肝素钠效价测定步骤
准确称取0.035-0.05g样品，放入小烧杯中，加入35-50ml0.9%Nacl 盐，配成0.1%的样品溶液；
吸取0.5ml上述样品溶液至小瓶中；
根据估计效价，加入适量0.9%Nacl,其量为估计效价除以标准品效价（即8），减去1，除以2，即：
[（估计效价/8）-1]/2 摇匀；
取5个试管，分别吸取上述3的溶液140ul、150ul、160ul、170ul、180ul；
分别加入1ml血浆，再加入0.8ml0.25%Cacl2,盖上塞子，摇匀；
放入37℃±1水浴箱中1小时，1小时后观察结果
结果判定，实际效价=估计效价*标准品凝固点/样品凝固
(1L(升)=1000ML（毫升）\1ML=1000UL（微升）)
废液残留测定
试验目的
为了加强生产监控力度，在过程中进行检测吸附废液残留，从而根据废液残留量，在后道工序进行调整，最大程度的提高肝素钠效价和出率。
试验原理
肝素钠是具有抗凝血活性的一类物质，在溶液中肝素钠含量越高，抗凝血作用越强，吸附废液中肝素残留量的高低，直接跟血浆的凝固程度有关，含量越高，凝固程度越大。
三、试验器材及试剂
1、试验器材：-18度冰箱1个，吸耳球2个，10ml吸量管3个，1ml吸量管1个，试管架1个，恒温水浴箱1个，锥形漏斗1个，脱脂棉；
2、试验所需试剂：血浆，标准品，0.9%的Nacl,0.25%的Cacl2；
四、试验方法
1、吸附结束后，关闭搅拌电机，静置2分钟，用瓶子取半瓶吸附废液，盖上瓶盖，放冷水中冷却备用；
2、取1个试管架，装试管4排，第一排装5支，后面3排各装3支；
3、在第1排试管中分别按顺序加入吸附废液1400ul、1600ul、1800ul、2000ul、2200ul,后3排分别按顺序加入标准品150ul、160ul、170ul；
4、分别在上述4排试管里加入1ml血浆，然后再加入0.8ml0.25%的Cacl2，盖上试管塞，摇匀；
5、放入37℃±1 的恒温水浴箱中1小时，1小时后观察每1管的凝固程度；
五、试验结果
1、观察每一排试管中血浆的凝固程度，以第1排血浆的凝固程度作为吸附废液的血浆凝固点，后3排中凝固程度相同的两排的凝固程度作为标准品的凝固点；
凝固程度判断：
1）、完全凝固：溶液完全凝固，倒转管子，凝块不从管壁脱落；
2）、3/4凝固：溶液完全凝固，倒转管子，凝块有气泡产生，能从管壁脱落；
3）、1/2凝固：倒转管子，大约有一班体积的溶液凝固；
4）、1/4凝固：倒转管子，只有很少溶液凝固；
5）、0凝固：倒转管子，溶液无凝固现象，并完全流动；
2、废液残留量的计算方式：
废液残留量=8*标准品凝固点/样品凝固点
新树脂处理方案
1、用60度的热水浸泡4小时，沥干。
2、用40°酒精浸泡12小时，酒精和树脂的体积比为2：1，结束后用清水冲净，然后滤干。
3、用4°盐酸（按盐酸和水1：9稀释）搅拌2小时，盐酸与树脂比为
2：1，然后用清水冲洗至中性。
4、用4°氢氧化钠溶液搅拌2小时，氢氧化钠溶液与树脂的体积比为2：1，然后用清水冲洗至中性。
5、用1:1的18°盐水浸泡12小时，然后用清水冲洗至中性即可。
抗菌肽检测方法 1、LB培养基配制 NaCl：1% 胰蛋白胨：1% 酵母浸粉：0.5% 葡萄糖：0.5% 技术琼脂粉：2 % 将上述培养基配比，以水为溶剂，调pH值7.0，121度30分钟，灭菌备用。 2、大肠杆菌菌液制备 2.1 菌液制备：将大肠杆菌（K12D31）从斜面上刮一环转接于装液量50ml的250ml摇瓶中，置于180rpm、37℃的摇床上培养16-24h。 2.2 分光光度计测定其消光值（OD600nm）：将上述大肠杆菌菌悬液用无菌生理盐水稀释，用无菌生理盐水做空白对照，调整菌液吸光值为1.0。于4度冰箱中储存备用（菌液储存时间不得超过4天）。 3、试验菌培养基制备 将无菌LB培养基置室温待其冷却至48-50度时，按100ml无菌LB培养基中加入100μl菌液（OD600nm =1.0），摇匀。吸取含菌LB培养基10ml，使在90mm培养皿底内均匀摊布，放置在水平台面上使其凝固备用。 4、样品制备 4.1 精密称定待测的试样1.0000g，倒入精准9ml水中震荡溶解，放入100度水浴中温浴10分钟，拿出移入离心管中10000rpm离心15分钟，倒出上清液，用针筒吸取上清液，备用。 4.2 将上述3中制备好的检测培养基上用灭菌的打孔器（2.7mm）打孔，每孔中分别加入5ul 的抗菌肽测试样品溶液，取3个平板每板1空重复3板，置于37度培养箱中培养16-20小时后，测定抑菌圈直径，取平均值。 5、抗菌肽效价测定 计算公式：U（单位/克）=2X×1000×稀释倍数；X=（y -2.7）/2.1，其中： Y：抗菌肽抑菌圈直径（mm）取平均值； 2.7：孔穴直径（mm）； 2.1：抗菌肽浓度与抑菌圈直径的比值常数。 使用时间: 2013年9月26日起
肝素钠效价检测方法 试剂：羊血浆（冰冻保存）、0.9%生理盐水、0.25%CaCl2（用生理盐水配置）、8%柠檬酸钠溶液、8IU∕mg肝素钠标准溶液。 4.2.2.2 待检样品溶液的配置：精确称取肝素钠固体待检样品M mg，溶解并用0.9%生理盐水定容至100ml，再取V ml定容至25ml即得待检样品溶液，冷藏保存。 估计M及V的计算公式为：样品估计效价×MV∕100=25×8 估算时V只尽量小于10且取整数，从而计算出M值。 4.2.2.3检测方法：将恒温水域调制37℃恒温，取出冰冻羊血浆，融化，并过滤，待 用。取2组10只试管，分别加入标样110ul、120ul……200ul，然后每管加 入8%柠檬酸钠溶液20ul、0.25%CaCl2 0.8ml 及过滤后的羊血浆1ml，另一组 加入待检样品溶液110ul、120ul……200ul，同样每管加入8%柠檬酸钠溶液 20ul 、0.25%CaCl2 0.8ml及过滤后的羊血浆1ml。并将每只试管盖好管盖， 倒转3—4次混匀，使内壁湿润，垂直放入37℃水域1h。