大肠杆菌生长曲线的测定
蔡小鹏
（南京工业大学生物与制药工程学院制药1104班）【摘要】通过比浊法对大肠杆菌生长曲线进行测定。因为细菌悬液的浓度与光密度成正比，所以可利用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌悬液的浓度。将培养12h的大肠杆菌进行发酵罐培养，在不同时间段取样，用分光光度计对大肠杆菌的生长曲线进行测定，测定结果显示：大肠杆菌生长曲线基本符合迟缓期、对数生长期、稳定生长期和衰亡期4个时期。
【关键字】比浊法；发酵罐培养；生长曲线
大肠杆菌是人和动物肠道中最著名的一种细菌，主要寄生于大肠内，约占肠道菌中的1%。是一种两端钝圆、能运动、无芽孢的革兰氏阴性短杆菌。除某些菌型能引起腹泻外，一般不致病，能合成维生素B和K，对人体有益。大肠杆菌是肠杆菌科的一员，经常作为细菌的模式生物广泛用于科学研究。
1实验材料与方法
1.1实验材料
1.1.1菌种
大肠杆菌
1.1.2培养基
1.1.
2.1种子培养基
蛋白胨1%，酵母粉0.5%，Nacl0.8%，硫酸卡那霉素800μL/L（灭菌后同冻存管一起加入摇瓶）
在烧杯中加入1.5g/150mL蛋白胨、0.75g/150mL酵母粉、1.2g/mLNacl,再加入适量（少于150ml）的蒸馏水，搅拌使之充分溶解，再补充水定容至150ml，保持自然PH。平均分装3瓶后，121℃灭菌20min[1]
1.1.
2.2发酵培养基
在烧杯中加入6g/L蛋白胨、3g/L酵母粉、1.5g/L无水硫酸镁、0.013g/L无水氯化钙、5g/L硫酸铵、1.5g/L柠檬酸三钠、3g/L磷酸二氢钾、0.075g/L七水合硫酸亚铁，再加入适量的（少于1L）蒸馏水，搅拌使之充分溶解，再补充水定容至1L。121℃灭菌20min。
1.2器材
超净工作台，高压灭菌锅，分光光度计，发酵罐及相应装置，摇床，移液枪，枪头，酒精灯，接种环，三角瓶，玻璃棒，烧杯
1.3接种
1.3.1种子培养基接种
选取单菌落生长明显的平板，用接种环挑取适量的菌落转移到灭过菌的种子培养基三角瓶中。
将接种好的种子培养基放到摇床中，200rpm/min转速，37℃，培养12-14 h。
1.3.2发酵罐接种
将灭过菌的发酵液装入发酵罐中，安装好发酵罐。将三瓶种子液混合均匀，
向发酵罐中加入60mL种子液，再加入1mL硫酸卡那霉素和30g糖（已灭菌）。1.4生长曲线的测定
1.4.1原理
在液体培养基中，微生物随着培养时间的增加而不断增加，逐渐使培养基混浊，这一变化，可以用分光光度计测定，并可根据不同的时间里测定的数值而做出该种微生物的生长曲线。
1.4.2方法及步骤
以未接菌的培养液作为空白，在分光光度计上调零点。
用分光光度计，从0时开始，每隔2h测定三角瓶培养液的光密度值（OD），每次测定时以未接菌的培养液为空白对照调仪器零点、测定波长600nm。
以时间为横坐标，以OD值为纵坐标，制作曲线，即为细菌在该培养条件下的生长曲线。
2实验结果与分析
2.1大肠杆菌生长曲线的测定
按照1.4.2的方法测得大肠杆菌的生长曲线的结果见表1。以时间为横坐标，以OD值为纵坐标绘制的生长曲线图如图1所示。
表1大肠杆菌的生长曲线的测定结果
时间/h 0 2 4 6 8 OD 0.25 0.35 0.775 2.425 5.025
时间/h 10 12 14 16 18 OD 5.125 5.005 3.375 2.785 2.122
图1大肠杆菌生长曲线图
2.2糖浓度变化
表2糖浓度变化测定结果
时间/h 0 2 4 6 8
糖浓度g/L 30 27.5 26.85 22.3 14.7
时间/h 10 12 14 16 18
糖浓度12.29 10.6 10 9.73 9.02
3结论
从大肠杆菌的生长曲线可以看出培养4h后各菌株基本进入对数期，8h左右菌液浓度达到峰值，12h左右菌液浓度开始下降。各菌株都经历了迟缓期、对数生长期、稳定生长期和衰亡期4个时期，因而OD值可以反应细菌的生长曲线。
【参考文献】
[1]梁海曼.高压灭菌对培养基成分的影响.植物生理学通讯,1995(5):389-392.
