的健康生活中发挥着重大的作用。随着现代科学技术的发展，传统中药也面临着现代化的问题。近年来，全世界对中药的认识也逐渐加深，开始重视，这表明中药国际市场的快速发展时期已经来临。当前，中药要进入世界市场，实现中药现代化，首当其冲是其质量的控制，而含量测定是质量控制最关键的部分。中成药在剂型、品种、产量及应用范围等方面均有迅速的发展。1985年版《中国药典》中收载达207个，为使中成药的内在质量具有客观的评价方法,逐步制订切实可行的质量指标,我国药学工作者在这方面做了不少工作，到2010年版《中国药典》中共收载中成药标准1069个品种，新增各项鉴别2165项，其中显微鉴别259项、簿层色谱鉴别1818项、液相色谱鉴别25项、气相色谱鉴别9项等，2010年版《中国药典》大幅度增加收载品种和检测项目，能多药物多成分检测，更标准科学有效等等。
实验研究 CHINESE COMMUNITY DOCTORS 中国社区医师2018年第34卷第18期 桂枝加芍药汤出自《伤寒论》，常用于施治脾阴亏损、肠道失润所致便秘、腹胀满、口唇干燥的老年习惯性便秘患者[1]。本方由桂枝、白芍、生姜、大枣、炙甘草组成。方中重用阴柔之芍药滋养脾阴，复用味甘之炙甘草、大枣佐芍药补益脾阴[2]。方中用桂枝、生姜等阳药是为脾阴不足、运化失职、气机壅遏所致之腹胀满而设。如此配伍，动静结合，共奏滋养脾阴、调畅气机之功，则斯症愈矣。桂枝加芍药汤作为中药传统经典方已经经过了长期的临床使用，不仅具有疗效确切以及不良反应较少的优势，而且来源于传统，更突出了中医药特色。但是通过检索文献发现，未能检索到对桂枝加芍药汤质量控制的方法。桂枝加芍汤中活性成分复杂多样，为弥补质量评价的不足，本实验采用高效液相色谱法建立了桂枝加芍汤颗粒的指纹图谱，并同时对其中3种活性成分进行控制，从而为深入研究桂枝加芍汤颗粒的药效物质基础、配伍基础提供了有效的分析手段，为经典名方的开发 提供参考依据。 材料 仪器：岛津高效液相色谱仪(LC-2010A)，KQ-3000DB 超声波清洗仪(昆山市超声仪器有限公司)；Mettler Toledo AL104电子天平(瑞士梅特勒-托利多公司，精度：0.001g)，Mettler Toledo XP26电子天平(瑞士梅特勒-托利多公司，精密度：0.01mg)。 试药：乙腈(色谱纯，4L/瓶飞世尔批号：146971)，水为屈臣氏蒸馏水(4.5L/瓶，广州屈臣氏食品饮料有限公司北京饮料分公司)，磷酸为分析纯(500mL/瓶，国药集团化学试剂有限公司，批号：20141104)。桂枝加芍药汤颗粒由北京康仁堂药业有限公司自制 [3-5] ；芍药苷对照 品(批号：110736-201640，购于中国食品药品检定研究院)；甘草苷(批号：111610-201106购于中国食品药品检定研究院)；甘草酸铵对照品(批号：110731-201116，购于中国食品药品检定研究院)。 方法与结果 色谱条件：①色谱柱：美国安捷伦科技有限公司Agilent C18(4.6mm×250mm，5μm)；检测波长267nm ，流速1mL/min；②柱温：25℃；进样量10μL；③流动相：乙腈(A)-0.1%磷酸(B)采用下表梯度洗脱[6]。见表1，进样量10μL，色谱图，见图1。 供试品溶液的制备：取桂枝加芍药汤颗粒约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加蒸馏水50mL，称定重量，超声处理15min，使溶解，放冷，再称定重量，用蒸馏水补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 阴性样品制备：制备缺白芍、缺炙甘草阴性样品，按供试品溶液制备方法 桂枝加芍药汤颗粒指纹图谱及多指标成分含量测定方法研究 李明1李蕊2张佳诺1付静2 100000北京中医药大学东直门医院1100000北京康仁堂药业有限公司2 doi:10.3969/j.issn.1007-614x.2018.18.002摘 要 目的：探讨桂枝加芍药汤颗粒指纹图谱及多指标成分含量测定方法。方法：采用岛津高效液相色谱仪 (LC-2010A)，以乙腈-0.1%磷酸为流动相进行梯度洗脱，对标志性成分进行测定。结果：建立了桂枝加芍药汤指纹图谱、标定了5个共有峰，指认其中3个峰并对其进行含量测定。结论：本研究所建立的指纹图谱及多指标含量测定方法能较好地评价桂枝加芍药汤颗粒的质量，并可提高该制剂的质量标准，为保证产品质量奠定基础。