盐酸克伦特罗快速检测
摘要
本实验采用了百睿TM盐酸克伦特罗快速检测卡对样品进行定性检测。盐酸克伦特罗快速检测卡适用于尿样、瘦肉、肝脏、肺脏、肾脏和饲料等样本中盐酸克伦特罗的测定。检出限为3ng/mL（3ppb）。
关键词盐酸克伦特罗快速检测卡定性检出限
前言
盐酸克伦特罗(Clenbuterol,CLB),又名瘦肉精,分子式为C12H18Cl2N2O?HCl,药品名为克喘素、氨哮素等,为白色或类白色的结晶粉末,无臭、味苦,易溶于水、甲醇、乙醇,微溶于丙酮、氯仿,不溶于乙醚和苯,化学性质稳定;它是一种人工合成的B-肾上腺素受体激动剂,具有扩张支气管的作用,常用来防治哮喘、肺气肿等肺部疾病(Mersmann,1998)。当其应用剂量达到治疗量的5~10倍时,又具有能量重分配作用,可使肌肉合成增加,脂肪沉积减少,因此将其俗称为瘦肉精,在养猪业中一些非法使用者将其作为一种生长促进剂添加到饲料中(Kuip-er,1998),用以改善胴体的品质,但同时也造成了猪肉中盐酸克伦特罗的残留。当人们食用含有盐酸克伦特罗残留的肉品后,常常造成心动过速,低血钾,低磷酸盐血症,肌肉震颤,头晕,口干,失眠甚至于瘫痪等中毒症状,对心脏病患者更有生命危险。国家农业部农牧发[2002]1号文5关于发布食品动物禁用的兽药及其他化合物清单的通知6中,盐酸克伦特罗被列为所有食品动物禁止使用。
1实验步骤
（1）使用前将待测样本溶液恢复至室温
（2）取出检测卡平放，用移液枪吸取待测样品溶液100ul，垂直加于加样孔，开始计时
（3）结果应在3~5min读取，其他时间判读无效，根据示意图判定结果。
【结果判断】
2 实验结果
实验结果如下图 1
由图可知，左边表示样品中盐酸克伦特罗浓度低于 3 ng/mL ，或不含有盐酸克伦特罗；右边样品中盐酸克伦特罗浓度高于3 ng/mL 。
3结果与讨论
3.1实验原理
若待测样品溶液中不含盐酸克伦特罗,当样品溶液进入测试端,盐酸克伦特罗金标单抗在硝酸纤维素膜上层析泳动,被硝酸纤维素膜上检测印迹处的盐酸克伦特罗-BSA 偶联物拦截形成盐酸克伦特罗-BSA 偶联物)金标盐酸克伦特罗单抗 复合物,并在该印迹处形成红色的条带(检测线);
测试端多余的金标盐酸克伦特阴性（-）：两条紫红色条带出现。表示样品中盐酸克伦特罗浓度低于3 ng/mL ，或不含有。
阳性（+）：检测T 线无显色，则表示样品中盐
酸克伦特罗浓度高于3 ng/mL 。
无效：未出现质控C 线，表明操作过程不正确
或检测卡已失效。
罗单抗在硝酸纤维素膜上继续层析可被对照印迹羊抗鼠IgG单克隆抗体捕获形成红色的对照条带(对照线)。当待测尿样中含有一定量的盐酸克伦特罗时,盐酸克伦特罗与盐酸克伦特罗金标单抗形成复合物,从而与硝酸纤维素膜上的盐酸克伦特罗-BSA偶联物形成竞争,抑制了检测印迹处包被的盐酸克伦特罗-BSA偶联物捕获盐酸克伦特罗金标单抗的量,而不能在检测线形成红色印迹或形成颜色较浅的红色印迹,多余的盒标盐酸克伦特罗单抗继续层析在对照印迹处形成对照线。根据该反应模式,检测线颜色深浅与样品中盐酸克伦特罗含量呈负相关,即检测线颜色越浅表示样品中盐酸克伦特罗含量越高。
3.2 试纸条组成
1.样品垫的作用是尽快地将加样孔中的样品吸附到试纸中去，以利于继续加样；
2.结合垫中则是含有胶体金标记的盐酸克伦特罗单抗；
3.硝酸纤维素膜上则预先标记了两种物质，在检测线处标记的是盐酸克伦特罗
-BSA偶联物。
4.吸收垫一般由吸水纸构成，主要作用是保持从加样垫到吸收垫之间的毛细管
作用力[1]。
参考文献
[1] 姜艳彬，孙冠如，王海，等. 盐酸克伦特罗胶体金快速检测试纸条的研制[J]. 中国畜牧兽医. 2010(10): 109-113.
