第十章弧菌和弯曲菌
弧菌属(Vibrio)广泛分布于自然界,尤以水中为多，有100多种。主要致病菌为霍乱弧菌和副溶血弧菌（致病性嗜盐菌）。前者引起霍乱；后者引起食物中毒。
弯曲菌属（Camphlobacter）形态似弧菌，因G+C含量与弧菌不同，因此另立新属为弯曲菌属。对人致病的主要是空肠弯曲菌和肠道弯曲菌。前者引起急性肠炎，较为常见；后者是人体免疫力下降时的机会致病菌，较少见。
本间介绍霍乱弧菌和空肠弯曲菌。
第一节霍乱弧菌
霍乱弧菌（V.cholera）是人类霍乱的病原体,霍乱是一种古老且流行广泛的烈性传染病之一。曾在世界上引起多次大流行，主要表现为剧烈的呕吐，腹泻，失水，死亡率甚高。属于国际检疫传染病。
霍乱弧菌包括两个生物型：古典生物型（Classical biotype）和埃尔托生物型（EL-Tor bio-type）。这两种型别除个别生物学性状稍有不同外，形态和免疫学性基本相同，在临床病理及流行病学特征上没有本质的差别。自1817年以来，全球共发生了七次世界性大流行，前六次病原是古典型霍乱弧菌，第七次病原是埃尔托型所致。
1992年10月在印度东南部又发现了一个引起霍乱流行的新血清型菌株（0139），它引起的霍乱在临床表现及传播方式上与古典型霍乱完全相同，但不能被01群霍乱弧菌诊断血清所凝集，抗01群的抗血清对0139菌株无保护性免疫。在水中的存活时间较01群霍乱弧菌长，因而有可能成为引起世界性霍乱流行的新菌株。
一、生物学性状
（一）形态与培养特性
新从病人分离出古典型霍乱弧菌和EL tor弧菌比较典型，为革兰氏阴性菌，菌体弯曲呈弧状或逗点状，菌体一端有单根鞭毛和菌毛，无荚膜与芽胞。经人工培养后，易失去弧形而呈杆状。取霍乱病人米泔水样粪便作活菌悬滴观察，可见细菌运动极为活泼，呈流星穿梭运动。营养要求不高，在PH8.8～9.0的碱性蛋白胨水或平板中生长良好。因其他细菌在这一PH不易生长，故碱性蛋白胨水可作为选择性增殖霍乱弧菌的培养基。在碱性平板上菌落直径为2mm,圆形，光滑，透明。
霍乱弧菌能还原硝酸盐为亚硝酸盐，靛基质反应阳性，当培养在含硝酸盐及色氨酸的培养基中，产生靛基质与亚硝酸盐，在浓硫酸存在时，生成红色，称为霍乱红反应，但其他非致病性弧菌亦有此反应，故不能凭此鉴定霍乱弧菌。El Tor型霍乱弧菌与古典型霍乱弧菌生化反应有所不同。前者Vp阳性而后者为阴性。前者能产生强烈的溶血素，溶解羊红细胞，
在血平板上生长的菌落周围出现明显的透明溶血环，古典型霍乱弧菌则不溶解羊红细胞。个别El Tor型霍乱弧菌株亦不溶血。
（二）抗原性
根据弧菌O抗原不同，分成Ⅵ个血清群，第Ⅰ群包括霍乱弧菌的两个生物型。第Ⅰ群A、B、C三种抗原成份可将霍乱弧菌分为三个血清型：含AC者为原型（又称稻叶型），含AB者为异型（又称小川型），A、B、C均有者称中间型（彦岛型）。
（三）抵抗力
霍乱弧菌古典生物型对外环境抵抗力较弱，EL-Tor生物型抵抗力较强，在河水、井水、海水中可存活1～3周，在鲜鱼，贝壳类食物上存活1～2周。
霍乱弧菌对热，干燥，日光，化学消毒剂和酸均很敏感，耐低温，耐碱。湿热55℃，15分钟，100℃，1～2分钟，水中加0.5ppm氯15分钟可被杀死。0.1%高锰酸钾浸泡蔬菜、水果可达到消毒目的。在正常胃酸中仅生存4分钟。
二、致病性和免疫性
（一）致病性
人类在自然情况下是霍乱弧菌的唯一易感者，主要通过污染的水源或饮食物经口传染。在一定条件下，霍乱弧菌进入小肠后，依靠鞭毛的运动，穿过粘膜表面的粘液层，可能藉菌毛作用粘附于肠壁上皮细胞上，在肠粘膜表面迅速繁殖，经过短暂的潜伏期后便急骤发病。该菌不侵入肠上皮细胞和肠腺，也不侵入血流，仅在局部繁殖和产生霍乱肠毒素，此毒素作用于不粘膜上皮细胞与肠腺使肠液过度分泌，从而患者出现上吐下泻，泻出物呈“米泔水样”并含大量弧菌，此为本病典型的特征。
霍乱肠毒素本质是蛋白质，不耐热，56℃经30分钟，即可破坏其活性。对蛋白酶敏感而对胰蛋白酶抵抗。该毒素属外毒素，具有很强的抗原性。现已能将该毒素高度精制成晶状，仍保持极强的生物学活性。
霍乱肠毒素致病机理如下：毒素由A和B两个亚单位组成，A亚单位又分为A1和A2两个肽链，两者依靠二硫链连接。A亚单位为毒性单位，其中A1肽链具有酶活性，A2肽链与B亚单位结合参与受体介导的内吞作用中的转位作用。B亚单位为结合单位，能特异地识别肠上皮细胞上的受体。1个毒素分子由一个A亚单位和4℃6个B亚单位组成多聚体。霍乱肠毒素作用于肠细胞膜表面上的受体（由神经节苷脂GM1组成），其B亚单位与受体结合，使毒素分子变构，A精致单位进入细胞，A1肽链活化，进而激活腺苷环化酶（AC），使三磷酸腺苷（ATP）转化为环磷酸腺苷（cAMP），细胞内cAMP浓度增高，导致肠粘膜细胞分泌功能大为亢进，使大量体液和电解质进入肠腔而发生剧烈吐泻，由于大量脱水和失盐，可发生代谢性酸中毒，血循环衰竭，甚至休克或死亡。
（二）免疫性
患过霍乱的人可获得牢固的免疫力，再感染者少见。病人在发病数日，血液中即可出现特异性抗体，7℃14天抗体滴度达高峰，随后逐渐下降至较低水平，但能持续约3个月之外。病后小肠内可出现分泌型lgA。体液抗体与免疫的关系尚不清楚，一般认为局部SlgA可在肠粘膜与病菌之间形成免疫屏障，有阻断粘附和中和毒素的作用。
三、微生物学诊断
由于霍乱流行迅速，且在流行期间发病率及死亡率均高，危害极大，因此早期迅速和正确的诊断，对治疗和预防本病的蔓延有重大意义。
（一）直接镜检
采取病人“米泔水样”大便或呕吐物。镜检（涂片染色及悬滴法检查）观察细菌形态，动力特征。
（二）细菌分离培养
可将材料接种至碱性蛋白胨水37℃培养6～8小时后，取生长物作形态观察，并转种于碱性平板作分离培养，取可疑菌落作玻片凝集，阳性者再作生化反应及生物型别鉴定试验。
（三）特异性制动试验
取检材或新鲜碱性蛋白胨水培养物一滴，置于载玻片上，再加霍乱弧菌多价诊断血清，加盖玻片，用暗视野镜观察，3分钟内运动被抑制的即为阳性，此法优点是快速而特异操作简便，但必须有数量较多的弧菌才检出。
（四）免疫荧光试验
除一般免疫荧光法外，还可用荧光菌球法检查。
四、防治原则
必须贯彻预防为主的方针，作好对外交往及入口的检疫工作，严防本菌传入，此外应加强水、粪管理，注意饮食卫生。对病人要严格隔离，必要时实行疫区封锁，以免疾病扩散蔓延。
