1、植物组织培养：在无菌和人工控制的环境条件下，利用人工培养基，对植物的胚胎、器官、组织、细胞、原生质体等进行离体培养，使其再生发育成完整植株的过程。由于外植体已脱离了母体，植物组织培养又叫植物离体培养。
2、植物组织培养的特点：无菌条件下进行；多数情况下是利用成分完全不确定的人工培养基进行时；材料为离体状态；可以不断增殖，并通过调整成分控制实验的目的；在封闭的容器中进行，气体通过封口材料进行交换；环境、温度、光照强度都可人为控制。
3、植物组织培养的类型：按培养对象分：
植株培养：对完整植株材料的离体无菌培养；
胚胎培养：从果实或子房中分离出成熟或未成熟的胚进行离体无菌培养的技术；器官培养：以植物的根、茎、叶、花、果等器官为外植体的离体无菌培养技术；组织培养：对植物体的各部分组织如茎尖分生组织、形成层、木质部、韧皮部、表皮组织、胚胎组织和薄壁组织等，或对植物器官培养产生的愈伤组织进行培养，二者均通过再分化诱导形成植株；
细胞培养：对植株器官或愈伤组织上分离出的单细胞、花粉单细胞或很小的细胞团进行培养，形成单细胞无性系或再生植株的技术；
原生质体培养：对用酶、物理等方法除去植物细胞壁的、裸露的、有活性的原生质体团进行培养的技术；
按培养过程分：初代培养、继代培养；
按培养基的物理状态分：固体培养、液体培养。
4、植物组织培养在农林中的应用：植株离体快繁、无病毒苗木培育、次生代谢物的产生、培育新品种或创造新品种、植物种质资源的离体保存、人工种子、基因工程的应用。
5、外植体：植物组织培养中作为离体培养材料的器官或组织的片段。在继代培养时，将培养的组织切段移入新的培养基时，这种切段也称外植体。
6、愈伤组织：指在植物受伤后的伤口处或在植物组织培养中外植体切口处产生的一团不定形的薄壁组织。
7、脱分化：指离体培养条件下生长的细胞、组织或器官经过细胞分裂或不分裂，逐渐失去原来的结构和功能而恢复分生状态，形成无组织结构的细胞团或愈伤组
织或成为未分化细胞特性的细胞的过程。
8、再分化：离体培养的植物细胞和组织可以由脱分化状态重新进行分化，形成另一种或几种类型的细胞、组织、器官，甚至形成完整植株的过程。
9、影响脱分化和再分化的因素：损伤、生长调节剂、光照、细胞位置、外植体的生理状态、植物种类差异。
10、细胞的全能性：指任何具有完整细胞核的植物细胞都拥有形成一个完整植株所必需的全部遗传信息，在特定的环境下能进行表达，产生一个独立完整的个体。
11、胚状体：在植物组织培养中，起源于一个非合于细胞、领过胚胎发生和胚胎发育过程形成具有双根性的胚状结构叫胚状体。
12、组培室地址的选择要考虑的因素：
（1）首先要保证首先要保证水电供应；
（2）为节约能源，充分利用自然光，试验室应向南建设，使采光面积和时数达到最大；
（3）对于商业区性试验室，交通条件是否便利是一个应该考虑的因素；
（4）组培室最好避免建立在繁忙的交通线的附近；
（5）避免与温室、微生物实验室、昆虫实验室、种子或其它植物材料储藏室相邻，以免由于空气流通造成难以克服的困难。
13、组培实验室的基本组成
14、常用的生长素和分裂素有哪些种类？使用浓度范围如何？
生长素类：IAA（吲哚乙酸）、IBA（吲哚丁酸）、NAA（萘乙酸）、2,4-D（二氯苯氧乙酸）、2,4,5-T（三氯苯氧乙酸）、ABT生殖粉。生长素一般溶于95%的酒精或0.1mol/LNaOH（或KOH）溶液，后者的溶解效果更好。
细胞分裂素类：6-BA（苄基腺嘌呤）、2-ip（异戊烯腺嘌呤）、ZT（玉米素）、KT （激动素，呋喃氨基嘌呤）、人工合成具有细胞分裂素活性的物质TDZ（通常在0.002-0.2mg/L）。细胞分裂素一般溶于0.5mol/L或1mol/L的HCL或稀的NaOH 溶液中。
15、试述培养基配制的基本过程？
①按培养基配方及所需要的数量计算所需各成分的量，按计算好的量称凝固剂、蔗糖。取出母液并按顺序摆好，准备好称量用的器具如量筒、烧杯、移液管、移液器、玻璃棒等及溶解用的电磁炉、电炉等。
②在容器内装相当于所配置量1/3左右的纯水，根据计算的量加入琼脂溶煮或直接加入琼脂粉，再根据计算出的母液添加量一次加入大量元素、微量元素、铁盐、有机物、生长调节剂物质的母液及其他特殊添加物，最后加入称量好的蔗糖并搅拌均匀。
③加水定容至规定体积，搅拌均匀。加热引起的水分蒸发和温度变化均会引起培养基体积变化，为了精确定容，可以先做好标记，在培养基熬煮好后按标记刻度进行定容。
④调整培养基PH值。当培养基配制好以后，应立即进行PH值的调整。直接用PH试纸进行测定，根据不同植物要求调节培养基的PH值。PH通常用1mol/L的HCL或1mol/L 的NaOH来调节，加入酸碱后应搅拌均匀再进行测定。
⑤分装已经配好的培养基应立即分装，否则，凝固后难以分装，因为含琼脂的培养基会在40℃左右凝固。如果分装前培养基开始凝固，可在水浴中加热，使其重新熔为均匀液态再进行分装。一般来说，分装到培养瓶中的培养基应占培养的1/4-1/3唯有，太多造成浪费，太少不易接种并影响培养材料生长。
⑥封口培养基分装后，应立即封口，以防污染。
16、谈谈MS培养基的特点？
无机盐含量较高，特别是硝酸盐和铵盐含量高，可满足植物组织生长发育对营养元素的要求，但其不适合生长速度较慢、对无机盐浓度要求低的植物培养物。在使用中，可以将MS培养基的大量元素减到原来的1/2、1/3甚至1/4，以降低无
机盐的含量。
17、在组培中如何做好外植体的选择工作？
（1）该外植体具有细胞全能性，这样才能达到组织培养的目的
（2）选择带芽外植体茎尖的顶芽、腋芽、根和根茎的萌芽等带芽外植体非常适合植物体的立体快速繁殖。
（3）选择胚胚带有极其幼嫩的分生组织细胞，非常适宜进行组织培养。
（4）选择分化的器官组织包括嫩茎、嫩叶、鳞片、形成层、根、花瓣、花萼以及珠心等二倍体组织，在这类组织中，叶片和叶柄是常用的外植体，特别是新出的叶片不仅分化和脱分化容易，而且污染少，操作方便。
（5）还可以选择花粉及雌配子中的单倍体细胞，这些细胞里只有体细胞一半的染色体，可以作为外植体进行组织培养。
18、用于外植体灭菌的常用药剂有哪些？各其的特点如何？
（1）酒精是最常用的表而灭菌药剂，由于70%-75%的酒精穿透力和杀菌能力最强，在使用时，一般将外植体浸入其中10-30s。酒精具有浸润和杀菌双重作用，但不能达到完全灭菌，必须与其他灭菌剂结合使用，通常作为灭菌的第一步，酒精还可用于接种者的皮肤消毒及环境灭菌。
（2）升汞即氯化汞，是有剧毒的重金属盐杀菌剂，其杀菌原理是Hg+可与带负电荷的蛋白质结合，使菌体蛋白质变性，酶失活。升汞使用浓度为0.%-0.2%，一般浸泡6-12min，就可有效的杀死附着在外植体表面的细菌及真菌芽孢，通常用无菌水至少冲洗5次。此外，氯化汞对人畜有机枪的毒性，操作不当会对人体造成危害，废弃物处理不当也会引起环境污染。
（3）次氯酸钠是一种较好的表面灭菌剂，她可以释放出活性氯离子用以杀死细菌。常用浓度为有效氯离子为1%，灭菌时间5-30min，处理后用无菌水冲洗4-5次即可。由于他分解出的氯气在灭菌后易除去，不残留，既有强杀菌力，又对植物和人无害，对环境也没有污染。但次氯酸钠碱性较强，处理时间过长对植物组织有一定破坏作用，在使用过程中应注意。
（4）漂白粉是一种常用的低毒高效杀菌剂，一般含10%-20%次氯酸钙，使用浓度一般为5%-10%或其饱和溶液。处理时间为20-30min，处理后要用无菌水冲洗3-4次，漂白粉易吸潮散失有效氯二失效，故要密封贮藏，但不能贮藏太久，应
现配现用。
（5）双氧水即过氧化氢，常用6%-12%的双氧水溶液处理外植体材料，灭菌效果相当好。双氧水在外植体表面容易除去，不会损伤外植体你，通常用于叶片的灭菌。
（6）新洁尔灭是一种广谱型表面活性灭菌剂。它对绝大多数外植体伤害很小，灭菌效果很好。通常用1:200的稀释液，刷洗，浸泡外植体30min，甚至可以更长的时间。
