种子生活力的测定方法
种子生活力的测定有以下几种方法：
（一）氯化三苯基四氮唑法( TTC)
1．将种子用温水（约30℃）浸泡2--6小时，使种子充分吸胀。
2．随机取种子100粒，红花、蓖麻等具有外壳的需要去掉外壳，豆类种子要去皮。然后沿种胚中央准确切开，取一半备用。
3．将准备好的种子浸于2，3，5-三苯基氯化四氮唑(TTC)溶液中，于恒温箱( 30～35℃)中保温30分钟。4．染色结束后要立即进行鉴定，因放久会褪色。倒出TTC溶液，再用清水将种子冲洗1--2次，观察种胚被染色的情况，凡种胚全部或部分被染成红色的即为具有生命力的种子，种胚不被染色的为死种子。如果种胚中非关键性部位（如子叶的一部分）被染色，而胚根或胚芽的尖端不染色，都属于不能正常发芽的种子。
（二）溴麝香草酚蓝法（BTB法）
1．浸种：同上述 TTC 法。
2．BTB 琼脂凝胶的制备：取 0.1% BTB 溶液 100 mL 置于烧杯中，将 1 g 琼脂剪碎后加入，用小火加热并不断搅拌。待琼脂完全溶解后，趁热倒在 4 个干洁的培
养皿中，使成一均匀的薄层，冷却后备用。
3．显色：取吸胀的种子 200 粒，整齐地埋于准备好的琼脂凝胶培养皿中，种子胚朝下平放，间隔距离至少 l cm 。然后将培养皿置于 30 ～ 35 ℃下培养
1 ～
2 小时，在蓝色背景下观察，如种胚附近呈现较深黄色晕圈是活种子，否则是死种子。
4．计算活种子百分率。
用沸水杀死的种子作同样处理，进行对比观察。（三）靛红染色法
步骤同TTC染色法。
注意事项
1．染料的浓度要适当，染色时间不能太长（如用红墨水染色，只需要5～10分钟即可），否则不容易区别染色与否。
2．靛红染色法测定种子生活力，适用于豆类、麻类、瓜类、十字花科、果树、乔灌木种子的生活力测定。
（四）碘化钾反应法
1．将种子在水中浸18小时。
2．取出种子放在垫有湿滤纸的培养皿内，将培养皿置30℃恒温箱中，不同植物种子放置时间不同，如松种子放48小时，落叶松放72小时。
3．用刀片把胚部切下，然后浸入碘碘化钾溶液中
20--30分钟后，取出胚用水冲洗12分钟，然后在垫有白纸的玻璃板上进行观察。
4．鉴别种子生活力的标准是：有生活力的种子的胚部全部染成不同程度的黑色或灰色，或者胚根部呈褐色，子叶为黄色。无生活力种子的胚部全部染成黄色，或子叶呈灰色或黑色，胚根呈黄色，或胚根末端呈黑色或灰色，而其他部分呈黄色。
5．此法适于松属、云杉属和落叶松属的种子生活力测定。
（五）剥胚法
将种子在清水中浸泡24小时，使种皮软化，切开种皮，有胚乳的种子，还须将胚乳切开，用解剖刀和解剖针小心地取出胚。放在铺有湿润滤纸的培养皿内，每皿50粒，重复一次，放在20--25℃的温箱中，经2～10天后即可观察胚的生长情况。有生活力的胚在这段时间仍然坚实而呈白色，开始生长或转变为绿色；而死胚则变色腐烂。离体胚测定和TTC法测定一样比普通测定要快，但取胚时胚较易受伤。该法适于测定长度大于5mm种子的生活力。
（六）荧光法
1．直接观察法这种方法适用于禾谷类、松柏类及某些蔷薇科果树的种子生命力的鉴定，但种间的差异较大。用刀片沿种子的中心线将种子切为两半，使其切面向上放在无荧光的白纸上，置于紫外光灯下照射并进行观察、记载。有生活力的种子在紫外光的照射下将产生明亮的蓝色、蓝紫色或蓝绿色的荧光；丧失生命力的死种子在紫外光照射下多呈黄色、褐色以至暗淡无光，并带有多种斑点。
随机选取20粒待测种子，按上述方法进行观察并记载有生活力及丧失生活力的种子的数目，然后计算有生活力种子所占百分数。与此同时也作一平行的常规发芽试验，计算其发芽率作为对照。
2．纸上荧光随机选取50粒完整无损的种子，置烧杯内加蒸馏水浸泡10～15分钟令种子吸胀，然后将种子沥干，再按0.5cm的距离摆放在湿滤纸上（滤纸上水分不宜过多，防止荧光物质流散），以培养皿覆盖静置数小时后将滤纸（或连同上面摆放的种子）风干（或用电吹风吹干）。置紫外光灯下照射，可以看到摆过死种子的周围有一圈明亮的荧光团，而具有生活力的种子周围则无此现象。根据滤纸上显现的荧光团的数目就可以测出丧失生活力的种子的数量，并由此计算
出有生活力种子所占的百分率。此外，可与此同时作一平行的常规种子萌发试验，计算其发芽率作为对照。这个方法应用于白菜、萝卜等十字花科植物种子生命力的鉴定效果好。但不适用衰老、死亡后减弱或失去荧光的种子，因此，对它们只宜采用直接观察法。