人群的菌苗预防接种，可获良好效果，现用加热或化学药品杀死的古典型霍乱菌苗皮下接种，能降低发病率。这种苗菌对EL-Tor 型霍乱弧菌感染也有保护作用，但持续时间短，仅3-6个月。近年来，有使用口服菌苗（大剂量、反复服用），类毒素及类毒素与死菌的混合疫苗等，这些尚待现场验证，才能下结论。
治疗主要为及时补充液体和电解质及应用抗菌药物如链霉素、氯霉素、强力霉素、复方SMZ-TMP等。
第11章弧菌属（Vibrio） 弧菌属：菌体短小，弯曲成弧形的革兰阴性菌。广泛分布于自然界，以水表面最多。 一、霍乱弧菌（V ibrio cholerae） （一）生物学性状 1. 形态与染色：G－，弧型或逗点状，单鞭毛；液体中，运动非常活泼，呈穿梭样；涂 片中，排列整齐，呈鱼群状。人工培养后呈杆状。 2. 培养特性：耐碱不耐酸，在pH8.8～9.0的碱性蛋白胨水、碱性琼脂平板上生长良好－－ 增菌。能在无盐培养基中生长（区别其它弧菌）在TCBS培养基上生长。 过氧化氢酶阳性，氧化酶阳性，能发酵常见的单糖、双糖和醇糖，产酸不产气。 3. 抗原构造与分型：根据O抗原不同，现已有155个血清群，其中O1群、O139群引起霍乱，两者在抗原性方面无交叉。 △根据表型差异，O1群霍乱弧菌可分为两个生物型：古典生物型和El T or生物型。 4.抵抗力：El Tor生物型和其它非01群霍乱弧菌，在外环境中的生存力较古典型为强。 对热和一般消毒剂敏感。 （1）不耐干——干燥时易死亡，水环境中可存活两周（水源性传播，水性爆发） （2）不耐酸——正常胃酸4min （3）不耐热——100℃，1-2min （4）对氯敏感 二、致病性与免疫性 （一）致病物质 1.霍乱肠毒素：已知最强致泻毒素 （1）A亚单位（1个）——使细胞内cAMP水平升高，主动分泌Na+、K+、HCO3－和水， 导致严重的腹泻与呕吐。 （2）B亚单位（5个）——与小肠粘膜上皮细胞GM1神经节苷脂受体结合，介导A亚单 位进入细胞。 2. 鞭毛：鞭毛运动有助于细菌穿过肠粘膜表面粘液层而接近肠壁上皮细胞。 菌毛：是细菌定居于小肠所必须的因子。 （二）所致疾病 1. 霍乱：烈性肠道传染病，甲类法定传染病。在自然情况下，人类是霍乱弧菌的唯一易感者。 传染源：患者及无症状感染者。 传播途径：粪-口途径，通过污染的水源或食物如海产品（贝壳类） 正常胃酸条件下，10*8细菌方能引起感染。 2. 临床表现：剧烈的腹泻和呕吐（米泔水样腹泻），大量水分和电解质丧失（1L/H），代谢 性酸中毒、低碱血症、低容量性休克和肾衰竭（死亡率高达60％）。 3. 临床分期： 1)潜伏期：2-3天 2)吐泻期：剧烈吐泻、米泔样，每日数十次，持续2-3天 3)脱水期：严重吐泻引起水电解质紊乱，脱水酸中毒，肾衰、循环衰竭、休克、死亡 4. 表现：神志不安、淡漠“霍乱面容”， 脱水貌：眼窝下陷，舟状腹，肌痉挛等 5. 恢复期：吐泻停止、紊乱纠正、症状消失、病程平均为3-7天
弧菌属常规鉴定 :弧菌属分类上归弧菌科. 生物学特性::革兰氏阴性菌,直或弯曲.月牙形大部分菌种为兼性厌氧.氧化酶实验为阳性.具有鞭毛.运动活泼如穿梭状. 常规鉴定分两步:与相近的菌属鉴别.定属后在做种的鉴定 一,与相似的菌属的区别: 弧菌属的弧菌科,同科中有气单胞菌属,邻单胞菌属,均为氧化酶阳性,F,弧菌与其的区别,可依嗜血性,甘露醇,氧化酸盐O/129敏感性的区别见表: 弧菌科3个菌属特性的鉴别 特性气单胞菌属邻单胞菌属弧菌属 甘露醇+ - +/- 鸟氨酸- + +/- 精氨酸+/- + +/- 嗜血性- - +/- O/129敏感R R S 弧菌属的鉴定: 目前我院临床细菌室对霍乱弧菌的鉴定,一般的作初步鉴定,方法如下: 1.直接涂片: 2.悬滴检查:取患者粪便做悬滴标本(亦可用压滴法),检查细菌的动力,呈极活泼的穿梭性运 动,O1型霍乱血清制动试验阳性,可做早期推测性报告. 3.染色检查:取米泔样粪便的酶化物,黏液部分涂片,干燥后用乙醇固定,分别用革兰氏染液 1/10稀释的石炭酸副虹染色,干后,油镜镜检,观察有无革兰氏阴性,呈鱼群排列的弧菌,涂片检查,只能做初步参考,不能作确诊依据. 4.玻片凝集试验:自分离平板上挑取可疑菌落,与霍乱多价诊断血清(既O1群霍乱多价血清), 做玻片凝集试验,所用血清效价应在1/80~1/160之间,如过浓,则稀释后再做凝集. 将稀释的血清滴加在清洁的玻片上,挑取可疑菌落混匀于血清中,即刻(一般不超过10S),可见肉眼可见的明显凝集为阳性菌落应以出现销价对照,应不发生血凝 为了提高阳性率应多挑取可疑菌落进行涂片凝集试验.做初步鉴定试验后将此疑似菌退卫生防疫站做最后鉴定. [编写者]: 日期 [科主任签字]:
2019 第十六章弯曲菌属和幽门螺杆菌及检验 一、A1 1、碳标记呼气试验可用于检测哪种病原菌的感染 A、空肠弯曲菌 B、大肠弯曲菌 C、志贺菌 D、幽门螺杆菌 E、霍乱弧菌 2、关于幽门螺杆菌染色正确的是 A、革兰染色着色不匀 B、常用吉姆萨染色 C、革兰阴性 D、芽孢染色阳性 E、荚膜染色阳性 3、弯曲菌属培养特性为 A、需要95%CO2 B、专性厌氧 C、专性需氧 D、厌氧 E、微需氧 4、弯曲菌属显微镜观察显示 A、长丝状 B、蝌蚪形 C、棒形 D、菌体细长呈S形 E、长杆状 5、弯曲菌属属于 A、菌体呈Z形或字母状 B、革兰阴性 C、营养要求不高 D、流星样动力 E、无动力 6、弯曲菌属的细菌特点是 A、海鸥展翅型 B、分支结构 C、具有芽孢 D、革兰染色阳性 E、墨汁染色阳性 7、弯曲菌生化反应的特点是 A、生化反应活泼
B、发酵糖类 C、液化明胶分解尿素 D、VP试验和甲基红试验均阳性 E、氧化酶试验阳性 8、下列哪种病原菌，粪便标本应进行直接检查 A、大肠埃希菌 B、痢疾杆菌 C、结肠炎耶氏菌 D、沙门菌 E、弯曲菌 9、弯曲菌属中引起腹泻的常见病原菌有 A、空肠弯曲菌 B、大肠弯曲菌 C、胎儿弯曲菌 D、黏膜弯曲菌 E、猪肠弯曲菌 10、下列哪种细菌不是厌氧菌 A、产黑素类杆菌 B、肉毒梭菌 C、破伤风梭菌 D、产气荚膜梭菌 E、空肠弯曲菌 11、胎儿弯曲菌是 A、革兰阳性弯曲杆菌 B、革兰阳性杆菌 C、革兰阴性弯曲杆菌 D、革兰阴性小球菌 E、革兰阴性芽胞杆菌 12、培养弯曲菌属常用的培养基是 A、血平板 B、伊红美蓝 C、营养琼脂 D、Skirrow E、庆大培养基 13、脲酶活性最强的细菌是 A、变形杆菌 B、流感嗜血杆菌 C、幽门螺杆菌 D、布鲁菌 E、大肠埃希菌
