免疫学检测
抗原抗体反应(antigen-antibody reaction)是指抗原与相应抗体所发生的特异性结合反应。
抗原抗体反应的特点
（一）特异性抗原抗体的结合本质是抗原决定簇与抗体超变区的结合。抗原决定簇与抗体超变区在一级结构和空间构型上呈互补关系，所以它们的结合具有高度特异性。抗原抗体结合力的大小，常用亲和力（affinity）或亲合力（avidity）来表示，前者指抗体分子上一个抗原结合部位与相应的抗原决定基之间的结合强度，后者指一个抗体分子与整个抗原之间的结合强度。抗原与抗体的结合为非共价的可逆结合，它们空间构象的互补程度不同，结合力强弱也不同，互补程度越高，亲和力越高。
（二）可逆性抗原抗体结合反应不是化学反应，而是非共价键的结合。4种分子间引力参与了抗原抗体间的结合，分别是静电引力、范德华力、氢键结合力和疏水作用。抗体和抗原之间的亲和力源自抗体超变区和抗原决定簇在空间构型上的互补性。抗原和抗体分子均是极性分子，反应温度、酸碱度和离子浓度对它们的极性有重要影响，从而影响着两者的空间构型和亲和力。抗原抗体结合反应是可逆反应。正向反应产物是抗原抗体复合物，复合物解离则是逆向反应。（三）抗原和抗体的浓度及合适比例
抗原和抗体的浓度及合适比例是可见现象能否出现的关键。当比例不合适时，少量的小分子抗原抗体复合物停留在反应的第一阶段，不能进一步交联和聚集，故不出现肉眼可见的现象。一般用电解质溶液来调整抗原和抗体的浓度，使两者的比例合适。
（四）抗原抗体反应的阶段性
抗原抗体反应的过程可分为两个阶段。第一阶段是抗原抗体发生特异性结合，此阶段的抗原抗体复合物量很少，分子小，肉眼看不见。当抗原抗体比例合适并且具备一定的环境因素(如电解质、pH、温度、补体)时，抗原抗体复合物进一步交联和聚集，反应也进入第二阶段，即可见反应阶段。第二阶段的抗原抗体复合物可以出现凝集、沉淀等肉眼可见的现象，还可激活补体，引发溶菌、溶血
等现象。
影响抗原抗体反应的主要因素
（1）电解质
抗原与抗体发生特异性结合后，若没有电解质参加，也不出现可见反应。为了促使沉淀物或凝集物的形成，体外抗原抗体反应一般在生理盐水或缓冲液中进行。
（2）酸碱度
抗原或抗体都是具有一定等电点的极性物质，pH 过高或过低都将影响它们的理化性质。因此，抗原抗体反应一般在pH为6～8环境中进行。当pH接近颗粒性抗原的等电点时，即使无相应抗体存在，颗粒性抗原也会发生非特异性凝集，出现假阳性反应。
（3）温度
在一定范围内，温度升高可加速分子运动，抗原与抗体碰撞机会增多，反应得以加速。但若温度高于56℃，已结合的抗原抗体反而重新解离，甚至变性或破坏。为模拟体内的真实状况，抗原抗体反应温度一般定为37℃。每种试验都有自己的最适反应温度，有些实验必须在最适反应温度下进行。例如冷凝集素与红细胞的结合需要在4℃左右进行，因为温度超过20℃时结合发生解离。
抗原抗体反应的4种基本类型
（一）凝集反应(agglutination)
颗粒性抗原（细胞、细菌等）或吸附于免疫无关载体上的可溶性抗原，与相应抗体结合后，在适量电解质的存在下，形成肉眼可见的凝集团块，此为凝集反应。凝集反应既可测定抗原，也可测定抗体，方法简便、敏感，适用于各种颗粒性抗原、可溶性抗原和抗体的检测，且敏感度高于沉淀反应。
1、直接凝集反应 (direct agglutination)
直接凝集是指细菌或红细胞（又叫凝集原）与相应抗体直接结合所产生的凝集现象，例如诊断伤寒、副伤寒病的肥达氏反应(Widal reaction)，用于血型鉴定的血细胞凝集试验。
2、间接凝集反应 (indirect agglutination)
间接凝集是指可溶性抗原吸附在乳胶颗粒或红细胞等载体表面后（这个过程叫包被，又叫载体致敏），再与相应抗体结合，在适宜电解质存在的条件下，出现凝集现象。例如用γ球蛋白包被的乳胶颗粒检测病人血清中的类风湿因子，用抗真菌抗体包被的胶乳颗粒快速检测脑脊液中的真菌。在间接凝集反应中，常用的载体有动物或人的O型红细胞，细菌，多种惰性颗粒如聚苯乙烯胶乳颗粒、明胶颗粒、活性炭颗粒等。用红细胞做载体称为间接血凝试验，用聚苯乙烯胶乳颗粒做载体称为胶乳凝集试验。根据包被载体的物质不同，间接凝集试验分为2类。一类是用抗原包被载体以检测抗体，叫正向间接凝集。另一类是用抗体包被载体以检测抗原，叫反向间接凝集。
（1）间接血凝试验以红细胞为载体的间接凝集试验。最常用的为绵羊、家兔、鸡的红细胞及O型人红细胞。新鲜红细胞能吸附多糖类抗原，但吸附蛋白质抗原或抗体的能力较差。新鲜红细胞经甲醛、戊二醛、丙酮醛等物质醛化后，对蛋白质抗原或抗体的吸附能力增强，并且可长期保存而不溶血。醛化红细胞血凝反应的效果与新鲜红细胞相似。
（2）胶乳凝集试验以聚苯乙烯胶乳颗粒作为载体的间接凝集试验叫胶乳凝集试验。聚苯乙烯胶乳颗粒带负电荷，对蛋白质分子有弱吸附能力。现在常用的载体是带有化学活性基团的聚苯乙烯胶乳颗粒，例如羧化聚苯乙烯胶乳等。在碳化二亚胺等交联剂的作用下，抗原或抗体上的氨基与胶乳上的羧基发生缩合反应，抗原或抗体被连接到胶乳颗粒表面。
（3）协同凝集试验(co-agglutination) 金黄色葡萄球菌的细胞壁中有一种蛋白质，叫SPA(staphylococcus protein A)，它能与IgG的Fc段结合。利用这个特性可以将IgG类抗体与葡萄球菌连接。连接有IgG类抗体的葡萄球菌能与相应抗原发生凝集反应，这种反向间接凝集试验叫协同凝集试验。
