乙醇脱氢酶(ADH)提取液
简介：
乙醇脱氢酶(Alcohol dehydrogenase ，ADH)的系统名为乙醇：辅酶I 氧化还原酶（alcohol ：NAD+ oxidoreductase ），大量存在于人和动物肝脏、植物及微生物细胞之中，是一种含锌金属酶，具有广泛的底物特异性。乙醇脱氢酶够以烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)为辅酶，催化伯醇和醛之间的可逆反应： CH3CH2OH+ NAD+→ CH3CHO +NADH+ H+。在人和哺乳动物体内，乙醇脱氢酶与乙醛脱氢酶(ALDH)构成了乙醇脱氢酶系，参乙醇脱氢酶与体内乙醇代谢，是人和动物体内重要的代谢酶。作为生物体内主要短链醇代谢的关键酶，它在很多生理过程中起着重要作用。丙酮酸脱羧酶(PDC)、乙醇脱氢酶(ADH)是乙醇发酵途径的关键酶，无氧呼吸途径代谢产物的过程积累对细胞产生毒性，影响线粒体结构和三羧酸循环的相关酶活性。
Leagene 乙醇脱氢酶(ADH)提取液主要用于裂解植物组织，提取样品中的乙醇脱氢酶。该试剂仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：
自备材料：
1、 蒸馏水
2、 离心管或试管
3、 匀浆器或研钵
4、 低温离心机
操作步骤(仅供参考)：
1、取植物组织清洗干净，切碎。
2、配制乙醇脱氢酶提取工作液：取出乙醇脱氢酶提取液和PMSF ，恢复至室温，混匀，即配即用，不易久置，否则蛋白酶抑制剂PMSF 的效率会有所下降。
3、加入预冷的乙醇脱氢酶提取工作液，冰浴情况下充分匀浆或研磨。
4、离心，留取上清液即为乙醇脱氢酶粗提液，保存，用于乙醇脱氢酶的检测或其他用途。 编号 名称 CS0436 Storage 试剂(A): 乙醇脱氢酶提取液 500ml 4℃ 避光 试剂(B): PMSF 1ml 4℃ 使用说明书 1份
计算：
组织或植物粗酶液获得率(ml)=上清液体积(ml)/组织或植物质量×100%
注意事项：
1、实验材料应尽量新鲜，如取材后不立即使用，应存于-20-80℃。
2、待测样品中不能含有磷酸酶抑制剂，同时需避免反复冻融。
3、所测样本的值高于标准曲线的上限，应用乙醇脱氢酶提取工作液稀释样品后重新测定。
4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：12个月有效。
相关：
编号名称
CC0007 磷酸缓冲盐溶液(10×PBS,无钙镁)
CS0001 ACK红细胞裂解液(ACK Lysis Buffer)
DC0032 Masson三色染色液
DF0135 多聚甲醛溶液(4% PFA)
NR0001 DEPC处理水(0.1%)
PS0013 RIPA裂解液(强)
TC1167 尿素(Urea)检测试剂盒(脲酶波氏比色法)
⑴溶剂提取法原理及常用溶剂溶剂提取法是根据中草药中各种成分在溶剂中的溶解性质，选用对活性成分溶解度大，对不需要溶出成分溶解度小的溶剂，而将有效成分从药材组织内溶解出来的方法。当溶剂加到中草药原料（需适当粉碎）中时，溶剂由于扩散、渗透作用逐渐通过细胞壁透入到细胞内，溶解了可溶性物质，而造成细胞内外的浓度差，于是细胞内的浓溶液不断向外扩散，溶剂又不断进入药材组织细胞中，如此多次往返，直至细胞内外溶液浓度达到动态平衡时，将此饱和溶液滤出，继续多次加入新溶剂，就可以把所需要的成分近于完全溶出或大部溶出。中草药成分在溶剂中的溶解度直接与溶剂性质有关。运用溶剂提取法的关键，是选择适当的溶剂。溶剂选择适当，就可以比较顺利地将需要的成分提取出来。选择溶剂要注意以下三点：①溶剂对有效成分溶解度大，对杂质溶解度小；②溶剂不能与中药的成分起化学变化；③溶剂要经济、易得、使用安全等。选用什么样的溶剂提取中药成分，取决于溶剂的性质和被提取成分的化学结构及溶解性。溶剂可分为水及酸水或碱水。亲水性有机溶剂、亲脂性有机溶剂。根据“相似相溶原理”，欲提取亲脂性成分应选用亲脂性溶剂，欲提取亲水性成分则选用水及亲水性溶剂。应注意的是乙醇、甲醇虽然属于亲水性溶剂，它们可与水随便混溶，但很多亲脂性成分可溶于乙醇、甲醇，所以乙醇或甲醇溶液中既有水溶性成分，也有很多脂溶性成分。乙醇或甲醇中可加入水配成不同浓度的乙醇或甲醇，根据提取成分的情况可选用适当浓度的醇进行提取。⑵提取方法用溶剂提取中药成分，常用浸渍法、渗漉法、煎煮法、回流提取法、连续提取法等。同时，原料的粉碎度、提取时间、提取温度、设备条件等因素也都能影响提取效率，必须加以考虑。①浸渍法：浸渍法是将处理过的药材，用适当的溶剂在常温或温热（60～80℃）的情况下浸渍以溶出其中成分。本法适用于有效成分遇热易破坏以及含多量淀粉、树胶、果胶、粘液质的中药的提取。比较简单易行，但浸出率较差，特别是用水为溶剂，其提取液易于发霉变质，须注意加入适当的防腐剂。②渗漉法：渗漉法是将中草药粉末装在渗漉器中，不断添加新溶剂，使其渗透过药材便可认为基本上已提取完全。在大量生产中常将收集的稀渗淮液作为另一批新原料的溶剂之用。本法浸出效率较高，浸出液较澄清，但溶剂消耗量大、费时长、操作仍嫌麻烦。③煎煮法：煎煮法是我国最早使用的传统的浸出方法。所用容器一般为陶器、砂罐或铜制、搪瓷器皿，不宜用铁锅，以免药液变色。直火加热时最好时常搅拌，以免局部药材受热太高，容易焦糊。有蒸汽加热设备的药厂，多采用大反应锅、大铜锅、大木桶，或水泥砌的池子中通入蒸汽加热。还可将数个煎煮器通过管道互相连接，进行连续煎浸。此法简便，药中大部分成分可被不同程度地提出，但含挥发性成分及有效成分遇热易破坏的中药不宜用此法，对含有多糖类中药，煎煮后，药液比较粘稠，过滤比较困难。④回流提取法：应用有机溶剂加热提取，需采用回流加热装置，以免溶剂挥发损失。