超滤管使用方法和注意事项
蛋白浓缩和换Buffer通常使用的超滤管，常用Millipore的Amicon-Ultra-15超滤管（MWCO10kD）。也有其它型号的、不同体积大小和MWCO超滤管可选，视目的蛋白的分子量与浓缩前体积、浓缩目标体积而定。可重复使用，使用一次就扔掉太浪费。以下是个人总结的使用方法和注意事项。
1、选择合适的超滤管，主要考虑MWCO和浓缩体积，最常见的是Ultra-15（10kD）。到底选择多大截留分子量比较合适呢？10kDa、 5kDa、还是30kDa？通常应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3，比如目的蛋白分子量为35kDa，就可以选择10kDa截留分子量的超滤管。若目的蛋白分子量为10kD左右，则可以用截留分子量3kD的超滤管。认真阅读使用说明书，注意超滤膜对各种化学物质的耐受程度有所不同，表格中有。
2、新买来的超滤是干燥的，使用前加入MilliQ水，水量完全过膜，冰浴或冰箱里预冷几分钟。然后将水倒出，即可加入蛋白液，加入的多少，以不超过管顶的白线为准。操作要轻，加入蛋白液前，超滤管需要插在冰上预冷。
3、平衡。质量和重心二者都要达到平衡。注意转速和加速度不可太快，否则直接损坏超滤膜。开始离心超滤（离心机预冷至4度）。不同离心机的转速 rpm换算成g之后，有所不同。具体可参阅附件里的说明书。离心机的加速度调至最低档，减小对膜的压力。注意，一定要等离心机达到目的转速之后，方可离开离心机，否则离心机出问题时，无法第一时间处理，后果不可预测！膜与转轴的方向根据说明书调整（角转离心机的情况是膜与轴垂直）。在实际使用中，一般转速开的比说明书里的要低，这样可以延长离心管的使用寿命。
4、当浓缩到剩下1ml时，【取50ul国产Bradford溶液，加入10ul流穿，看有没变蓝色，以此判断超滤管是否漏掉蛋白。如果管漏了，将上层和流穿重新倒入新管中开始超滤。要精确判断是否漏管，用5mg/ml的BSA离心10min，再取流穿，跑蛋白胶或Bradford粗测】，继续加入剩下的蛋白液浓缩（在冰上操作，防止蛋白受热），直到所有浓缩液都加完为止。离心过程中注意是否发生蛋白沉淀，导致堵管。若发生沉淀，要确定沉淀的具体原因，是蛋白浓度过高还是Buffer不合适；前者可用多根超滤管同时超滤，降低浓度的办法解决，后者的方法是换不同的Buffer，直到蛋白不发生沉淀为止。
5、前面几步用以浓缩蛋白，如果要换Buffer，在总蛋白液浓缩至1ml左右的时候，轻轻加入新的Buffer（经0.22um超滤膜超滤），再浓缩至1ml左右，连续三次，最后一次的浓缩终体积根据需要的蛋白浓度而定，一般不多于500ul，也有浓缩至200ul以内的情况。按照每次至少10倍左右的体积浓缩算，三次达到1000倍以上，基本上可以达到换buffer的目的。
6、取出最终蛋白浓缩液的操作在冰上操作，用黄枪头（200ul）取，轻轻顺着边缘插入枪头，轻轻吹打、混匀蛋白液，注意不要碰到超滤膜，然后吸取浓缩液，每次吸接近200ul，直到吸完。管底剩下的最后一点浓缩液不必吸取，否则难度太大，有可能损坏超滤膜。最后加入MilliQ水到超滤管中，没过超滤膜，防止膜失水变干。
7、以下是处理超滤管，重复利用超滤管的步骤。
8、倒出超滤管里的水，用milliQ水轻轻润洗几次，【若管底有可见的蛋白沉淀，可以先加入水，然后用枪头吹打，注意不要碰到膜，吹打至沉淀悬起，然后倒掉，不可用自来水猛冲】然后加入0.2M的NaOH溶液，室温放置20min，期间平衡超滤管。再离心10min。倒出残留的NaOH溶液，将管芯浸入MilliQ水的烧杯(1或2L)中,放置几个小时,再换新的水,放置几个小时，不断稀释NaOH浓度。50ml管和盖子用自来水洗，内壁再用 MilliQ水洗干净。
9、取出浸没的管芯，加至接近满的MilliQ水，50ml管也加满MilliQ水，将管芯慢慢放入50ml离心管，排出部分水，然后盖上盖子，放4度保存，直到下次使用。一般来说，按照
上述步骤和注意事项，每根管用三四年不会坏。
- 爆破作业安全操作规程 一、爆破工必须通过具有培训资格的组织或机构按有关要求进行 的培训，并经考核合格取得公安部门颁发的爆破证。 二、爆破工必须持爆破证，才能去爆破器材库领取爆破材料，领 取时要认真检查爆破材料的质量和数量。 三、炮孔未经验收或不能满足爆破要求的不准装药爆破。 四、不应使用电机车或铲运机运送爆破材料，应用专用的爆破器 材车或矿车搬运，起爆材料应专人背送。禁止炸药及起爆材料同车装运。 五、在坑内运送炸药和起爆器材时，应有良好照明。搬运炸药和 加工起炸药包时禁止吸烟。 六、装卸爆破材料时，要轻拿轻放，不准摔打碰撞。 七、爆破材料运到现场应放在安全地点，要加强保管，起爆材料 及炸药应分开堆放。 八、剩余爆破材料应在当班及时交回炸药库，不得遗失、自存或 移交下班。 九、装药时，工作面应有良好照明，检查并处理好顶、帮及工作 面的安全问题后方能开始作业。 十、装药前，应检查装药器的各部位是否完好，风管接头是否牢 固，装药时缸内气压应保持在3-4Kg/cm2，输药管必须用半
导体性的塑料管。 十一、孔内装完药后，在抽出输药管时．注意不得用力过猛，防止返粉过多。 十二、在矿(岩)石有下滑(掉落)危险的地方，应采取有效防范措施后，方可进行装药、爆破。 十三、导爆索固定在炮孔中后，应立即切断。不应等整个炮孔的药量装完后再行切断。 十四、切割导爆索要用锋利的快刀，一刀切断，不得多刀切割，禁止用卡线钳剪切或用石块等砸断。 十五、导爆索联接搭头应用黑胶布缠结实，搭接长度不应小于10厘米。 十六、当导爆索的支线联接到干线上时，必须使支线的传爆方向及主线的传爆方向一致。 十七、在敷设导爆索网路时，不应将其绕成环状或结成扣，在有交叉的导爆索部分，两者间应衬以厚度不小于10厘米的隔离衬垫。 十八、电力起爆注意事项 1、距爆区边界50米范围内不应有电缆通过或存留电器设备。放主线时，不应通过电缆线，若必须通过时，要用木板或绝缘物品垫好。爆破施工前应对杂散电流进行测试，对高压电、射频电等进行调查，存在危险立即采取预防和排除措施。 2、联线时各接头要擦净。每孔都应进行导通试验，应使用专用