1h后取出各管，检 查各管的凝固程度，并记录确定标样及待检样的1∕2凝固点及体积。 凝固程度标准： ①完全凝固：溶液完全凝固，倒转试管并猛敲一下时，凝块不从管壁脱落。 ②3∕4凝固：溶液完全凝固，但当猛敲一下时，凝块能从管壁脱落。 ③1∕2凝固：大约一半体积的溶液凝固。 ④1∕4凝固：少量溶液凝固。 ⑤0凝固：溶液悟凝固现象。 若相邻两管跳过1∕2凝固点则1∕2凝固点的计算公式为 V=V2-（V2-V1）×（0.5-S1）∕(S2-S1) (S1：小凝固度；S2：大凝固度；V1：相邻两管大凝固度加入的微升数；V2：相邻两管小凝固度加入的微升数。) 待检样品效价计算公式： 4.2.2.4F=待检样品估计效价×标品1∕2凝固点微升数÷样品1∕2凝固点微升数4.2.2.5 注意事项： 4.2.2.6.1 实验室操作环境必须控制在30℃以下。 4.2.2.6.2在使用新开启羊血浆前，需检测羊血浆是否能够正常使用。取试管一只，加入0.8ml 0.25%CaCl2及过滤后的羊血浆1ml ，盖好管盖，倒转3—4次混匀，使内壁湿润，垂直放入37℃水域5min，5min后检查血浆是否凝固，如血浆凝固则可使用，未凝固则不能使用。 4.2.2.6.3 如在检测过程中，标样的1∕2凝固点高于200ul，则需重新调整羊血浆的1∕2凝固点。方法如下：取3组各10只试管 组一： 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 标样 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 ul 8%柠檬酸钠 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 ul 0.25%CaCl2 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 ml 羊血浆 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 ml
血型抗体效价测定 目的了解血型抗体效价测定的操作方法。 原理将被检抗血清作倍比稀释后，加入一定量的抗原红细胞，观察凝集强度。以抗体稀释后仍能与抗原红细胞出现1个（+）凝集的试管稀释倍数之倒数定为该抗体的效价。 器材小试管、刻度吸管、37°C水浴箱。 试剂1.标准2%A型红细胞生理盐水悬液。 2．生理盐水。 标本被检者血清。 操作以抗A效价测定为例。 1．血清倍比稀释取10支小试管，每管加入生理盐水0.1ml。在第1管中加入0.1ml被检者血清，混匀后吸取0.1ml加入第2管，依此类推，至第 10管，最后弃去0.1ml。 2．加入抗原红细胞于每管中加入2%A型红细胞生理盐水悬液0.1ml，混匀。 3．温育置15~20°C室温中温育15min。 4．离心和观察结果以1000r/min离心1min，以出现1个（+）凝集强度试管的血清稀释倍数的倒数定为该抗血清效价。 注意事项 1．倍比稀释要准确，避免稀释不匀出现跳管现象。 2．离心后试管内上清液出现溶血，表明不仅有抗原抗体反应，而且有补体激活，具有重要临床意义。 血型抗体效价测定 目的了解血型抗体效价测定的操作方法。 原理将被检抗血清作倍比稀释后，加入一定量的抗原红细胞，观察凝集强度。以抗体稀释后仍能与抗原红细胞出现1个（+）凝集的试管稀释倍数之倒数定为该抗体的效价。 器材小试管、刻度吸管、37°C水浴箱。 试剂1.标准2%A型红细胞生理盐水悬液。 2．生理盐水。 标本被检者血清。 操作以抗A效价测定为例。 1．血清倍比稀释取10支小试管，每管加入生理盐水0.1ml。在第1管中加入0.1ml被检者血清，混匀后吸取0.1ml加入第2管，依此类推，至第10管，最后弃去0.1ml。 2．加入抗原红细胞于每管中加入2%A型红细胞生理盐水悬液0.1ml，混匀。 3．温育置15~20°C室温中温育15min。 4．离心和观察结果以1000r/min离心1min，以出现1个（+）凝集强度试管的血清稀释倍数的倒数定为该抗血清效价。 注意事项 1．倍比稀释要准确，避免稀释不匀出现跳管现象。
管碟法测定抗生素效价中的影响因素分析及对策 关键字: 管碟法；抗生素；效价；抑菌圈 摘要: 目的提高管碟法测定抗生素效价的准确性。方法按操作步骤逐步分析，并提出合理的解决方案。结果减少外界因素与人为因素给试验带来的误差。结论可以提高测定结果的准确性。 Abstract: OBJECTIVE To improve the veracity of antibiotics titer evaluation by cylinder- plate method. METHOD According to the process of test, ana lyze the test and offer a proper measure to avoid influenci ng factors. RESULTS Reduce the errors caused by environment al and artificial factors. CONCLUSION This can improve the veracity of test results. Key words: cylinder- plate method; antibiotics; titer; bacterial inhibition ring 管碟法是国内外常用的抗生素微生物检定法[1]，利用管碟法测定抗生素效价，具有准确、直观、重复性好等优点，因而被广泛采用。但是整个试验过程中影响结果的因素很多，任何一个环节操作不当或者忽略就会造成很大误差，导致整组试验失败。根据实际操作中的积累经验，对管碟法中影响试验结果的因素进行如下分析及提出解决的方法。 1. 实验器材的准备 1.1 实验器材的选择 试验应该选择底面平整的玻璃双碟，避免底面的凹凸影响琼脂层的厚度。可将双碟放置在水平台上，下垫一层白纸，加入3mL水，再滴加蓝墨水，根据蓝色是否深浅一致来判断双碟底面平整程度。小钢管则应该选择加工精细的同一批产品，这样才能保证管壁厚薄与重量均匀一致，使得小钢管在培养基中下陷相同的深度，抗生素溶液扩散均匀有可比性。如果小钢管两端不够平，就应予剔除，否则会使抗生素溶液漏出，破坏均匀扩散现象。 1.2 实验器材的清洗 抗生素试验中，玻璃双碟、小钢管往往会连续使用。由于清洗方面的原因，它们还是容易残留上次试验中的抗生素（庆大霉素、争光霉素、链霉素等）或者被清洗用的杀菌剂（如新洁而灭、洗洁精、去污粉等）污染，以至于在下次试验中造成抑菌圈不正常的现象。因此，在清洗时要尤为注意多用流水冲洗。160℃干热灭菌2h后备用。 2. 配制试验所需的样品、标准品、缓冲液与培养基
