干细胞技术临床应用常见的不良反应：1．干细胞本身可能引起的反应：
1.1 发热：常常是由于细胞碎片吸收造成，通常体温不超过38.5℃。可以对症处理、严密观察。如果体温超过38.5℃，就要考虑感染的可能，急查各项化验,并早期应用抗生素。
1.2 过敏反应：又称为变态反应（Allergy），多在1～10分钟后出现，但也有在几日后出现的。主要表现为平滑肌收缩，毛细血管通透性增加，粘膜腺体分泌增多，在症状上常可见到皮肤红肿、皮疹、荨麻疹、搔痒、斑块，或喉部、气管、支气管和胃肠痉挛或水肿。全身症状可导致血压下降、心率加快、皮肤苍白、水肿脉弱；严重者可出现休克，甚至死亡。应对方法：传统抗过敏药多为抗组胺药和激素类药，对症治疗。
1.3致瘤性：有文献报道干细胞治疗有致瘤性情况的存在，但一般见于胚胎干细胞，且多代培养，本研究所所用的细胞均为成体干细胞而且传代较少，不容易出现致瘤性。
2．临床操作可能引起的反应：
脑脊液循环途径，在临床操作中有可能引起以下不良反应。
2．1 头痛：其原因常是由于滴放脑脊液较多或脑脊液由蛛网膜及硬脑膜穿刺针孔外漏造成脑脊液减少、颅内压降低，使支配脑膜的三叉神经感觉支及血管组织牵拉移位引起头痛。通常发生在腰椎穿刺后1-7天内，最长可延续致2周。
应对方法：可口服大量盐水、饮料，以补充液体，或静脉滴注0.9%盐水或5%葡萄糖液500---1000ml。
2．2 复视：腰椎穿刺术后，如脑脊液持续由硬脑膜穿刺孔外漏，则可使脑脊液减少，颅内压降低，展神经在颞骨的岩脊上被牵拉或移位，造成单侧或双侧展神经麻痹，眼球运动障碍，出现复视，可同时伴有腰椎穿刺术后头痛，经数日或数周后部分或完全恢复正
常。
2．3 腰痛：常因穿刺损伤纵行韧带、神经根，或脊髓核内胶状物流入蛛网膜下腔的脑脊液所致。
预防应对方法：在操作时将穿刺针斜面必须与纵行韧带平行穿刺，不会切断纵行韧带纤维，穿刺时减少损伤，如发生腰背痛，常持续数月或更长时间。
将干细胞悬液注入硬膜外腔等原因也可以造成腰背痛。
预防应对方法：加强操作基本功训练。
2．4 感染：细菌感染轻微的可无全身症状，感染较重的常有发热、头痛、全身不适、乏力、食欲减退等，一般均有白细胞计数增加和核左移。必要时，还可进行一些辅助检查，如化验、超声波、X 线检查和核素检查等。对疑有全身性感染者应抽血液作细胞培养检查，但一次阴性结果并不表示不存在全身性感染，应多作几次细菌培养检查，以明确诊断。
预防：总的原则是增强人体的全身和局部抵抗力，减少致病菌进入人体的机会。
3．干细胞动员药物造成的不良反应：
3.1 骨骼系统：有时会有肌肉酸痛、骨痛、腰痛、胸痛的现象。
3.2 消化系统:有时会出现食欲不振的现象，或肝脏谷丙转氨酶、谷草转氨酶暂时升高。
3.3 有人会出现发热、头疼、乏力及皮疹，ALP、LDH 升高。
3.4 极少数人会出现休克、间质性肺炎、成人呼吸窘迫综合征、幼稚粒细胞增加。
4．原有神经系统疾病的症状加重：
按病因进行针对性治疗；严密观察，尽快控制症；一旦出现上述症状，应及时向医学部汇报，以便尽快使问题得到解决。
干细胞治疗脊髓损伤新突破，瘫痪患者有希望站起来 提到脊髓损伤，大家应该会想起中国体操选手桑兰。1998年，她在参加第四届美国友好运动会时，不幸在热身练习中失足摔倒，造成颈椎错位，脊髓损伤。即便经过长达10个月的辛苦治疗，仍然无法站立，于轮椅上生活。 脊髓损伤究竟是什么样的疾病？它是指外力作用而造成的脊髓灰制和白质受损，神经通路中断，引起脊髓功能改变，最终导致患者的脊髓细胞死亡，上行下行纤维传导中断，身体失去知觉，甚至落下终生残废的病根。 据相关统计，在世界上每年会增加大约1万的脊髓损伤患者，而损伤时的平均年龄为31.7岁。在我国，现有超过200万的脊髓损伤患者等待治疗。在患者出现脊髓损伤后，会有以下几个症状：
（1）运动障碍： 脊髓处于休克期时，脊髓损伤节段以下患者会出现软瘫、反射能力下降甚至消失的症状。而休克期过后，受到脊髓横断伤的患者会出现上运动神经元性瘫痪，对生活造成极大不便。 （2）失去知觉： 脊髓损伤患者对损伤面以下的痛觉、触觉、温度觉和本体觉的感知衰弱甚至消失。 （3）括约肌功能不全： 患者主要会表现为尿潴留、无法随意排尿。若是脊神经损伤则会出现尿失禁的症状，也无法正常排泄大便。 在一个多世纪以来，科学家不断尝试使用神经移植、大网膜移植、手术减压、药物治疗、局部冷冻、物理康复等多种手段治疗脊髓损伤，在不同程度上有所缓解病况，却无法达到根治。我国科学家经过十多年的研究，成功利用间充质干细胞引导脊髓再生，如今仍在不断探索中。 （1）2015年，中科院科学家基于干细胞治疗脊髓损伤的多数临床实验数据，成功治愈部分患者，在治疗后患者均有明显的感觉功能与运动功能的改善。 （2）2017年，科学家通过间充质干细胞移植，为因脊髓损伤而瘫痪的患者进行2年的治疗，让患者成功地站了起来。 （3）2018年，《Cell Stem Cell》上报道了4名慢性脊髓损伤、腰部以下运动和能完全丧失的患者的治疗情况，他们在接受干细胞治疗过程中并未出现不良反应，且治疗后患者出现了微小改善。 干细胞治疗脊髓损伤具有明显的效果，其数据也让众多学者欣喜，因此国家点名支持干细胞治疗。干细胞治疗有望让脊髓损伤患者重新站起来！
附件2 造血干细胞移植技术临床应用 质量控制指标 (2017年版) 一、造血干细胞移植适应证符合率 定义:造血干细胞移植术适应证选择正确得例数占同期造血干细胞移植术总例数得比例。 计算公式: =×100% 意义:体现医疗机构开展造血干细胞移植技术时,严格掌握适应证得程度,就是反映医疗机构造血干细胞移植技术医疗质量得重要过程性指标之一。 二、异基因造血干细胞移植植入率 定义:异基因造血干细胞移植术后100天内,实现造血重建(患者外周血中性粒细胞＞0、5×109/L与血小板＞20×109/L)得患者例次数占同期异基因造血干细胞移植患者总例次数得比例。 计算公式:
=×100% 意义:反映医疗机构造血干细胞移植技术水平得重要指标之一。 三、重度(ⅢⅣ度)急性移植物抗宿主病发生率 定义:急性移植物抗宿主病(aGVHD),就是指造血干细胞移植术后100天内,由于移植物抗宿主反应而引起得免疫性疾病,主要表现为皮疹、腹泻与黄疸,就是异基因造血干细胞移植得主要并发症与主要死亡原因。重度(ⅢⅣ度)急性移植物抗宿主病发生率,就是指异基因造血干细胞移植术后发生重度(ⅢⅣ度)急性移植物抗宿主病患者例次数占同期异基因造血干细胞移植患者总例次数得比例。 计算公式: =×100% 意义:体现医疗机构对不同移植方式造血干细胞移植术后aGVHD预防水平,就是反映医疗机构造血干细胞移植技术医疗质量得重要过程性指标之一。 四、慢性移植物抗宿主病发生率
定义:慢性移植物抗宿主病(cGVHD),就是指造血干细胞移植术100天后,由于移植物抗宿主反应而引起得慢性免疫性疾病。慢性移植物抗宿主病发生率,就是指异基因造血干细胞移植术后发生慢性移植物抗宿主病患者例次数占同期异基因造血干细胞移植患者总例次数得比例。 计算公式: =×100% 意义:体现医疗机构对造血干细胞移植术后cGVHD预防水平,就是反映医疗机构造血干细胞移植技术医疗质量得重要过程性指标之一。 五、异基因造血干细胞移植相关死亡率 定义:异基因造血干细胞移植术后100天内非复发死亡患者数占同期异基因造血干细胞移植患者总数得比例。 计算公式: =×100% 意义:体现医疗机构对造血干细胞移植术后患者得综合管理水平,就是反映医疗机构造血干细胞移植技术医疗质量
综 述 内源性神经干细胞治疗脊髓损伤的研究进展 胡 博 综述 尹宗生 审校 2010-11-10接收 作者单位:安徽医科大学第一附属医院骨科,合肥 230022作者简介:胡 博,男,硕士研究生; 尹宗生,男,教授,博士生导师,责任作者,E ma i :l yi nzong sheng @si na .co https://www.doczj.com/doc/d311779964.html, 摘要 成体脊髓本身存在一定数量的神经干细胞,称为内源性神经干细胞(EN SCs)。ENSC s 对脊髓损伤(SC I)的作用越来越受到关注并可能成为SC I 最有潜力的治疗方式。现对神经干细胞(NSC s)生物学特性、SC I 后N SCs 的反应及抑制其分化因素的分析,阐述了EN SCs 治疗SCI 的优势及意义,对近几年来促进EN SCs 修复SC I 的研究现状进行了综述。主题词 脊髓损伤/治疗自由词 内源性神经干细胞中图分类号 R 681 54;R 322 8 文献标识码A 文章编号1000-1492(2011)01-0083-04 脊髓损伤(sp i n al cor d i n j u ry ,SC I)是一类临床常见的严重致残性疾病,SC I 的治疗至今仍是医学界的难题之一。目前的治疗方式有很多,但是效果一直不令人满意。自从1992年R eynolds 和W e iss 首先从小鼠纹状体中分离而获得的神经干细胞(neura l ste m cells ,NSC s)以来,对于它的特性研究已经成为当今细胞基础实验研究的焦点 [1] 。人们注 意到成体脊髓本身存在一定数量的NSC s ,称为内源性神经干细胞(endogenous neural ste m cells ,EN SCs),这些ENSCs 在SC I 后可以大量增殖 [2] 。目 前,E NSCs 的作用逐渐突显,特别在ENSCs 治疗脑疾病方面的研究已取得了一定进展[3] 。同时,EN SCs 对SC I 的作用也受到关注并可能成为SC I 最有潜力的治疗方式。现对E NSCs 的特征、在SC I 治疗中的意义及相关研究与进展进行综述。1 N SCs 的分布及生物学特性 成年哺乳动物中枢神经系统(central nervous syste m,C NS)存在有未分化的NSC s ,当其受到损伤刺激时静息态的NSCs 被激活,在诱导因子的作用下向损伤部位迁移并重新进入细胞增殖周期进一步分化为特定功能的神经细胞。神经系统受到损伤时,这些细胞可以复苏并分裂增殖来取代坏死的神 经元,促进神经系统功能恢复。目前已有实验证明,成年哺乳动物脑内有两个区域可产生大量的神经元,它们是海马结构的颗粒下区(subg ranu l a rzone , SGZ)和侧脑室下区(subventricu lar one ,SVZ),然而对于脊髓中ENSCs 存在的位置尚不十分明确,但在室管膜区和脊髓实质均能培养出ENSCs [4] 。成年NSC s 增殖和迁移成为神经祖细胞(neura l progenitor ce lls,NPC s)有两种方式。第一种方式认为:位于中央管的室管膜层的干细胞缓慢增殖,这些细胞的自我更新和分化在一定的条件下不对称性分裂,并迁移到脊髓的外层,分化为可增殖的胶质祖细胞或者成熟的脊髓胶质细胞 [5] 。第二种方式认为:无论是 干细胞或是神经胶质祖细胞都可能存在于脊髓实质或独立增殖的室管膜,在成人的脊髓白质细胞中的 大部分祖细胞产生一定的变异,可表达1个或多个标志物如硫酸软骨素蛋白多糖(CSPGs)NG2或转录因子O li g 2和Nkx212[4] 。这些细胞部分为多能干细胞,另一部分为胶质祖细胞并能转向少突胶质细胞。ENSCs 能自我更新,并分化成神经元细胞、星形胶质细胞(ast rocy tes ,AS)、少突胶质细胞。如果能将ENSCs 更多的向神经元分化,则能促进成体脊髓神 经元生发,修复SC I [6] 。 2 SCI 后EN SC s 的反应及抑制其分化的因素 外伤性SCI 可引起周围神经元和神经胶质细胞的病变,导致神经元和神经系统功能障碍和通路的损坏。该损伤的病理演变主要分为两个阶段: 脊髓主要受损部位的细胞和组织损伤; 脊髓非主要 受损部位的继发性损伤。已经有实验证明[7] ,成人脊髓祖细胞能对损伤进行反应,NPCS 的分裂,迁移和炎症等能诱导祖细胞产生反应。虽然脊髓中的祖细胞能通过支持和参加髓鞘再生以及替代损伤的神经元的方式参与脊髓修复,但是其在成年脊髓中的损伤修复却有很多抑制因素。现对ENSCs 抑制因素的研究发现主要有以下几方面。2.1 瘢痕组织的形成对神经再生的影响 CNS 损伤会启动一系列与形成瘢痕组织相关的细胞及分子间的反应,以阻止损伤的进一步扩大,并可持续数天
