蛋白&抗体篇
1.WB的泛抗体实验中，为什么总是出现只有一条带的情况？
答：(1)首先要确定这条带的大小；比如，组蛋白H3的信号会很强，经常出现在17kD左右，如果曝光时间短的话，很可能只存在信号强的条带；
(2)上样量是否足够；
(3)抗体浓度是否正确使用；
(4)荧光底物不灵敏，可调整荧光底物的孵育时间、曝光时间等。
2.WB实验中是否条带越多，蛋白修饰的丰度越高？
答：(1)客户提到的修饰丰度指什么，是一种蛋白的修饰强弱，还是指修饰的广谱性？
(2)同一样品，不同处理的对比，可以这么说；
(3)不同样品，不同来源，无可比性；
(4)条带的强度，可以体现该条带大小的蛋白修饰丰度高。
3.能否用泛抗体检测单一蛋白/IP复合物的修饰信号？
答：我们公司的蛋白质修饰泛抗体是指可以识别所有含该类修饰的蛋白质的抗体，与组蛋白位点特异性修饰抗体的区别在于不局限于某个蛋白的某个位点。如Lys三甲基化的修饰泛抗体可以识别所有含有Lys三甲基化的蛋白，而组蛋白H3K4Me3就只能特异性的识别组蛋白H3第4位Lys的三甲基化修饰。
因此泛抗体是可以用来检测单一蛋白/IP复合物的修饰信号。
4.抗体产品用途；如是否可以做ChIP? IP效果如何？
答：(1)抗体可以用来做WB，ELISA，Dot，IP，IF（免疫荧光）等；
(2)我们的泛抗体可以用来做肽段水平的IP且效果非常好，但不建议直接做蛋白水平的
IP，效果不是很好，客户用我们的位点特异性抗体尝试做过IP，结论是可以的；
(3) ChIP：我们没有用自己的抗体专门做过相关的检测，但我们也准备对此进行验证。
5.抗体可以做免疫组化么？
答：免疫组化，是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及定量的研究。
我们的抗体是可以做免疫组化、WB、ELISA等实验。
6.蛋白的提取，特别是枯草芽孢杆菌，发酵菌组蛋白提取的关键？
答：组蛋白提取的方法大同小异，题目中提到的2类菌株我们暂时没有提过。
除了结核杆菌等传染性或致病菌，需要客户经过专业处理后提供蛋白液外，其它样本一般建议客户直接把样品寄来，我们负责蛋白提取。蛋白提取是整个组学项目中最前面、最基础的一步，至关重要，好坏直接影响后续实验结果。因此我们的技术人员经过不断实践总结摸索出的蛋白的提取要点也是公司的技术资源、财富。
7.我们的泛抗体做WB的比例多少，100微升可以做多少次WB？
答：我们推荐稀释比例都是1:1000，客户可以根据实际情况自行调整。
8.用乙酰化、琥珀酰化泛抗体做WB检测，客户做不出条带的原因？
答：我们的乙酰化、琥珀酰化泛抗体在生产之后都有专门的质量检测，且在所有抗体销售中是销量较好、客户评价最高的两类的抗体，质量是毋庸置疑的。建议帮助客户从自身WB检测的实验中找原因。
9.甲基化抗体中单甲基、二甲基、三甲基的抗体如何区分同一位点的一、二、三甲基的基团而互不交叉？
答：(1) 首先，我们在抗体研发过程中，抗原多肽的合成阶段已经区分开；
(2) 其次，景杰生物的所有抗体都经过了严格QC验证，甲基化抗体也不例外。通过Dot
Blot和ELISA验证抗体的同一位点不同修饰和相同修饰不同位点之间是否存在交叉。
10.WB显示条带丰度较好，质谱鉴定到的蛋白种类比条带丰度相对不好的蛋白种类要少？答：WB某一个条带不代表一种蛋白，而是相同分子量的一类蛋白群。因此一个丰度较好的条带里很可能既存在实际丰度高的蛋白，也存在丰度极低的蛋白，而这些丰度极低的蛋白在质谱中鉴定不到是很正常的。
11.WB没有看出明显变化，为什么还需要做修饰定量分析？
答：(1) 首先要确定客户样品种类，比如酶类，微量变化对生物体本身都会有很大影响；
(2) 同一样品不同处理存在修饰类型变化的可能。
12.修饰性WB中经常出现低质量处没有条带的原因？
答：(1) 进行SDS-PAGE，看低质量处的蛋白条带丰度如何，确保蛋白的量是足够的；
(2) 胶的压缩分离效果不好，低质量蛋白本身易弥散，且泳动速度快，易跑出分离胶。
13.WB某蛋白有条带，但是MS没检测到该蛋白。为什么？
答：(1) WB是在蛋白水平的检测，MS是基于肽段水平的检测；一般来说免疫水平的检测灵敏度是高于质谱检测的；
(2)WB某条带为分子量相近的一类蛋白，包含蛋白的丰度不同，有高有低；而质谱一般
检测不到过低丰度蛋白；
(3) 某蛋白可能数据库不全，导致MS后搜库检索不到；
(4) 样品制备过程中可能存在个别肽段的丢失，导致蛋白的漏检；
(5) 蛋白氨基酸序列中K或R过多或过少，导致胰酶切割形成的肽段太短或太长，而
质谱有参数设置，切割肽段在7aa以下的，可信度就不高了。
14.IP实验，蛋白与抗体孵育的比例是多少？
答：我们建议1:200
15.做单蛋白修饰类型鉴定及位点鉴定，蛋白所需量及纯度？
答：所需量：微克级；
纯度：既然是单蛋白，肯定要求纯度尽可能地高，纯度的高低直接影响到鉴定结果。
16.为什么组蛋白位点特异性抗体的WB中会出现杂带？
答：通常情况下，组蛋白位点特异性抗体只会出现一个特定的阳性条带；但在极少数情况下，位点特异性抗体所识别的构象与较大分子量的部分序列不可避免的相近时，会出现杂带，
但并不会影响检测的结果。同时，合理提高抗体的稀释比可以让杂带消失，也可以尝试降低曝光时间或将上样量进行调整。
17.你们公司的泛抗体指的是什么抗体？
答：我们公司的蛋白质修饰泛抗体是相对于组蛋白位点特异性抗体而言的。泛抗体可以识别某一类含有某种修饰性氨基酸残基的蛋白质。我们公司的泛抗体种类是目前业界最齐全的，不仅有常见的乙酰化、磷酸化等泛抗体，还有世界独有的琥珀酰化、巴豆酰化、丁酰化、丙酰化、丙二酰化等泛抗体。
18.以某客户的WB protocol为例，分析WB常见操作错误
答：(1)提取蛋白：注意冰上操作（保持低温环境），以及提取试剂中要加入PIC（蛋白酶抑制剂），防止蛋白提取过程中被降解；
(2)封闭：5%脱脂奶粉封闭1.5h（用5%BSA封闭）；
(3) 一抗：5%脱脂奶粉稀释。（不能用脱脂奶粉稀释，改用2.5%BSA）
(4) 用1*PBST洗三次，每次10 min（漂洗次数可根据实际情况调整）；
(5) 孵二抗5%脱脂奶粉稀释，37℃1h（二抗也要用2.5%BSA稀释，室温即可不用37℃）；
(6) 用1*PBST洗三次，每次10 min.
