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多糖的分子量与分子量分布测定

多糖的分子量与分子量分布测定
多糖的分子量与分子量分布测定

多糖的分子量与分子量分布测定标准操作规程

1.目的:

建立多糖的分子量与分子量分布测定的标准操作规程。

2. 依据:

《中华人民共和国药典》2000年版二部。

3. 范围:

适用于药品中多糖的分子量与分子量分布的测定。

4. 职责:

QC检验员对本标准的实施负责。

5. 程序:

5.1. 对仪器的一般要求:

色谱柱为测多糖专用凝胶柱(按所测样品的分子量大小选择特定排阻范围的凝胶柱)。检测器为示差折光检测器。

5.2. 系统适用性试验:

按各品种项下要求对仪器进行适用性试验,规定分析状态下色谱柱的最小理论板数(n)和供试品在该分析状态下的分配系数(K d)应达到规定的要求。

K d =

t R—t0

t T—t0

式中t R为供试品峰的保留时间;

t0为完全被填料颗粒网孔排阻的大分子的保留时间,一般指蓝色葡聚糖的保

留时间。

t T为能自由进出填料颗粒网孔的小分子的保留时间,一般指葡萄糖的保留时间。

5.3. 测定法:

5.3.1. 系统校正:根据供试品分子量大小,一般选用5个已知分子量的多糖标准品

(常用的为葡聚糖)分别用流动相制成每1ml中约含10mg的标准溶液,分别取上述标准溶液25μl,注入液相色谱仪,记录色谱图。由GPC专用软件绘制标准曲线,得线性回归方程:1gM W=a+bt R

式中M W为标样的已知重均分子量;

t R 为标样的保留时间。

5.3.2. 样品测量:取供试品溶液25μl注入液相色谱仪,记录色谱图,按下式计算

分子量:

M n=ΣRI i/Σ(RI i/M i)

M w=Σ(RI i M i)/ΣRI i

D =M w/M n

式中M n为数均分子量;

RI i为为样品i级分的物质量,即供试品在保留时间i的峰高;

M i为样品i级分的分子量,即供试品在保留时间i的分子量。

5.4. 结果处理:

采用GPC专用软件,可获得供试品归一化色谱图,微分、积分分子量分布图,各时间点的分子量(片段数据)和各种平均分子量。根据供试品需要选择各项测定结果。

(完整版)粗多糖的测定方法

粗多糖的测定方法(1) 1. 原理 分子量大于10,000道尔顿的多糖经80%乙醇沉淀后,加入碱性铜试剂,选择性地从其他高分子物质中沉淀出葡聚糖,沉淀部分与苯酚-H2SO4反应,生成有色物质,在485nm条件下,有色物质的吸光度值与葡聚糖浓度成正比。 2. 适用范围 参照AOAC方法。适用于检测含有分子量大于10,000道尔顿葡聚糖的样品。 3.仪器 (1)分光光度计 (2)离心机 (3)旋转混匀器 (4)恒温水浴锅 4.试剂 除特殊说明外,实验用水为蒸馏水,试剂为分析纯。 (1)80%乙醇:800ml无水乙醇加水200ml。 (2)2.5 mol/L NaOH溶液:100 g NaOH加蒸馏水稀释至1 L,加入固体无水硫酸钠至饱和。(3)铜贮存液:称取3.0 g CuSO4 ·5H2O,30.0 g柠檬酸钠加水溶解至1 L。溶液可贮存2周。 (4)铜应用溶液:取铜贮存液50 ml,加水50 ml混匀后加入无水硫酸钠12.5 g,临用新配。 (5)洗涤液:取水50 ml,加入10 ml铜应用溶液,10 ml 2.5 mol/L NaOH溶液,混匀。(6)1.8 mol/L H2SO4:取100ml浓硫酸用水稀释至1L。 (7)20 g/L苯酚溶液:称取2.0g苯酚,加水溶解并稀释至100ml,混匀备用。 (8)葡聚糖标准液:称取500mg葡聚糖(分子量500,000D)于称量皿中,105℃干燥4h 至恒重,置于装有干燥硅胶的干燥器中冷却。准确称取100mg干燥后的葡聚糖,用水定容至100ml,葡聚糖标准浓度为1.0 mg/ml。 (9)葡聚糖标准应用液:吸取葡聚糖标准液10ml,用水稀释10倍,葡聚糖终浓度为0.1mg/ml。 粗多糖的测定方法(2) 5. 操作方法 5.1 样品处理 (1)样品提取:称取样品1~5g,加水100ml,沸水浴加热2h,冷却至室温,定容至200ml (V1),混匀后过滤,弃初滤液,收集余下滤液。 (2)沉淀高分子物质:准确吸取上述滤液100ml (V2),置于烧杯中,加热浓缩至10ml,冷却后,加入无水乙醇40ml,将溶液转至离心管中以3000rpm离心5min,弃上清液,残渣用80%乙醇洗涤3次,残渣供沉淀葡聚糖之用。 (3)沉淀葡聚糖:上述残渣用水溶解,并定容至50ml (V3),混匀后过滤,弃初始滤液后,取滤液2.0ml (V4),加入2.5mol/L NaOH 2.0ml,Cu应用溶液2.0ml,沸水浴中煮沸2mim,冷却后以3000rpm离心5min,弃上清液,残渣用洗涤液洗涤3次,残渣供测定葡聚糖之用。 (4)测定葡聚糖:上述残渣用2.0mL 1.8mol/L H2SO4溶解,用水定容至100mL(V5)。准确吸取2.0ml(V6),置于25ml比色管中,加入1.0ml苯酚溶液,10ml浓硫酸,沸水浴煮沸2分钟,冷却比色。从标准曲线上查得相应含量,计算粗多糖含量。 5.2 标准曲线制备:

