肾脏组织病理
主要的染色方式：
HE染色显示各种细胞核呈蓝色，细胞质呈红色，主要用于观察细胞的种类和数量、坏死及管型成分。观察的病变包括：肾小球的增生、坏死及渗出性病变，肾小管上皮细胞损伤，间质水肿、间质出血、炎细胞浸润、血管炎症等。
PAS染色显示基底膜、系膜基质、糖原及糖蛋白呈紫红色，细胞核呈蓝色，能很好的显示肾小球和肾小管的基底膜，主要用于观察肾组织的基本结构，进而发现病变，判断病变性质、累及部位和轻重程度，同时根据基底膜轮廓还能判断固有细胞种类。观察的病变包括：肾小球基底膜增厚，毛细血管袢塌陷，包曼囊壁病变，透明滴，硬化，系膜细胞和基质增多，系膜溶解，毛细血管袢内/外增殖；肾小管上皮细胞内蛋白吸收滴，肾小管基底膜增厚，肾小管炎；血管透明变性，动脉内弹力层分层等。
Masson-Trichrome三色染色显示基底膜、系膜基质和型胶原呈绿色（或蓝色，取决于使用亮绿或甲苯胺蓝），免疫复合物、纤维素样坏死、血栓均呈红色，细胞核呈蓝黑色，主要用于观察坏死性病变、免疫复合物沉积。观察的病变包括：肾小球免疫复合物沉积，血栓，纤维蛋白，血小板；肾小管萎缩，间质纤维化；血管血栓等。
PASM-Masson染色显示基底膜和系膜基质呈棕黑色，细胞质及免疫复合物呈红色，胶原呈绿色/或蓝色（取决于套染中使用亮绿或甲苯胺蓝），该染色对肾小球结构的显示较PAS染色更为精细，主要用于观察基底膜，免疫复合物及特殊沉积物。观察的病变包括：肾小球基底膜“钉突”和空泡，基底膜双轨，基底膜和包曼囊壁断裂，间质纤维化和动脉内弹力层分层等。
免疫荧光、免疫组化冰冻切片较好，足细胞标志物如（nephrin WT-1, podocin 等，查看足细胞病变、肾小球硬化
病理观察（电镜）
肾小球：
1.肾小球总数、球性、节段硬化的肾小球、缺血性肾小球
2.病变分布：局灶或弥漫，节段或球性
3.增生：系膜增生、毛细血管内增生或渗出性，浸润细胞类型或数量
4.K-W结节
5.毛细血管袢基底膜断裂、增厚、病变（钉突、空泡）
肾小管间质
1.肾小管急性损伤
2.肾小管上皮细胞凝固性坏死
3.肾小管基底膜异常
4.肾小管炎
5.间质炎细胞浸润
6.间质出血水肿
7.间质纤维化、肾小管萎缩
血管
动脉炎、动脉内皮细胞病变、动脉栓塞、管周毛细血管炎细胞浸润；动脉
TMA病变、动脉硬化和小动脉硬化（透明变性和内膜增厚）
HE 染色图解
对于肾脏的观察要看肾小球、肾小管、肾间质及肾小动脉的病变，肾小球的病变又要观察肾小囊、系膜细胞及基质、毛细血管基底膜、足细胞等等等等，而且糖尿病不等于糖尿病肾病，如果是糖尿病肾病最典型的标志性病变是系膜基质无细胞性增生，形成K-W结节
片子质量没有问题。但是不知道要看什么，看蛋白的沉积是用PAS染色，看基底膜是电镜，看免疫复合物是用免疫荧光，简单的炎症反应看HE。
常见检测指标因子
Nephrin（足细胞裂孔隔膜上的一种跨膜蛋白，于1998年被发现命名）是调节足细胞裂孔隔膜结构和功能的重要蛋白，可影响肾小球滤过膜的通透性及蛋白尿的产生，被作为肾脏疾病早期足细胞损伤的重要的标志物之一。
表达越高，表示损伤越严重
VEGF VEGF 增多提高肾脏损伤作用，抑制其作用可以降低足细胞损伤。
血清检测指标： Sflt-1 Enos 肌酐尿素
尿液检测指标： NGAL kim-1 尿肌酐和尿蛋白肾脏结构：
大鼠肾纤维化模型 肾积水(hydronephrosis)是指尿液从肾盂排出受阻，蓄积后肾内压力增高，肾盂肾盏扩张，肾实质萎缩，导致肾功能减退。梗阻性肾病其主要的病理生理改变是肾积水、肾盂及肾小管压力升高、肾间质水肿、炎性细胞浸润、肾间质内成纤维细胞增生、肾间质胶原蛋白聚集、肾间质增宽、肾小管萎缩，最终导致肾间质纤维化和肾单位减少，引起肾功能衰竭。 单侧输尿管梗阻是比较成熟的肾间质纤维化模型，结扎2周就可有成纤维细胞的增生和间质细胞外基质的生成。但是由于输尿管的结扎使患侧肾盂中的尿液不能外排，加上对侧肾脏的代偿作用，所以一般情况模型组血肌酐、尿素氮、NAG以及24h尿蛋白仅明显高于正常组，但还处于正常范围之内，同时对侧肾一般也无明显改变，而患侧肾脏组织中大量炎症细胞浸润、肾小管和间质的结构严重破坏以及肾间质纤维化，最后肾间质呈现广泛的纤维化，而肾小球几乎没有病变。因此单侧输尿管梗阻模型在研究肾间质纤维化方面使研究的靶点明确，有利于其病变机理及抗间质纤维化治疗的研究。 1.实验动物 SPF级Wistar大鼠，健康，雄性，体重为180g~200g 2.实验分组 实验分六组：正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组，每组15只动物。 3.实验周期 7d，14d，21d，28d 4.建模方法 1术前一晚禁食,自由饮水。 2称量大鼠，腹腔注射水合氯醛（15%）350mg/kg麻醉，剃毛固定后用碘酒及酒精擦拭手术区域。3在上腹中线偏左约3-4mm剪开腹壁，手术组分离出左肾输尿管。 4在靠近肾下极处结扎并分离输尿管，然后双结扎，在2个结扎中间剪断输尿管，逐层缝合肌层及腹壁，酒精清洁缝合处。待小鼠清醒后，将其放回洁净笼具后放回饲养室饲养，定期观察大鼠状态及死亡情况并做好记录。 5置于加热垫至其苏醒。假手术组不结扎输尿管，其余步骤相同。 6术后三天连续注射青霉素20万单位/天防止感染。 5.模型的评价 5.1 蛋白尿含量、尿NAG活性测定模型组术后2周、4周的24h尿蛋白含量以及尿酶NAG活性比正常组和假手术组明显上升。
正常肝脏与肝脏胆管病理组织切片彩色图谱大全
肝小叶( hepatic lobule)是肝的基本结构单位,呈多角棱柱体,长约2mm,宽约1mm, 人的肝小叶间结缔组织很少,相邻肝小叶常连成-片,分界不清(图15-7,图15-8)。肝小叶中央有一条沿其长轴走行的中央静脉( central vein) ,周園是大致呈放射状排列的肝索和肝血窦。