19、外植体选择的基本原则是什么？
（1）再生能力强一般而言，分化程度越高的细胞，脱分化越难，再生能力越弱。因此，在外植体的选择上，应该尽量选择未分化或者分化程度较低的植物材料，一般情况下，年幼的组织比老的组织好，在取材季节上，尽量选择处于旺盛阶段的材料。
（2）遗传稳定性好无论是大量繁殖还是遗传转化，保持原物种的优良性状是植物组织培养的基本要求。因此，在选择外植体时，应选取变异少的材料。
（3）来源丰富为建立一个高效而稳定的植物组织培养体系，往往需要反复试验，并要求结果有可重复性。因此，就需要外植体材料丰富并容易取得。
（4）灭菌容易在选择外植体时，应尽量选择带菌少的材料，减少培养中的杂菌污染。通常植物地上组织比地下组织灭菌容易，幼嫩的组织比老化和受伤的组织灭菌容易，温室材料比田间材料带菌少，灭菌容易。在人工光照培养箱中萌发的材料灭菌效果更好。
（5）外植体大小培养效果是一个外植体细胞总体对各个培养因子的综合反应，因此外植体的表面积、体积、细胞数量等都会影响培养效果。一般可以选择的外植体的大小可以在0.5-1cm 。外植体太大容易污染，过小不容易启动或启动后仅仅产生愈伤组织或容易褐化死亡。在以植物脱毒为目的时，应选用较小的外植体，一般在0.2-0.5cm。如果外植体过大，则达不到脱毒的目的。
20、简述外植体灭菌的一般过程？
预处理：为了使植物材料消毒彻底，一般先用自来水冲洗10min，表面不光滑或长有绒毛难以洗净的材料，要冲洗1-2h，并且用洗衣粉或洗洁精溶液洗涤，必要
时用毛刷充分刷洗。
灭菌：洗涤后的材料用滤纸吸干水分，然后浸泡于灭菌药剂溶液中，时间长短、浓度高低则根据材料而定。一般宜选用两种灭菌剂交叉进行灭菌。例如先用70%酒精浸10-20s，再浸入10%次氯酸钠溶液5-15min，随后用无菌水冲洗3-5次。21、污染产生的原因有哪些？如何预防？
原因：一是由于外植体材料表面消毒不彻底，植物材料带入培养过程，或是植物的内生菌随培养材料带入培养过程；二是无蒸操作过程中初代培养的外植体带菌、培养基和接种工具的消毒不彻底、接种室和超净工作台不符合要求、操作人员不遵守操作规程、培养过程中环境的空气不洁净等。
预防：
选择植物材料：不同的植物材料种类和品种、不同的取材部位、材料不同大小和年龄以及不同取材时期，其带菌量均不同。应尽可能选择温室或人工气候室培养的材料，田间采集的材料，可在温室条件下培养一段时间，使用新生长的部分；木本植物的枝条取回后可插入水中使它萌动；对于容易污染的材料，可在取材前用杀菌剂、抗生素等预处理。
严格消毒灭菌：对较难进行表面灭菌的材料可采用多次灭菌法，即将切好的外植体放入某一种灭菌液中灭菌一段时间、用无菌水冲洗3次；再放入另一灭菌液中灭菌一段时间，这是二次灭菌法。这种方法既可达到彻底灭菌的目的，又可减轻灭菌液对外植体表面的伤害。也可用2种以上灭菌液分别浸泡处理，以增加灭菌效果。对于组织内部所带的，难以杀灭的细菌，可以在培养中添加抗生素来解决。规范操作，合理控制环境条件：接种室应保持清洁、干燥、密闭，定期用紫外线灯照射、甲醛熏蒸、70%酒精喷雾等，操作人员注意手的消毒和操作规范。进行大规模组织培养，最好安装空气过滤装置。
22、愈伤组织培养含义？
是指在人工培养基上诱导植物外植体产生一团无序生长的薄壁细胞组织及对其培养的技术。
23、愈伤组织形成分三个时期：诱导期、分裂期、分化期。
24、胚状体发生途径与器官发生途径形成植株的区别？
胚状体途径：外植体按胚胎发生方式形成再生植株的过程。在植物的有性生殖过
程中，精子与卵子结合形成合子，尔后发育成胚，胚再进一步发育成完整的植株。器官途径：是指在组织培养的过程中，再生植株不是通过胚胎，而是通过分生中心直接分化器官，最终形成完整植株的过程。通常可以分为器官间接发生途径与器官直接发生途径两种
间接发生途径：在本途径中，所培养的外植体在培养基中的植物生长物质等因素的诱导下脱分化，随着脱分化的细胞数量不断增加，形成愈伤组织，愈伤组织所产生的分化细胞进一步形成分生组织、再分化出芽、根等器官。
直接发生途径：在此途径中，器官可直接从外植体上进行诱导
25、植物快繁的器官发生类型有哪些？
短枝发生型、丛生芽发生型、不定芽发生型、胚状体发生型、原球茎发生型。
26.常见的植物脱毒方法及原理
A.热处理脱毒
原理：热处理利用病毒病原与植物的耐热性不同，讲植物材料在高于正常温度的环境条件下处理一定的时间，使植物体内的病原钝化或失去活性，而植物的生长受到较小的影响，或在高温条件下植物的生长加快，病毒的增值速度跟不上植物的生长速度，使植物的新生部分不带病毒。
B.茎尖培养脱毒
原理：植物体内出现无病毒区是植物的顶端分生组织的胞间连丝不发达，病毒不能通过胞间连丝达到顶端分生组织
C.微体嫁接脱毒
微体嫁接脱毒是在无菌条件下，将切取的茎尖嫁接到试管中培养的苗上，待其愈合发育为完整植株而达到脱毒的效果
D.花器官培养脱毒
原理：通过植物各种器官成组织诱导产生愈伤组织，然后再从愈伤组织诱导芽和根形成完整植株，可以获得脱毒苗
E.珠心胚培养脱毒
原理：由于珠心细胞与维管束系统无直接联系，而病毒通常是通过维管束的韧皮组织传递的，因此，珠心组织往往是不带病毒的
27.脱毒苗的检测方法有哪些
脱毒效果的检测A.生物学检毒 B.血清学检测 C.分子生物学检测
脱毒苗农艺性状的坚定
无病毒原种的保存和应用
28．无病毒苗的生产及保存期方法
A.从现有的栽培种植中筛选无病毒的单株
B.通过物理或化学的方法将植物体内有害病毒及类似病毒去除而获得无病毒植株
29.商品化组织苗生产的成本核算包括哪些
A.直接生产成本：包括培养基配置药品费、人工工资、水电消耗费以及各种易耗品（如消毒剂、刀具、纸张、玻璃器皿等）消耗费等
B.固定资产折旧：组培工厂的固定资产（包括厂房、基本设备等）按年均5%的折旧率计算，那么，每株出瓶组培幼苗将增加成本费0.065元。
C.市场营销和经营管理开支：加上市场调查，经营与管理等各种经费开支，每株组培幼苗的成本将增加0.16-0.18元。
30.核算一种植物生产50万株的成本和利润
成本：A.按每年生产50万株组培出瓶幼苗计算，全部生产过程（包括无菌材料培养、继代扩繁培养、诱导生根培养、试管苗的清洗等）的直接生产成本约151842元，每株费用约0.304元
B.按生产50万株试管苗的生产规模，组织工厂的固定资产65万元。按每年5%的折旧率计算，折旧金额约为3.25万元，每株出瓶组培幼苗将增加成本费0.065元
C.市场调查、经营与管理开支每株组培幼苗的成本将增加0.16-0.18元。
D.生产项目的科研开发经费或技术转让经费，若每年以5万元计算，每株组培幼苗的成本将增加0.1元
以上各项成本费累计计算，每株组培出瓶幼苗的成本约0.304+0.065+0.17+0.1=0.639
利润：合格商品苗的成本包括瓶苗成本和移栽成本，若瓶苗的有效苗率为90%，移栽成活率和移栽后成苗商品合格率均为95%，那么，50万株瓶苗通过移栽所
得的合格商品苗为406125株，每株成本0.87元。若每株定价2.5元出售，年可利润406125*2.5元—0.639*500000=951412.5元
31.在组培苗工厂化生产中，降低成本，提高经济利润的措施
A.提高生产效率加强工人的技术及操作能力培训；按工作性质进行分工，实行岗位职责制或计件工资制，定额管理。
B.加强技术研究，优化生产工艺筛选更优的培养基配方，缩短增值周期；减少污染，降低污染率；提高栽培成活率与商品苗合格率。
C.提高设备设施的利用率及时维护与维修，尽量延长生产设施设备的使用寿命等；对非必须设备，采取不投资、少投资、或选用替代品；对可以合并的车间进行合并。
D.节省能源，降低消耗试管苗培养阶段，充分利用空间，尽量使用自然资源；节约用水、用电、降低水电消耗；简化生产工艺，降低药品费用等。