移液器的使用方法及注意事项 一、范围 本标准适用于移液器使用、维护和保养。 二、内容 一个完整的移液循环，包括吸头安装——容量设定——预洗吸头——吸液——放液——卸去吸头等六个步骤。每一个步骤都有需要遵循的操作规范。 1.吸头安装：正确的安装方法叫旋转安装法，具体的做法是，把白套筒顶端插入吸头(无论是散装吸头还是盒装吸头都一样)，在轻轻用力下压的同时，把手中的移液器按逆时针方向旋转180度。切记用力不能过猛，更不能采取剁吸头的方法来进行安装，因为那样做会对您手中的移液器造成不必要的损伤。 2.容量设定：正确的容量设定分为两个步骤，一是粗调，即通过排放按钮将容量值迅速调整至接近自己的预想值;二是细调，当容量值接近自己的预想值以后，应将移液器横置，水平放至自己的眼前，通过调节轮慢慢地将容量值调至预想值，从而避免视觉误差所造成的影响。在容量设定时，还有一个需要特别注意的地方。当我们从大值调整到小值时，刚好就行;但从小值调整到大值时，就需要调超三分之一圈后再返回，这是因为计数器里面有一定的空隙，需要弥补。 3.预洗吸头：在我们安装了新的吸头或增大了容量值以后，应该把需要转移的液体吸取、排放两到三次，这样做是为了让吸头内壁形成一道同质液膜，确保移液工作的精度和准度，使整个移液过程具有极高的重现性。其次，在吸取有机溶剂或高挥发液体时，挥发性气体会在白套筒室内形成负压，从而产生漏液的情况，这时就需要我们预洗四到六次，让白套筒室内的气体达到饱和，负压就会自动消失。 4.吸液：先将移液器排放按钮按至第一停点，再将吸头垂直浸入液面，浸入的深度为：P2、P10小于或等于1毫米，P20、P100、P200小于或等于2毫米，P1000小于或等于3毫米，P5ML、P10ML小于或等于4毫米(浸入过深的话，液压会对吸液的精确度产生一定的影响，当然，具体的浸入深度还应根据盛放液体的容器大小灵活掌握)，平稳松开按钮，切记不能过快。 5. 放液：放液时，吸头紧贴容器壁，先将排放按钮按至第一停点，略作停顿以后，再按至第二停点，这样做可以确保吸头内无残留液体。如果这样操作还有残留液体存在的话，您就应该考虑更换吸头了。 6. 卸掉吸头：卸掉的吸头一定不能和新吸头混放，以免产生交叉污染。 两分钟检查法：这是可以对手中移液器进行快速检查的一种简单方法，通过检查，来判断我们手中的移液器是否处于一种正常的工作状态。 1、测漏：我们手中的移液器叫空气排代式移液器，如果出现漏气的情况，那我们的取样结果就肯定不会准确，这将直接影响到我们实验的最终结果，后果是比较比较严重的。那么，如何判断移液器是否漏气呢?这就需要我们对它做一个简单的测试，首先，取一个透明的容器，装上水，将需要测试的移液器装上吸头，吸上水，如果是P 2、P10、P20、P100、P200的移液器，请将吸头浸入液面1——2毫米，静待20秒，观察吸头内部液面是否下降，如果下降了，就说明您手中的移液器出现了漏气的情况;如果是P1000、P5000、P10ML的移液器，请将吸头朝下悬垂20秒，观察是否有液体下滴，如果有，说明您手中的移液器也出现了漏气的情况。出现了漏气的情况怎么办呢? 2、查找故障原因：首先，检查吸头安装是否到位，换掉吸头再次测试，以排除因吸头的关系产生的漏气情况;接着，检查白套筒的端口部份(即白套筒与吸头接触的部份)是否有刮痕;
二、离心超滤管浓缩样品 2.1 浓缩样品 1、要浓缩的样品含盐量必须0.3M以上，含盐量低的样品须补加到0.3MNaCl。 2、在内管（附有3KD膜）中加入500μl样品，将内管套入外管。 3、对称放置离心管，14520rpm(即14000g)离心。（离心5min约浓缩2倍，10min约4倍，15min约6倍，20min约8倍，30min约10倍）。 4、离心结束后，将内管倒置套在另一个干净的离心管呢，3880rpm离心min收集浓缩后的样品。或者用移液器直接吸出内管中的样品。 2.2 浓缩管使用后的处理和保存 1、使用完的浓缩管，立即加入500μl含1MNaCl的缓冲液（此缓冲液与浓缩样品的缓冲液一致），8000rpm离心20min。 2、甩净内管中的盐溶液，将内管放入超纯水中浸泡1h。 3、内管加入超纯水500μl，8000rpm离心5min。 4、甩净内管中的水，加入500μl0.2MNaOH，8000rpm离心20min。 5、甩净内管中的NaOH溶液，用超纯水再8000rpm离心5min。 6、甩净内管中的水，放入含0.2-0.5‰NaN3的生理盐水中。 7、外管用自来水洗净后，用超纯水冲洗干净，晾干。 超滤管使用注意事项 2012-06-06 18:12:28| 分类：默认分类| 标签：|字号大中小订阅 蛋白浓缩和换Buffer通常使用的超滤管，常用Millipore的Amicon-Ultra-15超滤管（MWCO10kD）。也有其它型号的、不同体积大小和MWCO超滤管可选，视目的蛋白的分子量与浓缩前体积、浓缩目标体积而定。可重复使用，使用一次就扔掉太浪费。以下是个人总结的使用方法和注意事项。 1、选择合适的超滤管，主要考虑MWCO和浓缩体积，最常见的是Ultra-15（10kD）。到底选择多大截留分子量比较合适呢？10kDa、5kDa、还是30kDa？通常应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3，比如目的蛋白分子量为35kDa，就可以选择10kDa截留分子量的超滤管。若目的蛋白分子量为10kD左右，则可以用截留分子量3kD的超滤管。认真阅读使用说明书，注意超滤膜对各种化学物质的耐受程度有所不同，表格中有。 