关键词桂枝加芍药汤；HPLC 指纹图谱；芍药苷 Study on the fingerprint and determination method of multi index component content of Guizhi and Shaoyao decoction granule Li Ming 1,Li Rui 2,Zhang Jianuo 1,Fu Jing 2 Dongzhimen Hospital of Beijing University of Chinese Medicine 1000001Beijing Kangrentang Pharmaceutical Limited Company 1000002 Abstract Objective:To explore the fingerprint and determination method of multi index component content of Guizhi and Shaoyao decoction granule.Methods:The Daojin high performance liquid chromatograph(LC-2010A)was used,gradient elution was carried out with acetonitrile-0.1%phosphoric acid as the mobile phase,we measured the markers.Results:We had established the fingerprint of Guizhi and Shaoyao decoction,calibrated 5common peaks,and identified three peaks and measured them.Conclusion:The fingerprint and multi index determination method established in this study can better evaluate the quality of Guizhi and Shaoyao decoction granule.It can improve the quality standard of the preparation and guarantee the quality of the product.Key words Guizhi and Shaoyao decoction;HPLC fingerprint;Paeoniflorin 7
?学术探讨? “一测多评”法中药质量评价模式方法学研究 王智民3 ,高慧敏,付雪涛,王维皓 (中国中医科学院中药研究所,北京100700) [摘要] 目的:建立适合于中药特点的利用1个对照品同步测定多成分的分析方法,并建立其方法学的考察 模式。方法:以木通为研究对象,以药材中典型成分皂苷P J1(saponin P J1)为指标,建立该成分与其他成分白木通皂苷B 和白木通皂苷C (mut ongsaponin B 和C )间的相对校正因子,测定saponin P J1的含量,用校正因子计算mut ong 2 saponin B 和C 的含量;同时采用外标法实测药材中3种成分的绝对含量;采用夹角余弦法对一测多评法的计算值 与外标法实测值进行比较,评价一测多评法的准确性和科学性。结果:建立了一测多评法方法学的考察模式;方法准确性评价结果表明一测多评法的计算值与外标法实测值之间没有显著性差异,实验所得的校正因子可信。结论:一测多评的研究思路在木通药材中得到验证,有望成为适合中药特点的多指标质量评价新模式。 [关键词] 一测多评;HP LC;木通;校正因子 [中图分类号]R 284.1 [文献标识码]A [文章编号]100125302(2006)2321925205 [收稿日期] 2006209208 [通讯作者] 3王智民,Tel:(010)84014128,E 2mail:zhmw123@https://www.doczj.com/doc/f34960058.html, 中药质量控制和评价是中药现代化的瓶颈,中药多成分的复杂性决定了单一成分或指标评价难以表达中药的质量,并由此提出多成分质量控制的模式;多指标的质量评价模式,必需有足够量的化学对照品,由于中药化学对照品分离难度大或单体不稳定难以供应或供应价格高等因素,致使对照品的供应和使用力不从心。鉴于目前单成分质量控制尚缺乏对照品供应,更不用说多指标成分的质量控制模式,该模式也仅限于科研,难以应用到实际质量监督和评价中。故有人提出增加指纹图谱进行质量控制的模式,但指纹图谱的模糊性特点决定了其在实际生产、监督中应用的难度和“难以说清楚”的局面。 那么能否通过中药有效成分间存在的内在函数关系和比例关系,仅测定1个成分(对照品可以得到者),来实现多个成分(对照品没有或难以供应)的同步监控,这是“一测多评”的基本设计思想。