小量操作时，可在圆底烧瓶上连接回流冷凝器。溶剂浸过药材表面约1～2cm。在水浴中加热回流，一般保持沸腾约1小时放冷过滤，再在药渣中加溶剂，作第二、三次加热回流分别约半小时，或至基本提尽有效成分为止。此法提取效率较冷浸法高，大量生产中多采用连续提取法。但受热易破坏的成分不宜用此法，且溶剂消耗量仍大，操作亦麻烦。⑤连续提取法：为了弥补回流提取法中需要溶剂量大、操作较烦的不足，可采用连续提取法。实验室常用脂肪提取器或称索氏提取器。应用挥发性有机溶剂提取中草药有效成分，不论小型实验或大型生产，均以连续提取法为好，而且需用溶剂量较少，提取成分也较完全。连续提取法，一般需数小时才能提取完全。提取成分受热时间较长，遇热不稳定易变化的成分不宜采用此法。上述几种为提取中药的传统方法，存在的缺点主要有：(1)煎煮法有效成份损失较多,尤其是水不溶性成份；(2)提取过程中有机溶剂有可能与有效成分作用,使其失去原有效用；(3)非有效成分不能被最大限度的除去,浓缩率不够高；(4)提取液中除有效成分外,往往杂质较多,尚有少量脂溶性成分,给精制带来不利；
酒精计法检测验证报告报告编号：XZ/YZ20170003 编写： 审核： 时间：
酒精计法检测验证报告 1. 目的：本方案是酒精计法检测酒精考察，证明酒精棉签的挤出液里的酒精可以用精密酒 精计进行检测。 2. 原理：用精密酒精计读取酒精体积分数示值，按GB/T10345-2007白酒分析法附录B进 行温度校正，求得在20℃时乙醇含量的体积分数，即为酒精度。 3.实验依据：《消毒技术规范》2002版2.2.1.2.11乙醇含量的测定第二法比重法 GB/T10345-2007白酒分析法6.2酒精计法 4试验条件： 4.1室温：约20℃ 4.2检测方法：在洁净、干燥的100ml量筒中加入酒精样品溶液，静置数分钟后，待溶液中气泡消失后，放入洁净、擦干的酒精计，不应触量筒壁，同时插入温度计，平衡5min，水平观测，读取液面处与酒精计刻度弯月面相切处的刻度示值，同时记录温度。根据测得的酒精计示值和温度，查附录B换算成20℃时样品的酒精度。 4.3 样品：酒精棉签，批号：20171101、20171110、20171120，规格：30支/瓶 4.4检测器具： 精密酒精计：分度值为0.1%vol ，70-80%，两支量筒：100ml ，3个 温度计：2支 4.5检测人员：陶荣玲，复检人员：舒秀珍 5方法验证精密度 5.1配制方法：取酒精棉签，批号：20171101、20171110、20171120，规格：30支/瓶 各20瓶，分别取其挤出液100ml用酒精计检测，两个人检测结果绝对差值，不应超过平均值的0.5%。 5.2数据记录及处理见下表
表1 酒精计检测数据 表2 酒精计检测数据 表3 酒精计检测数据对比
乙醇提取法 一、参考文献：2011Antioxidant Activity of Uruguayan Propolis. In Vitro Ethanolic Extracts Preparation. Propolis samples from the southern region of Uruguay were provided as raw material by the Uruguayan Beekeepers Association (SAU), collected in late spring/early summer, and stored at 20 C in the dark until use. Propolis ethanolic extracts (EEP, 40 g/L) were prepared by adding 20 mL of 75% ethanol to 2 g of raw propolis previously milled. The suspension was heated to 50-60 C for 30 min under agitation and then filtered. This procedure was repeated twice over each sample, and the collected extracts were combined to a final volume of 50.0 mL. EEP were gently bubbled with nitrogen and stored at room temperature in the dark. The UV absorption spectra were performed in a Cary 50 spectrophotometer (Varian, USA) Total Polyphenols and Flavonoids Determination.The relative content in polyphenols was determined according to the Folin Ciocalteu (FC) method.Briefly, dilutions of EEP or gallic acid (standard) were mixed with FC reagent, and 10% Na 2CO 3 was added.Absorbance at 760 nm was measured in a Varioskan Flash microplate reader (Thermo Electron Corp.) after 2 h of incubation at room temperature. Flavonoid content was determined by mixing dilutions of EEP or quercetin (standard) with 5% Al2Cl3;21 the mixture was left in the dark for 30 min, and the absorbance was measured at 425 nm in the microplate reader. 