E.培养珍惜名贵植物和无病毒种苗通过市场调查与分析引进或自行研发名贵珍惜植物、无病毒优良品种的种苗生产工艺。
F.培养专利品种组培苗积极研制和开发具有自主知识产权的专利品种的组培苗生产技术。
32、植物快繁与传统营养繁殖相比的优点？
A、繁殖效率高，生长速度快
B、培养条件可控性强
C、占用空间小
D、管理方便，利与自动化控制
E、便于种质交换和保存
33、试述植物快繁的全过程及影响因素。
包括5个阶段：（1）无菌培养的建立
（2）初代培养
（3）继代培养和快速繁殖
（4）诱导生根
（5）驯化移栽
影响因素：植物种类，外植体的生理状态，外植体消毒时受毒害的程度，培养基
配方以及激素配比。
34、植物离体繁殖商业化生产中应注意哪些问题？
培养物污染
褐化
玻璃化
性状变异
35、试管苗在移栽之前为什么要练苗？
由体细胞发育的试管苗十分娇嫩，如果从培养容器内直接移栽到田间，就会因环境不适而死亡，因此移栽前炼苗是必要的环节。
36、简述提高试管苗成活率的途径？
做法是先将培养容器从培养室内转移到自然温度下的房间内，解开捆扎培养容器的绳子而不要去掉盖子，在较弱的自然光下培养5d左右，经过驯化以后的试管苗变得比较健壮，适应自然环境能力增强。此时再从培养瓶内仔细地取出体细胞胚苗，用水和毛刷除去附在根上的培养基，栽植到温室内的生长基质中，保持室温和高温的环境。大约经过一个月的时间，小苗就长出新根、新叶、新芽，完全适应了自然环境，即可移栽到大田。
37、了解植物脱毒的意义
在自然条件下，病毒一旦侵入植物体就很难根除。国内外的系统研究和生产实践证明，培育和栽培无病毒种苗是防治作物病毒病的根本措施。同时，栽培无病毒种苗不仅会增强作物的适应能力和抗逆能力、提高作物的产量和品质，而且脱毒种苗的应用还能消减生化农药的使用，对生态环境的保护、健康农产品的生产和农业的可持续发展也具有十分重要的意义。
38、说明植物茎尖培养脱毒技术原理及其影响因素
茎尖培养脱毒的原理是1934年White提出的“植物体内病毒梯度分布学说”。虽然病毒侵入植物体后是全身扩展的，但不同的组织和部位，病毒的分布和浓度有很大差异。一般而言，病毒粒子随着植物组织的成熟而增加，顶端分生组织是不带病毒的。
影响因素:（1）培养基.不同培养阶段所需要的植物生长调节剂种类、用量及配比各不相同，需要根据所培养的植物种类或品种类型而做适当调整
（2）茎尖大小。脱毒成功概率与茎尖大小直接相关，一方面它关系到茎尖培养能否成活，另一方面而又决定成活的茎尖是否带毒，一般而言，切取的茎尖越小，脱毒率就越高。
1.植物组织培养按培养对象分为______ 、 _______ 、________ 、 ________ 、________ 等几种类型。 2.一个己停止分裂的成熟细胞转变为分生状态，并形成耒分化的愈伤组织的现象称为 n tv 3.不同的灭菌剂其灭菌的机理一般不一样，次氯酸钙和次氯酸钠都是利用分解产生 _________ 来杀菌的；升汞是靠 ________ 来达到灭菌日的。 4.去除植物病毒的主耍方法是 _____ 和_______ 两种方法，当把二者结合起來脱毒效 果最好 5.在通过微茎尖培养脱毒时，外植体的大小应以成苗率和脱毒率综合确定，一般以 __________ mm、带 ________ 个叶原基为好。 6.White培养基________ 浓度低，适合生根培养。 7.一个已停止分裂的成熟细胞转变为_________ 状态，并形成_________ 的现象称为“ 脱分化”。 8.BA/NAA的高低决定了外植体的发育方向，比值低时促进 ________ 的生长，这时 _________ 占主导地位；比值高促进_________ 的生长，这时 _________ 占主导地位。 9.进行植物组织培养最基本的前提条件是 _____ 。 1、植物组织培养的理论基础是植物细胞全能性。 2、组织培养实验室必要的设备有超净工作台、高压灭菌器、空调机、夭平、显微镜、蒸饱水发生器等。 3、糖在植物组织培养中是不可缺少的，它不但作为离体组织赖以生长的碳源，而且还能维持培养菇渗透压 4、培养基灭菌一般在-108 kPa的压力下,锅内温度达121 °C ,维持20-30 min o 5、在离体叶培养中，6?BA和KT利于芽的形成:24D利于愈伤纟FI织的形成 6、在离体叶组织脱分化和再分化培养屮，茎和芽的分化主要有4个途径：方?接产生不泄芽、由愈伤组织产工不定芽、胚状体形成、形成球状体或小鳞茎等途径。 7、目前培育无病毒苗最广泛和最重要的一个途径是茎尖培养脱毒。 8、花药培养前的预处理:低温冷藏是最常用的方法。 1、植物组织培养的发展分为三个阶段：萌芽阶段、奠基阶段和快速发展和丿、'、/「用阶段。 2、培养基最常用的碳源是蔗糖,使用浓度在1%?5%常用 _3_%o 3、培养基的种类按其态相不同分为固体培养基与液体培养基，其火菌方法一般采用壷热消毒灭菌方法。 4、 pll的大小会影响琼脂的凝固能力，一般当pll大于6.0时，，培养基将会 ___________ ,低于5.0时，琼脂不能很好地凝同。 5、一般情况下，生长索/细胞分裂素的比值高，有利于根的形成和愈伤组织的形成:比值低有利于芽的形成。
植物组织培养练习题 1.植物组织培养：指要人工控制的条件下，将植物体的任何部分，或器官、或组织、或细胞， 进行离体培养，使之发育形成完整植物体。所谓人工控制的条件，即营养条件和环境条件； 植物体的任何一部分是指根、茎、叶、花、果、实以及它们的组织切片和细胞。 2.愈伤组织培养：将外植体接种在人工培养基上，由于植物生长调节剂的存在，而使其细胞 脱分化形成愈伤组织，然后通过再分化形成再生植株。 3.外植体：植物组织培养中的各种接种材料，包括植物体的各种器官、组织、细胞和原生质 体等。 4.脱分化：一个已停止分裂的成熟细胞转变为分生状态，并形成未分化的愈伤组织的现象。 5、接种：把经过表面灭菌后的外植体切碎或分离出器官、组织、细胞，转放到无菌培养基上的 全部操作过程。 6、褐变：外植体在培养过程中体内的多酚氧化酶被激活，使细胞里的酚类物质氧化成棕褐色的醌类 物质，这种致死性的褐化物不但向外扩散使培养基逐渐变成褐色，而且还会抑制其他酶的活性，严重影响外植体的脱分化和器官分化，最后变褐而死亡的现象。 二填空 植物组织培养根据培养方式分为固体培养和液体培养。 2、植物组织培养类型分为愈伤组织培养、器官培养、胚培养、细胞和原生质体培养。 3、组织培养的主要应用领域有快速繁殖、脱毒、体细胞无性系变异和新品种培育、单倍体育种、种质保存、遗传转化、次生代谢物的生产等几个方面。 4、茎尖培养根据培养目的和取材大小可分为快速繁殖和脱毒培养两种类型。 5、一般组织培养的几道工序如下：培养器皿的清洗、培养基的配制、分装和高压灭菌；无菌操作——材料的表面灭菌和接种，培养；试管苗的驯化、移栽与初期管理。 6、在进行植物组织培养室设计时，其设计应包括洗涤室、准备室、灭菌室、无菌操作室、培养室、细胞学实验室、摄影室等分室，另加驯化室、温室和大棚。 7、培养基的成分主要包括无机营养、氨基酸、有机附加物、维生素、糖、琼脂、激素、活性炭、PH。 8、植物器官培养主要是指植物的根、茎、叶、花器和幼小果实的无菌培养。 9、细胞全能性是指植物的每一个细胞都携带有一完整的基因组，并具有发育成完整植株的潜在能力。 10、玻璃化现象是指试管苗的一种生长失调症状，当植物材料进行离体繁殖时，有些培养物的嫩茎、叶片往往会出现半透明状和水渍状，这种现象称为玻璃化。其苗称为玻璃化苗。