作者以木通药材为例,采用一测多评模式对其中3种皂苷类成分进行同步测定,对一测多评方法的技术适用性和应用可行性进行了探索和评价。 1 仪器与试药 W aters2695-2996高效液相系统,E mpower 工作站(W a 2ters 公司);Agilent 1100高效液相系统,白木通皂苷B (mu 2t ongsaponin B ),皂苷P J1(saponin P J1)和白木通皂苷C (mu 2t ongsaponin C )对照品由本实验室分离纯化并鉴定结构(图1),HP LC (面积归一化法)纯度>98%。白木通药材采自四 川,经本所生药室何希荣主管技师鉴定为白木通A kebia trifo 2 liata (Thunb .)Koidz .var .australis (D iels )Rehd 的干燥藤 茎,其他样品由本所生药室郝近大研究员鉴定提供。甲醇为色谱纯,水为高纯水,其余试剂均为分析纯 。 图1 对照品白木通皂苷B,皂苷P J1和白木通皂苷C 2 方法与结果2.1 方法原理 在一定的范围内(线性范围内)成分的量(质量或浓度)与检测器响应成正比,即:W =f A [123]。在多指标质量评价时,以药材中某一典型组分(有对照品供应者)为内标,建立该组分与其他组分之间的相对校正因子,通过校正因子计算其他组分的含量。这种测定一个成分,实现对多个成分定量的方法命名为一测多评法。 假设某样品中含有i 个组分 W i A i =f i (i =1,2,…,k ,…,m ) ① 式中A i 为组分峰面积;W i 为组分浓度。 选取其中一组分k 为内标,建立组分k 与其他组分m 之
高效液相色谱法测定栀子药材中栀子苷的含量 实验目的和要求 1.掌握高效液相色谱法的基本原理及操作步骤； 2.熟悉高效液相色谱法在中草药有效成分测定中的应用。 实验原理 高效液相色谱法是用高压输液泵将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相，泵入装有固定相的色谱柱，经进样阀注入供试品，由流动相带入色谱柱，在柱内各组分被分离后,依次进入检测器，色谱信号由记录仪或积分仪记录。 所用的仪器为高效液相色谱仪。色谱柱的填充剂和流动相的组分应按待测组分的性质而定，常用的色谱柱填充剂有硅胶和化学键合硅胶，后者以十八烷基键合硅胶最为常用，辛基硅烷键合硅胶次之，氰基或氨基键合硅胶也有使用。除另有规定外，柱温为室温，检测器有紫外检测器，二极管阵列检测器，示差折光检测器等。 影响色谱分离效率有两大主要因素，其一为热力学因素, 如不同组分容量因子(K’)，其二是动力学因素, 如色谱峰的展宽。反映这些物理过程的指标是保留时间和理论塔板数(N)。 其中K’=t R-t o / t o ；n = 5.54(t R / W1/2)2 密切注视和努力解决这两个因素引起的矛盾，组分间的分离就成功了，分离的表 现指标是分离度“R”。 R = 2 (t2 - t1) / (W b1+W b2) 实验条件 1.仪器：高效液相色谱仪，超声波清洗器，Zorbax C18柱（4.6×250mm）。 2.试剂：栀子苷对照品，乙睛，甲醇，水。 实验内容 1.色谱条件：色谱柱：Zorbax C18柱（4.6×250mm）；流动相：乙睛—水（15:85）；检测波长：238nm，流速：1mL/min。 2.对照品溶液的制备和标准曲线的绘制：精密称取栀子苷对照品适量，加甲醇制成每1mL含100μg的溶液，摇匀后，分别取该液1，2，3，4，5mL，置10mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀后，分别进样20μl，按上述色谱条件测定，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线，计算回归方程和相关系数。 3.供试品溶液的制备：取本品粉末0.1g，精密称定，置25mL量瓶中，精密加入甲醇20mL，超声处理30min s。放冷，加甲醇至刻度，摇匀，滤过。精密量取续滤液5mL，置25mL