门管区：位相邻肝小叶间，为三角形或椭圆形结缔组织小区，内含伴行小叶间动脉、小叶间静脉和小叶间胆管。有时在肝小叶间的结缔组织中可见一条单独的静脉即小叶下静脉。小叶间胆管由单层立方或柱状上皮围成。
图13-10肝门管区图示壁厚腔小的是小叶间动脉（※）、 壁薄腔大的是小叶间静脉（★），单层立方上皮构成，核深蓝色圆形的是小叶间胆管（↑）。 天马波波
胆小管( bile canaliculus) 是相邻两个肝细胞之间局部胞膜凹陷形成的微细管道,在肝板内连接成网。靠近胆小管的相邻肝细胞膜形成由紧密连接、桥粒等组成的连接复合体,可封闭胆小管周围的细胞间隙,防止胆汁外溢至细胞间或窦周隙。当肝细胞发生变性、坏死或胆道堵塞而内压增大时,胆小管的正常结构被破坏，胆汁则溢人窦周隙,继而进人肝血窦 ，导致机体出现黄疸。 相邻肝小叶之间呈三角形或椭圆形的结缔组织小区,称门管区( portal area) , 每个肝小叶周围有3 ~4个门管区。门管区内有小叶间静脉、小叶间动脉和小叶间胆管。小叶间静脉是门静脉的分支,管腔较大而不规则,管壁薄;小叶间动脉是肝动脉的分支,管腔小，管壁相对较厚。小叶间胆管管壁为单层立方上皮,它们向肝门方向汇集，最后形成左、右肝管出肝。在非门管区的小叶间结缔组织中,还有单独走行的小叶下静脉,由中央静脉汇集形成,它们在肝门部汇集为肝静脉。 胆小管
生理学报 Acta Physiologica Sinica , December 25, 2007, 59 (6): 796-804 https://www.doczj.com/doc/c23492380.html, 796 研究论文 Received 2007-05-16 Accepted 2007-06-08 This work was supported by the National Natural Science Fundation of China (No. 30470627). * Corresponding author. Tel: +86-21-54237716; Fax: +86-21-64171179; E-mail: lulimin@https://www.doczj.com/doc/c23492380.html, 肾素(原)受体在大鼠肾小球系膜细胞和肾脏的表达 贺 明1，黄娅林2，张 琳3，姚 泰1，陆利民1,* 复旦大学上海医学院1生理学与病理生理学系；2医学神经生物学国家重点实验室，上海 200032; 3上海交通大学医学院生理学系，上海 200025 摘 要：近年发现的肾素(原)受体(renin/prorenin receptor, RnR)已被证明具有生物学功能，在心、肾及多种细胞表达。本文旨在观察RnR 在体外培养的大鼠肾小球系膜细胞(mesangial cells, MCs)和肾脏中是否表达，及其表达的细胞部位，并用RnR 的多肽阻断剂肾素原“柄区肽” (handle region peptide, HRP)与RnR 结合后观察受体复合物进入细胞的过程与定位。结果显示，RnR 主要存在于大鼠肾脏皮质肾小球系膜区和体外培养的MCs 的细胞核周围胞浆和细胞膜。将FITC 标记的HRP (FITC-HRP)加入细胞培养液后30 s 到30 min 期间，可观察到FITC-HRP 由培养液转移到胞浆内并进入细胞核。用免疫荧光和激光共聚焦技术观察到，HRP 与RnR 的共定位主要位于细胞膜和细胞核周围胞浆；在30 min 时，一部分HRP 已进入细胞核，而RnR 没有进入细胞核内，仍主要位于细胞核周围胞浆。上述结果提示，RnR 与其配基结合后进入细胞内并发挥生物学效应。 关键词：肾素(原)受体；肾素原“柄区肽”；系膜细胞；肾素-血管紧张素系统中图分类号：R 334+.1 Expression of renin/prorenin receptor in rat kidney and cultured mesangial cells HE Ming 1, HUANG Ya-Lin 2, ZHANG Lin 3, YAO Tai 1, LU Li-Min 1,* 1 Department of Physiology and Pathophysiology; 2 National Key Laboratory of Medical Neurobiology, Shanghai Medical College, Fudan University, Shanghai 200032, China; 3 Department of Physiology, Medical College of Shanghai Jiaotong University, Shang-hai 200025, China Abstract: The renin/prorenin receptor (RnR) has recently been cloned and demonstrated to exist in different cells in the cardiovascular and renal systems, playing an important role in physiological and pathophysiological situations. In the present study, we used immunofluorescence method to identify whether and where the RnR expressed in cultured rat renal mesangial cells (MCs) and rat kidney.By using the prorenin handle region peptide (HRP) as a decoy peptide of the RnR, we observed the