分子量及分布

分子量及分布 一、DLS(Dynamic Light Scattering ) 动态光散射 1.测试适用于:测量粒径,Zeta电位、大分子的分子量等 2.测试原理: 光通过胶体时,粒子会将光散射,在一定角度下可以检测到光信号,所检测到的信号是多个散射光子叠加后的结果,具有统计意义.瞬间光强不是固定值,在某一平均值下波动,但波动振幅与粒子粒径有关。某一时间的光强与另一时间的光强相比,在极短时间内,可以认识是相同的,我们可以认为相关度为1,在稍长时间后,光强相似度下降,时间无穷长时,光强完全与之前的不同,认为相关度为0。根据光学理论可得出光强相关议程。正在做布朗运动的粒子速度,与粒径(粒子大小)相关(Stokes - Einstein方程)。大颗粒运动缓慢,小粒子运动快速。如果测量大颗粒,那么由于它们运动缓慢,散射光斑的强度也将缓慢波动。类似地,如果测量小粒子,那么由于它们运动快速,散射光斑的密度也将快速波动。附件五显示了大颗粒和小粒子的相关关系函数。可以看到,相关关系函数衰减的速度与粒径相关,小粒子的衰减速度大大快于大颗粒的。最后通过光强波动变化和光强相关函数计算出粒径及其分布。 二、GPC(Gel Permeation Chromatography ) 凝胶渗透色谱 1.测试适用于:分离相对分子质量较小的物质,并且还可以分析

分子体积不同、具有相同化学性质的高分子同系物。 2.测试原理: 让被测量的高聚物溶液通过一根内装不同孔径的色谱柱,柱中可供分子通行的路径有粒子间的间隙(较大)和粒子内的通孔(较小)。当聚合物溶液流经色谱柱时,较大的分子被排除在粒子的小孔 之外,只能从粒子间的间隙通过,速率较快;而较小的分子可以进入粒子中的小孔,通过的速率要慢得多。经过一定长度的色谱柱,分子根据相对分子质量被分开,相对分子质量大的在前面(即淋洗时间短),相对分子质量小的在后面(即淋洗时间长)。自试样进柱到被淋洗出来,所接受到的淋出液总体积称为该试样的淋出体积。当仪器和实 验条件确定后,溶质的淋出体积与其分子量有关,分子量愈大,其淋出体积愈小。 3.测试步骤: 直接法:在测定淋出液浓度的同时测定其粘度或光散射,从而求出其分子量。间接法:用一组分子量不等的、单分散的试样为 标准样品,分别测定它们的淋出体积和分子量,则可确定二者之间的关系. 1).溶剂的选择:能溶解多种聚合物;不能腐蚀仪器部件;与检 测器相匹配。 2).把激光光散射与凝胶色谱仪联用,在得到浓度谱图的同时,还可得到散射光强对淋出体积的谱图,从而计算出分子量分布曲线和整个试样的各种平均分子量

超声波法提取香菇多糖实验报告

竭诚为您提供优质文档/双击可除超声波法提取香菇多糖实验报告 篇一:超声波提取香菇多糖汇报 项目名称: 超声波提取香菇多糖 【工作汇报】 超声波提取香菇多糖 操作者姓名:王岚 班级技术102 专业生物技术 前言 1、实训的背景、目的和意义: 实训背景: 香菇(Lentinulaedodes)是侧耳科的 担子菌,味道鲜美,药食两用,具有较好的保健作用。香菇多糖是香菇中的重要营 养成分和有效药用组分,具有抗病毒、抗 肿瘤、调节免疫功能和刺激干扰素形成等功能,香菇还

原糖对于人体糖分的补充也起着重要作用 测定蛋白质的方法可分为两大类:一类是利用蛋白质的物理化学性质来推算,如密度、折射率、紫外吸收、荧光性等;另一类是利用化学方法来计算,如定氮、双缩脲反应、染料结合反应、酚试剂反应等 主要测定方法有:双缩脲法、染料结合法、酚试剂法、紫外分光光度法、水扬酸比色法、折光法、旋光法、近红外光谱法. 目前蛋白质测定最常用的方法是凯氏定氮法,是通过测总氮量来确定蛋白质含量的方法。 实训目的及意义: 1、 2、 2、实训要解决的问题: 掌握微量凯氏定氮仪测定蛋白质含量的原理。熟练掌握微量凯氏定氮仪测定蛋白质含量的操作技术。 1、微量凯氏定氮法与常量法的同点? 2、根据08年国标,样品消化完全一小时之后,需要冷却后加20ml水,为什么会有晶体析出,成分是什么,为什么会析出? 3、香菇多糖的主要成分是什么?如何脱蛋白? 3、实训操作关键技能

1.在蒸馏过程中,切勿关闭电炉,否则会引起硼酸液的倒吸。 2.环境中氨气的含量要低。 3.定氮仪各连接处绝对不能漏气。 4.所用橡皮塞、管用前均需处理。其方法是:浸在10%氢氧化钠溶液中煮沸约10min,再经水洗和水煮10min,最后冲洗数次。 材料及方法 1、实训材料及配制、预处理技术 干香菇,蒸馏水; 电热恒温鼓风干燥箱 组织粉碎机 圆底烧瓶,铁架台,温度计 超声波发生器(带加热功能) 真空泵,漏斗,滤纸,滤布,烧杯,量筒,玻璃棒等 微量凯氏定氮蒸馏装置一套、三角烧瓶、酸式滴定管、容量瓶溶液的配制 1.浓硫酸:分析纯,95.5% 2.80%苯酚:80克苯酚(分析纯重蒸馏试剂)加20克水使之溶解,可置冰箱中避光长期储存。 3.6%苯酚:临用前以80%苯酚配制。(每次测定均需现配)