实训结果记录分析：一般的种子可全部剥皮，取出种仁。发现的空粒、腐坏粒和病虫害粒记入表格。剥出的种仁先放人盛有清水的器皿中，待一个重复全部剥完后再一起放入染液中，使溶液淹没种仁，上浮者要压沉。
（七）抗冷法
1．将种子按普通发芽试验方法置床，每个样品重复4次。然后在10℃、黑暗条件下处理7天后，移至适宜温度下，交替光照培养6天，凡正常幼苗作为高活力种子。
2．抗冷测定主要适用于春播喜温作物，是在发芽试验前或发芽试验期间将种子置于低温和潮湿的土壤中经一定时间的处理后，移至适宜温度下生长，模拟早春田间逆境条件，观察种子发芽成苗的能力。
（八）低温法
1．取试样200粒或400粒，分4次重复，用纱布包好，写好标签，放入冷水中（3~6℃）浸泡一定时间，然后取出进行标准发芽试验，测定种子发芽势、发芽率、发芽指数和活力指数。
2．此法是将种子浸泡在低温水中，因此，种子会受到吸胀冷害、吸胀损伤及缺氧的损害，活力低的种子经过一定时间的处理后就会丧失发芽力，而活力高的种子由于抗逆性强仍能保持其发芽力。冷浸后所测得的指标能较好地反映种子活力的高低。
（九）电导法
1．取试样两份各50粒种子，称重至小数两位，然后放入烧杯内，用量筒向各烧杯加入250ml无离子水，另一烧杯加无离子水为对照，于20℃浸泡24h，然后用电导仪测定浸出液的电导率。
2．高活力种子细胞膜完整性好，浸入水中后渗出的可溶性物质和电解质少，浸泡液的电导率低；反之，低活力的种子细胞膜完整性差，浸泡时就会使细胞内的可溶性物质外渗，浸泡液的电导率高。
（十）加速衰老法
将200粒种子置于老化盒内的支架网上铺平，箱内加水，水面距支架6～8cm，然后加盖密封，置于规定温度（40～50℃）的种子老化箱内，经48～72h处理。期间，恒温箱也保持密闭。老化处理结束后将种子风干进行标准发芽试验，将长成正常幼苗的种子作为高活力种子。
种子生活力名词解释 种子生活力是指种子发芽或萌发的能力。其强度直接影响种子播后出苗率和发芽势。所以在品种选育过程中，通常需要检测种子的生活力。生活力强的种子出苗快，质量好。反之，则出苗慢，生活力差，难以形成健壮的幼苗。种子生活力不同于发芽率，发芽率仅指单个种子的发芽能力，而种子生活力既包括单个种子的发芽能力，又包括种子群体发芽能力。 种子的生活力强弱与种子自身的成分有关。影响种子生活力的因素主要有：种皮的厚薄、成熟度及破损程度、含水量、吸胀性、含油量等。 1、种子生活力的测定方法种子生活力的测定一般采用恒温培养的方法，即将未经过处理的种子放在规定温度( 25-30 ℃)、规定湿度(相对湿度90%-95%)的恒温培养箱中培养。为了减少大气对测定结果的影响，最好采用封闭式恒温培养箱。如果室内空气干燥，可采用喷雾方式进行加湿。种子生活力可采用一般植物种子检验方法，如风选、筛选、重量检查等来评价。种子生活力还可以通过物理和化学方法来测定，如紫外线光谱分析，电泳法等。 2、种子生活力的结果计算。种子生活力指数=每升温度下死亡数/每升培养温度下发芽数/100种子生活力指数越高，表示种子生活力越强。 3、种子生活力的结果解释。 (1)种子生活力指数，是指在规定条件下，种子单位质量中的发芽数，以每升温度下死亡数表示，即：种子生活力指数=每升温度下死亡数/每升培养温度下发芽数/100(2)种子生活力指数的解释：(a)每升温度下死亡数：是指某一培养温度
范围内，种子死亡到发芽所需时间。(b)每升培养温度下发芽数：是指某一培养温度下，每升培养温度下发芽的平均数。(c)种子生活力指数：是指某一温度下，种子群体发芽的能力，以群体发芽的平均数来表示。(d)种子生活力指数=(死亡率-----发芽率)/(死亡率+1)=死亡率--发芽率/(死亡率+1) 1。种子生活力是指种子发芽或萌发的能力。其强度直接影响种子播后出苗率和发芽势。所以在品种选育过程中，通常需要检测种子的生活力。生活力强的种子出苗快，质量好；反之，则出苗慢，生活力差，难以形成健壮的幼苗。种子生活力不同于发芽率，发芽率仅指单个种子的发芽能力，而种子生活力既包括单个种子的发芽能力，又包括种子群体发芽能力。