distribution of the HRP-RnR complex in the MCs. Our results showed that the RnR was localized in the perinuclear zone and plasma membrane of the MCs. At the organ level, the RnR was observed in the mesangium of cortical glomeruli in rat kidney. The FITC-labeled HRP (FITC-HRP) translocated from cell culture medium into the cytoplasm within 30 s. Colocalization of the HRP and RnR was observed mainly on the cell membrane and in the perinuclear zone of cytoplasm by using immunofluorescence and confocal microscopy. At 30 min the FITC-HRP was mainly observed in the nucleus while the RnR remained in the perinuclear zone of cytoplasm. Taken together, our results confirm the expression of RnR in the renal MCs. It is suggested that internalization of the RnR after binding with its ligand is at least one of the pathways through which the RnR exerts its biological actions. Key words: renin/prorenin receptor; handle region peptide of prorenin prosegment; mesangial cells; renin-angiotensin system
大鼠肝脏组织病理切片的制作和HE 染色 步骤如下： （一）固定与修块 取组织块放入Bouin氏液中，组织块的直径应小于7mm。6小时左右后用双面 刀片将组织块修剪成3-5mm3大小。 （二）脱水与透明 1．75%乙醇50分钟 2．85%乙醇50分钟 3．95%乙醇（I）30分钟 4．95%乙醇（II）30分钟 5．100%乙醇（I）30分钟 6．100%乙醇（II）30分钟 7 1/2 二甲苯（乙醇与二甲苯等体积）20分钟 8．二甲苯（I）20分钟 9．二甲苯（II）10分钟（可依据透明效果而定） 若脱水不好，二甲苯溶液颜色会变混浊。在每一步骤之后，要充分滤干组织 块，一般用筒纸吸干组织块上的液体，以免影响其他液体的浓度，但也要防止组织块干燥。全过程约需要5h。 （三）浸蜡、包埋与修蜡块 1．浸蜡：将60℃恒温箱打开，使石蜡充分溶解，待脱水与透明结束后，将 组织块转入石蜡里，放置于60℃恒温箱120分钟。 2．包埋：将60℃的石蜡倒入纸盒内，然后用小镊子将各组织块按一定的顺 序排列好，使切面朝下。不同组别的同一组织包埋于一个蜡块中，以保证切片和染色条件相同。为防止倒入纸盒内的石蜡底部立刻凝固，可将纸盒置于一玻璃板上（或大培养皿内），然后将玻璃板置于80-90℃左右热水上，包埋时蜡盒底部 要放平，做蜡块的蜡要反复冻融较好。 3．修蜡块：待纸盒内蜡凝固后，用刀片将其修成梯形，组织块与蜡块边缘 之间的距离不得小于2mm。 （四）切片 在载玻片上擦少量甘油蛋白。可滴半滴甘油蛋白于载玻片上，用手指充分抹 匀，呈半干状为佳。切片厚约4-8μm，将切片在55℃左右水浴中展开，展开程度以带黄颜色的组织完全摊平为准。用涂有甘油蛋白的载玻片从水浴中捞取切片，放入37℃烘箱中过夜。每个组织块捞片2张。过夜后，将载玻片置于玻片架上，进行下面的实验。 （五）脱蜡、染色与脱水 倾斜玻片架，将玻片架和载玻片下缘的试剂用筒纸吸干，减轻对其他试剂浓 度的影响。全过程约需要60分钟。 1．脱蜡 （1）二甲苯（I）15分钟 （2）二甲苯（II）15分钟 （3）100%乙醇2分钟 （4）95%乙醇（I）1分钟 （5）95%乙醇（II）1分钟 （6）蒸馏水浸洗1分钟
大鼠肾脏冰冻切片的体会 发表时间：2016-03-01T14:17:27.000Z 来源：《中国综合临床》2015年9月供稿作者：张丽娥[导读] 福建省南平市第二医院病理科福建建阳３５４２００冰冻切片不仅要求病理技师在短时间内制出高质量的切片,还需要病理技师具有娴熟的技术,对冰冻切片机功能的熟练掌握合理应用. 张丽娥 福建省南平市第二医院病理科福建建阳３５４２００ 【中图分类号】R５８７．２【文献标识码】B 【文章编号】１００１－５３０２(２０１５)０９－０８５７－０１ ０．引言由于肾脏组织质地柔软,含水量高,或在取材过程中肾组织与水分接触, 突遇低温,易形成冰晶,快速冷冻切片的制作难度大,我们通过对大鼠肾脏的冰冻制片,总结经验如下. １材料使用德国产Leica—CM１９５０型冰冻切片机,Leica一次性刀片,冷冻组织包埋剂(O．C．T．),AF固定液,改良Gill苏木素染色液,２％碳酸氢钠返蓝液,逐级梯度酒精,中性树胶. ２方法２．１取材及包埋２．１．１取新鲜大鼠肾脏标本常规取材,标本要新鲜,无需固定,严禁浸入甲醛, 酒精,生理盐水等液,尤其是不可以用酒精固定,酒精固定后组织将无法冷冻.２．１．２将样本托放入冰冻切片机的冻台上预冷,加少许O．C．T．,在OCT 未完全冻结前快速的将组织放于样本托上,在组织周围适量的补充O．