本人贡献率
大肠杆菌生长曲线的制备 一、实验目的 1 了解细菌生长曲线特点及测定原理； 2 学习用比浊法测定细菌的生长曲线。 二、基本原理 将少量细菌接种到一定体积的、适合的新鲜培养基中，在适宜的条件下进行培养，定时测定培养液中的菌量，以菌量的对数作纵坐标，生长时间作横坐标，绘制的曲线叫生长曲线。它反映了单细胞微生物在一定环境条件下于液体培养时所表现出的群体生长规律。依据其生长速率的不同，一般可把生长曲线分为延缓期、对数期、稳定期和衰亡期。这四个时期的长短因菌种的遗传性、接种量和培养条件的不同而有所改变。因此通过测定微生物的生长曲线，可了解各菌的生长规律，对于科研和生产都具有重要的指导意义。 测定微生物的数量有多种不同的方法，可根据要求和实验室条件选用。本实验采用比浊法测定，由于细菌悬液的浓度与光密度（OD值）成正比，因此可利用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液的浓度，并将所测的OD值与其对应的培养时间作图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线，此法快捷、简便。 三、器材 1菌种：大肠杆菌
2培养基：LB培养基（蛋白胨10g 酵母膏5g Nacl 10g pH7.0~7.2） 3仪器和器具：721分光光度计，比色杯，恒温摇床，无菌吸管，试管，三角瓶。 四、方法与步骤 1种子液制备 取大肠杆菌斜面菌种1支，以无菌操作挑取1环菌苔，接入LB培养基中，静止培养18h作种子培养液。 2标记编号 取11支无菌试管，分别编号为0、1.5、3、4、6、8、10、12、14、16、20h。 3接种培养 吸取2.5ml种子液加入装有60mlLB培养基的锥形瓶中，混匀。分别取5ml加入到11根试管，于37℃下振荡培养。然后分别按对应时间将试管取出，立即放冰箱中贮存，待培养结束时一同测定OD值。 4生长量测定 将未接种的LB培养基倾倒入比色杯中，选用600nm 波长分光光度计上调节零点，作为空白对照，并对不同时间培养液从0h起依次进行测定，对浓度大的菌悬液用未接种的牛肉膏蛋白胨液体培养基适当稀释后测定，使其OD值在0.10.～0.65以内，经稀释后测得的OD值要乘以稀释倍数，
大肠杆菌生长曲线的测定 一、基本原理 生长曲线是微生物在液体培养基中所表现出来的生长、繁殖的规律，不同的微生物表现为不同的生长曲线，而即使是同一种微生物在不同培养条件下，其生长曲线也不同。因此测定微生物的生长曲线对于了解，掌握微生物的生长规律是有帮助的。 由于细菌悬液的浓度与混浊度成正比，因此可利用光电比色计测定菌悬液的光密度来推知菌液的浓度。本实验是以活菌计数法与光电比浊法相对应来测定大肠杆菌在不同培养条件下的生长曲线，从而观察分析大肠杆菌在这些培养条件下的生长情况。 二、器材 培养了20小时的大肠杆菌悬液；肉汤蛋白胨培养基（液体、固体）；浓缩的肉汤蛋白胨液体培养基（浓缩5倍）；无菌酸溶液（甲酸：乙酸：乳酸＝3：1：1）。 1毫升及5毫升无菌吸管；无菌试管；无菌生理盐水； 无菌平皿；血球计数器；显微镜；光电比色计；无菌离心管；离心机等。 三、操作步骤 1．将经20小时培养的大肠杆菌培养物，倒入无菌离心管内离心（3000r.p.m×10），以无菌生理盐水洗涤三次后，制成约9亿毫升的菌悬液（用显微镜直接计数法），作为种子。上述过程都必须注意严格无菌操作。 2．取盛有200毫升培养基经灭菌的三角瓶三瓶，分别标明A、B、C，按5%接种量，将上述种子接入，置37℃振荡培养。在B瓶培养了4小时后取出，加入10毫升无菌酸溶液，然后继续振荡培养。