Advances in Microbiology 微生物前沿, 2018, 7(1), 26-37
Published Online March 2018 in Hans. https://www.doczj.com/doc/ea8198437.html,/journal/amb
https://https://www.doczj.com/doc/ea8198437.html,/10.12677/amb.2018.71004
Extraction Process of Ganoderma lucidum
Polysaccharides
Yuantao Yin, Qingzhi Yao*
College of Life Science, Inner Mongolia Agriculture University, Huhhot Inner Mongolia
Received: Mar. 5th, 2018; accepted: Mar. 16th, 2018; published: Mar. 23rd, 2018
Abstract
In this paper, the optimum extraction process of two kinds of Ganoderma lucidum polysaccharide was studied, and the content of two kinds of Ganoderma lucidum polysaccharide was compared. The hot water extraction method is used to study the conditions of extracting polysaccharides from Ganoderma lucidum. With taking the polysaccharide yield as the evaluation index, the single factor test and L18
(35) orthogonal test are used to examine the effect of the extraction ratio, pH value, extraction tem-
perature, ethanol concentration and extraction time on the yield of Ganoderma lucidum polysaccha-rides. The optimum processing conditions for Ganoderma lucidum polysaccharides extraction with hot water are determined as that of extraction ratio 1:40, pH 7.5, extraction temperature 90?C, extraction time 1.5 h, and ethanol concentration 90%. The content of Ganoderma lucidum polysaccharide was determined by Sevage method with the removal of free protein and 3,5-Dinitrosalicylic acid (DNS).
Keywords
Ganoderma, Polysaccharide, Extraction, Hot Water Extraction
灵芝多糖提取工艺研究
殷远滔，姚庆智*
内蒙古农业大学生命科学学院，内蒙古呼和浩特
收稿日期：2018年3月5日；录用日期：2018年3月16日；发布日期：2018年3月23日
摘要
本文主要研究了两种灵芝多糖的最佳提取工艺，比较两种灵芝多糖含量的不同。采用热水浸提法对灵芝*通讯作者。
殷远滔，姚庆智多糖的提取工艺条件进行研究，以多糖得率为评价指标,选用单因素试验和L18(35)正交试验法，考察浸提比、pH值、浸提温度、乙醇浓度、浸提时间等5个因素对灵芝多糖得率的影响。确定了热水浸提法提取灵芝多糖的最佳工艺条件是浸提比1:40、pH 7.5、浸提温度90℃、浸提时间1.5 h、乙醇浓度90%。采用Sevage法除游离蛋白,3.5-二硝基水杨酸(DNS)法测定灵芝多糖含量。
关键词
灵芝，多糖，提取工艺，热水浸提法
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1. 引言
灵芝[Ganoderma lucidum(Leyss ex Fr)Karst]又称为赤芝、红芝，俗称瑞草、灵芝草；日本人称之为万年茸，其英文名称为Reishi mushroom。根据卯晓兰主编的《中国大型真菌》描述，灵芝属菌物界、真菌门、担子菌亚门、层菌纲、非褶菌目、灵芝科。灵芝的生活史是由成熟的担孢子离开母体开始，当遇到适宜的温、湿度、营养及空气等条件时，孢子萌发成菌丝体。当灵芝菌丝体达到生理成熟后，遇到适宜的条件，菌丝开始分化，在菌丝体表面开始出现纽结，发育成灵芝子实体原基，最后成为子实体。灵芝的开发经历了简单利用灵芝子实体到以子实体发醇菌丝体为原料提取多糖等活性成分[1]、发展灵芝孢子破壁技术提取孢子内涵物的过程。灵芝为担子菌纲多孔菌科灵芝属真菌。
灵芝主要药效成分为灵芝多糖(Ganoderma lucidium Polysaccharide)，具有多种药理学活性功能及保健养生效果[2][3][4]，目前，对灵芝进行了有效成分、药理和临床等方面的研究，就药理作用而言，灵芝具有多种药理活性成分，其灵芝中包含了多肽、多糖、三萜类、16种氨基酸(其中含有七种人体必需氨基酸)、蛋白质、甾类、甘露醇、香豆精苷、生物碱、有机酸(主含延胡索酸)等10类药理活性成分，以及微量元素Ge、P、Fe、Ca、Mn、Zn等[5][6][7]。而且各药理活性成分在发挥保健及药理作用时各成分之间还体现有协同效应。已从它的子实体、菌丝体和孢子中分离出数十类。灵芝的菌丝体，是其营养体，它是由菌丝体的气生菌丝及分泌物共同组成的一种营养结构。菌丝呈细管状，管壁即细胞壁由葡聚糖、糖蛋白、蛋白质及几丁质微丝等成分组成。子实体灵芝的子实体，是其繁殖体，常因其粘附大量的孢子粉，而使盖面因灰褐色粉末覆盖而失去了光泽[8][9][10]。灵芝在成熟时可产生数百分子孢子，这些孢子飘散在子实体周围似一阵烟雾一样围绕着灵芝子实体，因此称为孢子粉。灵芝孢子是灵芝的种子，浓缩了灵芝的精华，具有灵芝全部遗传活性物质，药理活性成分更具多样性。在电镜下孢子大小，只有8~12*6~7 μm[11]。由于灵芝孢子细胞壁由具有抗压、耐酸和不易酶解的几丁质、树脂和纤维素等成分组成，孢内药理活性成分难以外释，增加了人体对各有效成分的吸收利用难度[12][13][14]，因此采用热水浸提法对灵芝多糖的提取工艺条件进行研究，为灵芝多糖的开发利用提供理论资料和基础技术，它的深入研究和开发将成为中药现代化的一个典范。
2. 实验材料与设备
2.1. 实验材料
赤灵芝粉(林源珍宝参茸销售有限公司)、平盖灵芝粉(白山市名源特产有限公司)。
殷远滔，姚庆智
不同产地的不同种灵芝由于其生长环境、栽培条件的不同，会导致多糖含量的差异。
2.1.1. 主要试剂
主要试剂如表1。
2.1.2. 主要仪器
主要仪器如表2。
2.2. 实验方法
2.2.1. 灵芝多糖提取的工艺流程
灵芝多糖的提取：原料烘干至恒重→索氏提取→热水浸提并调节pH值→离心分离(常温3000 r/min，
20 min)，得上清液→Sevage法脱蛋白→乙醇沉淀→过滤，得沉淀物→干燥得灵芝多糖。
2.2.2. 灵芝多糖提取的操作要点
1) 原料的处理
将灵芝粉用滤纸分批包好，放进索氏提取装置中进行脱脂肪。
注：灵芝要尽量粉碎，不要留大块，以便提取完全。
Table 1. List of experimental drugs
表1. 实验药品清单
实验药品名称规格生产厂家
3.5-二硝基水杨酸化学纯国药集团化学试剂有限公司
酒石酸钾钠分析纯天津市光复科技发展有限公司
亚硫酸钠分析纯北京化工厂
苯酚分析纯国药集团化学试剂有限公司
正丁醇分析纯天津市富宇精细化工有限公司
石油醚分析纯天津天泰精细化学品有限公司
三氯甲烷分析纯北京化工厂
乙醇分析纯天津市富宇精细化工有限公司
氢氧化钠分析纯北京化工厂
盐酸分析纯北京化工厂
葡萄糖标准品分析纯北京化工厂
Table 2. List of experimental instruments
表2. 实验仪器清单
仪器名称型号生产厂家
气浴恒温振荡器THZ-82B 金坛市医疗仪器厂
旋转蒸发器RE 3000D 上海亚荣生化仪器厂
723A可见分光光度计UV762 上海佑科仪器仪表有限公司
低速离心机XiangYi-L-550 北京医疗仪器修理厂
电热鼓风干燥机101—1AB 天津市泰斯特仪器有限公司
电子天平AL104 梅特勒-托利多仪器有限公司
恒温水浴锅02060705-023 余姚市东方电工仪器厂
殷远滔，姚庆智
2) 多糖的浸提
灵芝多糖的浸提法有水浸提、碱法水解、酶解等，在此次实验中，我们通过对热水浸提法的研究选出最佳的浸提方法，在实验中用浸提率的高低为标准来衡量浸提各因素对浸提效果的影响。
在提取时要避免温度浮动，并通过不断搅拌使局部温度不会过度偏高。浓缩水提液时应尽量缩短时间，减少料液受热时间，以减少多糖分解的机会。
3) 蛋白质的去除
灵芝中的蛋白质、胶质、粗纤维及脂肪等成分不利于糖类物质析出。分离之前，必须去除蛋白质。Sevage法脱蛋白：Sevage法是利用蛋白质遇到有机溶剂会变性而不溶于水的特点分离去除蛋白的。
将上述澄清溶液中，加入用氯仿和正丁醇按4:1比例所配制成的Sevage试剂，使溶液产生絮状凝聚物在摇床上45℃下振摇30至40 min，离心1 min，然后将两相分开。再向水相中加入其体积1/3的氯仿–正丁醇，重复操作，直至无乳白色变性蛋白质析出，无凝聚物生成。
注：灵芝多糖在实际提取和应用上，对其产品和色泽无特别要求时，尽量不要去脱色。因为我们在提取多糖的同时也应注重其他有效成分的提取。
4) 醇沉
将乙醇慢慢注入脱蛋白和冷却后的浓缩液中，此时灵芝多糖呈现絮状凝胶物沉淀析出，而大部分的蛋白质和其他成分保留在溶液中，并边加边搅至完全混合均匀，静止过夜。然后过滤，得沉淀物。
2.2.