C．T,待包埋剂约１/３未冻结时压上冷冻锤,打开加强冷冻,使组织快速冷冻.２．１． ３冰冻切片机温度设定在－１６oC—－１８oC为宜.冷冻时间一般为１min~２min.冷冻时间过长,组织易变硬变脆,细胞结构会发生改变,难于切片.２．１．４包埋组织时应将组织周边多留出O．C．T．用于牵引展开切片,O．C．T．中的小气泡应尽量去除,以免切片时挤压旁边组织产生皱褶,影响切片效果. ２．２切片组织切片厚度设定为５um－６um.刀具提前安放好,调整好刀具角度,切片时控制好操作窗,以利保温.肾脏组织细胞比较致密,若时间过长会变脆且易碎,在冰冻切片时可用手指轻压组织回温,再进行切片. ２．３固定切片后立即放入AF固定液固定３０s—１min,不可待切片干后再固定,这样会造成细胞核染色质不清晰,呈现毛玻璃样改变,细胞胞浆边界不清等组织细胞的退变现象. ２．４染色封片固定好的冰冻切片在苏木素染液中染色３０s—５０s,经１％盐酸分化,２％碳酸氢钠水溶液返蓝,伊红染色,梯度酒精脱水,二甲苯透明,中性树胶封片. 制好的切片核浆对比分明,红蓝适度,颜色鲜艳,达到理想染色效果. ３讨论与分析:３．１冰晶是由于冷冻缓慢,冷冻时间过长,胞质内与组织间隙未结合的水分析出形成的.肾脏因其组织结构,在组织冷冻过程中,组织内易产生大量的冰晶影响冰冻切片的诊断,为了防止组织内冰晶的产生,最佳的办法一是使用冻锤:新鲜标本包埋后放入冷冻台时,不能将冻锤马上按压在组织上,那样会使组织受挤压变形.应该待O．C．T．凝固６０％~７０％时,再将冻锤轻压在组织上, 这样既能防止冰晶的产生,又能得到较平整的切面;另一种方法为使用液氮冷冻,可将组织放入液氮中２s－３s,待组织冻至８０％时即可取出制片,否则过冻会引起组织发脆,冻头与组织分离[２]. ３．２将包埋剂放入－１０OC或－４OC冰箱内保存,包埋剂要使用OCT,而不能用胶水等替代,因OCT 的主要成分为PVP,其能通过渗透的作用将细胞内的水分移出,减少冰晶形成. ３．３冰冻的速度与样品的表面积和体积成正比,取材时组织块尽可能薄,０．２cm 为宜,扁平状冷冻速度快,切片的前几张冰晶少,越后冰晶越多,切片不能求快,而要确保切片质量,力争一次完成一张高质量的切片[１]. ３．４可预先做好OCT冻头,将冻头上的OCT 修平,有利于将组织放平,再在冰冻机内在肾组织上滴加OCT,有利于OCT迅速降温,避免组织复温,减少冰晶形成. ３．５肾脏冰冻制片时易产生不规则裂痕,与切片时温度和切片速度有关,操作时应注意操作窗不要开太大,免工作箱的温度升高;OCT的用量太少易产本皱褶,滴加OCT时要上下俩端多,俩侧少,同时要注意OCT不要有小气泡. ３．６冰冻切片机应安放在冷室内,避免压缩机反复工作,仪器要定期维护,除霜,清洁消毒. 总之,冰冻切片技术是病理科最重要的常规工作之一,也是较难掌握的病理实验技术.要做好一张冰冻切片需要病理技术人员具有严格的责任心、严谨的工作态度、丰富的工作实践经验[３]在日常的工作中还需不断摸索经验提高切片质量,冰冻切片不仅要求病理技师在短时间内制出高质量的切片,还需要病理技师具有娴熟的技术,对冰冻切片机功能的熟练掌握合理应用. 参考文献[１] 陈乐真,徐庆中,陈国璋手术中病理诊断图鉴１版北京:科学技术文献出版社,２００５:２(还需卷数期数页码等现在还没查询查询后补上)[２] 范慧,陈立华,刘宇冷冻切片的制作体会及常见问题分析．诊断病理学杂志,２００８,１３８(还需卷数期数页码等现在还没查询查询后补上)[３] 吴艳霞．冰冻切片的制作方法分析．吉林医学,２００９,３０(６):４９３．
大鼠肝脏组织病理切片的制作和HE染色步骤如下： （一）固定与修块 取组织块放入Bouin氏液中，组织块的直径应小于7mm。6小时左右后用双面 刀片将组织块修剪成3-5mm3大小。 （二）脱水与透明 1．75%乙醇50分钟 2．85%乙醇50分钟 3．95%乙醇（I）30分钟 4．95%乙醇（II）30分钟 5．100%乙醇（I）30分钟 6．100%乙醇（II）30分钟 7 1/2二甲苯（乙醇与二甲苯等体积）20分钟 8．二甲苯（I）20分钟 9．二甲苯（II）10分钟（可依据透明效果而定） 若脱水不好，二甲苯溶液颜色会变混浊。在每一步骤之后，要充分滤干组织 块，一般用筒纸吸干组织块上的液体，以免影响其他液体的浓度，但也要防止组织块干燥。全过程约需要5h。 （三）浸蜡、包埋与修蜡块 1．浸蜡：
将60℃恒温箱打开，使石蜡充分溶解，待脱水与透明结束后，将 组织块转入石蜡里，放置于60℃恒温箱120分钟。 2．包埋： 将60℃的石蜡倒入纸盒内，然后用小镊子将各组织块按一定的顺 序排列好，使切面朝下。不同组别的同一组织包埋于一个蜡块中，以保证切片和染色条件相同。为防止倒入纸盒内的石蜡底部立刻凝固，可将纸盒置于一玻璃板上（或大培养皿内），然后将玻璃板置于80-90℃左右热水上，包埋时蜡盒底部 要放平，做蜡块的蜡要反复冻融较好。 3．修蜡块： 待纸盒内蜡凝固后，用刀片将其修成梯形，组织块与蜡块边缘 之间的距离不得小于2mm。 （四）切片 在载玻片上擦少量甘油蛋白。可滴半滴甘油蛋白于载玻片上，用手指充分抹 匀，呈半干状为佳。切片厚约4-8μm，将切片在55℃左右水浴中展开，展开程度以带黄颜色的组织完全摊平为准。用涂有甘油蛋白的载玻片从水浴中捞取切片，放入37℃烘箱中过夜。每个组织块捞片2张。过夜后，将载玻片置于玻片架上，进行下面的实验。 （五）脱蜡、染色与脱水 倾斜玻片架，将玻片架和载玻片下缘的试剂用筒纸吸干，减轻对其他试剂浓 度的影响。全过程约需要60分钟。