二、参考文献：2004Antioxidant activity of propolis of various geographic origins 样品的制备：Crude propolis materials were extracted with ethanol at room temperature for 24 h. The ethanol suspension was separated by centrifugation, and the supernatant was concentrated under reduced pressure to give EEP. Total polyphenol contents in EEP were determined by the Folin-Ciocalteau colorimetric method (Kumazawa,Taniguchi et al., 2002; Singleton, Orthofer, & Lamuela-Raventos, 1999). EEP solution (0.5 ml) was mixed with 0.5 ml of the Folin-Ciocalteau reagent (Kanto Chemicals, Tokyo, Japan) and 0.5 ml of 10% Na2CO3, and the absorbance was measured at 760 nm after 1 h incubation at room temperature. EEP samples were evaluated at the final concentration of 20 mg/ml. Total polyphenol
0711 乙醇量测定法 —、气相色谱法 本法系采用气相色谱法（通则0521) 测定各种含乙醇制剂中在20℃时乙醇 (C 2H 5 OH )的含量（％) (ml /ml ) 。除另有规定外，按下列方法测定。 第一法（毛细管柱法） 色谱条件与系统适用性试验采用（6% )氰丙基苯基- (94%)二甲基聚硅氧烷 为固定液的毛细管柱；起始温度为40℃，维持2分钟，以每分钟3℃的速率升温至65℃，再以每分钟25℃的速率升温至200℃，维持10分钟；进样口温度200℃；检测器(FID )温度220℃；采用顶空分流进样，分流比为1：1；顶空瓶平衡温度为85℃，平衡时间为20分钟。理论板数按乙醇峰计算应不低于10000，乙醇峰与正丙醇峰的分离度应大于2 .0。 校正因子测定精密量取恒温至20℃的无水乙醇5ml，平行两份；置100ml 量瓶中，精密加入恒温至20的正丙醇（内标物质）5ml，用水稀释至刻度，摇匀，精密量取该溶液lml ，置100ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀（必要时可进一步稀释），作为对照品溶液。精密量取3ml，置10ml顶空进样瓶中，密封，顶空进样，每份对照品溶液进样3次，测定峰面积，计算平均校正因子，所得校正因子的相对标准偏差不得大于2.0% 。 测定法精密量取恒温至20的供试品适量（相当于乙醇约5 ml ) ，置 100ml 量瓶中，精密加入恒温至20 ℃的正丙醇5 ml，用水稀释至刻度，摇匀，精密量取该溶液lml ，置100ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀(必要时可进一步稀释），作为供试品溶液。精密量取3 ml ，置10ml顶空进样瓶中，密封，顶空进样，测定峰面积，按内标法以峰面积计算，即得。 【附注】毛细管柱建议选择大口径、厚液膜色谱柱，规格为30m×0.53mm×3.00um。 第二法（填充柱法） 色谱条件与系统适用性试验用直径为0.18~0.25mm的二乙烯苯-乙基乙烯苯型高分子多孔小球作为载体，柱温为120~150℃。理论板数按正丙醇峰计算应不低700，乙醇峰与正丙醇峰的分离度应大于2.0。 校正因子测定精密量取恒温至20℃的无水乙醇4ml、5ml、6 ml，分别置
人乙醛脱氢酶（ALDH)酶联免疫分析（ELISA） 试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，组织及相关液体样本中乙醛脱氢酶（ALDH)的含量。 实验原理： 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人乙醛脱氢酶（ALDH)水平。用纯化的人乙醛脱氢酶（ALDH)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入乙醛脱氢酶（ALDH)，再与HRP标记的乙醛脱氢酶（ALDH)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的乙醛脱氢酶（ALDH)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人乙醛脱氢酶（ALDH)浓度。 