在C瓶培养了6小时后取出，加入10毫升无菌浓缩肉汤蛋白胨液，再继续振荡培养。 3．间隔一定时间，即0、2、4、6、8、10、12、14、16、18、20小时后，从A、B、C三角瓶中各取5毫升菌液放于无菌试管中，置冰浴。并作适当稀释，使菌悬液的光密度控制在0.0－0.4范围内，再置光电比色计中进行比浊测定（400－440毫微米波长），用未接种的肉汤蛋白胨液为空白对照。记下光密度值。 另外，A管在比浊测定以前，以无菌操作吸取0.1毫升菌液于肉汤蛋白胨琼脂平板上，用玻璃刮棒涂抹均匀后，置37℃培养30小时后计数。 4．按间隔时间全部测完了以后，以菌悬液光密度值（O.D.）为纵坐标，培养时间为横坐标再绘制一条A培养条件下的生长曲线。 四、思考题 1．比较A、B、C三组生长曲线有什么不同？说明原因，标出A组生长曲线的四个时期的位置及名称。 2．两条A生长曲线有什么不同？为什么？
四川大学 化学实验报告 课程名称生物工艺学实验课程号 309119060 学院轻纺与食品学院专业轻工生物技术 学生姓名赵凤佼学号 0843095035 指导教师周荣清成绩评定 实验日期 2011-06-20~2011-06-22 一、实验名称：大肠杆菌生长曲线的制作 二、实验目的： 1.通过细菌数量的测量了解大肠杆菌的生长特征与规律，绘制生长曲线。 2.掌握光电比浊法测量细菌数量的方法。 三、实验仪器及药品： 1.菌种：大肠杆菌。 2.培养基：LB培养基100ml，分装两支大试管（5ml/支），剩余90ml装入250ml三角瓶。 3.仪器和其他药品：722型分光光度计，水浴振荡摇床，无菌试管和无菌吸管等。 四、基本原理： 在合适的条件下，一定时期的大肠杆菌细胞每20min分裂一次，将一定量的细菌转入新鲜培养液中，在适宜的培养条件下细胞要经历延迟期、对数期、稳定器和衰亡期4个阶段。以培养时间为横坐标，细菌数目的对数或生长速率为纵坐标所绘制的曲线成为该细菌的生长曲线。不同的细菌在在相同的培养条件下其生长曲线不同，同种细菌在不同的培养条件下所绘制的生长曲线也不同。 当光线微生物菌悬液时，由于菌体的散射及吸收作用使光线的透过量降低。在一定范围内，微生物细胞浓度与透光度成反比，与光密度成正比；而光密度或透光度可以通过光电池精确测出。因此，可利用一系列菌悬液测定的光密度及其含菌量，做出光密度—菌数的标准曲线，然后根据样品液所测得的光密度，从标准曲线中查处对应的菌数。 本实验用分光光度计进行光电比浊，测定不同时间细菌悬浮液的OD值，绘制生长曲线。 五、关键步骤及注意事项： 1.测定OD值时，要求从低浓度到高浓度测定 2.严格控制培养时间
实验日期：2017.11.1 实验班级：生物技术指导教师：张建丽 姓名：高熹学号：1120152430 测定细菌生长曲线 一．实验目的 1.通过对大肠杆菌生长曲线的测定，了解细菌生长的特点，综合训练微生物实验的基本实验技能。 2.巩固培养基的配制、灭菌、仪器的包扎、倒平板。 3.掌握用比浊法测定细菌的生长曲线。 二．实验原理 将少量细菌接种到一定体积的、适合的新鲜培养基中，在适宜的条件下进行培养，一定时间测定培养液中的菌量，以菌量的数量作纵坐标，生长时间作横坐标，绘制的曲线叫生长曲线。它反映了单细胞微生物在一定环境条件下于液体培养时所表现出的群体生长规律。依据其生长速率的不同，一般可把生长曲线分为延缓期、生长期、稳定期和衰亡期。将每一种一定量的细菌转入新鲜液体培养基中，在适宜的条件下培养细胞要经历延迟期、对数生长期、稳定期和衰亡期四个阶段。 延迟期：又叫调整期。细菌接种至培养基后，对新环境有一个短暂适应过程（不适应者可因转种而死亡）。