餐饮服务单位配置食品安全 快速检测设备实施方案 为继续深入推进餐饮服务环节“地沟油”、“瘦肉精”、“非法添加”、“假劣酒类”四项整治工作，加强餐饮服务单位自检能力建设，根据《餐饮服务食品安全监督管理办法》，按照市政府领导要求，经我局反复研究论证，决定在全市大型以上餐饮服务单位配置食品安全快速检测设备。 一、配备范围 大型餐馆（加工经营场所使用面积在500㎡至3000㎡或者就餐座位数在250座至1000座）、特大型餐馆（加工经营场所使用面积在3000㎡以上或者就餐座位数在1000座以上）及供餐人数500人及以上的集体食堂。 二、检测箱配置标准 餐饮服务单位配备的食品快速检测箱应包含生鲜肉的瘦肉精、熟肉制品的亚硝酸盐、食用油的酸价和过氧化值、酒类的甲醇、水发水产品的甲醛、果蔬的农药残留及消毒液的有效氯等7项必检项目和注水肉、木耳中的硫酸镁及双氧水等3项自选项目相应的配套装置及试剂试纸等。 三、快速检测场所要求 特大型餐饮服务单位要建立快速检测室，室内至少要有照明设施、操作台和试剂试纸的储存设施；其他餐饮单位要有相对固定的检测场所及试剂试纸的储存设施。快速检测场所应悬挂《食品安全快速检测管理制度》、《食品安全快速检测操作规范》、《食品安全快速检测工作相关人员职责》。快速检测室或检测场所要确保光线良好，照度不低于110lux。
四、快速检测要求 1、各相关餐饮服务单位要有1‐2名经培训合格的高中以上学历的专（兼）职快速检测人员。 2、各相关餐饮服务单位必须对生鲜肉、食用油、酒类、熟肉制品、水发水产品、果蔬及配比后的消毒液进行检测，可根据采购的实际情况适时增加检测项目。上述食品及食品原料和配比后的消毒液的检测率不低于30%。 3、各相关餐饮服务单位要做好《食品安全快速检测登记表》、《可疑（问题）食品处置登记》。记录表格由市局统一格式、统一要求，保存期不少于2年。 五、可疑食品的处理 经快速检测认为不合格的食品，餐饮服务单位要停止制售，按要求封存，并送有资质的检测机构检测，经检测合格的食品可继续使用，不合格的食品报相关部门查处。如经快速检测认为不合格的食品数量较少、价值较低且送检费用较高，餐饮服务单位应在单位负责人的监督下自行销毁，并做好登记。 六、工作推进步骤 1、各级餐饮服务监管部门于2011年11月16日前完成快速检测工作的动员部署，并将准确统计的配备食品安全快速检测设备的餐饮服务单位名单（包括单位名称、地址、联系人及电话）上报市食品药品监督管理局食品处，作为生产厂家订做设备及试剂试纸的数量依据，同时为售后服务提供方便。 2、各级餐饮服务监管部门于11月底前完成对辖区内相关餐饮服务单位食品安全快速检测设备、试剂试纸的配备及
盐酸克伦特罗的检测方法 科技信息职教与成教 盐酸克伦特骂硇楦测方法 河南科技大学林业职业学院刘荣森 [摘要]肉食中的盐酸克伦特罗严重危害人体健康.检测盐酸克伦特罗残留常用的方法有气相色谱一质谱联用法,高效液相色谱 法,酶标记免疫吸附测定法,毛细管电泳'~--(CE)等,本文分析了各方法的优缺点,指出了今后的研究方向. [关键词]盐酸克伦特罗检测方法研究进展 中央电视台2011年3.15晚会上,曝光了一些地方在动物饲养中滥 用"瘦肉精"的问题."瘦肉精"是盐酸克伦特罗的俗称,通用名称: Clenbuterol(CLB),化学名称:d一[(叔丁氨基)甲基卜4一氨基一3,5一二氯 苯甲醇盐酸盐,分子式:C.:H.C12N20?HC1,结构式: ]}H31. l 盐酸克伦特罗是一种B:一受体激动剂,具有蛋白同化作用,可以减 少脂肪的形成,提高瘦肉和脂肪的比率,因而被滥用于饲养业,造成该 药在动物体内蓄积,尤其是肝脏组织中的浓度较高.人类食用含有克伦 特罗残留的肉品后会出现头晕,心悸,手指震颇等中毒症状.滥用瘦肉 精已成为重大的食品安全问题. 中国严禁盐酸克伦特罗等在动物生产中使用.但目前非法使用情 况仍非常严重.近几年来,接连发生数起人食用有CLB残留的肉品中毒 事件.造成CLB屡禁不止的原因一方面是利益驱使;另一方面是现在 检测CLB的方法,手段还不完善,急需建立宰前监测体系和准确,迅速, 方便,精确的检测方法. 检测CLB残留常用的方法有气相色谱一质谱联用法(GC—MS),高 效液相色谱法(HPLC),酶标记免疫吸附测定法(ELISA),毛细管电泳法
(CE)等. 1.气相色谱一质谱联用法(GC—MS) 气相色谱一质谱联用法是我国CLB测定中的确证性方法 fNY/T468—2001].是最常用的CLB测定方法,能在多种残留物同时存在情况下对某种特定的残留物进行定性,定量分析.具有灵敏度高,假阳 性率低等特点.测定时一般需要柱前衍生,最常用的衍生试剂是双三甲 基硅基三氟乙酰氨(BSTFA).本办法具有前处理过程烦琐,检测时间 长,需贵重仪器等缺点. 吴银良等建立了同时测定动物肝组织中盐酸克伦特罗和盐酸莱 克多巴胺残留量的固相萃取一气相色谱一质谱分析方法.样品在碱化 条件下经乙酸乙酯和异丙醇混合溶剂提取,浓缩后用乙酸乙酯溶解,经SCX固相萃取(SPE)柱净化,经氮气吹干后用双三甲基硅基三氟乙酰氨(BSTFA)衍生,外标法定量.盐酸克伦特罗的检出限为O.301~g/kg.盐酸 克伦特罗添加浓度在1.O～5.01zg/kg范围内,添加回收率为77.4%～88.3%;相对标准偏差(RSD)为3.1%～5.1%.胡明友等[21建立了克伦特罗的测定方法,用甲醇提取,正己烷脱脂净化,然后旋转蒸发冷冻离心浓 缩后加0.1mmol/L的盐酸溶解,加样到净化柱上,用4%氨化乙酸乙酯 洗脱后氮气吹干,甲苯溶解后加BSTFA衍生,用气相色谱一质谱法进行测定,内标定量.结果表明:添加56~10-9540x10(∞)浓度水平的克伦 特罗,方法回收率在89.3%～107%,相对标准偏差为7.3%～16.5%,线性相关系数r为0.998,克伦特罗的最低检测限为2.0xl0f∞).PeterBa—tioens等[31用气相色谱一质谱联用法测定了牛,羊,猪粪便中的盐酸克伦特罗含量,最低检测限为2n. 2.高效液相色谱法(HPLC) 高效液相色谱法是检测CLB残留常见的分析检测手段之一,适合 大批量样品的快速测定.我国已将HPLC法作为检测CLB残留的半确证法.HPLC法中常用的检测器有电化学检测器,紫外检测器;其优点是 检测精确度高,其最低检测限范围为1～15ng/g,而且假阳性率低,与GC—MS法相比样品不必衍生;缺点是检测过程繁琐,检测时间长,需贵
