组织及血液碱性磷酸酶（AKP/ALP）活性检测试剂盒说明书微量法 货号：BC1595 规格：100T/48S 产品说明： AKP/ALP是一种含锌的糖蛋白酶，在碱性环境中可水解各种天然及人工合成的磷脂单酯化合物。AKP/ALP 广泛分布于人体各脏器中，以肝脏为主。在碱性环境中，AKP/ALP催化磷酸苯二钠生成游离酚；酚与4-氨基安替比林和铁氰化钾反应红色亚醌衍生物，在510nm有特征光吸收；通过测定510nm吸光度增加速率，来计算AKP活性。 自备仪器和用品： 紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、台式离心机、水浴锅、可调式移液器和蒸馏水。试剂组成和配制： 试剂一：液体×1瓶，4℃保存。 试剂二：液体×1瓶，4℃避光保存。 试剂三：液体×1瓶，4℃避光保存。 试剂四：液体×1瓶，4℃避光保存，未变成蓝绿色之前均可使用。 标准品：液体×1支（EP管中），2μmol/mL酚标准液，4℃保存。 操作步骤： 一、粗酶液提取： 1.组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂 一）进行冰浴匀浆，4℃、10000rpm离心10min，取上清液待测。 2.血液可直接测定，或者适当稀释后测定。 二、测定步骤： 1.分光光度计预热30min以上，调节波长到510nm，蒸馏水调零。 2.试剂三置于37℃水浴中预热30min以上。 3.空白管：取EP管，加入4μL蒸馏水，40μL试剂二，40μL试剂三，混匀后置于37℃水浴中保温15min；
加入试剂四120μL，混匀后于510nm测定吸光度，记为A空白管。 4.标准管：取EP管，加入4μL标准品，40μL试剂二，40μL试剂三，混匀后置于37℃水浴中保温15min； 加入试剂四120μL，混匀后于510nm测定吸光度，记为A标准管。 5.对照管：取EP管，加入40μL试剂二，40μL试剂三，混匀后置于37℃水浴中保温15min；加入试剂 四120μL，混匀；最后加入4μL上清液，混匀后于510nm测定吸光度，记为A对照管。 6.测定管：取EP管，加入4μL上清液，40μL试剂二，40μL试剂三，混匀后置于37℃水浴中保温15min； 加入试剂四120μL，混匀后于510nm测定吸光度，记为A测定管。 其中标准管和空白管只需做一管，测定管和对照管每个样均需做。 三、AKP/ALP活性计算： a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下 1.血液中AKP/ALP活力计算 活性单位定义：37℃中每毫升血液每分钟催化产生1μmol酚定义为一个活性单位。 AKP/ALP活力(U/mL)=[C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V反总]÷V样×V样总÷T=6.8×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管) C标准品：2μmol/mL；V反总：反应体系总体积（mL），1020μL=1.02mL；V样：加入反应体系中上清液体积（mL），0.020mL；V样总：1mL；T：反应时间（min），15min。 2.组织中AKP/ALP活性计算 （1）按蛋白浓度计算 活性单位定义：37℃中每毫克蛋白每分钟催化产生1μmol酚。 AKP/ALP(U/mg prot)=[C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V反总]÷(Cpr×V样)÷T = 6.8×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷Cpr （2）按样本质量计算 活性单位定义：37℃中每克样品每分钟催化产生1μmol酚。 AKP/ALP(U/g)=[C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V反总]÷(V样÷V样总×W)÷T
货号: QS2002 规格：50管/24样碱性磷酸酶（alkaline phosphatase ，AKP/ALP） 活性测定试剂盒说明书 可见分光光度法 注意：正式测定之前选择 2-3个预期差异大的样本做预测定。 测定意义： AKP/ALP是一种含锌的糖蛋白酶，在碱性环境中可水解各种天然及人工合成的磷脂单酯化合物。AKP/ALP广泛分布于人体各脏器中，以肝脏为主。 测定原理： 在碱性环境中，AKP/ALP催化磷酸苯二钠生成游离酚；酚与4-氨基安替比林和铁氰化钾反应红色亚醌衍生物，在510nm有特征光吸收；通过测定510 nm吸光度增加速率，来计算AKP 活性。 自备仪器和用品： 可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿和蒸馏水。 试剂组成和配制： 试剂一：液体×1瓶，4℃保存。 试剂二：液体×1瓶，4℃避光保存。 试剂三：液体×1瓶，4℃避光保存。 试剂四：液体×1瓶，4℃避光保存，未变成蓝绿色之前均可使用。 标准品：液体×1支（EP管中），2 μ mol/mL酚标准液，4℃保存。 粗酶液提取： 1.组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加 入1mL试剂一）进行冰浴匀浆，4℃、8000g离心10min，取上清液待测。 2.细菌或细胞：按照细菌或细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建 议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。 3.血液可直接测定，或者适当稀释后测定。 测定步骤： 1. 分光光度计预热30min，调节波长到510 nm，蒸馏水调零。 2. 