(7) 显色：将A液，B液等比例混合均匀，孵育时要完全覆盖住膜，显色1 min（显色
时间可以根据实际情况自行调整）
19.蛋白样品提取制备的注意事项？
答：(1) 尽可能提取完全或者降低样本复杂物，集中提取目的蛋白；
(2) 保持蛋白处于溶解状态；
(3) 提取过程中防止蛋白降解、聚集、沉淀、修饰（低温操作，加入适量的蛋白酶抑制
剂和磷酸酶抑制剂）；
(4) 尽量去除核酸、多糖、脂类等；
(5) 蛋白样品低温保存，可-80℃长期保存，但避免反复冻融。
20.WB常见问题分析
1.背景高解决方法
(1)膜没有完全湿透使用100% 甲醇浸泡膜；
(2)洗膜不充分增加洗液体积和洗涤次数；
(3)阻断不充分增加封闭时间，或者提高温度；选择合适的封闭试剂；
(4)二抗浓度过高降低二抗浓度；
(5)检测过程中膜干燥保证充分的反应液，避免出现干膜的现象；
(6)曝光过度缩短曝光时间；
(7)抗体与阻断蛋白有交叉反检测抗体与阻断蛋白的交叉反应性，选择无交叉反应
的封闭试剂；洗涤液中加入Tween-20可减少交叉反应；
2．无阳性条带解决方法
(1) 抗体染色不充分增加抗体浓度，延长孵育时间；
(2) 酶失活直接将酶和底物混合，如果不显色说明酶失活；
选择有效期内有活性的酶联物；
(3)标本中不含靶蛋白或靶蛋白含量低设置阳性对照，若对照有结果但标本没有说明标
本中不含靶蛋白或含量太低，可考虑增加上样量；
(4)试剂不匹配一抗与组织种属性。一抗与二抗或者底物与酶系
统之间不匹配，可通过设置内参照验证二级检测系
统的有效性；
(5)一抗失效选择有效期内的抗体；并选择现用现配的工作液
(6)HRP抑制剂所用溶液和容器中避免含有叠氮化钠
3. 阳性条带较弱解决方法
(1)抗体染色不充分增加抗体浓度，延长孵育时间；
(2)酶活性降低直接将酶和底物混合，如果不显色说明酶失活
选择有效期内、有活性的酶联物；
(3)标本中靶蛋白含量太低增加标本上样量；
(4)洗膜过度缩短洗涤时间；
(5)HRP抑制剂所用溶液和容器中避免含叠氮化钠；
(6)抗体活性降低选择在有效期内的抗体，工作液现配现用，避免
长时间放置；
(7)蛋白转移不充分充分转膜；注意转膜时不要将正负极放反；
注意蛋白分子量大小与转膜时间的关系（分子量较
小的蛋白要缩短转膜时间，同时选择小孔径的胶；
而分子量很大的蛋白则要延长转膜时间同时选用
大孔径的胶）；
(8)封闭过度减少封闭剂的量或缩短时间；换用不同封闭剂；
(9)曝光时间多短延长曝光时间；
4. 条带大小不对或有非特异性条带解决方法
(1)二抗的非特异性增加对照：不加一抗，其他操作过程不变，即可验证
背景是否由二抗系统来源。选择其他二抗（特异性更
强的，只针对重链的）；
(2)一抗特异性不够使用单克隆或者亲和纯化的抗体，保证抗体的特异性；
(3)蛋白降解使用新鲜制备的标本，并使用蛋白酶抑制剂；
(4)二聚体或多聚体存在增加蛋白质变性过程及强度；
(5)抗体浓度过高降低抗体（一抗、二抗）浓度；
(6)蛋白上样量过大降低上样量；
5. 背景有斑点解决方法
(1) 封闭剂中有聚集体使用前过滤封闭试剂；
(2) HRP偶联二抗中有聚集体过滤二抗试剂，去除聚集体；
6. 膜上出现反像（暗背景上白色带）解决方法
(1) HRP含量过高降低酶联二抗的浓度
21. 我们公司的抗体优势在那里？
答：(1) 我们公司有世界上最多种类的蛋白质修饰泛抗体和覆盖位点最全的组蛋白修饰的位点特异性抗体；
(2) 公司在国内，也就是货期短，而且可以很方便的与客户交流，及时反馈问题；
(3) 有很多文章支持，就乙酰化而言，我们发现了真核生物和原核生物中最大的乙酰化
组，所用抗体就是我们的抗体；
(4) 最核心的一点，我们开发的所有抗体都进行了最严格、最全面的交叉检验，确保了
不同修饰类型抗体间的高特异性和高灵敏度。注：别的公司抗体没有这方面的检验。
21.抗体生产的流程？
答：(1) 单抗：多肽合成→交联KLH为免疫原（抗原）→免疫→小鼠（取血检测WB、Dot、Elisa）→取脾脏磨碎→与骨髓瘤细胞融合（在PEG作用下融合）→选择培养（HAT 培养基）为融合的细胞死亡，杂交瘤细胞存活→阳性克隆的筛选及克隆化→克隆扩增及大量制备McAb（打腹水→Protein G纯化（一步）→QC检测
(2) 多抗：多肽合成→交联KLH为免疫原（抗原）→免疫→兔子（取血检测Dot,WB泛
抗体时不用）→检测合格（大规模取血，每次取30ml，大约要150ml）→纯化→QC 检测→上市入库
注：合成多肽一般15个氨基酸，抗原决定簇是3-5个氨基酸。种族的差异性越强越易产生抗体，但修饰位点固定，我们的抗体很难做，导致修饰的抗体贵。
技术篇
1.胶条蛋白混合物鉴定时提供样品的注意事项？
答：(1) 切取的胶条应为刚脱离浓缩胶刚刚进入分离胶的样品；
(2) 跑胶的整个过程应保持干净，防止其他蛋白质的污染；
(3) 若是全蛋白的鉴定，若是全蛋白的鉴定需要增加胶条的长度，待所有蛋白都分离后，
将胶条分批切下。
2.蛋白修饰类型鉴定的样本要求？
答：(1) 样本要求更加严格，样品量要足够，否则鉴定不出全部的修饰类型及位点；可用考马斯亮蓝染色，能够看到清晰的条带方可；
(2) 样品纯度要求在90%以上。
3.iTRAQ常规蛋白质组学中，如果有3个以上样品相互比较，而且做生物重复，那需要做3个3标的实验。这3次实验中出现的差异怎么处理？最后得到的结论是怎么定下来的？答：因为一个iTRAQ试剂盒一次最多8标，所以，原则上3个3标，不可能同时标记完。
所以样本之间相互比较和生物重复不能兼得。如果分成3次实验，那这三次出现的差异是没有意义的。
4.如何做细胞器的定量修饰组学？
答：我们目前相关实验室的条件尚不成熟，很多相关的设备仪器，如差速离心机、细胞器提取试剂盒等都还没有，暂时还不可以做关于细胞器为实验材料的组学实验。
5.蛋白质组学中常见样本处理方法？
答：植物、动物、真菌
细菌、可培养的细胞DTT：还原二硫键
EDTA：金属酶抑制剂
超声破碎
离心、取上清
样品蛋白提取
蛋白定量与质检
iTRAQ标记修饰组学项目
还原烷基化沉淀蛋白
沉淀蛋白酶解
酶解还原烷基化
除盐与标记IP
HPLC分离除盐
LC-MS/MS
6.iTRAQ、SLIAC技术的优势？
答：iTRAQ技术：
(1)可同时对多达8个样本进行定量分析，降低反复实验引入的误差；
(2)8个样品之间可进行任意两两比较，增加实验设计灵活性；
(3) 为体外标记，可标记各种动物组织、植物组织、微生物、体液、细胞等样本；
(4) 重复性好，灵敏度高，蛋白覆盖范围广，可在单张谱图中同时进行定性与定量；
(5) 标记完全，标记效率高达97%以上，等质量的同位素标签不增加样品的复杂程度；
SLIAC技术：
(1) 多个样品混合后同时进行分离、酶切和鉴定；后续实验对样品的影响是一致的，减
少了实验操作和仪器设备引入的实验误差；
(2) 体内标记技术，标记效率高达99%；
(3) 应用广泛，可对多种在DMEM/DMEM-F12/1640三种培养基中培养的细胞进行标记；(4)
体内标记，标记效率不受裂解液成分影响，标记效果稳定。
7.修饰定量组学需要做生物学重复么？
答：严格的来说，任何实验为确保结果的准确性都需要生物学重复。但是修饰定量组学本身费用较高，客户一般也不会做重复；当客户样本数量较多时，可考虑将多个样本混合。
8.数据分析包括哪些内容？如何看？
答：分析主要包括GO分析（biological process, cellular compartment, molecular function）、Protein domain分析、Cellular pathway分析与Protein complex 分析。
具体分类见“生物信息学分析内容分类”表，里面有详细的标注。
9．如何做iTRAQ修饰定量，我需要提供组织有多大？细胞要多少个呢？
答：首先，做修饰定量，本身要求蛋白量要比普通组学要高，建议客户提供尽可能多的样品。
其次，不同的组织，蛋白丰度不同，不能一概而论，下面提供的为最低值供参考。
(1)动物组织：不低于100mg
(2)植物组织：保证研磨后不低于1g
(3)细胞：一般细胞修饰定量最好用SILAC，选择用iTRAQ做的多是一些不可传代的原
代细胞，无法SILAC标记，因此提供的是细胞沉淀，要求细胞数5*107-1*108。
10.组织内包括血管、血液等杂质细胞，如何保证数据结果不受这些杂质细胞的影响呢？答：动物组织样本中的内部血管是无法完全除去的，但我们可以通过用PBS等缓冲液清洗处理，去掉溶血的部分等杂质，尽可能地除去杂质细胞，无法除去的内部血管等对结果的影响可以忽略不计。