（4）抗球蛋白试验 (antiglobulin test, Coombs test) IgG类抗体能与相应的颗粒性抗原牢固结合，但由于它只有两个结合价，分子又较小，故这种结合反应不出现凝集现象。因此IgG类抗体被称为不完全抗体。加入抗球蛋白抗体（第二抗体）后，它能够同红细胞表面的IgG抗体结合，使红细胞发生凝集。这种通过抗球蛋白抗体的搭桥作用使红细胞凝集的试验叫抗球蛋白试验，又叫桥梁凝集试验。它是由Coombs于1945年建立的，故称为Coombs试验。该实验可以
检测不完全抗体，广泛用于血液病及输血产生的抗体检测。依据方法的不同又分为两种。①直接Coombs试验：用于检测红细胞上的不完全抗体。它将抗人球蛋白抗体加入致敏红细胞（表面已结合有不完全抗体）悬液中，与红细胞表面的不完全抗体结合，使红细胞发生凝集。常用于新生儿溶血症、自身免疫性溶血症、特发性自身免疫性贫血等疾病检测。②间接Coombs试验：用以检测血清中游离的不完全抗体。方法是用红细胞预先吸收待检血清中的不完全抗体，再加入抗球蛋白抗体，红细胞就发生凝集。间接Coombs试验多用于检测红细胞Rh血型系统的抗D抗体。抗D抗体是Rh+红细胞的D抗原刺激机体后产生的IgG类抗体（不完全抗体），它可以同Rh+红细胞结合但不发生凝集。用Rh+红细胞预先吸收母体血清中的抗D抗体，再加入抗IgG的抗体（抗球蛋白抗体），红细胞就发生凝集。
（二）沉淀反应(precipitation reaction)
可溶性抗原与抗体结合，当两者比例合适时，在一定的介质中可出现不透明的沉淀物（即较大的不溶性免疫复合物）。这种抗原抗体反应叫沉淀反应。沉淀反应所用的介质主要有电解质和凝胶两种。经典的沉淀反应是利用第二阶段出现的沉淀线或沉淀环等来判定结果，称为终点法；而免疫浊度法则是依据第一阶段免疫复合物的形成速率来判定结果，称为速率法。
凝胶内的沉淀反应
（1）单向琼脂扩散试验(single agar diffusion) 是在含有抗体的琼脂板上打孔，将抗原加入小孔内，经一段时间的扩散后，在比例合适处抗原与抗体形成肉眼可见的以小孔为中心的白色沉淀环，环的直径与加入的抗原浓度成正相关，再与已知浓度抗原制作的标准曲线相比较即可求出未知抗原的量。本方法常用于定量测定IgG、IgM、IgA和C3等。
（2）双向琼脂扩散试验(double agar diffusion) 方法是在琼脂板上间隔一定距离打孔，再在相邻的两孔分别加入抗原和抗体，它们各自向四周凝胶中扩散，一段时间后在两孔间比例合适处形成白色沉淀线。根据沉淀线的数量、位置、形态等可以对抗原或抗体做定性或半定量分析（图14-2），还可分析两种抗原性质上的异同（图14-3）。
3、免疫电泳技术
免疫电泳技术是电泳技术与沉淀反应的结合产物。它有两大优点，一是加快了沉淀反应的速度，二是可利用电泳技术先分离蛋白质各组分，再分别与抗体反应，由此可对复杂蛋白质进行分析。免疫电泳技术的种类很多如火箭电泳（rocket electrophoresis），对流免疫电泳(counter immunoelectrophoresis) ，免疫电泳(immunoelectrophoresis) ，免疫印迹法 (immunoblotting)
（三）补体结合试验(complement fixation test，CFT)
抗原抗体反应的产物是免疫复合物，它可以固定游离的补体，使补体失去溶解致敏红细胞的能力。补体结合试验依据此特点，应用致敏红细胞做指示系统，来判断反应系统是否发生了抗原抗体反应。该试验有5种成分参与，分属于3
个系统：①反应系统，即已知的抗原(或抗体)与待测的抗体(或抗原)；②补体系统；③指示系统，即表面结合了溶血素的绵羊红细胞。如果反应系统中存在待测的抗体(或抗原)，则抗原抗体发生结合后可固定补体；再加入指示系统时，由于反应液中已没有游离的补体而不出现溶血现象，此为补体结合试验阳性。反之，为阴性。补体结合试验早先多用于病原体检测、肿瘤相关抗原鉴定以及自身抗体检测等，但由于参与反应的成分多，影响因素复杂，重复性差，现已逐渐被其它方法取代。
（四）中和反应(neutralization reaction)
有生物活性的抗原性物质（例如病毒、毒素、激素等）同抗体结合后，其生物活性会丧失，称为中和反应。常用的有病毒中和试验(virus neutralization)。原理是：病毒可以使培养细胞出现病变效应，结合了中和抗体的病毒则失去这种毒力。将待检血清与病毒混合，再接种培养细胞，根据细胞病变效应的变化情况来判断病毒是否被中和，同时计算“中和指数”即可反映中和抗体的效价。该试验可对病毒分型，也可检测患者血清中的抗病毒中和抗体。免疫标记技术
免疫标记技术利用酶、荧光素、生物素-亲和素、胶体金、发光物质以及放射性核素等标记物来标记抗原或抗体，再与标本中的抗体或抗原反应，最后测定复合物中的标记物，通过标记物的信号放大作用，大大提高了反应的敏感性，应用领域也得到了拓展。
依据标记物的不同，标记免疫技术可分为以下几种：酶标记、荧光素标记、
生物素-亲和素标记、胶体金标记、发光物质标记以及放射性核素标记等标记免疫技术。
酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)是固相酶免疫测定中最具代表性的一种。该技术利用酶的放大效应，大大提高了灵敏度。它主要有三种试剂：①固相抗原或抗体，即把抗原或抗体用合适的方法连接到固相载体表面，同时保留它们的免疫活性；②酶标抗原或抗体，即把某些酶用合适的方法连接到抗原或抗体表面，同时保留它们的免疫活性以及酶的催化活性。常用的酶是辣根过氧化物酶(HRP)和碱性磷酸酶(AP)；③酶作用的底物，一般是能发生颜色改变的化合物（也叫显色剂），还可以是发光类化学物质。
(一)双抗体夹心法检测标本中的抗原
（二）间接法常用于检测抗体，
荧光免疫技术