3. 灵芝多糖提取条件研究
采用热水浸提法对灵芝多糖的提取工艺条件进行优化根据前人研究结果[3]，以多糖得率为评价指标，考察浸提比、pH值、浸提温度、乙醇浓度、浸提时间等5个因素对对灵芝多糖得率的影响，得出最佳提取条件。
1) 采用单因素试验和L18 (35)正交实验设计得出热水浸提最佳条件；
2) Sevage法脱蛋白得多糖样品。
2.3. 灵芝多糖含量测定
测定灵芝多糖含量采用3.5-二硝基水杨酸(DNS)法。取提出的灵芝多糖5 mg，加7.5 mL蒸馏水及5 mL 6 mol/L HCl溶液于50 mL的锥形瓶中，置沸水浴中加热水解30 min。待水解液冷却，定容至50 mL作为总糖测试液。另取5 mg多糖配置单糖供试液。其他操作与制作标准曲线相同。
2.3.1. 配制标准葡萄糖溶液
取一定量的葡萄糖放入烘箱中，105℃干燥至恒质量，冷却后，精确称取50 mg，定容至500 mL，即为0.1 mg/mL的标准液。
2.3.2. 配制显色剂DNS溶液
将6.3 g 3.5-二硝基水杨酸(DNS)溶于262 mL 2 mol/L NaOH溶液中，将此溶液与500 mL含有182.0 g 酒石酸钾钠的热水(不超过50℃)混合，向该溶液中再加入5.0 g重蒸酚和5.0 g亚硫酸钠，充分搅拌使之溶解，待溶液冷却后，以蒸馏水稀释到1000 mL储存于棕色瓶中(在冰箱中放置1周后方可使用)。
注：3.5-二硝基水杨酸和NaOH加入的时间要很接近，或者先加入NaOH，否则将产生难容的沉淀，导致溶液配置失败。
2.3.3. 制作葡萄糖标准曲线
取6支20 mL具塞刻度试管，编好号后，按表3分别加入0.1 mg/mL葡萄糖标准溶液、蒸馏水和DNS 试剂，配成不同葡萄糖含量的反应液。
殷远滔，姚庆智
Table 3. Glucose standard curve reagent table
表3. 葡萄糖标准曲线试剂表
0 0 2 1.5 0 0
1 0.
2 1.8 1.5 0.2 0.231
2 0.4 1.6 1.5 0.4 0.504
3 0.6 1.
4 1.
5 0.
6 0.775
4 0.8 1.2 1.
5 0.8 1.095
5 1.0 1.0 1.5 1.0 1.353
将各管摇匀，在沸水浴中准确加热5 min，取出，冷却至室温，用蒸馏水定容至20 mL，加塞后颠倒混匀，在分光光度计上进行比色。调波长540 nm，用0号管调零，测出1~5号管的吸光度。以吸光度为纵坐标，葡萄糖含量(mg)为横坐标，绘制葡萄糖标准曲线。
2.4. 灵芝多糖提取的单因素分析方法
2.4.1. 材料预处理
分别称取灵芝粉2 g，放入编号的三角瓶中，加蒸馏水，使其组织软化，备用。
2.4.2. 不同浸提比提取灵芝多糖方法
取5个三角瓶，按表4的浸提比加蒸馏水(以干品重量计) pH 7下置于90℃恒温水浴锅中浸提2 h，3000 r/min离心20 min，弃沉淀留上清液，加入约1/3原体积的Sevage试剂，置于气浴恒温振荡器中45℃振荡30 min，取上清，再加4倍于热水浓缩后体积的95%乙醇，醇析24 h，过滤得到粗多糖。
2.4.
3. 不同pH值提取灵芝多糖方法
取5个三角瓶，以1:30浸提比加蒸馏水(以干品重量计)，按表4调pH值，置于90℃恒温水浴锅中浸提2 h，离心、脱蛋白、浓缩、醇析、过滤，得到粗多糖。
2.4.4. 不同浸提温度提取灵芝多糖方法
取5个三角瓶，以1:30的浸提比加蒸馏水(以干品重量计)，pH 7下置于不同温度下(见表4)恒温水浴浸提2 h，离心、脱蛋白、浓缩、醇析、过滤，得到粗多糖。
2.4.5. 不同浸提时间提取灵芝多糖方法
取5个三角瓶，按1:30的浸提比(以干品重量计)、pH 7下置下90℃恒温水浴锅中浸提不同时间(见表4)，离心、脱蛋白、浓缩、醇析、过滤，得到粗多糖。
2.4.6. 不同乙醇浓度提取灵芝多糖方法
取5个三角瓶，按1:30的浸提比加蒸馏水(以干品重量计)，pH 7下置于90℃恒温水浴锅中浸提2 h，离心、脱蛋白、浓缩，再加4倍于浓缩后体积的不同浓度乙醇(见表4)醇析24 h，再过滤，得到粗多糖。
2.5. 正交试验方法
本实验通过对各单因素影响灵芝多糖提取效果的分析，确定正交试验的因素和水平(表5)。采用热水浸提法提取多糖，对实验结果进行极差分析，确定灵芝最佳的提取工艺。实验数据用Microsoft Excel 2007进行统计分析。
殷远滔，姚庆智
Table 4. The single factor extraction conditions of Ganoderma lucidum polysaccharides 表4. 灵芝多糖的单因素提取条件
提取因素 因素水平
多糖提取条件
pH 值 6.0、6.5、7.0、7.5、8.0 浸提温度90℃、浸提时间2 h 、乙醇浓度95%、浸提比1:30
浸提温度 60℃、70℃、80℃、90℃、100℃ pH 7、浸提时间2 h 、乙醇浓度95%、浸提比1:30 浸提时间 1 h 、1.5 h 、2 h 、2.5 h 、3 h pH 7、浸提温度90℃、乙醇浓度95%、浸提比1:30 乙醇浓度 80%、85%、90%、95%、100% pH 7、浸提温度90℃、浸提时间2 h 、浸提比1:30 浸提比
1:10、1:20、1:30、1:40、1:50
pH 7、浸提温度90℃、浸提时间2 h 、乙醇浓度95%
Table 5. Extraction of Polysaccharides from Ganoderma lucidum 表5. 提取灵芝多糖因素水平
水平 A pH 值 B
浸提时间(h)
C
浸提温度(℃)
D
乙醇浓度(%)
E 浸提比 1 6.5 1.5 70 85 1:20 2 7.0 2.0 80 90 1:30 3
7.5
2.5
90
95
1:40
3. 结果与分析
3.1. 影响灵芝多糖提取的单因素分析
3.1.1. 计算多糖的含量及得率
将粗多糖沉淀物置于60℃干燥至恒重。按以下公式计算
()21mg C C =?样品多糖含量 式3-1
式中C 1为葡萄糖含量(mg)；C 2为总糖含量(mg) (图1)。
()()
mg mg 5100%1000
×
=
××提出粗多糖量样品溶液多糖含量多糖得率灵芝干粉量 式3-2
3.1.2. 不同浸提比对灵芝多糖提取的影响
用不同的浸提比进行提取效果比较，结果见表6和图2。从图2看出随着浸提比的增加多糖得率提高，最后曲线出现一个高峰，即在1:40，这是由于当浸提比小于1:40时增加水分更有利于多糖的浸出，达到一定值之后无影响。从实验结果考虑，选取1:20，1:30，1:40三个浸提比作为正交试验浸提比的三个水平。
3.1.3. 不同pH 值对灵芝多糖提取的影响
调节不同的pH 值，提取灵芝多糖。从图3和表7看出，在pH 7.0时多糖得率最高，达0.41%，pH < 7.0多糖得率随着pH 值升高呈上升趋势，在pH > 7.5以后，多糖得率则随pH 值升高呈下降趋势。这是由于灵芝多糖大多是碱性多糖根据相似相溶原理碱性环境有利于多糖浸出，多糖提取率较高，但当碱性过强时浸提液呈粘性不利于过滤导致多糖得率降低。对比它们的多糖含量进行分析，在pH 7.0时多糖含量最高，在pH > 7.0以后，多糖含量均较高，故选取pH 6.5、7.0、7.5三值作为正交试验pH 值的因素水平。
殷远滔，姚庆智
Figure 1. Glucose standard curve
图1. 葡萄糖标准曲线
注：图表中(1)为赤灵芝，(2)为平盖灵芝。图像分析以赤灵芝多糖例。
以下同是。
Figure 2. The polysaccharide content of different extraction
ratio
图2.不同浸提比的多糖含量
Figure 3. Polysaccharide content of different pH values
图3. 不同pH值的多糖含量
殷远滔，姚庆智Table 6. Effect of different extraction ratio of polysaccharide content
表6. 不同浸提比对多糖含量的影响
试验号浸提比(1)灵芝多糖含量(mg) (2)灵芝多糖含量(mg) (1)多糖得率(%)
1 1:10 0.2727 0.1276 0.44
2 1:20 0.2910 0.1488 0.47
3 1:30 0.3148 0.2389 0.51
4 1:40 0.3163 0.2488 0.52
5 1:50 0.3170 0.2141 0.52
Table 7. Effect of different pH on the content of polysaccharide
表7. 不同pH对多糖含量的影响
试验号pH值(1)灵芝多糖含量(mg) (2)灵芝多糖含量(mg) (1)多糖得率(%)
1 6 0.2391 0.1571 0.35
2 6.5 0.2480 0.207
3 0.37
3 7 0.273
4 0.2202 0.41
4 7.