弧菌病：南美白对虾养殖难以回避的话题 ?https://www.doczj.com/doc/d22766904.html, 2011年04月14日14:37 水产前沿 ?发表评论共有条评论 2010年华南地区的对虾养殖遭受了严重病害，尤其是对虾“偷死”情况严重。虽然种质退化、天气恶劣、养殖密度高、养殖水质恶化等难辞其咎，但从整个疫情上来看，对虾养殖中弧菌贯彻始终，可谓“魅影重重”。 文/江西农业大学动物科学技术学院阮记明黄建珍 上海海洋大学国家水生动物病原库章海鑫王祎 江西福仁德生物科技有限公司金中平 2010年我国的对虾养殖业特别是华南地区的对虾养殖遭受到严重的病害肆虐，其危害程度严重的，发病率和排塘率均在50%以上，个别达到90%。总体去年的对虾病情表现出南北有较大差异的特点。从病情上看，南方病情重于北方，其中海南、粤东、粤西地区受灾最重；从病程上看，南方地区呈现发病范围广、发病速度快、传染性强、发病季节不明显等特点，头造虾减产严重；而以江浙、京津唐为中心的北方养殖区虽也有发病现象，但整体发病率不高、造成的损失不大；从症状上看，南方地区多表现为空肠空胃、偷死等症状，而北方对虾养殖区虽也曾出现了“偷死”现象，但该病整体发病率不高，对虾仍以传统的白斑病、桃拉综合症等为主。关于对虾病害的原因，虽然种质退化、天气恶劣、养殖密度高等难辞其咎，但总的来看，对虾养殖中处处体现出弧菌的身影，可谓“魅影重重”。本文就对虾养殖中的病原弧菌、弧菌病症状和防治等作简要综述，以期为今后对虾的健康养殖提供参考。 1 弧菌及弧菌病 弧菌(vibrio)是海洋环境中常见的细菌类群之一，该类细菌具很强的适应性和抗逆性，因此成为海水环境的优势种群，尤以溶藻弧菌、副溶血弧菌、鳗弧菌等占优势。目前，第九版《伯杰氏细菌学手册》收录了35种弧菌属细菌，在这些弧菌当中，部分种已被认为是鱼类的重要致病菌。据有关报道，鳗弧菌(V．anguillarum)、溶藻弧菌(V．alginolyticus)、哈维氏弧菌(V．harveyi)、灿烂弧菌(V．splendidus)、副溶血弧菌(V．parahaemolyticus)、创伤弧菌(V．vulnificus)、杀鲑弧菌(V．salmonicida)、海利斯顿氏菌(V．pelagius)、美人鱼弧菌(V．damsela)、奥氏弧菌(V．ordalii)、费氏弧菌(V．fischeri)、鲨鱼弧菌( V．carchariae)以及最小弧菌(V．mimicus)等10多种弧菌可以引起鱼类病害。随着人工养殖迅速发展，养殖水域生态变化，弧菌病已经成为海水养殖动物主要的细菌性病害之一。 由弧菌属（Vibrio）细菌引起的弧菌病(Vibriosis)是在世界各地养殖鱼、虾、蟹及贝类等水产动物中普遍流行且危害最大的细菌性疾病，给水产养殖业造成了严重的经济损失。据报道，弧菌属中的鳗弧菌、副溶血弧菌等在弧菌种群中占优势，广泛存在于自然海水中，导致弧菌病在全世界发生，且具有流行广、发病率高、危害大、死亡率高等特点，给鱼、虾、蟹及贝类等海水动物的养殖造成了巨大的影响。 由鳗弧菌、海弧菌、溶藻弧菌和副溶血弧菌引起的疾病统称弧菌病。对虾常见的细菌性疾病有对虾幼体菌血病、烂鳃病、红腿病、烂眼病等，其主要的病原菌为弧菌、假单胞菌、气单胞菌等，其中弧菌科的许多种细菌，是引起对虾类细菌性疾病的重要病原（表1），并且作为海水中的常在菌群，弧菌也存在于健康的甲壳类个体的体内，Gomez等报道了万氏对虾的肝胰脏内可能存在着多种弧菌。当水中弧菌的数量为103-104cfu/mL（cfu/mL：每毫升样品中含有的细菌群落总数）时，对虾的红腿病症状明显加重。通过对比看出，对虾的发病程度和死亡情况与虾池水中弧菌的数量有一定的关系。有研究认为，当水中的弧菌数量达到104cfu/mL时，对虾就可能被感染发病。
第十六章弯曲菌属和幽门螺杆菌及检验 本章内容 一、弯曲菌属 二、幽门螺杆菌 弯曲菌属——分类 包括5个种和5个亚种。 致病：空肠弯曲菌是人类腹泻最常见的病原菌之一。 胎儿弯曲菌（胎儿亚种）在免疫功能低下时可引起败血症、脑膜炎等。 弯曲菌属——生物学特性 形态与结构 形态：细长、螺旋形或海鸥展翅状、S形的弯曲杆菌。 染色：G-。 特殊结构：有单鞭毛，运动活泼，投镖式或螺旋状运动。一端单鞭毛多见于胎儿亚种，两端单鞭毛多见于空肠弯曲菌，无芽胞，无荚膜。 培养特性 营养要求：高；需加入血液、血清才能生长。 气体环境：微需氧；初次分离需在含5%O2、85%N2、10%CO2中生长，传代培养时能在10%C02环境中生长。 温度环境：空肠弯曲菌在43℃生长，25℃不生长。 胎儿弯曲菌在25℃生长，43℃不生长。 37℃都能生长。
菌落特征： 选择培养基： Skirrow琼脂、ButzIer培养基和Campy-BAP培养基。 空肠弯曲菌初次分离时，经48h培养： 扁平湿润灰白色、半透明、边缘不整齐、常沿接种线扩散生长的菌落，不溶血。 圆形凸起半透明、针尖状、有光泽、单个细小菌落，不溶血。 抗原 有菌体（O）抗原、热不稳定抗原和鞭毛（H）抗原。 根据O抗原可将空肠弯曲菌分为42个血清型。 抵抗力 较弱，56℃5分钟被杀死。干燥环境中仅能存活3小时。 弯曲菌属——微生物检验及鉴定 标本采集：粪便、血液或脑脊液。 形态学检查：革兰阴性逗点状、S形或螺旋状小杆菌。 悬滴法：投镖式或螺旋状运动。 分离培养： 粪便和肛拭子标本接种于Skirrow血琼脂平板和Campy-BAP平板。 血液或脑脊液标本接种布氏肉汤增菌后，转种弯曲菌分离培养基，置43℃、37℃，在微需氧环境下培养24～72h，观察菌落特征。 生化反应 弯曲菌属——致病性及临床意义 人类肠道感染和各种肠道外感染。 空肠弯曲菌：引起散发性细菌性肠炎。
弧菌 一、弧菌是菌体短小，弯曲成弧形，尾部带一鞭毛的革兰 氏阴性菌 主要对虾致菌为：溶藻弧菌、鳗弧菌、副溶血弧菌、 哈维氏弧菌、鳗弧菌、霍乱弧菌等 弧菌适应温度10-35度，最适25度左右，弧菌在半咸 水和海水中很多，但淡水中少。这也是淡水养殖对虾，弧 菌病发病率低，养殖成功率较高的原因。 弧菌的繁殖速度随着盐度的增加和温度的增加而加快。 二、在对虾养殖中，我们经常使用弧菌培养皿来测试弧菌 的种类和数量。这就有我们常说的黄弧菌、绿弧菌。 绿弧菌：副溶血弧菌、河流弧菌 黄弧菌：溶藻弧菌、霍乱弧菌、哈维氏弧菌、鳗弧菌三、各种弧菌有什么危害呢？ 大名鼎鼎的EMS，很多研究表明，副溶血弧菌是凶手。 溶藻弧菌、副溶血弧菌、鳗弧菌会引起红腿红尾等初 期症状，继而出现肠炎和肝发红、肿大或萎缩，严重的引 起菌血症“红体病“。 感染哈维氏弧菌：频死或死亡的幼体会发荧光。成体 发病先是头胸部、腹部的腹面发荧光，严重时全身发光。 霍乱弧菌会引起瞎眼。 四、弧菌的感染途径主要是经口传播，其次是通过体表创 伤和腮进入体内。 五、水中弧菌防控，主要靠三点。