高中生物植物的组织培养技术知识点总结高中生物植物的组织培养技术基础知识点 1、植物组织培养过程： (1)原理：植物细胞具有全能性。 (2)过程： 2、用途： (1)微型繁殖 微型繁殖就是用于快速繁殖优良品神的植物组织培养 技术，也叫快速繁殖技术。繁殖过程中的分裂方式是有丝分裂，亲、子代细胞内DNA不变，所以能够保证亲、子代遗传特性不变。 (2)作物脱毒 作物脱毒是利用茎尖、根尖等无毒组织，进行微型繁殖，所获幼苗是无毒的。 (3)人工种子：通过组织培养技术，可把植物组织的细 胞培养成在形态及生理上与天然种子胚相似的胚状体，也叫作体细胞胚。这种体细胞胚有于叶、根、茎分生组织的结构。科学家把体细胞胚包埋在胶囊内形成球状结构，使其具备种子机能。所以，人工种子是一种人工制造的代替天然种子的颗粒体，可以直接播种于田间。 ①制作方法：人工种子是利用植物组织培养获得胚状体、不定芽、顶芽和腋芽等，然后包上人丁种皮就形成了人工种
子，如图： ②优点：可使在自然条件下不结实或种子昂贵的植物得以繁殖;保持亲本的优良性状，因该过程为无性繁殖;节约粮食，减少种子的使用;可以控制添加一些物质，如除草剂、农药、促进生长的激素、有益菌等。周期短，易储存和运输，不受气候和地域的限制。 (4)细胞产物的工厂化生产：从人工培养的愈伤组织细胞中提取某种成分，如紫草素、香料等。 高中生物植物的组织培养技术重要知识点 1、植物细胞的全能性 (1)概念：具有某种生物全部遗传信息的任何一个细胞，都具有发育成完整生物体的潜能。 (2)原理：细胞内含有本物种的全部遗传信息。 (3)全能性表达条件：具有完整的细胞结构，处于离体状态，提供一定的营养、激素和其他适宜外界条件。 2、作物新品种培育 (1)单倍体育种： ①过程：植株(AaBb)通过减数分裂得到花粉(AB、Ab、aB、ab四种类型);对花粉进行花药离体培养(技术是植物组织培养);得到单倍体植株;对其幼苗时期进行秋水仙素处理;得到了正常的纯合二倍体植株(AABB、Aabb、aaBB、aabb四种类型)。
植物组织培养复习题（习题） 一、名词解释 愈伤组织：在培养基上由培养物产生的无序生长且没有一定结构的薄壁细胞团。 外植体：在组织培养中，由植物体上取下来进行离体培养的那部分组织或器官. 脱分化：由高度分化的植物器官，组织或细胞经过离体培养，产生愈伤组织的过程。 半连续培养：利用培养罐进行大量细胞培养的一种方式。 无性系变异：由任何形式的细胞培养所产生的植株所表现出来的差异。 胚状体：在离体植物细胞、组织或器官培养过程中，由一个或一些体细胞，经过胚胎发生和发育过程，形成的与合子胚相类似的结构。 看护培养：用同种或异种材料的愈伤组织作为看护组织培养细胞的一种方法。 无融合生殖：由配囊中卵细胞以外的其他细胞发育成的单倍体植株。 种质：亲代通过生殖细胞活体细胞直接传递给子代并决定固有生物性状的遗传物质。 悬浮培养：将游离的植物单细胞或小细胞团，按一定的细胞密度在受到不断拉动或摇动的液体培养基中进行培养的一种方式。 早熟萌发：在培养后迅速萌发为幼苗，不继续进行胚状生长，超过正常发育阶段。 选择压：在2个相对性状之间，一个性状被选择而生存下来的优势。 细胞全能性：任何有完整细胞核的植物细胞具有全部的遗传信息，在一定条件下，均具有分化，发育成完整植株的潜在能力。 条件培养基：在培养集中加入高密度的细胞进行培养，经过一段时间后，这些细胞向培养基中分泌一些促进细胞生长的活性物质，使培养基条件化，使原来在合成培养基上不能分裂的细胞发生分裂。 离体授粉：将未授粉的胚珠，子房或柱头从母体上分离下来，进行无菌培养，并通过一定的方式授给无菌花粉，使其在试管实现受精的技术。 同步化培养：培养基多数细胞都能同时通过细胞周期的各个阶段。 植板率：(每个平板上形成的细胞团数/ 每个平板上接种的细胞总数) * 100%、 继代培养：对来自于外植体所增殖的培养物通过更换新鲜培养基及不断切割分离进行的连续多代的培养。 无性系：由任何形式的细胞培养所产生的植株。 细胞融合：在自发或人工诱导下，两个不同基因型的细胞或原生质体融合形成一个杂种细胞。 二、填空题 1、根据外植体的的种类不同，组织培养可以分为组织培养、细胞培养、器官培养、原生质培养和胚胎培养五种类型。根据培养基的物理性状，组织培养可以分为固体培养基和液体培养基两种类型。 2、对高温高压条件下易降解变质的物质，在灭菌时应采用过滤灭菌方法。 . .
植物组织培养考试复习题 植物组织培养 绪论P1 第一章植物组织培养的基本原理P3 第二章植物组织培养的基本原理P6 第三章植物器官和组织培养P口 第四章胚胎培养及离体授粉P16 第五章花药和花粉培养P20 第六章植物细胞培养P24 第八章原生质体培养P27 第九章植物离体繁殖P30 第十章无病毒苗木培育P33 植物组织培养基本操作P35 1 绪论 植物组织培养的概念植物组织培养是在无菌和人工控制的环境条件 下，利用适当的培养基，对离体的植物器官、 由于培养的植物材料已脱离母体，乂称为植物离体培养(Plant culture in vitro)o 广义：对植物的器官、组织、细胞及原生质体进行离体培养技术植物组织培养
狭义：对植物的组织(分生组织、表皮组织、薄壁组织等)及培养产生 的愈伤组织进行离体培养。 1.无菌：使培养器皿、器械、培养基和培养材料等处于无真菌、细菌、病毒等微生物的状态，以保证培养材料在培养器1111中正常生长和发育。 2.人工控制的环境条件：对光照、温度、湿度、气体等条件进行人工 控制，以满足植物培养材料在离体条件下的正常生长和发育。 3.外植体：由活体（in vivo）植物体上提取下來的，接种在培养基上的无菌细胞、组织、器官等。（植物组织培养中，使用的各种器官、组织和 细胞统称为外植体。） 4.愈伤组织：外植体因受伤或在离体培养时，其未分化的细胞和已分 化的细胞进行活跃的分裂增殖而形成的一种无特定结构和功能的组织。 （在人工培养基上由外植体上形成的一团无序生长状态的薄壁细胞。）植物组织培养的特点 植物组织培养的主要特点是采用微生物学的实验手段来操作植物离体 的器官、组织和细胞。具体特点表现在： 1）组织培养的整个过程都是在无菌条件下进行的，外植体、培养基、接种环境都须经过无菌处理。 2）组织培养在多数情况下是利用成分完全确定的人工培养基进行的, 除少数特殊情况（进行营养缺陷型突变细胞的筛选）夕卜，素、微量元素、有机物和植物激素，培养基的PH和渗透压也是人为设定的。因此，在组织下也能再生完整植株。14）组织培养物通过连续继代培养可以不断增殖，
植物的组织培养技术 【学习目标】 1、指导植物组织培养技术的基本原理和基本技术。 2、掌握植物培养过程中使用的无菌技术（重点）。 3、掌握植物知识培养的基本过程及操作。 4、说出被子植物花粉发育的过程及花药例题培养产生花粉植株的两种途径。 5、说出花药离体培养的因素，学习话要例题培养的基本技术。 【要点梳理】 要点一、植物组织培养的基础知识【高清课堂：植物的组织培养技术 高清未发布 课题1：基础知识】 1、植物组织培养的基本过程： 离体的植物器官、组织或细胞，在培养了一段时间以后，会通过细胞分裂，形成愈伤组织。愈伤组织的细胞排列疏松而无规则，是一种高度液泡化的呈无定形状态的薄壁细胞。由高度分化的植物组织或细胞产生愈伤组织的过程，称为植物细胞的脱分化（去分化）。脱分化产生的愈伤组织继续进行培养，又可以重新分化成根或芽等器官，这个过程叫再分化。再分化形成的试管苗移栽到地里，可以发育成完整的植物体。植物组织培养的过程可以简要归纳为： 离体的植物器官、组织或细胞（外植体）???→脱分化愈伤组织???→再分化根、芽—→植物体。 2、植物组织培养的理论基础：细胞的全能性 要点诠释： 细胞的全能性与植物组织培养间的关系 ①细胞的全能性是植物组织培养的理论基础。 植物组织培养的理论基础是细胞的全能性。植物细胞只有脱离了植物体，在一定的外部因素作用下，经过细胞分裂形成愈伤组织，才能表现出全能性，由愈伤组织发育、分化出新的植物体。 ②高度分化的植物细胞仍具有全能性的原因是所有体细胞均来自受精卵的有丝分裂，均有和受精卵相同的一整套遗传信息。 ③植物体的组织、器官的形成，是基因选择性表达的结果，其细胞的全能性受到限制，在离体状态下，其全能性才容易得以表达，表达的过程须经过脱分化和再分化。 ④容易进行营养繁殖的植物细胞，其全能性容易表达，易进行植物组织培养。 要点二、影响植物组织培养的因素 1、无机营养 （1）大量元素：除碳（C ）、氢（H ）、氧（O ）外，还有氮（N ）、磷（P ）、钾（K ）、钙（Ca ）、镁（Mg ）、硫（S ）等元素。 （2）微量元素：包括铁（Fe ）、铜（Cu ）、钼（Mo ）、锌（Zn ）、锰（Mn ）、钴（Co ）、硼（B ）和碘（I ）等。 2、有机营养 （1）维生素类：植物组织培养中经常使用维生素C 、维生素B 1（盐酸硫胺素）、维生素B 6（盐酸吡哆醇）、维生素H （生物素）、叶酸和烟酸等，一般使用浓度为0.1～10 mol ／L 。 （2）氨基酸：有甘氨酸、丝氨酸、酪氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、水解酪蛋白（CH ）和水解乳蛋白（LH ）等，是重要的有机氮源。 （3）有机添加物：是一些成分比较复杂，大多含氨基酸、激素、酶等的复杂化合物，它们对细胞和组织的增殖与分化有明显的促进作用。 3、植物生长调节物质 植物生长调节物质是培养基中的关键物质，对植物组织培养起着重要、明显的调节作用。植物生长调节物质包括生长素、细胞分裂素及赤霉素等。
组培复习材料 一、名词解释 1、培养基：是离体植物（外植体）赖以生长、分化的基础，是根据植物的需求，人工配制的含有各种营养成分的营养液。 2、液体培养：把细胞或生物体的一部分，置于液体培养基中使其发育，并不断振荡，使之均匀地在悬浊液中进行培养的一种方法。 3、种子培养：是成熟种子和发育不全的未成熟种子的无菌培养。 4、叶培养：从母体植株上将叶组织（包括叶原基在内）切下，放在无菌的人工条件下使其生长发育形成植株的技术。 5、热处理脱毒：在一定范围内，用高温处理可部分或完全钝化植物组织中的某些病毒而不伤害或很少伤害植物本身的脱毒方法。 6、花药培养：是把花粉发育到一定阶段的花药接种到培养基上，来改变花粉的发育程序，使其分裂形成细胞团，进而分化成杯状体，然后再生植株，或形成愈伤组织，由愈伤组织再分化成植株。 7、连续培养：是利用特别的培养容器进行大规模细胞培养的一种培养方式。（培养过程中，不断注入新鲜培养基，排掉等体积用过的培养基，或者抽取悬浮培养物，使培养物的营养物质得到不断补充，从而保持其恒定体积的培养。—— 8、分批培养：指把细胞分散在一定容积的培养基中进行培养，建立单细胞培养物的培养方式。（细胞生长在固定体积的培养基中，当主要营养物质耗尽时，细胞的分裂和生长即停止。） 二、简答题 1、MS培养基特点。 答：MS培养基是Murashige和Skoog于1962年为烟草细胞培养设计的，其特点是无机盐和离子浓度较高，是较稳定的离子平衡溶液，具有高含量的氮、钾，尤其是硝酸盐用量大，还有一定数量的铵盐，其养分的数量和比例合适，不需要添加更多的有机附加物，就能满足植物组织对矿质营养的要求，加速愈伤组织和培养物的生长，当培养物就不转移时仍可维持其生存。目前应用最广泛。 2、植物组培生产特点。 答：①和传统的生产方式相比，具有不占耕地、生产不受季节限制而且能够整年连续进行、不受灾害性天气和病虫害影响的特点； ②具有人为可控性，可采用更适合于植物生长的“培养基”代替土壤提供养分和生长调节物质；
1 1.细胞的全能性：指植物体的任何一个有完整细胞核的活细胞都具有该植物的全套遗传基因和产生完整植株的潜在能力。 2.分化：指细胞、组织、器官或整株植物从分生组织或幼小状态发育为成熟状态的过程，并在生理、形态上发生的变化。其最大的特征是失去分裂能力。 3.脱分化：植物离休的器官、组织、细胞在人工培养基上，经过多次细胞分裂而失去原来的分化状态，形成无结构的愈伤组织或细胞团的过程，使其回复到胚性细胞的状态。其特征是已失去分裂能力的细胞重新获得了分裂能力。 4.再分化：指由脱分化的细胞再度分化成另一种或几种类型的细胞、组织、器官，甚至最终再生成完整的植株的过程。 5.试管苗：指在无菌离体条件下，对植物组织、细胞、器官进行组培所获得的的再生植株。 6.根芽激素理论：根和芽的分化由生长素和细胞分裂素的比率所决定，这一比率高时促进生根，比率低时促进茎芽的分化，比率适中时，组织则倾向于以一种无结构的方式生长。通过改变培养基中这两类生长调节物质的相对浓度可以控制器官的分化。 7.污染：批在组培过程中，由于真菌、幼苗等微生物的侵染，在培养容器内滋生大量的菌斑，使试管苗不能生长和发育的现象。 8.褐变：指在组培过程中，培养材料向培养基中释放褐色物质，致使培养基逐渐变成褐色，培养材料也随之慢慢变褐而死亡的现象。 9.玻璃化现象：指试管苗因生理失调而引起的嫩茎、叶片出现半透明状和水渍状的现象。 10.无菌操作：亦称接种。指将经过表面灭菌后的植物材料在无菌环境中切碎或分离出器官、组织或细胞转移到无菌培养基上的过程。由于整个过程均在无菌条件下进行，所以将这个过程称为无菌操作。 11.植物组织培养：指在无菌条件下，将离体的植物器官(如叶、花、未成熟的果实、种子)、组织(如形成层、花药组织、胚乳)、胚胎(如成熟和未成熟的胚)、细胞或原生质体，培养在人工配制的培养基上，给予适宜的培养条件，使其长成完整的植株或生产具有经济价值的其他产品。
第一章 1、植物组织培养：是指在离体条件下，利用人工培养基对植物的器官、组织、细胞、原 生质体等进行培养，使其长成完整植株 2、外植体：在植物组织培养中，由活体（in vivo）植物上提取下来的、接种在培养基上的 无菌细胞、组织、器官等均称为外植体。 3、愈伤组织：指在人工培养基上由外植体长出来的一团无序生长的薄壁细胞。 4、应用 一、农业上的应用 1. 种苗快速繁殖(rapid propagation) 2.无病毒苗(virus free)的培养 3.在育种上的应用(breeding) （1）倍性育种，缩短育种年限，杂种优势明显； （2）克服远缘杂交的不亲合性和不孕性（胚培养）； （3）保存种质 （4）创造变异 二、在遗传学、分子生物学、细胞生物学、组织学、胚胎学、基因工程、生物工程等方面的应用。用于基因工程技术创造植物新种质。用于植物生长发育理论研究，包括生理学、病理学、胚胎学和细胞与分子生物学等。 三、利用组织培养材料作为植物生物反应器 第二章 1、细胞全能性（Totipotency）：指任何具有完整的细胞核的植物细胞都拥有形成一个完整植 株所必须的全部遗传信息和发育成完整植株的能力。 2、细胞分化（cell differentiation）：指导致细胞形成不同结构，引起功能或潜在的发育方式 改变的过程。 3、脱分化（Dedifferentiation）：指离体条件下生长的细胞、组织或器官逐渐失去原来的结构 和功能而恢复分生状态，形成无组织结构细胞团或愈伤组织 的过程。 4、再分化（Redifferentiation）：指脱分化的细胞重新恢复分化能力，形成具有特定结构和功 能的细胞、组织、器官甚至植株的过程。 5、植物组织培养中常遇到的问题以及解决措施 一、污染及防治： 1、真菌污染后，如果已形成孢子，则必须经高压灭菌后扔掉。但若是细菌污染，只 要及时发现，将材料上部未感菌的部分剪下转接，材料仍可使用。 2、用抗生素等杀菌药剂的处理，会影响植物材料正常生长。 二、褐变及防止 （1）选择合适的外植体 （2）合适的培养条件 （3）使用抗氧化剂 （4）连续转移 三、玻璃化问题及其防止
