人N端前脑钠肽(NT-proBNP)ELISA试剂盒操作方法
本试剂盒仅供研究使用
检测范围：96T
2 ng/L -80 ng/L
使用目的：
本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中N端前脑钠肽(NT-proBNP)含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人N端前脑钠肽(NT-proBNP)水平。用纯化的人N端前脑钠肽(NT-proBNP)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入N端前脑钠肽(NT-proBNP)，再与HRP标记的N端前脑钠肽(NT-proBNP)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的N端前脑钠肽(NT-proBNP)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人N端前脑钠肽(NT-proBNP)浓度。
标本要求
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀
待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此
重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
15分钟.
10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止
液后15分钟以内进行。
操作程序总结：
计算
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
注意事项
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好
控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
保存条件及有效期
1．试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6个月
elisa试剂盒 Elisa试验是一种敏感性高，特异性强，重复性好的实验诊断方法。由于其试剂稳定、易保存，操作简便，结果判断较客观等因素，已广泛应用在免疫学检验的各领域中。ELISA检测试剂盒是用于体外定性检测人血清或血浆中的抗人类戊型肝炎（HEV）病毒IgM 抗体ELISA检测。 目录 1elisa试剂盒简介 2优点 3回收率 4发展 5使用方法 6制备方法 7影响 8检测原理 9操作步骤 10试剂器材 elisa试剂盒简介 ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。 然而，影响Elisa试验结果的因素很多，故加强各个环节的质量保证才能充分发挥其方法学的优点。 2优点 一、高效、灵敏、特异的抗体； 二、稳定的重复性和可靠性； 三、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相载体； 四、适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型； 五、节省实验经费。
大鼠皮质醇(Cortisol)酶联免疫分析试剂盒 使用说明书 厦门慧嘉生物科技有限公司 本试剂盒仅供体外研究使用! 预期应用 ELISA法定量测定大鼠血清、血浆或其它相关生物液体中皮质醇(Cortisol)含量。 实验原理 用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗皮质醇(Cortisol)抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗皮质醇(Cortisol)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的皮质醇(Cortisol)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。ELISA法 试剂盒组成及试剂配制 1. 酶联板：一块（96孔） 2. 标准品（冻干品）：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上， 然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为180 ng/ml，做系列倍比稀释(注：不要直接在板中进行倍比稀释)后，分别稀释成180 ng/ml，90 ng/ml，45 ng/ml，22.5 ng/ml，11.25 ng/ml， 5.63 ng/ml，2.82 ng/ml，样品稀释液直接作为标准浓度0 ng/ml，临用前15分钟内配制。 如配制90 ng/ml标准品：取0.5ml (不要少于0.5ml ) 180 ng/ml的上述标准品加入含有 0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。 3. 样品稀释液：1×20ml。 4. 检测稀释液A：1×10ml。 5. 检测稀释液B：1×10ml。 6. 检测溶液A：1×120μl（1:100）临用前以检测稀释液A 1:100稀释，稀释前根据预先计算 好的每次实验所需的总量配制（100μl/孔），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl检测溶液A加990μl检测稀释液A的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。 7. 检测溶液B：1×120μl/瓶（1:100）临用前以检测稀释液B 1:100稀释。稀释方法同检测溶 液A。 8. 底物溶液：1×10ml/瓶。 9. 浓洗涤液：1×30ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。 10. 终止液：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。 11. 覆膜：5张 12. 使用说明书：1份 自备物品 1. 酶标仪（建议参考仪器使用说明提前预热） 2. 微量加液器及吸头，EP管 3. 蒸馏水或去离子水，全新滤纸