试剂盒组成： 试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份 封板膜2片（48）2片（96） 密封袋1个1个 酶标包被板1×481×962-8℃保存标准品：90ng/ml0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存 样本处理及要求： 1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上 清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。 2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心 20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。 3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程 中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。 4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/ 分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分
XXXX大学 毕业论文（设计） 题目：迷迭香乙醇提取物的制备及抗氧化活性研究姓名：XXX 学院：XXXXXX 专业：XXXXXXX 班级： 学号： 指导教师： 201X年X月X日
目录 摘要 (1) ABSTRACT (2) 1引言 (3) 1.1迷迭香的功用价值 (3) 1.2迷迭香抗氧化剂 (3) 1.3微波辅助萃取技术 (4) 1.4论文研究的主要内容 (5) 2 材料与方法 (6) 2.1材料与设备 (6) 2.1.1 主要材料 (6) 2.1.2 主要试剂 (6) 2.1.3 主要设备及仪器 (6) 2.2实验方法 (6) 2.2.1 原料预处理 (6) 2.2.2 迷迭香乙醇提取物的粗提取 (6) 2.2.3 迷迭香乙醇提取物的分离与含量测定 (7) 2.2.4 迷迭香乙醇提取物清除DPPH自由基能力的测定 (7) 2.2.5 实验流程 (7) 3 结果与分析 (10) 3.1溶剂浓度对提取物得率的影响 (10) 3.2微波功率对提取物得率的影响 (10) 3.3提取时间对提取物得率的影响 (11) 3.4料液比对提取物得率的影响 (12) 3.5迷迭香乙醇提取物制备的正交试验 (12) 3.6迷迭香乙醇提取物制备的验证试验 (13) 3.7迷迭香脂溶性提取物清除DPPH自由基能力测定 (13) 4 讨论 (15)
致谢 (16) 参考文献 (17)
迷迭香乙醇提取物的制备及抗氧化活性研究 食品质量与安全XXX 指导教师XXX 摘要：迷迭香作为一种香草材料，具有诸多功用价值，尤其有研究发现其具有极高的抗氧化活性。为探索迷迭香乙醇提取物微波辅助提取的最佳工艺条件，并对其抗氧化活性进行研究，本文利用微波辅助萃取技术萃取迷迭香中的天然抗氧化活性成分。通过实验，确定其最佳提取条件为：溶剂浓度80%，微波功率为700w，提取时间为5min，料液比为1:12，在这个条件下提取迷迭香乙醇提取物，平均得率为13.3%。在确定最佳提取工艺的基础上，测定迷迭香乙醇提取物清除DPPH自由基能力，结果发现，迷迭香乙醇提取物具有优良的氧化活性，可以应用于食品、药品和化工等领域。 关键词：迷迭香；抗氧化；微波辅助；提取 Study on Preparation of Rosemary ethanol extract and
№.6 陕西科技大学学报 Dec.2007 Vol.25 J OU RNAL OF SHAANXI UN IV ERSIT Y OF SCIENCE&TECHNOLO GY ?41?3 文章编号:100025811(2007)0620041204 啤酒废酵母中乙醇脱氢酶提取工艺的研究 毛跟年,张晓霞,张云丽,遆艳萍 (陕西科技大学生命科学与工程学院,陕西西安 710021) 摘 要:以废弃的啤酒酵母为原料,采用超声辅助的方法对其中的AD H进行了提取.实验考 察了料液比、啤酒酵母用量、p H、超声波功率、超声全程时间和提取液浓度对AD H提取效果 的影响,进一步通过L9(33)正交试验对AD H的提取工艺进行了优化,得到了啤酒废酵母中 AD H提取的最优方案为p H值8.5、超声功率320W、超声时间10min,在此条件下所得的 AD H活力可达1806U/mL. 关键词:啤酒废酵母;乙醇脱氢酶;提取 中图分类号:Q554+.9 文献标识码:A 0 引言 乙醇脱氢酶(AD H)属氧化还原酶第一亚类,作用于-CHO H基团,是以NAD+、NADP+或PQQ为辅酶,催化伯醇和醛之间可逆反应的一种含锌金属酶,为胞内酶[124],已广泛应用于化工、医药、食品等工业领域.目前商品AD H多来源于动物肝脏,提取纯化工艺比较成熟,但其资源有限且价格昂贵,远远不能满足市场的需要,而啤酒厂废弃的啤酒酵母中含有大量的AD H.本文主要研究了从啤酒废酵母中提取AD H的工艺,为拓宽AD H的来源、降低AD H的生产成本提供了新的途径. 1 材料与方法 1.1 材料与设备 (1)啤酒废酵母:由西安汉斯啤酒厂提供. (2)药品试剂:辅酶Ⅰ(NAD+)(Sigma公司生产),磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、乙醇等均为分析纯试剂. (3)仪器设备:H H22超声波细胞粉碎机(国华电器有限公司)、T G L216G台式离心机(宁波新芝生物科技股份有限公司)、UV29100紫外可见分光光度计(北京瑞利分析仪器公司)等. 1.2 实验方法 1.2.1 AD H活性测定 AD H活性测定采用Vallec2Hoch法[5].将0.1mL AD H酶液与3mL p H为8.5的磷酸盐缓冲液混合,于37℃水浴预热5min,然后加入0.4mL的2M乙醇和0.1mL的4.5mM NAD+溶液,37℃水浴反应5min,立即置于沸水中灭活,于340nm波长处检测吸光度值.空白对照用蒸馏水代替加NAD+,其余均相同. AD H酶活力(U/mL)定义:将AD H在37℃每分钟氧化乙醇脱氢生成乙醛,即还原NAD+为NAD H,在340nm处测定的吸光度变化0.001作为一个活力单位(U). 1.2.2 AD H的提取方法 3收稿日期:2007-09-17 作者简介:毛跟年(1962-),男,陕西省泾阳县人,教授,研究方向:生物制药