一测多评法同时测定补骨脂主要化学成分 中药补骨脂，为豆科植物补骨脂（Psoralea corylifolia L.）干燥成熟果实。其性温、味辛，具有补肾助阳，温中止泻，纳气平喘之功。其中主要活性成分补骨脂素（psoralen）和异补骨脂素（isopsoralen）等香豆素类成分，具有较强的光敏化作用和镇静、解痉、止血等作用[1-2]，是治疗白癜风、斑秃、牛皮癣以及瘤样皮肤病的有效药物。近来研究表明，补骨脂素对多种动物及人的肿瘤生长有明显抑制作用[3-4]。 1实验方法 1.1色谱条件色谱柱：Puros pher○RSTAR LP RP-18 endcapped（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为乙腈-水，梯度洗脱程序；流速1.0 mL/min；检测波长250 nm；进样量10 μL；柱温30℃。 1.2对照品溶液的制备分别精密称取补骨脂素、异补骨脂素、异补骨脂二氢黄酮、新补骨脂异黄酮、补骨脂二氢黄酮、补骨脂宁、Broussochalcone B、補骨脂定、补骨脂二氢黄酮甲醚、异补骨脂查尔酮和Corylifol A适量，置同一棕色10 mL容量瓶中，加甲醇溶解至刻度，摇匀，制成浓度分别为0.3000 mg/mL、0.3500 mg/mL、0.3000 mg/mL、0.2700 mg/mL、0.3000 mg/mL、0.1200 mg/mL、0.2000 mg/mL、0.2500 mg/mL、0.4500 mg/mL、0.3600 mg/mL和0.2000 mg/mL的混合对照品溶液。于4℃保存备用。 1.3供试品溶液的制备取补骨脂生品粗粉（过60目筛）各约0.1 g，精密称定，置圆底烧瓶中，加甲醇50 mL，加热回流2 h，放冷，滤过，滤液置100 mL 蒸发皿中，在水浴锅上蒸至有少量滤液残留即可，用甲醇将蒸发皿中残留的滤液和残渣完全转移至10 mL容量瓶中，摇匀，过0.45 μm微孔滤膜作为供试品溶液。于4℃保存备用。 2方法学考察 2.1线性关系考察取2.2项下的混合对照品溶液，精确稀释2倍、4倍、8倍、16倍和32倍。精密吸取以上6份混合对照品溶液各10 μL注入高效液相色谱仪，测定。以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程，结果R>0.999，线性良好。 2.2精密度试验精密吸取2.2项下的混合对照品溶液5 μL连续进样6次，记录补骨脂各主要成分的峰面积积分值，计算RSD，结果精密度各成分峰面积的RSD≤2.92%，表明仪器精密度良好。 2.3稳定性及重复性试验取生品供试品溶液分别在0，2，4，6，8，10，12 h进样，测定补骨脂素、异补骨脂素、新补骨脂异黄酮、补骨脂二氢黄酮、补骨脂宁、Broussochalcone B、补骨脂定、补骨脂二氢黄酮甲醚、异补骨脂查尔酮、
水蒸气法-GC-MS分析栀子花香气成分 文昊1，吴昊天1，黄海洋2 （1．后勤工程学院研究生管理大队2．南京军区大埕湾训练基地司令部训练保障科） 摘要采用水蒸汽法-GC-MS气质联用仪器对后勤工程学院校园的栀子花香气成分进行了分析，得到了11种香气成分，经过数据库对比和资料对比，鉴定出9种成分分别为反式-1，2-二己烯，顺-3-正己醇，月桂烯，甲酸辛酯，2-甲基丁酸顺式-3-己烯酯，惕各酸顺-3-己烯酯，β -金合欢烯，τ-杜松烯，十二烷。 关键词栀子花；气质联用；水蒸汽；GC-MS 栀子花，又名栀子、黄栀子，为茜草目、茜草科栀子属植物，培育容易，花白香浓，是我国八大香花之一。其植物精油由于其独特的药用和香料价值，有着“液体黄金”之称。栀子花精油可用于多种花香型化学品，香皂香精以及实现香气调配。随着香料香精工业的迅猛发展，研究栀子花香气成分、栀子花精油提取有着越来越重要的意义。 目前对栀子花香气成分的研究以超临界CO2萃取、微波萃取、循环蒸馏法等方法为主。不同研究者得出的研究报告有时差异很大，其原因可能是方法、原料、产地不同所致，最多鉴定的化合物达86种[1]，但其主要类型和成分都差不多。其中超临界CO2萃取是利用超临界流体(SCF)分子兼有气、液两种流体的传递特点，将目标物提取出来后，溶剂很容易变成气体，如此得到的目标物纯度和含量都较高；微波萃取是一种利用不同物质在吸收微波能力的差异，选择性加热萃取体系中的某些组分，从而使得被萃取物质从体系中分离，进入到介电常数较小、微波吸收能力相对差的萃取剂中的新方法[2]。循环蒸馏法[3]一般是事先将植物茎叶花朵等剪碎，压制取汁。循环蒸馏有两种方式：一是将植物浸在水中，加热产生水蒸汽使之成分一起带出；一是将植物浸在水蒸汽中，循环带出。研究显示，第二种方法能较好的保存植物中有效成分。还有利用顶空套袋吸附的方法[1+]，即在特制的套袋内加入吸附剂，一般是活性炭等，然后将套袋套置于活体鲜花上，靠吸附剂吸附鲜花散发的香气成分，最后再利用高温使之脱附，进行检验。 为研究学院栀子花香气成分，采用的是蒸馏法提取栀子花香气成分，并通过GC-MS对蒸馏物做了检测。 一、实验部分 （一）原料 实验所用栀子花来源于后勤工程学院校园（重庆）的成熟期花朵（完全绽放，纯白无杂黄色）。 （二）香气成分提取 栀子花香气成分的提取实验采用的是水蒸汽蒸馏的方法，装置如图1所示。实验分两步进行，首先将采集的栀子花剪碎，置于冰箱（4℃）纯水浸泡24 小时之后，共沸蒸馏， 收集烧瓶放置于冰水浴中，以减少香气成分挥发；收集馏出 液。 对馏出液的处理采用以下2种方式：一是在分液漏斗中静置分层，取油层进行分析，记为样品1；二是加入等体积石油醚混合，振荡，在分液漏斗中静置分层，取油层分析，记为样品2。 文昊，1990-，男，硕士研究生，主要从事新型润滑材料研究，Email: wenhaosc@https://www.doczj.com/doc/f34960058.html, 图1 香气提取装置图