N-端脑利钠肽前体在心力衰竭患者诊断和治疗中的应用价值 发表时间：2018-11-28T14:03:50.633Z 来源：《兰大学报（医学版）》2018年9期作者：周海燕 [导读] 目的：探讨N-端脑利钠肽前体在心力衰竭患者诊断和治疗中的应用价值。 甘肃省定西市人民医院 743000 【摘要】目的：探讨N-端脑利钠肽前体在心力衰竭患者诊断和治疗中的应用价值。方法：选取我院2017年2月至2017年10月在心内科治疗的110例心力衰竭患者作为研究对象，同时选取90例健康人群作为对照组。通过测定急性HF患者及健康人群血清NT-proBNP水平。研究方法主要有N-端脑利钠肽前体（NT-proBNP）检测、心脏彩超检查、观察记录1年内心血管事件等。结果：心力衰竭程度越重，患者病死率越高，心力衰竭是大部分心血管疾病的最终结局，且相关数据显示随着年龄增加，心力衰竭发病率每10年会增加一倍，所以心力衰竭的早期发现与早期合理化治疗具有重要临床价值。结论：随着对N-端脑利钠肽前体的深入研究，其在心力衰竭早期诊断、临床合理化治疗等方面的价值日益受到重视，可成为一项重要的检查判断手段，值得推广。 【关键词】N-端脑利钠肽前体；心力衰竭患者；诊断；治疗；应用价值 引言 心力衰竭（HF）近几年来发病率日益升高，是导致患者死亡的主要原因，心力衰竭是一种在静脉回流正常情况下，因原发性心脏损失所致的心排血量下降而体循环淤血及组织血液灌注不足，临床表现为呼吸困难、咳嗽、咯血、夜尿增多、疲乏无力等，相关数据显示心力衰竭患者5年内病死率约为50%，10年病死率高达90%。N-端脑利钠肽前体（NT-proBNP）是反映左心室舒张功能变化的指标，与慢性心力衰竭的严重程度相关，是反映心室功能改变的高敏感性和特异性指标。本研究选取我院2017年2月至2017年10月在心内科治疗的110例心力衰竭患者作为研究对象，同时选取90例健康人群作为对照组。通过测定急性HF患者及健康人群血清NT-proBNP水平，探讨N-端脑利钠肽前体在心力衰竭患者诊断和治疗中的应用价值，现将结果报告如下： 1 资料与方法 1.1一般资料 选取2017年2月至2017年10月在心内科治疗的110例心力衰竭患者作为研究对象（观察组），所有患者符合美国纽约心脏学会（NYHA）有关心力衰竭诊断标准。排除标准：（1）精神疾病、认知障碍和语言障碍患者；（2）严重肺、肝、肾功能障碍患者；（3）甲状腺异常、血液疾病、恶性肿瘤以及先天性疾病患者；（4）严重感染及急诊心肺复苏后患者；（5）结缔组织及免疫性疾病患者。其中男60例，女50例；年龄62-78，平均（65.0±2.0）岁；缺血性心肌病52例，高血压性心肌病58例。另选取同期行健康体检者90例作为对照组，男49例，女41例，年龄60-77，平均（64.8±1.9）岁。两组人群年龄、性别等比较，差异无统计学意义（P>0.05），有可比性。本观察研究符合医学伦理要求，两组人群均签署研究知情同意书。 1.2研究方法 1.2.1 N-端脑利钠肽前体（NT-proBNP）检测 抽取患者及健康人群清晨空腹肘部静脉血液3-5ml，4000rpm离心5min，吸取120ul 血清，垂直滴加至检测卡加样处，开始计时， 15min后将测试卡插入南京基蛋FIA8000系列免疫定量分析仪的承载器上，按下“确认”健，仪器会自动检测，出具定量检测结果。两组人群均采用南京基蛋FIA8000系列免疫定量分析仪检测，使用方法是胶体金法。 1.2.2 心脏彩超检查 被检者取左侧卧位，使用彩超仪进行扫描，探头频率为2-2.5MHz，取心尖四腔切面，用改良的Simpson单平面法计算左心室射血分数（LVEF）。 1.2.3 观察记录1年内心血管事件。 1.3 统计学处理 数据均采取统计学软件SPSS13.0进行处理分析，多组均属比较用方差分析，计数资料比较采取卡方检验，各因素之间的相关关系采用Spearman秩相关分析，多因素分析采取多元Logistic逐步回归分析，将检验标准设定为а=0.05. 2.结果 3.分析 3.1 N-端脑利钠肽前体（NT-proBNP）主要来源于心室肌细胞，心肌细胞受到的容量负荷和压力负荷增高时分泌proBNP入血，proBNP裂解为无活性的NT-proBNP及具有生物活性的BNP。NT-proBNP可用于鉴别呼吸困难的原因，早期发现心衰患者，并进行危险分层，评估心衰治疗效果以及判断预后等方面。 3.2 NT-proBNP与心室功能密切相关，其血中浓度与心功能不全程度成正相关，可以用于评价心脏收缩功能不全以及舒张功能不全和心室壁节端运动协调性。因此，NT-proBNP的检测对心衰或心功能不全患者鉴别诊断、疗效评估、治疗方案调整、预后判断等方面具有很大的帮助。 3.3心力衰竭程度越重，患者病死率越高，心力衰竭是大部分心血管疾病的最终结局，且相关数据显示随着年龄增加，心力衰竭发病率每10年会增加一倍，所以心力衰竭的早期发现与早期合理化治疗具有重要临床价值。但目前对于该病的早期诊断，假阳性率较高，易发生