利用荧光素的示踪特性，将荧光素标记在抗体上获得荧光抗体，再用它对组织或细胞内的抗原进行定位，称为荧光抗体技术(fluorescent antibody technique)。常用的荧光素有异硫氰酸荧光素(FITC)和罗丹明(RIB200)。前者激发后呈现明亮的黄绿色荧光，后者则呈现红色荧光。
（一）荧光抗体技术
1、荧光抗体显微技术
将荧光抗体与组织切片或细胞表面的抗原进行反应，用荧光显微镜观察，在黑暗背景下抗原结合部位可见到明亮的特异性荧光。由此可对组织或细胞表面的抗原进行鉴定和定位。又可分为直接法和间接法两种。
（1）直接法多用于检测抗原。原理是：将针对抗原的荧光抗体直接滴加于标本上，使之与抗原发生特异性结合。本法简便，特异性高，本底低，但敏感度也低。
（2）间接法可用于检测抗原和抗体。原理是（图14-5）：先将针对抗原的抗体（第一抗体）滴加于标本上，使之与抗原发生特异性结合，再滴加抗第一抗体的荧光抗体（第二抗体），使之同第一抗体结合。本法灵敏度高，而且在检测不同抗原时只需要一种荧光抗体。
2、流式细胞术
是荧光抗体技术同流式细胞仪分离技术的结合。经特异性荧光抗体染色的游离细胞逐个从流式细胞仪的喷嘴流出，再在电磁场的作用下发生偏转，同时在单色激光照射下发出荧光，不同细胞的荧光信号及偏转角度均不同，细胞得以分离。这种方法可区分细胞大小、折散率、表面分子等，故常用于T、B等细胞亚群的检测及分离。
化学发光免疫技术
化学发光免疫测定技术是指将化学发光反应与抗原抗体反应相结合，以检测抗原或抗体的方法。它可分为二类，一类是以发光剂作为酶免疫测定的底物，通过发光反应增强测定的敏感性；另一类是直接用发光剂标记抗体或抗原，再进行抗原抗体反应，通过检测发光信号来测定抗原或抗体的含量。
胶体金免疫技术
胶体金(colloidal gold)也称金溶胶(goldsol)，是由金盐被还原成金原子后形成的金颗粒悬液。以胶体金为标记物的抗原抗体反应即为胶体金免疫技术。可分为两大类：一类是用于确定物质是否存在及其性质，包括免疫电镜技术和免疫组织化学技术。在免疫组织化学技术中，将结合有蛋白质的胶体金复合物称为金探针。另一类是用于物质的半定量测定，常与膜载体技术结合，包括斑点金免疫渗滤试验和斑点金免疫层析试验等，这类技术中应用的胶体金与抗原或抗体形成的复合物称为免疫金(immunogold)，这类技术简便且快速，得到了广泛应用。如斑点金免疫渗滤试验 (dot immunogold filtration assay，DIGFA)和斑点金免疫层析试验(dot immunochromatographic assay，DICA)简称ICA。
细胞分离法
免疫细胞主要包括T淋巴细胞、B淋巴细胞、巨噬细胞等。在体外对各种免疫细胞分别作鉴定、计数和功能测定，是观察机体免疫状态的一种重要手段。为此，须将各种免疫细胞从血液或脏器中分离出来。细胞分离的原理大致有两大类，一类是根据各种细胞的大小、沉降率、粘附和吞噬能力加以区分，另一类是按照各种细胞的表面标志，包括细胞表面的抗原和受体加以选择性分离。有时为了获得所需细胞，还可多次用不同方法组合处理。
（一）外周血单个核细胞的分离
外周血中的白细胞由单个核细胞和多核粒细胞组成，单个核细胞又包括淋巴
细胞和单核细胞2种。这些细胞的密度均不相同。红细胞和多核粒细胞的密度为1.090左右，淋巴细胞和单核细胞为1.075～1.090，血小板为1.030～1.035。如果用密度介于1.075～1.092之间的等渗溶液(分层液)为介质进行密度梯度离心，则不同密度的细胞按相应密度梯度悬浮于分层液中。常用的是聚蔗糖-泛影葡胺（商品名Ficoll-Hypaque）分层液。分离人外周血单个核细胞时Ficoll-Hypaque分层液密度以1.077±0.001为佳。先在试管底部加入适量分层液，然后在分层液上面小心加入经Hanks液或PBS液稀释的肝素抗凝全血，注意保持两者分界面清晰。水平离心后，试管中的液体和细胞分为几层。上层为血浆层，血小板悬浮于其中；中层为分层液，在上层（血浆层）和中层（分层液）的交界面是密集的单个核细胞层，呈白膜状；底层为沉积的红细胞和多核白细胞。本法分离单个核细胞纯度可达95%，淋巴细胞约占90%～95%。
（三）淋巴细胞及其亚群的分离
为研究免疫细胞的功能，需要高纯度的淋巴细胞群或其亚群，常用的分离方法有流式细胞仪法流式细胞仪能有效分离不同亚群细胞，它主要由4部分组成：细胞流动系统及气压流速控制系统，激光系统，检测与讯号处理系统，细胞分选系统。该方法的原理是：细胞经荧光染色后，在高速流动系统作用下细胞排成单行，逐个流经检测区。在检测区，单个细胞同时受到激光束的照射和电场力的作用。单个细胞经激光束照射后产生荧光和散射光，不同类型的细胞产生的光电信号不同。同时，不同类型的细胞带电量不同，受到的电场力不同，从而偏转角度不同，因此进入不同的收集管，细胞得以分离。该方法准确快速，细胞活力不受损且无菌，但仪器昂贵，故多用于科学研究。
NK细胞的杀伤活性检测方法主要有3种。
（1）形态法将靶细胞与NK细胞混合作用，再用台盼蓝或伊红Y等染料染色，分别计数染色的死细胞和未染色的活细胞，由此推算NK细胞的杀伤活性。（2）酶释放法将NK细胞与靶细胞共同温育，一段时间后取上清液检测靶细胞遭破坏后释放的乳酸脱氢酶或碱性磷酸酶含量，即可反映NK细胞的杀伤活性。（3）同位素掺入法先将靶细胞培养在加有3H-TdR的培养液中，靶细胞胞核以3H-TdR为原料合成新的DNA。接着用NK细胞处理上述靶细胞，靶细胞膜被破坏，细胞核游离出来。再用胰酶和DNA酶处理可使游离细胞核的内容物释放。释
放的3H-TdR的放射性即代表NK细胞的杀伤活性。
体液免疫检测