栀子炮制前后7种成分的比较研究 邵坚，罗光明*，朱继孝，张忠立，张兰，董艳凯，魏春华 江西中医药大学，江西南昌 330004 摘要：目的比较栀子Gardenia jasminoides全果、果仁、果皮中7种成分炮制前后的变化。方法利用HPLC/DAD对栀子全果、果仁、果皮生品及其炮制品中京尼平苷酸、去乙酰车叶草酸甲酯、京尼平龙胆二糖苷、栀子苷、绿原酸、西红花苷I和西红花苷II进行定量分析。结果栀子果皮中绿原酸和去乙酰车叶草酸甲酯的量较高，栀子果仁中京尼平龙胆二糖苷、栀子苷、西红花苷I和西红花苷II的量较高。栀子经过炮制后除京尼平苷酸的量升高外，京尼平龙胆二糖苷的量变化不大，去乙酰车叶草酸甲酯、栀子苷、绿原酸、西红花苷I和西红花苷II的量有所下降。结论栀子果仁、果皮中去乙酰车叶草酸甲酯、京尼平龙胆二糖苷、栀子苷、绿原酸、西红花苷I和西红花苷II的量分布存在差异；炮制可降低栀子中大多数有效成分的量，升高栀子中京尼平苷酸的量。 关键词：栀子全果；栀子果仁；栀子果皮；炮制；京尼平苷酸；去乙酰车叶草酸甲酯；京尼平龙胆二糖苷；栀子苷；绿原酸；西红花苷I；西红花苷II 中图分类号：R283.1；R286.02 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2015)11 - 1629 - 05 DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2015.11.012 Comparison on seven kind of ingredients in Gardeniae Fructus before and after processing SHAO Jian, LUO Guang-ming, ZHU Ji-xiao, ZHANG Zhong-li, ZHANG Lan, DONG Yan-kai, WEI Chun-hua Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine, Nanchang 330004, China Abstract:Objective To compare the changes of seven kinds of compounds in the fruits, seeds, and peels of Gardeniae Fructus. Methods Quantitative analysis of geniposidic acid, deacetyl asperulosidic acid methyl ester, genipin-1-gentiobioside, geniposide, chlorogenic acid, crocin I, and crocin II in the fruits, seeds, and peels of Gardeniae Fructus with rocessed and no processed, were firstly carried out by HPLC/DAD. Results The conents of deacetyl asperulosidic acid methyl ester and chlorogenic acid were higher in the peels of Gardeniae Fructus. The conents of genipin-1-gentiobioside, geniposide, crocin I, and crocin II were higher in the seeds of Gardeniae Fructus. Geniposidic acid content was increased in turn, the content of deacetyl asperulosidic acid methyl ester, geniposide, chlorogenic acid, crocin I, and crocin II were reduced in turn and genipin-1-gentiobioside contents were not changed