1、消毒，比如说我们的“弧菌杀“泼水可以安全有效杀灭弧菌。消毒作用快，是处理弧菌超标时使用的一种好方法。 2、蛭弧菌，以菌吃菌，预防用。 3、以菌制菌，研究表明，当环境中的弧菌数量超过理论阀值，但水体中总异养菌的数量达到弧菌数量的30倍以上，对虾仍是安全的。定期泼”金牌芽孢“、”护肠活水多效菌“等有益菌，有益菌从数量上抑制弧菌发病。 六对虾体内弧菌的控制。有3种方法。 1、控制水环的弧菌。对虾的消化道与水体相同， 水体的微生物组成直接影响对虾消化道的菌相 组成。所以水环境中弧菌数量少，就可以有效 预防消化道弧菌感染。这就是水体泼“弧菌杀 “的主要意义。 2、常伴乳酸菌或”护肠活水多效菌“，使其在肠 道形成优势种群，粘附在肠道表皮形成生物屏 障，使弧菌不易粘到肠壁上，避免感染。 3、抗生素和中草药。
应、毒素、噬菌体敏感性、药敏性等方面都存在一定 的变异[7] ,易于造成漏检。食品中的霍乱弧菌含量相对较少,且有一定程度的损伤和(或)抑制,致使检测更加困难。副溶血性弧菌的检测同样存在着上述类似的问题。荧光PCR 的高灵敏度、高特异性,特别是如果从食品样品直接提取DNA 则3h 左右能出结果的快速性,能有效地解决以上困难,很好地满足对食品中致病性弧菌快速检测的需要。参考文献 [1] 郁庆福.现代卫生微生物学[M ].北京:人民卫生出版社, 1995,1401. [2] F.奥斯伯,R.E.金斯顿,R.布伦特,著.颜子颖,王海林,译.精 编分子生物学实验指南[M].北京:科学出版社,2001,22223, 1042105. [3] J.萨姆布鲁克,D.W.拉塞尔,著.黄培堂,汪嘉玺,朱厚础,等 译.分子克隆实验指南[M].第3版.北京:科学出版社,2002, 682105,6182628. [4] 卫生部疾病控制司霍乱防治手册编写组.霍乱防治手册[M]. 第5版:北京:卫生部疾病控制司,1999. [5] S N ΠT 1022—2001.出口食品中霍乱弧菌检验方法[S]. [6] 王家豪.PCR 技术应用于霍乱监测的效果探讨[J ].中国公共卫 生学报,1999,18(5):2602262. [7] 蒋小皖.O139霍乱弧菌生物学特性分析[J ].江苏预防医学, 1999,10(4):28229. [收稿日期:2007-07-25] 中图分类号:R15;Q93-33;R44615 文献标识码:B 文章编号:1004-8456(2007)06-0514-05 作者简介:骆海朋 男 主管技师 硕士 实验技术与方法 弯曲菌菌种冷冻保存及复苏方法的研究 骆海朋 陈 倩 (北京市疾病预防控制中心,北京 100013) 摘 要:目的 探索一种简单、方便、有效的弯曲菌菌种保存方法。方法 采用含30%甘油的脑心浸液肉汤,将实 验室保存的19株弯曲菌于-30℃和-70℃分别保存,每个菌株3个菌种管。1年后,采用5%脱纤维羊血的布氏肉汤进行增菌,然后转种哥伦比亚血平板,比较存活效果。结果 -30℃条件下采用多管法保存弯曲菌可以获得与-70℃条件下保存相当的效果。结论 采用多管法(每株菌3个菌种管)于-30℃冷冻保存弯曲菌是一个简单、方便、有效、实用的方法。 关键词:弯曲杆菌属;保存,生物学;低温保存 Studies of Methods of Freezing Storage of C ampylobacter and R ecovery of Frozen Storage Strain LUO Hai 2peng ,CHE N Qian (Beijing Municipal Center for Disease C ontrol and Prevention ,Beijing 100013,China ) Abstract :Objective T o find an easy and effective method for the storage of cam pylobacter.Method Cam pylobacter strains were stored in the content of 30%glycerine brain heart broth.19is olates were used in this study and stored at -30℃and -70℃and every strain had 3copies.A fter one 2year store ,the frozen strains were recovered in the content of 5%sheep blood preston broth for 24hours ,and then were subcultured on the C olumbia blood plate.R esults In one 2year store ,the storage of the strains in the tem perature of -30℃had the same effect as the storage of strains in the tem perature of -70℃.Conclusion The method of storage of cam pylobacter in multi tubes in the tem perature of -30℃may be an easy and effective method . K ey w ord :Cam pylobacter ;Preservation ,Biological ;Cry opreservation — 815—中国食品卫生杂志 CHI NESE JOURNA L OF FOOD HYGIE NE 2007年第19卷第6期