种子活力测定方法 种子活力测定方法是种子品质评价的重要手段之一，其目的是评估种子的发芽力和萌发势。种子活力与种子内蕴水分、呼吸能力、抗逆性等因素密切相关，是衡量种子质量的重要指标之一。下面将介绍几种常用的种子活力测定方法。 1. 发芽力测定法 发芽力是衡量种子活力的重要指标之一，一般指种子萌发成苗的能力。发芽力测定是判断种子品质的主要方法之一。其步骤如下： 首先，准备一定数量的种子样品，待测种子数量应根据需要而定，但一般不少于100粒； 然后，将种子样品放入适合发芽的培养介质中，如培养皿、培养箱等； 接下来，将培养介质放置在适宜的温度条件下，通常在25 - 30之间； 观察并记录下种子的发芽情况，一般记录发芽数、发芽率等参数； 最后，根据发芽数和发芽率来判断种子的活力水平。 2. 胚乳酸测定法 胚乳酸测定法是测定种子活力的一种间接方法。其原理是在种子老化过程中，胚乳中的淀粉被分解产生酸，通过测定胚乳酸含量来评估种子的活力。具体步骤如下： 首先，准备一定数量的种子样品，通常取100粒； 然后，将种子样品粉碎，并用适量的水浸泡片刻，使胚乳酸完全溶解； 接下来，取一定体积的溶液，加入胚乳酸试剂；
然后，用菲仪或pH计测定胚乳酸的浓度； 最后，根据胚乳酸浓度来评估种子的活力水平，通常胚乳酸浓度愈高，表示种子活力愈低。 3. 电导率测定法 电导率测定法是一种评估种子活力的简单、快速的方法。其原理是测定种子浸泡液中的电导率，通过判断电导率的高低来评估种子的活力。具体步骤如下： 首先，取适量的种子样品，用一定体积的水浸泡一段时间，通常为4小时； 然后，用电导计测定浸泡液中的电导率； 最后，根据电导率高低来判断种子的活力水平，电导率愈高，表示种子活力愈低。 4. 呼吸强度测定法 呼吸强度测定法是一种评估种子活力的方法，其原理是通过测定种子的呼吸强度来评估种子的活力。具体步骤如下： 首先，取一定数量的种子样品，并进行表面消毒处理； 然后，将种子样品放入呼吸仪中，并测定呼吸强度； 最后，根据呼吸强度来评估种子的活力水平，呼吸强度愈高，表示种子活力愈强。 综上所述，种子活力测定是衡量种子质量的重要方法之一，通过测定种子的发芽力、胚乳酸、电导率、呼吸强度等指标来评估种子的活力水平。不同的方法有其各自的优缺点，选择适合的方法来评估种子活力是十分重要的。
高级植物生理实验报告 种子生理 农学院 农药学 东保柱2013202054 2013年12月27日
种子活力 种子活力即种子的健壮度，是种子发芽和出苗率、幼苗生长的潜势、植株抗逆能力和生产潜力的总和，是种子品质的重要指标。长期以来都用发芽试验检验种子的质量，生产实践表明，实验室的发芽率与田间的出苗率之间往往存在很大差距。由于种子活力是一项综合性指标，因此靠单一活力测定指标判定其总活力水平或健壮度是不科学的。 实验 1 种子活力的测定 种子发芽率、发芽势和发芽指数的测定（垂直板发芽法） 一 原理 种子在适宜的水分、氧气、温度条件下经一段时间可以萌发。在最适宜条件和规定天数内，发芽的种子数与供试的种子的百分比，叫发芽率。为了表示萌发速度与整齐度，反映种子活力程度，规定在短时间内能正常萌发的种子数叫发芽率（测定发芽与发芽天数可参看下述的《种子发芽试验的技术规定》）。发芽数与发芽相应天数之比的和叫发芽指数。 二 材料与设备 1 材料 ：小麦种子。 2 设备：玻璃板 滤纸或湿沙 恒温箱 镊子 3 药品： 1%次氯酸钠（NaClO ） 三 实验步骤 1 选取完整健壮的种子10-15粒，三个重复，用1%次氯酸钠消毒0.5—1min,将种子均匀地排列在有滤纸的培养皿中，种子之间留有一定距离，加入适量蒸馏水，放于所需温度条件下萌发。 2 每天定时记录发芽粒数。根据附表《种子发芽试验的技术规定》计算种子的发芽势、发芽率和发芽指数。 3 计算 正常发芽的种子数 1、发芽率（%）= ×100 供试种子数 2、发芽指数(∑=Dt Gt Gi ) 式中：Gi —发芽指数 Gt ——在时间t 日发芽日数 Dt ——相应的发芽日数 四 注意事项 1 对于1—2天内全部萌发的迅速发芽类型种子，不适用上述公式计算，宜采用简化活力指数（见实验21）。 2 种子发芽试验的技术规定（附表）
测种子生活力的方法 种子生活力是指种子在适宜的环境条件下能够发芽和生长的能力。测定种子生活力的方法有多种，下面将介绍几种常用的方法。 1. 观察种子外观 种子外观可以直观地反映种子的生活力。健康的种子应该具有充实的种皮，颜色鲜亮，表面光滑。如果种子外观变得干燥、褐色或者有裂纹，那么可能是种子生活力下降的表现。 2. 浸泡法 将一定数量的种子放入水中浸泡，观察浸泡后的变化。健康的种子通常会吸水膨胀，并迅速沉入水底。如果种子浸泡后浮在水面上，可能是种子生活力较低的表现。 3. 发芽率测定法 这是一种常用的测定种子生活力的方法。将一定数量的种子放入适宜的培养基中，提供适宜的温度、湿度和光照条件，观察一段时间内种子的发芽情况。通过统计发芽的种子数量，可以计算出种子的发芽率，从而判断种子的生活力。 4. 离体培养法 将种子表皮剥离，将胚乳或胚轴放入培养基中进行培养，观察胚乳或胚轴的发育情况。这种方法可以排除种皮对发芽的影响，更准确地评估种子的生活力。
