名词解释
1 .Cassette mutagenesis: 盒式突变(cassette mutagenesis),又称片段取代法(DNA fragment replacement),利用li标基因序列屮适当限制酶切位点，插入备种合适的突变DNA片段，用以取代目标基因屮特定DNA片段
2.DNA shuffling: DNA改组(DNA shuffling)将DNA拆散后重排，一种模仿6然进化的体外DNA重组的新技术.这种方法不仅可以对一种基因人为进化，而且可以将具有结构同源性的几种基因进行重组，共同进化岀一种新的蛋H质.在实验室屮把DNA改组与有效的筛选方法结合起来可为多领域的应用快速进化基因.
3.Yeast centromeric plasmid：酵母着丝粒载体，一种在YRp质粒结构基础上增加了一段来白酵母染色体着丝粒DNA片段的载体
4.yeast artificial chromosome酵母人丁.染色体型载体，具有酵母染色体的主要构件包括酵母染色体自主兰制序列(ARS)、着丝粒序列(CEN)和端粒序列(TEL)。
5.Inclusion Bodies
6.Refolding：
7.Interferon：干扰索是由多种细胞产生的具有广泛的抗病毒、抗肿寤和免疫调节作用的可溶性糖蛋白
8.Interleukin: 白细胞介素(interleukin, IL),简称白介素:是由多种细胞分泌的一类具有免疫调节活性的细胞因了。这类物质主要是市白细胞合成，且主要介导H细胞间的相互作川。一类低相对分了量的蛋白多肽，通常由一个或几个基因表达合成
9.Antisense technology：反义技术(antisense technology)是采用反义核酸分了(人T合成或生物合成的DNA或RNA,它们能与DNA、RNA互补)抑制、封闭或破坏与疾病发生相关的靶基因表达的一种手段
10.siRNA :RNAi是一个依赖ATP的过程，在此过程屮，dsRNA (外源或内生)首先被降解为
具3,端有2?3nt突出、长21?23bp的小分了双链RNA,这种RNA称为小干扰RNA(siRNA)。siRNA通过碱基互补配对识别具同源序列的mRNA,并介导其降解。
11.RNAi: RNAi,又称为RNA干扰或RNA干涉；是一种由dsRNA所引起的序列特异性基因沉默现彖Fire等(1998)发现将dsRNA注入线虫体内后可抑制序列同源基因的表达，并证实这种抑制主要作用于转录之示，所以又称转录示基因沉默(post transcriptional gene silencing, PTGS)。将这一现象称为RNA 干扰(RNA interference,简称RNAi)。
12.Subunit vaccine: 基因丁?稈亚单位疫苗；只含有病原体的一种或儿种抗原，而不含有病
原体的其他遗传信息
13.Virus like particles：病毒样颗粒疫苗(Virus like particles))IJ于免疫的抗原物质模拟了其天
然结构，诱导的体液和细胞免疫反应具有更强的针对性，保护效果更好。
14.Live recombinant vaccine:用基因工程的方法对细菌和病毒进行改造，使Z成为重纟fl活疫苗(live recombinant vaccine)o这种重组活疫苗可以是非致病性微生物通过基因工程的方法使Z
携带并表达某种特定病原体的抗原决定簇基因，产生免疫原性;也可以是致病性微生物通过基因工程的方法修饰或去掉毒性基因以后，仍保持免疫原性
I5.ScFv：ScFv是将抗体重链、轻链V区通过一段连接肽连接而成的抗体V区单链片段。其连接肽一般为15个氨基酸,序列为(Gly4Ser) 3
16.DsFv: DsFv是在轻链、重链V区适当部位各引入1个半胱氨酸,形成以二硫键固定的Fv 段。其结合能力及稳定性均优于ScFv ,用DsFv构建的免疫制剂己进入临床试用前期阶段。17.PNAs：肽核酸(peptide nucleic acids, PNAs)：是一种以肽为骨架的DNA类似物，它是在将
反义寡核廿酸的磷酸一糖骨架以肽键取代后得到的一类新型化合物
18.Prodrug: 前药转换体外无或较小活性体内经酶或非酶的作川转化为具有药理作用
的化合物
19.Expression cassette: 表达盒(expression cassette)绘酵母基因表达载体最重要的构件，
主要由转录启动了和终止了纟R成。如果需要外源基因的表达产物分泌，在表达盒的启动了下游还应该包括分泌信号序列
20.Signal sequence：信号序?lj(signal sequence),是前体蛋白N端一段17?30个氨基酸残基的分泌信号肽的编码区；作用：引导分泌蛋白在细胞内沿着正确的途径转移到胞外，对于分泌蛋H翻译后加工和生物活性有重要意义
阐述题
1?生物技术新药设计的基本策略包括那些？
仿真、类似、结构简化、激活、拮抗、拼合、前药转换、软药代谢、老药新用、化害为利等。
2、简述基因工程药物研发的基本程序。
构建目的基因DNA重组体
将DNA重组体转入宿主菌构建T程菌工程菌的发酵
外源基因表达产物的分离纯化
产品的检验
3、表达载体需要具备哪些条件？
能够独立复制.复制能力强，多用松弛型；
具有灵活、便于操作的多克隆位点；
具有方便的筛选标记；
具有强启动了，能为大肠杆菌的RNA聚合酶识别；
具有强终止了；
所产生的mRNA必须具有翻译的起始信号，即起始密码AUG和SD序列；
一般具有阻遏子，使启动子受到控制
4、什么是反义技术？反义药物包括哪些？
>反义技术(antisense technology)是采用反义核酸分子(人工合成或生物合成的DNA或RNA,它们能与DNA、RNA互补)抑制、封闭或破坏与疾病发生相关的靶基因表达的一种手段
> 反义药物分为6类：反义RNA (antisense RNA)
反义寡核廿酸(antisense oligodeoxynucleotid巳s, ODNs) 肽核酸(peptide nucleic acids, PNAS) 核酶(ribozyme)和DNAzyme
Aptamer
小干涉RNA(siRNA
5.什么是肽核酸？有何特点和结构特征?