1208 肝素生物测定法
本法系比较肝素标准品（Ｓ）与供试品（Ｔ）延长新鲜兔血或兔、猪血浆凝 结时间的作用，以测定供试品的效价。
标准品溶液的制备 精密称取肝素标准品适量，按标示效价加灭菌注射用水 溶解使成每 1ml 中含 100 单位的溶液，分装于适宜的容器内，4～8℃贮存，经验 证保持活性符合要求的条件下，可在 3 个月内使用。
标准品稀释液的制备 试验当日，精密量取标准品溶液，按高、中、低剂量 组（dS3、dS2、dS1）用 0.9％氯化钠注射液配制成 3 种浓度的稀释液，相邻两浓度 的比值（r）应相等；调节剂量使低剂量组各管的平均凝结时间较不加肝素对照 管明显延长，一般以大于 1.5 倍空白血浆的凝固时间为宜。高剂量组各管的平均 凝结时间，用兔全血法者，以不超过 60 分钟为宜，其稀释液一般可制成每 1ml 中含肝素 2~5 单位，r 为 1：0.7 左右；用血浆复钙法者，以不超过 30 分钟为宜， 其稀释液一般可制成每 1ml 中含肝素 0.5~1.5 单位，r 为 1：0.85 左右；用活化 部分凝血活酶时间测定法（APTT 法）者，一般以不超过 90 秒为宜，其稀释液浓 度一般可制成每 1ml 含肝素 0.4～1.7 单位，r 为 1:0.85 左右，可根据实验情况 调整。
供试品溶液与稀释液的制备 按供试品的标示量或估计效价（AT），照标准 品溶液与稀释液的制备法制成高、中、低（dT3、dT2、dT1）3 种浓度的稀释液。相 邻两浓度之比值（r）应与标准品相等，供试品与标准品各剂量组的凝结时间应 相近。
血浆的制备 迅速收集兔或猪血至预先放有 109mmol/L 枸橼酸钠溶液的容 器中，枸橼酸钠溶液与血液容积之比为 1：9，边收集边轻轻振摇，混匀，室温 下 1500×g 离心不少于 15 分钟（g 为重力常数）。立即吸出血浆，并分成若干份 分装于适宜容器内，低温冻结贮存。临用时置 37±0.5℃水浴中融化，用两层纱 布或快速滤纸过滤，使用过程中在 4～8℃放置。血浆复钙法可使用兔或猪血浆； APTT 法使用兔血浆。
测定法 （1）兔全血法 取管径均匀（0.8cm×3.8cm 或 1.0cm×7.5cm）、清洁干燥的 小试管若干支，每管加入一种浓度的标准品或供试品稀释液 0.1ml，每种浓度不
肝素钠 Gansuna Heparin Sodium ■本品系自猪或牛的肠黏膜中提取的硫酸氨基葡聚糖的钠盐，属黏多糖类物质，是由不同分子量的糖链组成的混合物，由α-D-氨基葡萄糖（N-硫酸化，O-硫酸化，或N-乙酰化）和O-硫酸化糖醛酸（α-L-艾杜糖醛酸或β-D葡萄糖醛酸）交替连接形成聚合物，具有延长血凝时间的作用。按干燥品计算，每1mg中抗Ⅱa因子效价不得少于180 IU，抗Xa因子效价与抗IIa因子效价比为0.9～1.1。■[修订] ■核酸取本品，加水溶解并稀释制成每1ml中含4mg的溶液，照紫外-可见分光光度法（附录ⅣA）测定，在260nm的波长处，吸光度不得大于0.10。■[增订] ■蛋白质取本品适量，精密称定，加水溶解并稀释制成每1ml中约含30mg的溶液，作为供试品溶液；另取牛血清白蛋白对照品适量，分别加水制成每1ml中各含0、10μg、20μg、30μg、40μg与50μg的溶液，作为对照品溶液，照蛋白质含量测定法（附录ⅦM 第二法）测定。按干燥品计，含蛋白质不得过0.5%。■[增订] ■有关物质取本品适量，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每1ml中约含100mg的溶液，涡旋混合至完全溶解，取0.5ml，加入1 mol/L盐酸溶液0.25ml和25%亚硝酸钠溶液0.05ml，振摇混匀，反应40分钟，加入1mol/L氢氧化钠溶液0.2ml终止反应，作为供试品
溶液；取肝素对照品250mg，加水2ml，涡旋混匀至完全溶解，作为对照品溶液（1）；取对照品溶液（1）1.2ml，加2%硫酸皮肤素对照品0.15ml与2%多硫酸软骨素对照品0.15ml，作为对照品溶液（2）；取对照品溶液（2）0.1ml，加水稀释至1ml，作为对照品溶液（3）；取对照品溶液（1）0.4ml，加水0.1ml，混匀，加1 mol/L盐酸溶液0.25ml和25%亚硝酸钠溶液0.05ml，振摇混匀，反应40分钟，加1mol/L氢氧化钠溶液0.2ml终止反应，作为对照品溶液（4）；取对照品溶液（2）0.5ml，加1 mol/L盐酸溶液0.25ml和25%亚硝酸钠溶液0.05ml，振摇混匀，反应40分钟，加1mol/L氢氧化钠溶液0.2ml终止反应，作为对照品溶液（5）。照高效液相色谱法（附录V D）测定，以烷醇季铵为功能基的乙基乙烯基苯-二乙烯基苯聚合物树脂为填充剂（如AS11-HC阴离子交换柱，2mm×250mm,与AG11-HC保护柱，2mm ，用 ] μg 均应符合规定。 干燥失重取本品，置五氧化二磷干燥器内，在60℃减压干燥至恒重，减失重量不得过5.0%（附录ⅧL）。 炽灼残渣取本品0.50g，依法检查（附录ⅧN），遗留残渣应为28.0%～41.0%。 钠精密称取本品约50mg，置100ml量瓶中，加0.1ml/L盐酸溶液（每1ml中含氯化铯1.27mg）溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。精密量取钠单元素标准溶液（每1ml中含Na+200μg），用上述盐酸溶液分别定量稀释制成每1ml中含Na+25μg，50μg，75μg 的对照品溶液。取对照品溶液与供试品溶液，照原子吸收分光光度法（附录IV D第一法），