第二十一章弯曲菌属和幽门螺杆菌及检验 一、弯曲菌属 （一）概述： 弯曲菌属细菌是一类微需氧，不分解糖类，氧化酶阳性，菌体弯曲呈逗点状、S形或螺旋状，有动力的革兰阴性菌。包括5个种和5个亚种。对人类致病的主要是空肠弯曲菌和胎儿弯曲菌胎儿亚种。前者是人类腹泻最常见的病原菌之一，后者在免疫功能低下时可引起败血症、脑膜炎等。 （二）生物学性状 1.形态染色：革兰阴性、细长、螺旋形或海鸥展翅状、Ｓ形的弯曲杆菌。一端或两端具有单鞭毛，运动活泼，有时呈螺旋状运动。一端单鞭毛多见于胎儿亚种，两端单鞭毛多见于空肠弯曲菌，无芽胞，无荚膜。 2.培养特性：微需氧菌，初次分离时需在含5%O2、85%N2、10%CO2气体环境中生长，传代培养时能在10%CO2环境中生长。 本属菌最适生长温度随菌种而异（生长温度差异可作为菌种鉴别要点）。 营养要求高，在普通培养基上不生长。需加入血液、血清才能生长。常用的选择培养基有Skirrow琼脂和Campy-BAP培养基。这些培养基以血琼脂为基础，加人多种抗生素，能抑制肠道正常菌群，而有利于本菌的分离。空肠弯曲菌初次分离时，经48h培养可形成两种菌落；一种为扁平、湿润、灰白色、半透明、边缘不整齐、常沿接种线扩散生长的菌落；另一种为圆形、凸起、半透明、针尖状、有光泽、单个细小菌落。两种菌落均不溶血。在布氏肉汤内呈均匀混浊生长。 3.生化反应：本属细菌生化反应不活泼。不分解糖类、不液化明胶、不分解尿素，V-P和甲基红试验均阴性。氧化酶均为阳性，大多数弯曲菌能还原硝酸盐、触酶试验为阳性，空肠弯曲菌马尿酸水解试验阳性。 4.抗原结构：有菌体（O）抗原、热不稳定抗原和鞭毛（H）抗原。根据O抗原可将空肠弯曲菌分为42个血清型。 5.抵抗力：抵抗力较弱，56℃5分钟即被杀死。干燥环境中仅能存活3小时。 （二）微生物学检验 1.标本采集：立即送检，及时接种。 2.检验方法及鉴定 （1）直接涂片 1）悬滴标本检查：显微镜下观察有无投镖式或螺旋状运动的细菌。 2）革兰染色检查：为革兰阴性逗点状、S形或螺旋状小杆菌。
第九章弧菌属、螺杆菌属与弯曲菌属 第一节霍乱弧菌 弧菌属（Vibrio）细菌是一类菌体成弧形的短小革兰阴性菌。在自然界广泛分布，尤以水中含量最多。根据国际通用分类方法，可将弧菌属分为56个种，其中至少12个种可感染人类，又以霍乱弧菌感染最为严重。 霍乱我国法定甲类传染性疾病，霍乱弧菌（Vibrio cholerae）是其病原体。迄今为止，全球已发生7次大流行，前6次由古典生物型引起。最后一次由El-Tor生物型引起。 一、生物学性状 （一）形态与染色 从患者体内新分离出的细菌形态典型，呈弧形或逗点状，大小约 （0.5~0.8）μm×(1.5~3) μm。多次传代培养后，细菌多呈杆状。G-。菌体无芽胞、有菌毛，个别菌株有荚膜，菌体一端有着生单鞭毛（图9-1）。悬滴法观察液体样本时可见呈穿梭样或流星状运动菌体。 图9-1霍乱弧菌 （二）培养特性 霍乱弧菌兼性厌氧，无严格营养要求，但在含氧条件下生长更好。对温度要求不高，18~37℃均可生长，因此可在野外环境下长期生存。该菌耐碱不耐酸，在pH9左右的碱性蛋白胨水或碱性琼脂平板上生长良好，而其他细菌不易生长，故多以碱性蛋白胨水富集增菌提高初次分离效率。霍乱弧菌与其他致病性弧菌的区别在于其可以无盐环境中生长。 触酶（过氧化氢酶）阳性，氧化酶阳性，产酸不产气。可代谢多种糖类，如葡萄糖、蔗糖和甘露醇，不利用阿拉伯糖；可还原硝酸盐，吲哚反应阳性。碱性琼脂平板培养后可形成圆形、透明或半透明的无色扁平菌落。在TCBS （thiosulfate-citrate-bile-sucrose）培养基上菌落呈黄色，培养基呈暗绿色。（三）抗原构造与分型
第十六章弯曲菌属和幽门螺杆菌及检验 一、A1 1、下面哪个不是幽门螺杆菌的特性 A、微嗜氧菌 B、脲酶阴性 C、动力阳性 D、引起胃炎 E、大多对阿莫西林敏感 2、对幽门螺杆菌性状的叙述，下列哪项不正确 A、是微需氧菌 B、37℃、25℃、42℃均生长 C、是非自身免疫性慢性胃炎的致病菌 D、氧化酶、过氧化氢酶均阳性 E、与胃癌的发生有关 3、引起慢性胃炎的病原菌为 A、棒状杆菌 B、幽门螺杆菌 C、大肠埃希菌 D、耶尔森菌 E、空肠弯曲菌 4、脲酶活性最强的细菌是 A、变形杆菌 B、流感嗜血杆菌 C、幽门螺杆菌 D、布鲁菌 E、大肠埃希菌 5、培养弯曲菌属常用的培养基是 A、血平板 B、伊红美蓝 C、营养琼脂 D、Skirrow E、庆大培养基 6、胎儿弯曲菌是 A、革兰阳性弯曲杆菌 B、革兰阳性杆菌 C、革兰阴性弯曲杆菌 D、革兰阴性小球菌 E、革兰阴性芽胞杆菌
7、下列哪种细菌不是厌氧菌 A、产黑素类杆菌 B、肉毒梭菌 C、破伤风梭菌 D、产气荚膜梭菌 E、空肠弯曲菌 8、弯曲菌属中引起腹泻的常见病原菌有 A、空肠弯曲菌 B、大肠弯曲菌 C、胎儿弯曲菌 D、黏膜弯曲菌 E、猪肠弯曲菌 9、下列哪种病原菌，粪便标本应进行直接检查 A、大肠埃希菌 B、痢疾杆菌 C、结肠炎耶氏菌 D、沙门菌 E、弯曲菌 10、弯曲菌生化反应的特点是 A、生化反应活泼 B、发酵糖类 C、液化明胶分解尿素 D、VP试验和甲基红试验均阳性 E、氧化酶试验阳性 11、弯曲菌属的细菌特点是 A、海鸥展翅型 B、分支结构 C、具有芽孢 D、革兰染色阳性 E、墨汁染色阳性 12、弯曲菌属属于 A、菌体呈Z形或字母状 B、革兰阴性 C、营养要求不高 D、流星样动力 E、无动力 13、弯曲菌属显微镜观察显示 A、长丝状 B、蝌蚪形