11.血液可以做修饰定量组学吗？
答：血液的组学一般分为三大类：
(1)全血；
(2)血细胞：红细胞、白细胞、淋巴细胞（含B细胞、T细胞等）等；
(3)血清
12.HPLC是按照什么来分组的？
答：我们用的HPLC，是通过一个固相材料为C18的反相柱，根据蛋白或肽段疏水性来分离的。疏水性越小的越早洗脱下来，疏水性越大的后洗脱下来。如果说这是一个明的分组，那么在质谱进样前，通过LC-MS还会有一个看不到的分组，原理是一样的。
13.单一蛋白的修饰是否可以做定量？
答：我们目前做的定量都是基于标记、对比的，也就是基于组学水平的。单一蛋白非要做定量的话，应该是所谓的非标定量，我们暂时不涉及。
14.单一蛋白修饰鉴定的技术策略是什么？
答：胶内酶解后质谱分析。
15.样本做组学，但没数据库（植物）怎么办？
答：只能用来源最接近的种属数据库来搜库，但提供的实验结果仅供参考。
16.常见的修饰分别对应多少质量位移
答：
17.看到你们公司网站上，乙酰化抗体偶联树脂有普通和优质2种，而且价格差别很大，请问是为什么？规格是多少？我如果做IP的话，一次需要用多少？
答：优质的乙酰化抗体偶联树脂是同时偶联了来自不同克隆株的乙酰化的单抗和多抗，抗体识别范围扩大，从而增加了树脂的捕捉抗体能力。而普通树脂只用了乙酰化的单抗。
我们的树脂规格是0.25ml的干树脂溶在含有50%甘油的slurry里，总体积是0.5ml, 偶联的抗体可高达1 mg（4mg/ml），相当于10支标准包装的乙酰化泛抗体（2880 元/支。100微升），所以说优质树脂售价14380元是性价比很高的。每个树脂可以做15次IP, 一次只需用15微升左右，可以用于1-2mg的肽段溶液样品。
18.用你们公司的抗体偶联树脂，进行蛋白富集，然后进行WB鉴定或质谱鉴定可以么？答：(1) 首先，我们的抗体偶联树脂适用于修饰性肽段的富集，也可以用于直接的蛋白富集，但效果不佳，我们也不建议这么做。原因蛋白是大分子，直接用抗体偶联树脂来富集很困难，修饰性的抗体及偶联树脂都是识别被修饰的肽段残基，对于整个蛋白而言，修饰性位点可能在蛋白表面，也可能被蛋白三维结构包裹在内部，这样抗体及其树脂是很难识别到的。而蛋白经酶解后的肽段，修饰位点可以完全暴露在外面，肽段分子量很小，非常利于富集。
(2) 其次，您如果是想鉴定目的蛋白某种修饰的有无，我们建议您直接用我们的修饰泛
抗体进行WB鉴定，或者将蛋白进行SDS-PAGE，胶内酶解后鉴定。
19.你们的平台所用仪器是什么？
答：我们有Thermo Scientific的Orbitrap Elite，QE等先进质谱仪器，都是目前市面上性能最好的。加上高水平的技术团队和生物信息学分析队伍，我们的平台绝对值得您的信赖。
20.做单一蛋白或混合物鉴定的流程是什么？对样品有什么要求？怎么收费？
答：(1) 流程：分离纯化——酶解——HPLC——质谱分析
(2) 样品要求：要求蛋白样品经SDS-PAGE鉴定，考染清晰；割胶时需注意无菌操作；
寄送样品时冰袋（低温）环境。
(3) 收费：根据样品不同，1500-2000元/胶条。
21.翻译后修饰定量的流程是什么？可以保证通量么？项目周期多长？价格上有无优惠？答：1. 根据样品的不同，我们一般采用2中不同的方法：
(1)iTRAQ方法：可以同时在体外对8种不同蛋白质样品加上同位素标签，然后等量混
合样品，酶解后进行质谱分析。
流程：蛋白质混合——酶解——iTRAQ标记——HPLC——质谱分析。
(2)SILAC方法：细胞在稳定同位素标记的培养基中培养，细胞经6代传代后，细胞的
所有蛋白质被轻、重稳定同位素标记。等量混合标记稳定同位素的蛋白质，酶解后
进行质谱分析。
流程：细胞SLIAC标记培养——提蛋白——混合——酶解——HPLC——质谱分析。
2. 物种不同，生理病理条件不同，同种修饰均有可能不同，因此很难预测修饰组学鉴
定的通量，尤其对WB检测表明修饰的底丰度和新修饰种类而言。但是，对一些常见的修饰类型，如乙酰化修饰，就哺乳类细胞样品和组织而言，在样品合格的前提下，我们可以保证有1000个Kac位点的鉴定。而且我们的技术水准是有保证的，我们的许多客户在影响因子很不错的期刊杂志上发了文章。
3.对定量蛋白质组学而言，体外iTRAQ标记需要20个工作日；体内SILAC标记需要
30个工作日。另外，质谱和抗体富集也都需要大约一周的时间。因此蛋白质组学项
目在40～50个工作日内，蛋白质修饰组学项目在60～70个工作日内完成。
4.关于项目报价，我会请负责您所在区域的技术服务销售工程师尽快和您联系，他会
根据样品和实验设计，在他权限范围内，给出您最优惠的价格及详细的报价单。
22.一对细胞做蛋白质组学，用SLIAC做需要4W，而用iTRAQ做只需2*9400元，那我为什么不选择iTRAQ方法？
答：可以从两者的技术优势区别来分析，SLIAC是体内标记，标记效率不受裂解液成分影响，标记效果稳定，且多个样品混合后同时进行分离、酶切和鉴定，可以后续实验对样品的影响是一致的，减少了实验操作和仪器设备引入的实验误差，但它最大的劣势在于只能用于细胞样本。而iTRAQ最大的优势在于体外标记，标记范围可标记各种动物组织、植物组织、微生物、体液、细胞等样本。对于可以传代培养，用SLIAC标记的细胞样品，肯定优先选择SILAC，而对于一些不可传代的原代细胞，无法SILAC标记，只能提供细胞沉淀，用iTRAQ。
23.比较iTRAQ和SILAC技术
答：1.SILAC定量主要是在一级质谱，iTRAQ主要是在二级质谱定量；
2. SILAC是体内标记，需要在进行材料培养的时候就加入标记，主要使用在动物或植
物细胞培养的过程中，针对其他类型的组织等样品不适用，但是iTRAQ是体外标记，是将蛋白质提取后再进行标记，可以适用几乎所有材料样品；
3. 两者的定量准确性及蛋白分辨率方面差别不是很大；
4. 由于SILAC需要进行培养的过程添加标记，所以需要较长的时间才能比较彻的标记。
24.用于SILAC标记的稳定同位素氨基酸主要有赖氨酸和精氨酸，新和成的蛋白质嵌合了
同位素氨基酸，如此5-6代，细胞所有的蛋白质几乎全部被同位素标记上。
25.为什么目前不能用iTRAQ和TMT技术做泛素化修饰定量相关项目？
答：1. 泛素化一般发生在赖氨酸上，蛋白质的泛素化修饰就是蛋白质的赖氨酸残基位点与泛素分子的羧基末端相互结合的过程。泛素分子的C末端为R-G-G结构，与赖氨酸发生了泛素化修饰后其侧链的氨基就会带上-G-G-R-......结构。当加入trypsin酶解时，该侧链就会被切开，变成-G-G-NH2（赖氨酸上的）；
2.而目前我们公司自主研发的泛素化抗体（PTM-1101)，即赖氨酸双甘氨酸
（glycine-glycine)抗体，只能识别含GG的肽段；这也是PTM-1101能识别发生泛素化修饰的肽段而不能直接识别蛋白的原因；
3. iTRAQ和TMT试剂均能标记肽段的N端以及侧链氨基的末端，那么也因此可以标
记在-G-G-NH2上，iTRAQ和TMT试剂都是大分子，分子量分别有三百多和二百多，远大于小小的-G-G-，因此这时IP时赖氨酸双甘氨酸（glycine-glycine)抗体就很难富集到该肽段，这就是该目前的瓶颈；
4. 值得期盼的是，目前技术部正在探索一种克服该瓶颈的方法。另外，利用label-free
技术来做修饰定量的尝试在正在进行。相信不久泛素化修饰的标记定量和非标定量
项目都可以做。
后续篇
1.蛋白混合物鉴定时，客户需要把好多质谱图提供给客户如何操作？
答：我们公司采用FTP传输的方式提供数据，届时我们会告诉客户该如何操作。
2.快递寄样品的选择，用什么快递？什么条件？
答：快递选择：建议选择顺丰快递或联邦快递。
运输条件：(1) 常温：在培养瓶中培养的细胞；
(2) 冰袋：胶条；
(3) 干冰：细胞沉淀、组织、菌体。
3.服务项目开抗体发票的操作方法？
答：服务项目在签署合同前就要向客户说明发票性质和合同报价挂钩，如果技术服务开成抗体，要提高报价或者增加折扣。客户同意后按一般开票流程，只需在开票申请单上合同性质一栏中技术服务处打√即可，后续开具发票时再补充合同，多少金额开成技术服务，另多少金额开成产品。