新疆农业大学 专业文献综述 题目: 肉品中盐酸克伦特罗的危害及其免疫检测技术姓名: 郑峰 学院: 食品科学与药学学院 专业: 食品科学 班级: 2013级研究生 学号: 1340020279 成绩： 指导教师: 王子荣职称: 教授 200 年4月24日 新疆农业大学教务处制
肉品中盐酸克伦特罗的危害及其免疫检测技术 郑峰指导老师：王子荣教授 摘要：本文介绍了盐酸克伦特罗的理化特性和生理作用，分析了它在肉制品中残留对人体造成的危害，同时综述了肉品中残留盐酸克伦特罗的胶体金免疫检测技术和酶联免疫检测技术的原理和操作要点，分析了两种免疫检测技术的特点，总结了两种免疫检测技术的技术优势并提出自己的观点。 关键词：盐酸克伦特罗；生理；胶体金检测；酶联免疫 The detection of Clenbuterol hydrochloride residues Absttact:This paper describes the effects in physiology of the clenbuterol hydrochloride remained in meat products,and analyzes the harms which caused by the residues in meat; The artical also summarizes the characteristics of technology principles with gold and enzyme-linked immunoassay to analyze the residues in meat and the operation points in immunoassay technique,contrasting the two immunoassay techniques.Finally the advantages of both immunoassay techniques were summarized and views were put forward on. Key words:Clenbuterol;DIGFA;ELISA 目前食品安全问题已经成为国内最为关注的问题，其关系到每个人的将抗发展。畜产品在人类饮食结构中占有重要的地位，如何确保畜产品的安全是目前急需解决的问题。市面上畜肉产品的安全卫生主要由两方面因素决定，即宰前因素和宰后因素，宰前因素主要是由动物的养殖方式和病害控制对肉品质产生的影响；宰后因素主要表现在宰后检验、运输、加工、包装等方面。随着一系列由饲料问题引起的肉品安全问题的发生（二噁英、疯牛病、苏丹红和瘦肉精），人们渐渐认识到饲料安全在保障畜产品安全中的重要性。饲料安全性关系到畜产品的质量与人类的健康。 盐酸克伦特罗（Clenbuterol Hydrochloride，CL）俗称瘦肉精是国家违禁药物中的一种[1]。盐酸克伦特罗是一种β-肾上腺素受体激动剂，曾作为药物用于治
瘦肉精快速检测
瘦肉精快速检测 2011年04月20日11:00 阅读次数：13 来源：食品安全快速检测网 [字号：大中小] 瘦肉精是一类药物，而不是一种特定的物质，是指能够促进瘦肉生长的饲料添加剂。任何能够促进瘦肉生长、抑制肥肉生长的物质都可以叫做“瘦肉精”。 目前，能够实现这种功能的物质是一类叫做β-兴奋剂（β-agonist）的药物，比如在中国造成中毒的克仑特罗（clenbuterol）和美国允许使用的莱克多巴胺/又译雷托巴胺（Ractopamine）。 瘦肉精在上海曾经引发了几百人的中毒事件。而在台湾，由于从美国进口的猪肉里含有瘦肉精，几乎挑起一场政治争端。由于西方国家一般不消费动物内脏（猪肉一般不含瘦肉精，但内脏特别是肝脏则会残留瘦肉精），因而在美国、加拿大、新西兰等国，瘦肉精这类物质的使用是合法的。其它这样类似药物还有沙丁胺醇（Salbutamol）和特布他林（erbutaline)等，同样能起到“瘦肉”作用、却对人体健康危害过大，因而造成安全隐患。它们也因而在全球遭到禁用。 早在2002年，农业部、卫生部、国家食品药品监督管理局就公告，明令禁止在饲料和动物饮用水中添加盐酸克伦特罗和莱克多巴胺等7种瘦肉精。而据有关专业人士透露，各地在进行瘦肉精检测中基本都只检测盐酸克伦特罗，莱克多巴胺只有个别地方有检测。而正因为如此，一些不法养殖户就选择回避盐酸克伦特罗，改用莱克多巴胺等其他品种的瘦肉精。 为了较彻底排查检测“瘦肉精”，最好检测盐酸克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇三种“瘦肉精”。 排查常用的方法是胶体金快速检测卡法，该方法操作方便、快捷，整个检测过程只需几分钟；检测灵敏度高;结果直观；胶体金本身为红色，不需加入发色剂，对人体无害；标记物稳定，携带、储存方便；成本低，无需仪器设备。非常适合于基层执法部门对“瘦肉精”的快速筛查。 胶体金速测卡原理： 胶体金速测卡的检测原理是竞争性免疫层析。将着色标记物与待测抗原的特异性抗体(Ab1)相偶联,沉积在结合区。而检测区处固相化的是待测抗原或待测抗原的类似物。若样品中含有待测抗原,则样品中的抗原和带有标记物的Ab1形成Ag-Ab1复合物。随后在通过固相化有待测抗原或其类似物的检测区时,由于竞争抑制,不再发生反应,检测线处不显色;样品继续前移, Ag- Ab1 复合物被固相化在质控线处的抗Ab1 抗体(Ab2)所结合,形成Ab1- Ag- Ab2 复合物,使质控线显色。 食品安全快速检测技术研究中心根据此原理成功研发出盐酸克伦特罗速测卡、莱克多巴胺速测卡和沙丁胺醇速测卡，为基层执法部门对“瘦肉精”的快速筛查提供了简便、快捷、经济、适用的快速检测手段。 瘦肉精快速检测法-盐酸克仑特罗快速检测卡 2011年04月11日16:44 阅读次数：6 [字号：大中小] 盐酸克仑特罗（瘦肉精）速测卡使用说明书