试剂三置于37℃水浴中预热30 min。 3. 空白管：取EP管，加入20μL蒸馏水，200μL试剂二，200μL试剂三，混匀后置于37℃水浴中保温15min；加入试剂四600μL，混匀后于510 nm测定吸光度，记为A空白管。 4. 标准管：取EP管，加入20μL标准品，200μL试剂二，200μL试剂三，混匀后置于37℃水浴中保温15min；加入试剂四600μL，混匀后于510 nm测定吸光度，记为A标准管。 5.对照管：取EP管，加入20μL上清液，200μL蒸馏水，200μL试剂三，混匀后置于37℃水浴中保温15min；加入试剂四600μL，混匀后于510 nm测定吸光度，记为A测定管。 6. 测定管：取EP管，加入20μL上清液，200μL试剂二，200μL试剂三，混匀后置于37℃水浴中保温15min；加入试剂四600μL，混匀后于510 nm测定吸光度，记为A测定管。 第1页，共2页
碱性磷酸酶活性测定 磷酸酶 磷酸酶能酶促有机磷化合物的水解。试验表明，土壤微生物对于土壤含磷有机物的矿化起着主要的作用；某些高等植物的根系也有磷酸酶活性。土壤的磷酸酶活性可以表征土壤的肥力状况（特别是磷的状况）。 基本原理： 土壤磷酸酶活性的测定常用各种磷酸酯作为基质。应用得最多的是酚酞磷酸酯、苯磷酸酯、甘油磷酸酯、ɑ-或?-萘磷酸酯和p-硝基苯磷酸酯等的水溶性钠盐。当它们被酶促水解时，能析出无机磷和基质的有机基团。因此磷酸酶活性的测定时测定基质水解后的无机磷或酚的部分。这里介绍的方法是测定基质水解时生成的酚量。该法可用于测定各种磷酸酶的活性：碱性磷酸酶（用PH10的硼酸盐缓冲液），中性磷酸酶（用PH7.0的柠檬酸盐缓冲液），酸性磷酸酶（用PH5.0的乙酸盐缓冲液） 试剂配制： 1）甲苯 2）0.5% 磷酸苯二钠 3）硼酸盐缓冲液（PH9.6与PH10.0）：称取12.404g硼酸（H3BO3）溶于700ml 去离子水，用稀NaOH溶液调节至PH10.0，用去离子水稀释至1000ml 4) 氯代二溴对苯醌亚胺试剂：取0.125g 2,6-二溴苯醌氯酰亚胺，用10ml 96%的乙醇溶解，贮于棕色瓶中，存放在冰箱里。保存的黄色溶液未变褐色之前均可使用。 5）标准溶液：（a）母液：1g酚溶于蒸馏水中，并稀释至1000ml，溶液保存在暗色瓶中；（b）工作液：10ml溶液（a）稀释至1000ml（1ml含10ug酚）6）0.3%硫酸铝溶液 标准曲线绘制： 取0，1，3，5，7，9，11和13ml酚工作液（b），置于50ml容量瓶中，每瓶加入5ml缓冲液和4滴氯代二溴对苯醌亚胺试剂，显色后稀释至刻度，30min后比色测定。以光密度为纵坐标，浓度为横坐标绘成标准曲线。 操作步骤： 1）取5g风干土置于200ml三角瓶中，用2.5ml甲苯处理 2）处理15min后，加入20ml 0.5%磷酸苯二钠 3）将反应混合物置于37℃恒温箱中，培养24h后，在培养液中加100ml 0.3%硫酸铝溶液用致密滤纸过滤。 4) 无土对照：不加土样，其他操作与样品实验相同。以检验试剂纯度，整个实验设置一个对照 5)无基质对照：对每个土样，设置以等体积的水代替基质，其他操作与样品实验相同。
碱性磷酸酶的分离纯化及比活性与米氏常 数测定 一、实验原理 (1).碱性磷酸酶的分离纯化 1. 机械破碎法制备肝匀浆 低浓度乙酸钠：低渗破膜 低浓度乙酸镁：保护和稳定AKP 2.有机溶剂沉淀法分离纯化AKP 加入不同有机溶剂重复离心 正丁醇：沉淀部分除AKP的蛋白质 33%丙酮、30%乙醇：溶解AKP 50%丙酮、60%乙醇：沉淀AKP (2).比活性测定 1.比活性的定义 *单位重量的蛋白质样品中所含的酶活性单位。 *通常用每毫克蛋白质具有的酶活性单位来表示。 *用以鉴定酶的纯化程度，是酶分离提纯完成的评价指标之一。 2.测定样品的比活性必须测定： *每毫升样品中的酶活性单位数。 *每毫升样品中的蛋白质毫克数。
3.磷酸苯二钠法测定碱性磷酸酶活性反应原理 (3).米氏常数测定 K m 即为米氏常数，V max为最大反应速度 ＊如上式表示,米氏常数是反应速度为最大值的一半时的底物浓度,因此, 米氏常数的单位为mol/L。 当反应速度等于最大速度一半时,即V = 1/2 V max, K m = [S]＊吸光度表示不同底物浓度时的酶反应速度。以吸光度的倒数作纵坐标， 以底物浓度的倒数作横坐标，按Lineweaver-Burk作图法可求出Km 值。
二. 器材 721分光光度计台式离心机恒温水浴锅微量移液器 托盘天平匀浆器试管 三. 试剂 1. 0.5mol/L醋酸镁溶液称取醋酸镁 5.3625g溶于蒸馏水中, 稀释至50ml. 2. 0.1mol/L醋酸钠溶液称取醋酸钠0.0820g溶于蒸馏水
中, 稀释至10ml. 3. 0.01mol/L醋酸镁---醋酸钠溶液取0.5mol/L醋酸镁溶液2ml 及0.1mol/L醋酸钠溶溶液10ml,混合均匀后加蒸馏水稀释至100ml. 4. 丙酮(分析纯). 5. 95%乙醇(分析纯). 6. Tris缓冲液(Ph8.8) 称取Tris 6.05g,用蒸馏水溶解成50ml,为0.1mol/L Tris液,取0.1mol/L Tris液10ml,加0.5mol/L 醋酸镁2ml,加蒸馏水80ml,再用1%醋酸调pH至8.8,然后用蒸馏水稀释至100ml. 7. 0.01mol/L基质液称取磷酸苯二钠(C6H5PO4Na2.2H2o) 0.3g, 4-氨基安替比林0.15g,分别溶于煮沸冷却后的蒸馏水中;两液混合并蒸馏水稀释至50ml,加0.2ml氯仿防腐,盛于棕色瓶中,冰箱内保存,可用一星期; 临用时与等量0.1mol/L pH10的碳酸盐缓冲液混合即可. 8. 0.1mol/L pH10的碳酸盐缓冲液称取无水碳酸钠0.318g 及碳酸氢钠0.168g溶于蒸馏水,稀释至50ml. 9. 碱性溶液量取0.5mol/L氢氧化钠溶液与0.5mol/L碳酸氢钠溶液各20ml,混合后加蒸馏水至100ml.