5. 高温处理法 将种子置于高温环境中，观察种子的耐热性。一些种子具有较强的耐热性，可以在高温环境下正常发芽和生长，而一些种子则对高温敏感，会导致种子生活力下降。 6. 高盐处理法 将种子置于含有一定浓度盐溶液中，观察种子的耐盐性。一些种子具有较强的耐盐性，可以在高盐环境中正常发芽和生长，而一些种子则对高盐敏感，会导致种子生活力下降。 7. 高湿处理法 将种子置于高湿环境中，观察种子的抗霉性。一些种子具有较强的抗霉性，可以在高湿环境中正常发芽和生长，而一些种子则对高湿敏感，容易受到霉菌的侵害，会导致种子生活力下降。 测种子生活力的方法有很多种，可以通过观察种子外观、浸泡法、发芽率测定法、离体培养法、高温处理法、高盐处理法和高湿处理法等方法来评估种子的生活力。选择合适的方法进行测定，可以帮助我们了解种子的质量，为种子的储存、选育和利用提供科学依据。
实验四氯化三苯基四氮唑（TTC）法测定种子生活力 一、实验目的 种子生活力是指种子发芽的潜在能力或种胚具有的生命力。可以通过发芽试验方法了解种子有无生活力，为正确评定种子质量提供依据。本实验的目的是让学生掌握化学快速测定种子生活力的原理、方法和鉴定标准。 二、仪器与试剂 培养皿4套；镊子１把；单面刀片１片；垫板（切种子用）１块；烧杯１个；棕色试剂瓶；解剖针１把；搪瓷盘１个；放大镜。 TTC溶液，配制方法：取1g TTC溶于１L蒸馏水或冷开水中，配制成0.1％的TTC溶液。 三、原理 以氯化三苯基四氮唑(简称四唑)无色溶液作为指示剂。这种指示剂是一种可被种子活组织吸收后，接受活细胞脱氢酶中的氢而被还原成一种红色的、稳定的、不扩散的和不溶于水的三苯基甲臜。据此，可根据胚和胚乳组织染色反应来区别有生活力和无生活力的种子。 四、方法步骤 材料：4份，分别是吸胀的玉米、小麦种子100粒，吸胀后煮5分钟的玉米、小麦种子） 1.将玉米、小麦等作物的种子，用温水（30℃）浸泡2～6h，使种子充分吸胀。 2.随机取吸涨种子100 粒，沿种胚中央准确切开，取每粒种子的一半备用。然后将处理好的种子置于培养皿中，加入0.1% TTC 溶液，以浸没种子为度。另取沸水中煮5 min 后的100 粒吸涨种子，再加入0.1%TTC 溶液染色。于35℃恒温箱中保温0.5~1 h。也可在20℃左右的室温下放置40～60min. 3.保温后，倾出药液，用自来水冲洗2～3次，立即观察种胚着色情况，判断种子有无生活力，把判断结果记入表4-1内。 五、注意事项 1.判断有生活力的种子应具备：胚发育良好、完整、整个胚染成鲜红色；子叶有小部分坏死，其部位不是胚中轴和子叶连接处；胚根尖虽有小部分坏死，但其它部位完好。 2.判断无生活力的种子应具备：胚全部或大部分不染色；胚根不染色部分不限于根尖；子叶不染色或丧失机能的组织超过1/2；胚染成很淡的紫红色或淡灰红色；子叶与胚中轴的连接处或在胚根上有坏死的部分；胚根受伤以及发育不良的未成熟的种子。 3.不同作物种子生活力的测定，所需试剂浓度、浸泡时间、染色时间不同。 六、实验报告内容：目的、原理、填表4-1，实验中的问题及解决办法 提醒：上实验课带上文字材料，课本，实验做完就上交该个实验的报告。
实验23种子生活力的快速测定 种子生活力是指种子能够萌发的潜在能力或种胚具有的生命力。它是决定种子品质和实用价值大小的主要依据，与播种时的用种量直接有关。测定种子生活力常采用发芽实验，即在适宜条件下，让种子吸水萌发，在规定天数内统计发芽的种子占供试种子的百分数。但是常规方法（直接发芽）测定种子生活力所需时间较长，特别是有时为了应急需要，没有足够的时间来测定发芽率，遇到休眠种子也无法知道。而采用以下的化学方法，则能在较短时间内获得结果。 Ⅰ 氯化三苯基四氮唑法（ TTC 法） 一、原理 凡有生命活力的种子胚部，在呼吸作用过程中都有氧化还原反应，在呼吸代谢途径中由脱氢酶催化所脱下来的氢可以将无色的 TTC 还原为红色、不溶性三苯基甲（ TTF ），而且种子的生活力越强，代谢活动越旺盛，被染成红色的程度越深。死亡的种子由于没有呼吸作用，因而不会将TTC 还原为红色。种胚生活力衰退或部分丧失生活力，则染色较浅或局部被染色。因此，可以根据种胚染色的部位以及染色的深浅程度来判定种子的生活力。 二、实验材料、试剂与仪器设备 （一）实验材料 玉米、小麦等种子。 （二）试剂 0.5% TTC 溶液：称取 0.5 gTTC 放在烧杯中，加入少许 95% 乙醇使其溶解，然后用蒸馏水稀释至 100 mL 。溶液避光保存，若变红色，即不能再用。 （三）仪器设备 恒温箱，培养皿，刀片，烧杯，镊子，天平。 三、实验步骤