胶体金法与酶联免疫法相结合 快速检测克伦特罗 苏存举,陈福生3,高志贤3①,苗颂②,刘楠①,冯屹 (华中农业大学食品科技学院,武汉430070) 摘要:目的研究胶体金免疫层析法(GIC A)与酶联免疫吸附法(E LIS A)相结合,以建立对饲养、屠宰、流通各环节的畜尿克伦特罗(Clenbutero1,C L)定性和定量检测的方法。方法用柠檬酸三钠还原氯金酸,制备20nm粒径的胶体金,胶体金标记单抗后喷涂到玻璃纤维膜上,特异性抗原(C L2BS A)以线状包被在硝酸纤维素膜上,制成快速检测试纸条。用E LIS A进行定量。结果对 G C2MS不确定的36份阴性样品和24份阳性样品用GIC A方法检测,其阴性符合率为97%,阳性 符合率为96%。同样样品用E LIS A方法检测,其符合率为100%。最低检测限为5.0ng/m L;用GIC A法只需在试纸条上滴加4～5滴样液5～10min就可出结果;在2个月的随机抽查中,试纸条的检测结果没有变化。结论本方法准确性高、稳定性好,操作过程简单,适合于作现场大规模、高通量检测。因此本方法具有广泛的应用及推广价值。 关键词: 胶体金; 克伦特罗; 酶联免疫吸附法 中图分类号:R155.5 文献标识码:A 文章编号:1001-5248(2008)03-0176-04 克伦特罗(Clenbutero1,C L)俗称“瘦肉精”,是β2肾2上腺受体激动剂。在家畜养殖中加入C L可以提高瘦肉率或者加速动物的生长。C L作为药物使用时可以治疗哮喘等疾病,但是如果用作家畜生长调节剂,其剂量通常是治疗疾病剂量的5～10倍,这样就可能残留于食品中而引起人体的不良反应,主要包括心跳过快和四肢肌肉颤动等中枢神经中毒后的失控症状,甚至导致死亡〔1〕。目前已有多种方法用于对C L的残留分析,主要包括酶联免疫检测法(E LIS A)、高效液相色谱法(HP LC)、气相色谱2质谱联用法(G C2MS)、液相色谱2质谱联用法(LC2MS)等,主要是依靠特殊仪器进行分析,不能适应市场监督需要快速、简便、价廉的要求。而E LIS A分析法操作简便、检测快捷、灵敏度高、特异性强,适用基层日常应用〔2〕。胶体金免疫层析法(GIC A)解决了以往在现场不能进行快速和定性检测的难题。因此, 基金项目:国家科技支撑计划(2006BAK02A09) 天津市科技攻关基金项目课题(N o.06VFG ZSH02200) 作者简介:苏存举(1981-),男,硕士研究生。从事食品安全快速检测研究。 3通讯作者 ①军事医学科学院卫生学环境医学研究所 ②山东大学将E LIS A和GIC A相结合应用于C L筛选检测已成为各地开展C L检测工作的主要技术手段。 1 材料与方法 1.1 材料 氯金酸为上海化学试剂厂产品;克伦特罗标准品为Sigma公司产品;克伦特罗单克隆抗体为浙江台州金芯生物工程公司产品;硝酸纤维膜(NC)、玻璃纤维膜、吸水纸、PVC背板均为美国Mill2 pore公司产品;克伦特罗检测试剂盒为江苏微生物研究所产品;其他试剂为国产分析纯。 1.2 仪器 紫外可见光分光光度计,Du2530型, Beckman公司;透射电镜,H27500型,日本HIT ACHI 公司;原子力显微镜,SPM29500型,日本岛津公司;磁力恒温搅拌器,79.3型,上海市曹行无线电元件厂;点膜机,Bio2Dot公司;普通离心机,TG L21613型,上海安亭科学仪器公司;纯水制备装置,AS D型,军事医学科学院卫生装备研究所。 1.3 方法 1.3.1 胶体金的制备 按照文献〔324〕采用柠檬酸三钠还原法制备20nm胶体金颗粒〔5〕。取0.01%氯金酸水溶液100m L,用恒温电磁搅拌器加热至沸腾,一次性加入l%柠檬酸三钠水溶液 2.52m L,再加热
ICS 备案号： DB34 动物组织中盐酸克伦特罗的残留测定 —胶体金免疫层析法 Determination of clenbuterrol residue in animal tissues Colloidal gold immunochromatographic method （征求意见稿） 安徽省市场监督管理局 发布
DB34/T 824—2008 II 前言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准代替DB/T 824-2008《动物组织中盐酸克伦特罗的残留测定—胶体金免疫层析法》，除编辑 性修改外主要技术变化如下： ——修改了范围（见1）； ——修改了规范性引用文件（见2）； ——修改了检测步骤（见5）； ——修改了结果判断（见6）； ——修改了结果确认（见7）。 本标准由安徽省兽药饲料监察所提出。 本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：安徽省兽药饲料监察所。 本标准起草人：许世富、。 本标准2008年8月发布，本次为第一次修订。
DB34/T 824—2008 动物组织中盐酸克伦特罗的残留测定—胶体金免疫层析法 1 范围 本标准规定了动物肌肉、肝脏、肾脏中盐酸克伦特罗残留测定的胶体金免疫层析法。 本标准适用于动物肌肉、肝脏、肾脏中盐酸克伦特罗残留的快速检测。 本标准检测限为3μg/kg。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 本试验采用胶体金竞争抑制法。将氯金酸用枸橼酸钠还原法制成一定直径的金溶胶颗粒，标记抗体。硝酸纤维素膜为载体，利用了微孔膜的毛细管作用，将样本滴加在胶体金检测条样品垫一端，使液体慢慢向吸水纸另一端渗移。在样本移动的过程中，会发生相应的抗原抗体反应，并通过免疫金的颜色而显示出来。样本中的盐酸克伦特罗在流动的过程中与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制了抗体和硝酸纤维素（NC）膜检测线上的盐酸克伦特罗人工抗原的结合，使检测线不显颜色，结果为阳性；反之，检测线显紫红色，结果为阴性。 4 试剂和材料 4.1 除非另有说明，本法所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T 6682规定的二级水。 注：不同检测卡制造商间的产品组成和操作会有细微的差别，应严格按说明书要求规范操作。 4.2 胶体金免疫层析快速检测卡组成 4.2.1 盐酸克伦特罗抗体单克隆抗体。 