神经干细胞与脊髓损伤修复 脊髓损伤（spinal cord injury, SCI）大多源于交通伤、坠落伤、暴力或运动伤等。SCI的发生随着各种创伤发生率的增高而日益增多，患者多数为健康的青壮年，损伤后常出现截瘫、下肢功能障碍甚至死亡，因此给个人、家庭、社会带来巨大负担。在美国，据统计大约有200，000人患有慢性损伤性SCI，并以每年新发10，000 SCI病例的速度递增，每年用于治疗SCI的费用超过40亿美元。 十余年来由于对脊髓损伤的机制、病理生理研究的不断深入及手术器械、方法的不断改进，脊柱骨折脱位的复位因定、解除脊髓压迫的方法及时机、药物治疗、康复治疗等治疗方案也随之取得了很大的进步。近年来随着神经病理生理及神经发育学研究的不断深人，神经组织或非神经组织移植逐渐应用于脊髓损伤并取得了肯定的成绩［1］。 5脊髓损伤的病理机制 脊髓损伤导致血一脊髓屏障被破坏，局部缺血缺氧，多种炎性因子进入损伤区域，触发细胞坏死和凋亡等相联效应。炎性因子在损伤残存神经细胞的同时，还会造成脊髓创伤区边缘脊髓组织的损伤。因此，早期预防继发损伤是治万脊髓损伤的重点。从病理生理机制角度分析，脊髓损伤后出现的局部微环境改变也是造成神经系统再生失败的重要原因。局部微环境变化包括,①损伤造成神经细胞死亡，血一脊髓屏障破坏造成脊髓内环境失衡。②细胞毒性物质造成缺血再灌注损伤。③损伤后多种抑制性因子表达于细胞表面。④反应性胶质细胞大量增殖，其形成的胶质疲痕及再生抑制分子阻止了轴突再生和跨越损伤区。 定义是一类具有多向分化潜能, 能够自我复制, 在特定诱因下, 能够向神经元或神经胶质细胞分化的未分化细胞的总称。它是神经系统形成和发育的源泉。其主要功能是参与神经系统损伤修复或细胞凋亡的更新 发现时间1992年，Reynodls等从成年小鼠脑纹状体中分离出能在体外不断分裂增殖，且具有多种分化潜能的细胞群，并正式提出了神经干细胞的概念，从而打破了认为神经细胞不能再生的传统理论。 特点⑴自我更新：神经干细胞具有对称分裂及不对称分裂两种方式，从而保持干细胞库稳定。对称分裂由一个神经干细胞产生两个神经干细胞；在特定诱因下进行非对称分裂，会产生神经干细胞和神经胶质细胞（astrocyte,oligodendrocyte)。⑵多向分化潜能：神经干细胞可以向神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞分化，其分化与局部微环境（niche）密切相关。⑶低免疫源性：神经干细胞是未分化的原始细胞，不表达成熟的细胞抗原，可以不被免疫系统识别。⑷良好的组织融合性：可以与宿主（即接受神经干细胞移植的患者）的神经组织良好融合，并在宿主体内长期存活。 3神经干细胞的生物学特性 神经干细胞有高度增殖自我更新及分化能力其生物学特性可以归纳为以下几点①分化性通过不对称分裂产生除自身以外的其他细胞分化形成神经细胞星形胶质细胞和少突胶质细胞等②迁移性能到达损伤或疾病的部位并产生新的神经细胞③趋化性神经干细胞具有位置特异性的分化潜能可生成神经组织细胞④免疫原性免疫原性较弱在移植后免疫排斥反应较轻有利于移植物的存活⑤良好的组织相容性;⑥可长期存活。神经干细胞的这些特性为干细胞移植及移植后的组织结构重建提供了重要依据,
大鼠的骨髓间充质干细胞提取 第一步，SD大鼠麻醉处死，75%乙醇皮肤消毒，无菌条件下迅速剪开两侧后肢皮肤及肌肉，取股骨及胫骨，浸泡在PBS中。 心得体会：①鼠龄4周，重量在160-200g之间的雄性SD大鼠。老鼠太老了，骨髓都分化的太厉害，没有年幼老鼠的骨髓这么有活力。雌的也行，但是雌的比较厉害，咬人。Wistar 大鼠行不行，也行，但是就品种而言，SD的生存力更强大。 ②我个人认为引颈处死不人道。麻醉药品为氯胺酮、安定、阿托品各一支混到一起，腹腔麻醉，保证30秒老鼠躺倒，安乐死。如果你水平够高，可以直接用注射器抽取心脏内的血液，可以减少手术中老鼠出血较多而影响术野不清的问题。 ③老鼠的两支前肢取下来也行，但老鼠太小，前肢更小，如果你的确需要大量的细胞取下来也无妨。浸泡的15ml的一次性离心管中（也可以用培养皿），管中提前加好含有青链霉素的PBS 10ml就行了，青链霉素的浓度为500U／ml，这样是区别于生长液中青链霉素浓度，组织抑菌是200-500U／ml，生长液抑菌是20-100U／ml。就当初步的消毒吧！ ④整个手术过程要快，一般控制在20分钟之内，时间长了，骨髓会凝，不利于后期的冲洗。老鼠浑身都是宝，可以叫上研究脂肪的，嗅鞘的，心肌的其他人员一起来，把剩下不要的老鼠尸体给别人，做实验要巧花钱。一般老鼠一条腿的一根股骨就够种在一个60mm的皿里了，具体根据个人经验而言。 第二步，⑴将装有骨头的离心管置于紫外线下消毒30分钟后移至超净台，倒掉PBS后，再用含青链霉素的PBS清洗骨头三遍。 ⑵去掉骨头两侧的骨骺端，暴露出骨髓腔，用5ml的一次性注射器吸取5.2ml的细胞生长液，用针头插到骨头的一端冲洗，然后换另一端接着冲。将骨髓冲出的细胞生长液至60mm培养皿中（皿最好倾斜45度），冲洗数次直至将绝大部分骨髓冲出。 ⑶换1ml注射器的针头，反复在培养皿中吹吸细胞悬液2-3次后再全部吸到无菌容器中，大约此时的细胞悬液为5ml。 心得体会： ①离心管中得骨头要用无菌的镊子夹取，放到一次性培养皿的皿盖上，皿是用来承装细胞悬液的，这样可以节省一个皿。 ②5.2ml的细胞生长液经过冲骨髓后或多或少都会有一些残留在骨髓中，所以到最后可能就剩下5ml细胞悬液了，甚至更少，如果不够5ml，可以加至5ml，这样是方便你计数用的。冲洗的过程中以骨腔颜色变白为标准，基本3-4次就差不多。培养皿倾斜45度是为了在冲洗和吹打过程让较大的杂质停留，方便去除的，相对保持细胞悬液的清晰度。 ③换用1ml的针头是为了能更好的打散细胞，当然这个过程要轻柔，避免用力破坏细胞。无菌容器最好是光滑的，因为在转移细胞悬液的时候会存在细胞的丢失，临床上经常使用的抗生素瓶子就非常好用，但是要经过严格的清洗和消毒。 ④以上的细胞生长液5ml具体配制为 DMEM(90%)+胎牛血清(10%)+L-VC(忽略不计)+青链霉素(忽略不计) 低糖DMEM液（含有glutamine的，Gibco公司的，500ml一瓶，大约60元）浓度90%，5ml 细胞生长液中大约需要4.5ml