本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断人（Human）瘦素（LEP）ELISA检测试剂盒 使用说明书 检测原理 试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被瘦素（LEP）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的瘦素（LEP）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。 样品收集、处理及保存方法 1.血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。 2.血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。 3.细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。 4.组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。 5.保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。自备物品 1.酶标仪（450nm） 2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL 3.37℃恒温箱 操作注意事项 1.试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。 2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。 3.浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度。 4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。 5.所有液体组分使用前充分摇匀。
Envirology ELISA试剂盒说明书 试剂盒内容物： ●Cry1Ab/Cry1Ac 抗体包被固相板 ●Cry1Ab/Cry1Ac 阳性对照组 ●Cry1Ab/Cry1Ac 酶结合物 ●底物 未提供的物品： ●TPBS清洗缓冲液（PBS/0.05% Tween-20 wash buffer），常温保存，最多一年，然后丢弃。 ●萃取缓冲液（PBS0.55% Tween-20）。可以将0.5 ml Tween-20加入到100 ml 上一步的TPBS 缓冲液内制得。不使用时放在冰箱内冷藏，ELISA分析时升至室温使用。 ●HCL(1 Mol/L) 终止液。将83 ml盐酸溶液（37%）到917ml蒸馏水或去离子水中制的。 配置过程在通风橱内操作。室温下保存可使用2年。 ●一次性吸管，可调节排气移液枪，记号笔，parafilm膜等。 实验步骤： ●此步在15min内完成。加50ul 到板孔内，随即在相应板孔内进行如下操作，加50ul 萃取缓冲液作为空白对照，加50ul Cry1Ab阳性对照，加50ul样品萃取物到板孔内。 ●在桌面上晃动96孔板20~30秒，使内容物充分混匀。注意勿使内容物溅出！ ●盖上盖子勿使水分蒸发，并在室温下孵化1~2小时。如果有孔板摇床，可在200 rpm速 度下摇动孔板。注意：根据组织萃取方法，用户应该决定一个合适的孵化时间，以使得到最佳结果。 ●孵化结束后，小心移去盖子并将孔内液体甩到废水池内，要剧烈甩弃，尽量甩尽孔内液 体。用TPBS清洗缓冲液清洗板孔（300ul/孔），然后甩尽缓冲液，3次重复。 ●每孔加100ul底物。 ●在桌面上晃动96孔板20~30秒，使内容物充分混匀。盖上盖子室温下孵化15~30分钟。 ●加100ul HCL(1 M)终止液，并且混匀。此步能使孔内物质变黄。注意：在加入终止液 后30分钟内读板。 读板： ●调节读板仪波长到450nm。如果读板仪有双波长功能，可依据文献选600、630或者 650nm作为备选波长。 ●设置读板仪空白项到空白对照孔。
人CX3C趋化因子受体1（CX3CR1）ELISA检测试剂 盒说明书 本试剂仅供研究使用标本：血清或血浆 樊克生物专业供应： 使用目的： 本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本CX3C趋化因子受体1（CX3CR1）含量。 试验原理： CX3CR1试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知CX3CR1浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板 内进行检测。先将CX3CR1和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合 的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中CX3CR1的浓度呈比例关系。 试剂盒内容及其配制 试剂盒成份（2-8℃保存）96孔配置48孔配置配制 96/48人份酶标板1块板（96T）半块板（48T）即用型 塑料膜板盖1块半块即用型 标准品：80ng/ml 1瓶（0.6ml）1瓶（0.3ml）按说明书进行稀 稀 空白对照1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）即用型 标准品稀释缓冲液1瓶（5ml）1瓶（2.5ml）即用型 生物素标记的抗CX3CR1抗体1瓶（6ml）1瓶（3.0ml）即用型 亲和链酶素-HRP 1瓶（10ml）1瓶（5.0ml）即用型 洗涤缓冲液1瓶（20ml）1瓶（10ml）按说明书进行稀 释 底物A 1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型 底物B 1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型 终止液1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型 标本稀释液1瓶（12ml）1瓶（6.0ml）即用型 自备材料 1．蒸馏水。 2．加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。 3．振荡器及磁力搅拌器等。 安全性 1．避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。