1. 浸种将待测种子在 30 ～35 ℃温水中浸种（大麦、小麦 6 小时，玉米 5 小时左右），以增强种胚的呼吸作用。 2. 显色取吸胀的种子 200 粒，用刀片沿种子胚的中心线纵切为两半，将其中的一半置于 2 只培养皿中，每皿 100 个半粒，加入适量的 0.5% TTC 溶液，以覆盖种子为度。然后置于30 ℃恒温箱中 1 h 。观察结果，凡胚被染为红色的是活种子。 将另一半在沸水中煮 5 min 杀死胚，作同样染色处理，作为对照观察。 3. 计算活种子的百分率，如果可能的话与实际发芽率作一比较看是否相符？ Ⅱ 溴麝香草酚蓝法（ BTB 法） 一、原理 凡活细胞必有呼吸作用，吸收空气中的 O 2 放出 CO 2 。 CO 2 溶于水成为 H 2 CO 3 ， H 2 CO 3 解离成 H + 和HCO 3 ˉ，使得种胚周围环境的酸度增加，可用溴麝香草酚蓝（ BTB ）来测定酸度的改变。 BTB 的变色范围为 pH6.0 ～ 7.6 ，酸性呈黄色，碱性呈蓝色，中间经过绿色（变色点为 pH 7.1 ）。色泽差异显著，易于观察。 二、实验材料、试剂与仪器设备 （一）实验材料 玉米种子。 （二）试剂 0.1% BTB 溶液：称取 BTB 0.1 g ，溶解于煮沸过的自来水中（配制指示剂的水应为微碱性，使溶液呈蓝色或蓝绿色，蒸馏水为微酸性不宜用），然后用滤纸滤去残渣。滤液若呈黄色，可加数滴稀氨水，使之变为蓝色或蓝绿色。此液贮于棕色瓶中可长期保存。 （三）仪器设备 恒温箱，天平，刀片，烧杯，镊子，培养皿，滤纸，漏斗。 三、实验步骤 1. 浸种同上述 TTC 法。 2. BTB 琼脂凝胶的制备取 0.1% BTB 溶液 100 mL 置于烧杯中，将 1 g 琼脂剪碎后加入，用小火加热并不断搅拌。待琼脂完全溶解后，趁热倒在 4 个干洁的培养皿中，使成一均匀的薄层，冷却后备用。
种子生活力的测定方法 种子生活力的测定有以下几种方法： （一）氯化三苯基四氮唑法( TTC) 1．将种子用温水（约30℃）浸泡2--6小时，使种子充分吸胀。 2．随机取种子100粒，红花、蓖麻等具有外壳的需要去掉外壳，豆类种子要去皮。然后沿种胚中央准确切开，取一半备用。 3．将准备好的种子浸于2，3，5-三苯基氯化四氮唑(TTC)溶液中，于恒温箱( 30～35℃)中保温30分钟。4．染色结束后要立即进行鉴定，因放久会褪色。倒出TTC溶液，再用清水将种子冲洗1--2次，观察种胚被染色的情况，凡种胚全部或部分被染成红色的即为具有生命力的种子，种胚不被染色的为死种子。如果种胚中非关键性部位（如子叶的一部分）被染色，而胚根或胚芽的尖端不染色，都属于不能正常发芽的种子。 （二）溴麝香草酚蓝法（BTB法） 1．浸种：同上述 TTC 法。 2．BTB 琼脂凝胶的制备：取 0.1% BTB 溶液 100 mL 置于烧杯中，将 1 g 琼脂剪碎后加入，用小火加热并不断搅拌。待琼脂完全溶解后，趁热倒在 4 个干洁的培
养皿中，使成一均匀的薄层，冷却后备用。 3．显色：取吸胀的种子 200 粒，整齐地埋于准备好的琼脂凝胶培养皿中，种子胚朝下平放，间隔距离至少 l cm 。然后将培养皿置于 30 ～ 35 ℃下培养 1 ～ 2 小时，在蓝色背景下观察，如种胚附近呈现较深黄色晕圈是活种子，否则是死种子。 4．计算活种子百分率。 用沸水杀死的种子作同样处理，进行对比观察。（三）靛红染色法 步骤同TTC染色法。 注意事项 1．染料的浓度要适当，染色时间不能太长（如用红墨水染色，只需要5～10分钟即可），否则不容易区别染色与否。 2．靛红染色法测定种子生活力，适用于豆类、麻类、瓜类、十字花科、果树、乔灌木种子的生活力测定。 （四）碘化钾反应法 1．将种子在水中浸18小时。 2．取出种子放在垫有湿滤纸的培养皿内，将培养皿置30℃恒温箱中，不同植物种子放置时间不同，如松种子放48小时，落叶松放72小时。