干细胞临床应用典型病例 多年来国内外干细胞研究进展及临床试验取得了丰硕的成果。干细胞几乎成为治疗各种疾病的理想工具。干细胞治疗帕金森氏综合症，脑瘫，脑外伤；干细胞治疗心肌梗死．治疗糖尿病，治疗慢阻肺；干细胞治疗白血病．治疗痛症，治疗不孕不育等。人类在想象干细胞所能做到的一切，付之行动并努力实践。几乎每天，世界各地都会有新的干细胞的研究进展及临床试验成果不断传来。 干细胞移植被广泛用来治疗的疾病就是癌症。利用干细胞治疗癌症的做法已逐步得到突破，目前有关这方面的临床试验超过500 项，几乎每一种恶性肿瘤都受到调查。在其中许多临床试验中，干细胞都用于替换那些被化疗杀死的细抱。糖尿病患者体内就下能产生胰岛素．需要每天注射。这种疾病是因患者体内免疫系统中产生胰岛素的细胞受损引起的，干细胞疗法的目标是取代这些免疫细胞。在美国西北大学正在进行的一项试验中．患者在接受完化学治疗后，会被注入从骨髓提取的干细胞。研究人员表示：“根据我们的推测，经过重新调整的免疫系统将对阻止自身产生胰岛素的细胞展开攻击，使得这些细胞再生。“神经系统疾病干细胞疗法还为帕金森氏综合症和其它众多神经系统疾病患者的康复提供了希望。这种疗法的目标是，将干细胞变成能产生多巴胺的神经细胞，以替代因疾病丧失的细胞。多巴胺是在大脑中形成的一种单胺神经传递索，能将信息传递到负责协调活动的大脑各个部分。研究人员正在探索的治疗方法是将干细胞移植到需要多巴胺的大脑目标位置。在大脑遭到损伤的儿童中．约四分之一最终不幸死亡。日前尚不存在逆转大脑损伤影响的任何疗法，但科学家在动物身上进行的研究表明，从骨髓提取干细胞能改善治疗效果。美国德克萨斯州已开始实施一项涉及年龄在5 岁到14 岁之间、大脑严重受损的儿童的临床试验。他们会在大脑受损后36小时内被注射干细胞，以观察干细胞疗法对大脑恢复情况的作用。研究表明干细胞最终有助于修复大脑损伤。英国有近300 万人患心脏病。干细胞疗法已用于处理心脏病发作造成的损伤，生成新血管的临床试脸。这一疗法的目标是，在心脏病发作后，给患者注入干细胞，这有助于抑制受损程度，生成新的心脏肌肉．增强心脏跳动能力。第二个目标是注射干细胞．生成新的血管，改变受损区域血液和氧气输送通道。多发性硬化症患者的髓磷脂会被免疫系统细胞破坏或摧毁。髓磷脂是神经细胞周围的保护涂层。干细胞疗法的目标是，利用化学疗法摧毁出现问题的免疫系统，使干细胞取代它们的位置。据美国国家卫生院过敏和传染病研究所及“免疫耐受网”称，他们赞助的一项初步研究发现，在19名多发性硬化症患者当中．18名在接受干细胞疗法治疗后，病情趋于稳定或有较大改善。《超人》电影系列中“超人’" 的扮演者克里斯托弗·里夫在一次事故中身体瘫痪．他是倡导干细胞研究的重要人士之一。尽管大规模临床试验目前尚无法实施．但研究人员报告说他们成功利用干细胞治愈了一些瘫痪患者。这种疗法的概念是，干细胞能生长成神经细胞．替代那些永远无法修复的细胞，在背髓受损片断之间的空隙架起一座“侨梁”。阿根廷研究人员就报告说成功令两名瘫痪患者恢复活动能力。骨折治疗方法多年来一直变化不大，夹板、绷带和石膏仍是治疗骨折的主要材料。科学家目前正在对利用干细胞修复断骨进行临床试验，这有可能使治疗骨析的方式发生翻天复地的变革。研究人员还在研究用干细胞和生长因子修复骨骼碎片，加速骨骼痊愈的概念。另外，他们在积极研究利用干细胞疗法医治引起骨骼脆弱的骨质疏松症。随着年龄增加，我们的骨质流失速度超过生长速度，结果引起骨质疏松症．干细胞疗法则有助于恢复这种平衡。 一、干胞治疗肿瘤性疾病的临床典型病例 患者．男，41岁。经诊断右肺癌20月余，脑及脑膜转移7月余。患者出现发作性头晕．失忆．伴语言障碍，每次持续约30 - 45 分钟逐渐缓解．第1周期全身化疗后第2天反复出现头晕、语言表达及认知障碍，并出现痫性发作1次．持续约1分仲后缓解，4天后腰推穿刺及鞘内化疗，于当日下午出现情绪激动、烦躁、躁动，伴意识及言语不清，口角流涎，化疗
干细胞临床研究治疗资料 干细胞治疗适应症： 1、干细胞移植治疗神经系统疾病如：脑瘫、脊髓损伤、运动神经元病、帕金森病、脑出血、脑梗塞后遗症、脑外伤后遗症等; 2、干细胞移植治疗免疫系统疾病如：糖尿病、皮肌炎、肌无力、血管病变、硬化病、白血病等; 3、干细胞移植治疗其他疾病：如肝病、肝硬化、股骨头坏死等; 干细胞功能作用： 重建系统 利用造血干细胞移植既可重建造血系统,又可重建免疫系统重建系统,目前是白血病、淋巴瘤、再生障碍性贫血等恶性和非恶性血液病以及部分免疫系统缺陷疾病的一种成熟常规的治疗手段。 细胞替代治疗 利用间充质干细胞、心肌干细胞等成体干细胞、iPS细胞进行神经系统疾病、心脏疾病、糖尿病、肝病等疾病治疗,技术尚未成熟,干细胞移柱时间、细胞数量以及移植后长期安全性仍需探索。 组织工程 体外以干细胞为种子细胞培育成一些组织器官,用来替换人体衰老和病变的组织器官,组织和器官同时也可作为药物检测平台和疾病
模型,距离治疗性人体器官克隆仍有很多关键性问题尚待解决。 基因治疗 干细胞是基因治疗的理想靶细胞,为目的基因持续稳定表达创造条件,用于临床尚有许多难以突破困难,如何在提高基因转移效率,使基因持久表达的同时防止基因整合所致的癌变,疗效仍不肯定。 国际干细胞研究发展 随着干细胞基本原理和相关技术的成熟和更新,以及监管政策的不断转暖,各国已纷纷加快干细胞的临床研究,列入国家科技的战略必争领域。据统计,全球约近100多个重要干细胞研究中心,美国和加拿大有50个先进中英国大约有20个,欧洲其他地区大约25个,亚太地区约30个中心主要在韩国及日本在国际干细胞研究领域,美国一直保持着绝对领先的地位,,美国一直大力支持包括成体千细胞在内的千细胞研FDA至今己批准数百个千细胞临床应用研究。欧洲和亚洲国家也纷纷加快干细胞各个层次的研究,英国药品与保健产品监管局(MHRA)己许可针对视网膜黄斑变性开展干细胞人体治疗试验;以色列Pluristem公司最先宣布基于其人胎盘来源贴壁细胞专利技术治疗重度下肢缺血症的药物PLX-PAD已在德国进入临床试验；日本从2000年即启动的“千年世纪工程”,将干细胞工程作为四大重点之一,并在诱导性多能干细(iPS)领域处于世界领先地位,。印度药品管理局早先即批准了干细胞产品的第一个临床试验。根据美囯囯立卫生研究院管理的临床研究登记系统(C| inicaltria|sgov)数据显示,截止至2016年5月,全球登记的干细胞临床研究项目共5496项主要是成体千细胞临床试验,涉及血液病、肿瘤、神经系统疾病、心脏疾病、免疫系统疾病等领域,其中美国保持绝对领先的地位,德国、法国等欧洲国家紧随其后,在亚洲,中、韩、日三国也是干细胞研究的热点地区。 全球共批准8个干细胞药物，中国并未在其列。