肽核酸(peptide nucleic acids, PNAs)：是种以肽为骨架的DNA类似物，它是在将反义寡核普酸的磷酸一糖骨架以肽键取代后得到的一类新型化合物
＞其特点：1.与核酸的杂交能力强于核酸间的杂交能力；2.热稳定性高于核酸间的杂交
体；3.抗酶解能了极强。由于其非肽和非核酸的结构特点，蛋白酶和核酸酶均不能降解PNA
6、何谓基因治疗？有哪几类？
＞基于修饰活细胞遗传物质而进行的医学干预。细胞可以体外修饰，随后再注入患者体内；或将基因治疗产品岚接注入患者体内,使细胞内发生遗传学改变。这种遗传学操
纵的日的：预防、治疗、治愈、诊断或缓解人类疾病"
＞1、体细胞基因治疗(somatic gene therapy)
治疗基因转移到体细胞内使Z表达基因产物，以达到治疗li的
2、生殖细胞基因治疗(gennline gene therapy)
将治疗基因转移到患者的生殖细胞或早期胚胎内的一种基因疗法
7、细胞因子主要包括哪些种类？何谓干扰素？包括哪些类型？如何提高基因工
程干扰素IFN-P的生物学活性？
① 干扰素(Interferon, IFN)
白细胞介素(Interleukin, IL)
集落刺激因子(Colony stimulating factor, CSF)
肿瘤坏死因了(Tumor necrosis factor,TNF)
生长因了(Growth factor, GF)
趋化因了(Chemokine CK)
造血细胞因子(Hematopoietic cytokine)
神经营养因子(Neurotrophic factor)
＞干扰素是由多种细胞产生的具有广泛的抗病毒、抗肿瘤和免疫调节作用的可溶性糖蛋白。
＞根据干扰素的产生细胞、受体和活性等综合因素将其分为2种类型：I型(a, P) 和II型(Y)＞用Scrl7替代Cysl7,称为丝氨酸B干扰素(IFN-P Ser),使大肠杆菌的表达产物能够正确折叠成高活性的IFN?B
8、基因工程重组激素类药物有哪些主要类型？各自的结构特征如何？如何通过基因工程技术开发速、常效和高效胰岛素制剂？
%1胰岛素生长激素心素钠及利钠多肽促性腺激素
＞②胰岛素：胰岛素是胰岛B细胞合成和分泌、由A、B两条多肽链借二硫键连接而成、含51个氨基酸残基的蛋白质激素。A链有21个氨基酸残基,
B链有30个；两条肽链有A7-B7和A20-B19的Cys之间形成的两对二硫
键和连，A链内部还有一对由A6-A11的Cys残基形成的链内二硫键＞生长激素：人生长激素(hGH)的主要形式：191个氨基酸的单一多肽链构成的球形蛋白。在55-165位和182-189位氨基酸Z间有两个分子内二硫
人心钠素(hANP)是由28个氨基酸残基组成的活性多肽，含链内二硫键
(Cys7-Cys23),使ANP分子呈环状结构，除第12位的氨基酸(人为Met, 其它为
lie)外，哺乳动物的ANP高度保守
＞促性腺激素：a亚基由92个氨基酸残基组成，寡糖链连接在Asn52和Asn78位上；0亚基由111个氨基酸组成，寡糖链连接在Asn7和Asn24 ±
9、抗体药物包括哪几个层次？比较细胞工程抗体与基因工程抗体的特点
＞多克隆抗体：指由不同B细胞克隆产生的针对抗原物质屮多种抗原决定簇的多种抗体混合物如:免疫血清
单克隆抗体：由单一-克隆的杂交瘤细胞分泌的抗体
基因工程抗体：利用重组DNA和蛋白质工程技术,对抗体基因进行加工改造和
重新装配,经转染适当的受体细胞所表达的抗体分子＞细胞工程抗体：①骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合
%1杂交瘤细胞的筛选
%1抗体的检测
优点：高度专一；高度存一缺点：
基因工程抗体：模拟全套天然抗体库；避开了人工免疫和杂交瘤技术；可获得高亲和力的人源化抗体
10、比较大肠杆菌、酵母菌和哺乳动物细胞表达系统的异同？
＞基于T7噬菌体R\A聚合酶/启动子的大肠杆菌表达系统
＞载体pET-28a的主要构成元件：有T7噬菌体启动子、乳糖操纵子、核糖体结合位
点、6XHis标签序列、凝血酶切割位点、多克隆位点、T7噬菌体终止子以及乳糖阻遏子序列(lad). pBR322复制子、fl噬菌体复制子、卡那霉索筛选标记序列等
11、影响蛋白质药物在大肠杆菌和酵母菌中表达的因素各是什么?
＞ mRNA屮是否有不为其二级结构封阻的RBS；确定转录终止子的存在与否；检查克隆基因序列的密码子是否为大肠杆菌不常用者
＞①外源基因在表达系统屮的遗传稳定性。②不同生物在蛋白质合成、加工和修饰功能上的差别。③产物在短吋间的过量表达等。
12、重组溶栓类药物有哪几类?
＞第一代：尿激酶和链激酶
＞第二代：组织型纤溶酶原激活剂(t?PA)、单链尿激酶型纤溶酶原激活剂(scu-PA),
＞第三代溶栓药物。主要是对第一、二代溶栓药物进行改造
13、如何设计和构建DNA疫苗？与传统疫苗相比，DNA疫苗有何优点和不足?
＞是将一种或多种抗原编码基因克隆到真核表达载体上构建成重组DNA质粒(plasmid),将其直接注入到体内，抗原基因在机体细胞内表达，进而激活机体免疫系统，因此也称为DNA免疫。
＞ DNA疫苗的优点：抗原合成和递呈过程与病原的自然感染相似，通过MHC I类和
II类分子直接呈递给免疫系统。编码正确折叠的糖基化抗原分子；易于构建和制备；化学稳定性：DNA比蛋白质稳定得多,便于保存和运输，成本低廉，适于规模化生产
14、生物技术新药临床前研究包括哪些主要内容？有什么特点？
%1安全性问题：免疫毒性，杂质引起的毒性，药理作用放大引起的毒性.
%1受试物的质量：要与临床用纱有可比性.
%1给药剂量与动物的全选择：剂量与临床一致.动物的选择因药血不同.
%1免疫原性：检定产生的抗体，是否有意义，以抗体产生不影响治疗作用为准.
%1三致试验(致癌、致残、致畸形)：不同新药，要求不同.
15、简述酵母载体的基本结构
?DNA复制起始区：一小段具有DNA复制起始功能的DNA序列
②选择标记：是载体转化酵母筛选转化子时必须的构件，它们和宿主的基因型
札I互配合
%1整合介导区:是与受体菌株基因组有某种程度同源性的一-段DNA序列，能有效地介导载体与宿主染色体之间发生同源重组
%1有丝分裂稳定区
%1表达盒(expression cassette):是酵母基因表达载体最重要的构件，主要由转录启动子和终止子组成
16、造血因子有哪些生物学特性？
%1都是糖蛋白，且相对分子质量较小；
%1人的造血细胞因子基因多数位于第5及第7号染色体长臂；
%1主要通过细胞旁分泌途径，即由细胞分泌释放，直接作用于靶细胞，不通过血液循环
17、简述利钠多肽家族成员的结构特征及其特性
心钠素ANP、脑钠BNP和C型利钠肽CNP都具有一个17个aa的环状结构，其屮11个“a位置和种类高度保守，完全一致，被认为是生理功能相似的结构基础
18、举例说明重组tPA改构及其目的
1983年Pennica等从Bowes黑色索瘤细胞系屮提取了tPA的cDNA,并在大肠杆菌屮表达成功，但由于复性困难，未能形成产品
19、比较用于基因治疗腺病毒载体的结构和主要优缺点
优点：
1）人类是腺病毒的天然宿主，所以比较安全；
2）该病毒在体外稳定，易于制备与纯化；
3）宿主范|韦I广，既可感染分裂细胞，乂可感染非分裂细胞；
4）可原位感染，特别是肺，可经口服，喷雾，气管内滴注等多途径进行治疗；5）外源基因表达水平较
不足之处：
1）它几乎可以感染所有的细胞，因此缺乏特异性；
2）不能整合到宿主染色体JL,所以不能持续表达所需产物，表达时间短暂, 需重复给予载体制剂治疗；
3）因可能刺激免疫反应，使反复治疗的效果会逐渐降低23、基因工程药物生产的常用表达系统有哪些？每一类表达系统的载体结构和
宿主细胞（细菌）各有什么特点