多糖含量的测定

多糖含量的测定 1.原理 分子量大于10,000道尔顿的多糖经80%乙醇沉淀后,加入碱性铜试剂,选择性地从其他高分子物质中沉淀出葡聚糖,沉淀部分与苯酚-H2SO4反应,生成有色物质,在485nm条件下,有色物质的吸光度值与葡聚糖浓度成正比。 2.适用范围 参照AOAC方法。适用于检测含有分子量大于10,000道尔顿葡聚糖的样品。3.仪器 (1)分光光度计 (2)离心机 (3)旋转混匀器 (4)恒温水浴锅 4.试剂 除特殊说明外,实验用水为蒸馏水,试剂为分析纯。 (1)80%乙醇:800ml无水乙醇加水200ml。 (2)2.5mol/LNaOH溶液:100gNaOH加蒸馏水稀释至1L,加入固体无水硫酸钠至饱和。 (3)铜贮存液:称取3.0gCuSO4·5H 2 O,30.0g柠檬酸钠加水溶解至1 L。溶液可贮存2周。 (4)铜应用溶液:取铜贮存液50ml,加水50ml混匀后加入无水硫酸钠12.5 g,临用新配。 (5)洗涤液:取水50ml,加入10ml铜应用溶液,10ml2.5mol/LNaOH溶液,混匀。 (6)1.8mol/LH 2SO 4 :取100ml浓硫酸用水稀释至1L。 (7)20g/L苯酚溶液:称取2.0g苯酚,加水溶解并稀释至100ml,混匀备用。(8)葡聚糖标准液:称取500mg葡聚糖(分子量500,000D)于称量皿中,105℃干燥4h至恒重,置于装有干燥硅胶的干燥器中冷却。准确称取100mg干燥后的葡聚糖,用水定容至100ml,葡聚糖标准浓度为1.0mg/ml。 (9)葡聚糖标准应用液:吸取葡聚糖标准液10ml,用水稀释10倍,葡聚糖终浓度为0.1mg/ml。 5.操作方法 5.1样品处理 (1)样品提取:称取样品1~5g,加水100ml,沸水浴加热2h,冷却至室温,定容至200ml(V1),混匀后过滤,弃初滤液,收集余下滤液。 (2)沉淀高分子物质:准确吸取上述滤液100ml(V2),置于烧杯中,加热浓缩至10ml,冷却后,加入无水乙醇40ml,将溶液转至离心管中以3000rpm离心5min,弃上清液,残渣用80%乙醇洗涤3次,残渣供沉淀葡聚糖之用。 (3)沉淀葡聚糖:上述残渣用水溶解,并定容至50ml(V3),混匀后过滤,弃初始滤液后,取滤液2.0ml (V4),加入2.5mol/LNaOH2.0ml,Cu应用溶液2.0ml,沸水浴中煮沸2mim,冷却后以3000rpm离心5min,弃上清液,残渣用洗涤液洗涤3次,残渣供测定葡聚糖之用。 (4)测定葡聚糖:上述残渣用2.0mL1.8mol/LH 2SO 4 溶解,用水定容至100mL(V5)。 准确吸取2.0ml(V6),置于25ml比色管中,加入1.0ml苯酚溶液,10ml浓硫酸,

香菇多糖质量标准

正式名:香菇多糖汉语拼音:Xianggu 标准号:WS-291(X-256)-97 拉丁文或英文:Lentinan 主要活性成分:香菇[Lentinus edodes(Berk)sing]子实体提取、精制的多糖。按干燥品计算,含香菇多糖应不得少于%。 性状:类白色或浅黄色粉末;无味,有引湿性。在水、甲醇、乙醇或丙酮中几乎不溶;在L氢氧化钠中溶解。 比旋度取本品,置五氧化二磷干燥器中,减压干燥至恒重,精密称取适量,加L氢氧化钠溶液溶解并定量稀释制成每1ml中含10mg的溶液,依法测定(中国药典),范围在+2~+15之间。 鉴别:(1)取含量测定项下的溶液2ml,加蒽酮溶液(取蒽酮35mg置100ml量瓶中加硫酸溶解,并用硫酸稀释至刻度,即得,临用配制)5ml,振摇混匀,置水浴中加热,应显蓝绿色。 (2)取本品约10mg,滴加水少许研磨,再加水制成每1ml中含的溶液,置匀浆器中制成匀浆液,取10ml,加高碘酸钠溶液[取高碘酸钠(NaIO4)4.28g,加L硫酸溶液。溶解并稀释至1000ml]1ml,摇匀,立即取反应液4ml,以水为空白对照,照分光光度法(中国药典1995年版二部附录ⅣA),在295nm的波长处测定吸收度(A1),剩余的反应液置避光容器中。于3O℃连续搅拌6小时后,取出,测定吸收度(A2)。两次吸收度之差(A1-A2)应为~。 (3)红外光吸收图谱应与对照品的图谱一致,在89Ocm-1上附近有弱吸收峰。 检查:酸碱度取本品,加水制成%的匀浆液,依法测定(中国药典1995年版二部附录Ⅵ H),pH值应为~。 特性粘数取本品,置五氧化二磷干燥器中,减压干燥至恒重,精密称取适量,加L 氢氧化钠溶液数滴,使充分溶胀,研磨均匀,在25~30℃放置6~8小时,使完全溶解,制成每1ml中含的溶液,摇匀,依法测定(中国药典1995年版二部附录ⅥG第三法),特

香菇中糖类物质离与测定

香菇中糖类物质离与测定

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香菇中糖类物质的分离与测定 摘要:本实验采用热水浸提和乙醇醇沉的方法提取香菇多糖(Lentinan,LNT),利用正交法得出最佳提取粗多糖的方案,得到的粗多糖回收率为14.05﹪,再对得到的粗多糖进行定性、定量分析。用苯酚—硫酸法测定已提取出的粗多糖中单寡糖与多糖的含量为35.9%;经过薄层层析和纸层析法分析单糖的组成,其中组成多糖的单糖多属于葡萄糖和阿拉伯糖;用 Sepharsose CL—6B柱层析法测定多糖的相对分子量约为5597.58道尔顿。气象色谱分析单糖含的结果是香菇多糖中的单糖种类有半乳糖、葡萄糖、阿拉伯糖、岩藻糖等,其中含量较多的半乳糖和葡萄糖。 关键字:香菇多糖回收率含量组成相对分子量 Separation and Determination of carbohydrates in Lentinus edodes Abstract:This experiment extracts of lentinan (Lentinan LNT) by using hot water extraction and ethanol alcohol precipitation method. The orthogonal method to get the optimum extraction of polysaccharides is the best program, resulting polysaccharides recovery of 14.05%, and then to get crude polysaccharide qualitative and quantitative analysis. By using Phenol-sulfuric acid method, extracted polysaccharides single oligosaccharides and polysaccharides content was 35.9%; TLC and paper chromatography analysis monosaccharide composition, the monosaccharide composes mostly of glucose and arabinose; Relative molecular weight of polysaccharide determined by Sepharsose CL-6B column chromatography is about 5597.58 daltons. The results of gas chromatographic analysis of a monosaccharide is galactose, glucose, arabinose, fucose, sugar, and other types of monosaccharides in the lentinan. galactose and glucose are much more among them. Key words: Lentinan; Recoveries; Content; Composition; Relative molecular weight 0 引言: 糖类化合物是中药的重要成分,随着现代生物化学与分子生物学的不断发展与进步,人们对糖的了解越来越多。而糖生物学研究对揭示生命本质,实现中药现代化,深入开发中药资源有着重要的意义。但是,目前多糖的研究主要以陆生植物为主, 有些源于名贵中药,这不