2、新买来的超滤是干燥的，使用前加入MilliQ水，水量完全过膜，冰浴或冰箱里预冷几分钟。然后将水倒出，即可加入蛋白液，加入的多少，以不超过管顶的白线为准。操作要轻，加入蛋白液前，超滤管需要插在冰上预冷。 3、平衡。质量和重心二者都要达到平衡。注意转速和加速度不可太快，否则直接损坏超滤膜。开始离心超滤（离心机预冷至4度）。不同离心机的转速rpm换算成g之后，有所不同。具体可参阅附件里的说明书。离心机的加速度调至最低档，减小对膜的压力。注意，一定要等离心机达到目的转速之后，方可离开离心机，否则离心机出问题时，无法第一时间处理，后果不可预测！膜与转轴的方向根据说明书调整（角转离心机的情况是膜与轴垂直）。在实际使用中，一般转速开的比说明书里的要低，这样可以延长离心管的使用寿命。 4、当浓缩到剩下1ml时，取50ul国产Bradford溶液，加入10ul流穿，看有没变蓝色，以此判断超滤管
移液器日常使用注意事项 1.调节容量的速度不宜过快，避免计数器部件的磨损。 2.移液器应始终在量程范围内进行使用。 3.安装吸头不应敲打、旋拧，避免吸头圆锥损坏。 4.当吸头内吸有液体时不能将移液器横过来拿，避免液体进入移液器内部。 5.吸液速度要控制好，不宜过快，避免液体反冲接触到吸头圆锥或进入移液 器内部。 6.移液器使用完后应悬挂存放，避免液体蒸汽进入移液器内部。 7.如使用安全圆锥过滤器应定期更换。按照使用频率，若感觉吸液速度明显 变慢可进行更换。另外，当发生液体过吸，或吸液时液体反冲接触到过滤 器时应立即更换。 8.定期保养移液器。如经常有灭菌操作，应在6-10次灭菌后检查移液器性能， 并做保养。 9.定期校准移液器，至少一年一次。 移液器保养 移液器需要定期进行保养，否则在使用一段时间后会出现操作不顺畅、漏液、 吸不上液体，甚至按下活塞无法弹起来（5ml和10ml移液器尤为常见）等现象。定期保养移液器能有效避免此类情况的发生。保养方法主要有以下步骤： 1.卸下移液器的止推环/杆（退吸头的部件）、套筒、弹簧等部件，露出移液 器的活塞部分。
2.清洁移液器的外表面、卸下的各个部件以及活塞。 3.晾干后在活塞上涂上专用的硅脂（产品包装内由附赠），5ml及10ml规格 需在套筒内也涂上硅脂。 4.重新装好移液器。调节容量，按压操作按钮，让硅脂在套筒内均匀分布。 由于不同系列、不同量程的移液器设计不同，具体操作方法请参照说明书介绍。 移液器灭菌 移液器一般可采用几种方法灭菌： 1.消毒剂擦拭（70%酒精、60%异丙醇及其它温和的清洁器。适用于所有型 号移液器） 2.紫外线照射（适用于mLINE，Proline Plus，Picus& Picus NxT，eLINE） 3.高温高压灭菌（适用于mLINE，Proline Plus整支，Picus& Picus NxT， eLINE，ePET及Proline的下半支）： 1)如有安装安全圆锥过滤器请先移除。 2)将移液器/可灭菌的部件装入消毒袋，在121℃，1bar条件下灭菌 20min。 3)冷却、干燥后重新安装。 4)注： mLINE，Proline Plus多通道移液器在灭菌前需逆时针将分液头 拧松一圈。
超滤的工作原理 超滤（Ultrafiltration）技术是一种膜滤法，也有错流过滤（Cross Filtration）之称。它能 从周围含有微粒的介质中分离出10～100A的微粒，这个尺寸范围内的微粒，通常是指液体内的溶质。其基本原理是在常温下以一定压力和流量，利用不对称微孔结构和半透膜介质，依靠膜两侧 的压力差作为推动力，以错流方式进行过滤，使溶剂及小分子物质通过，大分子物质和微粒子如 蛋白质、水溶性高聚物、细菌等被滤膜阻留，从而达到分离、分级、纯化、浓缩目的的一种新型膜分离技术。 超滤技术的优缺点 与传统分离方法相比，超滤技术具有以下特点： 1. 滤过程是在常温下进行，条件温和无成分破坏，因而特别适宜对热敏感的物质，如药物、酶 、果汁等的分离、分级、浓缩与富集。 2. 滤过程不发生相变化，无需加热，能耗低，无需添加化学试剂，无污染，是一种节能环保的 分离技术。 3. 超滤技术分离效率高，对稀溶液中的微量成分的回收、低浓度溶液的浓缩均非常有效。 4. 超滤过程仅采用压力作为膜分离的动力，因此分离装置简单、流程短、操作简便、易于控制 和维护。 5. 超滤法也有一定的局限性，它不能直接得到干粉制剂。对于蛋白质溶液，一般只能得到10～50％的浓度。 超滤装置是在一个密闭的容器中进行，以压缩空气为动力，推动容器内的活塞前进，使样液形成 内压，容器底部设有坚固的膜板。小于膜板孔径直径的小分子，受压力的作用被挤出膜板外，大 分子被截留在膜板之上。超滤开始时，由于溶质分子均匀地分布在溶液中，超滤的速度比较快。 但是，随着小分子的不断排出，大分子被截留堆积在膜表面，浓度越来越高，自下而上形成浓 度梯度，这日才超滤速度就会逐渐减慢，这种现象称为浓度极化现象。为了克服浓度极化现象， 增加流速，设计了几种超滤装置： 1. 无搅拌式超滤 这种装置比较简单，只是在密闭的容器中施加一定压力，使小分子和溶剂分子挤压出膜外， 无搅拌装置浓度极化较为严重，只适合于浓度较稀的小量超滤。 2. 搅拌式超滤 搅拌式超滤是将超滤装置位于电磁搅拌器之上，超滤容器内放人一支磁棒。在超滤时向容器 内施加压力的同时开动磁力搅拌器，小分子溶质和溶剂分子被排出膜外，大分子向滤膜表面堆积时，被电磁搅拌器分散到溶液中。这种方法不容易产生浓度极化现象，提高了超滤的速度。 4. 中空纤维超滤 由于膜板式超滤装置，截留面积有限，中空纤维超滤是在一支空心柱内装有许多的，中空纤维毛 细管，两端相通，管的内径一般在0．2mm左右，有效面积可以达到1平方厘米每一根纤维毛细管 像一个微型透析袋，极大地增大了渗透的表面积，提高了超滤的速度。