B细胞的表面标志包括表面抗原和表面受体两大类。检测这些表面标志一方面可用来研究B细胞各分化发育阶段的特性，另一方面可以鉴定和计数各阶段B 细胞的分布以及患病时的动态变化情况。
1、B细胞表面抗原的检测
不同亚群的B细胞表面有不同的分化抗原（CD）。应用相应的CD单克隆抗体，通过间接荧光免疫法、酶免疫组化法或化学发光法可以检测不同的CD抗原。2、B细胞表面受体的检测
B细胞表面有膜免疫球蛋白(SmIg)、Fc受体、补体受体、EB病毒受体等受体。SmIg为B细胞所特有，可用以B细胞计数和鉴定。以SmIg的检测为例，一般采用荧光法。首先从外周血中分离出富含淋巴细胞的单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBM)，再将PBM用荧光标记的抗人Ig抗体染色，呈现荧光的细胞为带有相应SmIg的B细胞。使用的是荧光抗体有两类，一类是多价抗人Ig抗体，另一类是单价抗各类Ig抗体，即抗IgM、抗IgG、抗IgA、抗IgE 等抗体。B细胞同荧光抗体结合后，细胞膜表面呈现不同形式的荧光。开始均匀分布呈环状，其后集中在某些部位呈斑点状，然后又聚集在某一部位呈帽状，最后可被吞饮入胞浆直至荧光消失。这是由于细胞膜在体温条件下呈半液体状，故镶嵌物能在其中移动。荧光抗体染色后，观察时间不能超过30min，以防止帽状物形成或被吞饮，从而影响荧光染色效果。在人外周血中，带有SmIgM的B细胞数目最多，检测SmIgM即可反映B细胞的数量。
3、B细胞功能的检测
B细胞受抗原或促有丝分裂原刺激后，发生分裂增殖并继续分化成熟为浆细胞，随后分泌相应的Ig。若B细胞功能减低或缺陷，则体内Ig量下降或缺如；同时，B细胞对抗原的应答能力减弱或缺如，仅产生极低或不能产生特异性抗体。测定血清中各种Ig量或者B细胞产生特异性抗体的能力，可判断B细胞功能。各类Ig量的测定可用单向琼脂扩散法或火箭电泳法或免疫比浊法等。
（1）溶血空斑形成试验(plaque forming cell,PFC ) PFC用于检测浆细胞产生抗体的能力。其原理是：将绵羊红细胞(SRBC)免疫小鼠，4天后取出脾细胞，
加入SRBC及补体，与温热的琼脂混合，在玻片上浇注成薄层，37℃温育后观察溶血空斑数目与大小。由于浆细胞分泌抗SRBC抗体，同周围SRBC发生结合，在补体参与下导致SRBC溶血，形成一个肉眼可见的圆形透明溶血区，称为溶血空斑(plaque)。每一个空斑代表一个浆细胞，空斑大小表示抗体分泌量的多少。如果预先将其它抗原连接在SRBC上，再进行上述实验，则可检测产生针对该抗原的特异性抗体的浆细胞。
（2）B细胞增殖能力的试验某些促有丝分裂原（如细菌脂多糖）能刺激B细胞增殖，使得B细胞能够利用培养液中的3H-TdR为原料合成新的DNA。检测B
细胞胞核内放射性同位素的量，即可反映B细胞的增殖能力。
细胞免疫测定
1、T细胞表面标志的检测
（1）CD抗原的检测 T细胞表面有多种CD抗原。用单克隆抗体检测T细胞表面的CD抗原即可鉴定和计数T细胞。以间接荧光法为例：将外周血单个核细胞分别与相应单克隆抗体(如抗CD2、抗CD4、抗CD8)结合，再加荧光素标记的抗小鼠IgG抗体，观察并计数200个单个核细胞，以荧光细胞数与计数细胞总数之比，求得带有相应CD抗原的T细胞的百分率。
2、T细胞计数
现在多用间接荧光法。方法是：将人的PBM分成三份，分别用小鼠抗人CD3、小鼠抗人CD4和小鼠抗人CD8 的单克隆抗体作第一抗体与PBM结合，再用FITC 标记的兔抗小鼠IgG抗体作第二抗体进行间接免疫荧光染色，用荧光显微镜或流式细胞仪检测结果。由于绝大多数T细胞表面都有CD3抗原，故PBM中被CD3
抗体染上荧光的细胞（CD3+细胞）数目，即代表了T细胞总数。正常人的T细胞总数为70%～80%。正常人的CD4+细胞数和CD8+细胞数之和应与CD3+细胞数一致，且两者的比值约为2/1，而艾滋病患者比值小于1.7。
3、T细胞功能的检测
（1）T细胞增殖试验又叫T细胞转化试验。一些刺激物在体内或体外可以刺激T细胞增殖，使得T细胞代谢和形态发生改变，转变成为淋巴母细胞。淋巴母细胞的特征是：蛋白质和核酸合成增加，细胞体积变大、胞浆增多伴有空泡、核仁明显、染色质疏松。淋巴母细胞的检测可利用形态学改变法，也可利用氚标
记的胸腺嘧啶核苷（3H-TdR）掺入法。依据刺激物的不同，T细胞转化试验分为非特异性和特异性两大类。前者用非抗原性的促有丝分裂原做刺激物，通常为植物血凝素(phytoagglutinin，PHA)和刀豆素蛋白A(concanavalin A，ConA)；后者用特异性抗原做刺激物，包括破伤风类毒素、结核菌素纯化蛋白衍生物(purified protein derivative，PPD)和旧结核菌素（old tubium,OT）等，还包括同种异型抗原（例如HLA）。虽然T细胞对促有丝分裂原和特异性抗原的识别过程不同，但激活后所发生的分裂和增殖过程却是相同的。因此T细胞非特异性转化试验可以间接反映T细胞对特异性抗原的应答能力。
（2）T细胞介导的细胞毒试验 T
细胞、NK细胞、LAK细胞等淋巴细胞可以
C
直接破坏或溶解靶细胞，称之为淋巴细胞介导的细胞毒作用(lymphocyte mediated cytotoxicity，LMC)。它可用来评价机体细胞免疫水平。例如测定肿瘤患者淋巴细胞杀伤肿瘤细胞的能力可以判断预后和观察疗效。该试验的原理是选用适当的靶细胞，常用的是人肿瘤细胞株（如肝癌、食管癌、胃癌等细胞株），经培养后制成单个细胞悬液，再与受检的淋巴细胞混合，温育后观察肿瘤细胞被杀伤情况。