肝素市场分析 2010年我国肝素及其盐的出口沿袭了2009年的强劲增长势头,再度走出火爆行情,出口量价同创历史新高:出口量为114.4吨,同比增长2.42%;出口金额达11.92亿美元,同比增长71.68%;出口平均价格10475.11美元/公斤,同比增长67.63%。肝素及其盐出口额已超过VC,跃居为我国第一大西药重点出口商品。 2010年,我国肝素及其盐共出口到51个国家和地区,出口集中度很高,前五大出口市场为法国、美国、德国、奥地利和意大利,所占出口比重累计高达86.32%。不同市场出口情况差异较大,如对法出口量价同比大幅增长,因为赛诺菲-安万特继续加大了采购订单;但是对美国、意大利的出口量同比则明显萎缩,可能是由于肝素价格过高,影响了客户采购积极性。 肝素作为抗凝血剂，于1935年正式应用于临床治疗，至今已有70余年历史。至今，它仍是世界上最有效和临床用量最大的抗凝血药物，已被收入世界各主要国家《药典》。 肝素首先从新鲜的健康生猪的小肠粘膜中提取并制成肝素粗品，肝素粗品中含有病毒及蛋白质，不能直接应用于临床治疗，需进一步提纯以制成肝素原料药，通常以钠盐或钙盐的形式存在，称为肝素钠（Heparin Sodium）或肝素钙，在使用中尤以肝素钠为主。肝素原料药主要的质量指标为效价，含义为每毫克（mg）肝素原料药含有的肝素活性单位（IU）。肝素原料药每毫克含有的活性单位（IU）越多，表示其品质越好、抗凝血的生物活性越强。各国《药典》均对肝素原料药规定了最低效价标准，以规范和控制肝素原料药的质量。一般而言，肝素原料药的效价为150－200IU/mg。 肝素原料药可直接被用于制成标准肝素制剂，或进一步加工制成低分子肝素原料药，再制成低分子肝素制剂。标准肝素制剂和低分子肝素制剂可直接应用于临床治疗。肝素类产品主要包括：肝素粗品、肝素原料药、标准肝素制剂、低分子肝素原料药以及低分子肝素制剂。其中肝素粗品是肝素原料药的原料，肝素原料药是标准肝素制剂和低分子肝素原料药的原料，低分子肝素原料药是低分子肝素制剂的原料。
管碟法测定抗生素效价中的影响因素分析及对策摘要: 目的提高管碟法测定抗生素效价的准确性。方法按操作步骤逐步分析，并提出合理的解决方案。结果减少外界因素与人为因素给试验带来的误差。结论可以提高测定结果的准确性。 Abstract: OBJECTIVE To improve the veracity of antibiotics titer evaluation by cylinder-plate method. METHOD According to the process of test, analyze the test and offer a proper measure to avoid influencing factors. RESULTS Reduce the errors caused by environmental and artificial factors. CONCLUSION This can improve the veracity of test results. Key words: cylinder-plate method; antibiotics; titer; bacterial inhibition ring 管碟法是国内外常用的抗生素微生物检定法[1]，利用管碟法测定抗生素效价，具有准确、直观、重复性好等优点，因而被广泛采用。但是整个试验过程中影响结果的因素很多，任何一个环节操作不当或者忽略就会造成很大误差，导致整组试验失败。根据实际操作中的积累经验，对管碟法中影响试验结果的因素进行如下分析及提出解决的方法。 1. 实验器材的准备 1.1 实验器材的选择 试验应该选择底面平整的玻璃双碟，避免底面的凹凸影响琼脂层的厚度。可将双碟放置在水平台上，下垫一层白纸，加入3mL水，再滴加蓝墨水，根据蓝色是否深浅一致来判断双碟底面平整程度。小钢管则应该选择加工精细的同一批产品，这样才能保证管壁厚薄与重量均匀一致，使得小钢管在培养基中下陷相同的深度，抗生素溶液扩散均匀有可比性。如果小钢管两端不够平，就应予剔除，否则会使抗生素溶液漏出，破坏均匀扩散现象。 1.2 实验器材的清洗
国家物价局财政部 关于发布中央管理的卫生系统行政事业性收费项目及标准 的通知 价费字[1992]314号 卫生部： 根据中发［1990］16号《中共中央、国务院关于坚决制止乱收费、乱罚款和各种摊派的决定》的精神，对中央管理的卫生系统行政事业性收费进行了重新审定，经全国治理“三乱”领导小组同意，就有关规定通知如下： 一、卫生监督防疫收费。卫生监督防疫（包括食品卫生监督、公共场所卫生监督、劳动卫生监督、学校卫生监督、放射性同位素与射线装置防护监督、化妆品卫生监督和传染病防治等）收费按《卫生监督防疫收费管理办法》（附件一）执行。 二、药品审批监督检验费 （一）证件工本费根据国务院有关规定，卫生部印制、颁发《药品生产企业许可证》、《药品经营企业许可证》、《制剂许可证》，每证可收取工本费3元；考虑到证件发放过程中的损耗及有关费用支出，经省级物价、财政部门批准，省级卫生管理部门发放过程中可以适当提高收费标准，但最高不得超过10元。 （二）新药审批费新药审批（包括新药临床研究审批、生产审批和试生产转正式生产审批）收费按《新药审批收费标准》（附件二）执行。 （三）已生产药品注册登记费生产企业：每个品种20元； 医院制剂：每个品种2元。 （四）首次进口药品审批费每个品种50元。 （五）国外药品在中国注册费每种500至1000美元。 （六）麻醉药品、精神药物进出口准许证费每份100元。