多糖的分子量测定

多糖的分子量测定 常用的是凝胶滤过法。将充分膨胀好的SephadexG-200、G-150或G-75湿法装柱,用一定离子强度的氯化钠水溶液进行平衡,然后将各种不同的已知分子量的多糖分别相继上柱,同一离子强度的氯化钠水溶液洗脱,分步收集,苯酚-硫酸法监测,分别求得洗脱体积Ve,然后再将兰葡聚糖(M V>200万)上同一条柱,求出柱的空体积V o,根据V e/V o与logM之间存在着线性关系,可绘制标准曲线。最后,将待测样品按上述不变的条件上柱,求得待测多糖的V e。通过标准曲线上的V e/V o,查得待测多糖的分子量对数,便可求出M。 对于黏度大的多糖,可采用黏度法求得。亦有用蒸汽压渗透法(VPO,基本原理是根据理想溶液的拉乌尔定律,参考文献:崔锡红, 等. 蒸汽压渗透法分析异丁烯的数均分子量. 河南化工. 2001, 1: 32. 骆传环. 蒸气压渗透计测定多糖分子量. 现代科学仪器, 1994, 4:11.)、超速离心法(骆传环, 等. 香姑多糖的分子量测定. 科学技术与工程. 2006, 6(8): 1058~1060)、光散射法(LS,光散射法测定高分子量基于高分子溶液的瑞利散射,垂直偏振光通过溶液产生的不同角度散射光的强度与溶质分子的大小即分子量成正比。参考文献:魏立平, 姜雄平. 光散射法在医学分子生物学中的应用. 国外医学分子生物学分册. 2000, 22(2): 123.)、玻璃纤维纸电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳(原理:SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS(十二烷基硫酸钠),SDS能断裂分子内和分子间氢键,破坏蛋白质的二级和三级结构,强还原剂能使半胱氨酸之间的二硫键断裂,蛋白质在一定浓度的含有强还原剂的SDS溶液中,与SDS分子按比例结合,形成带负电荷的SDS-蛋白质复合物,这种复合物由于结合大量的SDS,使蛋白质丧失了原有的电荷状态形成仅保持原有分子大小为特征的负离子团块,从而降低或消除了各种蛋白质分子之间天然的电荷差异,由于SDS与蛋白质的结合是按重量成比例的,因此在进行电泳时,蛋白质分子的迁移速度取决于分子大小。当分子量在15KD到200KD之间时,蛋白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系,符合下式:lgM W=k-bX,式中:M W为分子量,X为迁移率,k、b均为常数,若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量对数作图,可获得一条标准曲线,未知蛋白质在相同条件下进行电泳,根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量。应用如,将标准相对分子量蛋白质与样品进行SDS-PAGE凝胶电泳,以标准蛋白质的迁移率为纵坐标,lgM为横坐标,绘制相对分子质量曲线。根据样品迁移率得出相对分子质量。)测分子量,黏度法及超滤法估计分子量。利用不同方法测定多糖分子量可以从不同角度对多糖分子量进行确证,同时也是对多糖纯度的考察。在测定过程中要注意标准品的选择,尽量使用与被测多糖结构相似的标准品,因为不同结构的标准品虽然其绝对分子量相同而在一定条件下所表现的分子量会有所不同。

香菇多糖提取作业

香菇多糖提取 提取法: 用物理提取的方法生产精细化学品,即通过将某一种物质按一定的要求从混合物中提取出来从而获得产品的方法。 张杨杨 精化1122 1、认识香菇多糖 (1)香菇多糖结构式 分子式:〔C42H72O36〕n 分子量:〔1152.9995〕n

(2)香菇多糖性质 香菇多糖(l e n t i n a n;L N T)是从香菇中分离纯化的一种葡聚糖,是以增强T细胞和巨噬细胞功能为主的免疫增强剂。 密度:1.88g/c m3;沸点:1472℃a t760m m H g。 溶于碱溶液或甲酸,微溶于热水或二甲亚砜,不溶于冷水、醇、乙醚、氯仿、吡啶或六甲基磷酰胺。对硫酸和盐酸稳定。 (3)香菇多糖的功能 香菇多糖具有激活细胞免疫、调节多种体液免疫因子、诱导α-干扰素生成,调节机体免疫应答反应,诱导白细胞对肿瘤浸润,导致肿瘤部位血管扩张、出血、坏死,阻止病毒与宿主细胞的结合,提高S O D〔超氧化物歧化酶〕活性,抑制M D A〔丙二醛〕生成,抗脂质氧化,降低胆固醇,调节糖代谢、改善糖耐量、扩张胃肠道产生饱腹感而减轻食欲,降低血糖等功能。 【丙二醛】 英文名:M a l o n d i a l d e h y d e;m a l o n i c d i a l d e h y d e;P r o p a n e d i a l 简称:M D A 分子式O H C-C H2-C H O 分子量72.0634 无色针状晶体,熔点72~74℃,一般含两个结晶水,60℃下真空干燥可得无水物,易潮解,纯的丙二醛在中性条件下稳定,但在酸性条件下不稳定。 由乙醛和甲酸乙酯在碱作用下缩合而得,可在高真空下升华精制,主要用于医药中间体、感光色素的原料。与蛋白质不相容,有潜在的致癌性。

分子量及分子量分布检测方法

分子量及分子量分布检测方法 1 范围 本标准规定了用高效体积排阻色谱法(HPSEC)测定可溶性聚乳酸平均分子量(Mw)和分子量分布的方法。 本标准适用于外科植入物用,能被三氯甲烷(或其他溶剂)完全溶解的包括聚(L-乳酸)树脂(或缩写PLLA)、聚(D-乳酸)树脂(或缩写PDLA)、任何比率的DL型共聚体以及丙交酯(或缩写PLA)和丙交酯-乙交酯共聚物(或缩写PLGA)的材料。 注1:本方法不是绝对的方法,要求使用市售窄分子量分布聚苯乙烯标准物质进行校正。 注2:由于聚乳酸产品在生产加工及灭菌过程中(特别是辐照灭菌),会影响材料本身的分子量及分子量分布,因此在评价产品时,宜采用成品进行检测。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T 2035-2008 塑料术语及定义 3 术语、定义 GB/T 2035-2008界定的以及下列术语和定义适用于本文件 3.1 聚乳酸 polylactic acid,PLA 包括聚(L-乳酸)树脂(或缩写PLLA)、聚(D-乳酸)树脂(或缩写PDLA)。 3.2 丙交酯-乙交脂共聚物 polylactic acid- polyglycolide acid copolymer,PLGA 由丙交酯及乙交脂按一定比例共聚得到的高分子化合物。 4 方法概要 溶解于溶剂的聚乳酸样品注入填有固体基质的色谱柱,按照溶液中聚合物分子大小顺序分离。自进样开始检测器持续监测从柱中出来的洗脱时间,从柱中流出分子按照尺寸分离,并按照其浓度分离的分子量被检测和记录。通过校正曲线,洗脱时间可以转为分子量,样品的各种分子量参数可由分子量/浓度数据计算得出。 5 试剂和材料 5.1 溶剂:本方法推荐使用三氯甲烷(CHCl3)。任何与HPSEC系统组分和柱填料相容的溶剂,并且可溶解聚乳酸样品的溶剂均可以考虑使用。选择溶剂应考虑试剂的纯度和一致性,例如四氢呋喃易与氧气