碱性磷酸酶检测试剂盒(PNP 微板法) 产品简介： 碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase ，简称ALP 或AKP)为一类磷酸酯酶，广泛分布于哺乳动物组织内，其活性所需最适pH 9.2~9.8。此酶主要存在于物质交换活跃之处(细胞膜)，如肠上皮和肾近曲小管的刷状缘、附睾上皮之静纤毛、肝的毛细胆管膜以及微动脉和毛细血管动脉部之内皮，还见于内质网、高尔基复合体、吞饮小泡、肠上皮之溶酶体、中性粒细胞之中性颗粒以及平滑肌的细胞膜。 Leagene 碱性磷酸酶检测试剂盒(PNP 微板法)(Alkaline Phosphatase Colorimetric Assay Kit)采用PNP 比色法，其检测原理是Para-nitrophenyl phosphate (pNPP)为一种常用的磷酸酶显色底物，在酸性条件下，可在碱性磷酸酶的作用下生成p -nitrophenol 。在碱性条件下p -nitrophenol 转变成醌式结构，呈较深的黄色，产物黄色越深，说明碱性磷酸酶活性越高，反之则酶活性越低，通过分光光度比色法测定处吸光度，据此通过比色分析就可以计算出碱性磷酸酶活性水平。该试剂盒可用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清、尿液等样品中内源性的碱性磷酸酶活性。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。 产品组成： 自备材料： 1、 水浴锅或恒温箱 2、 96孔板 3、 酶标仪 操作步骤(仅供参考)： 1、 配制显色工作液： 取出1支pNPP ，恢复至室温后溶解于ALP Assay buffer ，混匀， 冰上预冷备用。新配制的显色工作液应在6h 内用完。 2、 配制标准品工作液：取出p -nitrophenol(10mM)恢复至室温后，取10μl 溶解于190μ 编号 名称 TE0002 100T Storage 试剂(A): ALP Assay buffer 15ml 4℃ 试剂(B): pNPP 2支 -20℃ 避光 试剂(C): p -nitrophenol(10mM) 0.1ml -20℃ 避光 使用说明书 1份
碱性磷酸酶染色液(偶氮偶联法) 简介： 碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase ，简称ALP 或AKP)为一类磷酸酯酶，广泛分布于哺乳动物组织内，其活性所需最适pH 9.2~9.8。碱性磷酸酶染色液(偶氮偶联法)是采用偶氮偶联法(又称同时偶联法)，细胞内碱性磷酸酶可使AB-BI 磷酸盐水解，释放出磷酸与萘酚，后者与偶联重氮盐生成有色产物，定位于细胞质中, 碱性磷酸酶活性部位呈红色，位于胞桨。 组成： 操作步骤(仅供参考)： 1、 血液、骨髓或细胞涂片、冰冻切片、石蜡切片入ALP 固定液固定，水洗。 2、滴加配制好的ALP 孵育液，放入湿盒中，避光孵育，水洗。 3、Lea 苏木素染色液复染或甲基绿染色液复染。 4、水洗、镜检或甘油明胶封固后镜检。 染色结果： 临床意义： 1、 类白血病反应积分明显增高，未经治疗的慢性粒细胞白血病积分明显减低。 2、 急性细菌性感染积分明显增高，病毒性感染积分多正常或减低。 3、 再生障碍性贫血积分常增高，PNH 、MDS 积分常减低。 编号 名称 DE0004 4×2ml DE0004 4×10ml DE0004 4×20ml Storage 试剂(A): ALP 固定液 2ml 10ml 20ml RT 避光 试剂(B): ALP 孵育液 B1: AS-BI 染色液 1ml 5ml 10ml -20℃ 避光 B2: FBB 染色液 1ml 5ml 10ml -20℃ 避光 临用前，按B1:B2=1:1比例混合，即为ALP 孵育液，即配即用。 试剂(C): Lea 苏木素染色液 2ml 10ml 20ml 4℃ 避光 试剂(D): 甲基绿染色液 2ml 10ml 20ml RT 避光 使用说明书 1份 ALP 活性部位 红色 细胞核 蓝色(苏木素)或绿色(甲基绿)
附件1 碱性磷酸酶测定试剂盒注册 技术审查指导原则 （2016年修订版） 本指导原则旨在指导注册申请人对碱性磷酸酶测定试剂盒注册申报资料的准备及撰写，同时也为技术审评部门审评注册申报资料提供参考。 本指导原则是对碱性磷酸酶测定试剂盒的一般要求，申请人应依据产品的具体特性确定其中内容是否适用，若不适用，需具体阐述理由及相应的科学依据，并依据产品的具体特性对注册申报资料的内容进行充实和细化。 本指导原则是供申请人和审查人员使用的指导文件，不涉及注册审批等行政事项，亦不作为法规强制执行，如有能够满足法规要求的其他方法，也可以采用，但应提供详细的研究资料和验证资料。应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。 本指导原则是在现行法规、标准体系及当前认知水平下制定的，随着法规、标准体系的不断完善和科学技术的不断发展，本指导原则相关内容也将适时进行调整。 一、适用范围 碱性磷酸酶测定试剂盒是指基于分光光度法原理对人血