客服工作中常见的问题 1、有些产品的存货还很多，不好卖，能不能换成其它的货？ 客：可以给您换其它的货，但是我这边做不了主，需要和领导汇报一下，我们这边退换货有相应的政策，麻烦您跟我说一下是什么原因需要换货？同时把您需要换货的明细单给我发一份，我收到以后去请示领导，看怎么处理。 （此时，客户会说出自己的换货的理由，同时发退换货明细单，客服收到明细单以后开始进行评估）评估标准：1）、如果客户要把动销产品换成滞销产品，可以给换，按退换货流程，收10%的报损费，同时运费由对方承担。 2）、如果客户要把滞销产品换成动销产品，原则是不换，客服回答如下：答：您提的问题我很理解，我也看了您发过来的换货明细表，我感觉您可能对我们的模式了解的还不够透彻，我先跟您说一下，我们公司最大的优势在于，我们独创的“三维立体营销模式”，这种模式的优势又在于产品必须成系列，而且我们的产品包装是红色系，非常吸引眼球，当诸多产品一起陈列时，不用做专柜也能吸引顾客的视觉，显示我们的产品品系全面，也就意味着我们公司是有实力的企业，顾客从心里就会感觉放心购买。当然，我们也知道其中某些产品不做活动销售会比较小。可是如果您把这些产品换掉，那我们的产品就不成系列了，成列面就会小，这样您在做二次、三次活动的时候势必会受到影响，这些问题我们公司也知道，可是我们也一直在做，就是因为以上的原因。其实您大可不必担心，因为这类的产品我们本身一个店就只配了三个，您一个月卖不了多少，一年总是没问题的，而且器械这个产品和别的不一样，它没有保质期；再者后期我们也会针对这些产品做一些活动，帮您消化掉的。 2、当到淡季时，季节性产品就不好卖，能否换成应季的产品？例如：夏季，护具类的产品不好卖，能不能换成别的畅销产品？ 答：可以给您换成应季的产品，但是不建议您更换，因为夏季护具类产品虽然不好卖，但并不是不能卖，只是销量比较慢而已。这些问题我们公司都是知道的，可我们还是坚持在做，原因就是我们的产品是成系列的，需要成系列的陈列，护具类的产品在反季节时如果坚持陈列，会给消费者形成一个心理价位，当到旺季咱们做活动时，就会因为淡季形成的心理价位，旺季时降价促销活动才会更加明显，假如你们没有成系列的陈列我们的产品，那么在后期做活动时会受到一定的影响，这也是我们公司这么多年来跟很多药店合作总结出来的经验。而且这些产品也是没有保质期的，您大可以放心，后期做活动时，我们也会帮您慢慢消化掉的。 3、我们首次合作培训怎么做?后续培训又怎么做？ 答：我们公司首次培训会先跟您那边确定培训日期，我们会派2—3名老师到您公司来，我们大概需要三天时间培训，培训第一天上午您公司需要安排专员陪同我们老师去巡店，下午是中高层领导开思想统一大会，接受我们老师的“三维立体营销模式”的培训，第二天和第三天都是培训一般员工，但是第二天我们要求所有的店长必须参加，会场内需要您那边提前准备好白板笔、投影仪、
20个HR最常用的面试问题及答案 A.别的同仁认为我是老板前的红人，所以处处排挤我。 B.调薪的结果令我十分失望，完全与我的付出不成正比。 C.老板不愿授权，工作处处受限，绑手绑脚、很难做事。 D.公司营运状况不佳，大家人心惶惶。 解答：超过一半的人事主管选择C，其次为D。选择C的回答，可以显示应征者的企图心、能力强，且希望被赋予更多的职责。选择D，则是因离职原因为个人无法改变的客观外在因素，因此，面谈者也就不会对个人的能力或工作表现，有太多的存疑。 A.贵公司在去年里，长达8个月的时间，都高居股王的宝座。 B.贵公司连续3年被XX杂志评选为“求职者最想进入的企业”的第一名。 C.不是很清楚，能否请您做些介绍。
D.贵公司有意改变策略，加强与国外大厂的OEM合作，自有品牌的部分则透过海外经销商。 解答：以D居多。道理很简单，他们希望求职者对所申请的工作有真正的了解，而不仅仅是慕名而来。 A.公司的远景及产品竞争力。 B.公司对员工生涯规划的重视及人性化的管理。 C.工作的性质是否能让我发挥所长，并不断成长。 D.合理的待遇及主管的管理风格。 解答：以C居多，因为公司要找工作表现好、能够真正有贡献的人，而非纯粹慕名、求利而来的人。 A.因为我深信我比别人都优秀。 B.因为我有很强烈的.企图心，想要与贵公司共同成长。
C.您可以由我过去的工作表现所呈现的客观数据，明显地看出我全力以赴的工作态度。 D.我在这个产业已耕耘了8年，丰富的人脉是我最大的资产。 解答：这题理想的回答是C。你如何让对方看到你的好?单凭口才，是很难令对方信服的，因此，从履历表内容或之前的回答内容中，如果能以客观数字、具体的工作成果，来辅助说明，是最理想的回答。 A.我人缘极佳，连续3年担任福委会委员。 B.我的坚持度很高，事情没有做到一个令人满意的结果，绝不罢手。 C.我非常守时，工作以来，我从没有迟到过。 D.我的个性很随和，是大家公认的好好先生。 解答：这题理想的回答是B。A、C、D虽然都表示出应征者个性上的优点，但只有B的回答，最能和工作结合，能够与工作表现相结合的优点、特质，才是面谈者比较感兴趣的回答。
患者常见敏感问题的答复 1.医院是什么性质的？一般是这样提问的：你们医院是民营的还是公立的，是莆田系吗？ 答：（1）我们是市卫生局直属的专科医院，本土医院，专家及医务人员都是各大医院退休的专家，教授。现在商机部门检查的非常严，专家资质不用质疑的。 （2）本土医院，我们医院中国风湿界的领军医院，行业著名专科医院。 2.在你们医院检查贵吗？ 答：（1）不贵，比起大医院，我们的收费很低，因为我们医院有健骨基金补贴，所以收费比其他医院低很多。 （2）收费是物价局统一规定，医院有价格公布，是透明的。中医检查是根据“望闻问切，视触叩听”等等来检查疾病的，这些都是不收费的。 （3）您先来医院，如果医生可通过查体和问诊就可以确诊，就不需要做其他检查了，需要检查时才做检查，能不做就不做检查，也减少不必要的花费。 3.治疗费贵不贵 答：普通老百姓和工薪阶层都是可以接受的，我们采用的方法是中医疗法，用的药是中药居多，一般都能接受。 4.别家医院看过的，没治疗好。问：你们的治疗特点是什么，能治疗好吗？
答：（1）某某医院是代表了我国目前类风湿骨关节病先进的治疗水平，“某某疗法”是由我们总院的院长和中蒙30多位专家经过20多年的临床完善，共同研发的，安全有效。 （2）首先，我们的专业是治疗***疾病的，其他病我们医院也治不了。其次，来我们医院的患者80%都是之前在其他医院治疗无效后又来我们专科医院的，像您这种情况非常多。最后，我们用的治疗方法是医院自行法制的独特技术和方法，获得国家专利，中医疗法。5.能彻底治愈吗？ 答：您这类疾病属于疑难杂症，在世界上都是难题，但是我们医院的专家经过多年研发，已经攻克这个难题，按疗程按医生的叮嘱注意是可以治疗好，但是无法保证彻底治愈，如果有人给您保证彻底治愈，那是不符合目前的科学和专业的。 6.不复发吗？ 首先，这个要根据您自身的情况来看的，根据您目前的年纪，病症，以及病史，再结合我们这边20年以来的临床经验来看是完全没有问题的，但是您必须按照我给你的指导来用。同时配合我们这边的治疗才可以，俗话说：三分病七分养，在治疗的同时要做好各方面的配合，那就完全可以的。 7.需要每天去医院吗?没有那么多时间？（不重视自己的疾病） 答：像您现在这个情况，如果不及时治疗的话，可能后期导致非常严重的后果，内蒙古是这个疾病的高发地区，临床上见过太多耽误疾病治疗的患者后期出现丧失劳动能力和致残的了。远处的不说，就这几
常见问题汇总 1.在工程添加的时候出现类似以下界面的提示的原因是什么？ 答：出现此问题的原因是工程的名称被修改过。工程建立后，生成的工程的文件夹的名字也对应建立，如“示例工程”，打开这个工程文件夹可以发现：该工程对应的设计数据资料文件也都是以此命名的用户一定不要去修改此工程文件夹的名字，如果名字被改动，当添加该工程的时候，系统会提示如以上找不到工程数据的路径，工程将不能被添加。 2.工程刚刚建立时，在“新建工程“界面中选择的是”双幅“，工程建立完后，若想将该工程改为”单幅“能否实现？如何修改？ 答：能实现，鼠标点击“项目”中的工程名字，在右键中有“属性”，在该属性界面中可将原设定的类型改为“单幅”。 3.某用户所设计的桥梁位于C线匝道上，在设计中要求生成图纸的桩号前加有“C“前缀，如何实现？ 答：在新建立工程的界面上，在桩号前缀加上C即可。 4.跨径表达式有哪几种格式？每种格式分别代表哪种桥梁结构形式？ 答：跨径表达式有多种，不同的表达式代表不同的组合：一般情况下如“跨数x跨径”为一联，但也可以在表达式中用“（）”来强制分联，如 225+(17+30)+2x35+2x25，其中的（17+30）被强制为一联。 对于左右幅结构不同或跨径不同的桥可以采用“/”区分左右半幅，如： “3x20/4x16”，表示左半幅跨径为3孔20米，右半幅跨径4孔16米。“ #3x16 ”表示0号桥台不设置伸缩缝。 对于设置过渡墩的桥面连续结构的桥，可以如[10+13+10]建立跨径表达式，表示此联内包含过度墩。 5.中心偏距的意义是什么？什么情况下使用中心偏距？格式有几种？每种格式代表什么意义？