5 0.2712 0.2242 0.41
5 8 0.2661 0.202
6 0.39
3.1.
4. 不同浸提温度对灵芝多糖提取的影响
温度的高低直接影响多糖提取率。以不同的温度提取灵芝多糖。由实验结果(见图4、表8)得知，浸提温度为80℃、90℃多糖量均较高，分别达0.41%、0.42%，但100℃提取率明显下降，出现此现象的原因可能是高温对多糖的结构与活性有一定的影响，100℃时多糖容易分解产生单糖而溶解在浓乙醇中进而影响多糖的提取率，从多糖含量看，90℃时所得多糖含量也较高，因此取70℃、80℃、90℃为正交试验浸提温度的三个水平。
3.1.5. 不同浸提时间对灵芝多糖提取的影响
以不同的浸提时间提取灵芝多糖，结果见图5和表9。从曲线走势看到，浸提2 h时，多糖得率高达0.62%，以后增加较为平缓，多糖提取率几乎保持不变。可能由于加热时间过长，促进多糖的溶解使得提取率增大，但是加热时间过长提取率无明显变化，因此提取时间选择由此确定1.5 h，2 h，2.5 h作为正交试验浸提时间因素的三个水平。
3.1.6. 不同乙醇浓度对灵芝多糖提取的影响
用乙醇沉淀法提取多糖时，乙醇的浓度对多糖的含量影响最大。图6、表10结果显示，低浓度的醇析效果不佳，多糖得率低，多糖含量也低,当乙醇浓度达95%时，醇析效果最好，多糖含量最高，100%乙醇时多糖含量也较高，但从经济、实验成本角度考虑，不宜选用100%乙醇，乙醇浓度为85%和90%时的多糖得率和含量都明显高于80%的提取效果。选取85%、90%、95%三个数据作为正交试验乙醇浓度因素的三个水平。
3.2. 灵芝多糖提取工艺的优化
为了提高在多因素条件下灵芝多糖的提取率，我们在单因素试验的基础上进行多因素正交试验，以优化提取工艺。结合3.2的试验结果和分析，我们采用五因素三水平L18(35)正交法进行正交试验。采用热水浸提法，提取灵芝多糖，结果见表11。
殷远滔，姚庆智
Figure 4. The content of polysaccharide in different extrac-
tion temperatures
图4.不同浸提温度的多糖含量
Figure 5.Polysaccharide content of different extraction
times
图5. 不同浸提时间的多糖含量
Figure 6. The content of polysaccharides in different ethanol
concentrations
图6. 不同乙醇浓度的多糖含量
殷远滔，姚庆智Table 8. Influence of different extraction temperatures on polysaccharide content
表8. 不同浸提温度对多糖含量的影响
试验号浸提温度(℃) (1)灵芝多糖含量(mg) (2)灵芝多糖含量(mg) (1)多糖得率(%)
1 60 0.2443 0.1583 0.35
2 70 0.2574 0.1617 0.38
3 80 0.2755 0.1635 0.41
4 90 0.2799 0.1648 0.42
5 100 0.2785 0.1609 0.40
Table 9. Effect of different extraction time on polysaccharide content
表9. 不同浸提时间对多糖含量的影响
试验号浸提时间(h) (1)灵芝多糖含量(mg) (2)灵芝多糖含量(mg) (1)多糖得率(%)
1 1 0.3206 0.2531 0.55
2 1.5 0.3388 0.2627 0.59
3 2 0.3527 0.2652 0.62
4 2.
5 0.3548 0.2648 0.63
5 3 0.3591 0.2614 0.63
Table 10. The effect of different ethanol concentration on the content of polysaccharide
表10. 不同乙醇浓度对多糖含量的影响
试验号乙醇浓度(%) (1)灵芝多糖含量(mg) (2)灵芝多糖含量(mg) (1)多糖得率(%)
1 80 0.2024 0.1248 0.29
2 85 0.2188 0.1387 0.31
3 90 0.2247 0.1659 0.32
4 9
5 0.235
6 0.1846 0.34
5 100 0.2312 0.1538 0.32
Table 11. L18 (35) orthogonal test scheme and test results
表11. L18(35)正交试验方案及试验结果
试验号 A B C D E (1)多糖含量(mg) (1)多糖得率(%)
1 1 1 1 1 1 0.3189 0.509
2 1 2 2 2 2 0.3538 0.626
3 1 3 3 3 3 0.3799 0.722
4 2 1 1 2 2 0.3471 0.603
5 2 2 2 3 3 0.387
6 0.751
6 2 3 3 1 1 0.3706 0.687
7 3 1 2 1 3 0.3537 0.626
8 3 2 3 2 1 0.3918 0.768
9 3 3 1 3 2 0.3789 0.721
殷远滔，姚庆智
Continued
10 1 1 3 3 2 0.3857 0.744
11 1 2 1 1 3 0.3506 0.615
12 1 3 2 2 1 0.3897 0.760
13 2 1 2 3 1 0.3912 0.765
14 2 2 3 1 2 0.3554 0.632
15 2 3 1 2 3 0.3302 0.545
16 3 1 3 2 3 0.3958 0.775
17 3 2 1 3 1 0.3756 0.705
18 3 3 2 1 2 0.3679 0.677
K0.663 0.670 0.616 0.624 0.691
1
K0.664 0.683 0.701 0.679 0.655
2
K0.712 0.685 0.721 0.735 0.672
3
极差R 0.049 0.015 0.105 0.111 0.032
由正交试验结果可知，极差R愈大的因素对指标的影响愈显著，即影响灵芝多糖提取率因素大小依次是D (乙醇浓度)、C (浸提温度)、E (浸提比)、A (pH值)、B (浸取时间)，其中乙醇浓度和浸提温度是主要因素，浸提时间对多糖提取的影响最小。正交试验结果显示，18组实验中，第16组灵芝多糖得率最高为0.775%，提取条件是A3B1C3D2E3，即pH 7.5，浸取时间1.5 h，浸取温度90℃，乙醇浓度90%，浸提比1:40。
4. 结论
本实验采用热水浸提法对灵芝多糖进行提取，对影响多糖得率的各种因素分析，得出最佳工艺条件为：pH 7.5，浸取温度90℃，乙醇浓度90%，浸提比1:40，浸提时间为1.5 h。最优条件下多糖提取量为
0.775%。
由各因素分析表中看出，不管哪个因素影响，结果表明赤灵芝粉中多糖含量多于平盖灵芝粉中的多糖，不同产地的不同种灵芝由于其生长环境、栽培条件的不同，会导致多糖含量的差异，对于灵芝多糖的提取有待进一步的研究。
参考文献
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灵芝多糖检测方法 1、蒽酮-硫酸法 该法为《中国人民共和国药典》规定方法，其原理是糖类遇浓硫酸脱水生成糠醛或其衍生物，可与蒽酮试剂缩合而显色，其显色的深浅与灵芝多糖含量呈线性关系。 【对照品溶液的制备】精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖对照品适量，加水制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。 【标准曲线的制备】分布精密吸取对照品溶液0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml、和1.2ml，置于10ml具塞试管中，加水至2.0ml，精密加入硫酸蒽酮溶液（精密称取蒽酮0.1g，加80%的硫酸溶液100ml使溶解、摇匀）6ml，摇匀，置水浴中加热15分钟，取出，放入冰浴中冷却15分钟，以相应的试剂为白色，在紫外-可见分光光度计上，于625nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。 【供试品溶液的制备】精确称定灵芝粉末1g，置蒸馏瓶中，加水40ml，沸水回流提取1小时，重复1次，两次提取液均转移至100ml容量瓶中，定容，摇匀。取40ml加200ml无水乙醇沉淀，过夜。4000rpm离心20分钟。沉淀定容至50ml，摇匀。 【样品测定】精确量取供试品溶液2ml，置10ml具塞试管中，照标准曲线制备项下的方法，自“精密加入硫酸蒽酮溶液6ml”起，依法测定吸光度。 【换算因子的测定】精密称取GL-pp10.3mg与10.4mg，分别置于100ml 容量瓶中加蒸馏水定容至刻度，作为多糖供试液。精密吸取2ml，按照标准曲线项下的方法测定吸光度，计算出多糖溶液中葡萄糖含量的平均值，并计算出换算因子：f=W/CD，式中W为多糖量（ug），C为多糖溶液中葡萄糖含量，D 为多糖的稀释因素。 测定结果为f=2.0428（n=6） 【计算】S=f×n/N×100% S—灵芝子实体中多糖百分含量； n—从标准曲线上读出供试品溶液中多糖浓度（以标准葡萄糖计）； N—供试品溶液浓度； f—换算因子； 2、苯酚-硫酸法