清、血浆或其他体液中的碱性磷酸酶活性进行体外定量测定的试剂。本指导原则适用于进行产品注册和相关许可事项变更的产品。 碱性磷酸酶活性的测定方法目前主要有连续监测法和比色法两类： 1.连续监测法（磷酸对硝基苯酚底物法） 碱性磷酸酶催化水解磷酸对硝基苯酚（4-NPP），生成对硝基苯酚（4-NP），在特定波长处监测吸光度变化速率，可计算碱性磷酸酶活性。 2.比色法（磷酸苯二钠底物法） 碱性磷酸酶催化水解磷酸苯二钠，生成游离酚，酚与4-氨基安替比林结合，经铁氰化钾氧化生成红色的醌衍生物，在特定波长处监测吸光度值，可计算碱性磷酸酶活性。 从方法学考虑，本文主要指以碱性磷酸酶水解底物引起特定产物的吸光度的改变对碱性磷酸酶活性进行定量测定的体外诊断试剂，不包括干化学和酶联免疫检测试剂。 依据《体外诊断试剂注册管理办法》（国家食品药品监督管理总局令第5号）、《食品药品监管总局关于印发体外诊断试剂分类子目录的通知》（食药监械管〔2013〕242号），碱性磷酸酶检测试剂属于酶类检测试剂，管理类别为Ⅱ类，分类代号为6840。 二、注册申报资料要求
5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl Phosphate (5-溴-4-氯-3-吲哚基-磷酸盐), BCIP/NBT （四唑硝基蓝）是碱性磷酸酶底物, 产物为深蓝色, 在碱性磷酸酯酶的催化下，BCIP被水解, 水解产物与NBT发生反应，形成不溶性的深蓝色至蓝紫色的NBT-formazan。 使用方法 1. 在膜或组织切片，最后一次洗涤完毕后，加入适量BCIP/NBT染色工作液 2. 室温避光孵育5-30分钟或更长时间(可长达24小时)，直至显色至预期深度. 3. 用蒸馏水洗涤1-2次即可终止显色反应 4. 膜标本可干燥后避光保存；组织切片或细胞样品，显色反应终止后，可以用中性红复染染色 干细胞成骨诱导的常用染色方法有几种 碱性磷酸酶（ALP）是成熟成骨细胞的标志性酶，同时成骨细胞形成的钙结节也是成骨细胞的标记物。 成骨细胞染色方法 以ALP为目标物的检测方法： 1 Gomori钙钴法 【染色原理】 ALP在pH值9.4的环境下，以镁离子作为激活剂，能够把β-甘油磷酸钠水解出磷酸，磷酸与高浓度的钙盐结合形成无色的磷酸钙，再与硝酸钴作用形成磷酸钴，经硫化胺处理形成黑色的硫化钴沉淀在酶活性处。 【孵育液配制】 3%β-甘油磷酸钠5ml 2%巴比妥钠5ml 蒸馏水10ml 2% CaCl2 10ml 2% MgSO4 1ml 【步骤】 （1）将无菌的玻片放入培养皿中，传代时加入适量的细胞悬液，作细胞爬片，呆细胞长满玻片后取出。 （2）PBS冲洗后用冷丙醇固定10min，蒸馏水冲洗数次。 （3）入孵育液中，37℃孵育4-6h。自来水冲洗数次。 （4）2%硝酸钴中浸3-5min，蒸馏水洗数次。 （5）1%的硫化铵中2min，自来水冲洗，自然干燥，封固。 【结果】胞质中阳性反应呈现灰黑色颗粒或块状沉淀。 2偶氮偶联法： 【孵育液配制】 萘酚AS-BI磷酸盐20mg DMSO 0.5ml 0.2mol/L巴比妥醋酸缓冲液（PH 9.2）50ml 六偶氮副品红0.5ml
碱性磷酸酶测定试剂盒（NPP底物-AMP缓冲液法） 适用范围：本品用于体外定量测定人血清中碱性磷酸酶的活性。 1.1包装规格 1.2产品组成成分 试剂盒由试剂A 、试剂B 组成，各组分见表2。 表2 试剂组成 2.1外观 试剂为澄清、透明溶液，无沉淀及絮状悬浮物，外包装完整无破损。 2.2净含量 用通用量具量取，试剂的净含量应不少于标示量。 2.3试剂空白 2.3.1试剂空白吸光度
用试剂盒测试生理盐水，在405nm的波长下测试，1cm光径下试剂吸光度值不大于0.80。 2.3.2试剂空白吸光度变化率 用试剂盒测试生理盐水，试剂空白吸光度变化率ΔA/min，应不大于0.005。 2.4分析灵敏度 测试一定浓度的碱性磷酸酶，120U/L的碱性磷酸酶引起的吸光度变化率ΔA/min 大于0.024。 2.5线性区间 试剂线性在[25，750] U/L区间内，线性相关系数│r│应不小于0.990，当检测范围在[25，100）U/L区间内，绝对偏差不超过±10U/L；当检测范围在[100，750]U/L区间内，相对偏差不超过±10%。 2.6精密度 2.6.1重复性 用质控品重复测试所得结果的变异系数CV应不大于5%。 2.6.2批间差 用同一水平浓度的质控品分别测试3个不同批号的试剂盒，其相对偏差不大于10%。 2.7准确度 进行比对试验（与国内批准上市的试剂盒进行比对），用线性回归方法计算两组结果的相关系数（│r│应不小于0.990）及每个浓度点的偏差。当测试值在[25，40）U/L区间内，偏差不超过±4 U/L；当测试值在[40，750]U/L区间内，偏差不超过±10%。 2.8稳定性 试剂贮存在2℃～8℃条件下，有效期为18个月。有效期满后，分别检测2.3、2.4、2.5、2.6.1、2.7项，结果符合各项要求。
碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒(磷酸苯二钠微板法) 货号：G5610 有效期：6个月有效。 产品内容： 产品规格 试剂(A):ALP Assay buffer 2.5ml 试剂(B):ALP显色液 2.5ml 试剂(C):显色基液7.5ml 试剂(D):Phenol标准(1mg/ml)1ml 试剂(E):ddH2O1ml 产品说明： 碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase，简称ALP或AKP)为一类磷酸酯酶，广泛分布于哺乳动物组织内，其活性所需最适pH9.2~9.8。此酶主要存在于物质交换活跃之处(细胞膜)，如肠上皮和肾近曲小管的刷状缘、附睾上皮之静纤毛、肝的毛细胆管膜以及微动脉和毛细血管动脉部之内皮，还见于内质网、高尔基复合体、吞饮小泡、肠上皮之溶酶体、中性粒细胞之中性颗粒以及平滑肌的细胞膜。 碱性磷酸酶检测试剂盒(磷酸苯二钠微板法)(Alkaline Phosphatase Colorimetric Assay Kit)采用磷酸苯二钠比色法，其检测原理是磷酸苯二钠在碱性条件下，可在碱性磷酸酶的作用下生成游离酚和磷酸。在碱性条件下酚与氨基安替比林结合，并经氧化生成红色醌式结构物，呈深浅不一的红色，产物红色越深，说明碱性磷酸酶活性越高，反之则酶活性越低，通过酶标仪测定510nm处吸光度，据此通过比色分析就可以计算出碱性磷酸酶活性水平。该试