种子生活力的测定 一、氯化三苯基四氮唑（TTC）法 【原理】 凡有生活力的种子胚部在呼吸作用过程中都有氧化还原反应，而无生活力的种胚则无此反应。当TTC溶液渗入种胚的活细胞内，并作为氢受体被脱氢辅酶（NADH或NADPH）还原时，可产生红色的三苯基甲（TTF），胚便染成红色。当种胚生活力下降时，呼吸作用明显减弱，脱氢酶的活性亦大大下降，胚的颜色变化不明显，故可由染色的程度推知种子的生活力强弱。TTC还原反应如下： TTC（无色） TTF（红色） 【仪器与用具】 培养皿2套；镊子１把；单面刀片１片；垫板（切种子用）１块；烧杯１个；棕色试剂瓶；解剖针１把；搪瓷盘１个；pH试纸。 【试剂】 TTC溶液的配制：取1g TTC溶于１L蒸馏水或冷开水中，配制成0.1％的TTC溶液。药液pＨ应在6.5～7.5，以pH试纸试之（如不易溶解，可先加少量酒精，使其溶解后再加水）。 【方法】 1.将玉米、小麦等作物的新种子、陈种子或死种子，用温水（30℃）浸泡2～6h，使种子充分吸胀。 2.随机取种子2份，每份50粒，沿种胚中央准确切开，取每粒种子的一半备用。 3.把切好的种子分别放在培养皿中，加TTC溶液，以浸没种子为度。 4.放入30～35℃的恒温箱内保温30min.也可在20℃左右的室温下放置40～60min. 5.保温后，倾出药液，用自来水冲洗2～3次，立即观察种胚着色情况，判断种子有无生活力，把判断结果记入表32-1内。 表32-1 染色法测定种子生活力记载表 【注意事项】 1.TTC溶液最好现配现用，如需贮藏则应贮于棕色瓶中，放在阴凉黑暗处，如溶液变红则不可再用。 2.染色温度一般以25～35℃为宜。 3.判断有生活力的种子应具备：胚发育良好、完整、整个胚染成鲜红色；子叶有小部分坏死，其部位不是胚中轴和子叶连接处；胚根尖虽有小部分坏死，但其它部位完好。 4.判断无生活力的种子应具备：胚全部或大部分不染色；胚根不染色部分不限于根尖；
冷浸法测定玉米种子活力的步骤如下： 1. 准备种子样品：选取具有代表性的玉米种子样品，样品应该具有广泛的遗传背景和来源，并且没有受到病虫害或其他外部因素的影响。同时，需要准备足够的种子数量，以确保测试结果的可靠性。 2. 种子处理：将种子放入冷水中浸泡一定时间（通常为24小时），让种子充分吸水膨胀。浸种时要注意，水质必须保持清洁，种子和水的比例要适当，种子应全部浸入水中，且水面要高出种子一定距离，以防种子吸水膨胀后露出水面，影响浸种效果。 3. 冷却处理：将吸足水分的种子从浸种水中捞出，稍微晾干表面的水分，然后放入冰箱中，在0～5℃的低温条件下进行低温预处理，处理时间为2～3天。低温处理期间，要注意保持种子湿度适中，防止种子干燥或发霉。 4. 恒温催芽：将低温处理后的种子取出，放入恒温箱中，在25℃左右的恒温条件下进行催芽处理。催芽期间，要保持适宜的湿度和通风条件，每天检查并记录发芽情况。 5. 结果统计与分析：催芽一定时间后（通常为7天），统计发芽率、发芽势和活力指数等指标。发芽率是指发芽种子数占测试种子总数的百分比；发芽势是指规定时间内发芽种子数占测试种子总数的百分比；活力指数是综合反映种子活力高低的指标，计算公式为：活力指数=发芽率×幼苗生长势。 6. 结果解释与应用：根据统计结果，对种子活力进行评价。一般来说，发芽率高、发芽势强、活力指数大的种子具有较高的活力水平。这些结果可以为玉米种子的选育、生产、加工和储存提供重要参考依据。 需要注意的是，冷浸法虽然是一种简单易行的测定玉米种子活力的方法，但其结果受到多种因素的影响，如浸种时间、温度、湿度等。因此，在进行实验时，要严格控制实验条件，确保结果的准确性和可靠性。
种子活力无损检测方法研究进展 种子活力是指种子存活能力和萌发能力的综合表现。种子活力的高低与种子的品质直 接相关，是衡量种子品质的一个关键指标。因此，种子活力的准确检测对种子行业的生产 和市场需求十分重要。 目前种子活力的检测方法主要有以下几种： 1.萌发率法 萌发率法是最常用的种子活力检测方法，其原理为种子在一定环境条件下对水和氧气 吸收后能发生萌发的比例。该方法简单、易操作，但存在诸多局限，如环境条件难以统一、缺乏明确的标准和指导等。 2.氧化还原能力法 氧化还原能力法是一种间接测定种子活力的方法，其原理基于种子内含物（如维生素C 和多酚等）对氧化剂的还原作用来调节细胞氧气摄取和利用水平。该方法操作简单，不受 萌发环境限制，但结果受不同材料及实验条件等多种因素影响。 