爆破作业场所有下列情形之一时，不应进行爆破作业： ?——距工作面20 m以内的风流中瓦斯含量达到1%或有瓦斯突出征兆的； ?——爆破会造成巷进涌水、堤坝漏水、河床严重阻塞、泉水变迁的； ?——岩体有冒顶或边坡滑落危险的； ?——硐室、炮孔温度异常的； ?——地下爆破作业区的有害气体浓度超过表15规定的； ?——爆破可能危及建（构）筑物、公共设施或人员的安全而无有效防护措施的；?——作业通道不安全或堵塞的； ?——支护规格与支护说明书的规定不符或工作面支护损坏的； ?——危险区边界未设警成的； ?——光线不足且无照明或照明不符合规定的； ?电力起爆网路 ?同一起爆网路，应使用同厂、同批、同型号的电雷管；电雷管的电阻值差不得大于产品说明书的规定。 ?电爆网路的连接线不应使用裸露导线，不得利用照明线、铁轨、钢管、钢丝作爆破线路，电爆网路与电源开关之间应设置中间开关。 ?电爆网路的所有导线接头，均应按电工接线法连接，并确保其对外绝缘。在潮湿有水的地区，应避免导线接头接触地面或浸泡在水中。 ?起爆电源能量应能保证全部电雷管准爆；用变压器、发电机作起爆电源时，流经每个普通电雷管的电流应满足：一般爆破，交流电不小于2.5A，直流电不小于2A； 硐室爆破，交流电不小于4A，直流电不小于2.5A。 ?用起爆器起爆电爆网路时，应按起爆器说明书的要求连接网路。 ?电爆网路的导通和电阻值检查，应使用专用导通器和爆破电桥，导通器和爆破电桥应每月检查一次，其工作电流应小于30mA。 ?导爆管起爆网路 ?导爆管网路应严格按设计要求进行连接，导爆管网路中不应有死结，炮孔内不应有接头，孔外相邻传爆雷管之间应留有足够的距离。 ?用雷管起爆导爆管网路时，应遵守下列规定： ?——起爆导爆管的雷管与导爆管捆扎端端头的距离应不小于15cm； ?——应有防止雷管聚能射流切断导爆管的措施和防止延时雷管的气孔烧坏导爆管的措施； ?——导爆管应均匀地分布在雷管周围并用胶布等捆扎牢固。 使用导爆管连通器时，应夹紧或绑牢 ?导爆索起爆网路 ?起爆导爆索的雷管与导爆索捆扎端端头的距离应不小于15cm，雷管的聚能穴应朝向导爆索的传爆方向。 ?导爆索起爆网路应采用搭接、水手结等方法连接；搭接时两根导爆索搭接长度不应小于15cm，中间不得夹有异物或炸药，捆扎应牢固，支线与主线传爆方向的夹角应小于90°。 连接导爆索中间不应出现打结或打圈；交叉敷设时，应在两根交叉导爆索之间设置厚度不小于10cm的木质垫块或土袋。
超滤管使用方法和注意事项 蛋白浓缩和换Buffer通常使用的超滤管，常用Millipore的Amicon-Ultra-15超滤管（MWCO10kD）。也有其它型号的、不同体积大小和MWCO超滤管可选，视目的蛋白的分子量与浓缩前体积、浓缩目标体积而定。可重复使用，使用一次就扔掉太浪费。以下是个人总结的使用方法和注意事项。 1、选择合适的超滤管，主要考虑MWCO和浓缩体积，最常见的是Ultra-15（10k D）。到底选择多大截留分子量比较合适呢？10kDa、5kDa、还是30kDa？通常应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3，比如目的蛋白分子量为35kDa，就可以选择10kDa截留分子量的超滤管。若目的蛋白分子量为10kD左右，则可以用截留分子量3kD的超滤管。认真阅读使用说明书，注意超滤膜对各种化学物质的耐受程度有所不同，表格中有。 2、新买来的超滤是干燥的，使用前加入MilliQ水，水量完全过膜，冰浴或冰箱里预冷几分钟。然后将水倒出，即可加入蛋白液，加入的多少，以不超过管顶的白线为准。操作要轻，加入蛋白液前，超滤管需要插在冰上预冷。 3、平衡。质量和重心二者都要达到平衡。注意转速和加速度不可太快，否则直接损坏超滤膜。开始离心超滤（离心机预冷至4度）。不同离心机的转速rpm 换算成g之后，有所不同。具体可参阅附件里的说明书。离心机的加速度调至最低档，减小对膜的压力。注意，一定要等离心机达到目的转速之后，方可离开离心机，否则离心机出问题时，无法第一时间处理，后果不可预测！膜与转轴的方向根据说明书调整（角转离心机的情况是膜与轴垂直）。在实际使用中，一般转速开的比说明书里的要低，这样可以延长离心管的使用寿命。 4、当浓缩到剩下1ml时，【取50ul国产Bradford溶液，加入10ul流穿，看有没变蓝色，以此判断超滤管是否漏掉蛋白。如果管漏了，将上层和流穿重新倒入新管中开始超滤。要精确判断是否漏管，用5mg/ml的BSA离心10min，再取流穿，跑蛋白胶或Bradford粗测】，继续加入剩下的蛋白液浓缩（在冰上操作，防止蛋白受热），直到所有浓缩液都加完为止。离心过程中注意是否发生蛋白沉淀，导致堵管。若发生沉淀，要确定沉淀的具体原因，是蛋白浓度过高还是Buf fer不合适；前者可用多根超滤管同时超滤，降低浓度的办法解决，后者的方法是换不同的Buffer，直到蛋白不发生沉淀为止。 5、前面几步用以浓缩蛋白，如果要换Buffer，在总蛋白液浓缩至1ml左右的时候，轻轻加入新的Buffer（经0.22um超滤膜超滤），再浓缩至1ml左右，连续三次，最后一次的浓缩终体积根据需要的蛋白浓度而定，一般不多于500ul，也有浓缩至200ul以内的情况。按照每次至少10倍左右的体积浓缩算，三次达到1000倍以上，基本上可以达到换buffer的目的。 6、取出最终蛋白浓缩液的操作在冰上操作，用黄枪头（200ul）取，轻轻顺着边缘插入枪头，轻轻吹打、混匀蛋白液，注意不要碰到超滤膜，然后吸取浓缩液，