中国组织工程研究与临床康复第15卷第18期 2011–04–30出版 Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research April 30, 2011 Vol.15, No.18 ISSN 1673-8225 CN 21-1539/R CODEN: ZLKHAH 3347 Department of Urology, Affiliated Hospital, Academy of Military Medical Sciences, Beijing 100071, China Mai Hai-xing★, Master, Department of Urology, Affiliated Hospital, Academy of Military Medical Sciences, Beijing 100071, China maimark24@ https://www.doczj.com/doc/c23492380.html, Correspondence to: Chen Li-jun, Doctor, Professor, Master’s supervisor, Department of Urology, Affiliated Hospital, Academy of Military Medical Sciences, Beijing 100071, China chenlijun829@ https://www.doczj.com/doc/c23492380.html, Received: 2010-10-26 Accepted: 2010-12-02 解放军军事医学科学院附属医院泌尿外科，北京市100071 麦海星★，男，1981年生，广东省阳江市人，汉族，2008年解放军第四军医大学毕业，硕士，主要从事肾脏移植的研究。 maimark24@ https://www.doczj.com/doc/c23492380.html, 通讯作者：陈立军，博士，教授，硕士生导师，解放军军事医学科学院附属医院泌尿外科，北京市100071 chenlijun829@ https://www.doczj.com/doc/c23492380.html, 中图分类号:R617 文献标识码:B 文章编号:1673-8225 (2011)18-03347-04 收稿日期：2010-10-26 修回日期：2010-12-02 (20101026009/W ? W) 大鼠原位肾脏移植模型的建立★ 麦海星，曲楠，赵立，黄晨，王亚林，李学超，李建涛，陈立军 Rat models of orthotopic kidney transplantation Mai Hai-xing, Qu Nan, Zhao Li, Huan Chen, Wang Ya-lin, Li Xue-chao, Li Jian-tao, Chen Li-jun Abstract BACKGROUND:There are many ways to prepare kidney transplantation models in rats; however, there are still many problems about operation time, transplantation effect and so on. OBJECTIVE: To study the microsurgical technique of establishing a reliable rat model of orthotopic kidney transplantation. METHODS: Kidney transplantation was performed from SD to Wistar strain (allogeneic),the donor’s artery and renal vein were put on the self-make rubber septum and underwent the end to end anastomosis surgeon with the receptor’s arteriae renalis and renal vein. After that, the donor’s bladder valva was inosculated with the receptor’s bladder. All the rats were divided into two groups: control group and Cyclosporin A (CsA) group, each group included 30 rats. The control group received 1 mL D-hanks each day after transplantation; the CsA group received subcutaneous injection of CsA for 15 mg/kg. The serum creatinine levels were observed at days 3, 5 and 10 after transplantation, pathological changes were also observed at 10 days after transplantation. RESULTS AND CONCLUSION: Rat orthotopic kidney transplantation was performed in 60 rats, and the successful rate was 85%. The serum creatinine level in the CsA group was lower than that in the control group (P < 0.05), but the survival time in the CsA group was longer than that in the control