N-端脑利钠肽前体的临床应用 发表时间：2014-08-19T11:12:49.967Z 来源：《中外健康文摘》2014年第26期供稿作者：马亚平[导读] 充血性心力衰竭（CHF），简称心衰。是许多心血管病如急性心肌梗死、扩张型心肌病瓣膜病、先天性心脏病的后期表现，其中尤以左心衰更为常见 马亚平（万荣县人民医院检验科 044200）【摘要】探讨N端脑利钠肽前体的临床应用方法调查对象为临床住院及门诊患者。结论 N端脑利钠肽前体的在临床有着极其重要的应用，尤其是对心衰患者具有较高的诊断价值。【关键词】 N端脑利钠肽前体的临床应用心衰【中图分类号】R96 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085（2014）26-0050-01 N端脑利钠肽前体（NT-proBNP）是由心、脑分泌的一种含32个氨基酸的多肽激素，心室张力增加时，心脏超负荷促进其分泌，在机体中起排钠、利尿、扩张血管的生理作用。其升高浓度和心衰（急性心衰AHF 慢性心衰CHF）严重程度相一致。疑似心衰（HF）时，应首选N端脑利钠肽前体（NT-proBNP）的检测。N端脑利钠肽前体（NT-proBNP）阴性有很高的预测价值，可排除心衰的存在。在呼吸困难患 者，N端脑利钠肽前体（NT-proBNP）是一个将发生（HF）的较强预示因子，能有效地鉴别慢性阻塞性呼吸困难和心源性呼吸困难。尤其是在筛选左室功能不良（LVD）以及心肌梗死后危险度评价方面能显示出明显优越性。我科于2010年1月开展了N端脑利钠肽前体（NT-proBNP）胶体金检测，该方法为临床提供了快速，敏感科学依据，其标本无需特殊规定，随时可以检测，在临床心衰的诊断、鉴别诊断及预后分析中，是较好的标志物，有着重要的临床意义。 一.对象与方法 1.对象来自2010年1月-2014年3月连续收住我院及部分门诊患者，所有临床诊断患者，均符合WHO诊断标准。共有患者1279例，其中，男759例，女574例。 2.方法（1）临床基本资料：包括年龄、性别、临床诊断等。（２）实验室指标测定：所有患者随时抽取静脉血（优先选用），在2500r/min，离心10min，分离血清或血浆（肝素抗凝）待测，在患者病情紧急或特殊情况下，可使用全血样本进行快速检测。检测方法采用胶体金干式免疫层析技术体外定量法，仪器为FIA8000免疫定量分析仪，由普朗医用设备有限公司提供，试剂由南京基蛋生物科技有限公司提供。（3）NT-proBNP胶体金检测线性范围：100 Pg/ml—2000 Pg/ml，线性相关系数r≥0.990；检测范围：100 Pg/ml—35000 Pg/ml；最低检出限：100 Pg/ml；精密度：批内差：CV≤10%，批间差：≤15%；准确度：质控品的检测结果与靶值的相对偏差≤20%。（4）检测过程严格遵循制造商的说明书，所有血标本均在室温条件下，2小时完成检测。NT-proBNP排除/诊断标准
人(5-HIAA)ELISA试剂盒说明书，5羟基吲哚乙酸ELISA检测试 剂盒 人(5-HIAA)ELISA试剂盒说明书，5羟基吲哚乙酸ELISA检测试剂盒 产品规格：96T/48T。 供应商：上海乔羽生物有限公司 上海乔羽有限公司，有elisa试剂盒，抗体，培养基 人(5-HIAA)ELISA试剂盒说明书，5羟基吲哚乙酸ELISA检测试剂盒其主要特点如下 专一性强：抗原与抗体的免疫反应是专一反应，而免疫酶技术以免疫反应为基础，所检测的对象是抗原（或抗体），使用的抗体除标记了酶以外，与普通抗体的免疫反应特性并无多大差别。 灵敏度高：由于抗体联结上了酶，因此，借助于酶与底物的显色反应，显示抗原与抗体的结合，大大提高了检测的灵敏性，使检测水平接近放射免疫测定法。 人(5-HIAA)ELISA试剂盒说明书，5羟基吲哚乙酸ELISA检测试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。 1.标准品复溶：试剂盒提供6管标准品，每管已标定浓度，并且冻干。实验前在每个标准品管中加入0.5mL 样本稀释液，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动助其溶解，使其恢复为每个标准品管身标注的浓度。 2.20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。 人(5-HIAA)ELISA试剂盒说明书，5羟基吲哚乙酸ELISA检测试剂盒试剂的准备： 按试剂盒说明书的要求准备实验中需用的试剂。ELISA中用的蒸馏水或去离子水，包括用于洗涤的，应为新鲜的和高质量的。自配的缓冲液应用pH计测量较正。从冰箱中取出的试验用试剂应待温度与室温平衡后使用。试剂盒中本次试验不需用的部分应及时放回冰箱保存。 ELISA试剂盒的优势： 全面——混合8 种不同的常见抗原，对自身免疫性疾病进行全面筛查。
人B细胞淋巴瘤因子2（Bcl-2）ELISA检测试剂 盒,ELISA试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用标本：血清或血浆 上海乔羽生物专业供应： 使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本B细胞淋巴瘤因子2 （Bcl-2）含量。 试验原理： Bcl-2试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知Bcl-2浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行 检测。先将Bcl-2和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合 物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中Bcl-2的浓度呈比例关系。 试剂盒内容及其配制 试剂盒成份（2-8℃保存）96孔配置48孔配置配制 96/48人份酶标板1块板（96T）半块板（48T）即用型 塑料膜板盖1块半块即用型 标准品：80ng/ml 1瓶（0.6ml）1瓶（0.3ml）按说明书进行稀 稀 空白对照1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）即用型 标准品稀释缓冲液1瓶（5ml）1瓶（2.5ml）即用型 生物素标记的抗Bcl-2抗体1瓶（6ml）1瓶（3.0ml）即用型 亲和链酶素-HRP 1瓶（10ml）1瓶（5.0ml）即用型 洗涤缓冲液1瓶（20ml）1瓶（10ml）按说明书进行稀 释 底物A 1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型 底物B 1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型 终止液1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型 标本稀释液1瓶（12ml）1瓶（6.0ml）即用型 自备材料 1．蒸馏水。 2．加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。 3．振荡器及磁力搅拌器等。 安全性