不同生长期白术多糖的含量测定 （作者:___________单位: ___________邮编: ___________） 【摘要】目的比较不同生长期白术多糖含量的动态变化，确定白术的最佳采收时期，为白术多糖的开发利用提供依据。方法用乙醇去杂和水回流提取白术多糖，于489 nm波长处用苯酚-硫酸比色法测定其含量。结果不同生长期白术多糖变化较大，其中9月底到10月底时期白术多糖的含量最高。结论以白术多糖含量为指标，不同生长期白术的最佳采收期为9月底到10月底。 【关键词】白术; 不同生长期; 多糖; 含量测定 白术(Rhizoma Atractylodis Macrocephalae)为菊科(Compositae)植物白术Atractylodes macrocephala Koidz的干燥根茎。白术为多年生草本, 栽培历史悠久,主产中国浙江省东阳、磐安一带, 是著名的道地中药材“浙八味”之一[1]，分布于浙江、江西、湖南、湖北、陕西，亦多栽培[2]。近几年以来,中国对白术的需求量大增,居全国大宗常用中药材之首。其含有白术多糖、挥发油、氨基酸等多种有效成分[3～6]，中药多糖具有增强机体免疫功能及抗肿瘤等药理作用[7～9],而且几乎没有毒性。但目前对白术多糖的含量测定报道还较少。因此可采
用一种方法提取不同时期白术中多糖类成分，应用硫酸-苯酚比色法测定其含量[10,11]，分析并对其进行比较，考察出多糖类成分的含量特征，为确定最佳采收期、种植条件打下基础，也为白术多糖的开发应用提供参考。 1 材料、仪器与试剂 1.1 材料样品采集于浙江林学院试验地百草园，从4月份采样至10月份，每半个月一次，有4月21日，5月5日，5月18日，6月3日，6月17日，7月7日，7月24日，8月6日，8月27日，9月10日，9月25日，10月12日，10月26日共13批样品，分别对其不同药用部位进行分离，标记分装，干燥，每批取样5份，洗净，减压干燥，粉碎，再分装干燥储存得到。 1.2 仪器UV-2501型紫外可见分光光度计(日本SHIMADZU)。 1.3 试剂乙醇，无水乙醇，苯酚，硫酸(均为分析纯);对照品葡萄糖(含量测定专用)。 2 方法与结果 2.1 多糖的精制称取切片白术200 g加6倍量70%乙醇→回流2次(每次2 h)→抽滤→药渣加8倍量水→煎煮3次(每次1.5 h)→合并水煎液浓缩至400 ml→静置→上清液加乙醇调至70%静置→抽滤→沉淀加蒸馏水溶解，在上清液中加乙醇调至70%，静置→抽滤，沉淀用无水乙醇洗涤→60℃真空干燥，即得精制多糖。 2.2 样品溶液的配制准确称取0.2 g白术药材粉末加70%乙醇50 ml置锥形瓶中→冷浸2 h →超声20 min→抽滤→药渣挥干后
灵芝多糖 灵芝属真菌具有很高的药用价值从而得到广泛的研究与应用,而多糖类化合物是灵芝属真菌的主要化学成分之一。灵芝多糖结构如分子量、单糖组成和糖苷键类型等，对其活性影响很大，本文列举了灵芝多糖结构通用的检测方法。已有实验证实，灵芝多糖的生物保健功能主要体现在降血糖、降血脂、抗肿瘤、提高免疫力和抗氧化方面。 灵芝是担子菌门担子菌纲多孔菌科灵芝属药用真菌，古代就认为其有扶正固本、滋补强壮的功效，对其药性十分推崇。灵芝类所含化学成分复杂,且因所用菌种培养方法、提取方法等不同而异.研究灵芝类的化学成分的目的,在于了解和比较灵芝属不同品种及同一品种的不同发育阶段(如子实体、菌丝体、孢子体)所含的化学成分,通过药理及临床研究确定其有效成分或有效部分.目前研究较多的灵芝化学成分主要有:三萜类化合物、多糖类、核苷类、甾醇类、生物碱类、呋喃衍生物、氨基酸多肽类、无机元素、脂肪酸等现代科学检测表明，灵芝在免疫系统的调节、通过增强宿主免疫调节功能达到抗肿瘤作用、抗病毒作用、通过提高氧化酶活性而清除体内自由基达到抗衰老的作用、降血脂等方面有着极其重要的医学作用。随着近年来对灵芝研究的不断深入，发现灵芝多糖是灵芝的主要活性物质之一，其重要性不言而喻。本文综述了近年来国内外对灵芝多糖的主要研究进展。 灵芝多糖的结构 如同其他的生物活性大分子，灵芝多糖的生物活性依赖于化学结构，因此，要研究灵芝多糖生物活性的机理，不可避免的要研究其化学结构。对灵芝多糖的化学结构的研究，主要集中于其单糖的组成、多糖分子量范围、单糖连接方式等方面。 近年来，随着研究的不断深入，对灵芝多糖的化学结构已经有了一定的了解。虽然灵芝多糖化学结构由于灵芝种类的不同而有所差异，但其化学结构的某些方面是固定不变的。 灵芝多糖的组成
1.多糖的提取方法 生物活性多糖主要有真菌多糖、植物多糖、动物多糖3 大类。多糖的提取首先要根据多糖的存在形式及提取部位，决定在提取之前是否做预处理。动物多糖和微生物多糖多有脂质包围，一般需要先加入丙酮、乙醚、乙醇或乙醇乙醚的混合液进行回流脱脂，释放多糖。植物多糖提取时需注意一些含脂较高的根、茎、叶、花、果及种子类，在提取前，应先用低极性的有机溶剂对原料进行脱脂预处理，目前多糖的提取方法主要有溶剂提取法、生物提取法、强化提取法等。1．1溶剂法 1．1．1水提醇沉法 水提醇沉法是提取多糖最常用的一种方法。多糖是极性大分子化合物，提取时应选择 水、醇等极性强的溶剂。用水作溶剂来提取多糖时，可以用热水浸煮提取，也可以用冷水浸提渗滤，然后将提取液浓缩后，在浓缩液中加乙醇，使其最终体积分数达到70 %左右，利用多糖不溶于乙醇的性质，使多糖从提取液中沉淀出来，室温静置 5 h，多糖的质量分数和得率均较高。影响多糖提取率的因素有：水的用量、提取温度、浸提固液比、提取时间以及提取次数等。 水提醇沉法提取多糖不需特殊设备，生产工艺成本低，安全，适合工业化大生产，是一种可取的提取方法。但由于水的极性大，容易把蛋白质、苷类等水溶性的成分浸提出来，从而使提取液存放时腐败变质，为后续的分离带来困难，且该法提取比较耗时，提取率也不高。 1．1．2酸提法 为了提高多糖的提取率，在水提醇沉法的基础上发展了酸提取法。如某些含葡萄糖醛酸等酸性基团的多糖在较低pH 值下难以溶解，可用乙酸或盐酸使提取液成酸性，再加乙醇使多糖沉淀析出，也可加入铜盐等生成不溶性络合物或盐类沉淀而析出。 由于H＋的存在抑制了酸性杂质的溶出，稀酸提取法提取得到的多糖产品纯度相对较高，但在酸性条件下可能引起多糖中糖苷键的断裂，且酸会对容器造成腐蚀，除弱酸外，一般不宜采用。因此酸提法也存在一定的不足之处。 1．1．3碱提法 多糖在碱性溶液中稳定，碱有利于酸性多糖的浸出，可提高多糖的收率，缩短提取时间，但提取液中含有其它杂质，使粘度过大，过滤困难，且浸提液有较浓的碱味，溶液颜色呈黄色，这样会影响成品的风味和色泽。 1．1．4超临界流体萃取法 超临界流体萃取技术是近年来发展起来的一种新的提取分离技术。超临界流 体是指物质处于临界温度和临界压力以上时的状态，这种流体兼有液体和气体的特点，密度大，粘稠度小，有极高的溶解，渗透到提取材料的基质中，发挥非常有效的萃取功能。而且这种溶解能力随着压力的升高而增大，提取结束后，再通过减压将其释放出来，具有保持有效成分的活性和无溶剂残留等优点。由于CO2的超临界条件（TC＝304．6 ℃，Tp＝7．38 MPa）容易达到，常用于超临界萃取的溶剂，在压力为8～40 MPa 时的超临界CO2足以溶解任何非极性、中极性化合物，在加入改性剂后则可溶解极性化物。 该法的缺点是设备复杂，运行成本高，提取范围有限。 1．2酶解法 1．2．1单一酶解法 单一酶解法指的是使用一种酶来提取多糖，从而提高提取率的生物技术。其中经常使 用的酶有蛋白酶、纤维素酶等。蛋白酶对植物细胞中游离的蛋白质具有分解作用，使其结构变得松散；蛋白酶还会使糖蛋白和蛋白聚糖中游离的蛋白质水解，降低它们对原料的结合力，有利于多糖的浸出。