爆破现场安全施工操作规范露天 测量→标定炮孔位置→钻孔→炮孔检查→爆破施工勘察、爆破施工一般顺序为：器材准备→装药→炮孔堵塞→联结爆破网络→布设警戒安全岗哨→（爆破覆盖）→起爆信号→起爆→消除盲炮、处理危石→解除警戒→爆破效果分析及资料记录。、警戒；76、防护覆盖；、装药；4、堵塞；5、连接网路1、钻孔；2、验孔； 3 、爆破总结。每一个步骤对施工安全起关键作用。、盲炮处理；98 一、钻孔首先，根据工程地质勘察报告到施工现场详细勘察与分析工程现场的地质情 1. 况，如岩面层理、节理发育等。2.钻孔前，现场安全管理人员认真仔细观察施工现场四周环境情况，确保施工安全（无安全隐患，如危石、浮石、特殊环境如高压线、重要管道、公路铁路、孔桩堆渣等）。 3.由熟练钻孔工施工操作，钻孔参数（孔深、孔距、孔排距、孔倾斜角等）按设计要求或熟练爆破员确定，一般根据岩石的性质、地形、地貌确定；环境复杂时，确保安全措施进行钻孔。 4.经常对爆破施工的机械设备进行检查、检修，确保在复杂环境下能正常施工。 二、验孔 1.对炮孔的深度、最小抵抗线大小是否符合要求，对不合格的炮孔，不装药。 2.对有泥槽、裂缝、溶洞等炮孔，应少装药或不装药，现场决定不了的应向专业技术人员汇报确定。 3.对有水的炮孔，必须清理干孔里水，才能装炸药。 总之，装药前对炮孔的基本情况要清楚，对安全爆破很重要。 三、装药 1.装药前，对施工作业场地要进行排险、清理，确定无安全隐患，保证施工安全。 2.开始装药前，现场安全管理人员要划定装药警戒区（10米范围），爆破器材堆放规范，不要暴晒，做好登记纪录，非爆破作业人员撤离警 戒区外。 3.装药区内，严禁烟火和携带有电源的电器，爆破器材要轻拿、轻放。 4.爆破施工现场警戒区范围内，不应有电缆线、电器、机械等设备，如有立即关闭电源，确保施工安全。 5.装药时，用竹杆、木棒填堵炮孔或者用套有胶管的金属管，严禁用金属管直接填堵炮孔。 6.装药时发生卡堵现象，若没有放起爆药包，可用非金属杆处理；若已放入起爆药包，不能用任何工具冲击、挤压、硬拉，可采用高压风吹出堵卡炸药（散装药）。 7.装药量： （1）公式：=ｑV（Q=ｑａｂL；ａ-孔距，ｂ-孔排距，L-孔深），Q为单孔3装药量，公斤；ｑ为岩石的单位体积炸药消耗量，公斤/米；V为被爆破的岩石33（W为最ｑ。ｑ一般取0.2--0.4。集中药包（葫芦炮）公式：Q=W体积，米 小抵抗线，米）。 ，通常使用米内）1（0.07）对浅孔、二次破碎爆破要控制装药量，ｑ一般取2（． 药量20克~50克不等。 8.要使用合格的爆破器材（同厂、同期、同一批号）。
移液管的使用方法和注意事项 移液管是一种量出式仪器，只用来测量它所放出溶液的体积。它是一根中间有一膨大部分的细长玻璃管。其下端为尖嘴状，上端管颈处刻有一条标线，是所移取的准确体积的标志。常用的移液管有5，10，25，和50mL等规格。通常又把具有刻度的直形玻璃管称为吸量管。常用的吸量管有1，2，5，和10mL等规格。移液管和吸量管所移取的体积通常可准确到0.01mL。 1、使用前：使用移液管，首先要看一下移液管标记、准确度等级、刻度标线位置等。使用移液管前，应先用铬酸洗液润洗，以除去管内壁的油污。然后用自来水冲洗残留的洗液，再用蒸馏水洗净。洗净后的移液管内壁应不挂水珠。移取溶液前，应先用滤纸将移液管末端内外的水吸干，然后用欲移取的溶液涮洗管壁2至3次，以确保所移取溶液的浓度不变。 2、吸液：用右手的拇指和中指捏住移液管的上端，将管的下口插入欲吸取的溶液中，插入不要太浅或太深，一般为10～20mm处，太浅会产生吸空，把溶液吸到洗耳球内弄脏溶液，太深又会在管外沾附溶液过多。左手拿洗耳球，先把球中空气压出，再将球的尖嘴接在移液管上口，慢慢松开压扁的洗耳球使溶液吸入管内，先吸入该管容量的1/3左右，用右手的食指按住管口，取出，横持，并转动管子使溶液接触到刻度以上部位，以置换内壁的水分，然后将溶液从管的下口放出并弃去，如此用反复洗3次后，即可吸取溶液至刻度以上，立即用
右手的食指按住管口。 3、调节液面：将移液管向上提升离开液面，管的末端仍靠在盛溶液器皿的内壁上，管身保持直立，略为放松食指（有时可微微转动吸管）使管内溶液慢慢从下口流出，直至溶液的弯月面底部与标线相切为止，立即用食指压紧管口。将尖端的液滴靠壁去掉，移出移液管，插入承接溶液的器皿中。 4、放出溶液：承接溶液的器皿如是锥形瓶，应使锥形瓶倾斜30°，移液管直立，管下端紧靠锥形瓶内壁，稍松开食指，让溶液沿瓶壁慢慢流下，全部溶液流完后需等15s后再拿出移液管，以便使附着在管壁的部分溶液得以流出。如果移液管未标明“吹”字，则残留在管尖末端内的溶液不可吹出，因为移液管所标定的量出容积中并未包括这部分残留溶液。
如果你是一名普通员工，请珍惜自己，善待他人，用规范化的作业行为作到“上岗一分钟，安全六十秒”。 如果你是一名安质人员，请热心岗位，恪尽职守，随时促进作业员工按标准作业，并严肃处罚违章行为。 如果你是一名管理干部，请严于律己，爱护同志，掌握作业标准，深入现场，消除你所发现的每一个事故隐患。 警惕！你的每一点疏忽，都会伤害自己、伤害他人，你的每一份慎重都会给他人和家人带来美好的明天。请让我们携起手来，共同提高安全意识、规范作业行为，确保安全工作目标的全面实现。
隧道施工作业要点及安全注意事项 一、司钻工 1、施工作业要点 ⑴风钻钻眼时，应先检查机身、螺栓、卡套、弹簧和支架是否正常完好；管子接头是否牢固，有无漏风；钻杆有无不直、带伤以及钻孔堵塞现象；湿式凿岩机的供水是否正常。不合要求者应予修理或更换。 炮眼位置要捣平后开钻，防止打滑或炮眼移位。 ⑵开孔时如确实有困难，可以适当调整，调整范围不超过5倍的炮孔直径。 ⑶底板孔下部炮孔钻完后立即用木棍、纸团或编织物将其填塞。 ⑷不能打干眼，操作时先开水，后通风，停钻时先关风，后关水。开眼时先低速运转，待钻进一定深度后再全速钻进。 ⑸钻孔中发现不正常声音，排粉出水不正常时，应停机检查，找出原因并消除后，才能继续钻进。 2、安全注意事项 ⑴施工前，应先检查围岩是否牢固，瞎炮是否处理完毕，松动岩石应锚固或清除，确认安全再开钻。 ⑵严禁在惨眼中继续钻眼。 ⑶钻眼时，戴好安全防护用品，带支架的风钻钻眼时，必须将支架安置稳妥。风钻卡钻时应用板钳松动拔出，不可敲打，未关风钻前不得拆除钻杆。 ⑷钻眼与装药平行作业时，装药与钻孔必须自上而下，两者应隔开一排孔，不少于2.5m；装药与钻孔人员必须分区；严禁在已装药管的情况下用钻杆清空，严禁在已装药管的区域内补打眼孔。 二、爆破工 1、施工作业要点 ⑴爆破工仔细核对所装炮孔和手上炸药品种数量是否与要求相符，核对手上雷管段别与所装炮孔的位置相适应。 ⑵装药时，用炮棍将炸药装到底，每装一卷炸药用木制炮棍捅一次，并记号每次炮棍插入的尺寸，对装有雷管的药卷只需压住即可，不能用炮棍重重撞击；