3.电导率法 电导率法是利用种子吸取水分时电导率的变化来判断种子活力的高低。该方法灵敏度高、可操作性强但会受到温度、湿度等环境因素的影响，无法避免由于材料间电导率差异 造成的误差。 4.荧光法 荧光法是通过测量种子细胞内色素的荧光强度来评价种子的营养和代谢状态，从而判 断其活力的方法。该方法灵敏度高、操作简单、快速，但需要专门荧光显微镜或荧光分光 光度计等设备支持。 以近年来发展最快的荧光法为例，一些研究学者已开发出了多种基于荧光测量的种子 活力检测方法。其中，DNA含量测量法、吸附电量分析法、荧光强度变化法等被广泛使用。这些方法可通过荧光荧光显微镜、荧光分光光度计等设备测定种子荧光强度的变化，通常 在荧光光谱和荧光寿命测量中有更高的灵敏度和更好的定量性。尤其值得一提的是，荧光 法的优点在于可以应用于非显微的纳米技术和生物芯片等现代技术中，最终实现高通量、 非侵入式、自动化的种子活力检测。 综上所述，虽然目前存在多种种子活力检测方法，但仅从准确度、精确度、快速性、 真实性等多个角度全面衡量，仍无法找出一种绝对优越的检测方法。因此，研究人员需结
一、红墨水染色法快速测定小麦、玉米种子生活力的具体方法如下： 选取玉米种子100粒、小麦种子200粒，在30℃~35℃温水中浸泡6小时~8小时，使种子充分吸胀。取吸胀的种子100粒，用刀片沿胚部中线切为两半，其中一半用于测定。将准备好的半粒种子置于杯中，加入稀释20倍的红墨水溶液，以浸没种子为好。染色15~20分钟后捞出，用清水冲洗种子，洗去颜色。观察冲洗后种子胚部着色情况，胚部不着色或略带浅红色者，即为有生命力的种子。若胚部染成与胚乳相同的深红色，则为无生命力的种子。依次计算活种子百分率，即为发芽率。 小麦种子发芽率快速测定法 1、浸种将小麦种子用28℃～30℃的温水浸泡3～5小时，让种子充分吸收水分膨胀。 2、切取选择具有代表性的种子，用刀片沿麦粒的腹沟切成两半，留取带有胚部的一半作测定之用。 3、染色先配制好5%的红墨水溶液（即将1份红墨水加入19份清水中，混合均匀即成），然后将切取的麦种半片均匀摊在培养器皿或瓷盘中，将红墨水倒入（用量以浸没种子为宜）。 4、冲洗染色5～10分钟以后，将种子取出，用清水反复冲洗数次，直到冲洗后的水不再见到红色为止。 5、观察种子的胚不着色或仅带有浅红色的，即为具有生命力的种子。如果胚部呈红色，与胚乳着色的程度不同，即表明该小麦种子已经丧失了生命活力，观察时将其拣出。 6、计算数出具有生命力的种子数目，除以供测试种子的总数，即可得出该小麦种子的发芽率。如果供测试的种子正好是100粒，那么具有生命活力的种子就是该小麦种的发芽率。 种子发芽率快速测定法——————红墨水染色法 宝兴县明礼乡朱范刚舒正蓉科技下乡应深入农户种子发芽率是指在最适宜的条件下，在规定的天数内，发芽的种子占供试种子的百分数，它是决定种子品质和实用价值大小的主要依据，与播种时的用种量直接相关。但是常规发芽（直接发芽）方法测定发芽率所需时间较长，特别是有时为了应急需要，没有足够的时间 来测定发芽率，遇到休眠种子也无法知道。这里介绍红墨水染色法却能在较短时间内获得结果。其原理是：凡生活细胞的原生质膜具有选择性吸收物质的能力，而死的种胚细胞原生质膜丧失这种能力，于是染料便能进入死细胞而染色，活种胚细胞则不被染色。操作方法：将待测种子在30～35℃温水中浸种6～8小时左右，以增强种胚的呼吸强度，使显色迅速。
三种常用检测种子生活力方法比较(1)
植物生理学小论文 三种常用检测种子生活力方法的比较 班级：09级生物技术2班 学号: 20091052258 系别: 化学与生命科学系 姓名: 孙雪婷 日期：2012年5月15日
为植株的潜在能力具有十分紧密的联系。对于科学选种，快速预测种子的利用价值也具有重要的意义。快速检测种子生活力的方法很多，但生产实验及植物生理实验中常用的主要有氯化三苯基四氮唑(TTC)法、溴麝香草酚蓝(BTB)法和红墨水染色法。这三种方法都能快速测定种子的正常生理代谢功能是否受到损害，胚是否存活,以了解种子是否还具有发芽的潜力。 种子生活力（seed viability)是指种子的发芽潜在能力和种胚所具有的生命力，通常是指一批种子中具有生命力（即活的）种子数占种子总数的百分率。早在1876年种子学的创始人Nobbe（德国）[1]就指出在同一批种子内存在个体间发芽和幼苗生长速度的差异，并且不同种子批的平均值通常也不同。他将这种现象称为生长力（triebkraft)，意为推动力（driving force）。1950年在国际种子协会（ISTA）[1] [2]的年会上首次讨论了种子活力测定这一概念。此次会议对发芽试验和幼苗活力的测定方法取得了一致意见：发芽试验一般应在无机发芽床上、适宜的条件下进行；而某些特殊试验，如土壤试验、砖砾试验则称为活力测定（Franck,1950）。[2]尽管