精品文档你我共享 客服常见问题与参考答案 1、您们公司佣金太贵了，别人都是0.8‰。 答：目前证监局对广省内所有的证券公司佣金收取都要求严格执行相关的规定，我们会依据相关的规定为不同的客户按排相对应的佣金标准。您方便的话可以把资金帐号和电话号码告诉我，我帮你看看你能够享受多少的佣金，尽快给你一个答复；同时你也可以直接找你的服务人员咨询。 2、你们公司的荐股太差了。 答：我们公司推荐的个股都是经过我们研究人员精心挑选的，可以说无论技术面或者基本面都是不错的，只是股票上涨与否还与市场各方面因素息息相关，所以有时候可能也会表现的不是太好，但从过去平均的回报来看，还是能够取得不错的表现，所以可能需要您耐心去跟进和持有。另外我们公司的推荐产品中是分短线、中线和长线品种，这也需要客户详细了解相关产品的特点再选择适合自己的，如果你觉得自己对选择产品不是太准确，也可以直接联系你的服务人员，协助你作正确的选择。 3、您们的投资信息太多了，我不需要这么多。 答：首先我们的信息都是按照不同类别分别推送的，其中每一类信息都是我们部门的专业人才精心挑选的精华。能够使您尽快全面的了解当前经济走势，市场环境，投资热点。另外当今社会就是信息社会，谁掌握了更多的信息，谁就获得了更大的优势。如果您还是觉得我们的信息太多，我们会根据您的个性化需求给出为您量身定做的投资信息，使您定位市场更加准确快捷。 4、对于客户已经在其他券商开户的情况。 答1：那您一定在投资上有很多心得，是一个高手了。那家证券公司是不是多年来都给予您很多建议？ 我没有钱做投资。 答1：不要紧，您可以先了解一下银河投顾的服务和产品，对市场和我们保持一个认识和接触， 您这么努力，以后您一定会成功的，总会有相关需求的，您现在先做一些准备，对您未来肯定是有益的。 答2：您太谦虚了，成功人士总是这样低调。其实投资与做其他工作是相通的，您了解了投资 的一些技巧可以协助您交很多投资圈的朋友，多一个朋友多一个成功的机会。 5、我没有时间做投资。 答1：我想您一定工作很忙吧，我理解，但是朋友，工作忙是为了实现个人的经济与社会价值，
第1章硬件故障 1.1 CPU故障 1.CPU温度过高造成死机 2.计算机自动关机或重启 3.如何避免CPU被烧毁 4.如何降低AMD CPU的温度 5.CPU为何有两个温度 6.通过BIOS来设置AMD CPU工作时的温度警戒线 7.由待机进入正常模式时死机 8.清洗散热器导致CPU温度过高 9.导热硅脂过多导致CPU散热不良 10.Intel原装风扇造成CPU温度过高 11.BIOS设置对CPU超频的影响 12.CPU超频引发的声卡问题 13.CPU超频导致显卡被烧毁 14.超频导致死机 15.超频引起电源供电不足 16.CPU超频造成计算机无法开机 17.CPU频率自动降低 18.使i865P主板也支持800MHzFSB的CPU 19.搭配800MHzFSB的Pentium4CPU 20.主板不能正确识别Pentium 4CPU的主频率 21.Windows 98中不识别双CPU 22.开机自检为两个CPU 23.关闭二级缓存造成计算机运行过慢 24.计算机检测到L2Cache时死机 25.CPU针脚接触不良导致无法进入系统 26.消除机箱内的风扇噪声 27.CPU风扇工作不正常导致死机 28.计算机运行时发出蜂鸣声 29.为何总显示100％的CPU占用率 30.CPU风扇转速为零 31.判断假冒CPU 32.CPU故障的判断 1.2 主板与BIOS故障 33.i865和i875芯片组之间的区别 34.华硕865主板支持PA T模式 35.老主板支持大硬盘 36.通过自检鸣叫声判断故障 37.开机时显示器无显示 38.显示器黑屏 39.计算机无法启动 40.主板的接口损坏 41.南桥芯片的温度过高
顾客常见的问题 （1）（活动类促销）资询类1我秒杀/抢购成功时订单显示有货，过一会为什么订单显示缺货/无货？ 由于同一时间下单客户较多，导致系统没有及时更新库存状态，所以订单显示是缺货状态，我们会尽快的补货，争取第一时间为您发货。请您保持手机畅通，耐心待即可。 2为何商品页面有赠品，下单之后无赠品？ 一般商品促销时，赠品的数量有限，先到先得,送完即止。具体以您提交订单信息为准。3为什么没有收到赠送的优惠券、京豆？ 一般赠送的优惠券、京豆等到账时间都是订单完成后7个工作日，一般您可以查看您的订单完成时间是否还在等待到账时间内，同时您也可以确认您的订单中是否所有商品都参加此“赠送活动”，具体规则建议以实际活动规则为准。 4为什么有时候秒杀/抢购活动开始前，商品显示无货或下柜呢？ 商品的价格、库存等信息会在抢购时显示，请您及时关注京东活动网页的信息。 5晒单后没有收到赠品？ 一般参与晒单获得赠品的活动，赠品的发放时间会在商品页面活动规则里面进行注明，您可以查看具体活动规则来确认赠品发放时间以及发放的规则，同时请您根据具体晒单规则来确认您的晒单是否符合活动的要求，具体规则还请您查看活动页面的详细信息。 6我已经收到商品，如何给商品评价？如何晒单？具体怎么操作？ 首先点击【我的订单】，然后找到需要评价/晒单的订单。然后击订单状态【评价】【晒单】按钮后，根据提示操作即可。 评价说明： 满意度评价用来对本次购物过程中的京东服务进行评价，评价大于100元的订单可以获得20个京豆； 商品评价是您对所购商品的质量、使用感受等进行评价，您公平公正的评价可以帮助其他用户做出正确的购买决 策，同时您也可以获得一定数量的京豆奖励，详见评价送京豆规则； .每一商品（某些商品除外）前10个上传图片且通过审核的评价会额外获得100个京豆；您可以针对180天内购买过的商品（某些商品除外）进行商品评价，90天内的订单进行满意度评价。 同一订单或相隔15日内不同订单中的相同商品，只能评价一次； 退换货订单产生的商品评价将会被删除，且会扣除相应的京豆； 鼓励发表原创、有价值的评价；杜绝剽窃、发表无意义、违反法律法规的评价内容，如您发布的无效评价超过（包含）5条，则一年内您发表的商品评价都不会获得京豆奖励。7为什么参加了活动没有得到优惠？ 由于活动优惠方式种类非常多，具体规则都不相同，具体优惠信息以活动页面显示为准。例如： （1）如满减活动未减价：可能由于您购买的商品中有套装商品，或者有赠品都无法参加满减。 (2、）赠品未领取活动：商品赠品有满赠活动一般都会在购物车中显示“领取赠品”的红
创作编号：BG7531400019813488897SX 创作者：别如克* 国企面试常见问题汇总 1、你为什么认为自己有能力胜任这个工作？ 分析：这是一个典型的无固定答案的问题，给应聘者提供了一个机会，展示自己勇于接受挑战的个性。主考官也可对应聘者的动机和信心有所了解。 回答提示：与以前相比，这个工作是最适合我。”“多年来我一直从事此领域的研究，并密切地关注贵公司，以寻求在贵公司就职的机会。你们所要求的技能我都具备，所以我能胜任这一工作。一旦录用，我将全力以赴为之努力。 2、你最大的优缺点是什么，对你的工作会有什么影响？ 分析：回答这个问题的难点在于应聘者既不能把优点说得不像优点，又不能把缺点说得过于严重。有一点应聘者应该牢记在心：从你的回答中，主考官可以知道你的才能，也能了解你的价值观和自我评价的尺度。 回答提示：我最大的优点是，我拥有组织严密的头脑，能从混乱的条理中理出头绪来。我最大的缺点或许就是不喜欢工作无序的人。我相信，我的逻辑组织能力有助于公司更快地实现
目标，而我欣赏工作井井有条的态度也会影响同事工作有序起来。 3、你如何让别人接受你的观点或主意？ 分析：主考官从你的回答中能获得两方面的信息：一是你在试图影响别人时，是不是让人感到很舒服；二是你的说服能力有多高。 回答提示：多年来，我一直在思考这个问题。有时候，我发现好的主意，甚至是伟大的观点，并不能被人们所认同。有一点我很赞同，表达观点的方式同观点一样重要。我通常会从他人的角度来看待这个观点，这样，我就能容易找到说服他们的方法。 4、你的好朋友是如何评价你的？ 分析：这个问题是为考察应聘者的性格而设计的。它看起来似乎与应聘者的潜能无关，实际上这个问题体现了用人单位不仅注重应聘者的技能，而且注重他们的人品。 回答提示：我的朋友们对我都很重要，与他们相处最重要的一点是能够互相信任。因为我们都很忙，所以不能经常见面。”“我有几个比较要好的朋友，可以互相信赖。” 5、你如何与同事相处？