（七）特殊化学品出口准许证费签发醋酸酐、乙醚、三氯甲烷三种化学品出口准许证，每份100元。 （八）药品检验费法定药品检验实行抽验制度，包括对药品生产企业、经营企业和医疗单位药品的抽验。药品的抽验由受检单位交纳检验费，抽验无论合格与否，均按《药品检验收费标准》（附件三）执行。 （九）新药技术复核审查检验费一类：600至800元；二类：500至700元；三类：300至500元；四、五类：200至300元。 （十）进口药品检验费按《进口药品检验收费标准》（附件四）执行。 （十一）出口药品检验费。出口药品检验按药品检验项目收费标准执行。 （十二）申请生产《中华人民共和国药典》、《卫生部药品标准》收载品种的审批费，每个品种250元。 生产省、自治区、直辖市药品标准收载品种的审批费，由省级物价部门会同财政部门制定。 三、新生物制品审批检验费。 （一）新生物制品审批费。申请新生物制品审批（包括申请人体观察审批、申请生产审批、试生产转正式生产审批）的单位，在提交申报资料的同时，应向卫生部药品审评委员会办公室交纳新生物制品审批费，收费标准见附件五。 （二）新生物制品检验费。研制单位在申请新生物制品人体观察或生产时，应向中国药品生产制品检定所交纳检验费。收费标准按附件六执行。 四、生物制品检验费按《生物制品检验收费标准》（附件七）执行。 生物制品检验机构利用受检单位的仪器设备，并由受检单位提供水、电、材料进行检验时，不得收取检验费，只收取每人每天20元劳务费；利用自带仪器设备或部分使用受检单位仪器设备的，在检验成本核算时应扣除受检单位所提供的仪器设备和水电材料费用，远程（单程200公里以外）抽样或检验的差旅费另行计收，但同一地区多家抽样或检验的差旅费应分摊，不得重复计算；远程样品的运输费，由被检单位支付。
肝素钠：是一种含有硫酸基的酸性粘多糖类天然抗凝血物质。肝素是分子量大小各异的一簇酸性粘多糖混合物的统称，具有由六糖或八糖重复单位构成的线形链状分子，分子量在3,000到30,000Da之间，平均分子量15,000Da左右。结构式：主要由两个结构单位构成：结构单位Ⅰ是： GlcNHR-6-OSO3-GlcA-GlcNSO3-3,6-二- OSO3-IdoA-2-OSO3- GlcNSO3-6- OSO3 结构单位Ⅱ是：IdoA-2-OSO3-GlcNSO3-6-OSO3 肝素广泛存在于哺乳动物肝、肺、肠黏膜中，多与蛋白质结合成复合体存在·。酶解蛋白可分离肝素，肝素是含硫酸、氨基、醛糖酸的粘多糖。在pH8-9时，带负电荷，可与阴离子交换剂进行离子交换，进行粗分离，多糖液在高浓度乙醇中沉淀进行精纯。 肝素在组织内和其它粘多糖一起与蛋白质结合成复合物，因此肝素制备过程包括肝素蛋白质复合物的提取，解离和肝素的分离纯化两个步骤。 肝素分子中含有硫酸基与羧基，呈强酸性，为聚阴离子，能与阳离子反应成盐。这些阳离子包括金属阳离子：Ca2+,Na+,K+,有机碱的长链吡啶化合物，如十六烷基氯化吡啶（CPC）、番木鳖碱、碱性染料-天青A，阳离子表面活性剂（长链季铵盐）如十六烷基三甲基溴化铵；阳离子交换剂和带正电的蛋白质如鱼精0蛋白等。 肝素结构中的N-硫酸基与抗凝血作用密切相关，如遭到破坏其抗凝血活性则降低。N-硫酸基对酸水解敏感，在碱性条件下相当稳定。肝素分子中游离羟基被酯化，如硫酸化，抗凝活性也下降，乙酰化不影响其抗凝活性。 肝素钠为白色或类白色粉末，无臭无味，有引湿性，易溶于水，不溶于乙醇、丙酮、二氧六环等有机溶剂。 碱性不足造成提取液偏酸，则在高温的情况下，肝素迅速破坏，升温过急会使蛋白质早凝固，影响肝素的分解和溶出。利用蛋白水解酶专一水解蛋白的特点，并结合调酸除蛋白和氧化除蛋白方法,采用酶解除蛋白法，该法能在除去蛋白质时较少影响肝素总效价。在调酸除蛋白过程中，为防止肝素失活,加入亚硫酸氢钠作保护剂。在低温下离心脱除蛋白。
肝素钠含量检验操作规程 1范围 1.1适用于肝素钠生产车间过程控制中各控制点肝素钠含量的检测。 2定义 2.1肝素钠化验指对肝素效价的检测过程。 3参考 《美国药典》 4职责 4.1相应职责由车间化验员承担。 5操作程序 5.1仪器、用具与试剂 5.1.1恒温水浴锅 5.1.2试管架 5.1.310ml具塞试管 5.1.4100ul或250ul微量进样器 5.1.510ml刻度吸管 5.1.62ml刻度吸管 5.1.71ml可调式加液器 5.1.820ml带塞样瓶 5.1.90.9%氯化钠溶液 5.1.100.25%氯化钙溶液 5.1.11经过标定的绵羊血浆 5.1.128.0u/ml肝素钠标准溶液 5.1.13计时器 5.2操作步骤 5.2.1取样 5.2.1.1根据车间生产实际，一般酶解液、洗涤液、沉淀废液取样量为8±2ml，吸附废液为20±2ml。特殊情况可适当多取，取样要做到均匀有代表性。 5.2.2样品检测 5.2.2.1根据实际情况将试管摆放在试管架上。 5.2.2.2用100ul微量进样器取8.0u/ml肝素标准溶液，加标准品之前，用标准液冲洗进样器两次，根据标定的血浆灵敏度n，分别按n-20ul、n-10ul、n ul、n+10ul、n+20ul的量加入一排5支10ml具塞试管中，作为标准溶液的浓度梯度。 5.2.2.3.1酶解液、洗涤液、沉淀废液进样：用同一个进样器取供试液，取之前先用供试液将进样器冲洗三次，然后再按n-20ul、n-10ul、n ul、n+10ul、n+20ul的量加入另一排5支10ml具塞试管中，作为供试液浓度梯度。 5.2.2.3.2吸附废液进样：用2ml刻度吸管取供试液，取之前先用供试液将刻度吸管冲洗三次，然后再按600ul、800ul、1000ul、1200ul、1400ul进样量