剂盒可用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清等样品中内源性的碱性磷酸酯酶活性。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。 自备材料： 96孔板、水浴锅或恒温箱、酶标仪 操作步骤(仅供参考)： 1、配制标准品工作液：取出Phenol标准(1mg/ml)恢复至室温后，取0.1ml溶解于1.9ml ddH2O，使浓度达到0.05mg/ml，即为标准品工作液-Phenol(0.05mg/ml)。按照下表稀释系列标准品溶液。 012345 010******** Phenol(0.05mg/ml)(μ l) ddH2O(μl)55453525155 相当于金氏单位(U/L)010******** 2、准备样品： （1）细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如果有必要需进行适当匀浆，低速离心取上清，-80℃冻存，用于碱性磷酸酯酶的检测。 （2）血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，尿液通常也可以直接用于测定，-80℃冻存，但为了消除样品本身颜色的干扰，需设置加了血浆或血清但不加底物的对照。 （3）高活性样品：如果样品中含有较高活性的碱性磷酸酶，可以使用原有的裂解液或PBS 等进行稀释，如鸡血清、血浆可稀释5～10倍后检测。
仅供科研使用版本号：180718 BCIP/NBT碱性磷酸酶显色试剂盒 【产品组成】 【保存条件】 4℃,避光,12个月。 【产品概述】 BCIP/NBT碱性磷酸酯酶显色试剂盒(BCIP/NBT Alkaline Phosphatase Color Development Kit)是一种用于免疫组化显色、Western等膜显色和诱导多功能干细胞iPS鉴定等的试剂盒。BCIP/NBT是碱性磷酸酯酶的常用底物，在碱性磷酸酯酶的催化下，BCIP会被水解产生强反应性的产物，该产物会和NBT发生反应，形成不溶性的深蓝色至蓝紫色的NBT-formazan。 BCIP/NBT Alkaline Phosphatase Color Development Kit可用于细胞或组织的碱性磷酸酯酶显色包括诱导多功能干细胞iPS的鉴定，也可用于Western等结合有碱性磷酸酯酶的膜的显色检测\细胞或组织内源性的碱性磷酸酯酶显色。 【使用方法】 1、对于组织切片或细胞样品或膜，在与碱性磷酸酯酶标记的抗体或其它形式的探针孵育后，用适当洗 涤液洗涤3～5次，每次3～5min。 2、对于检测内源性碱性磷酸酯酶的组织或细胞样品，在适当固定后，也用适当洗涤液洗涤3～5次，每 次3～5min。 3、按照如下比例依次加入各溶液，混匀后即配制成BCIP/NBT染色工作液： 4、洗涤完毕后，去除洗涤液。 5、加入适量BCIP/NBT染色工作液，确保能充分覆盖样品。 5、室温避光孵育5～30min或更长时间(可长达24小时)，直至显色至预期深浅。 6、去除BCIP/NBT染色工作液，用蒸馏水洗涤1～2次即可终止显色反应。 7、对于组织切片或细胞样品，显色反应终止后，如有必要可以用中性红染色液(neutral red staining solution)染色，以便于观察。对于膜，显色反应终止后，可以室温晾干避光保存。
货号: QS2902 规格：50管/48样 土壤碱性磷酸酶活性测定试剂盒 分光光度法 注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。 测定意义： 土壤磷酸酶是一类催化土壤有机磷化合物矿化的酶，其活性的高低直接影响着土壤中有机磷的分解转化及其生物有效性，是评价土壤磷素生物转化方向与强度的指标。土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和pH显著影响。通常按照其最适pH范围，分为碱性、中性和酸性三种类型磷酸酶。 测定原理： 碱性环境中，S-AKP/ALP催化磷酸苯二钠水解生成苯酚和磷酸氢二钠，通过测定酚的生成量即可计算出S-AKP/ALP活性。 自备实验用品及仪器： 可见分光光度计、台式离心机、37℃恒温培养箱、分析天平、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、冰、蒸馏水、无水乙醇和甲苯。 试剂组成和配制： 试剂一：液体×1瓶，4℃避光保存。 试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。用前加50mL蒸馏水充分溶解。 试剂三：液体×1瓶，4℃保存。 试剂四：粉剂×1瓶，4℃避光保存。临用前加1152μL无水乙醇（自备），48 μL蒸馏水充分溶解。（变褐色后不能再使用） 标准品：液体1.5mL×1瓶，0.5μmol/mL苯酚标准液，4℃保存。 催化反应： 称取风干混匀土壤约0.1g，加入50μL甲苯（自备），轻摇15min；加400μL试剂一并且摇匀后，置于37℃恒温培养箱，开始计时，催化反应24h；到时后迅速加入1mL试剂二充分混匀，以终止酶催化的反应。8000g，25℃离心10min，取上清液置于冰上待测。 显色反应： 1. 分光光度计预热30 min，调节波长到660 nm，蒸馏水调零。 2. 