①形态学检查法：淋巴细胞与肿瘤细胞共同孵育，瑞氏染色，显微镜计数残留的肿瘤细胞数，计算淋巴细胞抑制肿瘤细胞生长的抑制率。抑制率%＝(对照组平均残留肿瘤细胞数－实验组平均残留肿瘤细胞数)÷对照组平均残留肿瘤细胞数×100%。②51Cr释放法：先将含51Cr元素的无机盐溶液与靶细胞混合培养，51Cr 进入靶细胞与胞浆蛋白结合。再加入待检T细胞与51Cr标记的靶细胞共同培养，靶细胞被杀伤，导致胞浆中的51Cr重新释放出来。用γ射线测量仪测定上清液的cpm值，计算51Cr释放率，即可反映T细胞的细胞毒活性高低。该试验还可用来检测Tc细胞的效应功能、经IgG介导的ADCC效应、NK细胞的自然杀伤作用。
（3）PPD皮肤试验是一种检测细胞免疫功能的体内试验。原理是迟发型（Ⅳ型）超敏反应，方法是：在前臂皮内注射少量结核菌纯蛋白衍生物(PPD)，24h～48h后，测量红肿硬结的大小，硬结直径大于10mm即为皮试阳性。皮试阳性一般表明受试者对结核菌产生了一定的细胞免疫能力。皮试阴性则有3种可能性，一种是受试者从未接触过该抗原，一种是细胞免疫功能缺损，一种是严重感染(例
如麻疹、慢性播散性结核)造成的暂时性无应答。
4、细胞因子检测
检测细胞因子的方法主要有生物学法、免疫学法和分子生物学法3大类。（1）生物学法是根据各种细胞因子的不同生物学活性而设计的检测细胞因子的方法。各种细胞因子具有不同的生物学活性，例如白介素-2（IL-2）可以促进淋巴细胞增殖，肿瘤坏死因子（TNF）能够杀伤肿瘤细胞，集落刺激因子（CSF）可以刺激造血细胞集落形成，干扰素（IFN）可以保护细胞免受病毒攻击。利用某一细胞因子独特的生物学活性，即可对其进行检测。①细胞增殖法：根据许多细胞因子有促使细胞生长的活性而设计。首先筛选并培养出只依赖某一种细胞因子的依赖性细胞株。通常情况下它们不能存活，只有加入相应细胞因子后才能增殖，并且增殖程度与细胞因子水平呈正比关系。这些细胞的增殖情况可通过显微镜直接计数、3H-TdR掺入法等加以测定。例如应用来自于小鼠的IL-2依赖株CTLL-2就可以测定IL-2的含量。②靶细胞杀伤法：根据某些细胞因子能在体外杀伤靶细胞而设计。以TNF的测定为例：用L929细胞作为靶细胞，加入TNF后靶细胞的死亡率与TNF活性成正比。靶细胞的死亡率可用51Cr释放法测定。③细胞病变抑制法：病毒感染靶细胞可引起细胞病变，IFN可以抑制病毒增殖，从而靶细胞的病变效应也被抑制。利用这个特点可以检测IFN。
（2）免疫学法大多数细胞因子化学本质是蛋白质或多肽，有较强的抗原性。用细胞因子免疫动物可获得抗细胞因子的多价抗血清或单克隆抗体。利用抗原抗体反应可以检测细胞因子的含量，还可以检测细胞因子在细胞内的合成及分布情况。常用的方法包括ELISA和免疫印迹法。免疫学法依据细胞因子的抗原性而设计，检测结果反映了细胞因子的含量，但不能真实反映细胞因子的生物学活性。因此要了解细胞因子的生物学活性，还必须结合生物学法。例如用ELISA法检测病人血清中TNF水平，简便快速、特异性高、敏感性强，但该实验结果不能真实地反映TNF的生物学活性。
（3）分子生物学法分子生物学法是指利用核酸探针来检测细胞因子基因表达情况，即检测细胞因子mRNA的水平。核酸探针是指用放射性同位素或其他标记物(如生物素、酶等)标记并与目的基因互补的DNA或RNA片段。根据其来源可分为cDNA探针、寡聚核苷酸探针、基因组基因探针。利用核酸探针检测细胞因
子mRNA表达的方法很多，常用的有斑点杂交、Northernblot、逆转录PCR （RT-PCR），细胞或组织原位杂交等方法。分子生物学法检测的是细胞因子mRNA 的水平，不能直接提供细胞因子的浓度及生物学活性等资料，主要适用于机制探讨。
巨噬细胞功能的检测
巨噬细胞具有较强的吞噬功能，常用细胞性抗原作为被吞噬颗粒，如鸡红细胞。检测原理是将巨噬细胞与适量的鸡红细胞混合后，置37℃保温0.5 h～1h，最后离心取巨噬细胞制成涂片，染色镜检，计数200个巨噬细胞，分别计算吞噬百分比和吞噬指数。吞噬百分比＝吞噬有鸡红细胞的巨噬细胞数÷200×100%。吞噬指数＝被吞噬的鸡红细胞的总数÷吞噬有鸡红细胞的巨噬细胞数。
HLA DNA分型法
是利用PCR技术将标本中的少量DNA上的HLA基因片段大量扩增，再进行产物鉴定。特点是灵敏度高，试剂易得，对标本要求不高，陈旧或微量标本都能进行检测，故已逐步取代了传统的分型方法，被广泛应用于移植医学、法医学等多个领域。
第一节抗原抗体反应的原理 抗原与抗体能够特异性结合是基于抗原决定簇（表位）与抗体超变区的沟槽分子表面的结构互性与亲合性而结合的。 一、抗原抗体的结合力 抗原抗体间结合为非共价键结合，有四种分子间引力参与。 （1）静电引力：是抗原抗体分子带有相反电荷的氨基和羧基基团之间相互吸引的力。又称为库伦引力。这种引力的大小与两电荷间的距离的平方成反比。两个电荷距离越近，静电引力越强。 （2）范德华引力：是抗原与抗体两个大分子外层轨道上电子之间相互作用时，因两者电子云中的偶极摆动而产生吸引力。能促使抗原抗体相互结合，这种引力的能量小于静电引力。 （3）氢键结合力：是抗体上亲水基团与相应抗原彼此接近时，相互间可形成氢键，使抗原抗体相互结合。氢键结合力较范德华引力强。 （4）疏水作用力：是抗原表位与抗体超变区靠近时，相互间正、负极性消失，亲水层也立即失去，排斥了两者之间的水分子，使抗原抗体进一步相互吸引，促进其结合。疏水作用力是这些力中最强的，对维系抗原抗体结合作用最大。 二、抗原抗体的亲合性和亲合力 亲合性是指抗体分子上一个抗原结合点与对应的抗原表位之间相互适应而存在的引力，它是抗原抗体之间固有的结合力，可用平衡常数K来表示：K=K1/K2，K值越大，亲合性越高；亲合性越高，与抗原结合越牢。 