空肠弯曲杆菌感染流行病学研究进展 阳成波1,蒋 原2,黄克和1 (1.南京农业大学动物医学院,江苏南京210095;2.江苏出入境检疫检验局,江苏南京210001) 中图分类号:S855.1 文献标识码:A文章编号:100725038(2002)0620010203 摘 要:空肠弯曲杆菌是一种人畜共患病原菌,可以引起人和动物发生各种疾病,并且是一种食物源性病原菌,被认为是引起全世界人类细菌性腹泻的主要原因。本文就空肠弯曲杆菌病原学、传染源、传播途径、感染范围、致病性以及治疗方法的研究进展作一概述。 关键词:空肠弯曲杆菌;感染;流行病学 空肠弯曲杆菌(Cam pylobacter jejun i,C.jejun i)是80年代起受到国内外广泛重视的人畜共同感染的病原菌[1～10],对人的感染率不亚于沙门氏菌和志贺氏菌。自1973年D ekeyser和B u tzler从急性肠炎患者粪便分离到该菌并首次确定其致病性以来,现巳发现该菌除引起人类发烧、急性肠炎和Gu illain2B arri综合征外[1],还可引起牛和绵羊流产,火鸡的肝炎和蓝冠病,童子鸡和雏鸡坏死性肝炎,雏鸡、犊牛、仔猪的腹泻等多种疾病。到目前为止,对该菌的生物学特性、血清学特性、感染范围、质粒和染色体以及人类空肠弯杆菌性肠炎的流行病学、诊断治疗等作了大量研究[2]。 1 病原学 空肠弯曲杆菌系弯曲菌属的一个种,弯曲菌属共分6个种及若干亚种。弯曲菌属(Cam pylobacter genu s)包括胎儿弯曲菌(Cam p ylobacter fetu s),空肠弯曲菌(C.jejun i),结肠弯曲菌(C.co lic),幽门弯曲菌(C.p yb ridis),唾液弯曲菌(C.spu to rum)及海欧弯曲菌(https://www.doczj.com/doc/d22766904.html,ridis)。对人类致病的绝大多数是空肠弯曲菌及胎儿弯曲菌胎儿亚种,其次是结肠弯曲菌。空肠弯曲杆菌、结肠弯曲杆菌和胎儿弯曲杆菌占所有从人体分离的99%(其中空肠弯曲杆菌占90%),有人报道,其它弯曲杆菌也能引起人的疾病[3～8]。空肠弯曲杆菌为革兰阴性微需氧杆菌,长1.5～5Λm,宽0.2～0.5Λm;呈弧形,S形或螺旋形,3～5个呈串或单个排列;菌体两端尖,有极鞭毛,能做快速直线或螺旋体状运动;无荚膜[9]。粪便或肠拭子标本接种选择培养基(Sk irrow’s B u tzletp’s或Cam py2BA P),或通过0.65Λm滤器后接种于非选择培养基,在5%～10%O2、3%～10% CO2,42h可分离该菌。空气中不能生长。最初分离时菌落很小,约0.5～1mm,圆形,白色或奶 收稿日期:2002204201 作者简介:阳成波(1978—),男(汉族),湖南衡阳人,南京农业大学动物医学院硕士研究生,主要从事兽医临床病理诊断学研究工作。 油色,表面光滑或粗糙,转种后光滑型变成粘液型,有的呈玻璃断面样的折光。根据生长所需温度的不同,不发酵葡萄糖及在1%甘氨酸、3.5%盐液、1%胆汁的培养基中生长特性可鉴别其种。主要抗原有O抗原,是胞壁的类脂多糖,及H抗原(鞭毛抗原)。感染后肠道产生局部免疫,血中也产生抗O的IgG、Ig M、IgA抗体,有一定保护力。空肠弯曲杆菌在潮湿、少量氧的情况下,可以在4℃存活3～4周,经常可以持续产品在货架存货天数,该菌在水、牛奶中存活较久,在粪中存活也久,鸡粪中保持活力可达96h,人粪中如每克含菌数108,则保持活力达7d以上。它还可以在-20℃存活2～5个月,但在室温下只能存活几天,细菌对酸碱有较大耐力,故易通过胃肠道生存,对物理和化学消毒剂均敏感[9～14]。 2 传染源 传染源主要是动物,弯曲菌属广泛散布在各种动物体内,其中以家禽、野禽和家畜带菌最多,其次在啮齿类动物也分离出弯曲菌。李槿年报告1989年7月～1990年10月在合肥禽蛋公司对110只健康鸭盲肠内容物及327只健康鸭胴体空肠弯曲菌检测,前者带菌率为77.3%,后者为27.2%[15]。李忠阳等报道1993年4～6月份对保定市208只鸡,使用三种不同部位的采样方法,进行了空肠弯曲菌带菌调查,共检出78株弯曲菌,带菌率为37.5%,同时,调查表明鸡盲肠带菌率为最高[16]。胡永浩从猪、鸡、奶牛、山羊和绵羊粪便中的空肠弯曲杆菌分离率分别为26.47%、13.04%、9.76%、13.33%和6.82%[17]。空肠弯曲杆菌作为共生菌大量存在于各种野生或家养动物的肠道内,与人体感染较为密切的主要为家禽和家畜[18,20]。目前认为,猪、牛、鸡和狗是最为常见的传染源。被感染的动物常无明显的症状,并长期携带此菌,其分泌物可污染周围的环境、水和牛奶,在屠宰过程中可污染动物胴体。当人与这些动物密切接触或食用被污染的食品时,病原体就进入人体。由于动物多是无症状的带菌,且带菌率高,因而是重要的传染源和贮存宿主。病人也可作为传染源,尤其儿童患者往往因粪便处理不当,污染环境机会多,传染性就大。发展中国家由于卫生条件差,重复感染机会多,可形成免疫带菌。这些无症状的带菌者不断排菌,排菌期长达6～7周,甚至15个月之久,所以也是传染源。美国和加拿大零售的生鸡块54%和62%被污染[11～13]。国外报道主要通过饮用消毒不够的 01动物医学进展 2002年 第23卷 第6期(第122期)
弯曲菌属简介 （一）概述 弯曲菌属细菌是一类微需氧，不分解糖类，氧化酶阳性，菌体弯曲呈逗点状、S形或螺旋状，有动力的革兰阴性菌。包括5个种和5个亚种。对人类致病的主要是空肠弯曲菌和胎儿弯曲菌胎儿亚种。前者是人类腹泻最常见的病原菌之一，后者在免疫功能低下时可引起败血症、脑膜炎等。 （二）生物学性状 1.形态染色：革兰阴性、细长、螺旋形或海鸥展翅状、S形的弯曲杆菌。一端或两端具有单鞭毛，运动活泼，有时呈螺旋状运动。一端单鞭毛多见于胎儿亚种，两端单鞭毛多见于空肠弯曲菌，无芽胞，无荚膜。 2.培养特性：微需氧菌，初次分离时需在含5%O2、85%N2、10%CO2气体环境中生长，传代培养时能在10%CO2环境中生长。 本属菌最适生长温度随菌种而异（生长温度差别可作为菌种鉴别要点）医.学教育网搜集整理。 营养规定高，在普通培养基上不生长。需加入血液、血清才能生长。常用的选择培养基有Skirrow琼脂和Campy-BAP培养基。这些培养基以血琼脂为基础，加人多种抗生素，能抑制肠道正常菌群，而有利于本菌的分离。空肠弯曲菌初次分离时，经48h培养可形成两种菌落；一种为扁平、湿润、灰白色、半透明、边缘不整齐、常沿接种线扩散生长的菌落；另一种为圆形、凸起、半透明、针尖状、有光泽、单个细小菌落。两种菌落均不溶血。在布氏肉汤内呈均匀混浊生长。 3.生化反应：本属细菌生化反应不活泼。不分解糖类、不液化明胶、不分解尿素，V-P 和甲基红试验均阴性。氧化酶均为阳性，大多数弯曲菌能还原硝酸盐、触酶试验为阳性，空肠弯曲菌马尿酸水解试验阳性医.学教育网搜集整理。 4.抗原结构：有菌体（O）抗原、热不稳定抗原和鞭毛（H）抗原。根据O抗原可将空肠弯曲菌分为42个血清型。 5.抵抗力：抵抗力较弱，56℃5分钟即被杀死。干燥环境中仅能存活3小时。 （三）微生物学检验 1.标本采集：立即送检，及时接种。 2.检验办法及鉴定 （1）直接涂片 1）悬滴标本检查：显微镜下观察有无投镖式或螺旋状运动的细菌。 