小鼠Ⅰ型胶原 (Col I)酶联免疫吸附测定试剂盒 使用说明书 产品编号：E-EL-M0314 （本试剂盒仅供体外研究使用、不用于临床诊断!） 声明：尊敬的客户，感谢您选用本公司的产品。本产品选用世界著名生产厂家的原料，采用专业ELISA kit生产技术制造。适用于体外定量检测小鼠血清、血浆、组织匀浆或细胞培养上清液中天然和重组Col I浓度。使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分！如有疑问，请及时联系伊莱瑞特生物科技有限公司。 *: [96T/48T]（打开包装后请及时检查所有物品是否齐全完整）
检测原理: 本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗小鼠Col I抗体包被于酶标板上，实验时标本或标准品中的Col I会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗小鼠Col I抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗小鼠Col I抗体与结合在包被抗体上的小鼠Col I结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下现蓝色，加终止液后变黄。用酶标仪在450nm波长处测OD值，Col I浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线求出标本中Col I的浓度。 标本收集: 1.血清：全血标本于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集 血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。 2.血浆：抗凝剂推荐使用EDTA.Na2，标本采集后30分钟内于1000×g离心15分钟，取上清即可 检测。避免使用溶血，高血脂标本。 3.组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，以去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞 会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样本对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g 离心5~10分钟，取上清检测。 4.细胞培养上清：取细胞培养上清于1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。 5.其它生物标本：1000×g离心20分钟，取上清即可检测 （具体处理方法可参考：https://www.doczj.com/doc/e53270539.html,/news2.asp?tid=477 ） 6.标本应清澈透明，悬浮物应离心去除。 7.标本收集后若不及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃/-80℃冰箱内，避免反复冻融， 1-6月内检测,4℃保存的应在1周内进行检测。 8.如果您的样本中检测物浓度高于标准品最高值，请根据实际情况，做适当倍数稀释(建议先做 预实验，以确定稀释倍数)。 试验所需自备物品: 1.酶标仪(450nm波长滤光片) 2.高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL 3.37℃恒温箱, 双蒸水或去离子水 4.吸水纸
脑钠肽检测系统及临床意义 1.命名：脑钠肽又称B型钠尿肽，英文缩写BNP；N末端B型钠尿肽是脑钠肽 前体之一，英文缩写为NT-proBNP。 2.简述：1988年deBold从猪脑中发现了一种具有利钠利尿作用的多肽，命名 为脑钠肽，即B型钠尿肽（BNP）。BNP主要在心室分泌，人心肌细胞首先合成的是含有108个氨基酸的B型钠尿肽原，之后在内切酶的作用下被切割为含有76个氨基酸的N末端B型钠尿肽原（NT-proBNP）和含有32个氨基酸的C端多肽BNP。钠尿肽家族包括由二硫键连接的环状结构，可与钠尿肽受体结合发挥利钠、利尿、扩血管、拮抗肾素-血管紧张素-醛固酮系统（RAAS）和交感神经系统（SNS）的作用；而NT-proBNP无生物学活性。当心室容量负荷或者压力负荷增加时，心肌合成和释放BNP/NT-proBNP就会增多。 3.检测系统： A.BNP：检测所用单克隆抗体针对的抗原表位有差异，没有统一的参考物， 各厂家所使用的免疫学检测方法不同，各检测系统之间BNP测定结果就 存在差异，尤其是在测定的高值时差异较大。目前检测系统以美国临床 实验室标准委员会（NCCLS）为指南，以最早的Biosite为标准，对各分 析系统结果进行比较，保证医学决定水平一致性。 B.NT-proBNP：其检测采用针对相同氨基酸残基的多克隆抗体，两个检测 系统之间具有类似的检测线性和功能灵敏度。但国内外研究表明， NT-proBNP随着年龄的增长而升高，同龄女性高于男性，60岁以上人群 年龄的增长升高幅度更大。欧洲的NT-proBNP的参考范围为：<50岁， 男性84pg/ml，女性155pg/ml；>50岁，男性194pg/ml，222pg/ml。