一、总则 1.1本技术规范书适用于工业园区取供水工程超滤、反渗透及离子交换除盐水系统及其配套设备，它提出了该设备本体及辅助设备的功能设计、结构、性能、安装和试验等方面的技术要求。 1.2 需方在本招标文件中提出了最低限度的技术要求，并未规定所有的技术要求和适用的标准，供方应提供满足本招标文件和所列标准要求的高质量产品及其相应服务。 1.3 如果供方没有以书面对本招标书的条文提出异议，那么需方可以认为供方提出的产品应完全符合本招标书的要求。如有异议，不管是多么微小，都应在差异表中提出。 1.4 从签订合同之后至供方开始制造之日的这段时期内，需方有权提出因规程、规范和标准发生变化而产生的一些补充修改要求，供方应遵守这些要求。 1.5 本技术规范书所引用的标准若与供方所执行的标准发生矛盾时，按较高的标准执行。 1.6 供方对成套系统设备(含辅助系统与设备)负有全责，即包括分包（或采购）的产品。分包（或采购）的产品制造商应事先征得需方的认可。 1.7设备采用的专利涉及到的全部费用均已包含在设备报价中，供方保证需方不承担有关设备专利的一切责任。 1.8 本招标文件为订货合同的附件，与合同正文具有同等效力。 1.9 本工程采用KKS标识系统。供方提供的技术资料（包括图纸）和设备标识有KKS编码。具体标识要求由设计院提出，在设计联络会上讨论确定。
二、工程概况 2.1工业园区取供水工程，主要为园区内焦化锅炉等提供水源。 2.2 厂址条件 本期取供水工程，厂址设在临涣工业园内，所在区域地形系平原，地势平坦。设备通过公路和铁路运抵现场。 2.3气象特征值 2.3.1厂址： 2.3.2年平均大气温度13.0℃ 2.3.3年平均相对湿度64% 2.3.4极端最高气温41.1℃ 2.3.5极端最低气温-26.8℃ 2.3.6多年平均降水量608.2mm 2.3.7多年平均大气压力1008.6hPa 2.3.8最大积雪深度23cm 2.3.9多年平均风速 2.9m/s 2.3.10多年最大瞬时风速22.7m/s 2.3.11 10分钟平均最大风速22.3 m/s 2.3.12 地震基本烈度7度 2.4 厂区工程地质 厂址工程地质条件及稳定性良好，不易发生地质灾害，不压覆矿产，不压文物，适合工程建设。
导爆管雷管爆破安全问题 1.ICI澳大利亚某采石场一胶质炸药药包卡住，凿岩工用钻机加压推 送炸药，引起爆炸，这是由于钻杆的摩擦冲击引发，凿岩工送到医院2小时后死亡。 2.1991年5月19日，辽宁某县蓉花砂岩开发公司采石场，爆破违反 规程，在装药时，用炮辊捣药时由于用力过猛，挤压炸药包内雷管，引起炸药爆炸，死亡仨人！ 3.1983年11月30日上午，湖北某铁矿深孔装7~8袋浆状炸药后， 放入爆导爆索，起爆药包，导爆管雷管组起爆弹，接着装第二个起爆弹时发生爆炸，装药工当场死亡，另外附近四人炸伤；事故原因是暴露在起爆弹外的雷管，在装药过程中收到外力冲击或摩擦而引起爆炸。 4.2009年7月11日，河北钢铁集团矿业公司石人沟铁矿井下发生爆炸事故，造成6人死亡，6人受伤。 采矿生产外包作业，承包单位管理混乱；炸药、爆破器材散放在人员密集的井底车场躲避硐室处；炸药和爆破器材裸露运输、混放、混发；爆破器材发放点照明电缆、灯具、开关、电压等级不符合国家有关规定，违反《爆破安全规程》。 导致导爆管雷管分发过程中，由于漏电产生电火花引发导爆管雷管爆炸，继而引起炸药爆炸。 5.泾县一采石场，雷雨天气爆破，分发导爆管雷管在孔口准备装药时，
天空发生雷电引爆一枚导爆管雷管，幸好旁边没人，幸好没有装药。 关于雷电，分为直击雷、感应雷和球雷。直击雷和感应雷都能在架空线路或在金属管道上产生沿线路和管道两个方向迅速传播的雷电冲击波。 雷电具有电流幅值大（10KA~数百KA）;电流陡度大（可达50KA/微秒）；冲击性强，冲击过压高（可达数百到数千千伏）的特点。 无论井下，露天，不应该在雷雨天使用导爆管雷管起爆；高压线旁，带电电缆附近使用导爆管雷管起爆同样要注意安全风险。 爆破作业中,不能因为导爆管雷管安全而忽视其不安全的一面，必须将导爆管雷管与其它雷管同等标准对待，做到轻拿轻放，避免撞击！- 运输雷管时，严禁发生撞击、摩擦、抛掷作用。 单发导爆管雷管殉爆距离与火雷管相同；运输中若有一发导爆管雷管意外爆炸，其它导爆管雷管都有可能引爆！ 导爆管雷管在装箱中不严实，运输中不能有半点马虎，必须严格按章办事！ 爆破安全事故 违章装卸造成爆炸伤害事故 1993年10月21日，某单位进行隧道开挖，爆破器材运到掌子面
移液器操作注意事项 移液器是生物\化学实验室常用的小容量移取液体的单道微量移液器。 移液器的使用 1、选择量程合适的移液器：移液器只能在特定量程范围内准确移取液体，如超出最低或最大量程，会损坏移液器并导致计量不准； 2、设定容量值 粗调：通过调节旋钮将容量值迅速调整至接近自己的预想值； 细调，当容量值接近设定值以后，应将移液器刻度显示窗平行放至自己的眼前，通过调节旋钮慢慢地将容量值调至预想值，从而避免视觉误差所造成的影响； 设定容量值时的注意事项：在调节量程时，如果要从大体积调为小体积，则按照正常的调节方法，逆时针旋转旋钮即可。但如果要从小体积调为大体积时，则应先顺时针旋转刻度旋钮至超过量程的刻度，再回调至设定体积，这样可以保证量取的最高精确度。在设定容量值的过程中，禁止将按钮旋出量程，否则会卡住内部机械装置而损坏了移液器。 3、吸液嘴（枪头）的装配：把白套筒顶端插入吸液嘴，在轻轻用力下压的同时，把手中的移液器按逆时针方向旋转至吸液嘴卡紧。切记用力不能过猛，更不能采取剁吸头的方法来进行安装。