空白管：取1mL玻璃比色皿，加入50 μL蒸馏水，100 μL试剂三，20 μL试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水830 μL，混匀后25℃静置30 min，于660 nm测定吸光度，记为A 空白管。 3. 标准管：取1mL玻璃比色皿，加入50 μL标准液，100 μL试剂三，20 μL试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水830 μL，混匀后25℃静置30 min，于660 nm测定吸光度，记为A 标准管。 4. 测定管：取1mL玻璃比色皿，加入50 μL上清液，100 μL试剂三，20 μL试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水830 μL，混匀后25℃静置30 min，于660 nm测定吸光度，记为A 测定管。 注意：空白管和标准管只需测定一次。 第1页，共2页
碱性磷酸酶测定试剂盒（NPP底物-AMP缓冲液法）适用范围：用于体外定量测定人血清中的碱性磷酸酶的含量。1.1 包装规格 包装规格见表1。 表1 包装规格 1.2 主要组成成分 主要组成成分见表2。
表2 主要组成成分 2.1 外观 试剂1为无色澄清液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物； 试剂2为淡黄色澄清液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物； 试剂盒标签标识清晰，外包装完整无损。 2.2 净含量 试剂的净含量应不少于标称量。 2.3 试剂空白 2.3.1 试剂空白吸光度 试剂空白：A405nm（主）/A600nm（副）下测定空白吸光度应≤0.5000。 2.3.2 试剂空白吸光度变化率 用生理盐水作为样品加入试剂测试时，试剂空白吸光度变化率（ΔA/min）应不大于0.005。 2.4 准确度
与已上市产品进行比对试验：在[3，1702] U/L区间内，相关系数r≥0.975，在[3，80]U/L区间内测定的绝对偏差应不超过±8U/L，在(80，1702]U/L区间内测定的相对偏差应不超过±10%。 2.5 分析灵敏度 测试120U/L碱性磷酸酶时，其吸光度变化率在0.0240～0.0480之间。 2.6 线性区间 测试血清样本，试剂线性在[3,1702]U/L区间内： a) 线性相关系数︱r︱应不小于0.990； b) [3,80]U/L区间内，线性绝对偏差应不超过±8U/L；(80,1702]U/L区间内，线性相对偏差应不超过±10%。 2.7 测量精密度 2.7.1 重复性 用血清样品或质控样品重复测试所得结果的重复性（变异系数，CV）应不大于5%。 2.7.2 批间差 随机抽取三批试剂盒的批间相对极差（R）应不大于10%。 2.8 稳定性 试剂盒在2℃～8℃密封避光保存，有效期为18个月。取到效期后的样品检测外观、试剂空白、准确度、线性区间应符合2.1、2.3、2.4、2.6的要求。
抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)检测试剂盒(PNP微板法) 简介： 酸酸性磷酸酶(acid phosphatase，ACP)分布极广泛，遍布各种组织，主要存在于细胞的溶酶体内，所以常作为溶酶体标志酶。溶酶体外的酸性磷酸酶存在于内质网和胞质内，各种动物中的酸性磷酸酶各有不同，酸性磷酸酶的适宜pH为4.5～5.5。存在于正常人肺泡巨噬细胞和白血病人脾脏的抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate-resistnt acid phosphatase，TRAP)均在细胞滤泡中，并不是释放入血液，血液中的TRAP绝大多数来源于破骨细胞，因此可以通过测量血液中的TRAP了解破骨细胞的功能状态，几乎被认为是是机体破骨活性的唯一血液指标。TRAP一种糖基化的含金属蛋白酶，在破骨细胞(osteoclast)和破软骨细胞(chondroclast)中高表达，在活化的巨噬细胞和神经元中也有表达。 Leagene抗酒石酸酸性磷酸酶检测试剂盒(Tartrate Resistnt Acid Phosphatase Colorimetric Assay Kit)检测原理是利用Para-nitrophenyl phosphate(pNPP)为一种常用的磷酸酶显色底物，在酸性条件下，可在酸性磷酸酶的作用下生成p-nitrophenol。在碱性条件下p-nitrophenol呈黄色，产物黄色越深，说明酸性磷酸酶活性越高，反之则酶活性越低，通过分光光度比色法(酶标仪)测定吸光度，据此通过比色分析就可以计算出酸性磷酸酶活性水平。在适量的酒石酸存在的情况下进行酸性磷酸酶的活性检测，检测得到的酸性磷酸酶的活性就是抗酒石酸酸性磷酸酶的活性。该试剂盒可用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清、尿液等样品中内源性的抗酒石酸酸性磷酸酯酶活性。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。 组成： 自备材料： 1、96孔板 2、水浴锅或恒温箱 3、酶标仪编号 名称TE0043 120T Storage 试剂(A): ACP Assay buffer15ml 4℃ 试剂(B): pNPP 2支-20℃避光试剂(C): T artrate Solution 1ml 4℃ 试剂(D): p-nitrophenol(10mM) 0.1ml -20℃避光使用说明书1份
碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒(磷酸苯二钠比色法) 简介： 碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase ，简称ALP 或AKP)为一类磷酸酯酶，广泛分布于哺乳动物组织内，其活性所需最适pH 9.2~9.8。 碱性磷酸酶检测试剂盒(磷酸苯二钠比色法)(Alkaline Phosphatase Colorimetric Assay Kit)采用磷酸苯二钠比色法，其检测原理是磷酸苯二钠在碱性条件下，可在碱性磷酸酶的作用下生成游离酚和磷酸。通过分光光度比色法测定510nm 处吸光度，据此通过比色分析就可以计算出碱性磷酸酶活性水平。该试剂盒可用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清等样品中内源性的碱性磷酸酯酶活性。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。 组成： 操作步骤(仅供参考)： 1、 配制标准品工作液：。按照下表稀释系列标准品溶液。 2、 准备样品： ① 细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如果有必要需进行适当匀浆，低速离 心取上清，-80℃冻存，用于碱性磷酸酯酶的检测。 ② 血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的 测定，尿液通常也可以直接用于测定，-80℃冻存，但为了消除样品本身颜色的干扰，需设置加了血浆或血清但不加底物的对照。 ③ 高活性样品：如果样品中含有较高活性的碱性磷酸酶，可以使用原有的裂解液或 编号 名称 TE0007 50T TE0007 100T Storage 试剂(A): ALP Assay buffer 25ml 50ml 4℃ 避光 试剂(C): 显色基液 75ml 150ml -20℃ 避光 试剂(D): Phenol 标准(1mg/ml) 1ml 2ml RT 试剂(E): ddH 2O 5ml 10ml RT 使用说明书 1份 0 1 2 3 4 5 Phenol(0.05mg/ml)(ml) 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 ddH 2O(ml) 0.55 0.45 0.35 0.25 0.15 0.05 相当于金氏单位(U/L) 10 20 30 40 50
货号：MS2902 规格：100管/96样土壤碱性磷酸酶（S-AKP/ALP）活性测定试剂盒说明书 微量法 注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。 测定意义： 土壤磷酸酶是一类催化土壤有机磷化合物矿化的酶，其活性的高低直接影响着土壤中有机磷的分解转化及其生物有效性，是评价土壤磷素生物转化方向与强度的指标。土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和pH显著影响。通常按照其最适pH范围，分为碱性、中性和酸性三种类型磷酸酶。 测定原理： 碱性环境中，S-AKP/ALP催化磷酸苯二钠水解生成苯酚和磷酸氢二钠，通过测定酚的生成量即可计算出S-AKP/ALP活性。 自备实验用品及仪器： 可见光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、台式离心机、37℃恒温培养箱、分析天平、可调式移液器、冰、蒸馏水、无水乙醇和甲苯。 试剂组成和配制： 试剂一：液体×1瓶，4℃避光保存。 试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。用前加100mL蒸馏水充分溶解。 试剂三：液体×1瓶，4℃保存。 试剂四：粉剂×1支，4℃避光保存。临用前加576μL无水乙醇（自备），24μL蒸馏水充分溶解。（变褐色后不能再使用） 标准品：液体×1支，0.5μmol/mL苯酚标准液，4℃保存。 催化反应： 称取风干混匀土壤约0.1g，加入50μL甲苯（自备），轻摇15min；加400μL试剂一并且摇匀后，置于37℃恒温培养箱，开始计时，催化反应24h；到时后迅速加入1mL试剂二充分混匀，以终止酶催化的反应。8000g，25℃离心10min，取上清液置于冰上待测。 显色反应： 1. 分光光度计/酶标仪预热30 min，调节波长到660 nm，蒸馏水调零。 2. 空白管：取微量玻璃比色皿/酶标板，加入10μL蒸馏水，20μL试剂三，4μL试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水166μL，混匀后25℃静置30 min，于660 nm测定吸光度，记为A 空白管。 3. 标准管：微量玻璃比色皿/酶标板，加入10μL标准液，20μL试剂三，4μL试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水166μL，混匀后25℃静置30 min，于660 nm测定吸光度，记为A 标准管。 4. 测定管：微量玻璃比色皿/酶标板，加入10μL上清液，20μL试剂三，4μL试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水166μL，混匀后25℃静置30 min，于660 nm测定吸光度，记为A 测定管。 注意：空白管和标准管只需测定一次。 第1页，共2页