此期曲线平坦稳定，因为细菌繁殖极少延迟期长短因素种、接种菌量、菌龄以及营养物质等不同而异，一般为1～4小时。此期中细菌体积增大，代谢活跃，为细菌的分裂增殖合成、储备充足的酶、能量及中间代谢产物。 对数生长期：又称指数期。此期生长曲线上活菌数直线上升。细菌以稳定的几何级数极快增长，可持续几小时至几天不等（视培养条件及细菌代时而异）。此期细菌形态、染色、生物活性都很典型，对外界环境因素的作用敏感，因此研究细菌性状以此期细菌最好。抗生素作用，对该时期的细菌效果最佳。 稳定期：该期的生长菌群总数处于平坦阶段，但细菌群体活力变化较大细菌浓度达到最大即环境最大容纳量。由于培养基中营养物质消耗、毒性产物（有机酸、过氧化物等）积累PH下降等不利因素的影响，细菌繁殖速度渐趋下降，相对细菌死亡数开始逐渐增加，此期细菌增殖数与死亡数渐趋平衡。细菌形态、染色、生物活性可出现改变，并产生相应的代谢产物如外毒素、内毒素、抗生素、以及芽孢等。 衰亡期：随着稳定期发展，细菌繁殖越来越慢，死亡菌数明显增多。活菌数与培养时间呈反比关系，此期细菌变长肿胀或畸形衰变，甚至菌体自溶，难以辩认其形。生理代谢活动趋于停滞。故陈旧培养物上难以鉴别细菌。 体内及自然界细菌的生长繁殖受机体免疫因素和环境因素的多方面影响，不会出现象培养基中那样典型的生长曲线。掌握细菌生长规律，可有目的地研究控制病原菌的生长，发现和培养对人类有用的细菌。 这4个时期的长短因菌种的遗传性、接种量和培养条件的不同而有所不同。因此通过测定微生物的生长曲线，可了解个菌的生长规律，对于科研和生产都具有重要的指导意义。 测定微生物的数量有多种不同的方法，可根据要求和实验室条件选用。本实
实验七 测定细菌生长曲线 一、 实验目的 1. 了解细菌生长曲线特征，测定细菌繁殖的代时； 2. 学习液体培养基的配制以及接种方法； 3. 反复练习无菌操作技术； 4. 了解不同细菌，不同接种方法在同一培养基上生长速度的不同； 5. 掌握利用细菌悬液混浊度间接测定细菌生长的方法 二、 实验原理 将一定量的细菌接种在液体培养基内，在一定条件下培养，可观察到细菌的生长繁殖有一定的规律性，如以细菌的活菌数的对数作纵坐标，以培养时间作横坐标，可绘成一条曲线，成为生长曲线（如图一）。 图一 微生物生长曲线示意图 单细胞微生物的发酵具有四个阶段，即Ⅰ调整期（延滞期）、Ⅱ对数期（生长旺盛期）、Ⅲ平衡期（稳定期）、Ⅳ死亡期（衰亡期）。 生长曲线可表示细菌从开始生长到死亡的全过程的动态。不同的微生物有不同的生长曲线，同一种微生物在不同的培养条件下，其生长曲线也不一样。因此，测定微生物的生长曲线对于了解和掌握微生物的生长规律是很有帮助的。 测定微生物生长曲线的方法很多，有血球计数板法、平板菌落计数法、称重法和比浊法等。本实验采用比浊法测定，由于细菌悬液的浓度与混浊度成正比，因此，可利用分光光度计测定细菌悬液的光密度来推知菌液的浓度。将所测得的光密度值（OD600）与其对应的培养时间作图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线。注意，由于光密度表示的是培养液中的总菌数，包括活菌与死菌，因此所测定的生长曲线的衰亡期不明显。 从生长曲线我们可以算出细胞每分裂一次所需要的时间，即代时，以G 表示。其计算公式为： 2 lg /)lg (lg 121 2W W t t G --= 式中t1和t2为所取对数期两点的时间； W1和W2分别为相应时间测得的细胞含量（g/L ）或OD 。 三、 实验仪器、材料和用具 1. 实验材料:大肠杆菌，枯草杆菌菌液及平板； 2. 培养基:牛肉膏蛋白胨葡萄糖培养基