动物骨髓干细胞细胞分离液试验方法 货号：P8600 规格：200mL 保存：常温保存，有效期2年。本品易感染细菌，需无菌条件操作。无菌条件下操作，启 封后置常温保存。如4℃保存，本分离液易出现白色结晶，影响分离效果。 产品内容： 名称规格 动物骨髓干细胞分离液200mL 匀浆冲洗液200mL 样本稀释液200mL 清洗液200mL 洗涤液200mL 无菌硅化离心管5支 实验前准备： 1、适用仪器 最大离心力可达1200g的水平转子离心机 骨髓单细胞悬液的制备： 1.以适当方式处死动物，剥离出股骨或胫骨，用剪刀剪断骨头两端，露出内腔。 2.用注射器吸取适量（根据动物大小）的匀浆冲洗液冲洗出内腔中的骨髓。 3.收集悬液到合适离心管中，反复吹打成单细胞悬液，以70μm细胞筛网（随试剂盒附赠5个）过滤。 4.450g，离心10min，弃上清。 5.用样本稀释液重悬细胞浓度为2×108-1×109/ml的单细胞悬液备用（以小鼠为例，一般使用1ml样本稀释液重悬骨髓细胞）。 检验方法： 全过程样本、试剂及实验环境均需在20±2℃的条件下进行。 1.取一支离心管，加入与骨髓单细胞悬液等量的分离液（注：分离液最少不得少于3ml）。
2.用吸管小心吸取骨髓单细胞悬液加于分离液液面上，400-550g，离心20-30min。（注：根据骨髓单细胞悬液量确定离心条件，骨髓单细胞悬液量越大，离心力越大，离心时间越长，具体离心条件需客户自行摸索，以达到最佳分离效果）。 3.离心后，此时离心管中由上至下分为四层。第一层为稀释液层。第二层为环状乳白色目的细胞层。第三层为透明分离液层。第四层为红细胞层。 4.用吸管小心吸取第二层环状乳白色目的细胞层到另一15ml离心管中，向离心管中加入5-10ml洗涤液，混匀细胞。 5.400g，离心10min。 6.弃上清。 7.用吸管以5ml清洗液重悬所得细胞。 8.250g，离心10min。 9.重复7、8、9，弃上清后以0.5ml后续实验所需相应液体重悬细胞。 差异贴壁法纯化细胞： （1）用干细胞无血清培养基或干细胞完全培养基以1.5-3×106个/ml的密度重悬细胞，将细胞铺于一次性细胞板或细胞瓶中，放于37℃二氧化碳培养箱中进行贴壁培养。 （2）2-4小时内贴壁的为巨噬细胞前体（俗称为单核细胞）。 （3）10-24小时内贴壁的单个核细胞为内皮、内皮祖细胞、干细胞。 （4）不贴壁的为淋巴细胞。
干细胞在医学中的应用 摘要：干细胞(stem cells, SC)是一类具有自我复制能力(self-renewing)的多潜能细胞，在一定条件下，它可以分化成多种功能细胞。根据干细胞所处的发育阶段分为胚胎干细胞(embryonic stem cell，ES细胞)和成体干细胞(somatic stem cell)。根据干细胞的发育潜能分为三类：全能干细胞(totipotent stem cell,TSC)、多能干细胞（pluripotent stem cell）和单能干细胞（unipotent stem cell）。干细胞(Stem Cell)是一种未充分分化，尚不成熟的细胞，具有再生各种组织器官和人体的潜在功能，医学界称为“万用细胞”。 关键字：胰岛干细胞、神经组织细胞、皮肤干细胞、干细胞、脐血干细胞、成人干细胞、骨髓干细胞、胚胎干细胞 前言：干细胞即为起源细胞。简单来讲，它是一类具有多向分化潜能和自我复制能力的原始的未分化细胞，是形成哺乳类动物的各组织器官的原始细胞。干细胞在形态上具有共性，通常呈圆形或椭圆形，细胞体积小，核相对较大，细胞核多为常染色质，并具有较高的端粒酶活性。干细胞可分为胚胎干细胞和成体干细胞。 胚胎干细胞（Embryonic stem cell）的发育等级较高，是全能干细胞（Totipotent stem cell），而成体干细胞的发育等级较低，是多能干细胞或单能干细胞。据文献报导干细胞是一类具有自我更新和分化潜能并保持未分化状态的细胞。它包括胚胎干细胞和成体干细胞。干细胞的发育受多种内在机制和微环境因素的影响。目前人类胚胎干细胞已可成功地在体外培养。最新研究发现，成体干细胞可以横向分化为其他类型的细胞和组织，为干细胞的广泛应用提供了基础。 在胚胎的发生发育中，单个受精卵可以分裂发育为多细胞的组织或器官。在成年动物中，正常的生理代谢或病理损伤也会引起组织或器官的修复再生。胚胎的分化形成和成体组织的再生是干细胞进一步分化的结果。胚胎干细胞是全能的，具有分化为几乎全部组织和器官的能力。而成体组
中国组织工程研究与临床康复
第 13 卷 第 36 期 2009–09–03 出版
September 3, 2009 Vol.13, No.36
Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research
学术探讨
干细胞移植治疗脊髓损伤的临床应用现状
王连仲，王永才，闻 华，尹忠民，江晓莲，刘甲才，王 磊，王金刚，张激扬，杨志明，陈 实，董玉书，王 琦，张佳相，吴 静
Clinical application of stem cell transplantation in treating spinal cord injury
Wang Lian-zhong, Wang Yong-cai, Wen Hua, Yin Zhong-min, Jiang Xiao-lian, Liu Jia-cai, Wang Lei, Wang Jin-gang, Zhang Ji-yang, Yang Zhi-ming, Chen Shi, Dong Yu-shu, Wang Qi, Zhang Jia-xiang, Wu Jing