抗体的亲合力是指抗体结合部位与抗原表位之间结合的强度，与抗体结合价直接相关，即所谓多价优势，如IgG为两价，亲合力为单价的103倍，IgM为5～10价，亲合力为单价的107倍。由于抗原抗体的结合反应是可逆的，若抗体的亲合力高，与抗原分子结合牢固，不易解离；反之即容易解离。 二、亲水胶体转化为疏水胶体 大多数抗原为蛋白质，抗体是球蛋白，它们溶解在水中皆为胶体溶液，不会发生自然沉淀。这种亲水胶体的形成机制是因蛋白质含有大量的氨基和羧基残基，在溶液中这些残基带有电荷，由于静电作用，在蛋白质分子周围出现了带相反电荷的电子云并形成了水化层，由于电荷的相斥，就避免了蛋白质分子间靠拢、凝集和沉淀。当抗原抗体结合后，使水化层表面电荷减少或消失，水化层变薄，电子云也消失，蛋白质由亲水胶体转化为疏水胶体。再加入电解质，如NaCl，则进一步使疏水胶体物相互靠拢，形成可见的抗原抗体复合物。
免疫学检测 抗原抗体反应(antigen-antibody reaction)是指抗原与相应抗体所发生的特异性结合反应。 抗原抗体反应的特点 （一）特异性抗原抗体的结合本质是抗原决定簇与抗体超变区的结合。抗原决定簇与抗体超变区在一级结构和空间构型上呈互补关系，所以它们的结合具有高度特异性。抗原抗体结合力的大小，常用亲和力（affinity）或亲合力（avidity）来表示，前者指抗体分子上一个抗原结合部位与相应的抗原决定基之间的结合强度，后者指一个抗体分子与整个抗原之间的结合强度。抗原与抗体的结合为非共价的可逆结合，它们空间构象的互补程度不同，结合力强弱也不同，互补程度越高，亲和力越高。 （二）可逆性抗原抗体结合反应不是化学反应，而是非共价键的结合。4种分子间引力参与了抗原抗体间的结合，分别是静电引力、范德华力、氢键结合力和疏水作用。抗体和抗原之间的亲和力源自抗体超变区和抗原决定簇在空间构型上的互补性。抗原和抗体分子均是极性分子，反应温度、酸碱度和离子浓度对它们的极性有重要影响，从而影响着两者的空间构型和亲和力。抗原抗体结合反应是可逆反应。正向反应产物是抗原抗体复合物，复合物解离则是逆向反应。（三）抗原和抗体的浓度及合适比例 抗原和抗体的浓度及合适比例是可见现象能否出现的关键。当比例不合适时，少量的小分子抗原抗体复合物停留在反应的第一阶段，不能进一步交联和聚集，故不出现肉眼可见的现象。一般用电解质溶液来调整抗原和抗体的浓度，使两者的比例合适。 （四）抗原抗体反应的阶段性 抗原抗体反应的过程可分为两个阶段。第一阶段是抗原抗体发生特异性结合，此阶段的抗原抗体复合物量很少，分子小，肉眼看不见。当抗原抗体比例合适并且具备一定的环境因素(如电解质、pH、温度、补体)时，抗原抗体复合物进一步交联和聚集，反应也进入第二阶段，即可见反应阶段。第二阶段的抗原抗体
第二章抗原抗体反应 一、以下每一道考题下面有A、B、C、D、E5个备选答案。请从中选择1个最佳答案。并在答题卡上将相应题号的相应字母所属的方框涂黑。 1.抗原抗体复合物吸引在一起依靠 A.静电引力 B.共价键 C.分子间吸引力 D.疏水结合力 E.范德华引力 参考答案：C 2.抗原抗体反应的特点不包括 A.特异性 B.比例性 C.多价性 D.可逆性 E.电离性 参考答案：E 3.抗原抗体反应的特异性指的是 A.两者分子功能的相近性 B.两者分子的电子云吸引力 C.两者之间空间结构的相似性 D.两者分子大小的相近性 E.两者之间相互吻合的互补性 参考答案：E 4.完全抗原的特征是 A.有免疫原性，无反应原性 B.有反应原性，无免疫原性 C.无免疫原性和反应原性 D.有免疫原性和反应原性 E.必须与载体结合才具有免疫原性 参考答案：D 5.影响抗原抗体反应的因素不包括 A.电解质 B.温度 C.PH D.适当振摇 E.溶液量 参考答案：E 6.A、B两种抗原都能与某一抗体发生特异性结合反应，这两种抗原相互称为 A.TD-Ag B.TI-Ag C.半抗原 D.完全抗原
参考答案：E 7.抗原抗体结合形成复合物的主要原理是 A.氨基酸结构发生改变 B.氨基酸数量发生改变 C.氨基酸种类发生改变 D.由亲水胶体转变为疏水胶体 E.由疏水胶体转变为亲水胶体 参考答案：D 8.抗体在抗原抗体反应中的合适浓度是 A.固定的 B.规定的 C.随便设定的 D.与抗原相对而言 E.人为规定的 参考答案：A 9.下列关于抗原与抗体特异性结合的结合力，不正确的是 A.非共价键 B.氢键 C.范德华力 D.疏水键 E.需8种分子间引力参与 参考答案：E 10.一般抗原抗体反应的pH值为 参考答案：B 11.免疫学技术中的亲和层析法，纯化抗原或抗体是利用抗原抗体反应的 A.特异性 B.比例性 C.可逆性 D.亲和力 E.疏水作用力 参考答案：C 12.抗原抗体特异性反应时，若抗原或抗体极度过剩则无沉淀形成，叫做 A.前带 B.后带 C.带现象 D.等价带 E.拖尾 参考答案：C 13.凝集反应的抗原是 A.半抗原 B.超抗原 C.可溶性抗原 D.异嗜性抗原