常见电脑问题汇总 一、硬件方面 1、开机后显示器没有任何显示。 答：出来这种情况一搬都是硬件故障，主要原因为内存条有问题（计算机中出现问题的硬件一搬是内存条、盘、显卡、主盘、电源这几个大的器件，其中内存条出现问题的机会和可能性最大，出来这样的情况处理方法为：扒下内存，再开机，看系统会不会报内存错误，如果报错，说明是内存原因，可以把内存的金手指用干净的白纸擦拭干净后，插到电脑里面，再次开机一搬都可以解决问题。如果还不能解决问题，就更换一根内存条。 2、内存条是好的，开机后显示器没有任何显示。 答：出现这种情况，有可能是BIOS出现了问题，电脑使用时间长了，主板上的BIOS电池可能会因为掉电而倒至内面的设置出错，从而使计算机无法启动。解决方法是：清一次BIOS 电，（靠近BIOS电池的跳线从1、2跳2、3再跳到1、2） 3、能够听到计算机启动报警的声音，但是显示器什么显示都没有。 答：计算机启动最开始是一个系统自检的程序，自检通过就会有“嘟”的一声报警，如果计算机启动过程中能听到这声报警，说明计算机能够正常启动。以下情况说明中已听到报警声，说明计算机的主机部份没有问题。这时候显示器还不亮就说明是显示器的问题，请换一台好的显示器试试。 4、计算机能正常亮，但是，启动过程中报错，“disk boot fail” 答：出现这种提示，一搬是计算机的引导部份出现问题，可能出现的问题有：1、BIOS中设置的第一引导项是cdrom，而cdrom中又没有可启动的光盘，解决方法是：开机后按“DEL”键，时入BIOS，把第一启动项改成硬盘启动。
5、计算机能正常亮，BIOS设置也是正确的，但是，启动过程中报错，“disk boot fail”答：出这种问题，就要检查一下你的硬盘是不是好的了，或者说你的硬盘的C盘中的引导程序被破环了。解决方法：重新安装一次操作系统，或者更换一个新的硬盘。 6、开机后，系统出现“花屏” 答：开机系统出现花屏现像一搬都是显卡问题，这时可直接更换一块显卡，并重新安装驱动程序。 7、我的计算机只要放入光盘后，计算机就“死机了” 答：出现这样的情况，一搬是光盘的原因，或者是光驱的原因，解决办法为： 用一张好的，没有划伤的正版光盘试一试看看能不能读得出来，如果用一张好的光驱还是读不出来，就说明是光驱的问题，如果换一张光盘后，能够读得出来说明光驱是好的，而光盘是坏的， 8、开机后计算机没有任何反应，CPU风扇也不转了。 答：出现这种情况，一搬是因为电源有问题，这时可以换一个好的电源来试试。 9、开机后计算机没有任何反应，CPU风扇在转，这时要确定内存是好的。 答：出现这种问题，一搬比较棘手，因为出现这种问题的原因很多，有可能，是CPU有问题，也有可能是主板有问题，这时只能用排除法来解决：先换一个好的CPU到电脑上去试试，现换一块子的主板到电脑上去试一试。这样，总可以找出到底是那个地方出现问题。 二、网络问题 1、IE主页被修改了。 答：点击IE右键，属性。在主页选项框中点击使用空白主页就可 2、系统老是自动弹出网页
面试常见问题及回答 面试技巧及注意事项 一、面试程序 不同的单位对面试过程的设计会有所不同，有的单位会非常正式，有的单位则相对比较随意，但一般来说，面试可以分为以下五个阶段： 第一阶段：准备阶段。准备阶段主要是以一般性的社交话题进行交谈，例如主考会问类似 从宿舍到这里远不远 、 今天天气很好，是吗？ 这样的问题，目的是使应聘人员能比较自然地进入面试情景之中，以便消除毕业生紧张的心情，建立一种和谐、友善的面试气氛。毕业生这时就不需要详细地对所问问题进行一一解答，可利用这个机会熟悉面试环境和考官。 第二阶段：引入阶段。社交性的话题结束后，毕业生的情绪逐渐稳定下来，开始进入第二阶段，这阶段主要围绕其履历情况提出问题，给应聘者一次真正发言的机会。例如主考会问类似 请用简短的语言介绍一下你自己 、 在大学期间所学的主要课程有哪些 、 谈谈你在学期间最大的收获是什么 等问题。毕业生在面试前就应对类似的问题进行准备，回答时要有针对性。 第三阶段：正题阶段。进入面谈的实质性正题，主要是从广泛的话题来了解应聘人员不同侧面的心理特点、行为特征、能力素质等，因此，提问的范围也较广，主要是为了针对应聘者的特点获取评价信息，提问的方式也各有不同。 第四阶段：结束阶段。主考在该问的问题都问完后，会问类似 我们的问题都问完了，请问你对我们有没有什么问题要问 这样的话
题进入结束阶段，这时毕业生可提出一些自己想提问的问题，但不要问类似 请问你们在我们学校要招几个人 这样的问题，大部分单位都会回答你 不一定，要看毕业生的素质情况 ，可以就如果被公司录用可能会接受的培训、工作的主要职责等问题进行提问。 二、面试中可能被问到的问题 面试随单位和岗位的不同而有很大差别，没有固定的形式、问题和答案，这里所列的只是常见的一些问题和回答的要点，仅供毕业生参考。 （一）关于个人方面的问题 一、请介绍一下你自己 在面试前用人单位大多都看过了毕业生的自荐材料，一些基本情况都有所了解，所以在自我介绍时要简洁，突出你应聘该公司的动机和具备什么样的素质可以满足对方的要求。 二、你有什么优缺点 充分介绍你的优点，但最好少用形容词，而用能够反映你的优点的事实说话。介绍缺点时可以从大学生普遍存在的弱点方面介绍，例如缺少社会经验。但如果有不可隐瞒的缺陷，也不应该回避，比如曾经受过处分，应如实介绍，同时可以多谈一些现在的认识和后来改正的情况。 三、你是否有出国、考研究生等打算 很多毕业生在毕业时同时准备考研、就业和出国，先找单位，如果考研或出国成功就与单位解约。从单位的角度来说，招聘毕业生需要时间和费用，而且签约了一位毕业生就等于放弃了其它，所以在签
“金魔方”客服常见问题分类汇总 关于量化投资的问题： ●问：是否需要很多资金？ 答：否。量化投资特别追求稳健，关注风险。多策略量化交易正是控制资金回撤幅度的优秀手段。在资金回撤幅度预期很小的前提下，资金的仓位比例可以提得很高也不必担心爆仓。因此，量化交易反而令资金量的需要降低了。 ●问：是否适合中国股票？ 答：量化投资的本质上是利用市场中的“不合理”现象，找到价值洼地。顺应这些不合理，攻击这些不合理。“合理”的市场中，股价应该是围绕价值中枢随机振动的。中国市场显然不是这样。中国股票存在着远比西方成熟市场多得多的不合理。目前，能够使用量化投资的投资者也不多，竞争不充分，因而中国股票市场其实是量化投资的绝佳土壤。 ●问：是否只能是专业人士所为？ 答：未必。首先，金魔方策略平台基于传统指标语法构建，学习门槛并不高。其次，多策略组合的神奇作用令一些平凡的策略也有了自己的价值。目前网络上随时可以找到许多策略。非专业人士只要对策略进行挑选——简单组合——测评——优化——执行，就可以进行量化投资。
●问：是否存在一劳永逸的策略圣杯？ 答：首先，任何策略，通常特别契合某一段时间的行情。当行情性质发生变化之后，往往会发生失效。例如，趋势跟随类策略在大行情中表现出色，在震荡类行情中亏损。其次，任何成功的策略，随着使用人数的增加，必然慢慢失去获利空间。可见，不存在一劳永逸的策略圣杯。 应对之道：不断优化、调整策略。适合当前形势。不断找到市场中新的不合理现象，选用获利空间没有被填平的新策略。 ●问：到底效果如何？ 答：量化投资有许多成功榜样。最著名的成功例子是西蒙斯的大奖章基金，25年来年平均收益30%以上。本土的量化交易力量也在迅速崛起，近两年来在国内期货界风生水起、炙手可热。绝大多数应用量化投资的投资者认为：即使量化投资没有帮助他们赚到大钱，也肯定是帮助他们减少了亏损。“有了量化投资，我们很难死。”一位量化投资的践行者如是说。 安装类问题： ●问：我初次使用金魔方软件，如何下载、安装？ 答：首先，请登陆到花生网（https://www.doczj.com/doc/e318215300.html,）中进行下载；下载完成后，双击安装包；根据提示点击“下一步-下一步”即可完成安装。