0引言 灵芝为多孔菌科真菌赤芝或紫芝的干燥子实体，素有“仙草”之美誉[1]。古今药理与临床研究均证明，灵芝有防病治病延年益寿之功效。而灵芝多糖是灵芝的主要活性成分，具有免疫调节、抗肿瘤、抗氧化、抗辐射、抗衰老以及活血化瘀等广泛的药理活性[2-5],因此灵芝多糖也是目前灵芝研究的一个热点。 灵芝多糖存在于子实体的细胞壁内壁，而子实体结构紧密，在提取过程中传质阻力比较大，且灵芝多糖相对分子量很大，仅靠单纯的扩散原理的传统提取方法的提取效率较低。而酶法是一种通过酶解破坏细胞结构来强化有效成分的传质过程，能最大限度提取中药有效成分的方法[6]，越来越受到重视。故本试验选取灵芝作为酶法提取的对象，试图破坏灵芝的细胞壁结构，来提高灵芝多糖提取效率，对于实际应用有着现实的意义。 1仪器与试药 HY-02型高速粉碎机（北京环亚天元机械技术有限公司），上海菁华754分光光度计，电子天平，HH-S型恒温水浴锅（江苏国盛实验仪器厂），循环式多用真空泵SHZ-IIIB（临海市谭氏真空设备有限公司）。 灵芝子实体（江苏农林职业技术学院食用菌研究所）；纤维素酶活力≥400U/mg；浓硫酸、苯酚、无水葡萄糖、乙醇均为国产分析纯。 2方法与结果 2.1多糖的提取方法 干燥的灵芝切片在高速粉碎机下粉碎至一定粒度，精密称取0.25g的灵芝粉及适量的纤维素酶加入去离子水在一定温度水浴下进行酶解提取，后在沸水浴中灭酶4分钟，抽滤得提取液。 2.2多糖的含量测定方法 2.2.1还原糖的测定-DNS法[7] 2.2.1.1试液的制备 对照溶液的制备：精确称取在105℃干燥至恒重的葡萄糖对照品25mg，置100ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀即得。 样品溶液的制备：灵芝多糖提取液定容至100ml，移取50ml减压蒸馏浓缩后加蒸馏水至10ml，备用。 2.2.1.2样品还原糖的测定方法 精密吸取样品液1ml，对照品溶液1ml，分别置于25ml容量瓶中，各加1.5mlDNS试剂，摇匀置沸水浴中加热5min，迅速用凉水冷却。分别加水至刻度，摇匀。以水1ml按同样方法操作所得溶液作空白，在520nm分别测定吸光度值。 2.2.1.3样品还原糖量的计算方法 还原糖量=样品液吸光度值×每ml对照品中所含糖的克数×样品稀释倍数 标准品吸光度值 2.2.2总糖含量的测定—苯酚-硫酸法 2.2.2.1试液的制备 5%苯酚溶液的制备：精密称取5g苯酚(重蒸馏)，加水使之溶解，定容至100ml，棕色瓶保存。 对照品溶液的制备：精密称取10mg干燥至恒重的无水葡萄糖,加水使之溶解，定容至100ml，即得0.1mg/ml葡萄糖对照品溶液。 2.2.2.2标准曲线的绘制 分别精密量取0.1mg/ml葡萄糖对照品溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml置于25ml比色管中，一次添加水至1.0ml，加入5%的苯酚1.0ml，摇匀，加入6.0ml的浓硫酸，迅速振摇混匀，于室温放置30min 后490nm处测吸光度。以葡萄糖溶液的浓度mg/ml为横坐标，吸光度A 为纵坐标，绘制标准曲线。求得标准曲线回归方程为y=6.9650x+0.0057，r=0.9999，在0.02-0.10mg/ml范围内，葡萄糖曲线C与吸光度A线性关系良好。 2．2.2.3样品溶液总糖浓度的测定 将得到的提取溶液定容到100ml，精密移取2.0ml稀释定容至50ml，取1.0ml稀释液于25ml比色管，后加入5%的苯酚溶液1.0ml，振荡摇匀，加入6.0ml的浓硫酸，迅速振摇混匀，于室温放置30min后490nm处测A。 2.2.2.4灵芝总糖量计算 根据标准曲线计算出样品液中总糖的浓度后按下式计算总糖量。 灵芝总糖量=浓度×体积×稀释倍数 2.2.3多糖提取率的计算方法 灵芝多糖提取率=灵芝总糖量-还原糖量*100% 供试品量 2.3单因素试验 2.3.1酶量 固定其他因素，分别考察加酶量为0.5%、1.0%、1.5%、2.0%、2.5%时灵芝多糖的提取率。 图1酶量对多糖提取率的影响 由图1可知，在加酶量为0.5％～2.0％之间时，随着酶量的增加，整个体系中酶浓度上升，同一时间内酶与底物的接触机会增加，被酶水解的底物分子数增加，致使灵芝多糖能更多更快地提取出来。当酶量超过2.0％时，灵芝多糖的提取率略有增加，但考虑成本等因素，选择2.0％的酶量较为合理。 2.3.2酶解时间 固定其他因素，分别考察酶解时间为30min、60min、90min、120min时灵芝多糖的提取率。 图2酶解时间对多糖提取率的影响 由图2可见，随着酶解时间的增加，灵芝多糖的提取率也增加，到90min以后，多糖得率几乎不增大，故选择90min为最合适的酶解时间。 2.3.3料液比 固定其他因素，分别考察料液比为1:10、1:20、1:30、1:40条件下灵芝多糖的提取率。 图3液料比对多糖提取率的影响（下转第308页） 纤维素酶提取灵芝多糖的单因素研究 吕兴萍杨薇红马春娇 （江苏农林职业技术学院，江苏句容212400） 【摘要】利用纤维素酶从灵芝子实体中提取灵芝多糖，通过单因素实验研究酶量、酶解时间、料液比、酶解温度对灵芝多糖提取率的影响。实验结果表明：纤维素酶能够显著提高灵芝多糖的提取率，提取的最佳工艺条件为酶量2.0％，酶解时间90min，料液比1:30，温度50℃。 【关键词】灵芝多糖；提取；纤维素 酶 295
不同产地白术多糖含量考察 目的分析测定浙江、安徽、河北不同产地白术的多糖含量。方法用乙醇除去干扰物质后采用水浸提法提取多糖，以苯酚-硫酸比色法测定多糖的含量。结果多糖含量最高的为浙江白术，其次为安徽白术，再次为河北白术。结论浙江、安徽、河北三产地白术原药材中多糖含量有存在明显的差异。 标签：白术；多糖；苯酚-硫酸比色法 菊科植物白术有健脾益气，燥湿利水，止汗，安胎等功效，常用于治疗脾虚食少，腹胀泄泻，痰饮眩悸，水肿，自汗，胎动不安[1]。白术主要含挥发油、内酯类和多糖类成分[2]。由于多糖具有独特疗效的物质基础，白术多糖在抗肿瘤、抗衰老、增强机体免疫力、降血糖等方面的均有作用[3～5]。白术多为人工栽培品，分布广泛，主产于浙江、安徽、湖南、湖北、江西、河北等地。其中，浙江的于潜、新昌、天台等地为传统的地道产区。已有研究表明，白术随生长期或者生长地不同，药材中活性成分的含量不同[6]。近年来，国内外对白术的需求量大增，传统产地的白术供不应求，因此不同地区的白术培植得到了大力发展。研究不同产地白术中的活性成分对于白术的研究与医用具有重要的意义。本文将采用硫酸-苯酚比色法测定产地为浙江、安徽和河北的白术多糖的含量，为评判不同产地白术品质及合理用药提供科学依据。 1 材料与方法 1.1仪器与试药采用的主要仪器为双光束紫外-可见分光光度计IU-1901（日本岛津）。使用的药品试剂包括：80%乙醇、硫酸锌、氢氧化钡、硫酸、苯酚（均为分析纯）、浙江白术、安徽白术、河北白术（由天津中医药大学提供）、葡萄糖对照品（中国药品生物制品检定，批号：110833-200503）。 1.2方法 1.2.1供试品溶液的制备称取浙江、安徽、河北三产地白术药材粉末各0.5g，置于平底烧瓶中，分别加入80%乙醇50ml，加热微沸，计时1h停止，放置室温时滤过，滤渣中加入80℃水10ml，浸提1h，取出，趁热滤过，所得滤渣与第一次滤渣合并，加80℃水10ml，继续浸提1h，取出趁热过滤，合并2次所得滤液。将所得滤液转移至100ml容量瓶中，加蒸馏水定容。 1.2.2对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷减压干燥12h的无水葡萄糖对照品50mg，加蒸馏水使溶解，转移至100ml容量瓶中，定容，制成每1ml含无水葡萄糖0.5mg的溶液，作为对照品溶液。 1.3方法学考察 1.3.1线性关系考察精密量取质量浓度为0.5mg/ml的对照品溶液0.0、0.2、
第一部分：野生灵芝菌种的分离、扶壮、保藏和培养 前言 采集吉林长白山野生灵芝，经过菌种分离，鉴定为GANODERMA（英文名称）多孔菌科真菌赤芝Ganoderma lucidum(Leyss.ex Fr.) Karst．的菌种。经过纯化扶壮培养，成为一支优良的灵芝菌种，为灵芝菌丝体发酵培养和灵芝多糖的提取奠定了基础。 实验室流程：（百级净化超净工作台)菌种分离菌种接种（恒温培养箱）菌种培养扶壮（恒温恒湿冷藏柜）优良菌种保藏（百级净化超净工作台)菌种分离菌种接种（摇床）发酵菌种摇瓶培养（用于接种菌种罐） 第二部分：灵芝菌丝体液体发酵培养 前言 液体发酵培养不同于灵芝子实体栽培，周期短，产量高，无污染，灵芝多糖含量高，节省木材和耕地。是一种灵芝多糖理想的工厂化现代科技生产方式。经过摇瓶培养的灵芝菌种接种于种子罐，待生长良好，在接种于扩大的发酵罐中，通过通气恒温培养，长成成年灵芝菌丝体，生长完全后，进行离心分离喷雾干燥，就得到相当于灵芝子实体的灵芝菌丝体粉，多糖含量达到15%左右。进一步提取加工得到高含量的灵芝多糖。 灵芝菌丝体发酵工艺流程:（配料罐）培养液的配制（菌种罐）菌种的发酵培养 （发酵罐）灵芝菌丝体发酵培养（离心机）灵芝菌丝体固液分离（浓缩液配制罐)灵芝菌丝体配制成浓缩液（喷雾干燥塔）浓缩液喷雾干燥，得到灵芝菌丝体粉 第三部分：灵芝菌丝体多糖的提取分离 前言 灵芝菌丝体粉，是大部分不溶解于水，食用以后象灵芝子实体一样，只有少部分成分被吸收，通过现代提取手段，将灵芝菌丝体经过提取罐的水提取，经过真空浓缩，在经过醇沉工艺，加工成可以全部被人体吸收，灵芝多糖含量提高到30-40%灵芝菌丝体提取物。极大的提高了功效，减少了服用量。 灵芝多糖提取工艺流程：(提取罐）灵芝菌丝体粉水提取（外循环真空浓缩罐）提取液真空浓缩（醇沉罐）浓缩液乙醇沉淀多糖（离心机）沉淀多糖分离 (浓缩液储罐）沉淀物配制成多糖浓缩液（喷雾干燥塔）灵芝多糖喷雾干燥 （粉碎机）灵芝多糖粉碎到100目（混合机）灵芝多糖粉批量混合（真空包装机）食品塑袋真空包装。灵芝多糖原料成品