吸液嘴卡紧的标志是略为超过O型环，并可以看到连接部分形成清晰的密封圈。 4、预洗吸液嘴：在安装了新的吸液嘴或增大了容量值以后，应该把需要转移的液体吸取、排放两到三次，确保移液工作的精度和准度； 5、吸液：先将四指并拢握住移液器上部，用拇指按住塞杆顶端的按钮，向下按到第一停点，再将吸头垂直浸入液面2~3mm，缓慢平稳松开按钮，吸上液体，并停留1～2秒钟（粘性大的溶液可加长停留时间）； 6、移液：缓慢抬起移液器取出吸液嘴，确保吸液嘴外壁无残留液体。可用定性滤纸抹去吸嘴外面可能黏附的液滴。小心勿触及吸液嘴口； 7、目测吸入的液体体积是否合理； 8、放液：将吸液嘴贴到容器内壁并保持20°-40°倾斜，平稳地把按钮压到第一停点，停1-2s（粘性大的液体要加长停留时间）后，继续按压到第二停点，排出残余液体。松开按钮，然后将吸液嘴沿着内壁向上移开； 9、按吸头弹射器除去吸头，吸取不同样本液体时必须更换吸头； 河南信诺仪器设备有限公司产品服务宗旨： ●向用户提供持续、高效、快捷的服务，构建优质服务品牌； ●建立完善的服务网络，向用户提供专业化、标准化、多元化，产品化服务； 河南信诺仪器设备有限公司售后服务宗旨： ●终身提供维修及维护服务，终身负责零配件的及时供应； ●终身免费提供技术咨询及技术支持服务；
English Introduction Amicon? Ultra-15 10K centrifugal filter devices provide fast ultrafiltration, with the capability for high concentration factors and easy concentrate recovery from dilute and complex sample matrices. The vertical design and available membrane surface area provide fast sample processing, high sample recovery (typically greater than 90% of dilute starting solution), and the capability for 80-fold concentration. Typical processing time is 15 to 40 minutes. Solute polarization and subsequent fouling of the membrane are minimized by the vertical design, and a physical deadstop in the filter device prevents spinning to dryness and potential sample loss. The concentrate is collected from the filter device sample reservoir using a pipettor, while the ultrafiltrate is collected in the provided centrifuge tube. The device can be spun in a swinging-bucket or fixed-angle rotor. Amicon? Ultra-15 10K devices are supplied non-sterile and are for single use only. Intended Use The Amicon? Ultra-15 product line includes 5 different cutoffs (Molecular Weight Cutoff, MWCO), however, the Amicon? Ultra-15 10K device (10,000 MWCO) is the only device intended for in vitro diagnostic use. It can be used to concentrate serum, urine, cerebrospinal fluid, and other body fluids prior to analysis. For information on other Amicon? Ultra-15 cutoffs, go to https://www.doczj.com/doc/d08166406.html, and enter Amicon Ultra-15 in the search box. User Guide Amicon ? Ultra-15 10K Centrifugal Filter Devices for volumes up to 15 mL UFC901008UFC901024UFC901096 C V
实验五导爆管雷管的加工与网路连接 1、实验目的： 导爆管是一种内壁涂敷有猛炸药、以低爆速传递爆轰波的饶性塑料细管，其传爆速度为（1650~1950）m/s。导爆管起爆后，管内将产生爆轰波，在导爆管出口端部喷出的爆轰波可以引爆火雷管，但不能直接引爆炸药。实际施工时，可以根据每个炮孔所需要的导爆管长度现场加工导爆管雷管，既节约了成本，又满足了工程需要。通过实验应达到如下目的： 1.1了解常用起爆器材的外形特征及内部构造。 1.2了解单通、四通、雷管台钳的结构及使用方法，了解导爆管与火雷管的组装方法。 1.3了解导爆管爆破网络的联接方法及起爆方式。 2、仪器、材料： 火雷管、瞬发电雷管、塑料导爆管、单通、四通、铁箍、雷管台钳、专用爆破电桥、发爆器、导线、绝缘胶布。 3、操作步骤： 3.1观察火雷管、瞬发电雷管的外形特征。 3.2在雷管台钳上将导爆管、单通、铁箍、火雷管正确组装在一起。 3.3用四通连接件将组装好的火雷管按图5-1联接起来，形成复式网路结构。 3.4将电雷管置于指定位置或指定的容器内，测量电雷管的全电阻。 3.5将测好的电雷管连接到导爆管网路中，连接时将几根导爆管均匀地分布在电雷管周围，用胶布缠好，并要注意雷管聚能穴的方向。 3.6测量爆破主线阻值，将电雷管脚线与爆破母线相连并用胶布缠好。并将人员撤至警戒范围之外。 3.7测量电爆网路电阻，根据导线及电雷管的电阻判断网络连接是否正常。 3.8发出警戒信号→连接发爆器→起爆。 3.9观察爆破效果，收集未正常起爆之雷管并分析原因。未爆雷管由实验指导教师处理。登记爆破器材消耗数量。