4.2.2 胶体金。胶体金溶液采用氯金酸还原法制备，应为带负电的紫红色疏水胶体金溶液，金颗粒大小应在30 nm～60 nm之间。 4.2.3 硝酸纤维素膜。硝酸纤维素膜表面应平整、光滑、白净，没有划痕、凹印、小孔、水迹、橘皮状或其他肉眼能见的瑕疵，无灰尘、油渍或其他杂物。硝酸纤维素膜宽度为（2 5.4±0.5）mm，长度在（100±2）mm，厚度在（185±19）μm，毛细流速度为（180±45）s/40 mm。 4.2.4 聚酯纤维膜。聚酯纤维膜表面形状应为基本均匀的矩形，无明显歪斜现象。色泽好，白色，表面洁净，均匀度好，无破损，无起皱，无污点，无色斑，无霉点，无异味，无杂质及灰尘。聚酯纤维膜重量在（98.3±10.0）g/m2，厚度在（0.42±0.07）mm，长度为（30 5.0±2.5）mm，宽度为（254.0±2.5）mm。 4.2.5 吸水纸。 4.2.6 底板。 4.2.7 塑料盒。 4.2.8 塑料吸管。 4.2.9 提取液。 4.3 电子天平：感量分别为0.01mg和1mg。 1
龙源期刊网 https://www.doczj.com/doc/bd643786.html, 猪肉中“瘦肉精”盐酸克伦特罗残留危害及检测方法 作者：宋瑞张彩云何立宁张蕾 来源：《科技资讯》2011年第15期 摘要:本文介绍了盐酸克伦特罗(瘦肉精)的性质、危害性以及主要的检测方法。 关键词:盐酸克伦特罗残留检测方法 中图分类号:S859.84 文献标识码:A 文章编号:1672-3791(2011)05(c)-0104-01 1 盐酸克伦特罗的性质 盐酸克伦特罗(Clenbuterol,CLB)俗称瘦肉精,又名氨哮素、克喘素,化学名为“4-氨基-α-[(叔 丁基氨基)甲基]-3,5-二氯苄醇盐酸盐”,常温下为白色或微黄粉末状固体,熔点为170℃～176℃,极易溶于水、甲醇和乙醇,微溶于氯仿,不溶于苯,是一种β2一肾上腺素能激动剂。20世纪70年代末,美国等发达国家进行了盐酸克伦特罗实用性开发研究工作。80年代,由于盐酸克伦特罗能促进猪生长,提高瘦肉率,而被作为饲料添加剂广泛应用到猪的生产中。但是近年来,因食用被盐酸克伦特罗污染的猪肉导致中毒事件屡有发生,且后果极其严重,引起了世界各国的高度重视,为了保证猪肉产品质量安全,保护人类健康,许多国家都禁止在食用动物源性的生产中使用盐酸克伦特罗[1]。 2 危害性 2.1 对猪的影响 在饲用初期会在短期内出现血压升高、血管扩张、呼吸加剧、体温上升等症状,并出现采 食下降、行为动作失调、神经紧张不安甚至全身震颤等症状。后期会使猪体内糖降解作用不足,导致猪肉品质下降,同时容易发生蹄损伤和跛行,大运动量或高温条件会造成死亡。 2.2 对人的影响 人食用含残留盐酸克伦特罗猪肉后对肝、肾等内脏器官会产生毒害作用,出现心悸、头 痛、目眩、恶心、呕吐、心率加快、肌肉振颤等症状,特别是对高血压、心脏病、甲亢和前列 腺肥大等疾病患者危害更大,严重的可导致死亡。
┊┊┊┊┊┊┊┊┊┊┊┊┊装┊┊┊┊┊订┊┊┊┊┊线┊┊┊┊┊┊┊┊┊┊┊┊┊ 第1章盐酸克伦特罗的理化性质及其主要危害 1.1 盐酸克伦特罗的理化性质 盐酸克伦特罗又称“瘦肉精”，是一种从天然儿茶酚胺衍生合成的化合物，化学名称为羟甲叔丁肾上腺素分子式为C12 H19 C13 N20，相对分子质量为313．5，熔点为174 ～175.5 ℃，其制剂常用盐酸盐，又称为盐酸双氯醇胺氨双氯醇胺呈白色或类白色的结晶粉末状，熔点161℃，无臭，味苦，化学性质稳定，溶于水、乙醇，微溶于丙酮。不溶于乙醚，加热到172 ℃才能分解，盐酸克伦特罗的化学结构稳定，在体内不会被破坏分解，能耐受100 ℃高温，126 ℃油煎5min才能破坏减半，常规烹调对盐酸克伦特罗残留起不到破坏作用。 1.2盐酸克伦特罗的主要危害 对人的危害：人食用超过盐酸克伦特罗残留限量的肉及其制品后，会发生急性中毒通常表现为肌肉振颤、心慌、战栗、头疼、恶心、呕吐等症状，特别是原有心律失常的病例会引起心室早搏，ST段与T波幅压低，还可引起代谢紊乱，产生酮体，对糖尿病病人可发生酮中毒或酸中毒，对心律失常、高血压、青光眼、糖尿病、甲状腺功能亢进、前列腺肥大等疾病的患者更容易产生急性中毒症状，严重的可导致死亡，因食用猪肉中残留有盐酸克伦特罗的急性中毒病人，临床症状以交感神经系、统兴奋性增高为主要表现，并在患者血尿中检出较高含量的盐酸克伦特罗。人食用残留有盐酸克伦特罗的畜产品后表现为肌肉兴奋性增强，有的人中毒后表现为肌肉震颤，重症者腓肠肌痉挛；同时引起心肌收缩加强，心率加快；对高血压患者危害更大，盐酸克伦特罗分解脂肪成游离脂肪酸进入血液，使血管壁弹性降低，引起血压升高，微循环血管膨胀，压迫刺激周围的神经，引起头痛头晕；引起人内脏横纹肌和平滑肌+兴奋性增强，表现为呕吐和腹泻。盐酸克伦特罗中毒的患者群中，对患心、脑血管疾病、糖尿病、甲状腺机能亢进、青光眼、前列腺肥大者可造成威胁生命的恶果。孕妇中毒又可导致癌变、胎儿致畸的严重危害性。 对动物的危害:虽然盐酸克伦特罗的毒性并不很强，小鼠、豚鼠静脉注射的半数
盐酸克伦特罗快速检测 摘要 本实验采用了百睿TM盐酸克伦特罗快速检测卡对样品进行定性检测。盐酸克伦特罗快速检测卡适用于尿样、瘦肉、肝脏、肺脏、肾脏和饲料等样本中盐酸克伦特罗的测定。检出限为3ng/mL（3ppb）。 关键词盐酸克伦特罗快速检测卡定性检出限 前言 盐酸克伦特罗(Clenbuterol,CLB),又名瘦肉精,分子式为C12H18Cl2N2O?HCl,药品名为克喘素、氨哮素等,为白色或类白色的结晶粉末,无臭、味苦,易溶于水、甲醇、乙醇,微溶于丙酮、氯仿,不溶于乙醚和苯,化学性质稳定;它是一种人工合成的B-肾上腺素受体激动剂,具有扩张支气管的作用,常用来防治哮喘、肺气肿等肺部疾病(Mersmann,1998)。当其应用剂量达到治疗量的5~10倍时,又具有能量重分配作用,可使肌肉合成增加,脂肪沉积减少,因此将其俗称为瘦肉精,在养猪业中一些非法使用者将其作为一种生长促进剂添加到饲料中(Kuip-er,1998),用以改善胴体的品质,但同时也造成了猪肉中盐酸克伦特罗的残留。当人们食用含有盐酸克伦特罗残留的肉品后,常常造成心动过速,低血钾,低磷酸盐血症,肌肉震颤,头晕,口干,失眠甚至于瘫痪等中毒症状,对心脏病患者更有生命危险。国家农业部农牧发[2002]1号文5关于发布食品动物禁用的兽药及其他化合物清单的通知6中,盐酸克伦特罗被列为所有食品动物禁止使用。 1实验步骤 （1）使用前将待测样本溶液恢复至室温 （2）取出检测卡平放，用移液枪吸取待测样品溶液100ul，垂直加于加样孔，开始计时 （3）结果应在3~5min读取，其他时间判读无效，根据示意图判定结果。