香菇多糖

香菇香菇多糖发酵生产分离提取生理活性 摘要:香菇是一种营养丰富的食、药用真菌香菇多糖因其具有如降血脂、抗血栓、抗血 小板聚集及抗肿瘤等生理活性而受到广泛的关注本论文通过香菇深层发酵来生产具有 生物活性的多糖为目的,研究了香菇多糖的发酵生产、提取、分离纯化及结构的初步分 析研究了营养性因子对香菇深层发酵的影响,结果表明葡萄糖、玉米粉、豆饼粉有利于 香菇菌体生长和胞外多糖的形成进一步的正交优化实验,确定了香菇深层发酵培养基为 葡萄糖20gL,豆饼粉60目20gL,KH2PO42gL,无机盐MgSO4·7H2O0.5gL优化发 酵工艺条件为初始pH5.5自然、接种量10%、种龄6d,温度28℃、250mL摇瓶装液 量80mL的条件下,香菇深层发酵结果最佳,在此基础上进行摇瓶发酵曲线测定,确定 了香菇适宜发酵周期为144h,胞外粗多糖含量最高可达542mg100mL,菌体生物量达 8.41mg100mL香菇发酵液胞外多糖最佳提取工艺为75%VV的乙醇浓度沉淀,温度为4℃,溶液pH值7.0时胞外粗多糖得率为670mg100mL发酵清液香菇发酵液胞内多糖 最佳提取工艺为组织捣碎法破壁处理、提取温度90℃、料水比14、提取时间4h、提 取次数2次,胞内多糖的最高产率为14.73mg50g湿菌丝体香菇胞外粗多糖经活性炭 脱色,酶法和三氯乙酸正丁醇法脱蛋白,经DEAE-纤维素柱进行组别分离和 Superdex200进行分级分离,经透析脱盐冷冻干燥得到香菇多糖纯品含量最多的胞外 多糖级分LEN1经红外光谱照射,证明其有多糖的特征吸收峰,是α-型吡喃环多糖经 紫外光谱扫描证明其不含蛋白质经HPLC测定,其分子量为6.5×105,是处于这一分 子量范围的单一成分,把提取出的香菇多糖应用于果蔬复合饮料中,无沉淀产生,证明 香菇多糖可用于饮料生产 标题:香菇香菇多糖发酵生产分离提取生理活性 专业:食品科学 学位:硕士 单位:山东轻工业学院@ 关键词:香菇香菇多糖发酵生产分离提取生理活性 论文时间:2007 分类:TS201.5 S646.12 导师:王成忠 语种:中文文摘 香菇多糖提取的原理是什么? 多糖溶于热水,不溶于60%以上乙醇,也不溶于氯仿正丁醇.所以用热水提取,乙醇沉淀除去部分醇溶性杂质;因为热水也可以将蛋白类物质提取出来,所以用氯仿正丁醇萃取除去提取液中的蛋白. 香菇子实体粉碎,低温烘干,准确称量,乙醚回流脱脂,乙醚提取物回收处理,香菇子实体粉末加入20倍量水,温度50 ℃,反应时间为80 min提取香菇多糖粗品,活性炭脱色[ 5 ],离心除去沉淀,上清液中加入95%乙醇,使乙醇终体积分数为75% ,离心取沉淀即得香菇多糖粗品。 香菇多糖粗品水溶解后过DEAE2 52层析柱(cm × 60 cm,柱高52 cm) ,DEAE2 52层析柱先用pH518的磷酸盐缓冲液平衡,样品溶于此缓冲液后上柱。