孕妇母体IgG抗体效价检测操作规程 【原理】 新生儿溶血病HDN发生的主要原因在于母子血型不合，血型系统最主要的类型为ABO血型系统，本实验采用微柱凝胶检测孕妇血清中的抗A（B）IgG抗体效价。 【试剂】 6%牛血清白蛋白；生理盐水；凝胶卡 【标本采集】 孕妇静脉血3毫升，肝素钠抗凝，孕妇爱人静脉血3毫升，肝素钠抗凝。将孕妇标本制作成血清标本，孕妇爱人标本制成0.5%红细胞标本（用生理盐水洗涤后配制）。 【操作步骤】 1．取孕妇血清标本50微升加入等体积的牛血清白蛋白，37度水浴温育30～60分钟；2．将血清倍比稀释成9管，依次为1：4、8、16、32、64、128、512、1024、2048管；3．将卡作好标记，在所有孔中加入经处理好的孕妇血清标本50ul； 4．然后在所有孔中加入50ul的孕妇爱人0.5%红细胞标本； 5．37度孵育15分钟（专用孵育箱）； 6．专用离心机离心5分钟；900rpm2分钟，1500rpm3分钟； 7．取出判定结果； 【结果判定】 阳性结果：红细胞凝集块位于凝胶表面或凝胶中； 阴性结果：红细胞完全沉降到胶底部，在凝胶管底部形成红细胞扣。 【结果报告】 产生1+阳性凝集的最高稀释度，其倒数即为效价。 【注意事项】 1．红细胞标本一定不能被细菌污染，否则出现假阳性反应，尽可能应用当日采集的新鲜血做本实验。如不得不用过夜血或陈旧血，则必须首先用该标本做阴性对照试验，以确定该标本是否可以做本试验。 2．血清标本：血清标本必须充分去除纤维蛋白，否则标本中纤维蛋白在微柱凝胶中析出，阻碍红细胞沉淀，呈假阳性反应。 3．如在微柱凝胶中出现溶血现象，强烈提示为红细胞抗原抗体阳性反应，也不排除其他原因所臻溶血，故对此标本一定认真分析，并向上级主管技术人员报告并讨论。 4．本凝胶卡价格不菲，成本较高，请您节约使用。 【临床意义】 有人观察1632例孕妇血清中IgG抗A（B）≥1：64者249例；ABO-HDN发生率随IgG抗A（B）效价升高而上升；HDN与妊娠史的频率有关，随着年龄上升，孕妇个体IgG抗A（B）抗体效价也随之上升。夫妇间ABO血型不合者应及时检查产前血型抗体水平，用于预防不良妊娠的发生；IgG抗A（B）效价的高低与HDN的发病率成正比；孕妇血清IgG抗A（B）效价≥1：64需定期检测抗体效价水平及时用药降低抗体效价，以预防新生儿溶血病的发生。
一、肝素分类 肝素是哺乳动物体内含的一种粘多糖，它与蛋白质结合在一起存在于肠粘膜、肺、肝等器官内，肝素与蛋白质分离提取后，具有抗凝血、抗血栓、降血脂等多种生理活性，是防止动脉粥样硬化，心脑血管疾病的显效药物。 (1) 普通(标准)肝素是由猪或羊黏膜提取，平均分子量为15000，相当稳定。 (2) 通常把分子量小于6000的称为低分子肝素。低分子肝素与普通肝素比较，其半衰期较长，抗血栓效果好，而抗凝出血倾向较弱，有取代普通肝素的趋势。近年临床常用的有：达肝素钠(法安明)、依诺肝素钠(克赛)、低分子肝素钙(速避凝、那屈肝素钙)。 (3) 目前正在深入研究的肝素制剂中还有低抗凝活性肝素、改构型肝素、类肝素等, 这些药物特点是具有低抗凝、高抗栓、作用时间长和出血作用少的优点，很有开发前途。 二、肝素钠简介 拼音名：Gansuna 英文名：Heparin Sodium 本品系自猪的肠黏膜中提取的硫酸氨基葡萄糖的钠盐，属粘多糖类物质，通过激活抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)而发挥抗凝作用。它对凝血过程的三个阶段均有影响，在体内外均有抗凝作用，可延长凝血时间、凝血酶原时间和凝血酶时间。口服不吸收，皮下、肌肉或静脉给药均吸收良好。
三、肝素钠检测（药典版） 拼音名：Gansuna 英文名：Heparin Sodium 本品系自猪或牛的肠黏膜中提取的硫酸氨基葡聚糖的钠盐，属黏多糖类物质，具有延长血凝时间的作用。按干燥品计算，每1mg 的效价不得少于150 单位。 【性状】本品为白色或类白色的粉末；有引湿性。本品在水中易溶。【比旋度】取本品，精密称定，加水溶解并稀释制成每1ml 中含40mg 的溶液，依法测定（附录Ⅵ E），比旋度应不小于＋35°。 【鉴别】 (1) 取本品与肝素标准品，分别加水制成每1ml 中含2.5mg 的溶液，照电泳法（附录Ⅴ F第三法）试验，供试品和标准品所显斑点的迁移距离之比应为0.9 ～1.1 。 (2) 本品的水溶液显钠盐的鉴别反应（附录Ⅲ）。 【检查】酸碱度取本品0.10g ，加水10ml溶解后，依法测定（附录Ⅵ H），pH 值应为5.0 ～7.5 。 溶液的澄清度与颜色取本品0.50g ，加水10ml溶解后，溶液应澄清无色；如显浑浊，照分光光度法（附录Ⅳ A），在640nm 的波长处测定，吸收度不得大于 0.018；如显色，与黄色1 号标准比色液（附录Ⅸ A 第一法）比较，不得更深。 吸收度取本品，加水制成每1ml 中含4mg 的溶液，照分光光度法（附录Ⅳ A）测定，在260nm 的波长处，其吸收度不得大于0.20；在280nm 的波长处，其吸收度不得大于0.15。 黏度精密称取本品（按实际测得的单位计算相当于40万单位），加水
链霉素效价测定方案 试验目的： 1、设计链霉素效价测定方案 2、 熟悉并掌握抗生素效价测定方法 试验器材： 双碟 陶瓦盖 钢管、钢管放置器、玻璃容器 、毛细滴管 、灭菌刻度吸管 、称量瓶 、恒温培养箱 、万分之一天平、干燥箱、恒温水浴箱 、显微镜、抑菌圈测量仪或游标卡尺 、超净工作台 、冰箱、酒精灯、接种环 供试品称量量：50mg 缓冲液： 磷酸盐缓冲液（ph7.8）取磷酸氢二钾5.59g 与磷酸氢二钾0.41g,加水使成1000ml,摇匀滤过。121℃蒸汽灭菌30min 备用。 培养基制备数量 营养琼脂培养基：100ml,作为菌种活化用。 双碟数量：8套（供试品效价测定）+8套（预试验）。共16副 小钢管：32个（供试品效价测定）+32个（预试验），共64个，每个双碟中放置4个。 1个 供试品效价测定 4个 用于预试验 5个每瓶100ml 1个 用于预试验 1个供试品效价测定 2个 每瓶250ml 7个三角瓶