【结果判断】 2 实验结果 实验结果如下图 1 由图可知，左边表示样品中盐酸克伦特罗浓度低于 3 ng/mL ，或不含有盐酸克伦特罗；右边样品中盐酸克伦特罗浓度高于3 ng/mL 。 3结果与讨论 3.1实验原理 若待测样品溶液中不含盐酸克伦特罗,当样品溶液进入测试端,盐酸克伦特罗金标单抗在硝酸纤维素膜上层析泳动,被硝酸纤维素膜上检测印迹处的盐酸克伦特罗-BSA 偶联物拦截形成盐酸克伦特罗-BSA 偶联物)金标盐酸克伦特罗单抗 复合物,并在该印迹处形成红色的条带(检测线); 测试端多余的金标盐酸克伦特阴性（-）：两条紫红色条带出现。表示样品中盐酸克伦特罗浓度低于3 ng/mL ，或不含有。 阳性（+）：检测T 线无显色，则表示样品中盐 酸克伦特罗浓度高于3 ng/mL 。 无效：未出现质控C 线，表明操作过程不正确 或检测卡已失效。
综述盐酸克伦特罗的 药理作用、在机体内的残留性及检测技术 摘要：由瘦肉精引起的中毒事件屡见不鲜，而品种繁多的瘦肉精中盐酸克伦特罗是使用最普遍的一种，本文从盐酸克伦特罗的理化性质、药理作用、残留性、检测方法等方面详细介绍其对人体的危害，为我们更好的认识和抵制瘦肉精提供参考。 关键词：理化性质；药理作用；毒性；残留性；检测方法 瘦肉精是一类药物，而不是某一种特定的药物，任何能够促进瘦肉生长、抑制肥肉生长的物质都可以叫做“瘦肉精”。在中国，通常所说的瘦肉精是指克伦特罗，而普通消费者则把此类药物统称为瘦肉精。当它们以超过治疗剂量5-10倍的用量用于家畜饲养时，即有显著的营养“再分配效应”——促进动物体蛋白质沉积、促进脂肪分解抑制脂肪沉积，能显著提高胴体的瘦肉率、增重和提高饲料转化率，因此曾被用作牛、羊、禽、猪等畜禽的促生长剂、饲料添加剂。 1. 盐酸克伦特罗的理化性质及药理作用 1.1 理化性质 中文名：瘦肉精；克伦特罗；学名：盐酸克伦特罗(Clenbuterol Hydrochloride)，又称氨哮素、克喘素氨双氯醇胺，化学名称为羟甲叔丁肾上腺素，是一种平喘药。该药物既不是兽药，也不是饲料添加剂，而是肾上腺类神经兴奋剂。相对分子量：313.7，分子式：C12-H18-Cl12-N2-O·HCl； 图1盐酸克伦特罗结构式 盐酸克伦特罗的外观与性状：白色或类白色的结晶粉末，无臭、味苦；熔点：174～175.5°C；溶解性：溶于水、乙醇，微溶于丙酮，不溶于乙醚[1]。 1.2 药理作用 20世纪70年代中后期,克伦特罗作为一种伦特罗1000～3000 μg 具有促进新的、选择性的β肾上腺受体激动剂逐步应用于临床试验,它能够引起交感神经兴奋在治疗剂量下,强而持久地松弛支气管平滑肌,口服治疗剂量仅为30～40 μg/d, 对支气管哮喘和伴随有逆性气道梗塞的慢性支气管炎均有良好的效果,能较长时间地增加肺的最高呼气量(PEFR)，用药剂量仅为舒喘宁片的1%, 副作用和对心血管系统的作用不明显。克伦特罗可作为支气扩张剂治疗慢性梗塞性肺部疾病,用吸入法给药,有效剂量可低至12ug；口服效果是特布他林的170倍，对心率和血压的影响不明显。克伦特罗进入机体后, 与广泛分布于呼吸道效应细胞膜上的β2受体结合,导致受体构型改变,激活腺苷酸环化酶,催化细胞内ATP转化为cAMP,后者激活cAMP依赖性蛋白激酶,促使胞浆中游离钙浓度下降钾通道开放引起平滑肌松弛而缓解喘息等症状除松弛支气管平滑肌外克伦特罗也激活β2肾上腺受体克伦特罗能增加神经生长因子的表达而起到保护神经系统的作用,也能防止大鼠诱导性肝细胞凋亡。此外,克伦特罗可能具有治疗过敏性炎症的作用并可以在抑制失神经肌萎缩的同时不影响或很少影
表面等离子体共振生物芯片快速检测克伦特罗 李莹1,2，齐攀1,3，马骁1,4，钟金钢1,4，陈江韩5，张冠文5 （1.暨南大学光电信息与传感技术广东普通高校重点实验室，广东广州510632）（2.暨南大学预科部，广东广州510610）（3.广东交通职业技术学院电子工程系，广东广州 510650）（4.暨南大学光电工程系，广东广州 510632） （5.中国广州分析测试中心，广东广州 510070） 基金项目：国家自然科学基金资助项目（41206081）；海洋赤潮灾害立体监测技术与应用国家海洋局重点实验室资助项目（MATHAB20120208）；粤港关键领域重点突破招标资助项目（2005A20501001） 作者简介：李莹（1976-），女，博士，副教授，主要从事生物医学信息技术研究 通讯作者：钟金钢（1964-），男，博士，教授，博导，主要从事生物医学信息技术研究又称“瘦肉精”，属于β2-肾上腺素受体激动剂（β2-addrenoeeptor agonists）。克伦特罗引起的食物中毒事件近年来在国内外时有发生，1983年西班牙首次发生克伦特罗食物中毒事件，1998年和2006年分别在香港和上海发生克伦特罗食物中毒事件。1997年，中华人民共和国农业部下达文件，严禁β-肾上腺素类激素在饲料和畜牧生产中使用，在禁用激素类列表中， 2747