苯酚硫酸法测定多糖

分子量大于10,000道尔顿的多糖经80%乙醇沉淀后,加入碱性铜试剂,选择性地从其他高分子物质中沉淀出葡聚糖,沉淀部分与苯酚-H2SO4反应,生成有色物质,在485nm条件下,有色物质的吸光度值与葡聚糖浓度成正比。 2. 适用范围 参照AOAC方法。适用于检测含有分子量大于10,000道尔顿葡聚糖的样品。 3.仪器 (1)分光光度计 (2)离心机 (3)旋转混匀器 (4)恒温水浴锅 4.试剂 除特殊说明外,实验用水为蒸馏水,试剂为分析纯。 (1)80%乙醇:800ml无水乙醇加水200ml。 (2)2.5 mol/L NaOH溶液:100 g NaOH加蒸馏水稀释至1 L,加入固体无水硫酸钠至饱和。(3)铜贮存液:称取3.0 g CuSO4 ·5H2O,30.0 g柠檬酸钠加水溶解至1 L。溶液可贮存2周。 (4)铜应用溶液:取铜贮存液50 ml,加水50 ml混匀后加入无水硫酸钠12.5 g,临用新配。(5)洗涤液:取水50 ml,加入10 ml铜应用溶液,10 ml 2.5 mol/L NaOH溶液,混匀。(6)1.8 mol/L H2SO4:取100ml浓硫酸用水稀释至1L。 (7)20 g/L苯酚溶液:称取2.0g苯酚,加水溶解并稀释至100ml,混匀备用。 (8)葡聚糖标准液:称取500mg葡聚糖(分子量500,000D)于称量皿中,105℃干燥4h 至恒重,置于装有干燥硅胶的干燥器中冷却。准确称取100mg干燥后的葡聚糖,用水定容至100ml,葡聚糖标准浓度为1.0 mg/ml。 (9)葡聚糖标准应用液:吸取葡聚糖标准液10ml,用水稀释10倍,葡聚糖终浓度为0.1mg/ml。 5. 操作方法 5.1 样品处理 (1)样品提取:称取样品1~5g,加水100ml,沸水浴加热2h,冷却至室温,定容至200ml (V1),混匀后过滤,弃初滤液,收集余下滤液。 (2)沉淀高分子物质:准确吸取上述滤液100ml (V2),置于烧杯中,加热浓缩至10ml,冷却后,加入无水乙醇40ml,将溶液转至离心管中以3000rpm离心5min,弃上清液,残渣用80%乙醇洗涤3次,残渣供沉淀葡聚糖之用。 (3)沉淀葡聚糖:上述残渣用水溶解,并定容至50ml (V3),混匀后过滤,弃初始滤液后,取滤液2.0ml (V4),加入2.5mol/L NaOH 2.0ml,Cu应用溶液2.0ml,沸水浴中煮沸2mim,冷却后以3000rpm离心5min,弃上清液,残渣用洗涤液洗涤3次,残渣供测定葡聚糖之用。(4)测定葡聚糖:上述残渣用2.0mL 1.8mol/L H2SO4溶解,用水定容至100mL(V5)。准确吸取2.0ml(V6),置于25ml比色管中,加入1.0ml苯酚溶液,10ml浓硫酸,沸水浴煮沸2分钟,冷却比色。从标准曲线上查得相应含量,计算粗多糖含量。 5.2 标准曲线制备: 精密吸取葡聚糖标准应用液0.10,0.20,0.40,0.60,0.80,1.00,1.50,2.00ml(分别相当于葡聚糖0.01,0.02,0.04,0.06,0.08,0.10,0.15,0.20mg),补充水至2.0mL,加入苯酚溶液1.0ml,浓硫酸10ml,混匀,沸水浴2分钟,混匀,沸水浴2分钟,冷却后用分光光度计在485nm波长处以试剂空白溶液为参比,测定吸光度值(A),以葡聚糖浓度为横坐标,A 为纵坐标绘制标准曲线。

第四章聚合物的分子量和分子量分布

第四章 聚合物的分子量和分子量分布 一、 概念 1、 特性粘度 2、Mark-Houwink 方程 3、 M n 、M w 、M η的定义式 4、普适校正曲线 二、选择答案 1、( )可以快速、自动测定聚合物的平均分子量和分子量分布。 A 粘度法, B 滲透压法, C 光散射法, D 凝胶渗透色谱(GPC)法 2、下列四种方法中,( )可以测定聚合物的重均分子量。 A 、粘度法, B 、滲透压法, C 、光散射法, D 、沸点升高法 3、特性粘度[η]的表达式正确的是( )。 A 、c sp /η B 、c /ln γη C 、 c sp o c /lim η→ D 、c o c /lim γη→ 三、填空题 1、高分子常用的统计平均分子量有数均分子量、重均分子量、Z 均分子量和 ,它们之间的关系M z ≥M w ≥ ≥M n 。 2、测定聚合物分子量的方法很多,如端基分析法可测 分子量,光散射法可测重均分子量,稀溶液粘度法可测 分子量。 3、凝胶渗透色谱GPC 可用来测定聚合物的 和 。溶质分子体积越小,其淋出体积越大。 四、回答下列问题 1、简述GPC 的分级测定原理。 2、测定聚合物平均分子量的方法有哪些?得到的是何种统计平均分子量? 五、计算题 1、 35℃时,环己烷为聚苯乙烯(无规立构)的θ溶剂。现将300mg 聚苯乙烯(ρ=1.05 g/cm 3,Mn=1.5×105)于35℃溶于150ml 环己烷中,试计算:(1)第二维利系数A 2;(2)溶液的渗透压。 2、粘度法测定PS 试样的分子量,已知25ml 苯溶液溶解PS 为0.2035g ,30℃恒温下测溶液的流出时间为148.5秒,而溶剂苯的流出时间为102.0秒,试计算该试样的粘均分子量。(30℃,k=0.99×10-2ml/g ,α=0.74)

香菇多糖的提取

香菇多糖的提取技术 作者:唐庆菊学号:19 摘要:香菇多糖是香菇中分离出的一种重要的具有生理活性的物质,具有抗病毒、抗肿瘤、增强人体免疫力等多种功能,在保健食品和药品开发方面具有广阔的应用前景,本综述通过对当前常用的热水浸提法、酶解法、微波提取法和深层发酵培养法等6种香菇多糖的提取方法进行概述,具体的阐述了深层发酵液中香菇胞内、胞外多糖的提取、香菇多糖的微波提取法。并展望了其今后研究方向及其开发应用前景。 关键词:香菇多糖、提取 1 引言 多糖类物质是所有生命有机体的重要组成部分,广泛存在于动物,植物和微生物细胞壁中,是生物体内除核酸和蛋白质以外的又一类重要的生物分子.,尤其是一类重要的信息分子.到目前为止,已有近300种的多糖化合物从天然产物中分离出来,其中植物提取水溶性多糖最为重要.从植物中提取多糖主要根据不同溶解度来选择溶剂进行。香菇多糖的提取方法一般有热水提取法,酸提取法,碱提取法,酶提取法和微波助提法等方法.. 1.1.香菇多糖的组成及理化性质 香菇多糖又称香蕈、椎耳、香信、冬菰、厚菇、花菇,英文名:Lentinan。香菇是我国传统的著名食用菌,在世界上最早人工驯化栽培。香菇营养丰富,味道鲜美,被视为“菇中之王。