1、海量日志数据，提取出某日访问百度次数最多的那个IP。 首先是这一天，并且是访问百度的日志中的IP取出来，逐个写入到一个大文件中。注意到IP是32位的，最多有个2^32个IP。同样可以采用映射的方法，比如模1000，把整个大文件映射为1000个小文件，再找出每个小文中出现频率最大的IP（可以采用hash_map进行频率统计，然后再找出频率最大的几个）及相应的频率。然后再在这1000个最大的IP中，找出那个频率最大的IP，即为所求。 或者如下阐述： 算法思想：分而治之+Hash 1.IP地址最多有2^32=4G种取值情况，所以不能完全加载到内存中处理； 2.可以考虑采用“分而治之”的思想，按照IP地址的Hash(IP)24值，把海量IP日志分别存储到1024个小文件中。这样，每个小文件最多包含4MB个IP地址； 3.对于每一个小文件，可以构建一个IP为key，出现次数为value的Hash map，同时记录当前出现次数最多的那个IP地址； 4.可以得到1024个小文件中的出现次数最多的IP，再依据常规的排序算法得到总体上出现次数最多的IP； 2、搜索引擎会通过日志文件把用户每次检索使用的所有检索串都记录下来，每个查询串的长度为1-255字节。 假设目前有一千万个记录（这些查询串的重复度比较高，虽然总数是1千万，但如果除去重复后，不超过3百万个。一个查询串的重复度越高，说明查询它的用户越多，也就是越热门。），请你统计最热门的10个查询串，要求使用的内存不能超过1G。 典型的Top K算法，还是在这篇文章里头有所阐述， 文中，给出的最终算法是：
第一步、先对这批海量数据预处理，在O（N）的时间内用Hash表完成统计（之前写成了排序，特此订正。July、2011.04.27）； 第二步、借助堆这个数据结构，找出Top K，时间复杂度为N‘logK。 即，借助堆结构，我们可以在log量级的时间内查找和调整/移动。因此，维护一个K(该题目中是10)大小的小根堆，然后遍历300万的Query，分别和根元素进行对比所以，我们最终的时间复杂度是：O（N）+ N’*O（logK），（N为1000万，N’为300万）。ok，更多，详情，请参考原文。 或者：采用trie树，关键字域存该查询串出现的次数，没有出现为0。最后用10个元素的最小推来对出现频率进行排序。 3、有一个1G大小的一个文件，里面每一行是一个词，词的大小不超过16字节，内存限制大小是1M。返回频数最高的100个词。 方案：顺序读文件中，对于每个词x，取hash(x)P00，然后按照该值存到5000个小文件（记为x0,x1,…x4999）中。这样每个文件大概是200k左右。 如果其中的有的文件超过了1M大小，还可以按照类似的方法继续往下分，直到分解得到的小文件的大小都不超过1M。 对每个小文件，统计每个文件中出现的词以及相应的频率（可以采用trie树/hash_map 等），并取出出现频率最大的100个词（可以用含100个结点的最小堆），并把100个词及相应的频率存入文件，这样又得到了5000个文件。下一步就是把这5000个文件进行归并（类似与归并排序）的过程了。 4、有10个文件，每个文件1G，每个文件的每一行存放的都是用户的query，每个
常见精神疾病问题解答 1、精神病可以根治吗？ 精神分裂症是精神疾病中最多见的，具有慢性、易反复发作的特点，给家庭和社会造成沉重的经济负担。达到症状“完全缓解”的标准并保持“完全缓解”患者的生活质量，预防病情复发，是精神分裂症治疗的目标。 精神分裂症的治疗是个长期的过程，在短时间内不可能给予判断痊愈的标准，但是要是按照科学的理论来讲完全是可以治疗痊愈的。目前我们的目的是按照科学的方法给予治疗，主要的是注意安全性、耐受性、依从性，这样病人能够坚持长期服药，减少复发率，逐渐的恢复社会功能。说起来容易，做起来真的很难，这就是为什么很多人甚至医生都说分裂症很难治愈的原因。 我们都要认真的对待，以科学的理论为根基，去知道家属或者患者尽量的按照科学的治疗方法去治疗，这样能够减少复发率，社会功能也能很快的恢复，不会受到很大的影响！！我们要尽早治疗，避免脑功能出现不可逆转的损害！！ 抗精神病药引起的月经异常 1、抗精神病药物引起的月经失调时非常普遍的现象，对于重型精神疾病，我们可以考虑先 治疗，如果出现了月经失调的话可以给予乌鸡白凤丸治疗， 在治疗女性的精神病，尽量使用新型抗精神病药物，但是出现催乳素水平增高的药物，最严重的是利培酮 在临床工作中我还遇到这样的患者，就是出现月经周期延长，但是这样的患者年龄大多在绝经前后的年龄！！这样的患者，我的处理是暂时先不要管她，一旦到了绝经后，自然就好了，只要对病人没有太大的影响就好。 如果出现闭经，那么势必对年轻的患者产生影响，最主要的是心理上产生的焦虑比较严重，所以药给予正确的治疗，实在不好，就必须换药，不是说一种抗精神病药物疗效好久不能换药，换用另外一种抗精神病药物未必疗效不好，出现的闭经或者月经周期延长，在临床上时比较普遍的，同时我们的很多文献也都有报道，在处理上要看不同的病人不同的特点，结合临床及精神症状的改善情况来做最好的处理，希望大家对待这样的问题不要慌张，主要在于治疗的过程！！！ 影响精神分裂症预后的因素 精神分裂症目前病因不明，其病程具有不断发展逐渐加重的趋势现阶段其治疗效果仍不尽人意。 通过临床研究和观察,普遍认为以下因素可影响其预后： *病前性格 病前性格孤僻不合群;或具有分裂性人格，如孤僻退缩、沉默寡言、不与人交往、缺乏进取心敏感害怕、性格怪僻的人;常做白日蒙，适应能力差的人患病后可迅速走向衰退和慢性病程，预后差。
淘宝客服常见问题快捷短语回复 客服的常见快捷回复主要分为两类，一类是售前的快捷回复，是指买家在付款前咨询客服时我们应该如何快捷回复。一类是售后的快捷回复，是指买家在付款后咨询客服时我们应该如何快捷回复。 售前快捷回复 一、基础问候 1、首语 用于买家第一次咨询。例如：老板在不在？ 话术：亲，您好，**(店铺名)服饰XX为您服务！请问有什么可以帮到您的呢？现在我们**(店铺名)在举行“XXX”的活动，即日起，在本店任意购买两件即可包邮，亲选好要的东东后，用购物车一起拍下联系我修改邮费哦 2、尾语 适用于核对完客户的付款及订单信息后，保证已确认完客户订单及做好相关备注 话术：亲，感谢您的支持，我们支持七天无理由退换货，若收到货不满意请及时联系我们处理，若满意，请记得5分好评以示鼓励哦，我是客服XX，祝您生活愉快！ 二、库存咨询 1、跟客户确认他所查询的款式颜色和尺寸 话术：请问您是要哪个款式什么颜色和尺码的呢，麻烦告诉我我好帮您查询是否有货哦2、顾客问有货没呢？ 话术：亲，有现货的呢，只要能拍的都是有货的呢！ 3、若无现货，是预售款，则根据预售情况如实回答 话术：亲，这款宝贝因销售火爆，暂时预售，现在付款在X月X日发货，您可以等货吗? 4.、若客户不想现在付款，说等预售期到了再来买 话术：亲，这款预售数量有限，建议您尽早预定哦，这样到货了就可以给您先发货呢5、客户问题：那我现在买，没收到货淘宝就把款打给你们了怎么办？ 话术：亲，这个您放心哦，支付宝的担保交易是非常安全的呢，自动打款时间是从您确认收货了才会打款的哦！ 三、推荐 1、颜色推荐 顾客问题：什么颜色好看或是适合什么颜色 建议：根据顾客喜好及个人肤色适当推荐，由顾客做决策！ 2、款式推荐 （1）若客户要的款式没货，推荐差不多的款式给客户； 话术：亲看下这款跟您要的那款款式、板型上都差不多的哦，看下喜欢吗？（链接）（2）若客户不喜欢推荐的类似款，可适当推荐热销且有货的款； 话术：亲，每一款衣服穿上都有属于自己的气质哦，您可以看下这款，卖得非常好呢（链接）（3）客户在多个款式间徘徊，引导客户让亲人或者朋友给出建议； 话术：亲，您还可以请您身边的亲朋好友或是同事一起来看看，结合您的气质给出建议哦3、尺寸推荐 客户咨询尺码时，不直接正面给客户进行尺码推荐 顾客问题：适合穿什么尺寸 建议：尺寸依据顾客文胸尺寸、牛仔裤尺寸、平时穿衣尺寸、衣服版型及商品资料表格中的客服试穿感受来推荐。
电脑常用故障分析 显示器黑屏故障全解析 一、电脑主机故障引起的黑屏故障 电脑主机故障引起的黑屏故障主要可以分为以下几类: 1.主机电源引起的故障 主机电源损坏或主机电源质量不佳引起的黑屏故障很常见。例如，当你添加了一些新设备之后，显示器便出现了黑屏故障，排除了配件质量及兼容性问题之后电源的质量不好动力不足是故障的主要起因，这时你也许还可听到机内喇叭连续报警12声，更换大功率质优电源是这类故障的最好解决办法。此外，有的主板上有A T/ATX双电源接口，其选择跳线设置不对也可引起这类故障。 2.配件质量引起的故障 电脑配件质量不佳或损坏，是引起显示器黑屏故障的主要成因。例如主板（及主板的BIOS），内存，显示卡等等出现问题肯定可能引起黑屏故障的出现。其故障表现如显示器灯呈橘黄色，这时用替换法更换下显示卡，内存，甚至主板，cpu试试，是最快捷的解决办法。 3.配件间的连接质量 内存显卡等等与主板间的插接不正确或有松动造成接触不良是引发黑屏故障的主要原因。而且显示卡与显示器连接有问题也可能引发这类故障，直至AT电源插接不正确更有甚者如你的硬盘或光驱数据线接反也有可能引发启动黑屏故障。 4.超频引起的黑屏故障 过度超频或给不适合于超频的部件进行超频不仅会造成黑屏故障的产生，严重时还会引起配件的损坏。