Abstract: Research progress regarding the nerve stem cell in repairing spinal cord injury was slow due to the strict and expensive separation and purification techniques of the nerve stem cells, even though nerve stem cells therapy did not involved in ethics dispute. The embryo stem cell are used for treating the spinal cord injury at the early time, which could survive, migrated to the spinal cord damage spot, differentiate into the neuron after transplant, but its clinical practice is blocked by ethics questions and limited resource, as well as the latent oncogenicity of the undifferentiating embryo stem cells. The marrow stem cell has the stem cell essential feature and plasticity, which could anchor a kind of organization and differentiate into this organ cell under certain signal influence, meanwhile, the marrow stem cell, can secrete some nutrients that promoted endogene cell multiplication and growth. Compared with other transplant cell, the marrow stem cell is characterized by easy to separate and good organization compatibility, therefore, it is suitable for the clinical practice. Tough the transplant way of stem cell treatment the spinal cord injury had 3 kinds at present roughly: by partial plant way, by lumber puncture and by vein way, it was still not clear which way was the most appropriate one.
Wang LZ, Wang YC, Wen H, Yin ZM, Jiang XL, Liu JC, Wang L, Wang JG, Zhang JY, Yang ZM, Chen S, Dong YS, Wang Q, Zhang JX, Wu J.Clinical application of stem cell transplantation in treating spinal cord injury.Zhongguo Zuzhi Gongcheng Yanjiu yu Linchuang Kangfu. 2009;13(36): 7193-7196. [https://www.doczj.com/doc/d311779964.html, https://www.doczj.com/doc/d311779964.html,]
Department of Neurosurgery, the 463 Hospital of Chinese PLA, Shenyang 110042, Liaoning Province, China Wang Lian-zhong, Chief physician, Master’s supervisor, Department of Neurosurgery, the 463 Hospital of Chinese PLA, Shenyang 110042, Liaoning Province, China ben_2169@https://www.doczj.com/doc/d311779964.html, Received: 2009-04-25 Accepted: 2009-05-26
摘要：神经干细胞不牵涉伦理学纠纷，但体外分离纯化技术要求严格，费用昂贵，使得神经干细胞在脊髓损伤修复中的应
用研究进展缓慢。胚胎干细胞最早用于治疗脊髓损伤，移植后胚胎干细胞能够存活并且向脊髓损伤部位迁移分化成神经元， 但由于取材来源的限制以及难以回避的伦理学问题成为其临床应用的障碍，此外未分化的胚胎干细胞具有潜在的致瘤性。 骨髓干细胞除具备干细胞的基本特点外，还具有可塑性，表现为骨髓干细胞在某些信号的影响下，锚靠一类组织并分化成 该组织细胞，同时骨髓干细胞能够分泌一些营养物质促进内源性细胞的增殖和生长。与其他移植细胞相比，骨髓干细胞易 于提取分离，可行自体移植且组织相容性好，因此便于临床应用。对于干细胞治疗脊髓损伤的移植方式，目前大体有 3 种： 局部种植、经腰穿途径、经静脉途径，但尚不清楚何种方式更合适。 关键词：脊髓损伤；干细胞；移植 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2009.36.041 王连仲，王永才，闻华，尹忠民，江晓莲，刘甲才，王磊，王金刚，张激扬，杨志明，陈实，董玉书，王琦，张佳相，吴 静 . 干 细 胞 移 植 治 疗 脊 髓 损 伤 的 临 床 应 用 现 状 [J]. 中 国 组 织 工 程 研 究 与 临 床 康 复 ， 2009 ， 13(36):7193-7196. [https://www.doczj.com/doc/d311779964.html, https://www.doczj.com/doc/d311779964.html,]