年龄 与性别的差异分析其原因有：一方面老年人心肌变得僵硬，室壁张力增 高导致其合成增多，另一方面老年人肾小球硬化及肾皮质萎缩导致肾小 球滤过滤下降，使NT-proBNP肾的清除减少，而BNP不靠肾清除。因此 NT-proBNP反映了心-肾综合功能。性别的差异可能与雌激素对钠尿肽基 因表达的正调控作用有关。 C.因此，对于BNP的检测，各个检测系统应有各自的参考范围，而 NT-proBNP在各个年龄段根据地区差异设定合适的参考范围。 4.标本注意事项： A.BNP：Biosite Triage 推荐使用EDTA抗凝全血或血浆，雅培Abbott、贝 克曼Beckman coulter、拜耳Bayer等推荐使用EDTA抗凝血浆。标本在 25℃环境中2h下降20%，4℃和-20℃可稳定8h。因此BNP检测在标本采 集后立即冰浴送检，4℃离心，半小时完成测定。 B.NT-proBNP：Roche推荐使用EDTA或肝素抗凝血浆，也可以用血清（比 血浆检测结果高约10%），25℃可稳定3d，4℃可稳定5d，-20℃和-70℃ 至少稳定6个月。 C.体内BNP和NT-proBNP水平基本不受体位改变和日常活动的影响，不存 在日内波动和日间波动，因此采血无需固定体位和采血时间。 5.临床意义： 国外大规模多中心实验室临床试验结果证实，BNP和NT-proBNP是诊断心衰的很好的心肌标记物。目前应用于心衰的诊断、鉴别诊断及预后分析。 A.可用于急诊室心源性心脏病和肺源性心脏病的鉴别，BNP的灵敏度大于
人表皮生长因子elisa试剂盒使用方法 本试剂盒仅供研究使用。 检测范围：96T 25pg/ml-480pg/ml 使用目的： 本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本表皮生长因子(EGF)含量。 实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人表皮生长因子(EGF)水平。用纯化的人表皮生长因子(EGF)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入表皮生长因子(EGF)，再与HRP标记的表皮生长因子(EGF)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的表皮生长因子(EGF)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人表皮生长因子(EGF)浓度。 标本要求 1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融 2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 操作步骤 1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀 2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、 待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用 5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此 重复5次，拍干。 6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 7.温育：操作同3。 8.洗涤：操作同5。 9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色 15分钟. 10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。 11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止 液后15分钟以内进行。 操作程序总结： 计算 以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 注意事项 1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未
人elisa试剂盒,人8羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）ELISA 试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用标本：血清或血浆 樊克生物专业供应： 使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本8羟基脱氧鸟苷 （8-OHdG）含量。 试验原理： 8-OHdG试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知8-OHdG浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板 内进行检测。先将8-OHdG和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合 的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中8-OHdG的浓度呈比例关系。 试剂盒内容及其配制 试剂盒成份（2-8℃保存）96孔配置48孔配置配制 96/48人份酶标板1块板（96T）半块板（48T）即用型 塑料膜板盖1块半块即用型 标准品：80ng/ml 1瓶（0.6ml）1瓶（0.3ml）按说明书进行稀 稀 空白对照1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）即用型 标准品稀释缓冲液1瓶（5ml）1瓶（2.5ml）即用型 生物素标记的抗8-OHdG抗体1瓶（6ml）1瓶（3.0ml）即用型 亲和链酶素-HRP 1瓶（10ml）1瓶（5.0ml）即用型 洗涤缓冲液1瓶（20ml）1瓶（10ml）按说明书进行稀 释 底物A 1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型 底物B 1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型 终止液1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型 标本稀释液1瓶（12ml）1瓶（6.0ml）即用型 自备材料 1．蒸馏水。 2．加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。 3．振荡器及磁力搅拌器等。 安全性