选择 ABC分子印迹可以应用于下列哪些方面：模拟抗体，生物传感器的构建，手性药物的分离，新药的构建 ABD酶促反应的特点包括：催化效率高，酶的催化活性不受调节和控制，专一性强，反应条件温和 ABCD体细胞基因治疗常用的靶细胞主要有：造血干细胞成纤维细胞肌细胞、肾细胞肝细胞、淋巴组织 B世界上第一个基因工程药物是：人白细胞干扰素INFa 重组人胰岛素人鼠源性单克隆抗体尿激酶 C下列不属于脂类药物的是：胆酸固醇灵芝大豆异黄酮 C下列能够产生抗体的细胞是：肝细胞，巨噬细胞，浆细胞，血红细胞 ABCD下列属于细胞代谢过程中的生理活性物质的是：维生素，植物激素，抗生素，生物碱 C下列属于细胞工程内容的是：染色体改造的理论和技术，酶改造的理论和技术，细胞融合的理论和技术，有关产物提取纯化的理论和技术 ABD工业上下列哪些是使用大肠杆菌生产的：谷氨酸脱羧酶，天门冬氨酸酶，丙酮酸脱羧酶，青霉素酰化酶 D被称为药剂学鼻祖的是：张仲景，希波克拉底，华佗，格林 AB造血生长因子的作用是：促进骨髓造血细胞分化，促进骨髓造血细胞增殖和定向成熟，动员祖细胞从骨髓移动到外周血，促进血液生产和血液循环 D下列不属于按分子大小分离的方法是：有超滤法，凝胶过滤法，超速离心法，沉淀法 ABCD下列可以作为生物药物的是：氨基酸及其衍生物，酶与辅酶，糖类，细胞生长因子 D基因工程中，载体的本质是：DNA，RNA ，蛋白质，DNA或RNA ABCD能够用作蛋白质药品冷冻干燥保护剂的是：糖类/多元醇，表面活性剂，氨基酸、盐和胺，聚合物 ABC才才下列属于酶反应器的是：鼓泡塔反应器，填充床反应器，流化床反应器，淤浆反应器
生物技术制药试卷A 一、名词解释：（本题共10小题，每小题5分，共计50分） 1、生物药物：是指利用各种生物材料，综合采用各种生物技术的原理和方法制造的一类用于预防、治疗和诊断的制品。 2、抗生素：由微生物产生，在低浓度下能杀灭和抑制病原体，但对宿主不会产生严重的副作用的物质，或使用化学方法半合成的衍生物和全合成的仿制品。广义的抗生素还包括一些抗肿瘤药、杀虫剂和除草剂。 3、补料分批发酵：是指将种子接入发酵反应器进行培养，经过一段时间之后，间歇式地、或者连续地补加新鲜培养基，使菌体进一步生长的方法。 4、限制性内切酶：生物体内能识别并切割特异的双链DNA序列的一种内切核酸酶。它是可以将外来的DNA切断的酶，即能够限制异源DNA的侵入并使之失去活力，但对自己的DNA却无损害作用，这样可以保护细胞原有的遗传信息。由于这种切割作用是在DNA 分子内部进行的，故名限制性内切酶。 5、载体：将外源目的DNA导入受体细胞，并能自我复制和增殖的工具。 6、转化细胞系：正常细胞经过某个转化过程，失去正常细胞的特点而获得无限增殖能力的细胞系。 7、微载体培养：将细胞吸附于微载体表面，再在培养液中进行悬浮培养，使细胞在微载体表面生长成单层的方法称为微载体培养法。 8、毛状根：受到发根农杆菌感染后形成的根组织，易于培养，改变了植物的次生代谢。毛状根生长快速和次级代谢产物含量高，特别适用于从木本植物和难于培养的植物中得到较高含量的次级代谢产物。
9、气升式反应器：没有搅拌，气体通过喷管进入剪切力更小，主要用于悬浮细胞的分批式培养，近年开发用于贴壁细胞的微载体培养，并进行半连续、连续和灌流式培养。 10. 酶固定化：指经物理或化学方法处理，使酶（细胞）限制或固定于特定空间位置，使之不但能连续发挥催化作用，而且反应后酶又可以反复利用的技术。 二、简答题（本题共5小题，每小题8分，共40分） 1. 简述生物药物新药的研发流程。 答：新药研究和开发的主要过程： (1)确定研究计划； (2) 准备候选菌株； (3) 选择合适药理模型初筛（摇瓶）、复筛（小型发酵）体外试验、细胞试验； (4) 提纯有效成分进行化学分析； (5) 精制样品（中型发酵）； (6) 临床前Ⅱ期(Preclinical Ⅱ) ； (7) Ⅰ期临床(Preclinical I)； (8) Ⅱ期临床(Preclinical Ⅱ)； (9) Ⅲ期临床(Preclinical Ⅲ)； (10) 注册申请上市、试生产； (11) 售后监测(Post－marketing surveillance)。 2.简述生物药物的优点和缺点。 答：生物药物是指利用各种生物材料，综合采用各种生物技术的原理和方法制造的一类用于预防、治疗和诊断的制品。 优点：
第一章绪论 填空题 1. 生物技术制药的特征 _高技术、高投入、高风险、高收益、长周期。 2. 生物药物广泛应用于医学各领域，按功能用途可分为三类，分别是_治疗药物、预防药物、诊断药物。 3. 现代生物药物已形成四大类型：一是应用DNA重组技术制造的基因重组多肽、蛋白 质类治疗剂；二是基因药物_______________ ；三是来自动物植物和微生物的天然生物药 物；四是合成与部分合成的生物药物； 4. 生物技术的发展按其技术特征来看，可分为 三个不同的发展阶段，传统生物技术阶段；近代生物技术阶段；现代生物技术阶段。 5. 生物技术所含的主要技术范畴有基因工程; 细胞工程；酶工程；发酵工程；蛋白质核酸工程和生化工程； 选择题 1?生物技术的核心和关键是（A ） A细胞工程B蛋白质工程C酶工程D 基因工程 2. 第三代生物技术（A ）的出现，大大扩大了现在生物技术的研究范围 A基因工程技术B蛋白质工程技术C海 洋生物技术D细胞工程技术 3. 下列哪个产品不是用生物技术生产的（D）A青霉素B淀粉酶C乙醇D氯化钠 4. 下列哪组描述（A ）符合是生物技术制 药的特征 A高技术、高投入、高风险、高收益、长周期B 高技术、高投入、低风险、高收益、长周期 C高技术、低投入、高风险、高收益、长周期 D高技术、高投入、高风险、低收益、短周期 5. 我国科学家承担了人类基因组计划（C ）的测序工作 A10% B5% C 1% D 7% 名词解释 （2）近代生物技术阶段的技术特征是微生物 发酵技术，所得产品的类型多，不但有菌体的初 级代谢产物、次级代谢产物，还有生物转化和酶 反应等的产品，生产技术要求高、规模巨大，技 术发展速度快。代表产品有青霉素，链霉素，红 霉素等抗生素，氨基酸，工业酶制剂等。 （3）现代生物技术阶段的技术特征是DNA 重 组技术。所得的产品结构复杂，治疗针对性强， 疗效高，不足之处是稳定性差，分离 纯化工艺更复杂。代表产品有胰岛素，干扰素和 疫苗等。 3. 生物技术在制药中有那些应用？ 生物技术应用于制药工业可大量生产廉价的防治 人类重大疾病及疑难症的新型药物，具体体现在 以下几个方面： （1）基因工程制药，利用基因工程技术可生 产岀具有生理活性的肽类和蛋白质类药物，基因 工程疫苗和抗体，还可建立更有效的药物筛选模 型，改良现有发酵菌种，改进生产工艺，提供更 准确的诊断技术和更有效的治疗技术等。随着基 因技术的发展，应用前景会更广阔。 （2）细胞工程和酶工程制药 该技术的发展为现代制药技术提供了更强大的技 术手段，使人类可控制或干预生物体初次生代谢 产物和生物转化等过程，使动植物能更有效的满 足人类健康方面的需求。 （3）发酵工程制药 发酵工程制药的发展主要体现在对传统工艺的改 进，新药的研制和高效菌株的筛选和改造等。 第二章基因工程制药 填空题 1. 基因工 程药物制造的主要步骤是：目的 基因的获得；构建DNA重组体;构建工程菌；目 的基因的表达；产物的分离纯化; 产品的检 验。 1. 生物技术制药 采用现代生物技术可以人为的创 造一些条件，借助某些微生物、 植物或动物来生产所需的医学药 品，称为生物技术制药。 2. 生物技术药物 一般说来，采用DNA重组技术 或其它生物新技术研制的蛋白 质或核酸来药物称为生物技术药 物。 3. 生物药物 生物技术药物是重组产品概念在 医药领域的扩大应用，并与天然 药物、微生物药物、海洋药物和 生物制品一起归类为生物生物药 物。 简答题 1.生物技术药物的特性是什 么？ 生物技术药物的特征是： （1）分子结构复杂 （2）具有种属差异特异性 （3）治疗针对性强、疗效高 （4）稳定性差 （5）免疫原性 （6）基因稳定性 （7）体内半衰期短 （8）受体效应 （9）多效应和网络效应 （10）检验特殊性 2.简述生物技术发展的不同阶段 的技术特征和代表产品？ （1）传统生物技术的技术特征 是酿造技术，所得产品的结构较 为简单，属于微生物的初级代谢 产物。代表产品如酒、醋、乙 醇，乳酸，柠檬酸等。