实验日期：2017.11.1实验班级：生物技术指导教师：张建丽 姓名：高熹学号：1120152430 测定细菌生长曲线 一．实验目的 1.通过对大肠杆菌生长曲线的测定，了解细菌生长的特点，综合训练微生物实验的基本实验技能。 2.巩固培养基的配制、灭菌、仪器的包扎、倒平板。 3.掌握用比浊法测定细菌的生长曲线。 二．实验原理 将少量细菌接种到一定体积的、适合的新鲜培养基中，在适宜的条件下进行培养，一定时间测定培养液中的菌量，以菌量的数量作纵坐标，生长时间作横坐标，绘制的曲线叫生长曲线。它反映了单细胞微生物在一定环境条件下于液体培养时所表现出的群体生长规律。依据其生长速率的不同，一般可把生长曲线分为延缓期、生长期、稳定期和衰亡期。将每一种一定量的细菌转入新鲜液体培养基中，在适宜的条件下培养细胞要经历延迟期、对数生长期、稳定期和衰亡期四个阶段。 延迟期：又叫调整期。细菌接种至培养基后，对新环境有一个短暂适应过程（不适应者可因转种而死亡）。此期曲线平坦稳定，因为细菌繁殖极少延迟期长短因素种、接种菌量、菌龄以及营养物质等不同而异，一般为1～4小时。此期中细菌体积增大，代谢活跃，为细菌的分裂增殖合成、储备充足的酶、能量及中间代谢产物。 对数生长期：又称指数期。此期生长曲线上活菌数直线上升。细菌以稳定的几何级数极快增长，可持续几小时至几天不等（视培养条件及细菌代时而异）。此期细菌形态、染色、生物活性都很典型，对外界环境因素的作用敏感，因此研究细菌性状以此期细菌最好。抗生素作用，对该时期的细菌效果最佳。 稳定期：该期的生长菌群总数处于平坦阶段，但细菌群体活力变化较大细菌浓度达到最大即环境最大容纳量。由于培养基中营养物质消耗、毒性产物（有机酸、过氧化物等）积累PH下降等不利因素的影响，细菌繁殖速度渐趋下降，相对细菌死亡数开始逐渐增加，此期细菌增殖数与死亡数渐趋平衡。细菌形态、染色、生物活性可出现改变，并产生相应的代谢产物如外毒素、内毒素、抗生素、以及芽孢等。 衰亡期：随着稳定期发展，细菌繁殖越来越慢，死亡菌数明显增多。活菌数与培养时间呈反比关系，此期细菌变长肿胀或畸形衰变，甚至菌体自溶，难以辩认其形。生理代谢活动趋于停滞。故陈旧培养物上难以鉴别细菌。 体内及自然界细菌的生长繁殖受机体免疫因素和环境因素的多方面影响，不会出现象培养基中那样典型的生长曲线。掌握细菌生长规律，可有目的地研究控制病原菌的生长，发现和培养对人类有用的细菌。 这4个时期的长短因菌种的遗传性、接种量和培养条件的不同而有所不同。因此通过测定微生物的生长曲线，可了解个菌的生长规律，对于科研和生产都具有重要的指导意义。 测定微生物的数量有多种不同的方法，可根据要求和实验室条件选用。本实
用比浊法测定大肠杆菌的生长曲线 (一)实验目的 了解细菌生长曲线的持点及测定原理，学会用比浊法测定细菌的生长曲线。 (二)实验原理 将一定数量的细菌，接种于适宜的液体培养基中，在适温下培养，定时取样测数，以菌数的对数为纵坐标，生长时间为横坐标，作出的曲线称为生长曲线。该曲线表明细菌在一定的环境条件下群体生长与繁殖的规律。一般分为延缓期、对数期、稳定期及衰亡期四个时期，各时期的长短同菌种本身特征、培养基成分和培养条件不同而异。 比浊法是根据细菌悬液细胞数与混浊度成正比，与透光度成反比关系，利用光电比色计测定细胞悬液的光密度(即OD值)，用于表示该菌在本实验条件下的相对生长量。 实验设正常生长、加酸抑制和加富培养等三种处理，以了解细菌在不同生长条件下的生长情况。 （三）实验器材 (1)活材料：大肠杆菌(E.coli)。 (2)培养基和试剂：牛肉膏蛋白胨液体培养基14支(每支10mL)，浓缩5 倍的牛肉膏蛋白胨培养基1支。无菌酸溶液(甲酸：乙酸：乳酸=3：1：1)。 (3)器材：1mL无菌吸管、摇床、冰箱、光电比色计、标签等。 （四）实验方法 方法(1) 1)接种：取13支装有牛肉膏蛋白胨培养液的试管，贴上标签(注明菌名、培养处理、培养时间、组号)。按无菌操作法用吸管向每管准确加入0.2mL的大肠杆菌培养液，接种后，轻轻摇荡，使菌体混匀。另一支不接种的培养管注明CK(对照)。 2)培养：将接种后的培养管置于摇床上，在37℃下振荡培养。其中9支培养管分别于培养的0、1．5、3、4、6、8、10、12和14h后取出，放冰箱中贮存，待测定。加酸处理。取出经4h培养的另二支培养管，按无菌操作法加入lmL无菌酸溶液，摇匀后放回摇床上，继续振荡培养，于培养8h和14h后取出放冰箱中贮存，待测定。加富营养物处理。余下的二支培养管于培养6h后取出，按无
细菌生长曲线的测定的实验步骤 一、 实验目的 1. 了解细菌生长曲线特征，测定细菌繁殖的代时； 2. 学习液体培养基的配制以及接种方法； 3. 反复练习无菌操作技术； 4. 了解不同细菌，不同接种方法在同一培养基上生长速度的不同； 5. 掌握利用细菌悬液混浊度间接测定细菌生长的方法 二、 实验原理 将一定量的细菌接种在液体培养基内，在一定条件下培养，可观察到细菌的生长繁殖有一定的规律性，如以细菌的活菌数的对数作纵坐标，以培养时间作横坐标，可绘成一条曲线，成为生长曲线（如图一）。 图一 微生物生长曲线示意图 单细胞微生物的发酵具有四个阶段，即Ⅰ调整期（延滞期）、Ⅱ对数期（生长旺盛期）、Ⅲ平衡期（稳定期）、Ⅳ死亡期（衰亡期）。 生长曲线可表示细菌从开始生长到死亡的全过程的动态。不同的微生物有不同的生长曲线，同一种微生物在不同的培养条件下，其生长曲线也不一样。因此，测定微生物的生长曲线对于了解和掌握微生物的生长规律是很有帮助的。 测定微生物生长曲线的方法很多，有血球计数板法、平板菌落计数法、称重法和比浊法等。本实验采用比浊法测定，由于细菌悬液的浓度与混浊度成正比，因此，可利用分光光度计测定细菌悬液的光密度来推知菌液的浓度。将所测得的光密度值（OD600）与其对应的培养时间作图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线。注意，由于光密度表示的是培养液中的总菌数，包括活菌与死菌，因此所测定的生长曲线的衰亡期不明显。 从生长曲线我们可以算出细胞每分裂一次所需要的时间，即代时，以G 表示。其计算公式为： 2 lg /)lg (lg 121 2W W t t G --= 式中t1和t2为所取对数期两点的时间； W1和W2分别为相应时间测得的细胞含量（g/L ）或OD 。 三、 实验仪器、材料和用具
实验报告 课程名称：生物工艺学实验 实验名称：大肠杆菌生长曲线测定专业：___生物工程__________ 学号：________ 姓名：____________ 实验地点：_________________ 实验日期：_________________
[实验目的和要求] 1．了解光电比浊计数法的原理。 2．了解细菌生长曲线的特点，绘制生长曲线。 3. 掌握光电比浊计数法测定大肠杆菌生长曲线的方法。 [实验器材] 1．菌种大肠埃希菌（E.coli）1~18h液体培养物或菌悬液。或者上次实验诱变得到的菌种。 2．培养基营养肉汤培养基，生理盐水 3．其它：721型光电比色计、1ml无菌移液管、摇床等。 [实验原理和方法] 原理：细菌的生长一般指群体的生长，常常具有一定的规律性。描述细菌在液体培养基中的生长规律的曲线叫做生长曲线，即将一定量的细菌接种到一定容积的液体培养基中，在适宜的条件下进行培养，以培养时间为横坐标，以菌数的对数为纵坐标进行作图得到的曲线。 典型的生长曲线可分为延迟期、对数生长期、稳定期和衰亡期四个时期。 细菌培养物在生长过程中，由于原生质含量的增加，会引起培养物混浊度的增高。细菌悬液的混浊度和透光度成反比、与光密度成正比，透光度或光密度可借助光电比浊计精确测出，因此可用光电比浊计测定细胞悬液的光密度（OD值），表示该菌在特定实验条件下的细菌相对数目，进而反映出其相对生长量。