4、实验报告要求： 4.1 绘制实验所用雷管的结构图，说明其作用原理。 4.2 绘制导爆管、单通、铁箍与火雷管的组装图。 4.3 绘制实验所起爆的爆破网络图并说明所用的材料、原件及仪器的名称。 4.4 说明处理未正常起爆雷管的方法。 4.5 实验分析：应说明实验目的、原理，说明存在的问题或提出建议等。 5、实验注意事项： 5.1导爆管网路应严格按设计进行连接，导爆管网路中不应有死结。 5.2用雷管起爆导爆管网路时，起爆导爆管的雷管与导爆管捆扎端端头的距离应不小于15cm，起爆雷管的聚能穴和导爆管反向连接，导爆管应均匀地敷设在雷管的周围并用胶布捆扎牢固。 5.3严禁在起爆雷管上覆盖砖块、石子等杂物。 3、思考题： 6.1导爆管概念？导爆管网路主要的连接方法有哪几种？ 6.2使用导爆管起爆法应注意哪些问题？ 6.3导爆管起爆法的传爆序列是什么？ 6.4导爆管起爆法的特点？ 6.5在导爆管起爆网路中，对起爆用电雷管聚能穴的朝向有何要求？这样做的目
移液器使用方法与注意事项 1. 设定移液体积 从大量程调节至小量程为正常调节方法，逆时针旋转刻度即可； 从小量程调节至大量程时，应先调至超过设定体积刻度，再回调至设定体积，这样可以保证移液器的精确度。 2. 装配移液枪头 将移液枪垂直插入吸头，左右旋转半圈，上紧即可。 （注意：用移液器撞击吸头的方法是非常不可取的，长期这样操作回导致移液器的零件因撞击而松散，严重会导致调节刻度的旋钮卡住。） 3. 吸液及放液 垂直吸液； 吸头尖端浸入液面3mm以下，吸液前枪头先在液体中预润洗2-3次确保移液的精度和准度（因为吸头内壁会残留一层”液膜”，造成排液量偏小而产生误差）； 慢吸慢放，以防突然松开溶液吸入过快而冲入取液器内腐蚀柱塞而造成漏气； 放液时如果量很小则应吸头尖端可靠容器内壁。 （使用时要检查是否有漏液现象。方法是吸取液体后悬空垂直放置几秒中，看看液面是否下降。如果漏液，则检查吸液嘴是否匹配和弹簧活塞是否正常。） 4. 浓度和粘度大的液体，会产生误差，为消除其误差的补偿量，可由试验确定，补偿量可用调 节旋钮改变读数窗的读数来进行设定。（可采用反向移液技术移取高粘度液体） 4．吸有液体的移液枪不应平放，枪头内的液体很容易污染枪内部而可能导致枪的弹簧生锈 5．移液枪在每次实验后应将刻度调至最大，让弹簧回复原型以延长移液枪的使用寿命 6. 移液枪校正 可用分析天平称量所取纯水的重量并进行计算的方法，来校正取液器，1mL 蒸馏水20℃时重0.9982g. 7.移液器严禁吸取有强挥发性、强腐蚀性的液体（如浓酸、浓碱、有机物等）。 8. 严禁使用移液器吹打混匀液体。 9. 不要用大量程的移液器移取小体积的液体，以免影响准确度； 同时，如果需要移取量程范围以外较大量的液体，请使用移液管进行操作。 10.如液体不小心进入活塞室应及时清除污染物； 定期清洁移液枪外壁，可以用95%酒精或60%的异丙醇，再用蒸馏水擦拭，自然晾干。
超滤管使用注意事项 1、选择合适的超滤管。通常应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3，比如目的蛋白分子量为35kDa，就可以选择10kDa截留分子量的超滤管。若目的蛋白分子量为10kD 左右，则可以用截留分子量3kD的超滤管。认真阅读使用说明书，注意超滤膜对各种化学物质的耐受程度有所不同。 2、新买来的超滤是干燥的，使用前加入超纯水，水量完全过膜，冰浴或冰箱里预冷几分钟。然后将水倒出，即可加入蛋白液，加入的多少，以不超过管顶的白线为准。操作要轻，加入蛋白液前，超滤管需要插在冰上预冷。 3、平衡。质量和重心二者都要达到平衡。注意转速和加速度不可太快，否则直接损坏超滤膜。开始离心超滤（离心机预冷至4度）。不同离心机的转速rpm换算成g之后，有所不同。离心机的加速度调至最低档，减小对膜的压力。注意，一定要等离心机达到目的转速之后，方可离开离心机，否则离心机出问题时，无法第一时间处理。膜与转轴的方向根据说明书调整（角转离心机的情况是膜与轴垂直）。在实际使用中，一般转速开的比说明书里的要低，这样可以延长离心管的使用寿命。 4、当浓缩到剩下1ml时，取50ul缓冲溶液，加入10ul流穿，看有没变蓝色，以此判断超滤管是否漏掉蛋白。如果管漏了，将上层和流穿重新倒入新管中开始超滤。要精确判断是否漏管，用5mgml的BSA离心10min，再取流穿，跑蛋白胶或Bradford粗测，继续加入剩下的蛋白液浓缩（在冰上操作，防止蛋白受热），直到所有浓缩液都加完为止。离心过程中注意是否发生蛋白沉淀，导致堵管。若发生沉淀，要确定沉淀的具体原因，是蛋白浓度过高还是Buffer不合适；前者可用多根超滤管同时超滤，降低浓度的办法解决，后者的方法是换不同的Buffer，直到蛋白不发生沉淀为止。 5、前面几步用以浓缩蛋白，如果要换Buffer，在总蛋白液浓缩至1ml左右的时候，轻轻加入新的Buffer（经0.22um超滤膜超滤），再浓缩至1ml左右，连续三次，最后一次的浓缩终体积根据需要的蛋白浓度而定，一般不多于500ul，也有浓缩至200ul以内的情况。按照每次至少10倍左右的体积浓缩算，三次达到1000倍以上，基本上可以达到换buffer 的目的。 自来水过滤器家用超滤机：