一、生物发酵法酿造酒精 1.1生物发酵法的地位 由于化学合成法酒精有含有较多杂质等缺陷，其应用受到限制，因此我国酒精生产以发酵法为主，尤其是随着石油储量的锐减，发酵法酒精工业将日趋重要。 我国酒精年产量为300万吨，仅次于巴西、美国，列为世界第3位。其中发酵法酒精占绝对优势，80%左右的酒精用淀粉质原料生产、约有10%的酒精用废糖蜜生产、以亚硫酸盐纸浆废液等纤维原料生产的酒精约占2%左右，合成酒精占酒精总产量的3.5%左右。 1.2生产原料 淀粉质原料是生产酒精的主要原料。用于发酵法生产酒精的原料主要有：薯类（甘薯、马铃薯、木薯、山药等）；粮谷类（高粱、玉米、大米、谷子、大麦、小麦、燕麦、黍等）；糖质原料（甘蔗、甜菜、糖蜜等）；野生植物（橡子仁，土茯苓、蕨根、石蒜等）；农产品加工副产品（米糠饼、麸皮、高粱糠、淀粉渣等）；纤维质原料（秸秆、甘蔗渣等）；亚硫酸造纸废液等。 我国大多数工厂是采用红薯和玉米为原料生产酒精。 玉米化学成分： 水分蛋白质脂肪淀粉粗纤维灰分 7 8-10 3.1-5 60-65 1.3 1.7 红薯化学成分： 水分蛋白质脂肪淀粉粗纤维灰分 14 9-15 0.5-3 15-30 1.1 0.9
1.3辅助物料 辅助物料包括：酵母培养和糖化剂制备所需营养盐，调PH所用酸类、洗涤剂、消毒剂、脱水剂等。酒母，就是将酵母菌扩大培养，获得足够数量酵母菌的酵母培养液，以供酒精发酵之用。 酒精生产用水，按水的用处不同，大体分为以下三种： （1）酿造用水：或称工艺用水，凡制曲时拌料，微生物培养，制曲原料的浸泡、糊化、稀释、设备及工具的清洗等因其与原料、半成品、成品的直接接触，故统称为工艺用水。通常要求具有弱酸性，PH为4.0-5.0。 （2）冷却用水：蒸煮醪和糖化醪的冷却，发酵温度的控制，需大量的冷却用水。因其不与物料直接接触，故只需温度较低；硬度适中。为节约用水，冷却水应尽可能予以回收利用。 （3）锅炉用水：通常要求无固型悬浮物，总硬度和碱度应尽可能低，PH在25°时高于7，含油量及溶解物等越少越好。 1.4淀粉性质 1.4.1淀粉颗粒的形状 淀粉颗粒呈白色，不溶于冷水和有机溶剂，颗粒内部呈复杂的结晶组织。不同的淀粉颗粒具有不同的形状和大小。同一淀粉的颗粒大小也不均匀。淀粉颗粒具有抵抗外力作用较强的外膜，其化学组成与内层淀粉相同，但由于水分较少，密度较大，故强度较大。 1.4.2淀粉分子的结构 淀粉分子是由许多葡萄糖基团聚合而成的。根据淀粉分子链结构的不同，淀粉可分成直链和支链淀粉两类。直链淀粉溶解于70-80℃的温水中。支链淀粉具有分支，它不溶解于温水中。
乙醇脱氢酶（ADH）活性检测试剂盒说明书紫外分光光度法 货号：BC1080 规格：50T/48S 产品内容： 提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存。 试剂一：液体40mL×1瓶，4℃保存。临用前把试剂二转移到试剂一中，分装保存于-20℃。 试剂二：粉剂×1瓶，-20℃保存。 试剂三：液体5mL×1瓶，4℃保存。 产品说明： ADH是生物体内短链醇代谢的关键酶，催化乙醇与乙醛可逆转换，在很多生理过程中起着重要作用。哺乳动物ADH主要在肝脏生成，肝脏损伤导致ADH释放到血清中。血清ADH活性高低反映了肝功能是否异常。 ADH催化NADH还原乙醛生成乙醇和NAD+，NADH在340nm处有吸收峰，而NAD+没有；测定340nm吸光度下降速率，来计算ADH活性。 自备仪器和用品： 研钵、冰、低温离心机、紫外分光光度计、1mL石英比色皿、可调式移液器和蒸馏水。 操作步骤： 一、粗酶液提取： 1、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提 取液）进行冰浴匀浆。16000g，4℃离心20min，取上清置冰上待测。 2、细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞 加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；16000g，4℃离心20min，取上清液置冰上待测。 3、血清等液体：直接测定。 二、ADH测定操作：