操作步骤 菌种 1）枯燥芽孢杆菌【Bacillus subtilis CMCC(B) 63 501】 2）枯燥芽孢杆菌菌悬液的制备 菌液制备 取枯燥芽孢杆菌的营养琼脂斜面培养物，加灭菌水2ml冲下菌苔，制成悬液，用吸管将此悬液接种于营养琼脂培养基上，均匀摊布，在37℃培养7天，取菌苔少许涂片，用革兰染色镜检，应有芽孢85%以上。用灭菌水将芽孢洗下，制成芽孢悬液，合并至灭菌大试管内，65℃水浴内加热30min，将菌体杀死，待冷后放冰箱储藏为浓菌液。 供试品溶液的制备 供试品估计效价1000000U/g.精密称取样品50.0mg，加水50ml，稀释制成1000U/ml溶液，吸取2ml加入100ml容量瓶中，加pH7.8磷酸盐缓冲液稀释至刻度，制成20U/ml溶液，吸取7ml加入100ml 容量瓶中，制成1.4U/ml溶液, 吸取25ml加入50ml容量瓶中，制成0.7U/ml溶液,作为滴碟用供试品及标准品溶液。 培养基Ⅰ 胨5g 牛肉浸出粉3g 磷酸氢二钾3g 琼脂20g 水1000ml 除琼脂外，混合上述成分，调节ph值使比最总的ph值略高0.2，加入琼脂，加热溶化后滤过，调ph值使灭菌后为7.8～8.0，在115℃灭菌30min。
抗生素的生物效价测定法 测定抗生素效价的方法比较多，一般可以分为物理学方法、化学方法、生物学方法、和两种方法配合等四大类，可根据具体情况选择使用。 生物学方法以抗生素的杀菌力作为衡量效价的标准，其原理恰好和临床应用于的要求一致这是它的优点；又其灵敏度较高，需用检品的量较小，也是其它方法所不及的。 抗生素的生物效价测定法，常用的有稀释法、比浊法和扩散法（或称渗透法）。 稀释法这一方法是用培养基将检品抗生素稀释到各种浓度，并依次分装到一系列的容器内，再加入等量“试验菌种”菌种菌液，并放在37 ℃保温箱内培养一定时间，观察何种稀释度适能抑制细菌的生长，该稀释度即为测定终点（或以细菌生长所引起的PH改变及溶血现象等生化反应作为测定终点），再与同样处理的标准抗生素的终点作比较，即可求得检品的效价。这种方法可以使用液体培养基，也可以使用固体培养基。所用的材料及培养基都必须严格无菌，并要注意无菌操作。由于测定终点是以有无细菌生长来判断的，因此所得结果公是一个范围。 比浊法原理及操作大致与稀释法相同。比浊法也是将不同量的检品及标准品分别加入培养基中，观察其对“试验菌种”的效应——即细菌生长所引起的混浊。这一方法和稀释法的区别有二：a.比浊法的稀释间隔的密度比较近，准确度高一些；b.比浊法不以细菌有无生长的区分为终点，而是将标准品浓度和细菌生长所引起的混浊度求得一定的比例，再由检品的细菌生长混浊度推算检品的效价。这一方法易受杂质的影响，并且不适用于有色或混浊的检品。 扩散法使用固体培养基，在培养基凝固以前将“试验菌种”混合进去，在这样备妥的培养表面，可以用种种设计使检品液或含有抗生素的物质与有菌种的培养基接触。经过培育后，由于抗生素向培养基中扩散，凡抑菌浓度所能达到之下细菌不能生长因而形成透明的抑菌范围，此种范围一般都呈圆形，称为“抑菌圈”。扩散法有几种，或中一种叫管碟扩散法（筒称管碟法）为国际上常用的方法，在我国也作为法定的抗生素检定法。 下面我们将详细地讨论管碟法的原理和实验方法。 一、管碟法测定的设计原理及计算方法 管碟法所用的管子系用瓷、铝或玻璃制成，较好的用不锈钢制成，它是内径为6+0.1毫米、外径为8+0.1毫米、高10+0.1毫米的圆筒形管子，管子的重量尽可能相等。 摊布固体培养基的容器可用双碟，亦可用平底下班盘。管子放在混有菌种的固体培养基上时，可用人工放臵，也可用特定的管子放臵器放臵。
标准血清效价测定 （一）凝集效价的测定 1．取小试管20 支，分两排放置于试管架上，前排标明 A ，后排标明 B ，再将各排由左而右注明号码。 2．各管均加生理盐水0．2 ml 。 3．吸取A 型被测血清0．2 ml ，加入A 排第1 管中，混匀，从第一管 中吸出0．2 ml 加入第2 管中，依次稀释至第10 管，从第10 管吸出 的0．2ml 弃掉，用同样的方法取B 型被测血清在B 排中稀释，最后两 排管的血清稀释倍数分别为1∶2 、1∶4 、1∶8 、1∶16 、1∶32 、1∶ 64 、1∶128 、1∶256 、1∶512 、1∶1024 。 4．A 排管各加B 型2 ％红细胞生理盐水悬液0．2ml；B 排管各加A 型 2 ％红细胞生理盐水悬液0．2ml，混匀。 5．放置室温（18 ～22 ℃）1 ～2 小时观察结果，以稀释倍数最高而 又显凝集者为其凝集效价。上述操作过程见下表。 表 A 型标准血清(抗B)效价测定
表 B 型标准血清(抗A)凝集效价测定 如被测血清在第七管仍显凝集，则其凝集效价为1∶128 。如第八管仍显凝集则其凝集效价为1∶256 。O 型标准血清抗A 、抗B 的凝集效价测定，可参照上述 （二）标准血清的质量要求 A 型（抗B）效价应在1∶64 以上， B 型（抗A）效价应在1∶128 以上，如果低于上述标准，不能使用。并要检查效价低的原因，重新制备，如果效价太高，可按效价规定加适量等渗盐水稀释。且不含其它血型抗体，不形成缗钱状的假凝集，冷凝集素效价＜1∶4 。 （三）亲和力的测定 所谓亲和力是指标准血清与相对应的红细胞混合后出现的凝集速度及凝集块的大小而言。测定方法如下： 取待测血清0．1ml 放于玻片或瓷板上，取对应的10 ％红细胞生理盐水悬液0．05 ml ，加于血清中混匀并涂成直径约1cm 的圆形，立即记时。观察出现凝集的时间。并继续转动玻片或瓷板，至3 分钟时观察凝集块的大小。标准血清亲和力的质量要求，在15 ～30 秒以内应出现凝集，3 分钟时凝集块应在1m- m2 以上，标准血清中不应含脂肪（脂肪可使效价迅速降低），不可污染细菌。