植物组织培养知识点总结第一、二章 1植物组织培养概念、分类、应用、创始人、奠基人 2实验室各分室名称、主要设备、主要功能 3无菌操作技术流程 4表面消毒剂种类及作用效果 5培养基成分及各成分的作用 6植物组织培养三大难题 7那些成分要抽滤灭菌 第三、四章 8植物细胞全能性原理 9名词解释：愈伤组织、脱分化、体细胞胚、人工种子 10体细胞胚的特点 11愈伤组织形成发育的三个时期，两种类型，良好愈伤组织的特点 12植物离体微繁，一般过程，各阶段注意事项 13褐变，影响褐变的因素，克服褐变的措施；玻璃化，无糖培养技术第五、六、七章 14植物脱毒方法、原理 15脱毒率包括两种方面含义 16人工诱导单倍体的三种途径 17花药培养得到的再生植株倍性如何，为什么 18花药培养的应用，花药培养力，一般培养过程。 19离体幼胚培养，胚发育有几种类型各有何特点 20离体授粉离体受精 21简述胚乳培养的意义
第八、九章 22原生质体概念，两种分离方法，纯化方法。 23酶法分离植物原生质体的酶液组成及作用 24简述植物原生质体培养基的特点 25原生质体融合，融合的主要方法 26体细胞杂交过程 27融合产物的种类及特点 28植物细胞无性系变异，特点 29提高植物细胞无性系变异频率的方法 30细胞突变体的类型及对应的筛选方法 植物组织培养知识点总结 第一、二章 1植物组织培养概念、分类、应用、创始人、奠基人 概念：是一种将植物的器官、组织或细胞在适当的培养基上进行无菌培养，并重新再生细胞或植株的技术。 分类：（1）按外植体来源和特性分：植株培养胚胎培养器官培养组织或愈伤组织培养细胞或原生质体培养；（2）按培养方法分：固体培养液体培养固体液体两相培养 应用：（1）克服远缘杂交中杂种不育性，种子无活力或配发育不全的植物获得后代，一年多代育种（2）培育三倍体（3）单倍体育种（4）提高突变频率，筛选变异类型（5）经过细胞融合得到体细胞杂种（6）种质资源保存 2实验室各分室名称、主要设备、主要功能 化学实验室（准备室）
植物组织培养期末复习资料 一、名词解释 1.植物组织培养：是指在无菌和人工控制的环境条件下，利用适当的培养基， 对离体的植物器官、组织、细胞及原生质体进行培养，使其再生细胞或完整植株的技术。又称为植物离体培养、微型培养、试管培养。 2.愈伤组织：是指外植体因受伤或在离体培养时，其未分化的细胞和已分化的 细胞进行活跃的分裂增殖而形成的一种无特定结构和功能的组织。 3.细胞全能性：指植物的每一个具有完整细胞核的活细胞，具有该植株的全部 遗传信息，在一定条件下发育成完整植株的潜在能力。 4.胚状体：指在植物组织培养过程中，由细胞诱导分化形成的胚状结构，其功 能类似于合子胚，可进一步再生成一个完整植株。 5.器官离体培养：是指对植物某一器官的全部或部分或器官原基进行离体培养 的技术。 6.胚胎培养：指对植物的胚、子房、胚珠和胚乳进行离体培养，使其发育成完 整植株的技术。 7.花药培养：是将花粉发育至一定阶段的花药接种到人工培养基上进行培养， 以形成花粉胚或愈伤组织进而分化成植株的技术。 8.花粉培养：是将花粉从花药中分离出来进行离体培养的过程。 9.细胞培养：是指对植物器官或愈伤组织上分离出的单细胞（或小细胞团）进 行培养，形成单细胞无性系或再生植株的技术。 10.原生质体培养：在人工控制条件下，将原生质体进行培养，使其形成完整植 株的技术 11.原生质体融合：也称体细胞杂交，指通过物理化学方法使原生质体融合，经 培养获得具有双亲全部或部分遗传物质的后代的方法 12.植板率：已形成细胞团的百分数（即每100个铺在平板上的细胞中有多少个 能长出细胞团） 13.脱分化〔dedifferentiation〕:指在离体培养条件下，已分化的细胞、组织 和器官在人工诱导条件下，失去原来的结构和功能而恢复分生能力，回复到分生组织状态的过程。（掌握） 14.再分化（redifferentiation):指在离体培养条件下，经脱分化的组织或细胞 在一定的培养条件下可转变为各种不同的细胞类型，形成完整植株的过程。 （掌握） 15.初代培养：指外植体来源于母本植株的最初培养 16.继代培养：将初代培养得到的培养体移植于新鲜培养基中，这种反复多次的 移植培养称为继代培养。 17.胚状体发生（embryoid）：指在组织培养中，由一个非合子细胞(体细胞)，经 胚胎发生和胚胎发育过程（经过原胚、球形胚、心形胚、鱼雷胚和子叶胚5个时期），形成具有双极性的胚状结构。 18.污染：植物组织培养过程中培养基和培养材料滋生杂菌，导致培养失败的现 象 19.玻璃化：试管植物的玻璃化是指试管苗外观形态呈半透明、水渍状的生长异 常现象，一旦形成玻璃苗，植株的增值系数即明显下降，既不能再用于后续的生根或继代增殖培养，移栽也难以成活。
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植物组织培养试题库 一、名词 外植体：在植物组织培养过程中，由植物体上切取的根、茎、叶、花、果、种子 等器官以及各种组织、细胞或原生质体等统称为外植体。 热处理脱毒：利用病毒和植物细胞对高温忍耐性不同，选择适当的高温处理染病 植株，使植株体内的病毒部分或全部失活，而植株本身仍然存活。 平板培养法：是把单细胞悬浮液与融化的琼脂培养基均匀混合，平铺一薄层在培 养基底上的培养方法。 消毒：指杀死、消除或充分抑制部分微生物，使之不再发生危害作用。 玻璃化现象：在长期的离体培养繁殖时，有些试管苗的嫩茎、叶片呈现半透明水
渍状，这种现象称为玻璃化。 脱毒苗：是指不含该种植物的主要危害病毒，即经检测主要病毒在植物内的存在 表现阴性反应的苗木。 灭菌：是指用物理或化学的方法，杀死物体表面和孔隙内的一切微生物或生物体，
即把所有生命的物质全部杀死。 褐变：是指外植体在培养中体内的多酚氧化酶被激活，使细胞里的酚类物质氧化
成棕褐色的醌类物质，有时使整个培养基变褐，从而抑制其他酶的活性，影响 材料的培养。 微尖嫁接：指在人工培养基上培养实生砧木，嫁接无病毒茎尖以培养脱毒苗的技 术。主要程序：无菌砧木培养—茎尖准备—嫁接—嫁接苗培养—移栽。 植物细胞全能性：一个生活的植物细胞，只要有完整的膜系统和细胞核，它就会 有一整套发育成一个完整植株的遗传基础，在适当的条件下可以通过分裂、分化 再生成一个完整的植株。 人工种子：将组织培养产生的体细胞胚或不定牙包裹在能提供养分的胶囊里，再 在胶囊的外面包上一层具有保护功能和防止机械损伤的外膜，形成一种类似自然 种子的结构。 试管苗驯化：植物组织培养中获得的小植株，长期生长在试管或三角瓶内，体表 几乎没有保护组织，生长势弱，适应性差，要露地移栽成活，完成由“异养”到 “自养”的转变，需要一个逐渐适应的驯化过程。 器官培养：植物的根、茎、叶、花器（包括花药、子房）和幼小果实的无菌培 养。 微体嫁接：指将 0.1-0.2mm 的茎尖作为接穗，嫁接到由试管中培养出来的无菌 实生砧木上，继续进行试管培养，愈合成为完整的的植株。 快速繁殖(微繁殖): 用组织培养的方法,使植物的部分器官,组织迅速扩大培养, 并移植到温室或农田繁殖出大量幼苗的繁殖方法. 脱分化:将已分化组织的已停止分裂的细胞从植物体的抑制性影响下解脱出来, 恢复细胞的分裂活性.一个成熟的细胞转变为分生状态的过程叫脱分化. 原生质体融合(体细胞杂交):就是使分离下来的不同亲本的原生质体,在离体条 件下通过诱导发生的质膜融合进而细胞核融合,像性细胞受精作用那样互相融合 成一体的现象. 愈伤组织培养:是指将母体植株上的外植体,接种到无菌的培养基上,进行愈伤组 织诱导,生长和发育的一门技术