碱性磷酸酶测定试剂盒(NPP底物-AMP缓冲液法) 适用范围：用于体外定量测定人血清中碱性磷酸酶的活性. 1.1 规格 试剂1:1×60mL，试剂2:1×12mL； 试剂1:1×60mL，试剂2:1×15mL； 试剂1:1×60mL，试剂2:1×20mL； 试剂1:4×60mL，试剂2:4×15mL； 试剂1:2×40mL，试剂2:2×10mL； 试剂1:1×4L，试剂2:1×1L； 试剂1:2×4L，试剂2:1×2L。 1.2 主要组成成分 试剂1主要组分： 试剂2主要组分： 2.1 净含量 应不低于试剂瓶标示装量。 2.2 外观
试剂1：无色或淡黄色透明溶液；试剂2：无色或微黄色溶液。外包装完好、无破损，标签完好、字迹清晰。 2.3 试剂空白 2.3.1 试剂空白吸光度 在405nm处测定试剂空白吸光度，应≤0.5； 2.3.2 试剂空白吸光度变化率 用生理盐水作为样品加入试剂测试时，试剂空白吸光度变化率（△A/min）应不大于0.005。 2.4 分析灵敏度 测试120U/L碱性磷酸酶时，吸光度变化率（ΔA/min）应不低于0.0009。 2.5 准确度 参照CLSI EP9-A2的方法，与比对试剂盒同时测试40例线性范围内的不同浓度的血清样本，其相关系数r2≥0.95。每个浓度点在[25，100]U/L区间内绝对偏差不超过±10U/L；（100,750]U/L区间内相对偏差不超过±10%。 2.6 重复性 用血清样品或质控样品重复测试所得结果的变异系数（CV）应不大于5％。 2.7 线性 2.7.1在[25，750]U/L(37℃)区间内，线性相关系数r应不小于0.990； 2.7.2 [25，100]U/L区间内绝对偏差不超过±10U/L；（100,750]U/L区间内相对偏差不超过±10%。 2.8 批间差
血清碱性磷酸酶测定试剂盒(ALP)安全风险分析报告 1. 总则 血清碱性磷酸酶测定试剂盒(以下简称ALP 测试盒)是一种临床检验体外诊断化学试剂中酶类试剂。因为检查并不在人体内或人体体表上进行，所以不会对受检的患者或人员构成直接的风险。然而，在某些情况下，由于体外诊断试剂有关的危害，导致或促成错误的决定，可构成间接风险。另外，与使用有关的危害及其伴生风险也应给以考虑。本安全风险分析报告主要根据YY/T0316-20xx《医疗器械一风险管理一第一部分风险分析的应用》要求中的附录A《用于判定医疗器械可能影响安全的特征问题》和附录B《体外诊断医疗器械风险分析指南》以及GB7826-87《系统可靠分析技术失效模式和效应分析(FMEA)程序》进行全面的安全风险分析。 2. 有关医疗器械定性和定量的判定 2.1 预期用途和目的 ALP 测试盒是一种体外诊断试剂，是根据生物酶反应和光化学反应的原理，通过测定单位时间内吸光度的变化，实现对样品中ALP 的测定。ALP 测试盒预期用途为用于肝胆和骨骼系统疾病的诊断。
2.2 产品是否与患者或其他人员接触 ALP 测试盒为体外诊断试剂，与患者无接触，一般情况下也不与操作人员皮肤接触。 2.3 产品制造材料安全性 ALP 测试盒，制造原料均为AR级化学分析纯，该试剂盒所使用化学物质均为目前临床生化常规试剂，NaN3有一定毒性但含量极少，其余物质均无毒性，因此在使用试剂盒时应尽量避免接触皮肤等。废瓶、废液处理应符合环保要求。 2.4 是否有能量施加给患者或从患者身上获取 无施加于患者的能量，也不从患者身上获取。 2.5 是否有物质提供患者或从患者身上获取 ALP测定试剂盒不与患者接触，但间接由医务人员从患者身上抽取血液。
使用说明书 【大鼠碱性磷酸酶（ALP）Elisa试剂盒试剂盒名称】 大鼠碱性磷酸酶（ALP）定量检测试剂盒（ELISA） 【大鼠碱性磷酸酶（ALP）Elisa试剂盒试剂盒用途】 定量检测大鼠血清、血浆及相关液体样本中碱性磷酸酶（ALP）的含量。 【大鼠碱性磷酸酶（ALP）Elisa试剂盒检测原理】 本试剂盒采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法（ELISA）。将标准品、待测样本加入到预先包被大鼠碱性磷酸酶（ALP）单克隆抗体透明酶标包被板中，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分，再加入酶标工作液，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分。依次加入底物A、B，底物（TMB）在辣根过氧化物酶（HRP）催化下转化为蓝色产物，在酸的作用下变成黄色，颜色的深浅与样品中大鼠碱性磷酸酶（ALP）浓度呈正相关，450nm波长下测定OD值，根据标准品和样品的OD值，计算样本中大鼠碱性磷酸酶（ALP）含量。 备注：标准品（1号→6号）浓度依次为：40、20、10、5、2.5、1.25 IU/L. 【大鼠碱性磷酸酶（ALP）Elisa试剂盒需要而未提供的试剂和器材】 1、37℃恒温箱 2、标准规格酶标仪 3、精密移液器及一次性吸头 4、蒸馏水 5、一次性试管 6、吸水纸 【大鼠碱性磷酸酶（ALP）Elisa试剂盒操作步骤】 1、准备：从冰箱取出试剂盒，室温复温平衡30分钟。 2、配液：用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。 3、加标准品和待测样本：取足够数量的酶标包被板，固定于框架上，分别设置标准品孔、待测样本孔和空白对照孔，记录各孔位置，在标准品孔中加入标准品50μL；待测样本孔中先加入待测样本10μL，再加样本稀释液40μL（即样本稀释5倍）；空白对照孔不加。 4、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育30min。 5、洗板：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板4次（也可用洗板机按说明书操作洗板）。