1.分光光度计预热30min，调节波长到340nm，蒸馏水调零。 2.试剂一在25℃水浴中保温30min以上。 3.空白管：在1mL石英比色皿中依次加入100μL蒸馏水、800μL试剂一和100μL试剂三，迅速混匀后于 340nm测定吸光值变化，分别记录15s和75s时吸光值，分别记为A1和A2。△A空白管=A1-A2。空白管只需做1~2个。 4.测定管：在1mL石英比色皿中依次加入100μL上清液、800μL试剂一和100μL试剂三，迅速混匀后于 340nm测定吸光值变化，分别记录15s和75s时吸光值，分别记为A3和A4。△A测定管=A3-A4。 三、ADH活性计算： （1）按照蛋白浓度计算 活性单位定义：25℃中每毫克蛋白每分钟氧化1μmol NADH为1个酶活单位。 ADH(μmol/min/mg prot)=[(△A测定管–△A空白管)÷ε÷d×V反总×106]÷(Cpr×V样)÷T =1.61×(△A测定管–△A空白管)÷Cpr （2）按照样本质量计算 活性单位定义：25℃中每克组织每分钟氧化1μmolNADH为1个酶活单位。 ADH(μmol/min/g)=[(△A测定管–△A空白管)÷ε÷d×V反总×106]÷(W×V样÷V样总)÷T =1.61×(△A测定管–△A空白管)÷W （3）按细胞数量计算 活性单位定义：25℃中每104个细胞每分钟氧化1μmolNADH为1个酶活单位。 ADH(μmol/min/104cell)=[(△A测定管–△A空白管)÷ε÷d×V反总×106]÷(细胞数量×V样÷V样总)÷T=1.61×(△A测定管–△A空白管)÷细胞数量 （4）按液体体积计算 活性单位定义：25℃中每毫升样品每分钟氧化1μmol NADH为1个酶活单位。 ADH(μmol/min/mL)=[(△A测定管–△A空白管)÷ε÷d×V反总×106]÷V样÷T =1.61×(△A测定管–△A空白管) ε：NADH摩尔消光系数，6.22×103L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；
中国药典2000版一部附录 乙醇量测定法 附录Ⅸ M. 乙醇量测定法 一、气相色谱法 本法系用气相色谱法[附录Ⅵ Ｅ3.项下，照高效液相色谱法3.(1)测定各种制剂中 在20℃时乙醇(C2H5OH)的含量（%）（ml/ml）。除另有规定外，按下列方法测定。 色谱条件与系统适用性试验用直径为0.25～0.18mm的二乙烯苯－乙基乙烯苯型高 分子多孔小球作为载体,柱温为120～150℃；另精密量取无水乙醇4ml、5ml、6ml，分别 精密加入正丙醇（作为内标物质）5ml，加水稀释成100ml，混匀（必要时可进一步稀释），照气相色谱法（附录Ⅵ Ｅ）测定，应符合下列要求： (1)用正丙醇峰计算的理论板数应大于700； (2)乙醇和正丙醇两峰的分离度应大于2； (3)上述3份溶液各注样5次，所得15个校正因子的相对标准偏差不得大于2.0％。 标准溶液的制备精密量取恒温至20℃的无水乙醇和正丙醇各5ml，加水稀释成100 ml，混匀，即得。 供试溶液的制备精密量取恒温至20℃的供试品适量（相当于乙醇约 5ml）和正丙 醇5ml，加水稀释成100ml，混匀，即得。 上述两溶液必要时可进一步稀释。 测定法取标准溶液和供试品溶液适量，分别连续注样3次,并计算出校正因子和供 试品的乙醇含量，取3次计算的平均值作为结果。 【附注】 (1) 在不含内标物质的供试品溶液的色谱图中，与内标物质峰相应的位 置处不得出现杂质峰。 (2)标准溶液和供试品溶液各连续3次注样所得各次校正因子和乙醇含量与其相应的 平均值的相对偏差，均不得大于1.5％，否则应重新测定。 (3) 选用其他载体时，系统适用性试验必须符合本法规定。 二、蒸馏法 本法系用蒸馏后测定相对密度的方法测定各种制剂中在20℃时乙醇(C2H5OH)的含量（%）（ml/ml）。按照制剂的性质不同，分为下列三法。 第一法本法系供测定多数流浸膏、酊剂及甘油制剂中的乙醇含量。根据制剂中含 乙醇量的不同，又可分为两种情况。 1.含乙醇量低于30%者 取供试品，调节温度至20℃，精密量取25ml，置150～200ml蒸馏瓶中，加水约25ml，加玻璃珠数粒或沸石等物质，连接冷凝管，直火加热，缓缓蒸馏，速度以馏出液一滴接一 滴为准。馏出液导入25ml量瓶中，俟馏出液约达23ml时，停止蒸馏。将馏出液温度调节至20℃，加20℃的水至刻度，摇匀，在20℃时按相对密度测定（附录Ⅶ A）项下的方法测定 相对密度。在乙醇相对密度表内查出乙醇的含量（%）（ml/ml）,即为供试品中的乙醇含量（%）（ml/ml）。 2.含乙醇量高于30%者 取供试品，调节温度至20℃，精密量取25ml，置150～200ml蒸馏瓶中,加水约50ml，加玻璃珠数粒，如上法蒸馏。馏出液导入50ml量瓶中，俟馏出液约达48ml时，停止蒸馏。调节馏出液温度至20℃，加20℃的水至刻度，摇匀，在20℃时照上法测定相对密度。将查得所含乙醇的含量（%）（ml/ml）与2相乘，即得。
乙醇脱氢酶(ADH)检测试剂盒(乙醛比色法) 简介： 乙醇脱氢酶(Alcohol dehydrogenase，ADH)的系统名为乙醇：辅酶I氧化还原酶（alcohol：NAD+oxidoreductase），大量存在于人和动物肝脏、植物及微生物细胞之中，是一种含锌金属酶，具有广泛的底物特异性。乙醇脱氢酶够以烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)为辅酶，催化伯醇和醛之间的可逆反应：CH3CH2OH+NAD+→CH3CHO+NADH+ H+。在人和哺乳动物体内，乙醇脱氢酶与乙醛脱氢酶(ALDH)构成了乙醇脱氢酶系，参乙醇脱氢酶与体内乙醇代谢，是人和动物体内重要的代谢酶。作为生物体内主要短链醇代谢的关键酶，它在很多生理过程中起着重要作用。丙酮酸脱羧酶(PDC)、乙醇脱氢酶(ADH)是乙醇发酵途径的关键酶，无氧呼吸途径代谢产物的过程积累对细胞产生毒性，影响线粒体结构和三羧酸循环的相关酶活性。 Leagene乙醇脱氢酶(ADH)检测试剂盒(乙醛比色法)检测原理是在弱碱条件下，以乙醛为底物，乙醛在ADH催化下被NADH还原为乙醇，ADH每催化1分子乙醛消耗1分子NADH，通过分光光度比色法(分光光度计)测定吸光度的变化，计算出NADH的消耗速率进一步推算出乙醇脱氢酶活性水平。该试剂盒主要用于检测植物样本、血清等中乙醇脱氢酶活性。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。 组成： 自备材料： 1、研钵或匀浆器 2、离心管或试管 3、低温离心机 4、比色杯 5、分光光度计编号 名称TE0473 50T Storage 试剂(A):ADH Lysis buffer250ml4℃避光试剂(B):PMSF1ml-20℃ 试剂(C):ADH Assay buffer100ml RT 试剂(D):NADH1支-20℃ 使用说明书1份