脑利钠肽前体在普通人群的预后研究现状及进展 血浆脑利钠肽（BNP）最早由日本学者于1988年从猪脑分离出来因而得名，但其主要来源是心脏，其他来源有脑，肺，肾和肾上腺等。当心室壁压力升高或受到牵拉时大量BNP释放入血引起循环浓度明显升高。BNP由B型脑利钠肽原前体（pre-proBNP）经酶分解而来，pre-proBNP分解为等摩尔浓度的有活性的BNP和无活性的NT-proBNP。由于NT-proBNP无生物活性、半衰期较BNP长、缺乏主动清除机制等，其血浆浓度较BNP高出2～10倍，另外NT-proBNP在体外不同温度下稳定性更好，对取血样本要求相对低[1]，因而具有更好的临床应用价值，这也被许多临床研究证实，这些研究中大部分是针对心功能不全人群的[2]，也包括慢性肾功能不全、缺血性心脏病等心血管事件高危人群。还有一些研究发现血浆NT-proBNP在普通人群中也具有显著预测死亡和心血管事件的价值[3]，但机体机制尚不明确。本文拟就血浆NT-proBNP在普通人群中的预后价值研究现状及其可能的机制作一综述。 1 研究现状 随着研究的进展和临床的广泛应用，血浆NT-proBNP已经成为重要的心血管系统疾病标志物，在诊断、危险评估及指导治疗等方面已得到广泛应用。但上述研究及临床应用针对的人群主要是急慢性心功能不全或有较高心血管风险的人群，且在这些人群中血浆NT-proBNP值均高于普通人群。而血浆NT-proBNP 值处于正常范围的普通人群中，其是否也具有预测死亡或心血管事件风险的价值呢？2004年Wang等[3]首次在不伴心衰且表观健康的人群研究中发现NT-proBNP具有独立预测死亡和心血管事件的作用。随后的几年中陆续有NT-proBNP在社区人群和表观健康人群中的类似研究报导，综合分析这些研究的特点，我们发现其相同点是：①均为前瞻的队列研究；②研究对象均为普通人群或表观健康人群，发生心血管事件或死亡的风险相对较低；③平均年龄在49.3～67.9岁[4]；④随访时间长，均超过5年，最长随访时间达10年[5]；⑤平均血浆NT-proBNP值均较有症状心血管疾病人群低，最高NT-proBNP值为321 pg/mL； ⑥主要观察终点是全因死亡和主要心血管事件，这也是目前循证医学研究中对具有心血管风险人群的最主要的研究终点；⑦结果均表明在上述人群中，血浆NT-proBNP对死亡或主要心血管事件有独立预测价值。尽管上述研究在主要方法、人群、观察指标、研究终点等方面有很多相同之处。但是也存在一些不同点：①虽然上述研究纳入的是普通人群或表观健康人群，但仍还有一定比例的糖尿病、冠心病[6]、心肌梗死[7]、脑卒中等的患者，虽然总体比例较低，但有上述疾病史的患者死亡或心血管事件发生率均会高于无上述疾病史的表观健康人；②部分研究中有一定比例的人正在服用血管紧张素转化酶抑制剂或beta受体阻滞剂，说明研究人群中有一部分死亡或心血管事件高危的人，同时这些药物的应用可能影响终点事件的发生，从而影响NT-proBNP在普通人群中预后价值的判断； ③这些研究人群中吸烟人群所占比例从22.9%～37.8%[8]，这也可能影响NT-proBNP对人群预后价值的判断。 2 对普通人群具有预后价值的机制
人白介素18（IL-18）ELISA分析检测试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定小鼠血清，血浆及相关液体样本中转化生长因子（IL-18）的含量。 实验原理： 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人白介素18（IL-18）水平。用纯化的转化生长因子（IL-18）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入转化生长因子（IL-18），再与HRP标记的羊抗鼠抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的转化生长因子（IL-18）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中人白介素18（IL-18）浓度。 试剂盒内容及其配制： 试剂盒成份96孔配置48孔配置 96/48人份酶标板1块板 （96T） 半块板 （48T） 塑料膜板盖1块半块 标准品：100ng/ml 1瓶 （1.0ml） 1瓶 （0.5ml） 空白对照1瓶 （1.0ml） 1瓶 （0.5ml） 标准品稀释缓冲液1瓶 （8.0ml） 1瓶 （4.0ml） 生物素标记的抗OT抗体1瓶 （8.0ml） 1瓶 （4.0ml） 亲和链酶素-HRP 1瓶 （12ml） 1瓶（5ml） 洗涤缓冲液1瓶 （20ml） 1瓶（10ml） 底物A 1瓶 （6.0ml） 1瓶 （3.0ml） 底物B 1瓶 （6.0ml） 1瓶 （3.0ml） 终止液1瓶 （6.0ml） 1瓶 （3.0ml）