0 引言 脊髓损伤的修复一直是神经外科医师面 临的一大难题。自本世纪初Allen等[1]对脊髓损 伤进行实验研究以来，医学前驱们先后试用了 手术吻合、手术减压、神经移植、大网膜移植、 药物治疗、局部冷冻、物理康复以及应用酶制 剂来抑制和消除结缔组织瘢痕等多种方法治 疗脊髓损伤
[2-4]
基础研究工作，并于2003年开始逐步把干细胞 治疗应用于临床研究和治疗， 至2008-12已治疗 脊髓损伤400余例。 1 问题的提出
问题1：脊髓损伤的临床症状和病理过程的特 点？ 问题2：神经干细胞、胚胎干细胞、骨髓干细胞 作为现阶段研究较为广泛的种子细胞，用于脊髓损伤 移植时的效果怎样？哪种细胞更适合治疗脊髓损 伤？ 问题3：目前临床应用干细胞移植治疗脊髓损伤 的进展现状？ 问题4：干细胞移植治疗脊髓损伤面临的技术问 题？
解放军第四六三 医院神经外科， 辽 宁 省 沈 阳 市 110042 王连仲， 1949 男， 年生， 江苏省南京 市人，汉族，主任 医师，硕士生导 师， 主要从事脊髓 损伤方面的研究。 ben_2169@163. com
中图分类号:R394.2 文献标识码:B 文章编号:1673-8225 (2009)36-07193-04 收稿日期： 2009-04-25 修回日期： 2009-05-26 (20090321001/ZS· Z)
， 虽然这些方法在不同程度上缓
解了脊髓损伤的病理改变，但其后果仍不可避 免地造成了患者截瘫。 近10年来由于现代医学技术和基础医学 的迅速发展，医学工作者对脊髓损伤修复的治 疗有了新的认识。解放军第四六三医院神经外 科从2001年初开始了干细胞治疗脊髓损伤的
ISSN 1673-8225 CN 21-1539/R CODEN: ZLKHAH
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壹、計畫說明 長期以來造血幹細胞捐贈的傳統觀念中，認為骨髓捐贈是「抽龍骨水」，以至於願意捐贈造血幹細胞的民眾並不多，然而，骨髓捐贈並非抽龍骨水，而現在更有一種新的捐贈方式－週邊血幹細胞捐贈，是多數民眾所不知。台灣每年仍有約300位血癌患者需要尋找非親屬捐贈者，在血液病患日漸增加的情況下，我們更需要持續不斷推廣捐贈造血幹細胞的正確認知，讓民眾在正確的認知下，重新思考捐贈造血幹細胞的意義。 為推動造血幹細胞捐贈，希望透過宣導進而達到提升捐贈率的效果，並藉此將辦理「因為有愛-微電影創意影片」之徵選活動，向民眾徵求創意，吸引更多人加入捐贈行列。 貳、報名資格 一、一般民眾、不限年齡。(歡迎學校及社團踴躍參加) 二、個人或組隊報名均可，一組最多五人。 三、為符合公平原則，已獲得國內外獎項之作品，均不得參賽，違者取消參賽 資格。 四、不拘任何表現方式，發揮創意用5分鐘以內影片投稿參賽。 五、參賽作品不得使用非法取得下載之音樂、影像或影片片段。參賽者若有抵 觸任何著作權之法律，一切法律責任由參賽者承擔。 六、參賽者之作品如涉及智慧財產權者，主辦機關取得全部權利。 七、本活動之參賽作品，無論入選與否，一經送件即視為同意本活動評審所有 規則，並同意授權主辦單位得自行運用相關業務範圍內，對所有參賽作品 之公開發表、公開展示、公開播放、影像及圖文宣導、攝影、重製、改作、 編輯、印製、散布、出版、網頁製作、下載傳輸等相關非商業行為之用途， 日後不得有異議。且不另支付稿費及版稅，參賽者無異議亦不另行索取費 用。
參、徵件期間： 一、報名收件日期：即日起至6月30日止。以郵戳為憑，逾期恕不受理。 二、初審結果公佈：102年7月15日(一) 三、網路投票期間：102年8月1日～8月31日 請上「骨髓幹細胞中心Facebook粉絲團」投票 四、決審：102年9月 五、公布優勝結果：102年9月 六、頒獎典禮：102年本中心週年慶活動(預計9月) 七、成績公佈：公布於活動網站及慈濟骨髓幹細胞中心網站 肆、創作主題 須與造血幹細胞捐贈方式緊密連結，且畫面上需呈現自行設計的標語。 伍、作品規格： 一、類型：不限(劇情片、紀錄片、動畫短片皆可) 二、相關規格： 1.片長：嚴格規範5分鐘以內(包含片頭與片尾) 2.拍攝工具：不限 3.影片格式：像素至少720(W)x480(H)的avi/mov/mpg格式。 4.輸出格式：mpeg格式 5.參賽影片畫面大小至少720x480，最大不得超過1,920x1,080。 6.請將原始影片格式及輸出之mpeg格式，以數位檔案存於隨身碟中或以 CD/DVD-R片燒錄轉檔成之作品繳交。 7.提交作品不予退還，未符合作品競賽規格者不另行通知與退件。
干细胞的生物学特性 干细胞是一类具有自我更新、高度增殖和多向分化潜能的原始细胞群体,按其分化能力分为以下3类。 2. 1全能干细胞其具有形成完整个体的分化潜能。如胚胎干细胞( embryonic stem cell, ESC) ,来源于受精卵囊胚期内细胞团组织或早期胚胎的生殖嵴细胞,此外,还可以采用体细胞克隆技术获得。ESC属于起源细胞,具有分化为内、中、外3 个胚层的所有细胞的全能性;同时表达高水平的端粒酶活性,在胚胎状态能进行无限的增殖;具有正常的核型及染色体,表达阶段特异性胚胎抗原,如人类ESC表达SSEA-3、SSEA-4、TRA-1-60和TRA-1-81,还表达Oct4、Fgf4、H2az、Foxd3、Nanog和Sox2 等与多能性有关的关键蛋白[ 3 ]。1998年美国的Thomson等首次在国际上建立人ESC株,促进了ESC研究的飞速发展,展示出巨大的医学应用前景。 2. 2多能干细胞这种干细胞具有分化为多种细胞、组织的潜能,但丧失发育成完整个体的能力,发育潜能受到一定的限制。。例如内皮干(祖)细胞( endothelial p rogenitor cell, EPC) , 骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC )等。 2. 3单能干细胞只能向1 种类型或密切相关的2 种类型的细胞分化。如上皮组织基底层的干细胞。 