乙醇中药提取液专用MVR蒸发器 传统中药的乙醇提取浓缩生产工艺，能耗高，乙醇回收率低，这一直困扰着中药生产企业。现在我南宁飞创能源科技有限公司自主研发的MVR节能蒸发器已经能很好的解决这些问题。公司自主研发的MVR节能蒸发器为中药业界创造了更高的生产标准，极大的提高用户的竟争力。 MVR蒸发器全称机械式蒸汽再压缩蒸发器。是Mechanical Vapor Recompression的缩写。是上二十世纪九十年代末开发出来的一种高效节能的新型设备。MVR蒸发器采用低温、低压汽蒸技术和清洁能源（电能）产生蒸汽，将媒介中的水分分离出来。目前MVR是国际上最先进的蒸发技术，是传统蒸发器的升级换代产品。目前该技术只有北美和欧洲等一些发达国家掌握,并在众多领域中广泛应用。南宁飞创能源科技有限公司自主研发的MVR节能蒸发器已经成功应用于中药乙醇提取液减压浓缩产业生产。其最大的优点在于低能耗、无污染、自动化程度高；蒸发一吨乙醇仅用30度电，生产过程中可减压至-60KPA，同时乙醇并未因此而损耗。 MVR蒸发器的基本原理是：在MVR蒸发器系统内，一定的压力下，利用蒸汽压缩机对换热器中的不凝气（开始预热时）进行压缩，从而产生热蒸汽，并释放热能。同时产生的二次蒸汽在机械式蒸汽压缩机（类似于鼓风机）的作用后，能在蒸发器系统内循环利用所产生
的二次蒸汽的热能，而这些热能能使系统内的温度提升5~20℃。新鲜蒸汽仅用于补充热损失和进出热焓，大幅度降低蒸发器对外来新鲜蒸汽的能耗,提高了热效率。避免使用外部蒸汽和锅炉（本蒸汽在压缩式节能蒸发器的主要运行费用仅仅是驱动压缩机的电能所产生的费用）。电能属于清洁能源，对环境不造成任何污染。MVR蒸发器真 有害气体的排放）。在各正达到污染“零”的排放（完全没CO2 、SO2 级政府大力提倡节能减排、保护环境的今天，MVR技术的应用具有特别重要的显示意义。 目前，在国内的中药生产企业中，乙醇提取液采用MVR蒸发器技术减压生产的尚属空白。我公司现在已成功将此技术应用于穿心莲乙醇提取液的减压浓缩，并实现产业化生产。 MVR工艺简单示意图：
乙醇脱氢酶―1B(ADH1B)基因的生物信息学分析 摘要：本研究通过对ADH1B编码基因产物的亚细胞定位、信号肽、疏水性等预测，分析其基因编码蛋白的功能。结果显示，ADH1B编码基因产物为亲水性蛋白，不具备信号肽和跨膜结构。二级结构以α-螺旋与无规则卷曲为主。序列分析表明，ADH1B 基因编码产物很可能在免疫应答中起到关键作用。 关键字：ADH1B基因；生物信息学；结构与功能 乙醇脱氢酶乙醇氧化体系是肝脏中代谢酒精的一条主要途径。乙醇脱氢酶氧化体系包括醇脱氢酶（ADH）和醛脱氢酶（ALDH）。国内外研究发现ADH和ALDH都是多个同工酶组成的大家族，现有研究已发现ADH包括ADH1A、ADH1B、ADH1C、ADH4、ADH5、ADH6和ADH7共7个基因。根据ADH同工酶的电泳泳动度、动力学特性、对酒精的亲和力和是否受四甲基吡唑的抑制将ADH分为5种类型，ADH1A，ADH1B和ADH1C为I型，ADH4，ADH5，ADH7和ADH6分别为Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ和V型。ADH1B 和ADH1C还具有基因多态性。
1 分析原理与方法 从GenBank数据库中获得ADH1B基因及其同源蛋白质基因；采用DNAMAN及DNA Star软件预测分析理化性质；用ProtScale在线软件分析疏水性和亲水性；采用SignalP3.0预测蛋白信号肽；用PSORT Ⅱ软件进行亚细胞定位分析；用在线分析软件PBIL 和SWISS―MODEL预测二级和三级结构。 2 分析过程与结果 2.1 ADH1B基因编码产物的理化性质 用Bioedit及DNA Star分析软件对乙醇脱氢酶-1B（ADH1B）基因编码产物的理化性质进行预测，由ADH1B基因的氨基酸组成可知，ADH1B基因编码375个氨基酸，组成中最多的氨基酸是Val（缬氨酸），所占比例为10.40%；在pH7.0环境下其电荷量偏低、为-13.732；其理论分子量为39.833 kD，理论等电点为8.53。 2.2 ADH1B基因编码产物疏水性，亲水性预测 分析蛋白质的疏水性/亲水性由ExPASAy服务器的Protscale分析软件，采用K―D法预测。分析氨基酸的得分可知。多肽链第62位的亮氨酸（Leu）具有最高的分值（2.267），疏水性最强；第249位的赖氨酸（Lys）具有最低的分值（―2.244），亲水性最强。