2）革兰染色检查：为革兰阴性逗点状、S形或螺旋状小杆菌医.学教育网搜集整理。 （2）分离培养：粪便和肛拭子标本直接接种于改良弯曲菌琼脂平板如改良的Skir-row 血琼脂平板和Campy-BAP平板；血液或脑脊液标本接种布氏肉汤增菌后，转种弯曲菌分离培养基，置42℃、37℃，在微需氧环境下培养24～72h，观察菌落特征。 （3）鉴定 革兰阴性细小弯曲杆菌，单鞭毛具有投镖样或螺旋样动力，需氧环境不生长，微需氧条件下，在弯曲菌选择培养基上形成两种类型菌落。不分解葡萄糖。弯曲菌属的鉴定要点为氧化酶阳性，革兰阴性，菌体弯曲或呈S形。最常用的鉴定试验有生长温度（25℃、37℃、42℃）试验、过氧化氢酶试验、马尿酸盐水解试验、硝酸盐和亚硝酸盐还原试验、硫化氢试验等。 （四）临床意思 致病因素主要与肠毒素、细胞毒素、内毒素和黏附、定植能力有关。主要引起人类肠道感染和各种肠道外感染。其中空肠弯曲菌是引起散发性细菌性肠炎最常见的菌种之一。胎儿
临床医学检验技师初级（师）微生物学及检验（弧菌科、弯曲菌 和螺杆菌）-试卷1 (总分：74.00，做题时间：90分钟) 一、 B1型题(总题数：1，分数：4.00) A．O抗原和H抗原B．K抗原C．H抗原D．O抗原E．O抗原和K抗原副溶血性弧菌是一种嗜盐性弧菌，根据抗原分型以及致病因子回答以下问题（分数：4.00） (1).副溶血性弧菌定群根据（分数：2.00） A. B. C. D. √ E. 解析： (2).副溶血性弧菌定型根据（分数：2.00） A. B. C. D. E. √ 解析：解析：副溶血性弧菌以O抗原定群，以O抗原和K抗原组合定型。 二、 A1型题(总题数：27，分数：54.00) 1.在悬滴标本中呈穿梭样运动的细菌是 （分数：2.00） A.大肠埃希菌 B.伤寒沙门菌 C.幽门螺杆菌 D.霍乱弧菌√ E.变形杆菌 解析：解析：霍乱弧菌菌体一端有单鞭毛，运动非常活泼。取病人米泔水样粪便或培养物做悬滴观察，可见细菌呈穿梭样或流行样运动。 2.霍乱弧菌增菌培养用的碱性蛋白胨水的pH为 （分数：2.00） A.6．5～6．8 B.7．2～7．6 C.7．8～8．2 D.8．4～8．6 √ E.5．5～6．5 解析：解析：碱性蛋白胨水pH 8．4～8．6适合弧菌的增菌培养。 3.关于霍乱，下列叙述错误的是 （分数：2.00） A.属于烈性消化道传染病 B.人类是霍乱弧菌的唯一易感者 C.病愈后，少数病人可长期带菌 D.病后的免疫力短暂√
E.接种霍乱死疫苗可增强人群的特异性免疫力 解析：解析：患过霍乱的人可获得长久的免疫力，再感染的较为少见。 4.关于霍乱弧菌的培养特性，下列叙述错误的是 （分数：2.00） A.初次分离常选用pH8．5的碱性蛋白胨水 B.在TCBS平板上发酵蔗糖产酸，菌落呈红色√ C.营养要求不高 D.含亚碲酸钾的选择性平板上形成灰褐色菌落中心 E.在血琼脂上El-Tour生物型可形成β溶血环 解析：解析：霍乱弧菌在TCBS上形成较大黄色菌落。 5.感染后粪便呈米泔水样的细菌是 （分数：2.00） A.大肠埃希菌 B.志贺菌 C.变形杆菌 D.副溶血性弧菌 E.霍乱弧菌√ 解析：解析：霍乱弧菌典型感染病例一般在吞食细菌后2—3天突然出现剧烈腹泻和呕吐，在疾病严重时，每小时失水量可高达1升，排出如米泔水样的腹泻物。 6.关于霍乱毒素，下列叙述错误的是 （分数：2.00） A.由A和B两个亚单位组成 B.A1亚单位为毒素活性单位，激活腺苷酸环化酶 C.A2亚单位与肠黏膜上皮细胞膜上的神经节苷脂GMI受体结合√ D.对热不稳定 E.01群和0139群的是一样的 解析：解析：霍乱弧菌的繁殖产生由染色体编码、对热不稳定的霍乱肠毒素，由A和B两个蛋白质亚单位组成。A1为毒素活性单位，通过B亚单位结合细胞膜上GM1受体的通道或“内吞”进入细胞内，激活腺苷酸环化酶(cAMP酶)，快速向细胞外分泌水和电解质，使肠腔内水、钠潴留，导致呕吐和腹泻。 7.霍乱弧菌庆大霉素琼脂平板上形成灰褐色中心菌落，是因为还原了下列哪种物质 （分数：2.00） A.铁元素 B.硫元素 C.碲元素√ D.胆盐 E.亚硝酸盐 解析：解析：霍乱弧菌在含亚碲酸钾的4号琼脂平板和庆大霉素琼脂平板上生长，将培养基中的碲离子还原为碲元素，形成灰褐色菌落中心。 8.TCBS培养基的鉴别用糖是 （分数：2.00） A.葡萄糖 B.蔗糖√ C.乳糖 D.半乳糖 E.麦芽糖 解析：解析：分离霍乱弧菌常用的选择性培养基是硫代硫酸盐。枸橼酸盐．胆盐．蔗糖琼脂平板(TCBS)。 9.目前已知致泻毒素中毒性最强的是 （分数：2.00） A.大肠埃希菌肠毒素
第４５卷 第３期Ｖｏｌ．４５Ｎｏ．３ 淡 水 渔 业 ＦｒｅｓｈｗａｔｅｒＦｉｓｈｅｒｉｅｓ ２０１５年５月Ｍａｙ２０１５ 收稿日期：２０１４－０６－２５；修订日期：２０１４－１２－１１ 资助项目：四川省科技支撑计划项目（２０１４ＮＺ０００３） 第一作者简介：刘衍鹏（１９８４－ ），男，四川成都人，研究员，主要从事动物疾病病原检测方面的研究。Ｅ－ｍａｉｌ：ｈｉｎｄｏｏ＠１６３．ｃｏｍ通讯作者：肖 丹。Ｅ－ｍａｉｌ：ｔａｏｍｘ１２＠ｙｅａｈ．ｎｅｔ ?研究简报? 弧菌属PCR 检测方法的建立与应用 刘衍鹏１ ，黄冠军１ ，刘天强１ ，李爱华２ ，肖 丹 １ （１．通威股份有限公司动物保健研究所，成都 ６１００４１； ２．中国科学院水生生物研究所淡水生态与生物技术国家重点实验室，武汉 ４３００７２） 摘要：根据弧菌属细菌（Vibrio ｓｐｐ．）共有的rpoA 基因序列，比对和设计了一对ＰＣＲ引物，建立了能够快速而准确地检测弧菌属细菌的通用ＰＣＲ检测方法，该方法对靶标ＤＮＡ的检测灵敏度为５８ｆｇ／μＬ，对菌液的检测灵敏度为２．７×１０２ ｃｆｕ／ｍＬ，能够区分该属细菌与其它属的细菌，具有极高的特异性。使用建立的方法对分离自南美白 对虾的病原菌进行了检验，并结合１６ＳｒＤＮＡ序列分析，结果显示待检测病原均为弧菌属的细菌，与测序结果一致，说明该检测方法可用于弧菌属细菌的检测和诊断。关键词：弧菌属细菌；rpoA 基因；特异性；检验 中图分类号：Ｓ９１７．１ 文献标识码：Ａ 文章编号：１０００－６９０７－（２０１５）０３－００８８－０５ Establishment and application of PCR assay for dection of Vibrio spp ． ＬＩＵＹａｎ－ｐｅｎｇ１ ，ＨＵＡＮＧＧｕａｎ－ｊｕｎ１ ，ＬＩＵＴｉａｎ－ｑｉａｎｇ１ ，ＬＩＡｉ－ｈｕａ２ ，ＸＩＡＯＤａｎ １ （１．