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器官培养：即离体器官的培养。植株培养：对完整植株材料的培养。 组织或愈伤组织培养:是对植物体的各部分组织进行培养或对由植物器官培养产生的愈伤组织进行培养，二者均通过再分化诱导形成植株. 细胞培养:是对由愈伤组织等进行液体振荡培养所得到的能保持较好分散性的离体单细胞或花粉单细胞或很小的细胞团的培养. 原生质体培养:是用酶及物理方法除去细胞壁的原生质体的培养。 初代培养：芽、茎段、叶片、花器等外植体在离体培养条件下诱导愈伤组织、侧芽或不定芽、胚状体过程植物组织培养：是指通过无菌操作分离植物体的一部分（外植体），接种到培养基上，在人工控制的条件下（包括营养、激素、温度、光照、湿度）进行培养，使其产生完整植株的过程。 愈伤组织：原指植物在受伤之后于伤口表面形成的一团薄壁细胞，在组培中则指在离体培养过程中形成的具有分生能力的一团不规则细胞，多在植物体切面上产生。 外植体：从植物体上分离下来的用于离体培养的材料。 植物细胞全能型：任何具有完成细胞核的植物细胞，能拥有形成一个完整植株所必须的全部遗传信息和发育成完整植株的能力。 脱分化:已分化好的细胞在人工诱导条件下，恢复分生能力，回复到分生组织状态的过程。 再分化:脱分化后具有分生能力的细胞再经过与原来相同的分化过程，重新形成各类组织和器官的过程。胚状体：在离体过程中产生一种形似胚（具有明显的根端和芽端），功能与胚相同的结构。 褐变现象：指在接种后，其表面开始褐变，有事甚至会使整个培养基褐变的现象。 继代培养材料的玻璃化：当植物材料不断的进行离体繁殖时，有些培养物的嫩芽，叶片往往会呈半透明水迹状，这种现象通常成为玻璃化。 人工种子：通过植物组织培养的方法获得的具有正常发育能力的材料，外被有特定的物质，在适宜的条件下可以发芽成苗的植株幼体。 植板密度：形成的细胞团数/植板的细胞总数×100% 对称融合：双方原生质体均带有核基因组和细胞质基因组的全部遗传信息。 非对称融合：指一方亲本的全部原生质与另一方亲本的部分核物质及细胞质物质重组产生不对称杂种。 继代培养：是初代培养之后的连续数代的扩繁培养过程。目的：繁殖出相当数量的无菌苗，最后达到边繁殖边生根的目的。 细胞悬浮培养：将游离的植物细胞按一定的细胞密度悬浮在液体培养基中进行培养的方法。根据培养基的类型分为: 固体培养（琼脂、卡拉胶等固化），半液半固体培养(固液双层)，液体培养（震荡、旋转或静置培养）。 液体培养的优点：不使用凝固剂，节约生产成本，营养吸收充分；操作过程简化。 组织培养按培养对象可分为：植株培养，器官培养，组织培养，细胞培养，原生质体培养。 植物组织培养一般过程:初代培养，继代培养，生根培养，驯化移栽。 植物组织培养的特点：培养条件可以人为控制，生长周期短，繁殖率高，管理方便，利于工厂化生产和自动化控制。 组织培养技术在农业生产上的应用主要体现于以下几个方面：快速繁殖优良苗木；获得脱毒苗；育种上应用；工厂化育苗。 1902年，德国著名的植物生理学家和植物学家哈伯兰特提出了高等植物细胞全能性。1958年，美国植物学家斯图尔德等人，用胡萝卜根韧皮部的细胞进行培养，得到了完整植株，证明了细胞全能性。 怀特于1943年发表了《植物组织培养手册》专著，使植物组织培养开始成为一门新兴的学科。 腺嘌呤与生长素的比例是控制芽和根形成的主要条件之一，这一比例高时，产生芽，这一比例低时，则形成根，相等则不分化。 标准的组培实验室包括：1、洗涤室，器具的洗涤，干燥和消毒，2、配置室，进行药品的保存，配置，消毒，分装等，3、灭菌室，培养基及使用器具的消毒与灭菌，4、接种室，进行材料的接种，内置超净工作
植物组织培养复习题 植物组织培养复习题（习题） 一、名词解释 愈伤组织：在培养基上由培养物产生的无序生长且没有一定结构的薄壁细胞团。 外植体：在组织培养中，由植物体上取下来进行离体培养的那部分组织或器官 脱分化：由高度分化的植物器官，组织或细胞经过离体培养，产生愈伤组织的过程。 半连续培养：利用培养罐进行大量细胞培养的一种方式。 无性系变异：由任何形式的细胞培养所产生的植株所表现出来的差异。 胚状体：在离体植物细胞、组织或器官培养过程中，由一个或一些体细胞，经过胚胎发生和发育过程，形成的与合子胚相类似的结构。 看护培养：用同种或异种材料的愈伤组织作为看护组织培养细胞的一种方法。 无融合生殖：由配囊中卵细胞以外的其他细胞发育成的单倍体植株。 种质：亲代通过生殖细胞活体细胞直接传递给子代并决定固有生物性状的遗传物质。 悬浮培养：将游离的植物单细胞或小细胞团，按一定的细胞密度在受到不断拉动或摇动的液体培养基中进行培养的一种方式。 早熟萌发：在培养后迅速萌发为幼苗，不继续进行胚状生长，超过正常发育阶段。 选择压：在2个相对性状之间，一个性状被选择而生存下来的优势。 细胞全能性：任何有完整细胞核的植物细胞具有全部的遗传信息，在一定条件下，均具有分化，发育成完整植株的潜在能力。 条件培养基：在培养集中加入高密度的细胞进行培养，经过一段时间后，这些细胞向培养基中分泌一些促进细胞生长的活性物质，使培养基条件化，使原来在合成培养基上不能分裂的细胞发生分裂。 离体授粉：将未授粉的胚珠，子房或柱头从母体上分离下来，进行无菌培养，并通过一定的方式授给菌花粉，使其在试管内实现受精的技术。 同步化培养：培养基中大多数细胞都能同时通过细胞周期的各个阶段。
(1) 什么是植物组织培养? 植物组织培养是在无菌条件下，将植物体的任何一部分，如植物器官、组织、细胞以及原生质体等，培养在人工配制的培养基上，并给予合适的培养条件（包括营养、激素、温度、光照、湿度），使之发育成完整植株的过程。 （广义）又叫离体培养：指从植物体分离出符合需要的组织、器官或细胞、原生质体等，通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。 （狭义）组织培养：指用植物各部分组织，如形成层、薄壁组织、叶肉组织、胚乳等进行培养获得再生植株，也指在培养过程中从各器官上产生愈伤组织的培养，愈伤组织再经过再分化形成再生植物。 (2) 什么是"外植体"? 从植物体上分离下来的用于离体培养的材料称为外植体。 (3) 按照外植体的不同，植物组织培养可以分成几类? 可以分成5类 1、植株培养 2、器官培养（胚，花药，子房，根、茎和叶） 3、组织培养（各种组织、愈伤组织） 4、原生质体培养 5、细胞培养（愈伤组织分离或花粉单细胞或很小的细胞团) (4) 植物组织培养有哪些特点? ①培养条件可以人为控制 ②生长周期短，繁殖率高 ③管理方便，利于工厂化生产和自动化控制 (5) 你认为植物组织培养技术在当前的农业生产上有什么价值?为什么? （一）快速繁殖种苗 用组织培养的方法进行快速繁殖是生产上最有潜力的应用，包括花卉观赏植物、蔬菜、果树、大田作物及其他经济作物。快繁技术不受季节等条件的限制，生长周期短，而且能使不能或很难繁殖的植物进行增殖。 （二）无病毒苗的培养 植物在生长过程中几乎都要遭受到病毒病不同程度的危害，有的种类甚至同时受到数种病毒病的危害，尤其是很多园艺植物靠无性方法来增殖，若蒙受病毒病，代代相传，越染越重，甚至会造成极严重的后果。 （三）在育种上的应用 植物组织培养技术为育种提供了许多手段和方法，使育种工作在新的条件下更有效的进行 （四）人工种子 人工种子，是指植物离体培养中产生的胚状体或不定芽，被包裹在含有养分和保护功能的人工胚乳和人工种皮中，从而形成能发芽出苗颗粒体。 （五）工厂化育苗 是指以植物组织培养为基础，将外植体接种在人工配制的培养基上，通过控制环