酒精度代表的就是酒精百分比含量。如100ml的33度酒精度的酒就含33ml的酒精，假设这100ml的酒重93.4克（酒精密度为0.8，水密度为1），那就含30.8克酒精。… 酒精的度数 酒的度数表示酒中含乙醇的体积百分比，通常是以20℃时的体积比表示的，如50度的酒，表示在100毫升的酒中，含有乙醇50毫升(20℃)。 酒精度单位：(V/V),百分之七的意思是100体积单位的酒中含有7体积单位的乙醇。例如100升酒中含有7升的乙醇。 一般是以容量来计算，故在酒精浓度后，会加上“V ol”以示与重量计算之区分。 酒精度表示法 表示酒精含量也可以用重量比，重量比和体积比可以互相换算。 标签上酒精含量的表示法有两种： 欧式百分比法〔酒精度百分比法〕：欧洲、日本等国，是以百分比或度来表示，如威士忌一般为40%V ol或43%V ol，白兰地为40%V ol，葡萄酒为12%~12.5%V ol。美式proof 法：美国、加拿大是用proof 来表示。proof 之值等于百分比之两倍，如80proof=40%。 酒精度的测定 一、密度瓶法 1.原理 以蒸馏法去除样品中的不挥性物质，用密度瓶法测出试样（酒精水溶液）20℃时的密度，查表求得在20℃时乙醇含量的体积分数，即为酒精度。 2.仪器 2.1 全玻璃蒸馏器：500mL。 2.2 恒温水浴：控温精度±0.1℃。 2.3 附温度计密度瓶：25mL或50mL。 3.试样液的制备 用一干燥、洁净的100mL容量瓶，准确量取样品（液温20℃）100mL于500mL 蒸馏瓶中，用50mL水分三次冲洗容量瓶，洗液并入蒸馏瓶中，加几颗沸石或玻璃珠，连接蛇形冷却管，以取样用的原容量瓶作接收器（外加冰浴），开启冷却水（冷却水温度宜低于15℃），缓慢加热蒸馏（沸腾后的蒸馏时间应控制在30min －40min内完成），收集馏出液，当接近刻度时，取下容量瓶，盖塞，于20℃水浴中保温30min，再补加水至刻度，混匀，备用。 4.分析步聚 将密度瓶洗净，反复烘干、称量，直至恒重（m）。 取下带温度计的瓶塞，将煮沸冷却至15℃的水注满已恒重的密度瓶中，插上带温度计的瓶塞（瓶中不得有气泡），立即浸入20.0℃±0.1℃恒温水浴中，待内容物温度达20℃，并保持20min不变后，用滤纸快速吸去溢出侧管的液体，立即盖好侧支上的小罩，取出密度瓶，用滤纸擦干瓶外壁上的水液，立即称量（m1）。将水倒出，先用无水乙醇，再用乙醚冲洗密度瓶，吹干（或于烘箱中烘干），用试样液反复冲洗密度瓶3至5次，然后装满。重复上述操作，称量（m2）。 5.结果计算 试样液（20℃）的相对密度按下式计算。
枳实药材乙醇提取物的化学成分研究 目的：研究枳实药材乙醇提取物的化学成分。方法：采用硅胶柱、开放ODS 柱、制备液相色谱、HW-40F凝胶柱、大孔树脂柱对枳实药材乙醇提取物进行分离纯化，根据理化性质和波谱（质谱、氢谱、碳谱）数据分析鉴定化合物结构。结果：从枳实药材乙醇提取物中分离得到8个化合物，分别鉴定为Rimboxo （1）、胸苷（2）、尿嘧啶（3）、环-（亮氨酸1-异亮氨酸2-丙氨酸3-苏氨酸4-甘氨酸5-苏氨酸6-苯丙氨酸7）（4）、环-（亮氨酸1-亮氨酸2-脯氨酸3-酪氨酸4-甘氨酸5-丝氨酸6-脯氨酸7）（5）、水合橙皮内酯-β-D-葡萄糖苷（6）、伞形花内酯（7）、里那醇苷（8）。结论：化合物1、2、3、8为首次从柑橘属植物中分离得到，化合物4、5、6为首次从枳实药材中分离得到，该研究为枳实药材质量评价奠定了一定基础。 ABSTRACT OBJECTIVE：To study the chemical constituents of ethanol extract from Cirtus aurantium. METHODS：The ethanol extract of C. aurantium was isolated and purified by silica gel column，open ODS column，preparation liquid chromatography，HW-40F gel column and macroporous resin column. The structure of compounds was analyzed and identified according to physicochemical properties and spectral data （mass spectrum，hydrogen spectrum，carbon spectrum）. RESULTS：Eight compounds were isolated from ethanol extract of C. aurantium，i.e. Rimboxo （1），Thymidine （2），Uracil （3），Cyclo-（Leu1-Ile2-Ala3-Thr4-Gly5-Thr6-Phe7）（4），Cyclo-（Leu1-Leu2-Pro3-Tyr4-Gly5-Ser6-Pro7）（5），Meranzin hydrate-β-D-glucoside （6），Umbelliferone （7），Linaloyl glucoside （8）. CONCLUSIONS：Compound 1，2，3，8 are isolated from Citrus L. for the first time，compound 4，5，6 were isolated from C. aurantium for the first time. The study lays the foundation for quality evaluation of C. aurantium. KEYWORDS Cirtus aurantium；Chemical constituent；Structural identification；Ethanol extract；Citrus L. 常用理气中药枳实主产于江西新干、樟树等地，经产地及市场资源调查发现，绝大多数枳实药材来源于芸香科柑橘属植物酸橙（Citrus aurantium L.）的干燥幼果。相关文献报道，酸橙含有多种活性成分，果实中的香豆素类、黄酮类成分均对胃肠道功能具有调节作用[1-2]；此外，多甲氧基黄酮、柠檬苦素类成分还具有抗肿瘤活性[3]。本研究对枳实药材进行化学成分研究，以期为酸橙幼果的进一步开发利用提供参考。 1 材料 1.1 仪器 Avance HD型600 MHz 核磁共振仪（德国Bruker公司，四甲基硅烷为内标）；