一：选择题 1、酶的主要来源是( C) A、生物体中分离纯化 B、化学合成 C、微生物生产 D、动/ 植物细胞与 组织培养 2、所谓“第三代生物技术”是指(A) A、海洋生物技术 B、细胞融合技术 C、单克隆技术 D、干细胞技术 3、菌体生长所需能量与菌体有氧代谢所能提供的能量在什么情况下，菌体往往会产生代谢副产物乙酸：(A) A、大于 B、等于 C、小于 D、无关 4、促红细胞生长素( EPO)基因能在大肠杆菌中表达，但却不能用大肠杆菌的基因工程菌生产人的促红细胞生长素，这是因为：( E) A、人的促红细胞生长素对大肠杆菌有毒性作用 B、人促红细胞生长素基因在大肠杆菌中极不稳定 C、大肠杆菌内毒素与人的促红细胞生长素特异性结合并使其灭活 D、人的促红细胞生长素对大肠杆菌蛋白水解酶极为敏感 E、大肠杆菌不能使人的促红细胞生长素糖基化 5、目前基因治疗最常用的载体是：(B) A、腺病毒 B、反转录病毒 C、腺相关病毒 D、痘苗病毒 E、疱疹病毒 6、cDNA第一链合成所需的引物是：( D) A、Poly A B、Poly C C、Poly G D、Poly T E、发夹结构 7、为了减轻工程菌的代谢负荷，提高外源基因的表达水平，可以采取的措施有：(A) A将宿主细胞生长和外源基因的表达分成两个阶段 B、在宿主细胞快速生长的同时诱导基因表达 C、当宿主细胞快速生长时抑制重组质粒的表达 D、当宿主细胞快速生长时诱导重组质粒的复制 8、基因工程制药在选择基因表达系统时，首先应考虑的是：(A) A、表达产 物的功能B、表达产物的产量 C.表达产物的稳定性 D.表达产物分离纯化的难易 9、疫苗出产前需进行理化鉴定、效力鉴定和(安全性鉴定)。 10、基因工程药物的化学本质属于：(C) A. 糖类 B.脂类 C.蛋白质和多肽类 D.氨基酸类 11、用聚二乙醇( PEG)诱导细胞融合时，下列错误的是：(C) A、PEG的相 对分子量大，促进融合率高B、PEG的浓度高，促进融合率高C、PEG 的相对分子量小，促进融合率高D、PEG的最佳相对分子量为 4000 12、以大肠杆菌为目的基因的表达体系，下列正确的是：(C) A、表达产物 为糖基化蛋白质B、表达产物存在的部位是在菌体内 C、容易培养，产物提纯简单 D 、表达产物为天然产物 13、人类第一个基因工程药物是：(A) A、人胰岛素 B、重组链激酶 C、促红细胞生成素 D、乙型肝炎疫苗 14、下列不属于加工改造后的抗体是：(C) A、人-鼠嵌合抗体 B、单链抗体C 、鼠源性单克隆抗体D、单域抗体 15、动物细胞培养的条件中，不正确的是：(D)
生物技术制药要点概括 1.现代生物技术发展大事记： 年代主要发现和进展 1953 Watson和Crick阐明了DNA的双螺旋结构 1958 分离得到DNA聚合酶I，并在试管内制得人工DNA 1960 发现mRNA，并阐明了mRNA在蛋白质合成中的作用 1966 破译遗传密码 1967 分离得到DNA连接酶 1970 分离出第一个限制性内切酶 1971 第一次用限制性内切酶和连接酶获得重组DNA 1972 合成了完整了tRNA基因 1974 Boyer和Cohen建立了DNA重组技术 1975 Kohler和Milstein建立了单克隆抗体技术 1976 DNA测序技术诞生 1978 Genentech公司在大肠杆菌中表达出胰岛素 1981 第一个单克隆抗体诊断试剂盒在美国被批准使用 1981 第一台商业化生产DNA自动测序仪诞生 1982 用DNA重组技术生产的第一个动物疫苗在欧洲获得批准 1983 基因工程Ti质粒用于植物转化 1988 PCR（聚合酶链式反应）技术诞生 1990 美国批准第一个体细胞基因治疗方案 1997 英国培育出世界上第一只克隆羊多莉 1998 美国批准艾滋病疫苗进行人体实验 2001 人类基因组草图完成 2003 世界上第一个正式批准的基因治疗药物重组腺病毒-p53注射液在中国上市 2008 人类将表皮细胞激活为干细胞 2.生物技术药物（biopharmaceutics）:广义是是指所有以生物质为原料只去的各种生物活性物质及其人工合成类似物、以及通过现代生物技术制的的药物，狭义指利用生物体、生物组织、细胞及其成分，综合应用化学。生物学和医药学各学科原理和技术方法制得的用于预防、诊断、治疗和康复保健的制品，而这里特指采用DNA重组技术或其他现代生物技术研制的蛋白质或核算类药物。 3.生物技术药物的四大类型：基因重组药物、基因药物、天然药物、合成的半合成的生物技术药物。 4.生物技术药物的主要特点：剂量小，活性高；分子结构复杂，分子量一般较大；稳定性较差，易失活或分解，体内半衰期短；具有种属特异性；具有免疫原性；分析检验的特殊性。 5.生物技术药物与化学药物的区别：
生物技术制药考试题复 习 Document number【980KGB-6898YT-769T8CB-246UT-18GG08】
一：选择题 1、酶的主要来源是（C） A、生物体中分离纯化 B、化学合成 C、微生物生产 D、动/植物细胞与组织培养 2、所谓“第三代生物技术”是指 (A) A、海洋生物技术 B、细胞融合技术 C、单克隆技术 D、干细胞技术 3、菌体生长所需能量与菌体有氧代谢所能提供的能量在什么情况下，菌体往往会产生代谢副产物乙酸：(A) A、大于 B、等于 C、小于 D、无关 4、促红细胞生长素（EPO）基因能在大肠杆菌中表达，但却不能用大肠杆菌的基因工程菌生产人的促红细胞生长素，这是因为：（E） A、人的促红细胞生长素对大肠杆菌有毒性作用? B、人促红细胞生长素基因在大肠杆菌中极不稳定? C、大肠杆菌内毒素与人的促红细胞生长素特异性结合并使其灭活 D、人的促红细胞生长素对大肠杆菌蛋白水解酶极为敏感 E、大肠杆菌不能使人的促红细胞生长素糖基化 5、目前基因治疗最常用的载体是：(B) A、腺病毒? B、反转录病毒 C、腺相关病毒 D、痘苗病毒 E、疱疹病毒 6、cDNA第一链合成所需的引物是：（D） A、Poly?A B、PolyC C、PolyG D、PolyT E、发夹结构 7、为了减轻工程菌的代谢负荷，提高外源基因的表达水平，可以采取的措施有：(A) A将宿主细胞生长和外源基因的表达分成两个阶段 B、在宿主细胞快速生长的同时诱导基因表达? C、当宿主细胞快速生长时抑制重组质粒的表达? D、当宿主细胞快速生长时诱导重组质粒的复制 8、基因工程制药在选择基因表达系统时，首先应考虑的是：(A) A、表达产物的功能 B、表达产物的产量C.表达产物的稳定性 D.表达产物分离纯化的难易? 9、疫苗出产前需进行理化鉴定、效力鉴定和（安全性鉴定）。 10、基因工程药物的化学本质属于：(C) A.糖类 B.脂类 C.蛋白质和多肽类 D.氨基酸类 11、用聚二乙醇（PEG）诱导细胞融合时，下列错误的是：(C) A、PEG的相对分子量大，促进融合率高 B、PEG的浓度高，促进融合率高 C、PEG的相对分子量小，促进融合率高 D、PEG的最佳相对分子量为4000 12、以大肠杆菌为目的基因的表达体系，下列正确的是：(C) A、表达产物为糖基化蛋白质 B、表达产物存在的部位是在菌体内
2018年生物技术制药习题及答案 一、选择填空题 1. 酶的主要来源是什么? 微生物生产。 2. 第三代生物技术是什么? 基因组时代。 3. 基因治疗最常用的载体是什么? 质粒载体和λ噬菌体载体。 4. 促红细胞生长素基因可在大肠杆菌中表达。但不能用大肠杆菌工程菌生产人的促红细胞生产素为什么? 因为大肠杆菌不能使人的促红细胞生长素糖基化, 人的促红细胞生长素对大肠杆菌有毒性作用。 5. 菌体生存所需能量已菌有氧代谢所需能量在什么情况下产生代谢产物乙酸?