肝素钠效价方法 2. 1 羊血浆的制备 取冷冻贮藏的绵羊血浆,置于不超过37 ℃的水浴融化,以脱脂棉过滤至清洁干燥的玻瓶中备用。 取血浆1 mL 置试管内,加入0. 25 %氯化钙溶液0. 8mL ,混匀,在(37 ±1) ℃水浴中保温,若在5 min 内凝结,则血浆可用于实验。 2. 2 标准品溶液的制备 取肝素钠标准品(204 u/ mL) 适量,用煮沸放冷的纯化水稀释至100 u/ mL ,置4 ℃冷藏备用。临用前用生理盐水精确稀释至7 u/ mL 。 2. 3 供试品溶液的制备 称取肝素钠原料或量取肝素钠注射液适量,按估计效价用生理盐水稀释至与标准溶液相当的效价浓度。 2. 4 血浆半凝固度剂量(V1/ 2) 的测定 取具塞试管3 支,分别于各试管中加入梯度剂量(170 ,200 ,230μL) 的标准溶液,再按顺序准确加入血浆1. 0 mL ,0. 25 %氯化钙溶液0. 8 mL ,立即加塞,倒置混合3 次,置(37 ±0. 5) ℃恒温水浴中保温,准确记录1 min ,判断每管凝结程度,结果判定V1/ 2在200μL 左右。以此为中点,左右各以10μL 为一级,同法操作,测定V1/ 2为190μL 。
2. 5 肝素钠及其制剂的效价测定 取具塞试管若干支,分别于各试管中加入梯度剂量的标准溶液和供试品溶液,以190μL 为中点,每隔10μL 为一级,同2. 3 项下方法操作,记录每管凝结程度,按式(1) 计算。 供试品的效价单位= V std ×C std ×V V sam ×W sam (1) 式中:V std. 标准品1/ 2 凝固度的肝素加入体积(μL) ;C std. 标准品溶液的浓度(u/ mL) ; V sam. 供试品1/ 2 凝固度时的加入体积(μL) ;W sam. 供试品称取的重量(mg) ; V. 测定样 品的总体积(mL)
肝素钠检验项目附细则 一、效价测定 操作步骤： 1. 标准品制备：精密称量肝素钠标 准品数量(mg)×197u/mg=总单位 数×0.93=美国羊血浆法总单位 数（uspu ）÷8 uspu/ml=需要实际 加入的蒸馏水毫升数。精确加入 蒸馏水。分装封口备用。 2. 效价测定： 2.1 样品的制备：精确称量待测 肝素粗品40~50mg 放入容量瓶中，再向其中加入1mg:1ml 比例的生理盐水，至样品全部溶解。吸取0.5ml 上述溶液至西林瓶中，再按照公式：估效价÷16-0.5计算出生理盐水量，加入西林瓶中。 2.2 样品的测定：依据估计血浆标准凝固点±10ul 、±20ul 分别向试管中加入标准品和待测样品，再向各试管中加入1ml 血浆和0.8ml 的氯化钙生理盐水。充分混匀后置37℃水 浴锅中孵育1小时。结果按照公式计算：实际效价=凝固点样品2 1V 凝固点21V 标准品 ×估效价 结果要求： 所需主要仪器及价格：电子天平 单价：1000（物理）~2000（电子）rmb 水浴锅 单价：800rmb 二、比旋度测定 当平面偏振光通过含有某些光学活性物质（如具有不对 称碳原子的化合物）的液体或溶液时，能引起旋光现象，使 偏振光的振动平面向左或向右旋转。偏振光旋转的度数称为 旋光度。旋光度有右旋、左旋之分，偏振光向右旋转（顺时 针方向）称为“右旋”，用符号“+”表示；偏振光向左旋转（逆 时针方向）称为“左旋”，用符号“-”表示。偏振光透过长1dm ， 且每1ml 中含有旋光性物质1g 的溶液，在一定波长与温度 下，测得的旋光度称为比旋度。比旋度是旋光物质的重要物理常数，可以用来区别药物或检查药物的纯杂程度，也可用来测定含量。 物质的旋光度不仅与其化学结构有关，而且还和测定时溶液的浓度、光路长度以及测定时的温度和偏振光的波长有关。 旋光度测定法的测定方法主要包括以下几个方面：
肝素钠的检测方法 德晟肝素钠检测方法如下： 一．效价F：（标准≥150IU/mg），环境温度要求20~30℃。 F=标品微升数*预估效价/样品微升数 1.1试剂： 1羊血浆（冷冻保存，使用时室温解冻，过滤） 28IU/mg肝素钠标准品 30.9%生理羊水：9g氯化钠（精确至0.01g）溶解于100ml去离子水中，并定容至1000ml，待用。 40.25%氯化钙溶液：用0.9%生理盐水配制，取1.25gCaCl2（精确至0.0001g）溶于100ml生理盐水中，溶解并定容至500ml，待用。 58%柠檬酸钠溶液：用0.9%生理盐水配制，取20g柠檬酸钠（精确至0.0001g）溶于100ml生理盐水中，溶解并定容至250ml，待用。 1.2测定8%柠檬酸钠溶液用量： 取3支试管分1、2、3，分别加入标准品溶液110ul，再依次加入8%柠檬酸钠溶液10ul、20ul、30ul，→分别加入0.25%氯化钙溶液0.8ml，加入过滤好的羊血浆1ml，摇匀，置于37℃水浴中10min，观察凝固情况，取半凝固管的柠檬酸钠量xul作为后续的加量标准。
2.1待测品配制： M=20/样品预估效价（g） 称取Mg待测样品（精确至0.0001g），溶解于生理盐水中，并定容至100ml，取溶液2ml溶液溶解定容至50ml，取5ml样品溶液于试管中剩余样液冷藏保存。 2.2测定： 标准管：取10支试管分别加标品溶液100ul、110ul、120ul、……190ul，加入8%柠檬酸钠溶液xul，0.25%氯化钙溶液0.8ml，过滤好的羊血浆1ml，37°C水浴1h，记录半凝固点。 待测管：取10支试管分别加样品溶液100ul、110ul、120ul、……190ul，加入8%柠檬酸钠溶液xul，0.25%氯化钙溶液0.8ml，过滤好的羊血浆1ml，37°C水浴1h，记录半凝固点。 二．PH值 精确称取0.4g样品（精确至0.01g）溶于40ml去离子水中，测定其PH值，记录室温，湿度。 三．吸光度 精确称取0.2g样品(精确至0.01g)溶于50ml去离子水中，分别测定在260nm和280nm 的吸光度。 四．澄清度 称取1.00g样品溶于25ml去离子水中，测定640nm的吸光度。 五．比旋度 称取1.00g样品溶于25ml去离子水中，旋光仪测定其比旋度，取其三次均值。 注意：检测前所有试验仪器均用生理盐水清洗二至三遍