香菇多糖(LentinanLNT) 是一种β—1,3—葡聚糖,是从担子菌纲伞菌科真菌香菇子实体中提取分离纯化获得的均一组分的多糖.多糖以甘露糖为主,含少量的葡萄糖,微量的岩藻糖,半乳糖,木糖,阿拉伯糖等;肽链由天冬氨酸,组氨酸,丝氨酸,赖氨酸,谷氨酸等18种氨基酸组成.LNT的化学结构是一种以β—D—[1~3]葡萄糖残基为主链,侧链为(1—6)葡萄糖残基的葡聚糖,平均分子量约为50万道尔顿。 香菇多糖成品为白色粉末状固体,对光和热稳定。在水中溶解度为3g/L;能溶解于0.5mol/L氢氧化钠,溶解度可达50g/L-100g/L;不溶于甲醇、乙醇、丙酮等有机溶剂中。香菇多糖具有吸湿性,在相对湿度为92.5%,温度为25摄氏度的环境中放置15天,吸水量可达40%。 1.2营养价值 香菇含有的10余种氨基酸,其中有异亮氨酸、赖氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、苏氨酸、缬氨酸等7种人体必需的氨基酸及维生素B1、B2、PP及矿物盐和粗纤维等。 香菇中含不饱和脂肪酸甚高。除了含有还含有麦角甾醇(ergosterol)外,还有菌甾醇(fungi sterol),尤其所含大量麦角甾醇可转变为维生素D,有增强人体抗疾病和预防感冒的功效; 香菇中还有腺嘌呤(eriadenine)和胆碱,可预防肝硬化和血管硬化; 香菇中又含酪酸氧化酶,有降低血压的功效。 香菇中还分离出降血清胆固醇的成分(C6H11O4N5,C9H11O3N5) 香菇多糖能提

高聚物分子量及其分布测定技术

高聚物分子量及其分布测定技术 郑伟国 中国民航学院理学院,天津 300300 weiguozhejiang@https://www.doczj.com/doc/d33896691.html, 摘 要:研究高聚物分子量及其分布对洞察其聚合机理、裂解机理、溶液性 质、力学性质和加工性能等具有重要的理论和现实意义。本文综述并评价了目 前国内外高聚物分子量及其分布研究领域的主要技术。 关键词:数均分子量 重均分子量 Z 均分子量 粘均分子量 高聚物的分子量有两个基本特征:一是分子量大;二是具有多分散性,即同一种聚合物, 其分子量的大小可以各不相同[1]。因此,讨论某一种聚合物的分子量有多大并无意义,只有 讨论其平均分子量才具有应用价值。根据统计方法的不同,聚合物的平均分子量存在多种不同形式。常用的有数均分子量n M 、重均分子量w M 和粘均分子量ηM n M 和Z均分子量。我们用/表示分子量分布宽度,称为分子量分布指数w M n M [2] 。/越大,说明分子量分布越宽。 w M 当外界条件固定时,可应用聚合物的性质与分子量成函数关系这一特性,来测定其分子量的统计平均值。由于聚合物的不同性质与分子量有不同的依赖关系,因而根据不同的测试手段获得的分子量的平均值是不同的。即如果所用的测定方法不同,就要采用不同的统计平均方法。具体如下: 数均分子量:端基分析法、沸点升高法、冰点降低法、膜渗透压法(MO )、气相渗透压法(VPO ); 重均分子量:光散射法、小角激光光散射法(LALLS )、凝胶色谱法、超速离心沉降平衡法; Z均分子量:超速离心沉降速率法、凝胶渗透色谱法(GPC ); 粘均分子量:粘度法。 1.高聚物数均分子量及其分布的测定 1.1 端基分析法[3] 测定范围:用于相对分子量小于2×104的高聚物分子量的测定,是一种绝对法。 适用对象:适用于线形高聚物分子量的测定,也可用于测定聚合物的支链数目。 优点:操作简便,快捷,结果准确。 计算公式:t t n xw x n w M ==/.其中为聚合物的质量(克),n w t 表示试样中被分析的端基的摩尔数,x 代表高聚物中含被分析端基的个数。 - 1 -

多糖类药物分子量及其分布测定

多糖类药物分子量及其分布测定的意义和方法,各种分子量的介绍,介绍国内外分析方法的建立方法及对比,以低分子肝素为例。有EP & BP 方法和USP 方法 一、原理 ?凝胶渗透色谱(Gel Permeation Chromatography, GPC)测定多糖分子量及分子量分布 ?或高效分子排阻色谱(High performance size exclusion chromatography, HPSEC) ?检测器:紫外( ultra-violet , UV , 200~400nm)和 ? 示差(refractive index, RI) 1. UV 检测器 ?具有共轭双键的化合物都具有紫外吸收 共轭双键 →π π 和n → π 电子跃迁,从而导致紫外吸收 由光源产生波长连续可调的紫外光或可见光,经过透镜和遮光板变成两束平行光,无样品 通过时,参比池和样品池通过的光强度相等,光电管输出相同,无信号 产生;有样品通过时,由于样品对光的吸收,参比池和样品池通过的光强度不相等,有信号产生。根据朗伯—比尔 定律,样品浓度越大,产生的信号越大, 这种检测器灵敏度高,检测下限约为 10-10 g /ml ,而且线性范围广,对温度和流速不敏感,适于进行梯度洗脱。 2. 示差折光检测器 ?示差折光检测器是根据不同物质具有不同折射率来检测的。 ?凡是具有与流动相折射率不同的组分,均可以使用这种检测器。 ?示差折光检测器分为反射式和折射式两种。 ?反射式的原理:光在两种不同物质界面的反射百分率与入射角和两种物质的折射率成正 比。如果入射角固定,光线反射百分率仅与这两种物质的折射率成正比。光通过仅有流动相的参比池时,由于流动相组成不变,故其折射率是固定的;光通过样品池时,由于存在待测组分而使折射率改变,从而引起光强度的变化,测量光强度的变化,即可测出该组分浓度的变化。 ?示差折光检测器的优点是通用性强,操作简便;缺点是灵敏度低,最小检出限约为 10-7 g/ml 。 ? 3.平均分子量的表示方法 数均分子量(Number-average molecular weight ) 按聚合物中含有的分子数目统计平均的分子量 高分子样品中所有分子的总重量除以其分子(摩尔)总数 式中,Wi ,Ni ,Mi 分别为i-聚体的重量、分子数、分子量 i = 1-∞ 数均分子量是通过依数性方法(冰点降低法、沸点升高法、渗透压法、蒸汽压法) 和端基滴定法测定 重均分子量( Weight-average molecular weight ) 是按照聚合物的重量进行统计平均的分子量 C H C H C H C(O) ∑∑∑∑∑ = = = ) (i i i i i i i n M W W N M N N W M