盐酸克伦特罗高居榜首。克伦特罗既不是兽药，也不是饲料添加剂，但是可明显促进动物生长，并增加瘦肉率，抑制脂肪的合成，因此一些饲养者或者饲料厂仍在非法使用克伦特罗，提高肉用动物的瘦肉率，残留在动物性食品中的克伦特罗严重危害人类健康。与其它β-兴奋剂相比，克伦特罗的生物利用度高，更易出现中毒反应。食用含有盐酸克伦特罗的食品可能会出现血糖升高、心律失常、腹痛、腹泻、过敏等不良反应，其毒性高于具有相同功能的莱克多巴胺，所以，必须要对克伦特罗在动物养殖过程中的非法使用进行监控和检测。2002年9月10日农业部、卫生部、国家药品监督管理局发布了《禁止在饲料和动物饮用水中使用的药物品种目录》，盐酸克仑特罗和莱克多巴胺等7种“瘦肉精”被列为禁用药品。目前，检测盐酸克伦特罗的主要方法是气相色谱-质谱法（Gas Chromatograph-Mass Spectrometer-computer，GC-MS）[1]、高效液相色谱法（High performance liquid chromatography，HPLC）[2~3]、酶联免疫吸附法（Enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）[4]、液相色谱-质谱/质谱法（HPLC-MS/MS）[5]。这些方法的缺点是样品处理时间长，检测过程烦琐、难于操作，污染环境，仪器价格昂贵，在实际应用中受到限制[6]。表面等离子体共振生物芯片不需要标记就可对分子间的相互作用进行实时监测，已被广泛用于药物分析、食品分析、环境监测等许多领域[7~14]。 本研究利用自行研制的便携式表面等离子体共振（Surface plasmon resonance，SPR）生物传感器，根据免疫反应的特异性，研究克伦特罗抗原、抗体的相互作用，分析动力学反应过程，建立标准曲线，并提出克伦特罗的连续检测法和快速检测法。连续检测法是连续检测多个样品后再对生物芯片表面通入再生液，实现芯片再生，从而简化了检测过程，提高了芯片的使用寿命。快速检测法是通过动态设置检测参数，在免疫反应阶段提高单次检测速度，获取更多数据，提高灵敏度；在芯片制备阶段延长单次检测时间，去除冗余数据。与传统生化分析方法相比，本研究利用便携式仪器，提出的方法操作简便，无需标记，非破坏性，成本低，可进行现场大量样品的实时连续检测和快速筛选，适用于超市、集市、工厂等需要实时检测的场所，进行质量监控。 1 实验部分 1.1 仪器、试剂与材料 自行研制了便携型SPR检测仪，由光路系统、机械扫描系统、样品输送系统、生物传感芯片、控制及分析软件组成，用电学方法控制入射光角度的改变，由光电池检测反射光光强的变化，灵敏度高，方法简便易行。 盐酸克伦特罗标准品（Clenbuterol Hydrochloride，100 g/mL的乙醇溶液）由农业部环境保护科研监测所提供，分子量为313.7；克伦特罗-牛血清白蛋白（CLB-BSA）耦联物、克伦特罗抗体（anti-CLB）购于广州弗赛生物科技有限公司；猪肉中提取的克伦特罗样品由中国广州分析测试中心提供；巯基十一酸（HS(CH2)10COOH）、巯基己酸（HS(CH2)6OH）、N-羟基琥珀酰亚胺（N-Hydroxysuccinimide,NHS）、碳二亚胺（N-(3-Dimethylaminopropyl)-N’-ethylcardbodiimid hydrochlorid, EDC）、乙醇胺（Eth）、十二烷基硫酸钠（SDS）购于美国Sigma公司；其它试剂购于北京化学试剂公司。免疫反应的缓冲液是PBS缓冲液（2 mmol/L NaH2PO4, 2 mmol/L Na2HPO4, 150 mmol/L NaCl, pH 7.4），盐酸克伦特罗标准品（CLB）、克伦特罗衍生物（CLB-BSA）、克伦特罗抗体用PBS缓冲液稀释成相应浓度的溶液。 1.2 生物芯片制备 图1 克伦特罗免疫检测示意图 Fig.1 Scheme of Clenbuterol(CLB) immune detection 在直径20 mm厚度1 mm的圆形玻璃片上沉积50 nm的金。将镀有金膜的传感芯片固定到仪器上，安装好流通系统，通入PBS缓冲液，基线稳定几分钟后进行生物芯片的自组装，流通池中通入1 mM的HS(CH2)10COOH（巯基十一酸）和HS(CH2)6OH（巯基己酸）的乙醇溶液，质量比（M/M）是1:9，对金膜表面进行化学修饰2 h，然后通入PBS缓冲液清洗。基线稳定后加入0.1 mol/L的NHS和0.1 mol/L的EDC 混合液（1:1, V/V），活化芯片表面15 min，之后用PBS 冲洗2 min，这时的基线比活化前略有升高。然后进行生物探针的固定。连续检测法和快速检测法，均在生物芯片表面固定克伦特罗衍生物（CLB-BSA），作为生物探针，固定时克伦特罗衍生物浓度为83 mg/L，此时SPR响应值明显升高，30 min后通入PBS冲洗2 min，响应值只有小幅下降，说明探针固定效果较好。 2748
盐酸克伦特罗（瘦肉精）快速检测卡说明书 【产品名称】 产品名称：盐酸克伦特罗快速检测卡（胶体金法） 英文名称：Clenbuterol Rapid Test Card(Colloidal Gold) 【产品简介】 盐酸克伦特罗（瘦肉精主要成分）是为提高猪肉瘦肉率而使用的兴奋剂药物，在动物可食性组织中蓄积，危害食用者的健康，我国已经禁止用其做动物饲料添加剂。 本产品用于快速检测猪肉和其他肉类肌肉组织中盐酸克伦特罗残留，检测过程只需20分钟，适用于家庭、超市、食堂、食品企业及检测机构快速筛查。 【产品组成】盐酸克伦特罗快速检测卡（5条）；200μL刻度吸管（5支）；提取瓶（内含盐酸克伦特罗提取液0.5mL，5瓶）；小勺（1个）。 【检测原理】本产品采用了竞争抑制免疫层析的原理。 【检测限】本产品检测方法对肌肉组织中盐酸克伦特罗的检出限为5 μg/kg。 【使用方法】 1、取一小块瘦肉，用刀切成碎肉，用小勺将碎肉装入提取液的瓶盖内，高度与瓶盖相平（约 2.0g）。 2、将瓶盖量取的碎肉转移到提取瓶内，盖紧瓶盖后振荡，使碎肉与提取液充分混匀，放入盛有热水(>80℃)的容器中热水浴10分钟后取出，冷却至室温。 3、从包装袋中取出检测卡，平放在桌面，用吸管从提取瓶中吸取肉品提取液，垂直滴加2-3滴于加样孔（S孔）中。 4、室温环境计时5分钟，对照结果判断示意图判定检测结果，其他时间判定无效。 【结果判断】 阴性（-）：C线和T线都显色，表示样品中盐酸克伦特罗浓度低于检出限。 阳性（+）：C线显色，T线不显色，表示样品中盐酸克伦特罗浓度等于或高于检出限。 无效：C线未出现，表明操作过程不正确或检测卡已失效。在此情况下，应再次仔细阅读说明书，并用新的检测卡重新测试。 【注意事项】 1、请按照使用方法进行测试，检测卡打开包装后1小时内使用，检测前将检测卡恢复至室温。 2、尽量不要触摸检测卡中央的白色膜面，检测时避免阳光直射。 3、本检测卡为一次性产品，请勿重复使用。 4、提取瓶内液体不可食用，避免儿童接触，检测完后可倒入下水道，瓶体可丢在垃圾桶。 5、本产品检测结果仅供参考，如需确证，请参照国家相关标准方法。 【储存及有效期】 原包装应储存于4～30℃，阴凉避光干燥处，切勿冷冻；有效期12个月。