from crude, stir-fired, and stir-baked products. Conclusion The contents of eacetyl asperulosidic acid methyl ester, genipin-1-gentiobioside, geniposide, chlorogenic acid, crocin I, and crocin II between the seeds and peels of Gardeniae Fructus exist differences. The main ingredients of Gardeniae Fructus are decreased after processing except the increasing of geniposidic acid. Key words: fruits of Gardeniae Fructus; peels of Gardeniae Fructus; seeds of Gardeniae Fructus; processing products; geniposidic acid; deacetyl asperulosidic acid methyl ester; genipin-1-gentiobioside; geniposide; chlorogenic acid; crocin I; crocin II 栀子Gardeniae Fructus为茜草科（Rubiaceae）植物栀子Gardenia jasminoides Eills的干燥成熟果实，《中国药典》2010年版收载的有生栀子、炒栀子和焦栀子[1]。栀子是临床常用中药，有泻火除烦、清热利尿、凉血解毒之功效，现代药理研究表明栀子具有抗炎、镇静、镇痛、保肝利胆、抗凝血等作用。已知的主要有效成分为有机酸、环烯醚萜苷和色素。其中有机酸以绿原酸等为代表，环稀醚萜苷 收稿日期：2015-01-18 基金项目：国家科技部“十二五”科技支撑计划课题（2011BAI04B01）；国家中医药管理局行业科研专项：栀子药材优良品种选育方法及种植质量控制技术研究（201507002-1-02） 作者简介：邵坚（1988—），男，江西景德镇人，硕士研究生，主要从事中药及天然药物的药效物质基础研究。E-mail: shaojian1988@https://www.doczj.com/doc/f34960058.html, *通信作者罗光明 E-mail: jzlgm88@https://www.doczj.com/doc/f34960058.html,
38 第15卷 第6期 2013 年 6 月 辽宁中医药大学学报 JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCM Vol. 15 No. 6 Jun .，2013 栀子为茜草科植物栀子Gardenia jasminoides Ellis 的干燥成熟果实。具有泻火除烦、清热利尿、凉血解毒的功效。用于热病心烦，黄疸尿赤，血淋涩痛，血热吐衄，目赤肿痛，火毒疮疡；外治扭挫伤痛。化学成分研究表明，栀子药材有效成分主要有环烯醚萜类化合物、有机酸酯类化合物、萜类化合物、黄酮 类化合物及多糖类化合物等 [1-8] 。本实验主要研究应用高效液相色谱法同时测定环烯醚萜类化合物栀子苷和有机酸酯类化合物绿原酸含量，为全面实现栀子药材的质量控制提供新方法。 1 仪器与试药 Agilent 1200 型液相色谱仪（Agilent 科技有限公司），ChemStation 工作站（Agilent 科技有限公司）；Sarturius-BS110S 分析天平（北京赛多利斯天平有限公司）。 无水乙醇、乙腈（色谱纯，天津市康科德科技有限公司）；冰乙酸（分析纯，天津市大茂化学试剂厂）；所用水为去离子水；栀子苷（中国药品生物制品检定所，No.110749-200410）；绿原酸（中国药品生物制品检定所，No.110753-200212）；10批栀子（购于安国市，分别产于：河南、湖南、贵州、安徽、广西、江西、云南、四川、福建、湖北；经沈阳药科大学孙启时教授鉴定）。 2 方法与结果2.1 色谱条件 色谱柱：Diamonsil C 18（250 mm×4.6 mm，5μm）；流动相：1.0%的冰乙酸水溶液-1.0%冰乙酸乙腈溶液梯度洗脱（表1）；检测波长：238 nm ；柱温：30.0 ℃；进样量：10 μL ；流速：1.0 mL/min。 