抗原抗体反应的临床特点 抗原抗体反应的临床特点 (一)特异性抗原抗体的结合实质上是抗原表位与抗体超变区中抗原结合点之间的结合。由于两者在化学结构和空间构型上呈互补关系，所以抗原与抗体的结合具有高度的特异性。这种特异性如同钥匙和锁的关系。例如白喉抗毒素只能与相应的外毒素结合，而不能与破伤风外毒素结合。但较大分子的蛋白质常含有多种抗原表位。如果两种不同的抗原分子上有相同的抗原表位，或抗原、抗体间构型部分相同，皆可出现交叉反应医`学教育网搜集整理。 (二)按比例。 在抗原抗体特异性反应时，生成结合物的量与反应物的浓度有关。无论在一定量的抗体中加入不同量的抗原或在一定量的抗原中加入不同量的抗体，均可发现只有在两者分子比例合适时才出生现最强的反应。以沉淀反应为例，若向一排试管中中入一定量的抗体，然后依次向各管中加入递增量的相应可溶性抗原，根据所形成的沉淀物及抗原抗体的比例关系可绘制出反应曲线(图9-1)。从图中可见，曲线的高峰部分是抗原抗体分子比例合适的范围，称为抗原抗体反应的等价带(zoneofequivalence)。在此范围内，抗原抗体充分结合，沉淀物形成快而多。其中有一管反应最快，沉淀物形成最多，上清液中几乎无游离抗原或抗体存在，表明抗原与抗体浓度的比例最为合适，称为最适比(optimalratio)。在等价带前后分别为抗体过剩则无沉淀物形成，这种现象称为带现象(zonephenomenon)。出现在抗体过量时，称为前带(prezone)，出现在抗原过剩时，称为后带(postzone)。 关于抗原抗体结合后如何形成聚合物，曾经有过不少解释。结合现代免疫学的成就呼电镜观察所见，仍可用Marrack(1934)提出的网格学说(latticetheory)加以说明。因为大多数抗体的巨大网格状聚集体，形成肉眼可见的沉淀物。但当抗原或抗体过量时，由于其结合价不能相互饱和，就只能形成较小的沉淀物或可溶性抗原抗体复合物。 在用沉淀反应对不同来源的抗血清进行比较后，发现抗体可按等价带范围大小分为两种类型，即R型抗体和H型抗体。R型抗体以家兔免疫血清为代表，具有较宽的抗原抗体合适比例范围，只在抗原过量时，才易出现溶性免疫复合物，大多数动物的免疫血均属此型。H型抗体以马免疫血清为代表，其抗原与抗体的合适比例范围较窄，抗原或抗体过量，均可形成可溶性免疫复合物。人和许多大动物的抗血清皆属H型。
---------------------------------------------------------------最新资料推荐------------------------------------------------------ 抗原抗体反应及应用 不论天然的还是人工合成的分子，只要能被机体的免疫系统识别的都可以诱导机体的免疫应答，产生相应的抗体。 大多数抗体和抗原本身是既有免疫原性(诱发产生特异抗体) ，又有反应原性(与特异的抗体相结合) 。 抗原与抗体的特异性反应不仅可以在体内进行，而且可以在体外进行。 一切利用血清学技术方法所进行的各种测试都是基于这一根本的特性。 抗体反应技术的应用之广泛已经远远超出了免疫学、医学、甚至生命科学的范围，成为类微量，灵敏，快速的检测分析方法。 本章着重介绍抗体制备，抗体抗原反应原理及技术方法的应用。 第一节抗体的制备环境中的大部分生物(包括病原生物) 及其产物分子和一些化合物对哺乳动物的免疫系统而言是外源抗原，这些抗原能通过侵染或其他的途径刺激免疫系统，产生以抗体为主的体液免疫应答。 同样用抗原人工免疫实验动物，可以获得含有特异性抗体的血清，称为抗血清(antiserum) ，因血清中抗体是多个抗原决定簇刺激不同 B 细胞克隆而产生的抗体，所以称多克隆抗体(polyclonal antibody) 。 一个 B 细胞克隆所分泌的抗体即为单克隆抗体。 1 / 3
用免疫动物的 B 细胞与骨髓瘤细胞融合，在体外可以分离出许多单个 B 细胞克隆，以此方法可制备单克隆抗体(monoclonal antibody) 。 随着分子生物学技术的发展，已经可以用抗体基因文库(antibody combinatorial library) 筛选制备单克隆抗体。 应用基因工程技术，根据需要对抗体进行改造，获得基因工程抗体(engineering antibody) ，以及催化性抗体(catalytic antibody 或 abozyme) 等的全新的抗体。 一、抗血清的制备 1．免疫动物 (1) 抗原： 免疫动物是制备抗血清的第步。 免疫所用的抗原可用病毒、细菌或者其他蛋白质抗原，如果使用半抗原如小分子激素等，必须与大分子载体连接，连接剂见表71。 抗原的用量视抗原种类及动物而异，次注射小鼠可以少至几个微克，免、羊甚至更大的动物每次注射的量就相应增加，从几百 g ／次至几 mg／次。 〔2) 佐剂及乳化： 佐剂可以帮助抗原在注射部位缓慢释放，以增加免疫刺激的效果。 佐剂有完全和不完全佐剂之分。 完全佐剂加有灭活的分枝杆菌(如卡介苗) 或棒状杆菌。 福氏佐剂可从试剂公司购买，也可用羊毛脂和石蜡油按 1：
抗原抗体反应及其应用 摘要抗原抗体反应指抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反应。免疫印迹，又称蛋白质印迹（Western blotting），是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。双转印法、天然电泳及western blot 分析等是最近几年出现的新型蛋白印迹技术。单克隆抗体技术是20世纪后20年内最为重要的生物高技术之一。单克隆抗体药物在肿瘤治疗、抗感染等方面具有重要的作用。关键词抗原抗体反应、Western blotting、单克隆抗体技术 一、抗原抗体反应 抗原抗体反应指抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反应。这种反应既可在机体内进行，也可以在机体外进行。抗原抗体反应的过程是经过一系列的化学和物理变化，包括抗原抗体特异性结合和非特异性促凝聚两个阶段，以及由亲水胶体转为疏水胶体的变化[1]。抗原是能够刺激机体产生（特异性）免疫应答，并能与免疫应答产物抗体和致敏淋巴细胞在体内外结合，发生免疫效应（特异性反应）的物质。抗原表位是抗原上与抗体结合的区域。