如此，长期以来对种子活力的定义仍不统一，因为种子活力不像发芽率那样是一个单一的质量指标，而是描述若干特性的概念，不同学者对于种子活力的定义仍然有分歧。通过长达1/4世纪的争论，直到1977年，才在国际种子检验协会（ISTA）的代表大会上通过了种子活力的定义（Perry，1978)[2]，即“种子活力是决定种子或种子批在发芽和出苗期间的活性水平和行为的那些种子特性的综合表现。种子表现良好的为高活力种子”[2]。高活力种子具有生产优越性。对于农业生产而言种子的好坏是其根本，保证种子的优良性的前提下才可能高产高收。高活力的种子其出苗率更高，及时迅速的测得种子活力有利于选种，为提高产量打下前提。高活力的种子其生命力更加顽强，抵御不良环境的能力也更强。如遇到干旱，高活力种子适当深播，便可吸收足够的水分而萌动发芽，由于其储备了更丰富的营养物质，所以植株成活的可能性更大，而低活力种子则在深播情况下无力顶出土面更无足够的养分支撑其呼吸作用等新陈代谢活动。又如在多雨或土壤私重的地区，土壤容易板结，高活力种子同样有足够力量顶出土面，而低活力种子
实验六 一、原理 由于指示活力特性和指标是多种多样，而且因不同作物或种子生理发芽特性不同，幼苗生长 表现各异，因此活力测定的方法也是种类很多。大致可将这些方法分为直接法和简接法两大 类：所谓直接法，是利用实验室可控制的条件，模拟田间不良的因素，观察种子田间出苗能 力或幼苗生长的整齐健壮的程度。如玉米低温试验、棉花低温发芽，及大小麦砖砂试验（低 温及机械抑制力）等。间接法是在实验室中测定与田间出苗力相关的种子特性、生理生化特 性指标，如酶的活性、呼吸强度、种子浸泡液的电导率等。如何正确选用活力测定方式是很重要的，通常应该考虑以下几点：首先是所采用的方法，其测定结果能否真正反映一批种子的活力水平；其次是所用方法要简单易行，节用费用；第三是测定方法最好能快速及时；最后是测定结果要有重演性，即不同地区、不同实验室所测结果比较一致。 二、目的要求 1、了解种子活力测定原理和生产意义。 2、掌握重要种子活力测定方法和评定标准。 三、材料和器具 1、材料准备不同活力的大麦、小麦、玉米、大豆和豌豆等种子样品。 2、器具培养箱、老化箱、老化盒、电导仪、天平、玻璃培养皿、发芽纸或滤纸、烧杯、镊子、尺子等。 四、方法和步骤 （一）幼苗生长测定 本法适用于具有直立胚芽和胚根的禾谷类和蔬菜类作物种子。 其测定方法是取试样4份，各25粒种子。取发芽纸3张（30cm X 45cm）,取其中1张画线，先在纸长轴中心画一条横线，距顶端15cm。并在其上、下每隔1cm画平行线。在中心线上 平均间隔画25点，在每点上放1粒种子，胚根端朝向纸卷底部，再盖二层湿润发芽纸，纸的基部向上折叠2cm，将纸松卷成4cm直径的筒状，用橡皮筋扎好，将纸卷竖放容器内，上用塑料袋覆盖。置于黑暗恒温箱内培养7d,温度为正常发芽所规定温度，然后统计苗长： 计算每对平行线之间的胚芽或胚根尖端的数目，按下列公式求出幼苗平均长度： ”心 + 吨-MX15 式中：L 胚芽平均长度（cm）; n 每对平行线之间的胚芽尖端数； x 中点至中线之间的距离（cm）。 发芽试验中不正常幼苗不统计长度。 直根作物种子可用直立玻板发芽法测定其幼根长度：取滤纸2张，其中1张划1条中线，用 水湿润贴在玻板上。将25粒种子等距排列在中心线上，将另1张滤纸湿润后盖上，将玻板以70o角直立置于水盘内，放在25C黑暗下培养3d后测量根的长度，计算平均值。据报道 萬苣种子发芽3d的根长与田间出苗密切相关。 （二）幼苗评定试验 幼苗评定试验适用于大粒豆类种子，这些种子不能用幼苗长度表示活力，因其细弱苗可达相 当的长度。此法是采用标准发芽方法，幼苗评定时分成不同等级。豌豆种子试验方法如下： 取试样4份，各50粒种子。将1~2mm的粗沙清洗消毒后加水，使保持最大持水力约15% （W/W ）,放入4个容积为15cm X 20cm X 10cm的聚乙烯盒中，移于生长箱或培养箱中，于