还有就是过度超频或给不适合于超频的部件超频后散热不良或平常使用中散热风扇损坏、根本就不转等等都会造成系统自我保护死机黑屏。 5.其它原因引起的黑屏 其它如主板CMOS设置不正确及主板清除BIOS跳线不正确都可引起黑屏故障，这时你可对照主板说明更改其设置。此外软件冲突如驱动程序有问题安装不当，DIY不当如BIOS刷新出错，电源管理设置不正确，恶性病毒引起硬件损坏（如CIH）等等都有可能引起显示器黑屏故障的出现。大家在遇到这类故障时不妨多仔细想想多考虑一下故障的成因，做到解决故障知己知彼事半功倍。 二、显示器自身故障引起的黑屏故障 根据笔者平常的经验，显示器自身故障引起的黑屏故障主要是由以下几种原因引起的：1.交流电源功率不足 外部电源功率不足，造成一些老显示器或一些耗电功率大的显示器不能正常启动，是显示器自身故障引起的黑屏故障原因之一。或者外部电源电压不稳定，过高过低都可能造成显示器不工作。 2.电源开关电路损坏 显示器开关电路出现故障是引起显示器黑屏故障的主要成因。简单的如电源开关损坏或者内部短路；常见的如开关管损坏或其外围电路元器件出现损坏等等。 3.行输出电路的损坏 行输出电路或显像管及其供电电路出现故障也是引起显示器黑屏故障的主要成因。特别是高压包的损坏在一些使用多年或品质较劣的杂牌显示器中造成无显示黑屏故障更为常见。 三、显示器黑屏故障解决思路 对于显示器黑屏故障该如何维修，下面我们将提出一些思路供你参考。
1. 你的特长？ 2. 你不喜欢什么样的学生？ 我作为一名人民教师，我最大的愿望就是让我的每一个学生成才，最重要的原则就是以平等的心去面对每一名学生，所以我没有不喜欢的学生，只有对他们不满意的学生。之所以对他们不满意，或是因为一些学生学习方面不努力，或是因为他们为人处事有问题，而我要做的恰恰是帮助他们解决这些问题，这才是作为一名人民教师应该做的，而不应该主观的去喜欢或不喜欢某类学生，否则即违背了我作为一名人民教师的初衷，也不利于我工作的开展，更加会影响一些孩子的成长。俗话说没有教不好的学生，只有教不好的老师，相信经过细心的教育，每个学生都会成为大家所喜欢的好学生！ 每个学生都有自己独立的一面，我相信只要我们能够真正的关心爱护学生，每个学生都会实现自己的人生价值。所以并没有什么不喜欢的学生，只要老师耐心引导，没有所谓的差生。 3. 教师这个职业有发展前途吗？ 教师是一门很崇高和神圣的职业，当然是非常有前途的。并不是每个人都能当老师的！即便是师范学院的毕业生，也并不一定就具备了当老师的资格的！当老师并不简朴地是向学生教授书本上印的那些知识，学生从老师那里更多地是学习对生活、对人生、对他四周的世界的理解。在多数情形下，老师影响着学生的一生。教师的身上担着未来的希望，社会对教师的地位也越来越重视，不仅仅给教师更高的社会地位也给教师给好的进修机会。 4. 如果学生当面指责你，你会如何处理？ 作为教师碰到这种情况千万别急，急了会出乱，乱了就失分寸。我个人认为当面别激发矛盾，面子重要，但我们的修为更为重要。面对学生教师的言行直接影响到今后的工作，面对学生我们如何有效地进行交流这是一种艺术。 首先我会搞清晰为什么学生会有这种态度，是我的原因还是有什么误会。 其次不管是谁的原因都要保持冷静，不要觉得丢脸而打骂学生。 最后在了解情况后再做出判定，如果确实是我的错，我会表示以后注意自己的方式方法，但是学生可以私下给我交谈而不要采取这种过激犯的方式。 教师要明白正因为不成熟他们才叫学生，正因为是学生，所以才会犯错误，我们不能用成人的眼光看待孩子，教师是教育者，正因为学生的不成熟才需要我们这些教育者的帮助。 5. 你对学校有什么要求？
病人常问问题与解答 1、我现在是月经期，这些治疗可以做吗？ 答：这些是绝对的，我们的治疗有专门针对月经期患者的治疗，这样不会影响到您的治疗效果，避免了耽误治疗。 2、患者对检测结果提出质疑如何处理？ 答：①我们是妇产科专业医院，特点是专而精； ②我们医院的检查仪器都是最先进的设备，具有高精度的分辨能力； 要相信科学，建议患者早诊断早治疗。 3、性传播疾病是否是单一的性传染疾病？ 答：性传播疾病的传播途径90%以上是直接的不洁性行为传染，少数的间接传染，例如公用浴室、毛巾、坐便器、公厕的把手等。 4、你们医院包治吗？不复发吗？ 答：包治、包好的概念既不科学又不严谨。我们采用科学、规范、合理的方法治疗疾病，杜绝疾病的蔓延，防止复发。 5、我要上班，并且经常出差，没有太多时间怎么办？ 答：为了方便您就医，我们的治疗时间是早8：00——21：00，输液治疗24小时服务，节假日不休，随时都有专家应诊，对于出差的患者，可以提前向医生讲明，以保证治疗的连续性，以免间断治疗，影响疗效。 6、我在别家医院治疗，看到报纸上广告，前来咨询一下？ 答：耐心解答患者提出的问题，让患者了解我们专业的优点、优惠政策，从中了解，从谈话中了解到病人是哪方面的疾病后，介绍我们为**医生是专治**疾病方面的专家，都是三甲医院高资专家。谈话中要避免诋毁兄弟医院，给病人留下良好的第一印象。 7、症状好转，能否停药？ 答：①症状减轻，并不等于疾病的彻底治疗，这只能说明用药对患者起到了一定的疗效，病症出现好转，但并不意味着完全康复可以停药。临床实验证明，只有遵循医嘱，规范地接受治疗，才能达到治愈的目的； ②治愈的标准是临床症状消失，检测的结果均为阴性（要连续三个月的检测都转为阴性）。 8、治疗结束后，是否要复查？ 答：治疗结束后，按照医生要求针对性的复查肯定是十分必要的，并且要坚持半年到一年都
客服是淘宝网店销售环节中很重要的一环，淘宝客户通常有一些常见的问题，那么如何巧妙应对这些问题，让客户打消顾虑提高满意度就会直接关系到产品的销售，简单化网商互动平台这里针对客服中客户常见问题，总结了10点，1欢迎语.2解释低价销售.3解释邮费高低.4解释质量问题.5色差问题.6议价问题.7客户拒绝购买.8催付款.9售后问题.10结束语.. 1欢迎语（最重要的，给客户客户的第一印象就是要热情，专业，微笑服务） （这是最基本的也是最重要的.每个客户都是喜欢态度好的客服.是没有客户喜欢态度差的客服的） 用您“代替”你（我们对客户讲解商品时都用“您”字，这是对客户最基本的尊重） 问候直接设置为自动回复，在自动回复后可在个人回复快捷设置一下当前活动短语。 2怎么解释低价销售：（我们在做活动的时候，低价销售，客户会以为商品低价销售会有质量问题所以就必须要和客户解释为什么这个价格的因为） A.亲.您好我们现在正在冲量期间，；所有的产品都是低价销售赚信誉的，您 看中的这款是我们现在限时折扣销售的。 B.亲.您这个问题问得非常好，我们以前也有许多老顾客有这样的顾虑。不过 这一点我可以负责任的告诉您，不管是正价还是促销的产品，其实质量完全是一样的，比如这款特价的，质量保证都是一样的，而价格却要低很多，所以现在买这款产品真的非常划算。您完全可以放心选购 3.怎么解释邮费高低（对于许多不包邮的产品客户就会说怎么运费这么贵）
A亲.到您那只需要XX元的运费的就可以了的，快递是按照重量收费的，这款坐垫是加厚版的，所以质量上比较重，在XX 左右的，已经给您优惠了的，您看下…… 4.解释质量问题（顾客最为重视的一个问题，毕竟是要自己用的，有问题怎么办） A.亲产品质量问题您完全可以放心哦，我们不但参加了消费者保障计划之 外，还参加了7 天无理由退款，只要有质量问题，完全可以退货的哦 5.色差问题（网购毕竟不是现实没有看到货品，只能看到图片） A 亲衣服颜色和图片差距不大，我们都是实物拍摄的，由于受显示器显色程 度，每个人对颜色的感知不同，所以有轻微的“色差”是难免的，如果亲对颜色要求非常苛刻，请谨慎选购。） 6.议价问题（客户最关注的还是价格问题和质量问题） A亲，同样的产品也有质量区别的，最主要的就是材质的问题，材质的不同会直接影响到价格的差异。也会因为品牌、进货渠道等因素而有区别。您说的价位我们实在给予不了的! B.亲，如果您觉得您说的价位很合适的话，那我只能说声抱歉了，您说的这 个价格在整个市场都买不到的。您还可以多比较比较，如果需要的话，欢迎您随时光临小店来购哦 C实在抱歉。您经常网购您也知道网店利润很薄的，这个价格我真的给不了，但是您开口了，要是我还抱着这个价格不放，感觉有点死板，您看，我帮您申请件礼品吧，好吗 D.亲我们店内的宝贝都是正价销售，谢绝还价哦！如果给您私下低价，那样 对别的顾客不公平，如果下次有活动我们会第一时间通知您，希望您能理解；您看这样好不，我们帮您和主管申请下送您份礼品您看好吗 7.客户拒绝购购买（不管是你的产品还是服务态度没有打动他，这个问题还是