蛋白质抗原的表位是由相邻的连续的或非连续的氨基酸序列形成的局部表面结构[2]，如图1所示。抗体是指宿主对体内存在的外来分子、微生物或其他因子的应答而产生的蛋白质。抗体主要由B淋巴细胞系的终末分化细胞-浆细胞产生，并且循环在血液和淋巴液中，在那里与抗原结合。抗体是具有4条多肽链的对称结构，其中2条较长、相对分子量较大的相同的重链(H链)；2条较短、相对分子量较小的相同的轻链(L链)。链间由二硫键和非共价键联结形成一个由4条多肽链构成的单体分子。整个抗体分子可分为恒定区和可变区两部分。抗体上与抗原表位结合的位点由重链和轻链的可变区构成[3]，如图2所示。抗原抗体复合物通过大量非共价键连接。某些免疫复合物中抗体或抗原的结构未发生改变，而另一些则出现巨大的构像改变。研究抗原抗体复合物最有说服力的的方法是抗体-抗原共结晶的X射线衍射技术。
第九章抗原抗体反应 抗原抗体反应（antigen-antibodyreaction）是指抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反应。可发生于体内（invivo），也可发生于体外(invitro)。体内反应可介导吞噬、溶菌、杀菌、中和毒素等作用；体外反应则根据抗原的物理性状、抗体的类型及参与反应的介质（例如电解质、补体、固相载体等）不同，可出现凝集反应、沉淀反应、补体参与的反应及中和反应等各种不同的反应类型。因抗体主要存在于血清中，在抗原或抗体的检测中多采用血清作试验，所以体外抗原抗体反应亦称为血清反应（serologicreaction）。 第一节抗原抗体反应的原理 抗原与抗体能够特异性结合是基于两中分子间的结构互补性与亲和性，这两种特性是由抗原与抗体分子的一级结构决定的。抗原抗体反应可分为两个阶段。第一为抗原与抗体发生特异性结合的阶段，此阶段反应快，仅需几秒至几分钟，但不出现可见反应。第二为可见反应阶段，抗原抗体复合物在环境因素（如电解质、pH、温度、补体）的影响下，进一步交联和聚集，表现为凝集、沉淀、溶解、补体结合介导的生物现象等肉眼可见的反应。此阶段反应慢，往往需要数分钟至数小时。实际上这两个阶段以严格区分，而且两阶段的反应所需时间亦受多种因素和反应条件的影响，若反应开始时抗原抗体浓度较大且两者比较适合，则很快能形成可见反应。 （一）亲水胶体转化为疏水胶体 抗体是球蛋白，大多数抗原亦为蛋白质，它们溶解在水中皆为胶体溶液，不会发生自然沉淀。这种亲水胶体的形成机制是因蛋白质含有大量的氨基和羧基残基，这些残基在溶液中带有电荷，由于静电作用，在蛋白质分子周围出现了带相反电荷的电子云。如在pH7.4时，某蛋白质带负电荷，其周围出现极化的水分子和阳离子，这样就形成了水化层，再加上电荷的相斥，就保证了蛋白质不会自行聚合而产生沉淀。 抗原抗体的结合使电荷减少或消失，电子云也消失，蛋白质由亲水胶体转化为疏水胶体。此时，如再加入电解质，如NaC1，则进一步使疏水胶体物相互靠拢，形成可见的抗原抗体复合物。 （二）抗原抗体结合力 有四种分子间引力参与并促进抗原抗体间的特异性结合。 1．电荷引力（库伦引力或静电引力）这是抗原抗体分子带有相反电荷的氨基和羧基基团之间相互吸引的力。例如，一方在赖氨酸离解层带阳离子化的氨基+），另一方在天门冬氨酸电离后带有阴离子化的羧基（－COO－）时，残基（－NH 3 即可产生静电引力，两者相互吸引，可促进结合。这种引力和两电荷间的距离的平方成反比。两个电荷越接近，静电引力越强。反之，这种引力便很微弱。
单克隆抗体在临床医学上的应用 动物脾脏有上百万种不同的B淋巴细胞系，重排后具有不同基因不同的B淋巴细胞合成不同的抗体。当机体受抗原刺激时，抗原分子上的许多决定簇分别激活各个具有不同基因的B细胞。被激活的B细胞分裂增殖形成效应B细胞（浆细胞）和记忆B细胞，大量的浆细胞克隆合成和分泌大量的抗体分子分布到血液、体液中。如果能选出一个制造一种专一抗体的浆细胞进行培养，就可得到由单细胞经分裂增殖而形成细胞群，即单克隆。单克隆细胞将合成针对一种抗原决定簇的抗体，称为单克隆抗体。 单克隆抗体的特点是：理化性状高度均一、生物活性单一、与抗原结合的特异性强、便于人为处理和质量控制，并且来源容易。 一、作为亲合层析的配体 单克隆抗体能与其相应的抗原特异性结合，因而能够从复杂系统中识别出单个成分。只要得到针对某一成分的单克隆抗体，利用它作为配体，固定在层析柱上，通过亲合层析，即可从复杂的混和物中分离、纯化这一特定成分。 如用抗人绒毛膜促性腺激素(hCG)亲合层析柱，就可从孕妇尿中提取到纯的hCG。与其它提取方法(沉淀法、高效疏水色谱法等)相比，具有简便、快速、经济、产品活性高等优点。 二、作为免疫抑制剂 抗人T淋巴细胞单抗(McAb)作为一种新型免疫抑制剂，已广泛应用于临床治疗自身免疫疾病和抗器官移植的排斥反应。其作用机理有赖于McAb的种类及其免疫学特性。 注射抗小鼠Thy-1抗原的单抗，可以抑制小鼠同种皮肤移植的排斥反应。此外，对用于同种骨髓移植的供体骨髓，在体外经抗T细胞单抗加补体处理，能减轻移植物抗宿主病的发生。 三、作为研究工作中的探针 单克隆抗体只与抗原分子上某一个表位(即抗原决定簇)相结合，利用这一特性就可把它作为研究工作中的探针。此时，可以从分子、细胞和器官的不同水平上，研究抗原物质的结构与功能的关系，进而并可从理论上阐明其机理。 如用荧光物质标记单抗作为探针，能方便地确定与其结合的相应生物大分子(蛋白质、核酸、酶等)在细胞中的位置和分布。 四、增强抗原的免疫原性 抗体对抗原免疫原性的增强作用由来已久，60年代就已发现幼猪对破伤风类毒素难以产生抗体，注射相应特异性抗体IgG，就能有效地提高对委内瑞拉马脑炎病毒的免疫应答。