多糖分离纯化的基本原则和方法 多聚糖(polysaccharide)，简称多糖，常由一百个以上甚至几千个单糖基通过糖苷键连接而成的，其性质已大不同于单糖，如甜味和强的还原性已经消失，广泛存在于动物细胞膜和植物、微生物的细胞壁中，是构成生命的四大基本物质之一，与生命功能的维持密切相关。近年来，大量研究表明多糖除了有增强免疫功能、抗肿瘤作用、抗氧化、抗衰老、消化系统保护作用的生物学效应外，还有抗菌、抗病毒、降血糖、降血脂、抗辐射、抗凝血等作用。 1、基本原则 在不破坏多糖活性的前提下进行多糖的分离纯化。尽量不引入新的杂质，或引入的新杂志易于除去，如小分子盐类可经过透析作用除去，铵根离子可通过加热挥发除去等[1]。 2、分离纯化方法 多糖的生物活性倍受关注，但不少多糖的提取方法和工艺尚未成熟，基于效率、成本多方面的考虑，各种方法的开发、比较、分析是研究工作的焦点之一。目前多糖提取方法主要有溶剂提取法、酸提法、碱提法、酶解法、超滤法、超声法、微波法、超临界流体萃取法。首先要根据多糖的存在形式及提取部位不同，决定在提取之前是否做预处理：提取时需注意对一些含脂较高的根、茎、叶、花、果及种子类，在用水提取前，应先加入甲醇或l：l的乙醇乙醚混合溶液或石油醚进行脱脂，而对含色素较高的根、茎、叶、果实类，需进行脱色处理。 2.1多糖的提取与分离方法 由于各类多糖的性质及来源不同，所以提取方法也各有所异，主要归纳为以下几类： 第一类难溶于水，可溶于稀碱液的主要是胶类，如木聚糖及半乳糖等。原料粉碎后用0.5mol/L NaOH水溶液提取，提取液经中和及浓缩等步骤，最后加入乙醇，即得粗糖沉淀物。 第二类易溶于温水，难溶于冷水的多糖，可用70~80℃热水提取，提取液用氯仿：正丁醇（4:1）混合除去蛋白质，经透析、浓缩后再加入乙醇即得粗多糖产物[2]。 第三类粘多糖的提取。在组织中，粘多糖与蛋白质以共价键结合，故提取
湖北中医药大学本科生毕业论文题目：药用白术的研究 姓名：李晓华 学号： 20080305002 专业：中药资源与开发 年级： 2008 级 实习单位：武汉市健恒药业有限公司指导老师：刘强 完成日期： 2012 年 5 月 10日
药用白术的研究 白术为菊科植物白术（Atractylodes macrocephala Koidz.）的干燥根茎，为我国传统用药，始载于《神农本草经》，原名“术”，后因宋代林亿等人的极力推行，改为白术。白术是道地药材“浙八味”之一。野生白术主要产于浙江於潜、昌化、天目山一带，以於潜所产白术质量为佳，称“於术”，现多栽培，少有野生。2005 年版《中国药典》中白术药材居全国大宗常用中药材之首，全国年需求量 7000t[1]。白术性温，味苦甘，有补脾、益胃、燥湿、和中的功效，常用于脾胃气弱、不思饮食、腹胀泄泻、痰饮眩悸、水肿、自汗、胎动不安等症状，经典医书中就有“脾虚不健，术能补之，胃虚不纳，术能助之”的论断[2]。 1 白术的药用资源研究 1.1 白术的鉴别 1.1.1白术性状鉴别 根茎规则的肥厚团块，长3-13cm，直径1.5-7cm。表面灰黄构灰棕色，有瘤状突起及断续的纵皱和沟纹，并有须根痕，顶端有殖留茎基和芽痕。质坚硬，不易折断；断面不平坦，黄白色至淡棕色，有棕黄色的点状油室散在，烘干者断面角质样，色较深或有裂隙。茎下部叶羽状分裂，上部叶狭披针形。秋季开紫花，全为管状。气清香，味甘、微辛，嚼之略带粘性。 以个大、质坚实、断面黄白色、香气浓者为佳[3]。 1.1.2白术显微鉴别
根茎横切面：木栓层为1-5列木栓细胞，其间夹有1-2列断续的石细胞带。皮层、韧皮部及射线中散有油室，长径180-370μm，短径135-200μm。表成层环明显。木质部外侧的导管1-3列径向排列，基旁无木纤维束，内侧的导管周围有较发达的木纤维束。薄壁细胞中含草酸钙会晶和菊糖[4] 。 1.1.3 白术理化鉴别 （1）取本品粉末1g，加乙醚5ml，振摇浸出15min，滤过。取滤液2ml，置蒸发皿中，待乙醚挥散后，加含5%对二甲氨基苯甲醛的10%硫酸溶液1ml，则显玫瑰红色；再于100℃烘5min即变成紫色。（检查苍术酮）（2）薄层色谱按“苍术”顶下的方法进行薄层色谱，喷显色剂后苍术酮即显红色，烘后变成紫色[5]。 1.1.4 白术应用鉴别 （1）白术生用取其健脾而不燥，炒用则燥湿力量增加，炒焦则用在脾湿有寒，土炒则补脾止泻，米泔水制者，可以完全消灭燥气，适用于脾虚肝脏之体。 （2）术有苍白二种，古时曾通用不分。但因性效有殊，分别应用亦已甚久。苍术苦温辛烈，燥散之性有余，而补养之力不足；白术微辛，苦而不烈，燥散之性不足，而补养之力有余。故一般脾虚气弱用白术，脾为湿困苍术，止汗安胎用白术，发汗散邪用苍术[6]。 1.1.5 白术品质标志 （1）本品总灰分子得过5.0%。 （2）色度取本品最粗粉，精密称取2g，置100ml玻璃烧瓶中，加55%
白术挥发油的提取、包合及质量检查 摘要 目的：研究β-环糊精超声法包合白术挥发油物制备工艺。方法：以β-环糊精与白术挥发油的比例、包合温度、包合时间为变量，以挥发油的包合率及包合物收得率作为判断指标，采用正交设计优化包合工艺的条件，并采用薄层色谱鉴定方法对该包合物进行鉴定。结果：包合的最佳条件为挥发油与β-环糊精投料比为8:1，超声温度为40℃，超声时间为40min。结论：采用β-环糊精超声法包合白术挥发油包合物工艺可行，包合效果良好、制成品质量保证，工艺简单、设备要求不高，适用于工业化生产。 关键词 白术；β-环糊精；挥发油；正交实验；超声法 The volatile oil of atractylodes extraction, inclusion and quality inspection Abstract Objective: study the β-Cyclodextrin inclusion compound of volatile oil of rhizoma atractylodis macrocephalae ultrasonic method of preparation. Methods: β-Cyclodextrin inclusion temperature and proportion of volatile oil of rhizoma atractylodis macrocephalae, packing time as a variable, inclusion rate and the inclusion of essential oil yield as the outcome by using orthogonal design optimization process conditions, and by means of thin-layer chromategraphic identification of the inclusion complexes were identified. Inclusion of results of best conditions as follows: volatile oil and ratio 8:1 β-cyclodextrins, ultrasonic trasonic temperature 40℃, time to 40min.Conclusion: Ultrasound method using β-cyclodextrin inclusion compound of volatile oil of rhizome atractylodis macrocephalae clathrate is feasible, good packing effect, quality assurance of manufactured goods, simple technology, equipment demand is not high, suitable for industrial production. Keywords Atractylodes; beta – cyclodextrin; naphtha; orthogonal experiment; Ultrasonic method