多糖的分子量与分子量分布测定

多糖的分子量与分子量分布测定标准操作规程 1. 目的: 建立多糖的分子量与分子量分布测定的标准操作规程。 2. 依据: 《中华人民共和国药典》2000年版二部。 3. 范围: 适用于药品中多糖的分子量与分子量分布的测定。 4. 职责: QC 检验员对本标准的实施负责。 5. 程序: 5.1. 对仪器的一般要求: 色谱柱为测多糖专用凝胶柱(按所测样品的分子量大小选择特定排阻范围的凝胶 柱)。检测器为示差折光检测器。 5.2. 系统适用性试验: 按各品种项下要求对仪器进行适用性试验,规定分析状态下色谱柱的最小理论板数 式中t R 为供试品峰的保留时间; t o 为完全被填料颗粒网孔排阻的大分子的保留时间,一般指蓝色葡聚糖的保 留时间 t T 为能自由进出填料颗粒网孔的小分子的保留时间,一般指葡萄糖的保留时间 5.3. 测定法: 系统校正:根据供试品分子量大小,一般选用 5个已知分子量的多糖标准品 (常用的为葡聚糖)分别用流动相制成每 1ml 中约含10mg 的标准溶液,分别取上述标准溶 液25卩I ,注入液相色谱仪,记录色谱图。由GPC 专用软件绘制标准曲线,得线性回归方程: 1gM w =a+bt R 式中 M W 为标样的已知重均分子量; t R 为标样的保留时间。 (n )和供试品在该分析状态下的分配系数( K d )应达到规定的要求 K d = t R — t o

样品测量:取供试品溶液25 d注入液相色谱仪,记录色谱图,按下式计算 分子量: M n=E Rl i/艺(Rl i/M i) M w=E ( Rl i M i) /艺Rl i D =M w/M n 式中M n 为数均分子量; Rl i为为样品i级分的物质量,即供试品在保留时间i的峰高; M i为样品i级分的分子量,即供试品在保留时间i的分子量。 54结果处理: 采用GPC专用软件,可获得供试品归一化色谱图,微分、积分分子量分布图,各时间点的分子量(片段数据)和各种平均分子量。根据供试品需要选择各项测定结果。

多糖检测方法

多糖的检测方法 关于多糖含量测定,业内有两种评价方法。 一种是狭义上严格的多糖测定,即水提取多糖后,以凝胶色谱柱分离、洗脱提纯粗多糖得到较单一分子量的多糖,再水解成各种单糖,以HPLC法分离测定各单糖,即可得到比较严格意义上的多糖含量及其组成。这种方法是科研级的多糖测定。 另一种评价方法一般是生产企业用于质控的多糖测定:一般过程是水提醇沉粗多糖后,以葡萄糖作为相比较的物质,加入特定显色剂后比色测定粗多糖的含量。注意,这种方法测得的是以葡萄糖作为折算的多糖含量。但这种评价方法简单实用,能反映一定的质量指标,作为质控之用可以的了。包括中国药典和一些国标、行标都采用此方法评价多糖含量,方法大同小异,如硫酸-苯酚法,硫酸-蒽酮法。但根据不少实际检验人的反映,要想检测结果有很好的重现性,还是有很多细节问题要注意的。 粗多糖测定 多糖的测定方法,目前有碱性酒石酸铜滴定法、比色法(蒽酮比色法、硫酸-苯酚法)。一般说来,比色法的优点是灵敏度高,样品用量少;但缺点是一般做常规检测时使用葡萄糖作标准品,误差较大,应以被测物的纯品作对照品,以求出换算因子,但要制备被测物的纯品并非每个实验室所能做到的,而且保健食品中往往是多种中草药的提取物作为原料而制成,所含多糖是不同相对分子量多糖的混合体,这就给提取纯品增加了难度。所以当成品中多糖含量大于1%(质量浓度)时,最好选用碱性酒石酸铜滴定。 滴定法 1.样品预处理 取本品适量,精密称定,置于250ml磨口烧瓶中,精密加水50ml,称定重量,置沸水 浴回流2小时,放置至室温,用水补足减失重量,混匀,滤过,精密吸取续滤液15ml于100ml 离心管中,加无水乙醇75ml,混匀,以4000r/min离心10min,并小心弃去上清液,再加15ml 热水(温度>90℃)冲洗离心管中沉淀物,重复一次后再以4000r/min离心30min,弃去上清液,沉淀用乙醇液(水:乙醇=15:75)洗涤两次,离心,弃去洗涤液。 2.样品水解 将离心管中醇析物用50ml热水(温度>90℃)少量多次转移至250ml磨口三角瓶中,加入15ml浓盐酸,开启冷凝管,在沸水浴中回流2h,冷却,先用40%的氢氧化钠(约15ml)粗调Ph值,后用稀的氢氧化钠溶液细调,再置于PH计上调整pH在6.8~7.2之间。将中和的酸解液移置至100ml容量瓶中,加水定容至刻度,摇匀,过滤,滤液供滴定用。 3.碱性酒石酸钾钠铜溶液标定 3.1精密吸取碱性酒石酸铜甲、乙液各5ml于150ml的锥形瓶中,加10ml蒸馏水及2 粒玻璃珠,用滴定管加入9.0ml葡萄糖标准溶液于锥形瓶中。 3.2将锥形瓶置电炉上迅速加热,务必在2分钟内至沸,并保持溶液在微沸状态下再用标准葡萄糖溶液滴定,以每2秒1滴的速度滴定至蓝色刚好褪去为终点,记录消耗葡萄糖标准溶液的总体积。同法平行操作三份,取其平均值(V1)。 3.3样品溶液预测和测定。 3.3.1 样品溶液的预测 精密吸取碱性酒石酸铜甲、乙液各5ml于150ml的锥形瓶中,精密加入10ml蒸馏水及2粒玻璃珠,控制在2分钟内加热至沸,保持溶液在微沸状态下以先快后慢的速度,从滴定管中滴加样品水解液液进行滴定,直至溶液蓝色刚好褪去为终点,记录葡萄糖标准溶液消耗体积。 3.3.2样品溶液的测定 精密吸取碱性酒石酸铜甲液与乙液各5.0ml,置于150ml锥形瓶中,精密加入蒸馏水10ml 及玻璃珠2粒,从滴定管滴加比预测体积少1ml的样品水解液,将锥形瓶置电炉上迅速加热,务必在2分钟内至沸,并保持溶液在微沸状态下再用样品水解液滴定,以每2秒1滴的速度滴定至蓝色刚好褪去为终点,记录消耗葡萄糖标准溶液的总体积。同法平行操作三份,得出平均消耗体积(V2)。 最后计算结果乘以0.9,此为葡萄糖换算成粗多糖的细数。

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