步骤： 1．接种、培养 采用无菌操作技术用移液管向每个100ml营养肉汤培养基的三角瓶中试管准确加入大肠埃希菌悬液3ml，轻轻振荡混匀，另设一空白对照组（不加大肠埃希菌悬液）。 将接种后的9组三角瓶置于摇床上，37℃,220r/min，振荡培养。间隔一定时间，即0、1、2、3、4、5、6、7、8、9~18小时后，从摇床上将取下其中一瓶三角瓶培养物（标记时间），置4℃冰箱保存。2．吸光度测定 每组取9支干净小试管，从不同时间培养菌液中摇匀各取3ml，将大肠埃希菌培养液进行适当稀释，使光密度在0.1~0.65之间，以没有接种的空白对照组液体培养基调零点，在600nm波长，1cm比色杯中依次进行测定OD值。测定从最稀浓度的菌悬液开始，依次测定。 经稀释后测定的OD值要乘以稀释倍数，才是培养液的实际OD值。3．绘制生长曲线 以光密度(OD值)为纵坐标，培养时间为横坐标，绘制大肠埃希菌的生长曲线。
大肠杆菌生长曲线的测定 蔡小鹏 （南京工业大学生物与制药工程学院制药1104班）【摘要】通过比浊法对大肠杆菌生长曲线进行测定。因为细菌悬液的浓度与光密度成正比，所以可利用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌悬液的浓度。将培养12h的大肠杆菌进行发酵罐培养，在不同时间段取样，用分光光度计对大肠杆菌的生长曲线进行测定，测定结果显示：大肠杆菌生长曲线基本符合迟缓期、对数生长期、稳定生长期和衰亡期4个时期。 【关键字】比浊法；发酵罐培养；生长曲线 大肠杆菌是人和动物肠道中最著名的一种细菌，主要寄生于大肠内，约占肠道菌中的1%。是一种两端钝圆、能运动、无芽孢的革兰氏阴性短杆菌。除某些菌型能引起腹泻外，一般不致病，能合成维生素B和K，对人体有益。大肠杆菌是肠杆菌科的一员，经常作为细菌的模式生物广泛用于科学研究。 1实验材料与方法 1.1实验材料 1.1.1菌种 大肠杆菌 1.1.2培养基 1.1. 2.1种子培养基 蛋白胨1%，酵母粉0.5%，Nacl0.8%，硫酸卡那霉素800μL/L（灭菌后同冻存管一起加入摇瓶） 在烧杯中加入1.5g/150mL蛋白胨、0.75g/150mL酵母粉、1.2g/mLNacl,再加入适量（少于150ml）的蒸馏水，搅拌使之充分溶解，再补充水定容至150ml，保持自然PH。平均分装3瓶后，121℃灭菌20min[1] 1.1. 2.2发酵培养基 在烧杯中加入6g/L蛋白胨、3g/L酵母粉、1.5g/L无水硫酸镁、0.013g/L无水氯化钙、5g/L硫酸铵、1.5g/L柠檬酸三钠、3g/L磷酸二氢钾、0.075g/L七水合硫酸亚铁，再加入适量的（少于1L）蒸馏水，搅拌使之充分溶解，再补充水定容至1L。121℃灭菌20min。 1.2器材 超净工作台，高压灭菌锅，分光光度计，发酵罐及相应装置，摇床，移液枪，枪头，酒精灯，接种环，三角瓶，玻璃棒，烧杯 1.3接种 1.3.1种子培养基接种 选取单菌落生长明显的平板，用接种环挑取适量的菌落转移到灭过菌的种子培养基三角瓶中。 将接种好的种子培养基放到摇床中，200rpm/min转速，37℃，培养12-14 h。 1.3.2发酵罐接种 将灭过菌的发酵液装入发酵罐中，安装好发酵罐。将三瓶种子液混合均匀，