2009 年 4 月 Journal of Chemical Engineering of Chinese Universities Apr. 2009文章编号：1003-9015(2009)02-0355-05 盐酸克伦特罗完全抗原的合成及其偶联工艺的优化 杨香瑜, 黄鹤 (天津大学化工学院生物化工系系统生物工程教育部重点实验室, 天津 300072) 摘要：为获取用于快速免疫分析的免疫抗原和包被抗原，本实验采用重氮化反应制备盐酸克伦特罗(Clenbuterol hydrochloride, CL)完全抗原，在强酸条件下CL先经重氮化，再与鸡卵清白蛋白(OV A)发生共价取代制备了盐酸克伦特 罗包被抗原(OV A-CL)，并以正交实验确定了共价取代反应的关键影响因素，进一步采用单因素实验确定了反应所需的 最佳条件，并通过紫外扫描对制得的包被抗原进行了鉴定。结果表明，投料比例是盐酸克伦特罗完全抗原合成的关键 因素，搅拌转速和反应时间也起着至关重要的作用。而且偶联反应在1 h内基本完成，延长反应时间对提高产物偶联 比影响不大。当投料比例为30:1，pH值约为8，低速搅拌状况下，包被抗原和免疫抗原的偶联比分别高达29:1和48:1，盐酸克伦特罗完全抗原合成条件的优化筛选取得了预期的效果。 关键词：盐酸克伦特罗；重氮化反应；完全抗原；偶联比 中图分类号：O625.14 文献标识码：A Synthesis of Clenbuterol Hydrochloride Complete Antigen and Optimization of its Conjugation Conditions YANG Xiang-yu, HUANG He (Key Laboratory of Systems Bioengineering, Ministry of Education, Department of Biochemical Engineering, School of Chemical Engineering and Technology, Tianjin University, Tianjin 300072, China) Abstract: In order to synthesize the immunogen and coatigen used for the rapid immunoassay, the diazotization was adopted to prepare the Clenbuterol hydrochloride (CL) complete antigen. During which, the CL was firstly activated under strongly acidic conditions, and the activated CL was then conjugated with ovalbumin (OV A) to form coatigen OV A-CL. The important factors affecting the conjugating reaction were determined by orthogonal experiments, and the optimum value of those important factors was confirmed by single factor experiments. The prepared OV A-CL was characterized by UV scan. It was found that the CL/OV A dropping proportion is the key factor for preparing the complete antigen, while the stirring speed and reaction time are important too. The conjugating reaction can be completed within one hour and prolonging the reaction time has little effect on the increase of coupling ratio. When the CL/OV A dropping proportion (molar ratio) is 30:1, the pH value is 8 and at a low stirring dispersion speed (<250 r?min?1), the coupling ratio of coatigen and immunogen can be up to 29:1 and 48:1, respectively. It indicates that the optimization of the conjugation conditions of Clenbuterol hydrochloride complete antigen achieves the expected results. Key words: Clenbuterol hydrochloride; diazotization; complete antigen; coupling ratio 1前言 盐酸克伦特罗是一种β2-肾上腺受体激动剂 [1]。大量用其作为饲料添加剂，可显著提高畜禽生长速率，瘦肉相对增加[2]。但该药易在牲畜体内沉积，人食用含有该药残留的动物产品后可引起食物中毒，严重 收稿日期：2008-01-29；修订日期：2008-06-02。 基金项目：天津市自然科学基金资助项目(06YFJMJC13200)。 作者简介：杨香瑜(1983-)，女，河北省沧州人，天津大学硕士生。通讯联系人：黄鹤，E-mail：huang@https://www.doczj.com/doc/bd643786.html,