group (P < 0.05). Allografts of the control group exhibited typical severe acute rejection. It is indicated that this rat model of kidney transplantation is a reliable model with good reproducibility and high achievement ratio. Mai HX, Qu N, Zhao L, Huan C, Wang YL, Li XC, Li JT, Chen LJ.Rat models of orthotopic kidney transplantation. Zhongguo Zuzhi Gongcheng Yanjiu yu Linchuang Kangfu. 2011;15(18): 3347-3350. [https://www.doczj.com/doc/c23492380.html, https://www.doczj.com/doc/c23492380.html,] 摘要 背景：目前已有多种大鼠肾移植模型建模方式,但在移植时间、移植效果等方面都存在各种问题。 目的：探讨建立稳定、可靠的大鼠原位肾脏移植模型的方法。 方法：以SD大鼠为供体Wistar大鼠为受体行原位肾移植术。供体肾动脉、肾静脉在自制橡胶垫片上分别与受体的肾动脉、肾静脉端端吻合，供体输尿管膀胱瓣与受体膀胱吻合。将实验动物随机分为2组，对照组移植后每日腹腔内输注1 mL D-hanks 液；环孢素A组移植后每日皮下注射环孢素A 15 mg/kg。记录大鼠生存时间并于移植后第3，5，10天测定血肌酐值，移植后第10天，光镜下观察移植肾病理改变。 结果与结论：大鼠原位肾脏移植成功率为85%。移植后第5，10天环孢素A组血清肌酐值显著低于对照组(P < 0.05)。环孢素A组大鼠肾移植后存活天数明显长于对照组(P < 0.05)，移植肾病理可见排斥明显减轻。提示该模型稳定性强、重复性好，具有较高的成功率。 关键词：模型，动物；肾；移植；显微外科；大鼠 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2011.18.028 麦海星，曲楠，赵立，黄晨，王亚林，李学超，李建涛，陈立军.大鼠原位肾脏移植模型的建立[J].中国组织工程研究与临床康复，2011，15(18):3347-3350. [http://www.crte https://www.doczj.com/doc/c23492380.html, https://www.doczj.com/doc/c23492380.html,] 0 引言 大鼠是目前器官移植实验中最常用的实验动物[1-5]。由于大鼠的肾血管短，手术视野小，端端吻合难度较大，因而以往实验大多采用端侧吻合，但这须阻断大鼠体循环，导致其下半身在吻合期间处于缺血状态。当开放血管夹后，将发生严重的缺血-再灌注损伤[6-9]。有的方法采用带有与供肾动脉和肾静脉相连的主动脉和下腔静脉片，分别与受者肾动脉、肾静脉端端吻合，膀胱与膀胱吻合，但术中往往发现主动脉与肾动脉管径相差甚远，吻合后容易漏血。另一种方法利用供、受体动、静脉袖口式套叠，此方法提高了受体的存活率并缩短了手术时间，但因所用的套管管径有限，在翻转血管壁形成袖口时，使血管腔变狭小，影响移植肾脏血流的恢复，腹腔静脉与肾静脉作端端吻合时，因静脉壁薄弱常引起静脉壁撕裂而导致手术失败。 不阻断大鼠体循环的肾血管端端吻合原位肾移植技术的建立，避免了上述的缺点，采用端端吻合法减少了供肾的缺血-再灌注损伤，术后动物的存活率较采用端侧吻合者有明显提高[10-12]。 实验采用供体肾动脉、肾静脉分别与受体的肾动脉、肾静脉端端吻合，供体输尿管膀胱瓣与受体膀胱吻合的方法。施行大鼠肾移植。
肾缺血再灌注损伤大鼠模型具体步骤及说明 ?原型物种人 ?来源缺血再灌注，双侧肾动脉夹闭法 ?模式动物品系SD大鼠，SPF级，雄性，体重220g~250g ?实验分组随机分组：对照组，模型组，阳性药物组，受试药物组，15只每组 ?实验周期24h or 72h ?建模方法1. 选取250g左右大鼠，术前禁食12h，自由饮水。 2. 15％水合氯醛(350mg／kg)腹腔注射麻醉,大鼠背部去毛，消毒备 皮。 3. 在背部脊椎旁1cm、肋骨下缘1cm处剪开皮肤及肌肉，可见到肾脏, 小心分离出两侧肾脏的肾动脉，迅速用动脉夹夹闭两侧肾动脉。 4. 缺血60min后松开动脉夹，恢复血流，观察肾脏恢复情况。 5. 分两层缝合开口，待大鼠清醒后，将其放回洁净笼具后放回饲养室饲 养，定期观察大鼠状态及死亡情况并做好记录。 6. 对照组不做缺血处理，其他操作相同。 7. 分别取再灌注0h、3h、6h、12h、24h、72h六个时间点取材。麻 醉大鼠，下腔静脉取血，室温静置2h后于4℃3000r离心10分钟提取血清，放入-80冰箱冻存。同时取左肾组织留作病理标本，右肾组织分生标本。 ?应用疾病模型
1. 血清生化指标检测： 取各时间点（0h、1h、3h、6h、12h、24h、72h)血清，检测血清BUN（尿素氮）和Scr（血肌酐）水平,评估肾功能。 2. 肾系数检测 摘取双侧肾脏后，生理盐水冲洗，称重计算肾系数。 肾系数=双侧肾重（mg）/体重（g） 3. 肾小管坏死的评分 每张切片×200 倍镜下取外髓质部10 个视野，按0 = 正常，1 = 轻微损伤(受损肾小管< 5%) ，2= 轻度损伤(受损肾小管5 %～25 %) ，3 = 中度损伤(受损肾小管25 %～75 %) ，4 = 重度损伤(受损肾小管> 75 %) 作半定量分析并计算其均值，作为肾小管坏死的评分指数 4％多聚甲醛溶液固定48h。常规组织脱水、透明、浸蜡、包埋。石蜡切片进行HE染色和PAS染色。 对照组大鼠肾小球、肾小管及肾间质结构基本正常。在模型组，随着再灌注时间的延长呈现不同程度的肾脏病理改变，可见肾小管上皮细胞浑浊肿胀，出现水样或空泡变性，刷状缘消失，部分肾小管上皮细胞凝固性坏死、脱落，腔内可见管型，并可见间质水肿，间质内灶性炎症细胞浸润，肾小球病变不明显。