菌体生长所需能量 (大于) 菌体有氧代谢所能提供的能量时, 菌体往往会产生代谢副产物乙酸。 6.cDNA 第一链所合成所需的引物是什么? cDNA 第一条链合成所需引物为 PolyT 。 7. 基因工程制药在选择基因表达系统时首先考虑什么? 表达产物的功能。 8. 为了减轻工程菌代谢负荷,提高外源基因表达水平可采取什么措施? 将宿主细胞生长和外源基因的表达分成两个阶段。 9. 根据中国生物制品规定要求,疫苗出厂需要经过哪些检验? 理化检定、安全检定、效力检定。 10. 基因工程药物化学本质是什么? 蛋白质。
11.PEG 诱导细胞融合? PEG 可能与可能与临近膜的水分相结合, 使细胞之间只有微笑空间的水分被 PEG 取代, 从而降低了细胞表面的极性,导致双脂层的不稳定,使细胞膜发生融合。 12. 以大肠杆菌为目的基因表达系统的表达产物,产物位置是什么? 胞内、周质、胞外。 13. 人类第一个基因工程药物是什么? 重组胰岛素。 14. 动物细胞培养的条件是什么? 温度 :哺乳类 37昆虫 25~28, ph7.2~7.4,通氧量:使 co2培养箱,不同动物比例不同。防止污染, 基本营养物质:三大营养物质维生素, 激素, 促细胞生长因子, 渗透压:大多数 260~320。 15. 不属于加工改造抗体的是什么? 单域抗体。 16. 第三代抗体是什么?
生物技术制药 第一章绪论 药学一级学科分类：药物化学、药剂学、药理学、药物分析、生药学及微生物与生化药学二级学科 ★生物技术与生物技术药物的概念 生物技术药物的分类 ?按用途分类：治疗药物、预防药物、作为诊断药物(免疫诊断试剂、酶诊断试剂、器官功能诊断药物、放射性核素诊断药物、诊断用单克隆抗体(McAb)、诊断用DNA芯片) ?按作用类型分类：细胞因子类药物、激素类药物、酶与辅酶类药物、疫苗、单克隆抗体药物、反义核酸药物、RNA干扰(RNAi)药物、基因治疗药物 ?按生化特性分类：多肽类药物、蛋白质类药物、核酸类药物、聚乙二醇(PEG)化多肽或蛋白质药物 ★生物技术药物的特性 ?理化性质特性：相对分子量大、结构复杂、稳定性差 ?药理学作用特性：活性与作用机制明确、作用针对性强、毒性低、体内半衰期短、有种属特异性、可产生免疫原性 ?生产制备特性：药物分子在原料中的含量低、原料液中长存在降解目标产物的杂质、制备工艺条件温和、分离纯化困难、产品易受有害物质污染 ?质量控制特性：质量标准内容的特殊性、制造项下的特殊规定、检定项下的特殊规定(原液、半成品及成品检定等等) 第二章基因工程制药 蛋白类药物的特点：结构确证不完全性、具有种属特异性、多功能性、免疫原性 临床前安全性评价的特殊性：蛋白类药物安全性担忧的性质和来源；受试物的纯度；相关动物的选择；给药剂量的选择；免疫原性；遗传毒性和致癌性(一般不进行常规的遗传毒性实验)；药代动力学 真核细胞表达制品的安全性问题：生产细胞DNA残留的影响、生产用血清的影响 基因工程药物稳定性研究的相关问题：药物浓度、温度、湿度和水分、氧、光照、pH 基因工程药物的缺陷：生物利用度低，半衰期短；异体蛋白具有免疫原性 基因工程菌的修饰改造方法：构建突变体、构建融合蛋白、PEG修饰(降低免疫原性、增加水溶性、延长t1/2) 基因工程制药基本环节 ?上游阶段：制备目的基因→构建重组质粒→构建工程细胞 ?下游阶段：培养工程细胞→分离纯化产物→除菌→半成品、成品检定→包装 基本工具：目的基因、各种酶(切割酶、连接酶、修饰酶等)、载体、宿主细胞 ?酶切结果：5’粘性末端、3’粘性末端、平头末端 ?1U核酸内切酶的酶活性：指在最佳反应条件下反应1小时，完全水解1mg标准DNA所需的酶量?影响限制性内切酶反应的因素： ?DNA样品的纯度： ?DNA的甲基化程度：核酸限制性内切酶不能够切割甲基化的核苷酸序列。在基因克隆中要使用甲基化酶缺陷型细菌菌株制备质粒DNA。 ?酶切反应的温度 ?DNA的分子结构 ?反应缓冲液组成 ?反应时间、反应体积等
生物技术制药考试题复 习 内部编号：（YUUT-TBBY-MMUT-URRUY-UOOY-DBUYI-0128）
一：选择题 1、酶的主要来源是（C） A、生物体中分离纯化 B、化学合成 C、微生物生产 D、动/植物细胞与组织培养 2、所谓“第三代生物技术”是指 (A) A、海洋生物技术 B、细胞融合技术 C、单克隆技术 D、干细胞技术 3、菌体生长所需能量与菌体有氧代谢所能提供的能量在什么情况下，菌体往往会产生代谢副产物乙酸：(A) A、大于 B、等于 C、小于 D、无关 4、促红细胞生长素（EPO）基因能在大肠杆菌中表达，但却不能用大肠杆菌的基因工程菌生产人的促红细胞生长素，这是因为：（E） A、人的促红细胞生长素对大肠杆菌有毒性作用? B、人促红细胞生长素基因在大肠杆菌中极不稳定? C、大肠杆菌内毒素与人的促红细胞生长素特异性结合并使其灭活 D、人的促红细胞生长素对大肠杆菌蛋白水解酶极为敏感 E、大肠杆菌不能使人的促红细胞生长素糖基化 5、目前基因治疗最常用的载体是：(B) A、腺病毒? B、反转录病毒 C、腺相关病毒 D、痘苗病毒 E、疱疹病毒 6、cDNA第一链合成所需的引物是：（D） A、Poly?A B、PolyC C、PolyG D、PolyT E、发夹结构
7、为了减轻工程菌的代谢负荷，提高外源基因的表达水平，可以采取的措施有：(A) A将宿主细胞生长和外源基因的表达分成两个阶段 B、在宿主细胞快速生长的同时诱导基因表达? C、当宿主细胞快速生长时抑制重组质粒的表达? D、当宿主细胞快速生长时诱导重组质粒的复制 8、基因工程制药在选择基因表达系统时，首先应考虑的是：(A) A、表达产物的功能 B、表达产物的产量C.表达产物的稳定性 D.表达产物分离纯化的难易? 9、疫苗出产前需进行理化鉴定、效力鉴定和（安全性鉴定）。 10、基因工程药物的化学本质属于：(C) A.糖类 B.脂类 C.蛋白质和多肽类 D.氨基酸类 11、用聚二乙醇（PEG）诱导细胞融合时，下列错误的是：(C) A、PEG的相对分子量大，促进融合率高 B、PEG的浓度高，促进融合率高 C、PEG的相对分子量小，促进融合率高 D、PEG的最佳相对分子量为4000 12、以大肠杆菌为目的基因的表达体系，下列正确的是：(C) A、表达产物为糖基化蛋白质 B、表达产物存在的部位是在菌体内 C、容易培养，产物提纯简单 D、表达产物为天然产物? 13、人类第一个基因工程药物是：(A)