名词解释 1.外植体：由活植物体上切取下来的可以用于组织培养的组织或器官。 2.愈伤组织：在人工培养基上由外植体长出来的一团无序生长的薄壁细胞（细胞排列疏松、 无规则）。 3. 植物细胞的脱分化：由高度分化的植物器官、组织或细胞产生愈伤组织的过程，又称去分化。 4. 植物细胞的再分化：脱分化产生的愈伤组织在培养过程中重新分化根或芽等器官的过程。 5. 试管苗的玻璃化 植物组培玻璃化苗的1、叶和嫩梢呈水晶透明或半透明水渍状； 2、整株矮化肿胀、失绿； 3、叶片皱缩成纵向卷曲，脆弱易碎； 4、叶表缺少角质层蜡质，没有功能性气孔，不具栅栏组织，仅有海 绵组织。 玻璃化现象的预防措施： 1、适当控制培养基中无机盐浓度 2、适当控制培养基中蔗糖和琼脂浓度 3、适当降低细胞分裂素和赤霉素浓度 4、增加自然光照，控制光照时间 5、改善培养皿的气体交换状况 6、控制好温度 7、在培养基中添加其他物质 6.胚性感受态：体胚发生的相对容易程度。 7.人工种子又称合成种子或体细胞种子。任何一种繁殖体，无论是在涂膜胶囊中包裹的、裸露的或经过干燥的，只要能够发育成完整的植株，均可称人工种子。 8.微室培养法：即将细胞培养在很少量的培养基中。 9.看护培养法：指用一块活跃生长的愈伤组织来看护单个细胞，并使其生长和增殖的方法。 10.植板效率：已形成细胞团的百分数，即每100个铺在平板上的细胞中有多少个长出细胞团。 11.试管外生根：将生根诱导与驯化培养结合在一起. 试管内生根：茎芽生根诱导有2条途径，其中一途径为试管内生根，在试管内诱导枝条生根叫试管内生根 12.植物离体保存：将离体培养的植物细胞、组织、器官或试管苗，保存于人工环境下，一般需要在低温或超低温条件下进行，以抑制其生长，达到长期保存的目的。 13．超低温保存：低温从4℃往下推，－80℃（干冰温度），－196℃以下的低温称为超低温。 问答题 1. 母液：为了避免每次配制培养基都要对几十种化学药品进行称量，将培养基中的各种成分按质量的特定倍数称量配制成的浓缩液。 2.植物激素 ⑴生长素类 生长素主要促进细胞分裂的生长，促进细胞脱分化，有利于诱导愈伤组织的产生，生长素与细胞分裂素同时使用有协调作用，在离体培养分化调节中，生长素促进根的形成抑制芽的形成，液体培养中利于体细胞胚胎发生。常用IAA、IBA、NAA、2,4-D。 ⑵细胞分裂素类：促进细胞分裂和扩大，调解器官分化，延缓组织衰老，增强蛋白质合成，能改善其它激素作用，离体培养中，促进不定芽的发生，与生长素协调作用可有效控制培养物的生长与分化。常用6-BA、ZT、KT、2iP。 ⑶赤霉素类：促进细胞伸长生长、诱导花芽形成、打破种子休眠以及诱导单性结实等生理功能。有20多种，目前主要是赤霉酸GA3。离体培养下，还与生长素协调作用对形成层分化有影响，刺激体细胞胚进一步发育成植株。 （4）脱落酸：对某些植物体细胞胚发生的特异基因表达起调控作用，激活相关基因的表达，大量合成贮藏蛋白、晚期胚胎丰富蛋白和少量胚胎发生特异性蛋白。通常低浓度促进体细胞胚发生，高浓度抑制体细胞胚的发生。 3.芽的增殖途径 （一）通过愈伤组织 利用植物细胞在培养中无限增殖的可能性以及它们的全能性，可以对若干种植物类型进行快速繁殖。由这些植物的器官或组织诱导形成的愈伤组织，通过器官发生或体细胞胚胎发生都可以分化出植株。 （二）不定芽形成：产生不定芽的器官：根（福禄考属植物、苹果的某些无性系、悬钩子属植物）、鳞茎（风信子—基部受伤以后）、叶（秋海棠、天竺葵等）。通过培养基中适当配比激素的影响，就是那些在正常情况下不能进行营养繁殖的植物，如芸苔属
植物组织培养知识点总结第一、二章 1 植物组织培养概念、分类、应用、创始人、奠基人 2 实验室各分室名称、主要设备、主要功能 3 无菌操作技术流程 4 表面消毒剂种类及作用效果 5 培养基成分及各成分的作用 6 植物组织培养三大难题 7 那些成分要抽滤灭菌 第三、四章 8 植物细胞全能性原理 9 名词解释：愈伤组织、脱分化、体细胞胚、人工种子 10 体细胞胚的特点 11 愈伤组织形成发育的三个时期，两种类型，良好愈伤组织的特点 12 植物离体微繁，一般过程，各阶段注意事项 13 褐变，影响褐变的因素，克服褐变的措施；玻璃化，无糖培养技术 第五、六、七章 14 植物脱毒方法、原理 15 脱毒率包括两种方面含义 16人工诱导单倍体的三种途径 17花药培养得到的再生植株倍性如何，为什么 18 花药培养的应用，花药培养力，一般培养过程。 19 离体幼胚培养，胚发育有几种类型？各有何特点？ 20 离体授粉离体受精 21 简述胚乳培养的意义 第八、九章 22 原生质体概念，两种分离方法，纯化方法。 23 酶法分离植物原生质体的酶液组成及作用 24 简述植物原生质体培养基的特点 25 原生质体融合，融合的主要方法 26 体细胞杂交过程 27 融合产物的种类及特点 28 植物细胞无性系变异，特点 29 提高植物细胞无性系变异频率的方法 30 细胞突变体的类型及对应的筛选方法 植物组织培养知识点总结
第一、二章 1 植物组织培养概念、分类、应用、创始人、奠基人 概念：是一种将植物的器官、组织或细胞在适当的培养基上进行无菌培养，并重新再生细胞或植株的技术。 分类：（1）按外植体来源和特性分：植株培养胚胎培养器官培养组织或愈伤组织培养细胞或原生质体培养；（2）按培养方法分：固体培养液体培养固体液体两相培养 应用：（1）克服远缘杂交中杂种不育性，种子无活力或配发育不全的植物获得后代，一年多代育种（2）培育三倍体（3）单倍体育种（4）提高突变频率，筛选变异类型（5）经过细胞融合得到体细胞杂种（6）种质资源保存 2 实验室各分室名称、主要设备、主要功能 化学实验室（准备室） 无菌操作室（接种室） 培养室 高压灭菌室 细胞学实验室 3 无菌操作技术流程 4 表面消毒剂种类及作用效果 漂白粉饱和溶液 10-30m 效果很好 氯化汞 0.1-0.2% 3-12m 效果最好 酒精 70-75% 10-30s 效果好 5 培养基成分及各成分的作用 水提供水分，营造环境 无机盐大量微量提供细胞生长所需元素 有机化合物碳源：提供能源、维持渗透压；维生素参与代谢；氨基酸，促进芽根胚状体生长和分化 植物生长调节物质调节细胞生长 天然复合物 其他成分活性炭吸附；抗生素防止内生菌污染 6 植物组织培养三大难题 污染褐变玻璃化 7 那些成分要抽滤灭菌 热不稳定成分如：IAA ABA ZT GA3 第三、四章 8 植物细胞全能性原理 植物的每一个细胞都具有该植物的全部遗传信息和发育成完整植株的能力。 9 名词解释：愈伤组织、脱分化、体细胞胚、人工种子 愈伤组织：原指植物体的局部受到创伤刺激后，在伤口表面新生的组织。它由活的薄壁细胞组成，可
植物组织培养复习题 一、填空题： 1.植物脱病毒一般采用茎尖培养脱毒和热处理两种方法。 2.最典型的培养基是1962年发表的的一种适合于烟草愈伤组织快速生长的改良培养基，该培养基后来被称为MS培养基，现已广泛用于植物组织培养。 3.胚状体发育顺次经过原胚期、球形胚期、心形胚期、鱼雷形胚期和子叶期。 4.具有防止褐变作用的维生素是Vc。 5.植物组织培养按培养对象分为愈伤组织培养、器官培养、胚培养、细胞和原生质体培 养等几种类型。 6.在通过微茎尖培养脱毒时，外植体的大小应以成苗率和脱毒率综合确定，一般以0.3～0.5mm、带1～3个叶原基为好。 7.对植物组织培养的培养基灭菌时，一般情况采用的条件是121温度，保持时间是15～ 20分钟。 8.在幼胚培养基中，蔗糖的主要作用是维持渗透压、提供碳源和能源和防止幼胚早熟萌 发。 9.植物组织培养中，微量元素铁的用量较大，由于在较高pH下，易形成Fe(OH)3沉淀，难以被吸收，所以多用硫酸亚铁（FeSO4·7H20）和乙二胺四乙酸（Na2-EDTA）形成的螯合物，并且单独配制。 10.种质保存大致分为原地保存和异地保寸两种方式。 11.外植体选择的原则是：选择优良的种质、选择健壮的植株、选择最适时期、选取适宜 的大小。 12.细胞悬浮培养的方法有成批培养和连续培养等。 13.植物原生质体分离的方法有酶解法和机械法。 14.植板率是指已形成细胞团的单细胞与接种总细胞数的百分数。 15.花粉分离的方法有挤压法、磁搅拌法、漂浮释放法。 16.植物组织培养发展可分为三个时期：萌芽阶段、奠基阶段、快速发展和应用阶段。 17.一个年产4-20万株苗的商业性组织培养实验室，其总面积不应少于60平方米，可划 分为准备室、缓冲室、无菌操作室和培养室。 18.盐酸硫胺素VB1是脱羧酶辅酶，吡哆醛VB6是转氨酶辅酶。 19.愈伤组织形成大致经历三个时期，即：诱导期、分裂期、分化期。