试剂盒组成： 试剂盒组成48孔配置96孔配置保存 说明书1份1份 封板膜2片（48）2片（96） 密封袋1个1个 酶标包被板1×48 1×96 2-8℃保存标准品：45μ mol/L 0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存 浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1 瓶 （20ml×30倍） ×1瓶 2-8℃保存 自备材料： 1. 蒸馏水。 2. 加样器：5ul、10ul 、50ul 、100ul 、200ul 、500ul、1000ul。 3. 振荡器及磁力搅拌器等。 样品收集、处理及保存方法： 1、血清……操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。 2、血浆……EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000 ×g离心30分钟去除颗粒。 3、细胞上清液……1000 ×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。 4、组织匀浆……将组织加入适量生理盐水捣碎。1000 ×g离心10分钟，取上清液。 5、保存……如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。 人白介素18ELISA试剂盒操作注意事项： ●试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。 ●实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。 ●不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
1、elisa试剂盒简介 ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。ELISA 可用于测定抗原，也可用于测定抗体。 然而，影响Elisa试验结果的因素很多，故加强各个环节的质量保证才能充分发挥其方法学的优点。 2 优点 一、高效、灵敏、特异的抗体； 二、稳定的重复性和可靠性； 三、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相载体； 四、适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型； 五、节省实验经费。 3 回收率 elisa试剂盒回收率是反应待测物在样品分析过程中的损失的程度，损失越少，回收率越高，如果作标液1PPM，就是1毫克/升，而作出标准数据为0.99毫克/升，就是说你的回收率是99%，这个与真实成分有密切的关系，说明方法的准确度。比如水中总无机氯含量测定，样品水中含有无机氯20mg/L，取100mL 被测水样品，加入0.1mL浓度为10mg/mL的含无机氯标准样品，测定时忽略体积变化，如果测定出样品中无机氯为2.98mg/L，则认为回收率为99%。 4 发展 临床测定技术的发展主要在于方法学的发展，而方法学的发展依托于试剂生产技术不断进步更新和型标记物的应用。目前，分子生物学正在并最终肯定会让我们对整个生命科学有一个全面而彻底的认识，其对免疫测定技术发展的影响也是直接而又有效的，它使我们对以前一些难以检测的生物活性物质的测定变得轻而易举，并且大大提高了检测的灵敏度和特异性。 5 使用方法 （1）血清：操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血红细胞迅速小心地分离。 （2）血浆：EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。 （3）细胞上清液：1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。 （4）组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取上清
人胰高血糖素(GC)酶联免疫分析 试剂盒使用说明书 厦门慧嘉生物科技有限公司 本试剂盒仅供研究使用 检测范围：20 pg/ml -400 pg/ml 特异性：本试剂盒可同时检测天然或重组的人GC，且与其他相关物质无交叉反应。 有效期：6个月 预期应用：ELISA法定量测定人血清、血浆或其它相关生物液体中GC含量。 说明 1．试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。 2．浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。 3．中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。 4．刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。 实验原理 用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗体的微孔中依次加入标本或标准品、HRP标记的另一株单抗，经过彻底洗涤后用底物显色。颜色的深浅和样品中的GC呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。 试剂盒组成及试剂配制 1.酶联板(Assay plate )：一块（96孔）。 2.标准品（Standard）：4瓶（冻干品）。 3.酶结合物（HRP-conjugate）：1×6ml/瓶。 4.底物溶液A（Substrate A）：1×7ml/瓶。 5.底物溶液B（Substrate B）：1×7ml/瓶。 6.浓洗涤液（Wash Buffer）：1×15ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释20倍。 7.终止液（Stop Solution）：1×7ml/瓶（2N H2SO4）。 需要而未提供的试剂和器材 1.标准规格酶标仪 2.高速离心机 3.电热恒温培养箱 4.干净的试管和Eppendof管 5.系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，最好用多通道移液器 6. 蒸馏水，容量瓶等 标本的采集及保存 1.血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000g离心20分钟，取上清即可 检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。