一、植物多糖的提取 1 溶剂提取法 1．1 水提法 水对植物组织的穿透力强，提取效率高，在生产上使用安全、经济。用水作溶剂来提取多糖时，可以用热水浸煮提取，也可以用冷水浸提。一般植物多糖提取采用热水浸提法，该法所得多糖提取液可直接或离心除去小溶物；或者利用多糖不溶于高浓度乙醇的性质，沉淀提纯多糖；但由于不同性质或不同相对分子质量的多糖沉淀所需乙醇浓度不同，它也可以用于样品中不同多糖组分的分级分离；还可按多糖不同性质在粗分阶段利用混合溶剂提取法对植物中不同的多糖进行分离；其中，以乙醇沉淀最为普遍。但以根茎为主的植物体,细胞壁多糖含量高,热水直接提取率不高。此时为破坏细胞壁,增加多糖的溶出，有两种处理方法:一为酶解,二为弱碱溶解。 1．2酸碱提法 有些多糖适合用稀酸提取，并且能得到更高的提取率。但酸提法只在一些特定的植物多糖提取中占有优势，目前报道的并不多。而且即使有优势，在操作上还应严格控制酸度，因为酸性条件下可能引起多糖中糖苷键的断裂。 有些多糖在碱液中有更高的提取率，尤其是提取含有糖醛酸的多糖及酸性多糖。采用的稀碱多位为0．1mol／L氢氧化钠、氢氧化钾，为防止多糖降解，常通以氮气或加入硼氢化钠或硼氢化钾。同样，碱提优势也是因多糖类的不同而异。与
酸提类似，碱提中碱的浓度也应得到有效控制，因为有些多糖在碱性较强时会水解。另外，稀酸、稀碱提取液应迅速中和或迅速透析，浓缩与醇析而获得多糖沉淀。
1．4 生物酶提取法 酶技术是近年来广泛应用到有效成份提取中的一项生物技术，在多糖的提取过程中，使用酶可降低提取条件，在比较温和的条件中分解植物组织，加速多糖的释放或提取。此外，使用酶还可分解提取液中淀粉、果胶、蛋白质等的产物，常用的酶有蛋白酶，纤维素酶，果胶酶等。 1．5 超声提取法 超声波是一种高频率的机械波，其主要原理是利用超声波产生的“空化作用”对细胞膜的破坏，有利用植物有效成分的释放，而且超声波能形成强大的冲击波或高速射流，有效地减小、消除与水相之间的阻滞层，加大了传质效率，有助于溶质的扩散。另外，超声波的热效应使水温基本在57℃，对原料有水浴作用。超声波提取与传统的提取方法相比，有提取效率高、时间短、耗能低等优点。超声提取的影响因素有：超声时间、超声频率（一般低频中提取效率高，但也有例外）、料液比和温度等。 1．6 微波提取 微波是频率介于300MHz和300GHz之间的非电离电磁波，微波提取的原理是微射线辐射于溶剂并透过细胞壁到达细胞内部，由于溶剂及细胞液吸收微波能细胞内部温度升高，压力增大，当压力超过细胞壁的承受能力时，细胞壁破裂，位于细胞内部的有效成份从细胞中释放出来，传递转移到溶剂周围被溶剂溶解。微波技术应用于植物细胞破壁，有效地提高了收率。具有穿透力强、选择性高、加
植物多糖及其提取方法 1 前言 多糖是自然界和生物体中广泛存在的物质，它是生物体内除蛋白质和核酸以外的又一类重要的信息分子。它具有多种生物活性，与生物机能的维持密切相关，与蛋白质、脂类形成的糖蛋白、脂多糖在细胞的识别、分泌以及在蛋白质的加工、转移方面起着不容忽视的作用。近年来，植物、海洋生物及菌类等来源的多糖已作为有生物活性的天然产物中的一个重要类型出现，各种多糖所具有的抗肿瘤、免疫、抗凝血、降血糖和抗病毒活性已相继被发现。我国对多糖研究始于20世纪70年代，植物多糖由于它们独特的功能和低毒性，作为新药发展的方向具有广阔的应用前景，越来越多的研究人员将目光投向植物多糖。 2 植物多糖的结构 植物多糖是由许多相同或不同的单糖以a或p一糖苷键所组成的化合物，普遍存在于自然界植物体中，包括淀粉、纤维素、多聚糖、果胶等。多糖有复杂的四级结构，一级结构指糖基的组成、排列顺序、相邻糖基的连接方式、异头碳构型及糖链有无分支、分支的位置与长短等；二级结构指多糖主链以氢键为主要次级键而形成的有规则构象；三、四级结构是指以二级结构为基础，糖单位之间的非共价相互作用，导致二级结构在有序地空间产生规则构象。植物多糖的
主链与支链形成了特殊的构型一凹形槽。凹形槽是一级结构与构象的体现。凹形槽的支链与活性关系为：支链度越大，凹形槽越多，生物活性越大。近年来，人们对多糖的结构和活性的研究不断深入，进一步阐明了多糖作用机制与结构的关系，其多样性的生理活性更加受到重视。 3 植物多糖的功能 多糖与蛋白质一样，具有生物大分子的复杂结构，具有一定的生理和生物学活性，概括起来多糖的生物活性包括：免疫调节性、抗肿瘤活性、降血糖活性、降血脂活性、抗病毒活性、抗衰老活性(抗氧化活性)、抗疲劳、抗突变活性，除此之外，还具有其他生物活性，包括抗凝血、抗炎、抗菌、抗惊厥、镇静、止喘及降血压等作用。 (1)免疫调节功能。由于现代医学、细胞生物学及分子生物学快速发展，人们对免疫系统的认识越来越深入。免疫系统紊乱，会导致人体衰老和多种疾病的发生。植物多糖是一种免疫调节剂。多糖对肌体的免疫调节作用，包括激活巨噬细胞，激活网状内皮系统，激活T和B细胞，激活补体，进干扰素的生成，促进白细胞介素的生成，诱生肿瘤坏死因子等。 2)抗肿瘤活性植物多糖主要是通过增强机体的免疫功能来达到杀伤肿瘤细胞的目的，许多高等植物中都含有抗肿瘤活性的多糖，如芦荟多糖、香菇多糖提取物、人参多糖具有
灵芝多糖 【导读】灵芝多糖是灵芝所含有的一种物质，目前已分离到的有200多种，除一小部分小分子多糖外，大多不溶于高浓度酒精，在热水中溶解，大多存在于灵芝细胞内壁。灵芝多糖在国外亦在进行广泛、深入研究，同时人们发现灵芝多糖有很重要的药用价值。那么本文就为大家详细介绍灵芝多糖。 灵芝多糖是灵芝所含有的一种物质，目前已分离到的有200多种，除一小部分小分子多糖外，大多不溶于高浓度酒精，在热水中溶解，大多存在于灵芝细胞内壁。灵芝多糖在国外亦在进行广泛、深入研究，同时人们发现灵芝多糖有很重要的药用价值。 灵芝多糖是灵芝的最有效成分之一，因此，也特别受到医学界重视，对它的研究报道也最多。已分离到的灵芝多糖有200 多种，其中有数十种的结构已得出研究成果，分子量已被测定。 灵芝多糖有多方面的药理活性: 能提高机体免疫力，加速血液微循环，提高血液供氧能力，降低机体静止状态下的无效耗氧量，消除体内自由基，提高机体细胞膜的封闭度，抗放射，提高肝脏、骨髓、血液合成DNA,RNA，蛋白质的能力，延长寿命等。灵芝的多种药理活性大多和灵芝多糖有关。 灵芝多糖的作用 灵芝的多种药理活性大多和灵芝多糖有关，而灵芝多糖的作用很多，我们具体来看一下。 1、能提高机体免疫力，加速血液微循环，提高血液供氧能力，降低机体静止状态下的无效耗氧量，消除体内自由基，提高机体细胞膜的封闭度，抗放射，提高肝脏、骨髓、血液合成DNA,RNA，蛋白质的能力，延长寿命等。 2、对心血管疾病、气喘、过敏、神经衰弱、胃热等有显著效果。 3、具有降血压、降血脂、解血瘀、改善血液循环、皮肤美容等作用。 灵芝多糖胶囊价格 灵芝多糖胶囊含有人体所需的多种微量元素和氨基酸，具有防癌、解毒、美容养颜、降低胆固醇和防止糖尿病等作用。那么，作为一种珍贵的营养保健品，灵芝多糖胶囊的价格是多少呢？ 下面妈网为大家介绍一下各大品牌的灵芝多糖胶囊价格： 沛元牌复配破壁灵芝孢子粉胶囊参考价格：158元/100g 中信牌灵芝孢子粉胶囊参考价格：138元/300g 麦力若牌破壁灵芝孢子粉维C胶囊参考价格：368元/360g 美国自然之路灵芝多糖胶囊参考价格：91元/100g 却老斋破壁灵芝孢子粉家庭装参考价格：1950 以上价格信息仅供参考。 灵芝多糖和灵芝孢子粉哪个好 灵芝孢子粉是灵芝上面收集来的种子，粉末状，经过机器加工破壁的技术，容易氧化，按破壁的多少来分等级，比较好的的孢子粉是有点泥土味的，开水冲出来的时候上面有一层浮油，那就是灵芝孢子油成分，如果有这层浮油，可以算是质量比较好的灵芝孢子粉。 而灵芝多糖是从灵芝实体里提取出来的，也可以参合到灵芝孢子粉里面一起吃，现在市面上很多灵芝孢子粉已经含有灵芝多糖跟三帖成分。能提高机体免疫力，提高机体耐缺氧能力，消除自由基，抑制肿瘤、抗辐射，提高肝脏、骨髓、血液合成DNA、RNA、蛋白质能力，延长寿命，灵芝多糖还具有刺激宿主非特异性抗性、免疫特异反应以及抑制移植肿瘤生理活性
正交实验法优化灵芝多糖快速提取工艺 目的: 对灵芝多糖的快速提取工艺方法进行了优化，为工业化生产提供可靠的实验数据和理论依据。 方法: 采用正交试验设计提取方法，氧化酶反应比色法测定多糖含量。结果最佳提取工艺为A3B2C3。影响因素的大小依次为：脉冲数、料液比、电场强度。此法提取的灵芝中多糖含量为0.416% ，得膏率达6.23%。结论: 本提取工艺可行，经济、省时、回收率高。 灵芝提取物含有灵芝多糖、三萜类、蛋白质、微量元素、氨基酸等成分。多糖能强化人体的免疫系统，是灵芝治疗各种疾病的主要成分[1]。灵芝多糖是灵芝中最有效的成分之一。因此，也特别受到医药科技工作者的重视，研究报道也最多。现知灵芝多糖有广泛的药理活性，能提高机体免疫力、提高机体耐缺氧能力、消除自由基、抑制肿瘤、抗辐射、延长寿命等。灵芝多糖的提取方法多为加热浸提或超声提取等，费时、费力，耗能较大。本试验以灵芝多糖和浸膏得率为指标，采用正交试验法优化高频电场提取工艺，具有快速、节能、低温提取等特点。 1 仪器与试药 1.1 仪器 LDT-100/4-25.2型中药高压脉冲电场提取装置（长春华迪生物科技开发有限公司）；OSB-2000旋转蒸发器（日本东京理化株式会社）；电子天平ALC-210.4（Sartorius group）；DZKW-D恒温数显水浴锅（河北黄骅市航天仪器厂）；101-3C型烘箱（上海实验仪器厂）；754型紫外可见分光光度计（山东高密彩虹分析仪器有限公司） 1.2 试药 灵芝购于吉林市，经中国农业科学院特产研究所常维春研究员鉴定为赤芝；所用试剂均为分析纯。 2 方法与结果 2.1 正交实验 2.1.1 因素水平设计从安全性和灵芝多糖的特性考虑，采用水为提取溶剂；由于是连续流动进样提取，不需考虑提取温度、提取时间和提取次数的影响；又因为流速与脉冲数成相关，所以影110 响提取的因素主要有：电场强度、脉冲数、料液比。采用L9(34)正交表优化提取条件，重点考察上述3个因素，以浸膏得率和灵芝多糖为考察指标，见表1。 2.1.2 样品制备取灵芝干品，粉碎至80目，分别称取100 g，按L9(34)正交表所列实验因素和实验水平进行试验，所得提取液过滤后减压浓缩至100mL，取2 mL测多糖含量，其他真空干燥至恒重，计算浸膏得率，见表2。 2.1.3 含量测定按文献[7]测定灵芝多糖的含量，结果见表2。