Animal Health Research Institute ，Tongwei Co ．，LTD ，Chengdu ６１００４１，China ； ２．State Key Laboratory of Freshwater Ecology and Biotechnology ，Institute of Hydrobiology ， Chinese Academy of Sciences ，Wuhan ４３００７２，China ） Abstract ：ＡｐａｉｒｏｆＰＣＲｐｒｉｍｅｒｓｗａｓｄｅｓｉｇｎｅｄａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｔｈｅｃｏｎｓｅｎｓｕｓｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆｔｈｅrpoA ｏｆVibrio ａｎｄａＰＣＲａｓｓａｙ ｆｏｒVibrio ｓｐｐ．ｗａｓｔｈｕｓｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ．ＴｈｅＰＣＲａｓｓａｙｃｏｕｌｄｄｉｓｔｉｎｇｕｉｓｈVibrio ｓｐｐｆｒｏｍｂａｃｔｅｒｉａｏｆｏｔｈｅｒｇｅｎｕｓｗｉｔｈｇｒｅａｔｓｐｅ－ｃｉｆｉｃｉｔｙａｎｄｔｈｅｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｏｆｔｈｅａｓｓａｙｗａｓ５８ｆｇ／μＬｆｏｒＤＮＡａｎｄ２．７×１０２ ｃｆｕ／ｍＬｆｏｒVibrio ｓｔｒａｉｎ．ＰａｔｈｏｇｅｎｓｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍPenaeus vannmei ｗｅｒｅｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｂｙｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄＰＣＲａｎｄ１６ＳｒＤＮＡｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｔｗｏａｓｓａｙｓｈａｄｇｒｅａｔｃｏｎｆｏｒｍｉｔｙｗｉｔｈｅａｃｈｏｔｈｅｒ，ｗｈｉｃｈｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｅｄＰＣＲａｓｓａｙｃａｎｂｅｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔVibrio ｓｐｐ． Key words ：Vibrio ｓｐｐ．；ropA ；ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ；ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ 弧菌属于弧菌科弧菌属（Vibrio ），是一类革兰 氏阴性、具极生鞭毛、能运动、无芽孢的短杆状细菌［１］ ，是引起海、淡水养殖鱼类细菌性疾病的最重要的病原菌之一。第九版《伯杰氏细菌学手册》收录了３５种弧菌属细菌，其中的鳗弧菌（Vibrio an －guillarum ）、溶藻弧菌（V ．alginolyticus ）、哈维氏弧菌（V ．harveyi ）、灿烂弧菌（V ．splendidus ）、副溶血弧菌（V ．parahaemolyticus ）、创伤弧菌（V ．vulnificus ）、杀鲑弧菌（V ．salmonicida ）、海利斯顿氏菌（V ．pelagius ）、美人鱼弧菌（V ．damsela ）、奥 氏弧菌（V ．ordalii ）、费氏弧菌（V ．fischeri ）、鲨鱼弧菌（V ．carchariae ）以及最小弧菌（V ．mimicus ）等可以引起鱼类病害，某些种类还会导致人或其他动物发病［２］ 。因此，如何在临床上对弧菌病进行快速、正确的诊断，对于采取正确的应对措施以控制疾病的发生和进一步发展显得非常重要。 弧菌种类繁多，现有的检测方法只能对弧菌属 中的１种或者几种进行诊断［３－９］ ，因此要确定具体
2017年初级检验技师《微生物检验》练习题第16章弯曲菌属和螺杆菌属及检验
2017 第十六章弯曲菌属和幽门螺杆菌及检验 一、A1 1、关于幽门螺杆菌染色正确的是 A、革兰染色着色不匀 B、常用吉姆萨染色 C、革兰阴性 D、芽孢染色阳性 E、荚膜染色阳性 2、弯曲菌属培养特性为 A、需要95%CO 2 B、专性厌氧 C、专性需氧 D、厌氧 E、微需氧 3、弯曲菌属显微镜观察显示 A、长丝状 B、蝌蚪形 C、棒形 D、菌体细长呈S形 E、长杆状
4、弯曲菌属属于 A、菌体呈Z形或字母状 B、革兰阴性 C、营养要求不高 D、流星样动力 E、无动力 5、弯曲菌属的细菌特点是 A、海鸥展翅型 B、分支结构 C、具有芽孢 D、革兰染色阳性 E、墨汁染色阳性 6、弯曲菌生化反应的特点是 A、生化反应活泼 B、发酵糖类 C、液化明胶分解尿素 D、VP试验和甲基红试验均阳性 E、氧化酶试验阳性 7、下列哪种病原菌，粪便标本应进行直接检查 A、大肠埃希菌 B、痢疾杆菌
C、结肠炎耶氏菌 D、沙门菌 E、弯曲菌 8、弯曲菌属中引起腹泻的常见病原菌有 A、空肠弯曲菌 B、大肠弯曲菌 C、胎儿弯曲菌 D、黏膜弯曲菌 E、猪肠弯曲菌 9、下列哪种细菌不是厌氧菌 A、产黑素类杆菌 B、肉毒梭菌 C、破伤风梭菌 D、产气荚膜梭菌 E、空肠弯曲菌 10、胎儿弯曲菌是 A、革兰阳性弯曲杆菌 B、革兰阳性杆菌 C、革兰阴性弯曲杆菌 D、革兰阴性小球菌 E、革兰阴性芽胞杆菌
11、培养弯曲菌属常用的培养基是 A、血平皿 B、伊红美蓝 C、营养琼脂 D、Skirrow E、庆大培养基 12、脲酶活性最强的细菌是 A、变形杆菌 B、流感嗜血杆菌 C、幽门螺杆菌 D、布鲁菌 E、流感嗜血杆菌 13、引起慢性胃炎的病原菌为 A、棒状杆菌 B、幽门螺杆菌 C、大肠埃希菌 D、耶尔森菌 E、空肠弯曲菌 14、对幽门螺杆菌性状的叙述，下列哪项不正确 A、是微需氧菌 B、37℃、25℃、42℃均生长