实验大鼠取材方案 [取材内容] 1.取大鼠静脉血，分离血浆、血清，-80℃保存。 2.取大鼠门静脉血，分离血清，-80℃保存。 3.取大鼠甲状腺组织，制备甲状腺电镜观察标本，其余组织液氮冰冻保存备用。 4.取大鼠胸腺组织，制备胸腺组织电镜观察标本、免疫组化观察标本，其余组织液氮冰冻 保存备用。 5.取大鼠肺组织，制备肺组织电镜观察标本、免疫组化观察标本，其余组织分装液氮冰冻 保存备用。 6.取大鼠肝脏组织，制备肝脏组织电镜观察标本、免疫组化观察标本，其余组织分装液氮 冰冻保存备用。 7.取大鼠胰腺组织，制备胰腺组织电镜观察标本、免疫组化观察标本，其余组织分装液氮 冰冻保存备用。 8.取大鼠肠系膜淋巴结组织，制备肠系膜淋巴结免疫组化观察标本，其余组织液氮冰冻保 存。 9.取大鼠胃部组织，制备胃粘膜组织电镜观察标本、免疫组化观察标本，其余组织分装液 氮冰冻保存备用。 10.取大鼠空肠组织，制备肠道粘膜组织电镜观察标本、免疫组化观察标本，其余组织分装 液氮冰冻保存备用。 11.取大鼠回肠组织，制备肠道粘膜组织电镜观察标本、免疫组化观察标本，其余组织分装 液氮冰冻保存备用。 12.取大鼠肾组织，制备左肾组织电镜观察标本、免疫组化观察标本，右肾组织液氮冰冻保 存备用。 13.取大鼠肾上腺组织，左侧制备肾上腺组织免疫组化观察标本，右侧肾上腺液氮冰冻保存 备用。 14.取大鼠睾丸组织，左侧制备电镜观察标本、免疫组化观察标本，右侧睾丸液氮冰冻保存 备有。 [试剂及药品] 戊巴比妥钠或10%水合氯醛、75%酒精、生理盐水、多聚甲醛或福尔马林液、3％戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4％戊二醛、肝素钠、器械液（器械清洗消毒液） [器材] 备皮刀、解剖台、弯盘、组织剪、眼科剪、手术刀柄、刀片、小号弯式血管钳、蚊式血管钳、眼科镊、无损伤血管夹、聚乙烯管、三通管、丝线、培养皿、天平、一次性离心管（5ml、
雌雄大鼠肾脏结构的性别差异 王丽英，王建林 兰州大学生命科学学院，兰州（730000） E-mail：wang_ly05@https://www.doczj.com/doc/c23492380.html, 摘要：应用大体解剖与光镜对雌雄大白鼠的肾的结构指数、肾小球的的大小、肾小囊的大小以及肾小囊与肾小球的比值进行了比较研究，结果发现在肾的结构指数中，髓质厚度的百分数、髓质相对厚度、右肾乳头厚度的百分数有显著差异；髓质面积的百分数，髓质相对面积以及左肾厚度的百分数差异不显著；雌雄个体的肾小球大小、肾小囊的大小以及肾小囊与肾小球的比值均存在显著差异。 关键词：大鼠；肾；结构；性别差异 1 引言 肾脏是机体最主要的排泄器官，以形成尿液的方式排出各种水溶性的代谢终产物、多余的水分、无机盐以及药物和有害物质等，对机体的水盐代谢和离子平衡起调节作用，以维持机体内环境稳定。除此之外，也是体内药物代谢和排泄的重要器官[1]。近年来，对肾的研究主要集中在肾病理研究方面，如肾结石的治疗等。但对肾结构的研究相对来说则较少。1982年，Tatsuo Sakai和Katsumasa Kawahara利用半薄连续切片对日本蝾螈的肾脏及其结构进行了观察[2]。此后，有科学家研究了东北虎、西非蚓螈等动物的肾脏结构（谭超等，2003年；M?bjerg，N.，2004年）[2, 3]。但是他们均没有对雌雄个体进行比较。人们早已发现，兽类肾的形态结构和浓缩尿的能力都对干旱缺水环境有一定的适应关系。那些对缺水环境适应比较好的动物，其肾髓质的相对比例较大，肾结构指数较高，能产生较浓的尿以减少排泄时的失水。早在1988年倪建英等对江豚小肾结构指数和尿浓缩能力进行研究的时候，就对雌雄江豚肾的结构指数进行了比较，结果并没有发现有显著性差异。本论文对大鼠肾的结构指数是否存在性别差异进行研究，以期为实验动物学和动物解剖学提供一些实验数据和理论依据。 大鼠的肾实质只有一个锥体，故只有一个肾叶，因此称单叶肾或单锥体肾，但其结构却是与多锥体肾的一个锥体相同，所以鼠的肾相当于多锥体肾的一个肾锥体，同时也相当于分叶肾的一个小肾。所以计算比较简单。 2材料和方法 2.1 实验动物 四月龄的健康Wistar成年大鼠，雌雄各8只，平均体重为218.0±19.85 g，购自兰州大学医学实验动物中心。 2.2方法 2.2.1相对肾重的测定： 称取并记录每一只实验动物的体重，乙醚麻醉，心脏灌注，取其左右两肾，分别称其重量，记录数据。然后计算其相对肾重（总的肾重除以体重）。 2.2.2雌雄大鼠各个肾结构指数的测定： [4]用于测定肾结构指数的材料固定于10%中性福尔马林溶液中。六项肾结构指数分别
肝组织病理活检介绍 肝组织病理活检是什么?肝组织病理活检是根据负压吸引的原理，采用快速穿刺方法，从肝内抽取少量的肝组织，直接在显微镜下观察其组织形态的改变，再结合临床资料，作出肝病的诊断。快速肝穿刺术操作简单，安全可靠，并发症少，是目前诊断肝硬化比较流行的方法。 一、诊断意义： 通过对活检组织显微镜下观察，可以明确脂肪肝病变程度、类型、有无合并脂肪性肝炎和肝纤维化，对病人的治疗以及预后判断亦有重要价值。此外，像病毒性肝炎、脂肪肝、各种类型的肝硬化等，其肝脏病变呈弥漫性，取出较小肝组织，也能比较准确地反映出病变的性质和程度。 肝活检病理组织学检查结果可为各种肝病或原因不明的肝脾肿大提供诊断依据，有助于确定、补充或纠正临床诊断，有助于肝纤维化、早期肝硬化的发现，也有助于判断治疗效果及预后，了解疾病的演变过程。