生物技术制药知识点纲要 生物技术制药:采用现代生物技术，借助某些微生物、植物、动物生产药品。 生物技术药物一般来说，采用DNA重组技术或其他生物新技术研制的蛋白质或核酸类药物。 生物药物：生物技术药物是重组产品概念在医药领域的扩大应用，并与天然药物.微生物药物.海洋药物和生物制品一起归类为生物药物。 生物技术：基因工程、细胞工程、酶工程、发酵工程、生化工程、蛋白质工程、抗体工程等。 基因工程是生物技术的核心和关键，是主导技术； 细胞工程是生物技术的基础；酶工程是生物技术的条件； 发酵工程是生物技术获得最终产品的手段。 生物技术：从广义角度来看，是人类对生物资源（包括微生物、植物、动物）的利用、改造并为人类服务的技术。 第三代生物技术是海洋生物技术 我国科学家承担了人类基因组计划1%的测序工作 现代生物技术包括: ⑴重组DNA技术 ⑵细胞和原生质体融合技术 ⑶酶和细胞的固定化技术 ⑷植物脱毒和快速繁殖技术 ⑸动物和植物细胞的大量培养技术 ⑹动物胚胎工程技术 ⑺现代微生物发酵技术 ⑻现代生物反应工程和分离工程技术 ⑼蛋白质工程技术⑽海洋生物技术 现代生物技术的发展趋势主要体现在下列几个方面： ①基因操作技术日新月异，不断完善。 ②新技术、新方法一经产生便迅速地通过商业渠道出售专项技术，并在市场上加以应用。 ③基因工程药物和疫苗的研究和开发突发猛进。 ④新的生物治疗制剂的产业化前景十分光明，21世纪整个医药工业将面临全面的更新改造。 ⑤转基因植物和动物取得重大突破 ⑥现代生物技术在农业上的广泛应用将给农业和畜牧业生产带来新的飞跃。 ⑦阐明生物体基因组及其编码蛋白质的结构与功能是当今生命科学发展的一个主流方向， ⑧基因治疗取得重大进展，有可能革新整个疾病的预防和治疗领域。
第一章、绪论 1. 生物技术制药：采用现代生物技术，借助某些微生物、植物或动物来生产所需的医药品，称为生物技术制药。 2. 生物技术药物：采用DNA重组技术或其他生物新技术研制的蛋白质或核酸类药物，称为生物技术药物。 3. 生物药物：指运用生物学、医学、生物化学等的研究成果，综合利用物理学、化学、生物化学、生物技术和药学等学科的原理和方法，利用生物体、生物组织、细胞、体液等制造的一类用于预防、治疗和诊断的制品。 4. 现代生物药物四大类型：⑴应用重组DNA技术制造的基因重组多肽，蛋白质类治疗剂； ⑵基因药物 ⑶来自动物、植物和微生物的天然药物； ⑷合成与部分合成的生物药物。 5. 生物药物功能用途分类：⑴治疗药物，⑵预防药物⑶诊断药物。 6. 生物技术制药的特征：⑴高技术⑵高投入⑶长周期⑷高风险⑸高收益 7. 生物技术在制药中的应用：⑴基因工程制药：①基因工程药物品种的开发、②基因工程疫苗、③基因工程抗体、④基因诊断与基因治疗、⑤应用基因工程技术建立新药的筛选模型、⑥应用基因工程技术改良菌种，产生新的微生物药物、⑦基因工程技术在改进药物生产工艺中的应用、⑧利用转基因动、⑨植物生产蛋白质类药物 ⑵细胞工程制药：①单克隆抗体技术、②动物细胞培养 ⑶酶工程制药 ⑷发酵工程制药 8. 我国生物技术制药现状和发展前景（自己阐述观点）
第二章基因工程制药 1．基因工程生产哪些药：⑴免疫性蛋白，如各种抗原和单克隆抗体。⑵细胞因子，如各种干扰素、白细胞介素、集落刺激生长因子、表皮生长因子及凝血因子。⑶激素，如胰岛素、生长激素、心钠素⑷酶类，如尿激酶、链激酶、葡激酶、组织型纤维蛋白溶酶原激活剂及超氧化物歧化酶等。 2. 利用基因工程技术生产药品的优点在于： ⑴利用基因工程技术可大量生产过去难以获得的生理活性蛋白和多肽（如胰岛素、干扰素、细胞因子等），为临床使用建立有效的保障。 ⑵可以提供足够数量的生理活性物质，以便对其生理、生化和结构进行深入的研究，从而扩大这些物质的应用范围。 ⑶利用基因工程可以发现挖掘更多的内源性生理活性物质。 ⑷内源生理活性物质在作为药物使用时，存在不足之处，可以通过基因工程和蛋白质工程读起进行改造。 ⑸利用基因工程技术可以获得新型化合物，扩大药物筛选来源。 3. 上游阶段：是研究开发比不可少的基础，主要是分离目的基因、构建工程菌（细胞）。上游阶段的工作主要咋实验室内完成。 4. 下游阶段：是从工程菌（细胞）的大规模培养直到产品的分离纯化、质量控制等。下游阶段是将实验室成果产业化、商品化。 5. 制备基因工程药物的基本过程：获得目的基因→组建重组质粒→构建基因工程菌（或细胞）→培养工程菌→产物分离纯化→除菌过滤→半成品检定→成品检定→包装 6. 宿主菌应该满足以下要求：⑴具有高浓度、高产量、高产率；⑵能利用易得廉价原料； ⑶不致病、不产生内毒素；⑷发热量低，需氧低，适当的发酵温度和细胞形态；⑸容易进行代谢调控；⑹容易进行重组DNA技术；⑺产物容易提取纯化 7. 宿主细胞分为两大类：⑴原核细胞：大肠杆菌、枯草杆菌、芽孢杆菌、链霉菌等；⑵真核细胞：酵母、丝状真菌 8. 表达载体必须具备以下条件（特点）： ⑴载体能够独立地复制 ⑵应具有灵活的克隆位点和方便的筛选标记，以利于外源基因的克隆、鉴定和筛选。而且克隆位点应位于启动子序列后，以使克隆的外源基因得以表达。 ⑶应具有很强的启动子，能为大肠杆菌的RNA聚合酶所识别。 ⑷应具有阻遏子，使启动子收到控制，只有当诱导时候才能进行转录。 ⑸应具有很强的终止子，以便使RNA聚合酶集中力量转录克隆的外源基因，而不转录其他无关的基因，同时很强的终止子所产生的mRNA较为稳定。 ⑹所产生的mRNA必须具有反义的起始信号，即起始密码AUG和SD序列，以便转录后能顺利翻译。 ⒐密码子的偏爱性：在基因组中把使用频率高的同义密码子称为主密码子或偏爱密码子。此现象被称为密码子偏爱性 ⒑融合蛋白：由一条短的原核多肽和真核蛋白结合在一起的，称为融合蛋白。 ⒒酵母的复制序列的几种不同载体：⑴YEp类（酵母附加体质粒） ⑵YRp类（酵母复制型质粒） ⑶YCp类(酵母着丝粒质粒) ⑷Yip类（酵母整合型质粒） ⒓基因工程菌的不稳定性：基因工程菌在传代过程中经常出现质粒不稳定的现象，质粒不稳定分为分裂不稳定和结构不稳定。
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第三章基因工程—工程技术 一．填空 1、基因工程操作流程主要包括（）（）（）（） （）。 2、分离目的基因常采用（）从基因组DNA中扩增含目的具有的DNA片断， 或者 用分子杂交等方法从构建的（）或（）中获得含目的基因的克隆子。 3、克隆载体有（）和（）等，供不同实验要求选择使用。 4、在（）的作用下，含（）的DNA片断与（）连接成为重组 DNA 分子。 二．判断 1、无论用哪种转化方法均可用PBR322作载体。（） 2、cDNA是以DNA为起始材料，经过复制得到的互补DNA。（） 3、只有粘性末端才可以被连接起来。（） 4、任何细胞都可用作受体细胞。（） 5、原核生物细胞是最理想的受体细胞。（） 6、Western杂交是DNA-RNA之间的杂交。（） 7、 DNA连接酶只能催化双链DNA片断互补黏性末端之间的连接。（） 第四章细胞工程技术概论 一．选择 1、植物体细胞杂交要先去除细胞壁的原因是（） A. 植物体细胞的结构组成中不包括细胞壁 B. 细胞壁使原生质体失去活力 C. 细胞壁阻碍了原生质体的融合? D. 细胞壁不是原生质的组成部分 2、动物细胞融合的说法不正确的是（） A. 细胞融合首先用酶解法（胰蛋白酶）分散成单个细胞 B. 细胞融合是个细胞识别过程