Advances in Microbiology 微生物前沿, 2018, 7(1), 26-37 Published Online March 2018 in Hans. https://www.doczj.com/doc/ea8198437.html,/journal/amb https://https://www.doczj.com/doc/ea8198437.html,/10.12677/amb.2018.71004 Extraction Process of Ganoderma lucidum Polysaccharides Yuantao Yin, Qingzhi Yao* College of Life Science, Inner Mongolia Agriculture University, Huhhot Inner Mongolia Received: Mar. 5th, 2018; accepted: Mar. 16th, 2018; published: Mar. 23rd, 2018 Abstract In this paper, the optimum extraction process of two kinds of Ganoderma lucidum polysaccharide was studied, and the content of two kinds of Ganoderma lucidum polysaccharide was compared. The hot water extraction method is used to study the conditions of extracting polysaccharides from Ganoderma lucidum. With taking the polysaccharide yield as the evaluation index, the single factor test and L18 (35) orthogonal test are used to examine the effect of the extraction ratio, pH value, extraction tem- perature, ethanol concentration and extraction time on the yield of Ganoderma lucidum polysaccha-rides. The optimum processing conditions for Ganoderma lucidum polysaccharides extraction with hot water are determined as that of extraction ratio 1:40, pH 7.5, extraction temperature 90?C, extraction time 1.5 h, and ethanol concentration 90%. The content of Ganoderma lucidum polysaccharide was determined by Sevage method with the removal of free protein and 3,5-Dinitrosalicylic acid (DNS). Keywords Ganoderma, Polysaccharide, Extraction, Hot Water Extraction 灵芝多糖提取工艺研究 殷远滔，姚庆智* 内蒙古农业大学生命科学学院，内蒙古呼和浩特 收稿日期：2018年3月5日；录用日期：2018年3月16日；发布日期：2018年3月23日 摘要 本文主要研究了两种灵芝多糖的最佳提取工艺，比较两种灵芝多糖含量的不同。采用热水浸提法对灵芝*通讯作者。
不同土炒白术中白术內酯Ⅲ和白术多糖含量比较 陈鸿平刘友平刘承萍李萍 （成都中医药大学四川成都 610075） 摘要:目的探讨不同辅料土炮制白术对其主要有效成分的影响，为辅料土的筛选提供依据。方法采用同批药材，用5种不同品种的辅料土炮制；采用高效液相色谱法白术內酯-Ⅲ的含量，采用紫外分光光度法测定不同土炒白术中多糖的含量。结果白术内酯-Ⅲ含量高低为：为赤石脂炒白术＞壁土炒白术＞灶心土炒白术＞窑土炒白术＞黄土炒白术＞生白术；多糖含量高低为：灶心土炒白术＞黄土炒白术＞赤石脂炒白术＞窑土炒白术＞壁土炒白术＞生白术。结论白术经不同辅料土炒炮制后，白术內酯-Ⅲ和多糖的含量均有增高，但不同炮制品之间无显著差异。 关键词：白术；土炒炮制；白术內酯Ⅲ；白术多糖 Content Comparision of Atractylode III and Soluble Polysaccharide Processed with Different Soils CHEN Hong-ping, LIU You-ping, LIU Cheng-ping, LI Ping (Chengdu University of TCM, chengdu 610075, China) Abstract: Object:To discuss on the effect on the main effective ingredients of proce ssed Atratylodes (Baizhu) with different soils as excipient and provide the basis for s creening soils as processing excipient. Methods: Atratylodes of the same batch are pr ocessed with 5 different kinds of soils. Content of Atractylode III is determined by H PLC and Soluble Polysaccharide by UV spectrophotometry in different processed Atrat ylodes.Results:The contents of Atractylode III in different processed Atratylodes are Halloysitum rubrum processed Atratylodes＞Wall soil processed Atratylodes＞kitchen r ange soil processed Atratylodes＞kiln soil processed Atratylodes＞loess processed Atrat ylodes＞raw Atratylodes; The contents of Soluble Polysaccharide in different processed Atratylodes are kitchen range soil processed Atratylodes＞loess processed Atratylodes ＞Halloysitum rubrum processed Atratylodes＞kiln soil processed Atratylodes＞Wall so il processed Atratylodes＞raw Atratylodes. Conclusion: the contents of both Atractylo de III and Soluble Polysaccharide increased after soil processed. However, there is no significant difference among the processed Atratylodes with different soils.