表1 栀子栀子苷和绿原酸含量测定梯度洗脱程序梯度流动相 时间（min） 0 10 223045507580A 水（含1.0%冰乙酸）9595908870651414B 乙腈（含1.0%冰乙酸） 5 5 10 123035 86 86 2.2 对照品溶液的制备 精密称取栀子苷对照品39.64 mg，绿原酸对照 品24.40 mg 置25 mL 量瓶中，加80%乙醇溶液溶解稀释并定容至刻度，摇匀；精密吸取上述混合对照品溶液2 mL 置50 mL 量瓶中，加80%乙醇溶液稀释并定容至刻度，摇匀，备用。 2.3 供试品溶液的制备 栀子粉末（过4号筛）取约1.0 g，精密称定，加水50 mL，加热回流提取2 h，滤过，残渣继续加水30 mL 回流提取2 h 后，两次滤液合并，进行减压浓缩至20 mL，加乙醇至80%（V/V），阴凉处避光放置24 h 后，过滤弃去沉淀，滤液用80%乙醇定容至25 mL，摇 栀子药材中栀子苷和绿原酸含量测定方法研究 史玉红 （辽宁中医药大学附属第四医院，辽宁 沈阳 110101） 摘 要：目的：建立栀子药材中栀子苷和绿原酸含量测定方法。方法：色谱柱为Diamonsil C 18柱 （250 mm×4.6 mm，5μm）；流动相为1.0%的冰乙酸水溶液-1.0%冰乙酸乙腈溶液梯度洗脱；检测波长为238 nm ；流速1.0 mL/min ；柱温30 ℃；进样量10 μL。结果：栀子苷在3.171~126.85 μg/mL 质量浓度范围内线性关系良好，r =0.9999（n =6），平均回收率为99.98%，RSD 为0.33%；绿原酸在1.952~78.08 μg/mL 质量浓度范围内线性关系良好，r =0.9999（n =6），平均回收率为100.6%，RSD 为0.81%。结论：方法操作简便，结果准确，可用于栀子药材中的栀子苷、绿原酸含量测定。 关键词：栀子；HPLC ；栀子苷；绿原酸含量 中图分类号：R284 文献标志码：A 文章编号：1673-842X (2013) 06- 0038- 03 收稿日期：2012-12-10 作者简介：史玉红（1971-），女，辽宁沈阳人，副主任药师，研究方向：药学。 Study on Determination of Geniposide and Chlorogenic Acid in Fructus Gardeniae SHI Yuhong （The Fourth Hospital Affiliated to Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Shenyang 110101，Liaoning，China） Abstract ： Objective ：To establish a method for determination of Geniposide and chlorogenic acid contents in Fructus gardeniae. Methods ：Chromatographic column of Diamonsil C 18 column（250 mm ×4.6 mm，5 μ m）was selected ；the mobile phase consisted of 1% acetic acid aqueous solution-1.0% acetic acid acetonitrile gradient elution ；the detection wavelength was 238 nm ；the flow rate was 1 mL/min ；column temperature was 30 ℃；sample was 10 μ L. Results ：Jasminoidin in the concentration range of 3.171~126.85 μg/mL had good linear relationship， r =0.9999（n =6），the average recovery was 99.98% and RSD was 0.33%；chlorogenic acid in the concentration range of 1.952~78.08 μg/mL had good linear relationship，r =0.9999（n =6），the average recovery was 100.6% and RSD was 0.81%. Conclusion ：The method is simple，accurate and can be used for determination of geniposide，chlorogenic acid contents in Fructus gardeniae. Key words ：gardenia ；HPLC ；geniposide ；chlorogenic acid content