干细胞(stem cells, SC)是一类具有自我复制能力的多潜能细胞,在一定条件下,具有再生各种组织器官和人体的潜在功能,又称为“万用细胞”。根据发育阶段将其分为胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES细胞)和成体干细胞(somatic stem cell)2种。 干细胞做为一种新型的治疗方法，临床上广泛应用各种疾病的治疗，干细胞是一种未分化完全的细胞，还没有可以产生排斥的抗原，所以只要分离，提纯达到标准，是不会出现排斥反应的。干细胞是能够通过人工诱导在身体内长成任何类型的细胞或者组织的原始活细胞。 干细胞研究的学术与技术进展 1867年，德国病理学家Cohnheim教授在研究伤口愈合时，首次提出骨髓中存在着非造血干细胞的观点，指出纤维母细胞可能来源于骨髓。1945年，科学家们将正常老鼠的骨髓移植到经过放射线照射过的老鼠身上后发现骨髓移植可以使这些老鼠恢复健康。 1950年，研究证明骨髓移植能挽救遭受致死剂量辐射的动物。 1960年，加拿大科学家詹姆士·堤尔和恩尼斯特·莫科洛克发现并命名造血干细胞。 1967年，美国华盛顿大学的多纳尔·托马斯在《新英格兰医学》杂志报告说，如果将正常人的骨髓移植到患者体内，可以治疗造血功能障碍。 1969年，多纳尔·托马斯教授完成了第一例骨髓移植，并因此而获得1990年诺贝尔医学和生理学奖。 1970年3月，第一次尝试用8份脐血治疗一位16岁的白血病患者，虽然没有发生移植物抗宿主病发应，但移植失败。后经化疗成功治愈。1974年，Friedenstein 从骨髓中分离得到间充质干细胞（MSC） 1981年，美国华盛顿大学的Martin教授建立了小鼠胚胎干细胞系。1985年，Piersma证实MSC存在多向分化潜能。
在20世纪末和21世纪初干细胞的研究取得了突破性进展,主要进展包括两个方面:一是成功建立了可以分化为人体任何组织类型的成熟细胞的人类胚胎干细胞(embryonicstemcells,ES)系,这是干细胞研究的重大里程碑和生命科学的重大技术突破[1];二是发现成人各种组织中均有未分化成熟的干细胞分布,这类干细胞的基本功能是在生理条件下更新正常衰老死亡的细胞,维护组织或器官的结构完整和正常功能,而在组织损伤等病理条件下可动员、增殖和分化为成熟的功能细胞,修复损伤[2]。传统认为,特定组织中的干细胞只能向它所存在组织类型的成熟细胞分化,而这一观点目前受到挑战。许多研究结果证明,一种组织中的干细胞不但可以分化为它所在组织类型的成熟细胞,而且在特定的条件下或移植到其他组织中,还可以被诱导分化为其它无关组织类型的成熟细胞,有的还可打破胚层限制,分化为不同胚层的成熟细胞[3,4]。比如骨髓组织中的干细胞不但可分化为各种血液细胞,还可分化为脑神经细胞,脑组织中的干细胞可以分化为神经细胞,移植到受致死量放射线照射的小鼠骨髓组织中,也可以重建造血免疫功能。最近还有人从骨髓、神经等组织获得具有与ES细胞特性相似的成体干细胞,这类细胞可以在特定条件下分化为三个胚层的多种类型的成熟细胞。成人体内的干细胞虽然数量稀少,但由于其可塑性强,取材容易,可实现自体化治疗,避免了ES细胞或异体细胞治疗的免疫排斥、伦理和未知病源感染等问题。干细胞的研究进展极大地促进了生命科学研究和生物技术产业的发展,同时也预示着一些目前难以治愈的疾病可能由于干细胞的研究与应用而得到有效治疗,因此在最近几年受到相关研究者和社会各阶层的广泛重视。 1干细胞研究技术的新进展 干细胞是一类未分化的细胞或原始细胞,是具有自我复制能力的多潜能细胞。在一定的条件下,干细胞可以分化成机体内的多种功能细胞,形成任何类型的组织和器官,以实现机体内部建构和自我康复能力。根据细胞的发育阶段,干细胞可分为来源于早期胚胎的胚胎干细胞(embryonicstemcell,ESCs)和存在于成人各组织中的成体干细胞(adultstemcell,ASCs)。人类ESCs可来源于桑椹球细胞、囊胚内细胞团或拟胚体细胞等[5,6],还有发现从流产胎儿生殖脊分离获得的生殖原基细胞(embryonicgermcell,EGCs)和从畸胎瘤组织分离获得的多能干细胞也具有与ESCs类似的生物学特性,即具备分化为成人所有组织类型的成熟细胞的潜能[7,8]。1998年,美国科学家从人囊胚内细胞群分离培养胚胎干细胞(embryonicStemCells)并建立细胞系,与此同时,美国的另一研究小组从妊娠5~9周的胎儿生殖脊组织中也分离获得胚胎干细胞样细胞,此后,科学家从畸胎瘤组织、成人骨髓、胎盘,甚至外周血中均分离获得胚胎干细胞样细胞,这些进展为人类认识和利用干细胞前进了一大步[9,10]。当受精卵分裂发育成囊胚时,将内细胞团(innercellmass)分离出来进行培养,在一定条件下,这些细胞可在体外“无限期”地增殖传代,同时还保持其全能性,因此被称为胚胎干细胞。胚胎干细胞在培养条件下,若加入白血病抑制因子LIF(leukaemiainhibitoryfactor),则能保持在未分化状态,若去掉LIF,胚胎干细胞迅速分化,最终产生多种细胞系,如肌肉细胞、血细胞、神经细胞或发育成“胚胎体”。 1997年,英国科学家利用核移植技术已发育成熟的体细胞移植到去核卵母细胞中,在体外条件下成功将成体细胞的发育时钟拨回到最原始状态,然后启动其发育和分化机制,再历经了像天然受精卵发育那样的胚胎干细胞的发育和分化,胚胎形成和组织器官的发育,最终诞生一个新的生命体,表明成体细胞在合适的条件下可以返老还童,关键在于如何创造这种适于细胞返老还童的条件和土壤。依据上述原理,科学家怀疑成人组织细胞的更新与修复可能源于其中存在具有多向分化潜能的干细胞或逆向分化机制,于是对成体干细胞进行了深入研究。1999年,美国科学家MargarelGoodell发现小鼠肌肉组织干细胞可以“横向分化”(transdifferentiation,转分化)成血液细胞,这一发现很快被世界各地的科学家证实,并且发现其他组织来源的人成体干细胞同样具有“横向分化”的功能[11,12]。现在已证明人的骨髓干细胞可以分化为肝脏细胞、肌肉细胞、神经细胞等。这种横向分化具有相当的普遍性,