C. 融合细胞能表现出两个亲本的特点 D. 原生质体自然条件下常自发融合 3、单克隆抗体的生产方法中错误的是（） A. 发酵罐中培养 B. 小鼠的腹腔繁殖 C. 培养成组织移植到动物体内 D. 牛的体腔培养 4、不能人工诱导原生质体融合的方法是（） A. 高pH B. 电刺激 C. PEG（聚乙二醇）试剂 D. 重压 5、植物细胞融合常用的诱导剂是（） A. PEP B. PEG C. ATP D. 大肠杆菌质粒 6、目前有一种蔬菜新品种“白菜—甘蓝”,只是将两个来自不同植物的体细胞融合成一 个杂种细胞，并将其培养成新的植物体。这是利用了现代生物技术中的什么？ A.细胞工程 B.基因工程 C.蛋白质工程 D.酶工程 二. 填空 下图为植物体细胞杂交过程示意图。据图回答： (1)步骤?是_______________________，最常用的方法是_______________________。 (2)步骤?一般常用的化学试剂是_______________,目的是______________________。 第六章发酵工程技术概论 一．选择 1、发酵工程以培养微生物为主，所以又称为（）。 A．细胞工程B．微生物工程 C．细菌工程 2、发酵工程的主要内容包括（）。 A．生产菌种的选育B．发酵条件的优化与控制反应器的设计及产物的分离 C．提取与精制 D．以上都是 3、下列哪些是目前具有生产价值的发酵类型（）。 A．微生物菌体发酵 B．微生物菌体代谢产物发酵 C．微生物的转化发酵D．以上都是 4、下列哪些是发酵技术独有的特点（）。 A．多个反应不能在发酵设备中一次完成 B．条件温和、能耗少、设备简单 C．不容易产生高分子化合物D．发酵过程中不需要防止杂菌污染 5、发酵过程中，PH值取决于（）。 A．菌种B．培养基 C．培养条件D．以上都是 6、下列生产工艺属于固体发酵的是（）。 A．酿酒B．制酱C．天培（大豆发酵食品） D．以上都是 7、下列哪些是发酵的主要操作方式（）。 A．分批发酵B．连续发酵C．补料分批发酵D．全部都是 8、气升式发酵罐与搅拌式发酵罐相比，下列不属于前者特点的是（）。 A．发酵罐内没有搅拌装置，结构简单 B．发酵罐内有搅拌装置，混合速度快 C．耗能少，利于生产 二、填空 1、根据搅拌的方式不同，好氧发酵设备又可分为（）、（）。 2、根据操作方式的不同，液体深层发酵主要有（）、（）、 （）。 3、当前发酵工业所用的菌种总趋势是从野生菌转向（），从自然选育转 向（），从诱发基因突变转向（）。
生物技术制药（Biotechnological Pharmaceutics）是不断引进现代生物化学、分子生物学、细胞生物学、微生物学和制剂学及现代基因工程等多学科先进技术而形成与发展起来的实用制药技术。 基因工程药物的生产分为上游和下游两个阶段：①上游阶段：主要是分离目的基因、构建工程菌(细胞)。目的基因获得后，最主要的就是目的基因的表达。选择基因表达系统主要考虑的是保证表达的蛋白质的功能，其次是表达的量和分离纯化的难易。此阶段的工作主要在实验室内完成。、 ②下游阶段：从工程菌的大量培养一直到产品的分离纯化和质量控制。此阶段是将实验室成果产业化、商品化，主要包括工程菌大规模发酵最佳参数的确立，新型生物反应器的研制，高效分离介质及装置的开发，分离纯化的优化控制，高纯度产品的制备技术，生物传感器等一系列仪器仪表的设计和制造，电子计算机的优化控制等。 基因工程药物制药的主要程序：⒈目的基因的克隆⒉构建DNA重组体⒊DNA重组体转入宿主菌⒋构建工程菌⒌工程菌发酵⒍表达产物的分离纯化⒎产品的检验等 反转录法就是分离纯化目的基因的mRNA，再反转录成cDNA，然后进行cDNA克隆表达。 反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）：RT-PCR是将以RNA为模板的cDNA合成同PCR 结合在一起，该法是mRNA经反转录合成cDNA第一链，在以随机引物、oligo(dT)或基因特异性的引物（GSP）起始协助下，PCR扩增，特异性的合成目的cDNA链（目的基因）。 化学合成法：较小的蛋白质和多肽的编码基因可以用人工化学合成法获得。合成目的基因DNA不同部位的两条链的寡核苷酸短片段，再退火成为两端形成粘性末端的DNA 双链片段，然后将这些双链片段按正确的次序进行退火连接成较长的DNA片段，再用连接酶连接成完整的基因。 基因表达：是指结构基因在生物体中的转录、翻译以及所有加工过程 进行基因表达研究的主要问题是目的基因的表达产量、表达产物的稳定性、产物的生物学活性和表达产物的分离纯化。因此，建立最佳的基因表达体系，是基因表达设计的关键。 表达载体必须具备的条件（1）载体能够独立的复制；（2）具有灵活的克隆位点和方便的筛选标记。并且克隆位点应在启动子序列后，以使克隆的外源基因得以表达；（3）具有很强的Promoter，能为大肠杆菌的RNA聚合酶所识别；（4）具有Repressor，使启动子受到控制，只有当诱导时才能进行转录；（5）具有很强的终止子，以便使RNA聚合酶集中力量转录克隆的外源基因，而不转录无关的基因。
生物技术制药复习提纲 生物技术所含的主要技术范畴包含有哪几个工程？ 基因工程；细胞工程；酶工程；发酵工程；蛋白质核酸工程和生化工程； 基因工程菌在传代过程中的质粒不稳定的现象主要是指哪两种不稳定？ 质粒不稳定分为分裂不稳定性和结构不稳定性 基因工程菌的培养方式有哪几种？ 分批培养；补料分批培养；连续培养；透析培养和固定化培养； 从生产实际看，动物细胞的大规模培养主要可以分为哪几种？ 悬浮培养、贴壁培养和贴壁-悬浮培养。 动物细胞培养基分为哪三类？ 天然培养基合成培养基无血清培养基 植物组织和细胞培养所用培养基种类较多，但通常都含有哪几类？。 无机盐碳源植物生长调节剂有机氮源维生素 在V区中，决定抗体分子与抗原分子发生特异性结合的关键部位称为互补决定区（CDR），而 c 区则决定了Ig分子的异种抗原性。 酶固定法中的包埋法可分为哪两种？ 网格型微囊型 发酵工业的生产水平取决于哪三个要素？ 生产菌种、发酵工艺和发酵设备 生物药物广泛应用于医学各领域，按功能用途可分为哪三类？ 治疗药物、预防药物、诊断药物
基因工程药物制造的主要步骤如何？ 目的基因的获得；构建DNA重组体；构建工程菌；目的基因的表达；产物的分离纯化；产品的检验 酶和细胞的固定化载体主要有哪三类？ 吸附载体包埋载体交联载体 单克隆抗体制备时对动物的免疫方法分为哪两种？ 体内免疫法和体外免疫法 生产用动物细胞为原代细胞、二倍体细胞系、转化细胞系以及工程细胞系。 目前工业常用的酶一般是以什么为主要来源？ 微生物 发酵工程产品开发的关键是筛选到高效菌株，一般优良菌种的选育方法主要有哪几种？ 自然选育、诱变育种和原生质体融合 . 在制备大量微生物菌体或其代谢产物时，可采用不同的发酵方式。微生物的发酵方式有哪几种？ 分批发酵、补料分批发酵、连续发酵 目的基因的获得方法有哪几种？用反转录法获得目的基因，首先必须获得什么？cDNA法获得目的基因的优点是什么？将构建好载体导入动物细胞最常用的方法是什么？ 反转录法、反转录-聚合酶链反应法和化学合成法 目的基因的mRNA 获得的目的基因编码序列无内含子，目的基因的筛选较容易 磷酸钙沉淀法电穿孔法