另外，肝活检活组织也是一种治疗手段，肝脓肿病人可通过肝活检抽出脓液，同时还可通过穿刺针注入药物治疗。 二、主要应用： ①局灶性脂肪肝与肿瘤区别; ②为探明某些少见疾病，如胆固醇酯贮积病、糖原贮积病等; ③无症状性可疑非酒精性脂肪肝(NASH),肝活检是唯一诊断手段; ④戒酒后ALD或ALD有不能解释的临床或生化异常表现者; ⑤肥胖减少原有体重10%后肝酶学异常仍持续者，需肝活检寻找其他原因; ⑥任何怀疑不是单纯肝组织脂变或疑有多病因引起者。 三、术前准备： 术前应检查血小板数、出血时间、凝血时间、凝血酶原时间，如有异常，应肌注维生素Kllom9，每日1次，3天后复查，如仍不正常，不应强行穿刺(对于凝血酶原时间不符合穿刺条件者，术前应给予2～3u的新鲜干冻血浆;对于血小板低者应输血小板)。 (1) 穿刺前应测血压、脉搏并进行胸部x线检查，观察有无肺气肿、胸膜肥厚，验血型，以备必要时输血。术前l小时可服地西泮10mg。 (2) 术前应检查血小板数、出血时间、凝血时间、凝血酶原时间，如有异常，应肌注维生素Kllom9，每日1次，3天后复查，如仍不正常，不应强行穿刺(对于凝血酶原时间不符合
肝硬化大鼠肝脏组织病理学及血流动力学变化 作者：乔伟1,2，鲁建国1，王青1，李鹏超1 作者单位：(1. 第四军医大学唐都医院普外科，陕西西安710038;2. 西安市铁路中心医院普外科，陕西西安710054) 【摘要】目的通过建立大鼠肝硬化模型，了解肝硬化形成过程中门静脉血流动力学的变化。 方法雄性健康SD大鼠100只随机等分为5组：4个实验组(80只，每组20只)采用腹腔及皮下注射四氯化碳(CCl4)，同时饮用酒精溶液进行诱导;对照组(20只)给予普通饮水和饲料。 分别于2、4、7、10周后观察肝脏的组织病理学改变及门静脉血流动力学变化。结果肝硬化过程中肝细胞经历变性、坏死、纤维组织增生及假小叶的形成;血流动力学检测指标发生 相应变化，平均动脉压(MAP)表现为逐渐下降，门静脉压力(PVP)、下腔静脉压(IVCP)及门静脉阻力(PVR)表现为逐渐升高，门静脉血流量(PVF)表现为先升高后下降，内脏血管阻力 (SVR)表现为先下降后升高。结论本方法可建立稳定的肝硬化门脉高压症模型，且适于大批量制作;在大鼠肝硬化门脉高压形成过程中门静脉血流动力学及肝组织病理学均发生了变 化，可用于肝硬化门脉高压症方面的相关研究。 【关键词】肝硬化;门脉高压;组织病理学;血流动力学;大鼠 Histopathological and hemodynamic changes of rats with liver cirrhosisQIAO Wei1,2, LU Jian guo1, WANG Qing1, LI Peng chao1 (1. Department of General Surgery, Tangdu Hospital, Fourth Military Medical University, Xi an 710038; 2. Department of General Surgery, Xi an Railway Center Hospital, Xi an 710054, China)ABSTRACT: Objective To investigate the hemodynamic changes during the progression of portal hypertension (PHT) by establishing a model of liver cirrhosis in rats. Methods Totally 100 healthy male SD rats were assigned to 5 groups randomly (1 control group and 4 experimental groups with 20 rats in each group). Animal model of cirrhosis was established by subcutaneous injection of carbon tetrachloride (CCl4) and drinking alcohol. Rats in control group were given water and forage. The changes in the portal hemodynamics during the pathological process of liver tissues were observed after 2, 4, 7 and 10 weeks. Results During the formation of experimental cirrhosis, the hepatocytes of rats underwent 4 processes: degeneration, necrosis, fibrosis and pseudolobular proliferation. The hemodynamic changes were observed: the mean arterial pressure declined gradually after injection, but the portal venous pressure, the inferior vena cava pressure and the portal vascular resistance increased slowly. The portal venous flow reduced after ascending whereas the splanchnic vascular resistance increased after descending. Conclusion This method can establish a