生物技术制药试题及答案 一、论述题（共10 道试题，共50 分。） 1. 悬浮培养 答：培养细胞的生长不依赖支持物的表面，可在培养液中呈悬浮状态生长。 2. 双功能抗体 答：它是非天然抗体，结合抗原的两个臂具有不同的特异性。 3. 连续培养 答：将种子接入发酵反应器中，培养至一定菌体浓度后，进行不间断的培养。 4. 单克隆抗体 答：是将抗体产生B淋巴细胞与具有无限增殖能力的骨髓瘤细胞相融合所产生的抗体。 5. 生物药物 答：指从生物体、生物组织、细胞、体液等，利用物理、化学、生物技术等原理和方法方法制造一类用于预防、治疗和诊断的制品 6. 固定化培养 答：将固定化技术应用基因工程军的连续培养中，以提高治理的稳定性。 7. 补料分批培养
答：将种子接入发酵反应器中进行培养，经过一段时间后，间接或连续地补加新鲜培养基，使菌体进一步生长。 8. 质粒的分裂不稳定 答：指工程菌分裂时出现一定比例不含质粒子代菌的现象 9. 酶工程 答：是酶学和工程学相互渗透结合、发展而形成的新学科。 10. 基因表达 答：指机构基因在生物体中的转录翻译机所有加工的过程 二、简答题（共5 道试题，共50 分。） 1. 制备基因工程药物的一般程序？ 答：获得目的基因、组建重组质粒、构建基因工程菌、培养工程菌、产物分离纯化、除菌过滤、检定 2. 蛋白质类药物的分离纯化方法？ 答：⑴沉淀法⑵按分子大小分离的方法⑶按分子所带电荷进行分离的方法⑷亲和层析法 3. 简述单克隆抗体的制备过程？ 答：致敏动物的脾淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合成杂交瘤细胞，培养杂交瘤细胞，大量培养能
产生抗体的杂交瘤细胞注入纯系小鼠腹腔内，分离小鼠腹腔内抗体。 4. 影响目的基因在大肠杆菌中表达的因素？ 答：⑴外源基因的拷贝数⑵外源基因的表达效率①启动子的强弱②核糖体结合位点的有效性③SD序列和起始密码ATG的间距④密码子组成⑶表达产物的稳定性⑷细胞的代谢负荷 5. 生物药物德特性？ 答：⑴药理学特性①治疗针对性强、②活性高、③毒副作用小、④生理副作用常有发生⑵生产制备的特殊性①原料中有效含量低②稳定性差③易腐败④注射用药特殊要求 一、问答题：（每题10分，共100分） 1．成纤维细胞型细胞的特点及来源。 2．正常细胞体外培养在原代培养期的特点并举例。 3. 免疫毒素可用于治疗哪些疾病？优点是什么？ 4. 发酵过程的溶氧变化。
(完整word版)生物技术制药习题答案夏焕章版 亲爱的读者： 本文内容由我和我的同事精心收集整理后编辑发布到文库，发布之前我们对文中内容进行详细的校对，但难免会有错误的地方，如果有错误的地方请您评论区留言，我们予以纠正，如果本文档对您有帮助，请您下载收藏以便随时调用。下面是本文详细内容。 最后最您生活愉快 ~O(∩_∩)O ~
第一章绪论 填空题 1. 生物技术制药的特征高技术、高投入、高风险、高收益、长周期。 2. 生物药物广泛应用于医学各领域，按功能用途可分为三类，分别是治疗药物、预防药物、诊断药物。 3.现代生物药物已形成四大类型：一是应用DNA重组技术制造的基因重组多肽、蛋白质类治疗剂；二是基因药物；三是来自动物植物和微生物的天然生物药物；四是合成与部分合成的生物药物； 4.生物技术的发展按其技术特征来看，可分为三个不同的发展阶段，传统生物技术阶段；近代生物技术阶段；现代生物技术阶段。 5.生物技术所含的主要技术范畴有基因工程；细胞工程；酶工程；发酵工程；蛋白质核酸工程和生化工程； 选择题 1.生物技术的核心和关键是（A ） A 细胞工程 B 蛋白质工程 C 酶工程 D 基因工程 2. 第三代生物技术（ A ）的出现，大大扩大了现在生物技术的研究范围 A 基因工程技术 B 蛋白质工程技术 C 海洋生物技术D细胞工程技术 3.下列哪个产品不是用生物技术生产的（D ） A 青霉素 B 淀粉酶 C 乙醇 D 氯化钠 4. 下列哪组描述（A ）符合是生物技术制药的特征 A高技术、高投入、高风险、高收益、长周期 B高技术、高投入、低风险、高收益、长周期 C高技术、低投入、高风险、高收益、长周期 D高技术、高投入、高风险、低收益、短周期 5. 我国科学家承担了人类基因组计划（C ）的测序工作 A10% B5% C 1% D 7% 名词解释 1.生物技术制药 采用现代生物技术可以人为的创造一些条件，借助某些微生物、植物或动物来生产所需的医学药品，称为生物技术制药。 2.生物技术药物 一般说来，采用DNA重组技术或其它生物新技术研制的蛋白质或核酸来药物称为生物技术药物。
第一章绪论 ·生物技术（biotechnology）：是指将生物用于有价值产品的生产。 ·生物技术制药（biotechnology pharmaceutics）:用现代生物技术制造药物。 是指利用基因工程、细胞工程、发酵工程、酶工程、蛋白质工程等生物技术，来研究、开发和生产用于预防、治疗、诊断疾病的药物。 ·生物药物（biological drug）：从生物体中制取的各种天然活性物质及其人工合成或半合成的天然物质类似物。 ·生物技术药物（biotechnological drug）:利用现代生物技术生产的蛋白质或核酸类等生物药物。·现代生物技术的主要内容 基因工程技术 细胞工程技术 酶工程技术 发酵工程技术 ·生物技术制药的主要内容 基因工程制药 细胞工程制药 酶工程制药 发酵工程制药 ·基因工程技术：是将一种生物体的基因与载体在体外进行连接，然后转入另一种生物体内，使重组基因在受体细胞内表达，产生出人类所需要的基因产物。·细胞工程技术：包括细胞及转基因细胞的离体培养、繁殖、再生、融合以及细胞核、细胞器（如线粒体、叶绿体等）的移植与改建等操作技术。 ·酶工程技术：在一定生物反应装置中利用酶的催化作用，将相应的原料转化成有用物质的技术。 ·发酵工程技术：培养活细胞以
取得生物体或代谢产物的技术。（抗生素、氨基酸、维生素）·生物制药：从生物材料中提取、分离、纯化药物的过程。 第二章基因工程制药 ·基因工程制药：是指利用基因工程技术生产蛋白质或多肽类药物。 ·基因工程药物制造步骤: 上游阶段：分离目的基因，构建工程菌，目的基因的表达。 下游阶段：从工程菌的大量培养到产品的分离纯化和质量控制。 ·分离纯化的步骤：细胞分离- 细胞破碎-固液分离-浓缩与初步分离-高度纯化直至得到纯品-成品加工 ·基因重组蛋白的主要分离技术：分离、沉淀（等电点沉淀法、盐析法） 、膜分离、双水相萃取。·基因重组蛋白的主要纯化技术: 1.离子交换层析 2.亲和层析 3.凝胶过滤层析(分子量大 的先洗脱下来） 4.反相色谱和疏水色谱 ·亲和层析的主要步骤： a.配体固定化 b.亲和吸附阶段 c.洗涤阶段 d.洗脱解离阶段 e.再生阶段 ·凝胶过滤法的用途： 脱盐、分级分离、分子量的测定 ·反相色谱和疏水色谱：根据蛋白质疏水性的差异来实现分离纯化的。 ·基因工程药物的改造的目的：提高疗效降低毒副作用。 ·基因定点突变技术